כתב העת של Neuroscience, 6 ספטמבר 2006, 26 (36): 9196-9204; doi: 10.1523 / JNEUROSCI.1124-06.2006
פיטר אולאוסון1, ג 'יי דיוויד Jentsch2, נטלי טרונסון /1, רחל ל3, אריק ג 'נסטלר4, ו ג 'יין ר' טיילור1
1.התכתבות צריכה להיות מופנית אל ג'יין ר. טיילור, המחלקה לפסיכיאטריה, המחלקה לפסיכיאטריה מולקולרית, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ייל, מתקני מחקר של ריבקוף, מרכז בריאות הנפש של קונטיקט, רחוב 34 Park, New Haven, CT 06508.[מוגן בדוא"ל]
תַקצִיר
שינויים במוטיבציה היו מעורבים בפתופיזיולוגיה של מספר הפרעות פסיכיאטריות, כולל שימוש בסמים ודיכאון. חשיפה חוזרת ונשנית לתרופות של התעללות או לחץ ידועה גורמת לעקביות את גורם השעתוק ΔFosB בגרעין האקומבנס (NAc) והסטראטום הגבי, השפעות המשוערות לתרום לנוירו-דפטציות באיתות של דופאמין. מעט ידוע, עם זאת, על מעורבות ספציפית של ΔFB ב dysregulation של התנהגויות מוטיבציה appetitively. אנו מראים כאן overexpression inducation של ΔFosB ב NAC ו הסטריאטום הגבי של עכברים bitransgenic, או במיוחד הליבה NAC של חולדות על ידי שימוש בהעברת גנים מתווך ויראלי, משופרת ביצועים חיזוק ביצועים אינסטרומנטליים יחס פרוגרסיבי להגיב. השפעות התנהגותיות דומות מאוד נמצאו לאחר חשיפה חוזרת ונשנית קודמת לקוקאין, אמפטמין, MDMA [+] - 3,4-methylenedioxymethamphetamine], או ניקוטין בחולדות. תוצאות אלו חושפות את הרגולציה החזקה של תהליכים מוטיבציוניים על ידי ΔFOSB, ולספק ראיות כי שינויים המושרה על ידי תרופות ביטוי גנים באמצעות אינדוקציה של ΔFosB בתוך הליבה NAC עשוי לשחק תפקיד קריטי ההשפעה של השפעות מוטיבציה על התנהגות אינסטרומנטלית.
מבוא
חשיפה חוזרת ונשנית לתרופות גורמת לשינויים דינמיים זמניים בתעתיק גנים המייצרים נוירו-דפטציות מתמשכות בתוך הגרעין (nacus accumbens)נסלר, 2004). אזור מוח זה ממלא תפקיד קריטי בתהליכי סמים ותגבור טבעי (קלי ברידג ', 2002), אם כי מעט ידוע על גורמי שעתוק המשפיעים על התנהגות מונעת על ידי nondrug, חיזוקים תאבון כגון מזון. ΔFosB הוא גורם תעתיק המופעל בתוך הסטריאטום NAC והגבי על ידי חשיפה כרונית לסמים (Konradi ואח ', 1994; Nye et al., 1995; חן ואח ', 1997; Pich et al., 1997; שו-לוצ'מן ואח ', 2003) ואת ריצה כפייתי (Werme et al., 2002). זה גם המושרה באזורים אלה על ידי מספר צורות של מתח כרוני (Perrotti ואח ', 2004). השיפור של תהליכי חיזוק סמים הקשורים אינדוקציה של ΔFOS Steratal היא מבוססת היטב (Kelz ואח ', 1999; קולבי ואח ', 2003; Zachariou ואח ', 2006). התוצאות של רמות ΔFosB גבוהות באזורים אלה על התנהגות אינסטרומנטלית המונעת על ידי מחזקים טבעיים, עם זאת, לא ידוע.
תפקוד התגובות האינסטרומנטליות הוא מרכיב הכרחי בהתנהגות נטילת תרופות העלולה להפוך לבלתי מסודרת או לא גמישה ככל שהמעבר להתמכרות מתקדמת (ינטש וטיילור, 1999; ברק והיימן, 2000; ברידג 'ו רובינסון, 2003; אווריט ורובינס, 2005). ה- NAc מעורב במספר היבטים של התנהגות אינסטרומנטלית עם רלוונטיות להתמכרות (Balleine ו קילקרוס, 1994; קורביט ואח ', 2001; de Borchgrave et al., 2002; Di Ciano ו Everitt, 2004b; אווריט ורובינס, 2005). לכן סביר להניח כי neuroadaptations המושרה על ידי תרופות בתוך NAC יכול להשפיע על הביצועים של פעולות אינסטרומנטליות. ואכן, חשיפת קוקאין כרונית משפרת את הביצועים האינסטרומנטליים המחזקים סוכרוז (מיילס ואח ', 2004) ו מניפולציות חשבתי לחסום neuroplasticity בתוך הליבה NAC, כולל עיכוב של PKA (חלבון קינאז A) או סינתזה חלבון, להפריע תגמולים אינסטרומנטלי תגמול מזון (בולדווין ואח ', 2002a; הרננדס ואח ', 2002). הליבה NAC גם מתווך את ההשפעה המוטיבציה של השפעות מותנות על התנהגות אינסטרומנטלית (פרקינסון ואח ', 1999; קורביט ואח ', 2001; Hall et al., 2001; די צ'יאנו ואווריט, 2004a; איטו ואח ', 2004), המספק מצע נוירוביולוגי לפיה אינדוקציה ΔFosB עשוי להשפיע באופן משמעותי על ביצועים אינסטרומנטליים המוטיבציה עבור חיזוקים תיאבון כגון מזון, מים, או סמים של התעללות.
