Despois de darse un vistazo diario a unha solución de sacarosa, a privación de alimentos induce a ansiedade e acumula a desequilibrio de dopamina / acetilcolina (2008)

Afectar o azucre pode activar vías neurais de forma similar á de tomar drogas de abuso, dando lugar a signos de dependencia relacionados. Os experimentos actuais proban se as ratas que viñeron en sacarosa e logo xaxemas demostran signos de retirada similar ao opiáceo. As ratas mantivéronse en privación de 12-h seguidas de acceso 12-h a unha solución de sacarosa 10% e chow durante días 28, logo axustáronse durante 36 h. Estes animais pasaron menos tempo no brazo exposto dun labirinto máis elevado en comparación cun grupo de chow ad libitum similarmente privado, suxerindo ansiedade. A microdiálise revelou un aumento concomitante da acetilcolina extracelular e diminución da liberación de dopamina no núcleo accumbens. Non parece que estes resultados se deban a unha hipoglucemia. Os resultados suxiren que unha dieta de gordo en sacarosa e chow seguida do xaxún crea un estado que implica ansiedade e altera o equilibrio de dopamina e acetilcolina. Isto é semellante aos efectos da naloxona, o que suxire a retirada do tipo opiáceo. Isto pode ser un factor nalgúns trastornos alimentarios.

1.1 Métodos xerais

As ratas masculinas Sprague-Dawley obtivéronse de Taconic Farms (Germantown, NY) ou criaron no vivarium da Universidade Princeton a partir dun stock orixinario de Taconic Farms. As ratas aloxáronse individualmente nunha luz invertida 12-h: ciclo escuro 12-h. Todos os procedementos foron aprobados polo Comité Institucional de Coidados e Uso de Animais da Universidade de Princeton.

1.2 Experimento 1: ¿É evidente a ansiedade durante o xaxún en ratas que azucran o azucre?

Ratas (300 – 450 g) no grupo experimental principal (azucre intermitente + chow; n Mantíronse = 9) nunha dieta de privación de 12-h seguida de 12-h acceso a unha solución de sacarosa 10% (p / v) máis chow de roedores estándar (LabDiet #5001, PMI, St Louis, MO, 3.02 kcal / g) iniciando 4 h na fase escura cada día durante 28 días [13]. Un grupo de control (ad libitum chow; n = 7) permitíuse o acceso ad libitum ao chow de roedores estándar. Todos os animais tiñan auga dispoñible ad libitum. Outros grupos (chow intermitente e azucre ad libitum) empregados nos Experimentos 2 e 3 non foron probados de ansiedade porque non mostraron signos de comportamento de retirada tras naloxona ou xaxún nun informe anterior [3].

O día 28, tras a privación habitual de 12-h, ás ratas do grupo experimental se lles negou o acceso ao azucre e o chow por 24 h adicional. O grupo de control tamén foi privado de chow para 36 h. Durante este tempo, os animais continuaron a ter acceso ad libitum á auga. A continuación, os animais foron colocados individualmente no labirinto máis elevado durante 5 min coa técnica de File, Lippa, Beer e Lippa [14]. O aparello tiña catro brazos, cada 10 cm de ancho por 50 cm de longo, e estaba elevado 60 cm sobre o chan. Encerrábanse dous brazos opostos con altas paredes opacas. Os outros dous brazos non tiñan paredes protectoras. O experimento realizouse baixo luz vermella. As ratas colocáronse no centro do labirinto e alternáronse cara a un brazo aberto ou pechado. Cada proba de labirinto foi gravado en vídeo e anotado por un tempo observado coa cabeza e as antepasas no brazo aberto, o brazo pechado ou a sección central do labirinto por un observador cego á afección do tratamento.

1.3 Experimento 2: ¿As ratas que azucran o azucre alteraron a liberación de DA e ACh nos quintos durante o xaxún?

Un grupo separado de ratas (350-450 g) foi sometido a unha cirurxía para implantar cánulas guía para a microdiálise. As ratas foron anestesiadas con 20 mg / kg xilazina e 100 mg / kg ketamina (ip) suplementadas con ketamina segundo o necesario (100 mg / kg, ip). As cánulas bilaterais guía de aceiro inoxidable do calibre 21 foron dirixidas á cuncha de acumbens medial posterior (anterior: + 1.2 mm, lateral: 0.8 mm e ventral: 4.0 mm, con referencia a bregma, seno medio e a superficie do cranio, respectivamente) empregando un instrumento estereotóxico.

