Sistema de receptores CRF-CRF1 nos núcleos central e basolateral da amígdala Diferentemente medita a alimentación excesiva de alimentos palatáveis (2013)

Neuropsicopharmacoloxía. 2013 nov; 38 (12): 2456 – 2466.

Publicado en liña 2013 Xullo 10. Publicado en liña 2013 10 en xuño. doi: 10.1038 / npp.2013.147

PMCID: PMC3799065

Attilio Iemolo,¹ Angelo Blasio,¹ Stephen A St Cyr,¹ Fanny Jiang,¹ Arroz Kenner C,² Valentina Sabino,¹ Pietro Cottone^1,^*

Abstracto

Os alimentos altamente agradables e a dieta son factores importantes para o desenvolvemento dunha alimentación compulsiva en trastornos da obesidade e da alimentación. Demostramos anteriormente que o acceso intermitente a alimentos agradables dá lugar ao factor liberador de corticotropina-1 (CRF)₁) comportamentos reversibles do antagonista dos receptores, que inclúen un consumo excesivo de comida agradable, hipofagia de chow regular e un comportamento similar á ansiedade. Non obstante, aínda non se coñecen as áreas cerebrais que mediaban estes efectos. Os ratos machos Wistar eran alimentados chow continuamente durante 7 días / semana (Chow / Chow grupo), ou chow alimentado intermitentemente 5 días / semana, seguido dunha dieta sacarosa, saborosa 2 días / semana (Chow / palatable grupo). Tras a alternancia crónica da dieta, os efectos da microinfusión do CRF₁ Antagonista do receptor R121919 (0, 0.5, 1.5 μg / lado) no núcleo central da amígdala (CeA), o núcleo basolateral da amígdala (BlA) ou o núcleo do leito da estria terminalis (BNST) avaliáronse por inxestión excesiva. da dieta saborosa, hipofagia chow e comportamento similar á ansiedade. Ademais, a inmunostainción contra a CRF foi evaluada no cerebro de ratas cicladas na dieta. Intra-CeA R121919 bloqueou tanto a inxestión excesiva de alimentos agradable como o comportamento similar á ansiedade Chow / palatable ratas, sen afectar a hipofagia chow. Pola contra, R121919 intra-BlA reduciu a hipofagia chow Chow / palatable as ratas, sen afectar á inxesta excesiva de comida ou ao comportamento similar á ansiedade. O tratamento intra-BNST non tivo efecto. Non modificou o comportamento dos tratamentos Chow / Chow ratas. A inmunohistoquímica revelou un número maior de células positivas para CRF en CeA, pero non en BlA ou BNST - de Chow / palatable as ratas, durante a retirada e o acceso renovado á dieta agradable, en comparación cos controis. Estes resultados fornecen evidencia funcional de que o CRF-CRF₁ O sistema de receptores en CeA e BlA ten un papel diferencial na mediación de condutas inadaptativas derivadas do ciclismo da dieta agradable.

Palabras clave: factor liberador de corticotropinas, BNST, adicción, ansiedade, hipofagia, rata

Introdución

Crese que os alimentos altamente agradables (por exemplo, os alimentos ricos en azucres e / ou graxas) son un factor importante que contribúe na aparición dunha alimentación compulsiva en certas formas de obesidade e trastornos alimentarios (Corwin, 2006; Yach et al, 2006). Existen moitas analoxías entre a adicción a drogas e a inxestión excesiva de alimentos altamente agradables, incluída a perda de control sobre drogas / alimentos, a incapacidade de acabar co uso / alimentar a pesar de consecuencias negativas, angustia e disforia cando se intenta absterse de drogas / alimentos (Parylak et al, 2011; Volkow e O'Brien, 2007). Estes síntomas comúns propuxéronse derivar de disfuncións de circuítos cerebrais, que se superpoñen na drogodependencia e na alimentación compulsiva.

Factor liberador de corticotropinas tipo 1 (CRF)₁) Os antagonistas dos receptores foron propostos como novos obxectivos terapéuticos para trastornos adictivos debido á súa capacidade para reducir os efectos motivacionais da retirada (Rexistro et al, 2011). A CRF é un mediador crítico das respostas endocrinas, simpáticas e comportamentais ao estrés (Bakshi e Kalin, 2000; vale et al, 1981). A CRF no núcleo paraventricular do hipotálamo controla a resposta hipotálamo-hipofisaria-suprarrenal (HPA) ao estrés, mentres que os efectos conductuais da CRF son independentes do HPA e mediados por rexións do cerebro extrahipotalámicas (Koob e Heinrichs, 1999). CRF-CRF extrahipotalámica₁ O sistema de receptores recrútase en dependencia de todos os fármacos de abuso coñecidos mediante ciclos de intoxicación / retirada, e esta hiperactivación considérase un elemento común, promovendo a inxestión excesiva de drogas a través dun mecanismo reforzado negativamente (é dicir, a inxestión compulsiva de drogas producida pola eliminación da retirada- estado emocional negativo inducido; Heilig e Koob, 2007; Koob, 2010; Shalev et al, 2010).

Aínda que as semellanzas entre drogas de abuso e alimentos foron amplamente estudadas con respecto ás súas propiedades positivas de reforzo (é dicir, a inxestión excesiva de alimentos producida obtendo un efecto agradable; Avena et al, 2012; Blasio et al, 2013b; Corwin e Grigson, 2009; Cottone et al, 2012; Hagan et al, 2003), a hipótese de que a inxestión excesiva de alimentos pode producirse como unha forma de "automedicación" para aliviar o estado emocional negativo asociado á retirada de alimentos moi gustosos é relativamente pouco estudada (Bale, 2005; Cottone et al, 2009a; Shalev et al, 2010).

Demostramos anteriormente que a retirada do acceso crónico e intermitente a alimentos altamente agradables provoca o recrutamento do sistema de CRF extrahipotalámico e a aparición de CRF₁ comportamentos inadecuados dependentes dos receptores, que inclúen a inxestión excesiva de alimentos tras un acceso renovado á dieta altamente agradable, hipofagia da dieta chow doutro xeito aceptable e comportamento similar á ansiedade durante a abstinencia (Cottone et al, 2009a).

Non obstante, evidencia funcional directa sobre que área cerebral é responsable do CRF₁ Faltan adaptacións condutivas dependentes dos receptores inducidas polo ciclismo da dieta saborosa. Por tanto, este estudo tiña como obxectivo determinar se o antagonismo específico de sitio de CRF₁ Os receptores dentro do núcleo central da amígdala (CeA), o núcleo basolateral da amígdala (BlA) ou o núcleo da cama da estria terminal (BNST) foron capaces de bloquear a inxestión excesiva de alimentos altamente agradables, hipofagia inducida pola retirada do regular. chow e comportamento similar á ansiedade. Ademais, este estudo tiña como obxectivo determinar se a expresión de CRF en CeA, BlA e BNST aumentou en ratas cicladas na dieta en comparación cos controis, usando a inmunohistoquímica. Aínda que anteriormente demostramos que a retirada dos alimentos saborosos está asociada a unha expresión aumentada de CRF en CeA, non se sabe como o BlA e o BNST están afectados polo ciclismo da dieta.