כאן, בדקנו את ההשפעות של ΔFOSB על התנהגות מונעת התנהגותית באמצעות שתי גישות משלימות גנטית: (1) overexpression induced של ΔFosB בתוך הסטרייטום NAC ו הגבי של עכברים bitransgenic (NSE-tTA × TetOp-ΔFosB) ו (2) overexpression של ΔFosB בליבת NAC במיוחד על ידי שימוש בהעברת גנים מתווכת ויראלית בחולדות. החוקרים גם העריכו האם חשיפה חוזרת ונשנית קודמת לקוקאין, אמפטמין, (+) - 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA), או ניקוטין, בתנאים שדווחו כדי להגדיל את ΔFOSB, ישפר את היענות האינסטרומנטלית ו / או המוטיבציה המוגברת על ידי מזון באמצעות לוח זמנים יחס פרוגרסיבי, כפי שהוכח עבור ממשל עצמי מחוזק בסמים (הורגר ואח ', 1990, 1992; Piazza ואח ', 1990; Vezina ואח ', 2002; מיילס ואח ', 2004). התוצאות שלנו מדגימות השפעות מתמשכות של ΔFosB על התנהגות אינסטרומנטלית ומציעות שגורם שעתוק זה עשוי לפעול בבסיס ה- NAc כרגולטור של פונקציה מוטיבציונית.
חומרים ושיטות
בעלי חיים וטיפול בבעלי חיים
חולדות ספרגי דולי נאיביות ניסוי נרכשו מעבדות נהר צ'ארלס (Wilmington, MA). עכברים bitransgenic 11A זכר היו נגזרים מן הצלב בין עכברים מהונדס הומוזיגוגי להביע nolon ספציפי נוירון (NSE) -TTA tetracycline transactivator חלבון (קו A) ועכברים המבטאים TetOp (מקדם תגובה tetracycline) -FFB (קו 11); הקווים ההורים נשמרו על רקע מעורב של outbred (50% ICR ו- 50% C57BL6 × SJL)חן ואח ', 1998; Kelz ואח ', 1999). אלה עכברים xNUMXA bitransgenic להביע ΔFosB רק כאשר: (11) הן transgenes נמצאים באותו תא, ו (1) ההפעלה תעתיק על ידי TTA אינו מעוכב על ידי נוכחות של אנטיביוטיקה tetracycline כגון doxycycline. ניהול של doxycycline אלה עכברים יכולים ובכך להפעיל שליטה זמנית על הביטוי של ΔFOSB ולהשתמש בהם כדי למנוע את הביטוי במהלך הפיתוח; אכן, הממשל doxycycline מזוהה עם ביטוי דליפה לגילוי של ΔFOSB (חן ואח ', 1998; Kelz ואח ', 1999). יתר על כן, קו 11A של עכברים bitransgenic נבחרו עבור הניסויים הנוכחי, כי הם מציגים דפוס ביטוי זה מוגבל בעיקר נוירונים steratal המכיל dynorphin (הן NAC ו הסטריאטום הגבי), דומה מאוד דפוס של אינדוקציה Δ FosB על ידי תרופה כרונית חשיפה (Kelz ואח ', 1999). יתר על כן, כימות של ביטוי זה striatal של ΔFosB כבר לכמת בעבר (חן ואח ', 1998; Kelz ואח ', 1999). עכברים נוצרו באוניברסיטת טקסס דרום מערב ומתוחזק נבדק מתקני ייל. במהלך ההיריון והפיתוח, כל העכברים נשמרו ב- doxycycline עד 8-9 שבועות של גיל בריכוז של 100 מיקרוגרם / מ"ל במי השתייה, התנאים הידועים לשמירה על הטרנסגנים המונעים על ידי TetOp במצב "off", והשתמשו ב- 6 שבועות off doxycycline כאשר הביטוי ΔFosB הופך מקסימלי (Kelz ואח ', 1999). כל הניסויים מעורבים השוואה של עכברים bitransgenic littermate על לעומת doxycycline off, אשר כשלעצמה אין כל השפעה על התנהגות מוטיבציה (Kelz ואח ', 1999; McClung ו Nestler, 2003; Zachariou ואח ', 2006).
כל הנושאים הניסוייים שוכנו בזוגות (חולדות) או בקבוצות (עכברים, ארבעה עד חמישה לכלוב) תחת תנאי טמפרטורה ולחות מבוקרים תחת מחזור אור / כהה של 12 h (אור ב- 7: 00 AM ו- off ב- 7: 00 אחר הצהריים). הם הורשו לפחות 7 ד כדי להתאים את מתקני הדיור לפני כל מחקר. לבעלי חיים היתה גישה למודעות מים בכל עת וגישה מוגבלת למזון כמפורט להלן. כל שימוש בבעלי חיים נערך על פי המכון הלאומי לבריאות מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה אושרה על ידי טיפול בבעלי חיים ועדות שימוש באוניברסיטת טקסס דרום מערב ו אוניברסיטת ייל.
סמים
קוקאין הידרוכלוריד (MDM), MDMA הידרוכלוריד (מסופק בחביבות על ידי NIDA), ו - (-) ניקוטין מימן tartrate (Sigma), סיגמא ) מומסו מלוחים פיזיולוגיים סטריליים (0.9%) והזריקו intraperitonally בנפח של 5 מ"ל / ק"ג (עכברים) או 2 מ"ל / ק"ג (חולדות). ה- pH של הפתרון ניקוטין היה מותאם עם נתרן ביקרבונט לפני ההזרקה.
וקטורים ויראליים
העברת גנים מתווך נגיפי בוצעה כמתואר לעיל (קרלזון ואח ', 1998; Perrotti ואח ', 2004). בקיצור, cDNAs קידוד חלבונים ספציפיים הוכנסו לתוך הנגיף הרפס סימפלקס (HSV) amplicon HSV-PrPUC ו ארוזים לתוך הנגיף באמצעות עוזר 5dl1.2. ההופעת הנהיגה של וקטור או HSV-LacZ, קידוד של חלבון הבקרה β-galactosidase, או HSV-ΔFosB, קידוד עבור ΔFOSB, הועברו לאחר מכן לליבת ה- NAC על פי פרוטוקול הניסוי.
הליך ניסיוני
מתווה.