Os ratos permitíronse recuperarse da cirurxía durante polo menos 1 semana. Semellante aos procedementos do Experimento 1, un grupo experimental (n Mantívose = 6) durante a privación 12-h diaria seguida de 12-h acceso a sacarosa 10% e chow de roedor estándar, iniciando 4 h na fase escura, durante 28 días para inducir o coído (é dicir, azucre intermitente + chow). Un grupo de control mantívose no mesmo horario sen sacarosa (chow intermitente, n = 7), mentres que outro grupo mantíñase no ad libitum chow diario (n = 6). O día 28, cada rata foi trasladada á cámara de microdialisi e inseríuse unha sonda e fixouse no lugar con cemento acrílico 14-16 h antes do experimento para permitir que se estabilizase a recuperación de neurotransmisores. As sondas de microdialise foron construídas en tubo de vidro de sílice (diámetro interior de 37 µm, Polymicro Technologies Inc., Phoenix, AZ) dentro dun tubo de aceiro inoxidable de calibre 26 cunha punta de microdialisi de tubo de celulosa selado ao final con epoxi (Spectrum Medical Co., Los Angeles, CA, 6000 MW, diámetro exterior 0.2 mm × longo 2.0 mm) [15]. As sondas saíron 5 mm da cánula guía para chegar ao sitio previsto na cuncha de accumbens. Permitíronse as sondas coa solución de Ringer tamponada (142 mM NaCl, 3.9 mM KCl, 1.2 mM CaCl₂, 1.0 mM MgCl₂, 1.35 mM Na₂HPO₄, 0.3 mM NaH₂PO₄, pH7.35) a un caudal de 0.5 µL / min durante o período de estabilización e a 1.3 µL / min 2 h antes e ao longo do experimento. Engadiuse neostigmina (0.3 µM) á solución de Ringer para mellorar a recuperación basal de ACh dificultando a súa degradación enzimática.

Cando finalizou o período de acceso a sacarosa 12-h o día 28, elimináronse auga de chow, sacarosa e auga de todas as ratas. Eliminouse auga para o 36 h do experimento de diálise porque a auga potable pode alterar os niveis de base de DA e ACh [16], o que confundiría os resultados. Recolléronse mostras de microdiálise para 1 h (mostras 3 × 20-min) despois de 12, 24 e 36 h de xexún (sen alimentos, azucre ou auga dispoñibles). Cada mostra dividiuse, a metade para a análise de DA e a metade para ACh.

1.4 Ensaios de dopamina e acetilcolina

O ácido 3,4-dihidroxi-fenilacético (DOPAC) e o ácido homovanílico (HVA) analizáronse DA e os seus metabolitos mediante unha cromatografía líquida de alto rendemento en fase inversa con detección electroquímica (HPLC-EC). Injectionáronse mostras nun bucle de mostra 20-µL conducindo a unha columna 10-cm con ánima 3.2 mm e 3 µm, embalaxe C18 (Brownlee Co. Modelo 6213, San Jose, CA). A fase móbil contiña 60 mM fosfato sódico, 100 µM ​​EDTA, ácido heptanosulfónico 1.24 mM e metanol 5% vol / vol. DA, DOPAC e HVA medíronse cun detector coulométrico (ESA Co. Modelo 5100A, Chelmsford, MA) co potencial de acondicionamento establecido en + 500 mV e o potencial de células de traballo en −400 mV.

A ACh mediuse mediante HPLC-EC en fase inversa usando un bucle de mostra de 20 µL cunha columna analítica C10 de 18 cm (Chrompack Inc., Palo Alto, CA). O ACh converteuse en betaína e peróxido de hidróxeno mediante un reactor enzimático inmobilizado (acetilcolinesterase e colina oxidase de Sigma, St Louis, MO e columna de Chrompack Inc., Palo Alto, CA). A fase móbil foi de 200 mM de fosfato potásico a pH 8.0. Utilizouse un detector amperométrico (EG&G Princeton Applied Research, Lawrenceville, NJ). O peróxido de hidróxeno oxidouse nun electrodo de platino (BAS, West Lafayette, IN) fixado a 500 mV con respecto a un electrodo de referencia Ag-AgCl (EG&G Princeton Applied Research).

Recolléronse tres mostras de 20-min en 12, 24 e 36 h de xexún. Para cada hora medíronse os datos das tres mostras. Os datos para DA e ACh convertéronse ao por cento do tempo de privación de 12-h para cada grupo, cando as ratas alimentadas intermitentemente normalmente esperarían comida.