MATERIAIS E MÉTODOS

Temas

Ratos Wistar masculinos (n= 140, das cales ratas 33 para experimentos CeA, ratas 46 para experimentos BlA, ratas 39 para experimentos BNST e ratas 22 para o experimento de inmunohistoquímica; Táboa complementaria 1), con un peso de 180 – 230 g e 41 – 47 días de antigüidade á súa chegada (Charles River, Wilmington, MA, EE. UU.), atopáronse aloxados nunhas gaiolas de plástico cubertas de arame (27 × 48 × 20 cm) nunha luz inversa 12-h. ciclo (luces a 1100 horas), nun vivario con humidade (60%) e con temperatura controlada (22 ° C). As ratas tiñan ad libitum acceso a chow a base de millo (Harlan Teklad LM-485 Diet 7012; carbohidrato 65% kcal, 13% graxa, 21% proteína, enerxía metabolizable 310 cal / 100 g; Harlan, Indianápolis, IN, EUA) e auga, salvo que se especifique o contrario. . Os procedementos empregados neste estudo adheríronse á National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (número de publicación NIH 85-23, 1996 revisado) e aos Principios de coidado de animais de laboratorio, e foron aprobados polo Campus Médico Institucional da Universidade de Boston. Comité de coidado e uso de animais.

Drogas

R121919 (3-[6-(dimethylamino)-4-methyl-pyrid-3-yl]-2,5-dimethyl-N,Nsintetizouse a disipropil-pirazolo [2,3-a] pirimidina-7-amina, NBI 30775) como se describe en Chen et al (2004). R121919 é un CRF potente, non péptido, de alta afinidade₁ antagonista do receptor (K_i= 2 – 5 nM), que amosa unha actividade máis feble de 1000 veces máis feble na CRF₂ receptor, proteína que une CRF ou outros tipos de receptores 70 (Grigoriadis et al, 2000). R121919 solubilizouse usando unha mestura 18: 1: 1 de solución salina: etanol: cremóforo.

Probas de comportamento

Acceso alternativo á dieta agradable libitum

O acceso ao ad libitum A alternancia de dieta amable realizouse como se describiu anteriormente (Cottone et al, 2008, 2009a, 2009b; Iemolo et al, 2012). Brevemente, despois da aclimatación, as ratas dividíronse en dous grupos correspondentes á ingesta de alimentos, ao peso corporal e á eficiencia alimentaria dos días anteriores 3-4. Entón proporcionouse un grupo ad libitum acceso a unha dieta chow (Chow) durante 7 días á semana (Chow / Chow, o grupo control deste estudo) mentres que a un segundo grupo se lle proporcionou acceso gratuíto ao chow durante 5 días á semana, seguido por 2 días de ad libitum a unha dieta altamente saborosa, con sabor a chocolate e con alto contido de sacarosa (saborosa; Chow / palatable grupo). Todas as probas de comportamento realizáronse en ratas que levaban unha dieta ciclada durante polo menos 7 semanas. A dieta "chow" foi a descrita anteriormente a base de millo de Harlan, mentres que a dieta apetecible era unha dieta nutricionalmente completa, con sabor a chocolate e alta en sacarosa (50% kcal), a base de AIN-76A que é comparable en macronutrientes proporcións e densidade de enerxía respecto á dieta chow (fórmula con sabor a chocolate 5TUL: 66.7% kcal de hidratos de carbono, 12.7% graxa, 20.6% de proteína, enerxía metabolizable 344 kcal / 100 g (Test Diet, Richmond, IN, EUA) formulada como 45 mg de precisión pellets alimentarios para aumentar a súa preferencia). Por brevidade, os primeiros 5 días (só chow) e os últimos 2 días (chow ou apetecible segundo o grupo experimental) de cada semana denomínanse en todos os experimentos como C P fases. Proporcionouse unha dieta agradable en alimentadores GPF20 'J' (Ancare, Bellmore, NY, EUA). As dietas nunca estiveron dispoñibles simultaneamente.

Experimentos de inxestión de alimentos

As ratas recibían comida previamente pesada nas gaiolas domésticas ao comezo do ciclo escuro. Os tratamentos foron dados en ratas que foron recicladas na dieta durante polo menos 7 semanas ao renovar o acceso á dieta saborosa (C→P fase), ou para a dieta de chow (P→C fase). R121919 foi microinfundido bilateralmente dentro do CeA, o BlA ou o BNST (0, 0.5 e 1.5 μg / side, 0.5 μl / side, 30-min tempo de pretratamento) usando deseños cadrados latinos aleatorios dentro de suxeitos.

Proba na caixa escura

As ratas probáronse 10 min nunha caixa rectangular de cor escura (50 × 100 × 35 cm) na que o compartimento de luz aversiva (50 × 70 × 35 cm) estaba iluminado por unha luz de lux 60. O lado escuro (50 × 30 × 35 cm) tiña unha cuberta opaca e ∼0 lux de luz. Os dous compartimentos estaban conectados por unha porta aberta, que permitía aos suxeitos moverse libremente entre ambos. A proba tivo lugar despois de polo menos 7 semanas de alternancia na dieta, 5-9 h despois do cambio da dieta saborosa á dieta chow (P→C fase); este punto de tempo asegura a aparición de comportamentos semellantes á ansiedade inducidos pola retirada de alimentos saborosos Chow / palatable ratos (Cottone et al, 2009a, 2009b). As ratas mantivéronse nun anticorpo tranquilo e escuro durante polo menos 2 h antes de realizar a proba. O ruído branco estivo presente durante a habituación e probas. O día da proba, as ratas foron microinfundidas bilateralmente con R121919 dentro do CeA, o BlA ou o BNST (0, 0.5 e 1.5 μg / lado, 0.5 μl / lado) 30 min antes de ser colocadas no compartimento escuro orientado á porta. eo comportamento foi rexistrado en vídeo para facer unha puntuación posterior. Os tratamentos foron dados mediante un deseño entre asuntos. O tempo empregado no compartimento aberto medíase como un índice de comportamento similar á ansiedade. Limpouse o aparato con auga e secouse despois de cada suxeito.

Cirurxías intracraniais, procedemento de microinfusión e colocación da cánula

Cirurxías intracraneais

As ratas foron implantadas estereotáxicamente con cánulas bilaterais e intracraneais como se describiu anteriormente (Cottone et al, 2007; Iemolo et al, 2012; Sabino et al, 2007). En breve, as cánulas guía de aceiro inoxidable (calibre 24, Plastics One, Roanoke, VA, EUA) baixáronse bilateralmente 2.0 mm por encima do CeA, o BlA ou o BNST. Catro parafusos de xoiería de aceiro inoxidable fixáronse ao cranio da rata ao redor da cánula. Aplicáronse resina dental restauradora (Henry Schein, Melville, NY, EUA) e cemento acrílico, formando un pedestal ancorando firmemente a cánula. As coordenadas de cánula do bregma empregadas para o CeA foron: AP +0.2, ML ± 4.2, DV −7 (do cranio) coa barra incisiva colocada 5.0 mm sobre a liña interaural, segundo o atlas de Pellegrino (1979). As coordenadas de cánula utilizadas para o BlA foron: AP −2.64, ML ± 4.8, DV −6.5 (de cranio) con cranio plano, segundo Paxinos e Watson (2007). As coordenadas da cánula utilizadas para o BNST foron: AP −0.6, ML ± 3.5, DV −4.8 (de cranio) con cráneo plano e ángulo de inclinación de 14 °. Un estilete maniquí de aceiro inoxidable (Plastics One) mantivo a patencia da cánula. Tras a cirurxía, ás ratas déuselles un período de recuperación de 7 días, durante o que se manexaban diariamente.