הניסוי 1 בחן את ההשפעות של חשיפה חוזרת ונשנית קודמת של תרופות על ביצועים חיזקו ביצועים אינסטרומנטליים יחס פרוגרסיבי להגיב. חולדות חולקו באופן אקראי לחמש קבוצות ניסוייות (n = 9-10 / group). קבוצות אלו קיבלו זריקות פעמיים ביום (תוך intraperitoneally, ב- 9: 00 AM ו- 5: 00 PM) עם מלוחים או אחת מהתרופות הבאות: ניקוטין, 0.35 מ"ג / ק"ג; MDMA, 2.5 mg / kg; קוקאין, 15 מ"ג / ק"ג; או אמפטמין, 2.5 מ"ג / ק"ג עבור 15 ימים רצופים. המינונים נבחרו בהתבסס על הנתונים שפורסמו בעבר (טיילור ו Jentsch, 2001; Olausson ואח ', 2003), ואת גירוי תרופה המושרה סמים היה פיקוח על ימים טיפול 1 ו 15. לאחר 5 ד של נסיגה, בעלי חיים הוכשרו על תגובה אינסטרומנטלית עבור 10 ימים רצופים ולאחר מכן נבדק על יחס פרוגרסיבי להגיב ביום המחרת. שני בעלי חיים לא נכללו בניתוח הסטטיסטי משום שלא קיבלו את התגובה האינסטרומנטלית, ולא עשו יותר מנוף פעיל אחד על כל אחת משלוש האימונים הסופיים.
ניסויים 2 ו 3 בחן את ההשפעות של overexpression סטרילית overable של ΔFBB בעכברים bitransgenic על הביצועים אינסטרומנטלי להגיב על יחס פרוגרסיבי של חיזוק. Overexpression overducion של ΔFosB בעכברים אלה הוכח בעבר כדי לחקות את ההשפעות של חשיפה חוזרת של סמים בפעילות המנוע ואת פרדיגמות העדפת מקום מותנה (Kelz ואח ', 1999; Zachariou ואח ', 2006). עכברים אלה יכולים לספק מידע קריטי על תרומתו של ΔFosB סטריאטלי לתהליכים התנהגותיים ספציפיים. עכברים זכרים Genotyped נשמרו על דוקסיציקליין או הועברו במי ברז ב 8 שבועות של גיל. ניסויים בוצעו לאחר 6 שבועות של נסיגה doxycycline, שבו הביטוי transgene הזמן הוא מקסימלי (Kelz ואח ', 1999). בניסוי 2, בעלי חיים (n = 16) היו מוגבלים ומוגבלים על התהליך האינסטרומנטלי המתואר להלן (ראה להלן, בדיקה אינסטרומנטלית ובדיקת יחס פרוגרסיבי) עבור 10 ימים רצופים. לאחר השלמת בדיקות אינסטרומנטליות, cocaine- המושרה גירוי תנועה הוערך בעכברים אלה. בניסוי 3, קבוצה נפרדת של עכברים (n = 18) הוכשרו על התגובה אינסטרומנטלית עבור 10 ימים רצופים בתנאים שבהם מקסימום של חיישנים 50 נמסרו. ביום 11, כל העכברים נבדקו על יחס פרוגרסיבי להגיב. ביום 12, קבענו את ההשפעות של חיזוק פיחות ידי prefeeding על יחס פרוגרסיבי להגיב.
ניסויים 4 ו 5 בחנו את ההשפעות של overexpression ויראלי בתיווך של ΔFosB במיוחד בתוך NAC. הניסוי 4 בדק את ההשפעות של overexpression ΔFosB על הביצועים אינסטרומנטלי. הנה, חולדות היו חדורים HSV-ΔFosB (n = 8) או HSV-LacZ (n = 8) ב NAC הליבה מאומן על פרוצדורה אינסטרומנטלית החל 40 h מאוחר יותר. לאחר אימון 10 יומי, רמות הפעילות הבסיסית הוערכו עבור כל בעלי החיים של ציוד ניטור פעילות ניטור כפי שמתואר להלן (ראה להלן, פעילות לוקומוטור). הניסוי 5 העריך את ההשפעות של overcion NAC ΔFosB במיוחד על יחס פרוגרסיבי להגיב. הנה, חולדות הוכשרו לראשונה עבור 15 ימים רצופים, שהוקצו קבוצות ניסיוניות, ולאחר מכן חדורים HSV-ΔFosB (n = 8) או HSV-LacZ (n = 7) ב NAC הליבה. בעלי חיים נותרו שלא נבדקו ולא מטופלים עבור 4 d כדי לאפשר ביטוי ΔFOSB לשיא. ביום 5 לאחר עירוי, כל בעלי החיים נבדקו עבור מנוף לחיצה על לוח הזמנים יחס פרוגרסיבי. לאחר היום האחרון של בדיקות, כל החולדות נהרגו ואת המיקום של cannulas אינפוזיה הליבה NAC מאומת היסטולוגית. בהתבסס על המיקום של cannulas אינפוזיה, שני חולדות הוצאו מן הניסוי 4 ועכברוש אחד מניסוי 5.
אפיון ביטוי גנים נעשה בקבוצה נפרדת של בעלי חיים. הנה, HSV-LacZ היה חדורים לתוך הליבה NAC ובעלי חיים נהרגו 3 ד מאוחר יותר. הביטוי של β-galactosidase הוערך לאחר מכן immunohistochemically.
פעילות תנועה.
הפעילות לוקומוטור נמדדה באמצעות מטר פעילות (צג פעילות בעלי חיים digiscan, Omnitech אלקטרוניקה, קולומבוס, OH). מטר הפעילות היו מצוידים בשתי שורות של photensors אינפרא אדום, כל שורה המורכבת חיישנים 16 להציב 2.5 ס"מ זה מזה. מטר הפעילות נשלט על ידי ונתונים של מטר הפעילות שנאספו על ידי מחשב אישי באמצעות תוכנת Micropro (Omnitech אלקטרוניקה).