1.5. Histoloxía

Ao final do experimento realizouse a histoloxía para verificar a colocación da sonda de microdiálise. As ratas recibiron unha sobredose de pentobarbital sódico e cando se anestesiaron profundamente se perfundiron intracardialmente con 0.9% salino seguido de 10% formaldehído. Os cerebros foron eliminados, conxelados e o experimentador inspeccionou as seccións mentres se cortaron (franxas de 40 µm, comezando anterior ás acumbens) ata que se localizaron os sitios das puntas da sonda. Unha vez visualizadas as pistas da sonda, trazáronse empregando o atlas de Paxinos e Watson [17].

1.6 Experimento 3: ¿Existen cambios nos niveis de glicosa no sangue debido á inflamación crónica en sacarosa?

As ratas (300-350 g) en tres grupos mantivéronse durante 28 días en (a) azucre intermitente + chow (privación 12-h seguida de 12-h acceso a unha solución de sacarosa 10% e chow, iniciando 4 h na fase escura ; n = 10), (b) chow intermitente (privación de 12-h seguida de 12-h acceso a chow de roedores estándar (sen sacarosa), iniciando 4 h na fase escura; n = 10) ou (c) ad libitum chow (n = 9). Elimináronse chow e azucre e recolléronse mostras de sangue de rabo despois de privación de 12, 24 e 36 h. Un experimentador recolleu sangue da punta da cola, un experimentador sostendo suavemente o animal mentres outro facía unha pequena incisión sobre 5 mm desde a punta da cola cun bisturi estéril. A sangue recolleuse nun tubo capilar, centrifugouse e analizouse o soro para os niveis de glicosa cun metabolismo enzimático rápido Analox GM7 (Analox, Lunenburg, MA). Durante o período de acceso do día 28, a inxestión de azucre e chow medíronse diariamente e o peso corporal medíase semanalmente. Os pesos do corpo tamén se mediron en cada momento durante a privación.

1.7. Estatísticas

Os datos do labirinto máis analizáronse cun estudante monográfico e sen parella t-test. Cohen d, que mide o tamaño do efecto [18], e p_rep, que proporciona a probabilidade de replicación [19], tamén se calcularon. Os datos de DA e ACh analizáronse como diferenza por cento da liña base normalizada como se describiu anteriormente, empregando ANOVA de dúas veces repetidas medidas seguidas de probas post hoc. Os niveis de glicosa en sangue, o peso corporal e os datos de inxestión foron analizados por ANOVA, repetidas por dúas vías.

2.1 Peso corporal, inxestión de azucre e chow

Os datos recollidos durante o período de acceso do día 28 no Experimento 3 revelaron que as ratas con acceso binge á sacarosa aumentaron a inxestión de sacarosa durante o período de exposición do día 28 (F(27, 279) = 4.9, p <0.001; Fig. 1A), un achado similar ao demostrado nos nosos informes anteriores con sacarosa ou glicosa [3,20]. Os datos de inxestión de Chow mostraron unha diferenza significativa entre os grupos. As ratas con acceso a azucre intermitente comían menos chow que o libitum e os grupos chow intermitentes (F(2,26) = 60.8, p <0.001; Fig. 1B). Non obstante, non houbo diferenza entre os grupos na inxestión calórica diaria total (Fig. 1C).

  

Fig 1

A inxestión de azucre e chow durante o período de acceso do día 28. A) As ratas con azucre intermitente + chow escalaron o seu consumo diario total de azucre co paso do tempo. B) As ratas con azucre intermitente + chow comeron menos gramos de pito que o chow intermitente e ad libitum ...

Non houbo diferenzas no peso corporal entre os grupos durante o período de acceso do día 28; con todo, houbo un efecto do tempo, e os tres grupos gañaron peso nos días 28 (F(4,104) = 298.9, p <0.001). Durante as 36 h de privación, o peso corporal diminuíu co paso do tempo para todos os grupos (F(2,52) = 1957.8, p <0.001), sen diferenzas entre grupos en ningún momento (12, 24 ou 36 h).