Procedemento de microinfusión

A droga estaba microinfundida no cerebro das ratas, como se describiu anteriormente (Blasio et al, 2013b; Dore et al, 2013). Para a microinfusión intracraneal, o estilete maniquí foi eliminado da cánula guía e foi substituído por un inyector de aceiro inoxidable 31 calibre que proxectaba 2 mm máis alá da punta da cánula guía; o inyector conectábase mediante tubo PE 20 a un microsirringo de Hamilton (Hamilton, Reno, Nevada) conducido por unha bomba de microinfusión de varias xeringas (KD Scientific / Biological Instruments, Holliston, MA, USA). Microinfusións realizáronse en 0.5 μl volume entregado en 2 min; Os inxectores deixáronse no lugar durante 1 minuto adicional para minimizar o fluxo de volta.

Colocación da cánula

Verificouse a colocación da cánula ao finalizar todas as probas (ver figura 1). Os suxeitos foron anestesiados (isoflurano, 2-3% en osíxeno) e transcardialmente perfusionados con 4% paraformaldehído xeado (PFA) en auga (pH 7.4) e microinfundidos con violeta Cresyl (0.5 μl / lado). Os cerebros fixáronse durante a noite en 4% PFA e equilibráronse en 30% sacarosa en PFA. As seccións coronais de 40 μm foron recollidas mediante un criostato (Thermo Scientific HM-525) e as colocacións verificáronse nun microscopio. Corenta suxeitos (14 para CeA, 16 para BlA e 10 para BNST) foron excluídos da análise por mor dunha colocación incorrecta da cánula. Analizáronse datos de colocacións incorrectas para interpretar a especificidade dos efectos no sitio.

figura 1

Debuxo de franxas cerebrais de ratas coronais. Os puntos representan os sitios de inxección no núcleo central da amígdala (CeA) (a), o núcleo basolateral da amígdala (BlA) (b) e o núcleo do leito da estría terminal (BNST) (c) incluídos na análise de datos. ...

CRF Inmunohistoquímica

Procedemento de conduta, perfusións e inmunohistoquímica

Ratos (n22) xicláronse durante 7 semanas, anestesiadas e 2-4 h perfusionadas despois de pasar da dieta saborosa á dieta chow (P→C fase) ou desde a dieta chow á dieta saborosa (C→P fase). As ratas foron anestesiadas e despois se perfunderon transcardialmente con solución salina + NNUMX% (p / v) nitrito sódico (pH = 2) e con 7.4% paraformaldehido tamponado en Borax (pH = 4) seguinte. As ratas foron entón decapitadas e os cerebros inmediatamente recollidos, colocados en ∼9.5 ml de 20% PFA, e almacenados nunha sacarosa 4% en solución 30% PFA a 4 ° C ata a saturación.

Para a visualización por CRF, os cerebros cortáronse en seccións coronais de 40 μm usando un criostato e posteriormente almacenáronse nun crioprotector a -20 ° C. Cada sexta sección (a 240 μm de distancia) de todo CeA, BlA e BNST foi escollida de forma aleatoria sistemática e procesada para inmunocitoquímica. As seccións de flotación libre laváronse en solución salina tampón de fosfato potásico (KPBS). Despois do lavado inicial, as seccións recibiron incubación en solución de KPBS de peróxido de hidróxeno ao 0.3% durante 30 minutos para bloquear as peroxidasas endóxenas. As seccións laváronse de novo e colocáronse en solución de bloqueo (3% de soro de cabra normal, 0.25% de Triton X100 e 0.1% de albúmina de soro bovino) durante 2 h. As seccións trasladáronse despois ao anticorpo primario (dilución 1: 100, anti-CRF (sc-10718), Santa Cruz Biotechnology) en solución de bloqueo e incubáronse durante 72 h a 4 ° C. Despois dun lavado adicional, incubáronse seccións en anticorpos secundarios (dilución 1: 1000, biotinilados anti-coello (BA-1000) Vector Laboratories, Burlingame, California) en solución de bloqueo durante 2 h a temperatura ambiente. As seccións laváronse e logo incubáronse nunha solución de perididasa de avenís-biotina de rábano picante ABC (Laboratorios Vectoriais) en solución de bloqueo durante 1 hora. A continuación incubáronse as seccións empregando un kit de substrato de diaminobenzidina (Laboratorios Vector) segundo as instrucións do fabricante e unha vez completada a reacción laváronse as seccións en KPBS, montáronse en láminas e deixáronse secar durante a noite. Ao día seguinte, as láminas deshidratáronse usando concentracións graduadas de alcol e cubríronse con cubridor usando un montante DPX (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, EUA).

Cuantificación de corpos celulares CRF +

A cuantificación dos corpos celulares CRF + realizouse de acordo co enfoque estereolóxico imparcial. A serie de seccións analizouse para cada lote de tinción. Analizáronse seccións usando un microscopio BX-51 Olympus (Center Valley, PA, EUA) equipado cunha cámara de vídeo en directo Rotiga 2000R (QImaging, Surrey, BC, Canadá), unha etapa motorizada MAC6000 XYZ de tres eixes (Ludl Electronics, Hawthorne, NY, Estados Unidos), e unha estación de traballo para ordenador persoal. Todos os recuentos de células fixéronse en diapositivas codificadas por un investigador cego ás condicións do tratamento. Cada rexión foi esbozada virtualmente na imaxe dixitalizada de cada sección escollida aleatoriamente usando o módulo de fluxo de traballo óptico do programa Stereo Investigator (MicroBrightField, Williston, VT, EUA). Todos os contornos deseñáronse cun aumento reducido usando un obxectivo Olympus PlanApo N 2X con apertura numérica 0.08 e contados usando un obxectivo Olympus UPlanFL N 40X con apertura numérica 0.75. O marco da reixa e o cadro de conteo fixáronse en 275 × 160 μm. Utilizáronse unha zona de protección de 2 μm e unha altura de disección de 20 μm. As seccións conxeladas foron orixinalmente cortadas cun grosor nominal de 40 μm. O inmuno-mantemento e a montaxe resultan no espesor da sección alterada, que foi medido en cada sitio de reconto. O software calculou un grosor medio da sección e utilizouse para estimar o volume total da rexión de mostra e o número total de células CRF +.

Análise Estatística

Estudantil tUsáronse probas para analizar factores con dous niveis. Realizáronse ANOVA para analizar factores con máis de dous niveis. Seguindo o efecto significativo de todos os ANOVA (p<0.05), LSD de Fisher post hoc empregáronse probas de comparación. A proba de Dunnett utilizouse para determinar se R121919 normalizou a inxestión de Chow / palatable ratos tratados con vehículos Chow / Chowniveis de subvencións. Os paquetes de software / gráfico utilizados foron Systat 11.0, SigmaPlot 11.0 (Systat Software, Chicago, IL, Estados Unidos), InStat 3.0 (GraphPad, San Diego, CA, EUA), Statistica 7.0 (Statsoft, Tulsa, OK, EUA) e PASW Estatísticas 18.0 (SPSS, Chicago, IL, EUA).