חיות הניסוי הונחו בקופסאות פלסטיק שקופות (25 × 45 × 20 ס"מ) שהוכנסו למטר הפעילות. בעלי חיים הורשו בתחילה כדי להרגיל את הפעילות הקטרית הקלטה ציוד עבור 30 דקות. בניסויים מסוימים, בעלי חיים נלקחו לאחר מכן, מוזרק עם קוקאין, אמפטמין, ניקוטין, או רכב על פי העיצוב הניסויי, והניח בחזרה לתוך הקופסאות. הפעילות לוקומוטור נרשמה אז עבור 60 דקות, החל 5 דקות לאחר הזרקת סמים, כדי למנוע הזרקת יתר הזרימה המושרה. כל הניסויים בוצעו במהלך שלב האור של החיה (בין 9: 00 AM ו- 6: 00 PM).
שיטת ההיענות והבדיקות היחסיות.
שיטת התגובה נעשתה באמצעות תאי אופרנט סטנדרטיים לחולדות (30 × 20 × 25 ס"מ) או עכברים (16 × 14 × 13 ס"מ) בשליטת תוכנת MedPC (Med Associates, St. Albans, VT). כל חדר היה שוכן בחדר חיצוני המצמצם קול, מצויד בגנרטור רעש לבן ומאוורר כדי להפחית את השפעת הרעש החיצוני. אור בית שהונח על הקיר האחורי האיר את החדר. מתקן גלולה נמסר כדורי מזון (20 או 45 מ"ג, Bio-Serv, Frenchtown, ניו ג 'רזי) כמו מחזק לתוך המגזין. ראשי הזיהוי נתגלו על ידי תא צילום שהורכב מעל קיבול החיזוק. במגזין הזה היה אור גירוי. עבור עכברושים, מנוף אחד הונח על כל צד של המגזין. עבור עכברים, שני פתחי האף הוצבו על הקיר האחורי של החדרים (כלומר, מול המגזין חיזוק).
במהלך 5 ד מיד לפני תחילת האימון, בעלי חיים הוגבלו גישה 90 דקות מזון ליום חשופים גרעיני מזון מבוססי גרגר (עכברים, 20 מ"ג, חולדות, 45 מ"ג) בכלובים בביתם. במהלך תקופת הבדיקה, כדורי מזון היו זמינים לסירוגין בתאי אופרנטית על פי פרוטוקול התנהגותי (ראה להלן), כמו גם כמויות בלתי מוגבלות בכלוב הביתה עבור 90 דקות, החל 30 דקות לאחר הפגישה בדיקה יומית. זה לוח הזמנים גישה מזון מאפשר לכל חיה בנפרד להגיע לנקודת השובע הפרט שלהם ומקטין את השתנות הנגרמת על ידי תחרות בין בעלי חיים דומיננטית ו כפוף. בידיים שלנו, לוח זמנים זה מאפשר עלייה במשקל איטי לאחר ירידה במשקל הראשוני ∼85-90% ממשקלות האכלה ללא תשלום. משקולות בעלי חיים נצפו לאורך כל הניסוי.
כל הנבדקים היו בתחילה הורגל את מנגנון בדיקה עבור 2 ד; במהלך הפגישות הללו, כדורי מזון נמסרו למגזין החיזוי על לוח זמנים קבוע של 15 (FT-15). החל ביום המחרת, המשתתפים קיבלו הדרכה יומיומית עבור 10 ימים רצופים. ההיענות למזון נבדקה על בסיס נהלי מיזוג אינסטרומנטלי שפורסמו בעבר (Baldwin et al., 2002b). תגובה על המנוף הנכון (כלומר, הפעיל) / האף היה מחוזק, בעוד להגיב על מנוף אחרים (לא פעיל) / האף לא היו תוצאות מתוכנתות. מיקום האף או הידית הפעילים (שמאל / ימין) היה מאוזן עבור כל קבוצות הניסוי. השלמת דרישת התגובה (ראה להלן) גרמה להתעוררות האור הגירוי המגזין, ואחריו 1 של מאוחר יותר על ידי משלוח של גלולה מזון יחיד. שתי שניות לאחר מכן, אור הגירוי היה כבוי. חיישני 10 הראשונים התקבלו לאחר סיום מוצלח של תגובה על פי לוח קבוע (FR1) לוח הזמנים, לאחר מכן היו כדורי זמינים לאחר תגובה על יחס משתנה (VR2) לוח זמנים. משך ההפעלה נמשך 15 דקות.
ניסויים 3 (עכברים) ו 5 (חולדות) השתמשו לוחות זמנים הכשרה חלופית כדי למנוע את ההשפעה הפוטנציאלית של הבדלים בביצועים אינסטרומנטליים במהלך האימון על יחס פרוגרסיביים הבאים להגיב (מפורט להלן). בניסוי 3, עכברים הוכשרו על לוח זמנים FR1 עבור 2 ד ולאחר מכן על לוח הזמנים FR2 עבור 8 ד. 3 הראשון של בדיקות בשימוש 60 דקות הפעלות. ביום האחרון 7 אימונים, הפגישה הופסקה כאשר חיזק 50 נרכשו. בניסוי 5, חולדות הוכשרו על לוח הזמנים של FR1 / VR2 בפרוטוקולים של 15 דקות כפי שתואר לעיל עבור כל הניסויים האחרים עם שני חריגים. ראשית, מספר מקסימלי של 150 pellets / session נמסר. שנית, בעלי חיים אלה קיבלו 5 ימים נוספים של אימון (כלומר, סך של 15 ד) כדי לאפשר את הקמתה של ביצועים יציבים לפני כל מניפולציה ניסיונית.
בעלי חיים נבדקו גם על להגיב על מזון על לוח זמנים יחס פרוגרסיבי של חיזוק. בבדיקה זו, דרישת התגובה להשגת מזון החלה כתזמון FR1, אך הגדילה בהדרגה באמצעות 2 כדי לקבל חיזוק נוסף (כלומר, 1, 3, 5, 7 ..., X + 2 תגובות). בניסוי טיפול תרופתי באמצעות עכברושים, לוח הזמנים גדל בהדרגה על ידי 5, מניב לוח זמנים סופי של 1, 6, 11, 16 ..., X + 5. כל שאר הפרמטרים נשמרו זהים להליך האימונים המפורט לעיל. הבדיקה הופסקה כאשר לא נעשתה תגובה פעילה עבור 5 דקות.