2.2 Experimento 1: índices de ansiedade condutuais despois do xaxún en ratas con azucre

Cando se coloca no labirinto elevado durante 5 min, despois de 36 h de privación de alimentos, as ratas que antes se mantiveron en azucre intermitente + chow pasaron menos tempo (18 ± 4 s, 6% do tempo total) no brazo aberto de o labirinto máis en comparación co grupo de libitum-chow igualmente privado que non tivo experiencia en sacarosa (34 ± 8 s, 11% do tempo total; t(16) = 2.01, p <0.05, d = 1.03, onde 0.8 ou superior considérase un tamaño de efecto grande [18], e p_rep = 0.87; Fig 2).

  

Fig 2

Porcentaxe de tempo dedicado ao brazo aberto do labirinto máis elevado. As ratas que antes foran alimentadas con azucre intermitente + chow pasaron moito menos tempo no brazo aberto tras 36 h de xexún en comparación cun grupo de chow ad libitum igualmente privado. ...

2.3 Experimento 2: As ratas que azucran o azucre reducen a DA extracelular e aumentaron a ACh no shell de NAc mentres xexunaban

Houbo unha interacción significativa entre o grupo e o tempo (privación 12, 24 e 36 h) (F(4,28) = 2.86, p <0.05; Fig. 3A). Despois de 24 h de xexún, a liberación de DA diminuíu a 68 ± 6% para o grupo alimentado previamente de azucre intermitente + chow, e 72 ± 5% para o grupo de libitum chow, mentres se mantivo sen cambios para o grupo chow intermitente (95 ± 7%) . Despois de que 36 h de DA extracelular en xaxún permaneceu baixa para o grupo intermitente de sacarosa + chow (61 ± 14%), e neste momento era significativamente menor que o grupo chow ad libitum (113 ± 14%, p <0.05) e grupo de chow intermitente (104 ± 15, p <0.05).

  

Fig 3

DA e ACh extracelulares na NAc seguindo 24 e 36 h de xaxún. A) Despois de 36 h de xexún, a liberación de DA no grupo de azucre + chow intermitente (barra negra) foi significativamente menor que o chow intermitente (barra gris) e o chow ad libitum (branco ...

Non houbo diferenzas entre os grupos despois de 12 h de privación por DA ou ACh (azucre intermitente + chow = 1.6 ± 0.3 pg e 0.4 ± 0.1 pmol / mostra; chow intermitente = 1.5 ± 0.4 pg e 0.7 ± 0.3 pmol / mostra; ad libitum chow = 1.4 ± 0.3 pg e 0.7 ± 0.3 pmol / mostra; DA e ACh, respectivamente).

Despois de 24 h de xexún, diminuíron os niveis de DOPAC para todos os grupos (F(2,34) = 33.8, p <0.001). Unha tendencia similar, aínda que non significativa, observouse ás 36 h de xaxún. Tamén houbo un efecto do tempo na liberación de HVA (F(2,34) = 6.97, p <0.001). Do mesmo xeito que DOPAC e DA, o HVA diminuíu ás 24 horas de xaxún para todos os grupos (Táboa 1). Non obstante, por 36 h de xexún, o HVA foi maior para o grupo de azucre + chow intermitente (119 ± 20%), pero permaneceu lixeiramente diminuído para os grupos chow ad libitum chow e intermitentes.

  

Táboa 1

Valores dos niveis de DOPAC e HVA no Experimento 2

A ACh extracelular cambiou no sentido contrario da DA. Houbo unha interacción significativa entre grupo e tempo (F(4, 30) = 4.81, p <0.005; Fig. 3B). A ACh aumentou despois de 24 h de xexún para o grupo intermitente de sacarosa + chow (115 ± 10%; p <0.05), pero non para o grupo de chow ad libitum (77 ± 13%) ou o grupo de chow intermitente (90 ± 15%). Esta diferenza aumentou despois de 36 h de xaxún, aumentando ACh para o grupo de sacarosa + chow intermitente (164 ± 14%) en comparación cos niveis observados no chow ad libitum (97 ± 17%; p <0.05) e chow intermitente (104 ± 15%; p <0.05) grupos de control.

Teña en conta que as medidas básicas tomáronse despois do primeiro 12 h de xexún cando a rata sacarosa intermitente + chow e as ratas intermitentes chow normalmente recibirían comida. Así, o punto de tempo de xaxún 36-h foi exactamente 24 h despois da medida 12-h. Neste momento do ciclo circadiano, os grupos de control alimentados por chow non mostraron cambios no DA ou ACh, mentres que o grupo con azucre tiña DA significativamente baixa e alta ACh.

A histoloxía verificou que as colocacións das sondas estaban principalmente no shell do NAc (Fig 4).