RESULTADOS

Efectos da microinfusión de R121919 no CeA

Consumo excesivo de alimentos apetecibles

Para determinar se CRF₁ receptores do CeA median a inxestión excesiva de alimentos apetecibles en ratos ciclados con dieta, microinfusamos o sitio específicamente o CRF selectivo₁ antagonista do receptor R121919 nesta área cerebral e medida da inxestión de alimentos no inicio da P fase. Como se mostra en Imaxe 2a, a inxestión de alimentos alimentarios apetecibles e tratados por vehículos Chow / palatable as ratas tiñan unha dobre máis alta que a do control alimentado por chow Chow / Chow Ratos. Antagonismo do CeA CRF₁ Os receptores bloquearon esta alimentación excesiva de alimentos apetitosos Chow / palatable ratos, sen afectar a inxestión de alimentos en ratas de control (Chow / Chow, F (2, 20) = 0.72, NS; Chow / palatable, F (2, 14) = 5.02, p Post hoc A comparación revelou que a dose máis alta de R121919 (1.5 μg / lado) reduciu significativamente a inxestión de alimentos apetecible en comparación co vehículo en Chow / palatable Ratos. A inxestión de Chow / palatable As ratas que seguiron a microinfusión da dose 1.5 μg / lateral non difiriron significativamente da inxestión de vehículos tratados Chow / Chow Ratos. Confirmar a especificidade dos efectos da CRF₁ receptores no CeA, non se observou ningún efecto na inxestión de alimentos de individuos con cánulas extraviadas (Chow / palatable, F (2, 2) = 4.32, NS).

figura 2

Efectos da microinfusión do factor liberador selectivo de corticotropina-1 (CRF)₁) antagonista do receptor R121919 (0, 0.5, 1.5 μg / lado) no núcleo central da amígdala (CeA) sobre o consumo excesivo de alimentos apetecibles, hipofagia regular ...

Hipofagia da dieta regular

Para determinar se CRF₁ Os receptores do CeA median a hipofagia da dieta chow en ratos ciclados con dieta, microinfusamos R121919 nesta área cerebral e midemos a inxestión de alimentos no inicio do C fase. Como se mostra en Imaxe 2b, o consumo de vehículos tratados Chow / palatable as ratas foron N1 / 3 da inxestión de vehículos tratados Chow / Chow Ratos (hipofagias). O tratamento con R121919 non afectou á hipofagia do chow regular en Chow / palatable ratos (Chow / palatable, F (2, 12) = 0.14, NS). Confirmando os resultados obtidos en P fase, microinfusión de R121919 no CeA non afectou a inxestión de chow no control Chow / Chow ratos (Chow / Chow, F (2, 20) = 0.01, NS).

Comportamento de ansiedade inducido por abstinencia aguda

Determinar se CeA CRF₁ os receptores median o estado emocional negativo inducido ao retirar o alimento apetecible en ratas cicladas, microinfusamos o sitio específicamente R121919 nesta área cerebral e medimos un comportamento de ansiedade usando a proba de caixa clara-escura 5 h no C fase. Como se mostra en Figura 2cAs ratas retiradas agudamente do acceso intermitente crónico á dieta altamente palatável mostraron unha diminución significativa do tempo dedicado ao compartimento lixeiro da caixa escura. A microinfusión de 1.5 μg / lado de R121919 no CeA, a dose que reduciu efectivamente a alimentación excesiva de alimentos apetecibles, bloqueaba completamente o comportamento de ansiedade aumentando o tempo gastado na área de luz da caixa Chow / palatable ratas, sen afectar o comportamento Chow / Chow ratas (DOSE: F (1, 24) = 4.40, p<0.05). Confirmando a especificidade dos efectos para CRF₁ receptores no CeA, non se observou ningún efecto na inxestión de alimentos de suxeitos con cánulas extraviadas (DOSE: F (2, 2) = 4.32, NS).

Efectos da microinfusión de R121919 no BlA

Consumo excesivo de alimentos apetecibles

Para determinar se BlA CRF₁ os receptores medían o consumo excesivo de alimentos apetecibles en ratos ciclados con dieta, microinfusamos o sitio específicamente R121919 nesta área cerebral e medimos a inxestión de alimentos no inicio do P fase. Ao contrario do que se observou despois da administración de R1219191 no CeA, como se mostra en Imaxe 3a microinfusión bilateral do CRF selectivo₁ O antagonista do receptor no BlA non afectou de xeito significativo a inxestión de alimentos saborosos Chow / palatable ratos (Chow / palatable, F (2, 26) = 1.56, NS). Do mesmo xeito, o consumo regular de chow en Chow / Chow a rata non se viu afectada pola microinfusión R121919 (Chow / Chow, F (2, 18) = 0.52, NS).

figura 3

Efectos da microinfusión do factor liberador selectivo de corticotropina-1 (CRF)₁) antagonista do receptor R121919 (0, 0.5, 1.5 μg / lado) no núcleo basolateral da amígdala (BlA) por comer excesivamente de alimentos saborosos, hipofagia regular. ...

Hipofagia da dieta regular

Para determinar se CRF₁ os receptores de BlA mediaban a hipofagia de chow en ratas cicladas, microinfundimos R121919 nesta área cerebral e medimos a inxestión de alimentos ao comezo do C fase. Como se mostra en Imaxe 3b, observouse un aumento significativo da inxestión regular de chow despois da microinfusión do CRF₁ antagonista do receptor na BlA de Chow / palatable ratos (Chow / palatable, F (2, 26) = 4.46, p<0.05). De feito, a dose máis alta (1.5 μg) de R121919 microinfundida na BlA durante C a fase aumentou significativamente o consumo da dieta regular de chow por 221.1 ± 33.1 (M ± SEM) por cento en comparación co tratado con vehículo Chow / Chow ratas. R121919 atenuou, pero non bloqueou completamente, a hipofagia inducida pola retirada na dose máis alta inxectada. Confirmando os datos obtidos en P a fase, a microinfusión R121919 non afectou a inxestión regular de xeadas Chow / Chow ratos (Chow / Chow, F (2, 20) = 0.25, NS). Confirmando a especificidade dos efectos para CRF₁ receptores en BlA, non se observou ningún efecto na inxestión de alimentos de suxeitos con cánulas incorrectas (Chow / palatable, F (2, 8) = 0.50, NS).

Comportamento de ansiedade inducido por abstinencia aguda

Para determinar se BlA CRF₁ Os receptores mediaban o estado emocional negativo inducido por retirar de forma aguda o alimento agradable en ratas cicladas, microinfundimos o sitio específicamente R121919 nesta área cerebral e medimos o comportamento similar á ansiedade 5 h no C fase. Como se mostra en Figura 3cretirada de alimentos agradables Chow / palatable as ratas pasaron menos tempo no compartimento lixeiro en comparación con Chow / Chow ratas (DIETA: F (1, 23) = 84.03, p<0.001). R121919, microinfundido no BlA, non afectou significativamente o tempo que pasou na área de luz (DOSE: F (1, 39) = 0.01, NS).