חיזוק פיחות.
ההשפעה של פיחות חיזוק נבדקה באמצעות prefeeding ספציפי חיזוק. כאן, עכברים הורשו לאכול כדורי מזון מבוססי גרגר ללא גרגר בכלוב הבית שלהם במהלך 3 שעה לפני בדיקה על לוח הזמנים יחס פרוגרסיבי של חיזוק כמתואר לעיל.
טכניקות כירורגיות.
בעלי חיים הורדו באמצעות Equithesin (תערובת המכילה pentobarbital (35 מ"ג / ק"ג) ומינרל כלורל (183.6 מ"ג / ק"ג) באתנול (10% v / v) ופרופילן גליקול (39% v / v); מנוהל ב 4.32 מ"ל / ק"ג, ip]. Cannulas (פלסטיקה אחת, Roanoke, VA) היו מושתלים כירורגי מכוון מעל הליבה NAC, באמצעות ציוד סטריאופטי Kopf. קואורדינטות stereotactic בשימוש ביחס לגרגמה היו כדלקמן: הקדמי / אחורי, + 1.5 מ"מ; לרוחב / המדיאלי, ± 1.5 מ"מ; הגחון / הגב, -6.0 מ"מ (Paxinos ו ווטסון, 1986). הקנולים עוגנו לגולגולת באמצעות ברגים ומלט דנטלי. המוטרים הונחו לתוך cannulas המדריך כדי למנוע חסימה. לאחר הניתוח, בעלי חיים היו נתון לטיפול לאחר הניתוח הסטנדרטי והורשו להתאושש עבור 5 ד לפני תחילת הניסוי.
עירויים.
עירוי intracerebral של וקטורים ויראליים בוצעו בילטרלית 40 שעה לפני תחילת האימון (ראה להלן). מזרקים הזרקה (31 מד), הארכת 1 מ"מ מתחת לקצה של cannulas המדריך, הורידו אט אט בו זמנית לתוך שמאל ימין NAC, ו 1.0 μl / הצד היה חדורים על פני תקופה 4 דקות בקצב עירוי של 0.25 μl / דקות באמצעות משאבת microinfusion (PHD-5000, הרווארד Apparatus, Holliston, MA). המחטים אינפוזיה נותרו במקום עבור 1 דקות לאחר העירוי הושלמה, ואת cannulas דמה הוחלפו. מיקומים קנולה אומתו היסטולוגית לאחר השלמת הניסויים ההתנהגותיים (ראה איור 6B), ורק בעלי חיים עם cannulas להציב כראוי נכללו בניתוח סטטיסטי של נתונים ניסיוניים.
ניתוח היסטולוגית וחיסונים.
לאחר השלמת הניסויים, בעלי חיים אשר קיבלו ניתוחים כחלק הניסוי הורדו עם Equithesin ו perfused transcardially עם 0.1 מ 'PBS (5 דקות) ו 10% פורמלין (10 דקות) על פי נהלים סטנדרטיים. המוח נקבעו בפורמלין והוצבו לאחר מכן בפתרון סוכרוז שנמצא על ידי פוספט (30%). כל המוח נחתכו אז מקטעי 40 מיקרומטר על microtome ומשמש עבור ניתוחים היסטולוגית של מיקום צינורית ביטוי חלבון.
מיקום קנולה נעשה סעיפים counterstained עם אדום ניטרלי רכוב על שקופיות מיקרוסקופ ב plasticizer distirrene ו xylene (DPX) לאחר התייבשות אתנול. אימונוהיסטוכימיה בוצעה כפי שתואר לעיל (Hommel ואח ', 2003). בקיצור, הביטוי של β- galactosidase לאחר עירוי HSV-LacZ נקבע על ידי מכתים אימונופלורסנט באמצעות נוגדן אנטי-β-galactosidase ראשוני עז (1: 5000, ביוגנזה, קינגסטון, NH). לאחר הדגירה לילה, שטחים היו שטופים ולאחר מכן מודגרות עם נוגדנים פלואורסצנטי אנטי עיזים נוגדנים משני מצומדות כדי Cy2 (1: 200, ג 'קסון ImmunoResearch, ווסט גרוב, הרשות הפלסטינית). סעיפים נשטפו שוב ואחריו התייבשות אתנול הרכבה DPX. מקטעי בקרה סמוכים טופלו באופן זהה ללא הכללה של נוגדנים ראשוניים. Immunofluorescence הוערך ב 520 ננומטר באמצעות Zeiss (Oberkochen, גרמניה) מיקרוסקופ עם מסנן FITC ותמונות שנתפסו בזמני חשיפה זהים עם Zeiss Axiovision מערכת הדמיה דיגיטלית.
סטָטִיסטִיקָה
נתוני כל הניסויים הוערכו באמצעות ANOVA חד-כיווני או שלוש-כיווני ואחריו מבחן הפוסט-הוק של שפה או דנט, ותיקן להשוואה מרובה במידת הצורך באמצעות מבחן הדחייה הרציף של הולם. ערך של p ≤ 0.05 נחשב למובהק סטטיסטית.
תוצאות
ניסוי 1: השפעות של חשיפה חוזרת על סמים על ביצועים אינסטרומנטליים ועל יחס פרוגרסיבי להגיב
כדי לאשר כי הפרדיגמה החוזרת ונשנית שלנו לסמים ייצרה נוירופפטציות משמעותיות מבחינה תפקודית, הערכנו לראשונה רגישות ל"מוטוריקה "כמדד התנהגותי אב-טיפוסי של פעילות סמים כרונית. חולדות קיבלו פעמיים ביום זריקות ניקוטין (0.35 mg / kg), MDMA (5 mg / kg), קוקאין (15 mg / kg) או אמפטמין (2.5 mg / kg), ופעילות לוקומוטורית נבדקה לאחר ההזרקה הראשונה ימים טיפול 1 ו 15 (משלים איור 1A-E, זמין ב www.jneurosci.org כחומר משלים). ניתוח סטטיסטי גילה טיפול משמעותי על ידי אינטראקציה יום (F(4,42) = 9.335; p ≤ 0.0001). פרט ל- MDMA (p = 0.62), כל התרופות גרמו לפעילות משמעותית יותר של תנועה קטלנית (כלומר, רגישות) ביום 15 בהשוואה ליום 1 (ניקוטין, p ≤ 0.001, קוקאין, p ≤ 0.001, אמפטמין, p ≤ 0.01). לזריקות מלוחים חוזרות לא היתה השפעה. אף אחד מהטיפולים לא שינה את הפעילות הבסיסית של התנועה המוטורית שנמדדה במהלך תקופת ההרגלה ביום 15 (משלים איור 2A, זמין ב www.jneurosci.org כחומר משלים).