  

Fig 4

A colocación da pista de sondas indica que as mostras de microdiálise foron extraídas principalmente da shell de NAc medial nos planos 1.2 e 1.7 anteriores a bregma [17]. CPu = caudato putamen, AcbC = acumbens core, AcbSh = shell de accumbens.

2.4 Experimento 3: Os signos de retirada tras o xaxún en ratas que azucran o azucre non están directamente relacionados coa hipoglucemia

Non houbo diferenzas significativas nos niveis de glicosa no sangue entre os grupos (rango de 12 h = 5.1 – 7.8 mmol, rango para 24 h = 4.6 – 6.9 mmol, rango de 36 h = 4.2 – 6.4 mmol). Non obstante, houbo un efecto do tempo, cos niveis de glicosa no sangue caeron para todos os grupos ao longo da 36 h de privación (F(2,52) = 52.8, p <0.001).

3.1 Indicacións de ansiedade no comportamento durante o xaxún en ratas que azucran o azucre

O labirinto máis elevado é unha das probas de ansiedade de animais máis usadas [14,21], e foi extensamente validado para a ansiedade xeral [22] e ansiedade inducida pola retirada de drogas [23]. Os resultados do Experimento 1 suxiren que o xaxún tras unha dieta de acceso intermitente ao azucre pode producir ansiedade medida polo elevado labirinto. As ratas que xa estiveron a coidar o azucre pasaron o 6% do tempo no brazo aberto do labirinto, en comparación co 11% do grupo ad libitum chow. Estes datos están no rango de valores obtidos por outros, e os resultados son similares aos que normalmente se atopan usando este procedemento [24,25]. Este achado é semellante á diminución da exploración do brazo aberto que se observou tras a retirada espontánea da morfina [26]. En estudos anteriores, os animais que se mantiveron nunha dieta ad libitum de azucre e chow non mostraron signos de ansiedade cando se administrou naloxona, mentres que os animais que se mantiveron nunha dieta intermitente de azucre e chow mostraron ansiedade cando se administrou a mesma dose de naloxona [3]. O acceso ad libitum ao azucre tampouco produciu outros signos de comportamento de dependencia, incluída a sensibilización cruzada á anfetamina [27] e unha proclividade de consumir alcol [28]. O acceso intermitente ao azucre produce estes comportamentos. A importancia do acceso intermitente na obtención dos efectos observados é suxerida tamén por descubrimentos nos que a abstinencia de sacarina ad libitum non derivou en comportamentos de tipo depresivo [29], que é outro comportamento que se pode observar durante a retirada. Tendo en conta estes estudos anteriores, o azucre ad libitum non se probou no presente experimento.

Os estudos tamén demostraron que non se trata da administración da dieta con sacarosa, senón da abstinencia prolongada da dieta que precipita signos de ansiedade en ratas que afagan sacarosa. Xa informamos anteriormente que as ratas de azucre con acceso 12-h diario, seguidas de privación 12-h, non presentan signos somáticos de ansiedade, chamadas de socorro por ultrasóns ou ansiedade no labirinto máis elevado seguindo o habitual 12-h, diariamente. período de privación de alimentos [3]. Os resultados presentes confirman que a privación de 36-h causa o fenómeno de ansiedade.

O descubrimento de ansiedade durante o xaxún no experimento 1 é similar aos signos de retirada do tipo opiáceo que poden precipitarse co antagonista do opioide, a naloxona [3]. A sensibilidade á naloxona nas ratas que azucran o azucre suxire unha alteración nos receptores de opioides endóxenos como resultado da dieta. Isto foi confirmado en informes que demostran que a afección ao alimento palatable altera a ARNm da encefalina e o receptor μ-opioide no NAC [30-32]. É probable que os signos de retirada tras a privación observados no presente estudo se deban a unha falta de estimulación endoxena de opioides nos animais con azucre.

Estes resultados están de acordo con outros informes de sinais de retirada como opiáceos que seguen o xaxún, ou que xorden espontáneamente, en ratas que previamente viñeron azucre. Ademais de signos somáticos de angustia [3], notáronse comportamentos agresivos e diminución da temperatura corporal [10]. Estes cambios de comportamento e fisioloxía son similares aos observados durante a retirada de opiáceos [33,34], e apoia a teoría de que unha dieta de acceso intermitente a unha solución de azucre pode producir signos de retirada similar aos opiáceos.