Efectos da microinfusión de R121919 na BNST

Consumo excesivo de alimentos apetecibles

Para determinar se BNST CRF₁ Os receptores median a alimentación excesiva de alimentos saborosos en ratas cicladas na dieta, R121919 foi o sitio especificamente microinfundido nesta área cerebral e a inxestión de alimentos foi medida ao comezo da P fase. Como se mostra en Imaxe 4b, microinfusión bilateral do CRF selectivo₁ O antagonista dos receptores no BNST non afectou significativamente a inxesta de alimentos saborosos Chow / palatable ratos (Chow / palatable, F (2, 18) = 0.33, NS). Do mesmo xeito, o consumo regular de chow en Chow / Chow a rata non se viu afectada pola microinfusión R121919 (Chow / Chow, F (2, 20) = 1.03, NS).

figura 4

Efectos da microinfusión do factor liberador selectivo de corticotropina-1 (CRF)₁) antagonista do receptor R121919 (0, 0.5, 1.5 μg / lado) no núcleo da cama da estria terminalis (BNST) por comer excesivamente de alimentos saborosos, hipofagia de ...

Hipofagia da dieta regular

Para determinar se BNST CRF₁ os receptores mediaban a hipofagia da dieta chow en ratas cicladas, microinfundimos R121919 nesta área cerebral e medimos a inxestión de alimentos ao comezo da C fase. Como se mostra en Imaxe 4aA microinfusión R121919 non afectou a inxestión regular de xeadas Chow / Chow ratos (Chow / Chow, F (2, 14) = 0.03, NS). Do mesmo xeito, o tratamento con R121919 non afectou a hipofagia do chow regular Chow / palatable ratos (Chow / palatable, F (2, 20) = 0.27, NS).

Comportamento de ansiedade inducido por abstinencia aguda

Para determinar se BNST CRF₁ os receptores mediaban o estado emocional negativo inducido por retirar de forma aguda o alimento agradable en ratas cicladas, microinfundimos o sitio específicamente R121919 nesta área cerebral e medimos o comportamento similar á ansiedade 5 h despois do cambio de P→C fase. Como se mostra en Figura 4cretirada de alimentos agradables Chow / palatable as ratas pasaron menos tempo no compartimento lixeiro en comparación co control Chow / Chow ratas (DIETA: F (1, 17) = 17.11, p<0.01). R121919, microinfundido bilateralmente a unha dose de 1.5 μg / lado no BNST non afectou significativamente o tempo que pasou na área de luz (DOSE: F (1, 33) = 0.47, NS).

CRF Inmunohistoquímica

figura 5 ilustra micrografías representativas de células CRF + en CeA, BlA e BNST en Chow / Chow Chow / palatable ratas, seguindo o ad libitum procedemento alternativo de dieta saborosa. A análise da inmunoreactividade de CRF do CeA revelou que hai unha diferenza significativa entre Chow / palatable Chow / Chow ratas durante as dúas C eo P fase (F (2, 19) = 4.19, p<0.05). Non se observaron diferenzas estatisticamente significativas entre os grupos en BlA (F (2, 17) = 1.13, NS) ou BNST (F (2, 19) = 1.16, NS).

figura 5

Micrografías representativas da inmunoreactividade do factor liberador de corticotropina (CRF) no núcleo central da amígdala (CeA) (a – d), núcleo basolateral da amígdala (BlA) (e-h) e núcleo da cama da stria terminalis (BNST ) (i – l) ...

Conversa

Este estudo foi deseñado para identificar funcionalmente o sitio cerebral responsable da inxestión excesiva mediada por CRF de alimentos altamente agradables en ratas en réxime de alternancia dietética. Os nosos resultados demostran un papel fundamental para o CEA na mediación de consumo excesivo de alimentos altamente agradables. Ademais, demostramos que o sistema de CRF en BlA, diferente do CeA, ten un papel no proceso de devaluación que se produce ao reducir a magnitude de recompensa dos alimentos.

Demostramos anteriormente que os ciclos repetidos de acceso e retirada aguda dunha dieta azucrada e altamente agradable provocan unha consumo excesivo de alimentos saborosos e tamén unha hipofagia dependente da retirada aguda da dieta regular de chow e un comportamento similar á ansiedade (Blasio et al, 2013a; Cottone et al, 2009a, 2009b). A hipótese excesiva observada aquí é hipótese de ser provocada polo estado emocional negativo inducido por episodios repetidos de retirada aguda de alimentos altamente agradables a través dun CRF-CRF extrahipotalámico₁ mecanismo mediado polo sistema receptor, que se asemella ao proceso semellante ao "aceso" subxacente aos trastornos adictivos (Breese et al, 2005; Cottone et al, 2009a; Koob, 2008; Parylak et al, 2011).

Os resultados deste estudo demostran que CRF₁ Os receptores de CeA e BlA median diferencialmente as adaptacións alimentarias e o comportamento similar á ansiedade de ratas cicladas en dieta crónica. Administración do CRF selectivo₁ Un antagonista dos receptores no CeA bloqueou a alimentación excesiva e o comportamento similar á ansiedade Chow / palatable as ratas, sen afectar á hipofagia da dieta non aceptada e regular. Curiosamente, a administración de R121919 no BlA, atenuou a hipofagia da dieta de chow menos apetitosa (é dicir, un aumento da inxestión regular de chow) en Chow / palatable ratas, sen afectar a unha alimentación excesiva nin comportamento tipo ansiedade. Cando se microinfundiu na BNST, R121919 non afectou a ningunha das variables medidas Chow / palatable ratas (consumo excesivo da dieta altamente saborosa, inxestión da dieta regular de chow e comportamento coma a ansiedade provocada pola retirada aguda). Os efectos farmacolóxicos observados foron selectivos para Chow / palatable ratas porque R121919, microinfundidas dentro dos CeA, BlA ou BNST de Chow / Chow as ratas de control non exerceron ningún efecto. Polo tanto, o CRF – CRF₁ O sistema de receptores do CeA e BlA parece mediar diferencialmente os resultados do comportamento resultantes dunha dieta crónica agradable ao ciclismo. Por outra banda, o CRF – CRF₁ O sistema receptor do BNST non parece estar implicado nas adaptacións comportamentais inducidas por unha alternancia de dieta agradable.