חמישה ימים לאחר הזרקת הסמים האחרונה, בדקנו את ההשפעות של חשיפה חוזרת ונשנית של ניקוטין, MDMA, קוקאין או אמפטמין על התנהגות אינסטרומנטלית מחוזקת במזון. הנתונים מוצגים עבור כל תרופה בנפרד איור 1A-H באמצעות אותה קבוצת מלח מלוחים עבור השוואות. מצאנו כי חשיפה קודמת לכל אחת מהתרופות הללו הגבירה באופן משמעותי ובמצב סלקטיבי את התגובה האינסטרומנטלית המחוזקת על ידי מזון (טיפול על ידי מנוף על ידי אימון יום, F(36,378) = 1.683; p ≤ 0.01; ניתוח פוסט: ניקוטין, p ≤ 0.01; MDMA, p ≤ 0.05; קוקאין, p ≤ 0.01; amphetamine, p ≤ 0.001). העלייה המתמשכת בתגובת הנגיף שנצפתה בביצועים אסימפטוטית הציעה שיפור אפשרי במוטיבציה, בהתאם לעליות שדווחו בעבר לאחר חשיפה פסיכו-סוליטית חוזרת ונשנית (ראה דיון). לכן בדקנו האם חשיפה חוזרת ונשנית קודמת של התרופה הגבירה את המוטיבציה תוך שימוש בלוח זמנים פרוגרסיבי. ההשפעה הסטטיסטית של חשיפה לסמים קודמת על תגובה על הידית הפעילה (טיפול על ידי אינטראקציה מנוף, F(4,42) = 3.340; p ≤ 0.05) (האיור 2A) כמו גם את נקודת הפסקה הסופית (F(4,42) = 5.560; p ≤ 0.001) (האיור 2ב). ניתוח נוסף הראה שכל הטיפולים הגדילו את מספר התגובות הפעילות (ניקוטין, p ≤ 0.001, MDMA, p ≤ 0.05, קוקאין, p ≤ 0.001, אמפטמין, p ≤ 0.001) ונקודת השבירה (ניקוטין, p ≤ 0.001; MDMA , p ≤ 0.01, קוקאין, p ≤ 0.0001, amphetamine, p ≤ 0.0001) בהתאם להשפעה של טיפולים אלו על המוטיבציה. בהינתן היעדר ההשפעה של התרופות על פעילות מוטורית בסיסית, וחוסר ההשפעה על לחיצות מנוף לא פעילות, אין זה סביר כי התגובות המוגברות למזון בתנאים אלו משקפות עליות לא ספציפיות בפעילות המוטורית.
האיור 1.
ההשפעה של זריקות חוזרות ונשנות של ניקוטין (0.35 mg / kg), MDMA (2.5 mg / kg), קוקאין (15 mg / kg) או אמפטמין (2.5 mg / kg) פעמיים ביום עבור 15 d בהתנהגות אינסטרומנטלית בהמשך. החיות נבדקו יחד, אך בהירות ההשפעות של כל תרופה מוצגות בנפרד, תוך שימוש באותה קבוצת טיפול מלוחים. A (תגובות פעילות) ו- B (תגובות לא פעילות) מראות את השפעת החשיפה הקודמת לניקוטין; C, D, MDMA; E, F, קוקאין; G, H, אמפטמין. הנתונים מיוצגים כאמצעים ± SEM.
האיור 2.
ההשפעה של טיפול חוזר קודם (פעמיים ביום, 15 ד ') עם מי מלח, ניקוטין (0.35 מ"ג לק"ג), MDMA (2.5 מ"ג לק"ג), קוקאין (15 מ"ג לק"ג) או אמפטמין (2.5 מ"ג לק"ג) על התגובה האינסטרומנטלית על לוח זמנים יחסי פרוגרסיבי של חיזוק. הנתונים מיוצגים כאמצעים ± SEM. *** p <0.001; ** p <0.01; * p <0.05. Sal, Saline; ניק, ניקוטין; קוק, קוקאין; אמף, אמפטמין; יחסי ציבור, יחס פרוגרסיבי.
חשיפה קודמת לתרופות לא השפיעה גם על משקל הגוף שנרשם לפני הגבלת המזון, ביום הראשון או האחרון של אימון אינסטרומנטלי, או מיד לפני מבחן היחס המתקדמת (משלים איור 2B, זמין ב www.jneurosci.org כחומר משלים). הגישה המוגבלת למזון עבור 3 d הפחיתה תחילה את משקל הגוף ל- 91-92 בממוצע של משקולות האכלה חופשית. בתום בדיקות התנהגותיות, משקולות חזרו ל- 97-99% ממשקל הגוף, ולא נצפו הבדלים בין בעלי חיים שנחשפו לתרופות ובין בעלי חיים שטופלו במלוחים. שינויים במשקל הגוף והבדלים ברעב או בתיאבון צריכים אפוא לא לתרום באופן משמעותי לשיפור המבוצע בביצועים או במוטיבציה האינסטרומנטליים.