3.2 DA e ACh extracelulares nos quintos durante o xaxún en ratas que azucran o azucre

A 36 h de xexún, en comparación con ambos os grupos de control, os niveis de DA diminuíron significativamente para o grupo de azucre intermitente + chow. Isto suxire que a privación de alimentos e auga pode causar unha perda de ton de DA nas ratas con antecedentes de afección ao azucre. Ao mesmo tempo, a ACh extracelular é elevada, o que suxire un estado parecido á retirada de opioides.

Os grupos de control non mostraron este efecto. Neste momento 36-h, que é a mesma fase do ciclo luz / escuro que o punto de tempo 12-h, DA volveu aos niveis de referencia para o grupo chow ad libitum (Fig. 3A). Isto suxire que a liberación de DA no grupo ad libitum chow seguiu un ritmo diúrno, como suxeriron Paulson e Robinson [35]. Outros suxeriron cambios similares no estriatum [36,37]. Este efecto diúrno non se observou co grupo chow intermitente, posiblemente porque a alimentación cíclica pode alterar o ritmo circadiano normal de liberación de DA.

A diminución prolongada da DA extracelular no grupo de azucre + chow intermitente é similar á que se informou durante a retirada espontánea da morfina [7] e pode xogar un papel no fomento da reinserción da inxestión de azucre despois da abstinencia [38]. Os resultados obtidos co grupo intermitente de chow, que mostrou un cambio relativamente escaso na liberación de DA en calquera momento, suxiren que a combinación de bingeing en azucre e chow, non só en chow, é importante para producir os efectos observados.

Aínda que DOPAC e HVA seguen normalmente pautas similares a DA, non sempre é así. No presente experimento, DOPAC e HVA non mostraron unha variación diurna como a observada con DA, e no seu lugar mantivéronse suprimidos co paso do tempo. Aínda que outros informaron de flutuacións circadianas nestes metabolitos no NAc [35], non sabemos ningún documento que medira estes niveis durante o xaxún para 36 h. Así, no presente experimento, o xaxún pode afectar o metabolismo da DA no grupo control do chow.

Os niveis de ACh mostraron unha diferenza significativa entre grupos despois de 36 h de xaxún. ACh na NAc estivo implicada en comportamentos inxestivos [39] e saciedade en particular [40-44] e, cando a DA é baixa, ACh pode favorecer a aversión [40,45-48]. O aumento significativo de ACh observado nas ratas de azucre + chow intermitentes durante o xaxún no presente experimento pode corresponder aos aspectos negativos de estar privado de recompensa. Estudos anteriores apoian a teoría de que os resultados aquí reportados son o resultado da privación da dieta con sacarosa. Os ratos que se producen na liberación de sacarosa DA e mostran unha atenuación da liberación de ACh no NAc.20,49], o contrario aos resultados actuais vistos durante a privación prolongada. O desequilibrio entre os accumbens DA e ACh no grupo de azucre + chow intermitente, pero non nos grupos de control, pode contribuír á ansiedade observada no experimento 1.

3.3 Niveis de glicosa no sangue durante o xaxún en ratas que azucran o azucre

A hipoglicemia pode levar a un estado aversivo do que un animal pode intentar escapar comendo. Os comportamentos asociados a este estado de aversión son similares aos observados durante a administración de naloxona ou o xaxún en ratas que afagan sacarosa [50]. Unha infinidade de factores poden influír no sistema de recompensa cerebral. Non obstante, debido á similitude entre os comportamentos observados durante a hipoglucemia e os observados durante a ansiedade, este estudo mediu os niveis de glicosa no sangue para garantir que os efectos observados non se debían simplemente a un estado glicémico aberrante. Os niveis de glicosa no sangue foron similares en todos os grupos e polo tanto non parecen ter en conta as diferenzas de comportamento ou cambios na liberación de DA e ACh. Pódese deducir que os niveis medios de insulina mantivéronse consistentes entre grupos, xa que non se observaron alteracións dos niveis de glicosa no sangue e os pes do corpo non difiren como consecuencia dos horarios de alimentación. Así, os resultados actuais, así como os do noso informe anterior [30], suxerir que os cambios de comportamento e neurochemicos non son o resultado de diferenzas nos niveis de glicosa no sangue. No seu lugar poden deberse a unha combinación de alteracións nos sistemas opioides endóxenos e DA.

Esta investigación contou co apoio de USPHS AA-12882 (a BGH) e DA-16458 e DK-79793 (becas para NMA).