Os nosos descubrimentos comportamentais e farmacolóxicos foron apoiados pola observación de que a inmunorreactividade de CRF dentro do CEA Chow / palatable As ratas incrementáronse significativamente en comparación con Chow / Chow controlan as ratas, durante a retirada e despois do acceso renovado á dieta altamente palatávelCottone et al, 2009a). Curiosamente, non se observou ningunha diferenza significativa na inmunorreactividade de CRF entre os grupos no BLA ou no BNST. A imunorreactividade CRF observada no CEA de Chow / palatable as ratas son consistentes co noso descubrimento anterior de que a retirada aguda da dieta agradable está asociada cun aumento da liberación de CRF no CEACottone et al, 2009a). Non obstante, ao contrario do que se mostrou anteriormente, renovar o acceso á dieta agradable non causou un retorno da expresión de CRF no CeA aos niveis de control. A discrepancia entre os resultados obtidos aquí e a observación anterior pode estar relacionada co diferente punto de tempo da recollida do cerebro e coa diferente resolución anatómica das técnicas adoptadas para medir a expresión CRF. Non obstante, o aumento observado na expresión de CRF no CeA durante a retirada e despois do acceso renovado á dieta agradable é consistente cos efectos selectivos do bloqueo do comportamento de ansiedade (durante a retirada) e do consumo excesivo (acceso renovado) en Chow / palatable Ratos. A aparente inconsistencia entre os dous estudos pode, polo tanto, ser interpretada colectivamente do seguinte xeito: durante a retirada de alimentos aguda e saborosa, a expresión de CRF aumenta no CeA de ratos ciclados con dietas comparados cos controis e é responsable da aparición dun efecto negativo. A expresión de CeA CRF permanece alterada ata as primeiras horas de acceso moi palatável, o que induce a comer en exceso. Despois dun excesivo consumo de alimentos apetecibles, o CRF volve aos niveis de control (Cottone et al, 2009a).

Os resultados comportamentais, farmacolóxicos e moleculares amosan a hipótese de que o CRF-CRF₁ O sistema receptor do CeA ten un papel importante na mediación do estado afectivo negativo e na inxestión excesiva de alimentos apetecibles en ratas cicladas por dieta, do mesmo xeito que se demostrou extensivamente para a dependencia de alcohol e drogas (Koob, 2010). De feito, os ratos dependentes de etanol mostran un aumento na liberación extracelular de CRF no CeA durante a retirada e a administración dun antagonista do receptor de CRF no CeA é capaz de bloquear a autoadministración escalada de etanol durante a retirada.Medo et al, 2006; Merlo Pich et al, 1995). Análogamente, os animais dependentes de opiáceos mostran unha expresión de CRF aumentada no CeA durante a retirada.maio et al, 2003) e o bloqueo dos receptores CRF no CeA, pero non o BNST, reduce os signos de comportamento da retirada.Heinrichs et al, 1995; McNally e Akil, 2002). Un papel clave para o CRF-CRF₁ O sistema na CeA tamén se demostrou na dependencia da nicotina. De feito, a retirada de nicotina precipitada por mecamilamina está asociada a unha hiperactivación do CRF-CRF₁ sistema receptor en CeAGeorge et al, 2007), e intra-CeA, pero non intra-BlA, microinfusión dun CRF₁ antagonista do receptor reduce as elevacións dependentes da retirada da nicotina no limiar de recompensa do cerebroBruijnzeel et al, 2012). Nos ratos dependentes de cannabinoides, a retirada precipitada está asociada a unha marcada elevación da concentración de CRF extracelular no CeARodríguez de Fonseca et al, 1997). En conxunto, esta evidencia apoia fortemente a hipótese de que o CRF-CRF₁ O sistema receptor no CeA é un mediador clave do efecto negativo inducido pola abstinencia aguda, xunto co consumo excesivo de drogas e alcohol durante a dependencia. Os nosos resultados expanden este coñecemento a unha alimentación excesiva de alimentos altamente palatábeis, o que suxire que ocorren neuroadaptacións análogas.

Os resultados deste estudo mostran que a hipofagia dependente da retirada de alimentos do paladar da dieta de aperitivo menos apetitiva é atenuada por microinfusión no BLA da CRF selectiva₁ antagonista do receptor, mentres que o tratamento farmacolóxico intra-BlA non afectou o consumo excesivo de comer e a ansiedade. A implicación diferencial da BLA CRF-CRF₁ O sistema receptor nos resultados do ciclo de dieta suxire que a hipofagia do chow pode representar un proceso comportamental independente do comportamento de ansiedade. Non obstante, estas conclusións coinciden coa hipótese de que o BlA media os aspectos sensoriais e de incentivos dos acontecementos salientais de motivación. De feito, hai probas considerables de que o BlA ten unha importante importancia na mediación dos procesos de depreciación e as respostas aversivas para reducir a recompensa (é dicir, o efecto Crespi, o contraste negativo sucesivo, a desvalorización da recompensa, etc .; Hatfield et al, 1996; Salinas et al, 1996; Wellman et al, 2005), e, polo tanto, a hipofagia resultante do cambio da dieta altamente palatábel á dieta de cacao menos apetitiva pode representar un proceso de depreciación hedónica, en vez de un mecanismo dependente da enerxía homeostasis (é dicir, independente do consumo de enerxía anterior ou da ganancia de peso corporal ; Cottone et al, 2008, 2009b). Bloqueo de CRF₁ Os receptores dentro do BlA son, por tanto, hipótese que reducen a hipofagia do chow (é dicir, para aumentar a inxestión de chow) atenuando o proceso de depreciación que ocorre ao pasar do alimento altamente apetecible ao chow menos apetitivo. Relevante para este contexto é tamén a aparente inconsistencia entre os resultados moleculares e comportamentais / farmacolóxicos obtidos no BLA. Aínda que o CRF₁ O antagonista do receptor foi capaz de reducir a magnitude da hipofagia do chow cando se inxectou dentro do BLA, non se observaron diferenzas significativas na inmunorreactividade da CRF nesta área ao comparar ratas controladas e cicladas. Esta aparente discrepancia pode explicarse tendo en conta que os procesos de depreciación dependentes de BlA de recompensas alternativas ocorren fisioloxicamente e teñen unha importante importancia evolutiva na selección de alimentos que producen o maior valor de recompensa / enerxía (Murray et al, 2011). Polo tanto, é discutible que a mediación destes procesos no BLA non require neuroadaptacións no sistema CRF (similar ás observadas no CeA). En apoio desta hipótese, mentres que o consumo excesivo require un ciclo crónico de dieta para desenvolverse, a hipofagia do chow alternativo menos preferido ocorre despois do primeiro cambio da dieta altamente palatábel cara ao chow normal (Cottone et al, 2008). Ademais, é importante recalcar que, en base aos resultados obtidos ao inxectar o antagonista do receptor CRF1 no BlA e CeA, o CRF₁ A hipofagia dependente do receptor observada aquí parece ser un proceso de comportamento diferente do que a anhedonia que se observou na retirada de drogas. Non obstante, demostrouse que a retirada aguda de acceso intermitente a alimentos apetecibles induciu outras respostas de tipo hipoedónico, como aumento da inmobilidade na proba de natación forzada e diminución da resposta nun programa de proporción progresiva de reforzo (Cottone et al, 2008; Iemolo et al, 2012).

Cabe mencionar isto, aínda que Chow / palatable As ratas foron cicladas de forma crónica, os cambios comportamentais e neuroquímicos que aparecen aquí ocorren durante unha retirada aguda e non crónica da dieta agradable. Resaltar este aspecto é particularmente relevante, xa que na investigación por adicción hai profundas diferenzas nas consecuencias comportamentais, farmacolóxicas e neuroquímicas do agudo vs observáronse a abstinencia prolongada (Heilig et al, 2010; Koob e Le Moal, 2008). Os futuros estudos serán valiosos para determinar como a retirada prolongada pode influír nos resultados do ciclo de dieta.