ניסוי 2: overexpression inducible של ΔFosB בעכברים bitransgenic; ביצועים אינסטרומנטליים
בדקנו הבא אם ביצועים אינסטרומנטליים היה גם גדל בעכברים bitransgenic כי overexpress overexpress ΔFOSB עם סלקטיביות מסומנת ב הסטטיסטיקה NAC ו הגבי (Kelz ואח ', 1999). בניסוי זה, ΔFos-overexpressing עכברים הושוו עם פקדים littermate כי לא overexpress ΔFosB כי הם נשמרים על דוקסיציקלין (ראה חומרים ושיטות). מצאנו כי overexpression של ΔFOSB הגדילה באופן משמעותי מזון חיזק להגיב (ביטוי גנים ידי מנוף על ידי אימון יום, F(9,126) = 3.156; p ≤ 0.01) (האיור 3א). מספר תגובות האף שנעשו בצמצם הלא פעיל לא היה שונה בין שתי הקבוצות (האיור 3ב). יחד, נתונים אלה מצביעים על כך overexpression ΔFosB ב NAC ו הסטריאטום הגבי סלקטיבי ביצועים אינסטרומנטליים
איור 3
ההשפעה של overexpression striatal induced של ΔFBB בעכברים bitransgenic על הביצועים אינסטרומנטלי. A, תגובות פעילות. B, תגובות לא פעילות. הנתונים מיוצגים כאמצעים ± SEM.
כדי לשלול כי שיפור הביצועים האינסטרומנטליים ΔFosB- overexpressing בעלי חיים יכול להיות מוסבר על ידי שינויים בתיאבון או רעב, משקל הגוף נרשם לפני הגבלת מזון ובימים הראשונים והאחרונים של האימון. ΔFosB לא השפיעה על משקל הגוף לפני הגבלת המזון, וגם לא הייתה השפעה על משקל הגוף במהלך בדיקות התנהגותיות. כאן, גישה מוגבלת מזון עבור 3 D ירידה במשקל הגוף לממוצע של 87-89% של משקולות האכלה חופשית. בסוף בדיקות התנהגותיות, משקולות בעלי חיים היו 97-99% של משקולות הגוף prerestriction, עם שינויים מקבילים לראות ΔFOSB ועכברים שליטה (משלים איור 3A, זמין ב www.jneurosci.org כחומר משלים). לכן אין זה סביר כי השפעות פוטנציאליות של overexpression ΔFosB על רעב או תיאבון יכול להסביר שיפורים בתגובה אינסטרומנטלית שנצפתה.
כאשר הבדיקה על הביצועים האינסטרומנטליים הושלמה, overexpression ΔPOSB לא שינתה את הפעילות הבסיסית של תנועה מוטורית שנמדדה במהלך פרק זמן של 30 דקות (משלים איור 3B, זמין ב www.jneurosci.org כחומר משלים). תצפית זו תומכת בתפיסה ששינוי לא ספציפי בפעילות אינו תורם לביצועים האינסטרומנטליים המשופרים שנצפו אצל בעלי חיים אלו. עם זאת, ΔFosB- overexpressing עכברים bitransgenic דווחו להציג התגובות מנוע משופרים קוקאין חריף חזר (Kelz ואח ', 1999). כי השתמשנו בלוח זמנים שונה במקצת של הנסיגה מ doxycycline כדי לגרום ביטוי גנים (6 שבועות עם הגבלת מזון), יצאנו לאשר פנוטיפ זה. ואכן, ΔFOS-overexpressing עכברים הראו עלייה משמעותית יותר בפעילות התנועה כאשר הזריקו קוקאין לעומת פקקים littermate שלהם נשמר על doxycycline (טיפול על ידי ביטוי גנים, F(1,44) = 4.241; p ≤ 0.05) (משלים איור 3C, זמין ב www.jneurosci.org כחומר משלים).
ניסוי 3: overexpression inducible של ΔFosB בעכברים bitransgenic; - יחס פרוגרסיבי
בהתחשב בכך שחשיפה סמים קודמת גורם סטריאטאל ΔFosB (נסלר ואח ', 2001) ונמצא כאן כדי להגדיל את יחס פרוגרסיבי להגיב, נבדקנו הבא overexpression מהונדס מהונדס של ΔFosB גם מגביר את הביצועים על לוח הזמנים יחס פרוגרסיבי של חיזוק. קבוצה חדשה של עכברים הוכשרו על תגובה אינסטרומנטלית בתנאים (ראה חומרים ושיטות) שלא הביאו להבדלים משמעותיים בביצועים האינסטרומנטליים לפני בדיקה על יחס פרוגרסיבי (F(1,16) <1). עם זאת, במבחן היחס הפרוגרסיבי ראינו ביטוי גנטי משמעותי על ידי אינטראקציה עם מנוף (F(1,16) = 5.30; p ≤ 0.05) (האיור 4A) ומצא כי ΔFOS-overexpressing עכברים, לעומת עכברים שליטה littermate נשמר על דוקסיציקלין, עשה מספר גדול יותר של תגובות פעילות (p ≤ 0.05), בעוד מספר תגובות מנוף לא פעיל לא היה שונה. ΔFOS-overexpressing עכברים גם הגיע לנקודת מעבר גבוהה יותר (F(1,16) = 5.73; p ≤ 0.05) (האיור 4ב). נתונים אלה מצביעים על כך, כמו חשיפה פסיכוסטימולנטית קודמת, overexpression סטראטלי של ΔFOSB מגביר את המוטיבציה. מאחר שמספר התגובות הלא פעילות לא השתנה בעכברים של ΔFOS-overexpressing, העלאות לא ספציפיות בפעילות לא צפויות לתרום להשפעות אלו. תצוגה זו נתמכה עוד יותר על ידי הערכות של הפעילות הבסיסית של תנועה בו לא היה הבדל בין עכברים overexpressing ΔFOSB ו עכברים שליטה littermate נשמר על דוקסיציקלין. לא נמצאו הבדלים ברוטו במשקל הגוף בין החשיפה ל- D-POSB-overexpressing ולבעלי השליטה, כפי שנמדדו ביום הבדיקה. לכן, למרות ΔFosB-overexpressing בעלי חיים יהיה לפלוט תגובתיות אינסטרומנטלית יותר מוטיבציה מזון, הם לא מופיעים לצרוך יותר מזון כאשר הוא זמין באופן חופשי. ההסבר הסביר ביותר לתצפית זו הוא, כי למרות המוטיבציה קובעת כמה קשה חיה יפעל לרכוש חיזוק, גורמים רבים נוספים (תיאבון, שובע, מצב מטבולי, וכו ') משפיעים על התנהגות האכלה והצריכה בפועל של מזון.