Un punto relevante de discusión é se o comportamento excesivo de inxestión alimentaria que observamos no contexto deste modelo animal pode considerarse "compulsivo". Na investigación de adicción preclínica, o termo "compulsivo" foi amplamente utilizado para describir a inxestión excesiva de drogas durante a retirada, que é impulsada por un estado afectivo negativo e aliviase ao renovar o acceso á droga (Ahmed e Koob, 2005; Koob e Le Moal, 2005). Esta aceptación do termo "compulsivo" baséase no marco conceptual de que os trastornos compulsivos caracterízanse por ansiedade e estrés antes de cometer un comportamento compulsivo e alivio do estrés realizando o comportamento compulsivo (Koob, 2009; Koob e Volkow, 2010). No contexto do modelo animal utilizado aquí, o comportamento alimentario excesivo podería interpretarse como unha forma de comportamento "compulsivo" dada a evidencia publicada anteriormente de que as ratas con acceso intermitente á dieta gustosa mostran un estado emocional negativo durante a retirada de alimentos gustosos, caracterizada por comportamentos de ansiedade e depresivos, que se alivian ao renovar o acceso (Cottone et al, 2009a, 2009b; Iemolo et al, 2012).

En resumo, os resultados deste estudo proporcionan evidencias funcionais críticas que o CRF-CRF₁ O sistema receptor do CeA e o BlA teñen un papel diferencial na mediación de comportamentos inadaptados resultantes do acceso intermitente a un alimento agradable. No CeA, o CRF-CRF₁ o sistema receptor é un mediador clave da inxestión excesiva de alimentos agradables e do efecto negativo dependente da abstinencia, mentres que na BlA media as respostas aversivas dos suxeitos provocadas pola redución da recompensa.

FINANCIACIÓN E DIVULGACIÓN

Os autores declaran ningún conflito de interese.

Grazas

Agradecemos a Duncan Momaney, Aditi R Narayan, Jina Kwak a asistencia técnica e Tamara Zeric a asistencia técnica e editorial. Tamén agradecemos a Elena F Crawford as suxestións útiles relacionadas coa inmunohistoquímica do CRF. Esta publicación foi posible grazas aos números de subvencións DA023680, DA030425, MH091945, MH093650 e AA016731, do Instituto Nacional de Abuso de Drogas (NIDA), do Instituto Nacional de Saúde Mental (NIMH) e do Instituto Nacional de Abuso de Alcohol e Alcoholismo ( NIAAA), pola Peter Paul Career Development Professorship (PC) e polo Programa de oportunidades de investigación universitarias da Universidade de Boston (UROP). Esta investigación tamén contou co apoio dos programas de investigación intramuros NIH do Instituto Nacional sobre Abuso de Drogas e do Instituto Nacional de Abuso e Alcoholismo do Alcohol, NIH, DHHS. Os seus contidos son responsabilidade exclusiva dos autores e non representan necesariamente as opinións oficiais dos Institutos Nacionais de Saúde.

Notas ao pé

Información complementaria acompaña o artigo no sitio web de Neuropsychopharmacology (http://www.nature.com/npp)

Material complementario

Información complementaria

Prema aquí para obter un ficheiro de datos adicional.^{(129K, pdf)}

References

Ahmed SH, Koob GF. Transición á drogodependencia: modelo de reforzo negativo baseado nunha diminución alostática na función de recompensa. Psicofarmacoloxía (Berl) 2005; 180: 473-490. [PubMed]
Avena NM, Bocarsly ME, Hoebel BG. Modelos animais de azucre e graxa gordura: relación coa dependencia dos alimentos e aumento do peso corporal. Métodos Mol Biol. 2012; 829: 351-365. [PubMed]
Bakshi VP, Kalin NH. Hormona liberadora de corticotropina e modelos animais de ansiedade: interaccións xene-ambiente. Psicoloxía biolóxica. 2000; 48: 1175-1198. [PubMed]
TL de balas. Sensibilidade ao estrés: desregulación de vías de CRF e desenvolvemento de enfermidades. Horm Behav. 2005; 48: 1-10. [PubMed]
Blasio A, Iemolo A, Sabino V, Petrosino S, Steardo L, Arroz KC. 2013aRimonabant precipita a ansiedade en ratas retiradas de alimentos apetecibles: papel da amígdala central Neuropsychopharmacologydoi: 10.1038 / npp.2013.153 [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed] [Cruz Ref]
Blasio A, Steardo L, Sabino V, Cottone P. O sistema 2013bOpioide na corteza prefrontal media media a alimentación parecida á compulsión Bioldoi: 10.1111 / adb.12033 [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed] [Cruz Ref]
Breese GR, Overstreet DH, Knapp DJ. Marco conceptual para a etioloxía do alcoholismo: unha hipótese de "acendido" / estrés. Psicofarmacoloxía (Berl) 2005; 178: 367-380. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Bruijnzeel AW, Ford J, Rogers JA, Scheick S, Ji Y, Bishnoi M, et al. O bloqueo dos receptores CRF1 no núcleo central da amígdala atenúa a disforia asociada á retirada da nicotina nas ratas. Pharmacol Biochem Behav. 2012; 101: 62-68. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Chen C, Wilcoxen KM, Huang CQ, Xie YF, McCarthy JR, Webb TR, et al. Deseño de 2,5-dimetil-3- (6-dimetil-4-metilpiridina-3-il) -7-dipropilaminopirazolo [1,5-a] py rimidina (NBI 30775 / R121919) e relación de estrutura-actividade dunha serie de potentes e oralmente antagonistas dos receptores do factor de liberación de corticotropina activa. J Med Chem. 2004; 47: 4787-4798. [PubMed]
Corwin RL. Ratos atronadores: un modelo de comportamento excesivo intermitente. Apetito. 2006; 46: 11-15. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Corwin RL, Grigson PS. Descrición xeral do simposio: adicción aos alimentos: feito ou ficción. J Nutr. 2009; 139: 617-619. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Cottone P, Sabino V, Nagy TR, Coscina DV, Zorrilla EP. Microestrutura de alimentación en ratos susceptibles contra as obesidades dietéticas versus resistentes: efectos centrais da urocortina 2. J Physiol. 2007; 583 (Pt 2: 487-504. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Cottone P, Sabino V, Roberto M, Baixo M, Pockros L, Frihauf JB, et al. O recrutamento do sistema de CRF media o lado escuro da alimentación compulsiva. Proc Natl Acad Sci USA. 2009a; 106: 20016 – 20020. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. O acceso intermitente a alimentos preferidos reduce a eficacia reforzante do chow nas ratas. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2008; 295: R1066 – R1076. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Adaptacións metabólicas e consumadoras en ratas femininas con acceso alternativo a alimentos preferidos. Psicouroendocrinoloxía. 2009b; 34: 38 – 49. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Cottone P, Wang X, Park JW, Valenza M, Blasio A, Kwak J, et al. O antagonismo dos receptores sigma-1 bloquea a alimentación compulsiva. Neuropsicofarmacoloxía. 2012; 37: 2593-2604. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Dore R, Iemolo A, Smith KL, Wang X, Cottone P, Sabino V. 2013CRF media os efectos anxiogênicos e anti-gratificantes, pero non os anoréxicos de PACAP Neuropsychopharmacologydoi: 10.1038 / npp.2013.113 [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed] [Cruz Ref]
Funk CK, O'Dell LE, Crawford EF, Koob GF. O factor liberador de corticotropina dentro do núcleo central da amígdala media unha autoadministración mejorada de etanol en ratas retiradas e dependentes do etanol. J Neurosci. 2006; 26: 11324 – 11332. [PubMed]
George O, Ghozland S, MR Azar, Cottone P, EP de Zorrilla, Parsons LH, et al. A activación do sistema CRF-CRF1 media os aumentos inducidos pola abstinencia na auto-administración da nicotina en ratas dependentes da nicotina. Proc Natl Acad Sci USA. 2007; 104: 17198-17203. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Grigoriadis DE, Chen C, Wilcoxen K, Chen T, Lorang MT, Bozigion H, et al. In vitro caracterización de R121919: un novo antagonista do receptor factor de liberación de corticotropina sen péptidos (CRF1) para o posible tratamento de depresións e trastornos relacionados coa ansiedade. Sociedade para a Neurociencia. 1; Resumo 2000: 807-4.
Hagan MM, Chandler PC, Wauford PK, Rybak RJ, Oswald KD. O papel da comida e a fame apetitosos como factores desencadeantes nun modelo animal de compulsión alimentaria provocada polo estrés. Int J Eat Disord. 2003; 34: 183-197. [PubMed]
Hatfield T, Han JS, Conley M, Gallagher M, Holanda P. As lesións neurotóxicas da amígdala basolateral, pero non central, interfiren cos condicionamentos de devolución de reforzo de segundo nivel de Pavlovian. J Neurosci. 1996; 16: 5256-5265. [PubMed]
Heilig M, Egli M, Crabbe JC, Becker HC. Retirada aguda, abstinencia prolongada e efecto negativo no alcoholismo: están ligados. Adicto a Biol. 2010; 15: 169-184. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Heilig M, Koob GF. Un papel clave para o factor liberador de corticotropina na dependencia do alcohol. Tendencias Neurosci. 2007; 30: 399-406. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Heinrichs SC, Menzaghi F, Schulteis G, Koob GF, Stinus L. A supresión do factor liberador de corticotropina na amígdala atenúa as consecuencias aversivas da retirada da morfina. Behav Pharmacol. 1995; 6: 74-80. [PubMed]
Iemolo A, Valenza M, Tozier L, Knapp CM, Kornetsky C, Steardo L, et al. A retirada do acceso crónico e intermitente a un alimento altamente palatável induce un comportamento depresivo nos ratos de compulsión. Behav Pharmacol. 2012; 23: 593-602. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Koob GF. Un papel para os sistemas de tensión cerebral en adicción. Neurona. 2008; 59: 11-34. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Koob GF. Sustratos neurobiolóxicos para o lado escuro da compulsividade na dependencia. Neurofarmacoloxía. 2009; 56 (Suppl 1: 18 – 31. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Koob GF. O papel dos péptidos relacionados con CRF e CRF no lado escuro da adicción. Res. Cerebral. 2010; 1314: 3-14. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Koob GF, Heinrichs SC. Un papel para o factor liberador de corticotropina e urocortina nas respostas comportamentais a factores de estrés. Res. Cerebral. 1999; 848: 141-152. [PubMed]
Koob GF, Le Moal M. A plasticidad da recompensa do neurocircuito e o "lado escuro" da adicción ás drogas. Nat Neurosci. 2005; 8: 1442-1444. [PubMed]
Koob GF, Le Moal M. Review. Mecanismos neurobiolóxicos para os procesos de motivación opositores. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2008; 363: 3113-3123. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Neurocircuíto da adicción. Neuropsicofarmacoloxía. 2010; 35: 217-238. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Rexistro ML, Koob GF, Zorrilla EP. Papel do factor liberador de corticotropina na dependencia de drogas: potencial de intervención farmacolóxica. Drogas CNS. 2011; 25: 271-287. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Maj M, Turchan J, Smialowska M, Przewlocka B. Influencia de morfina e cocaína na biosíntese de CRF no núcleo central da amiga da rata. Neuropéptidos. 2003; 37: 105-110. [PubMed]
McNally GP, Akil H. Papel da hormona liberadora de corticotropina no núcleo da amígdala e no leito da estria terminal no comportamento, modulación da dor e consecuencias endocrinas da retirada de opiáceos. Neurociencia. 2002; 112: 605-617. [PubMed]
Merlo Pich E, Lorang M, Yeganeh M, Rodríguez Fonseca F, Raber J, Koob GF, et al. Aumento dos niveis de inmunorreactividade en forma de factor de liberación de corticotropina extracelular na amígdala de ratos espertos durante a tensión de contención e a retirada de etanol medida por microdiálisis. J Neurosci. 1995; 15: 5439-5447. [PubMed]
Murray E, Wise S, Rodas S. 2011 O que poden facer diferentes cerebros con recompensa In Gottfried JA (eds) .Neurobioloxía de sensación e recompensa, capítulo 4 CRC Prensa: Boca Raton, FL, EUA [PubMed]
Parylak SL, Koob GF, Zorrilla EP. O lado escuro da adicción aos alimentos. Physiol Behav. 2011; 104: 149-156. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Paxinos G, Watson C. 2007 O cerebro de ratos en coordenadas estereotáxicas6th edn.Academic Press
Pellegrino A. Un Atlas estereotóxico do cerebro da rata. Plenum: Nova York; 1979.
Rodríguez de Fonseca F, Carreira MR, Navarro M, Koob GF, Weiss F. Activación do factor liberador de corticotropina no sistema límbico durante a retirada de cannabinoides. Ciencia. 1997; 276: 2050-2054. [PubMed]
Sabino V, Cottone P, Steardo L, Schmidhammer H, Zorrilla EP. 14-Methoxymetopon, un agonista de opioides mu moi potente, afecta bifásicamente a inxestión de etanol en ratas de preferencia alcohólica sarda. Psicofarmacoloxía (Berl) 2007; 192: 537-546. [PubMed]
JA Salinas, pai MB, McGaugh JL. As lesións de ácido ibotenico do complexo basolateral da amígdala ou do núcleo central afectan diferencialmente a resposta ás reducións da recompensa. Res. Cerebral. 1996; 742: 283-293. [PubMed]
Shalev U, Erb S, Shaham Y. Papel do CRF e doutros neuropéptidos no restablecemento da busca de drogas por estrés. Res. Cerebral. 2010; 1314: 15-28. [Artigo gratuíto de PMC] [PubMed]
Vale W, Spiess J, Rivier C, Rivier J. Caracterización dun péptido hipotalámico ovino residuo 41 que estimula a secreción de corticotropina e beta-endorfinas. Ciencia. 1981; 213: 1394-1397. [PubMed]
Volkow ND, O'Brien CP. Problemas para DSM-V: debería incluírse a obesidade como trastorno cerebral. Son J Psiquiatría. 2007; 164: 708-710. [PubMed]
Wellman LL, Gale K, Malkova L. A inhibición mediada por GABAA de bloques basolaterales de amígdala recompensa a depreciación en macacos. J Neurosci. 2005; 25: 4577-4586. [PubMed]
Yach D, Stuckler D, Brownell KD. Consecuencias epidemiolóxicas e económicas das epidemias globais de obesidade e diabetes. Nat Med. 2006; 12: 62-66. [PubMed]