האיור 4.
השפעת ביטוי יתר המושרה של FosB בעכברים ביטטרנסגניים על תגובה אינסטרומנטלית בתזמון יחס פרוגרסיבי של חיזוק, לפני ואחרי פיחות מחזק המושרה על ידי שובע. A, B, Baseline: תגובות מנוף (A), נקודת שבירה (B). C, D, לאחר פיחות מחזק: תגובות מנוף (C), נקודת שבירה (D). הנתונים מיוצגים כאמצעים ± SEM. * p <0.05.
עכברי bitransgenic ΔFosB משמש כאן להביע ΔFOSB לאורך הסטריאטום. והואיל והסטריאטום הגחון (כולל ה- NAc) היה מעורב בתהליכים מוטיבציוניים, הסטריאטום הגבי נטען כי הוא מעורב ברכישת הרגלים אינסטרומנטליים (Yin et al., 2004; Faure et al., 2005). למרות שלא ראינו הבדלים בביצועים האינסטרומנטליים במהלך שלב האימון תוך שימוש בלוח זמנים יחסי נמוך עם גבולות חיזוק מקסימליים, תנאים עמידים יחסית להתפתחות הרגלים אינסטרומנטליים (דיקינסון, 1985), ייתכן כי הקמת הרגלים יכול להשפיע על התגובה תחת לוח הזמנים יחס פרוגרסיבי. אפשרות זו נבחנה ישירות על ידי הערכת ההשפעה של חיזוק פיחות על ידי prefeeding על יחס פרוגרסיבי להגיב. Prefeeding כזה מחק את ההשפעה של ΔFosB על יחס פרוגרסיבי להגיב, ללא הבדלים בתגובה או נקודות הפסקה שנצפה בין ΔFosB- overexpressing ועכברים שליטה (F(1,16) <1) (האיור 4C, D). יחד, נתונים אלה מצביעים על כך overexpression סטריאטלי של ΔFosB לא שינה את הרגישות לשינויים בערך של תוצאות מתוגמל באמצעות לוח זמנים זה בדיקות. במקום זאת, התגובה האינסטרומנטלית שנצפתה במבחן היחס המתקדמת נראית כמכוונת-מטרה, ונקודת השבירה המוגברת שנצפתה בעכברים של FOSB-overexpressing עשויה לייחס את המוטיבציה המוגברת ולא להגדלת ההרגלה של ההרגל.
ניסוי 4: overexpression ויראלי בתיווך של ΔFosB בליבה NAC: ביצועים אינסטרומנטליים
כדי להעריך אם overexpression ΔFosB באופן סלקטיבי ב NAC יכול להסביר את ההתנהגות שנצפה בעכברים bitransgenic, אנו infuse HSV-ΔFosB, או HSV-LacZ כבקרה, באופן סלקטיבי לתוך הליבה NAC של חולדות ולמד את ההשפעה של מניפולציה זו על מזון - ביצועים אינסטרומנטליים מחוזקים (האיור 5A, B). לאחר אימון המגזין, HSV-ΔFosB או HSV-LacZ היה חדורים לתוך הליבה NAC 40 שעה לפני תחילת בדיקות התנהגותיות. המיקום של העירוי ואת היקף הביטוי גנטי בתיווך גנטי מוצגים ב איור 6, A ו- B. חדירת NAC של HSV-ΔFosB הפיקה עלייה מתמשכת במספר התגובות הפעילות (ביטוי גנטי על ידי מנוף, F(1,12) = 8.534; p ≤ 0.05) (האיור 5א), אשר נמשכה לאורך הניסוי. השפעות אלה היו סלקטיביות, כי לא היו השפעות משמעותיות של overexpression ΔPosB בתוך הליבה NAC על מספר תגובות לא פעיל (האיור 5B) או על פעילות בסיסית של תנועה מוקדמת נרשמה יום לאחר השלמת הניסוי (נתונים לא מוצגים). Overexpression של ΔFosB ב NAC ובכך חיקה את ההשפעות ההתנהגותיות של חשיפה לסמים הקודם או overexpression striatal של ΔFOSB.
האיור 5.
השפעת חליטות של HSV-ΔFosB לתוך הליבה NAC לפני האימון על תגובה אינסטרומנטלית. A, תגובות פעילות. B, תגובות לא פעילות. הנתונים מיוצגים כאמצעים ± SEM.
האיור 6.
A, מיקומים של אינפוזיה אתרים עבור ניסויים וקטור ויראלי. למעלה, עיגולים שחורים מלאים מתאימות לאתר אינפוזיה המיועד. רק חליטות עשויות בתוך ~0.5 מ"מ של אזור זה (כלומר, בתוך הליבה NAC), כפי שצוין על ידי המעגל, נחשבו מקובלים. בעלי חיים עם עירויים שנעשו מחוץ לאזור זה לא נכללו מנתונים סטטיסטיים. תחתית, עירוי באתר בתוך NAC בבעל חיים נציג. B, אימונוהיסטוכימיים אימות של ביטוי חלבון לאחר עירוי של HSV-LacZ. לוחות העליון להפגין ביטוי β- galactosidase בתוך הליבה NAC (2.5 ו 10 × הגדלה). לוחות התחתון להדגים את חוסר immunofluorescence בקטעי בקרה סמוכים באמצעות הליך immunohistochemical אותו ללא הכללה של הנוגדן העיקרי.
ניסוי 5: overexpression ויראלי בתיווך של ΔFosB בליבה NAC: יחס פרוגרסיבי
הניסוי הסופי נקבע באופן ישיר אם overexpression מוגבלים של ΔFosB בליבה NAC באמצעות גישה גנטית מתווך גנטי הגן היה מספיק כדי לשפר את המוטיבציה של חולדות. הנה, HSV-ΔFosB היה infused רק לאחר האימון האינסטרומנטלי הושלמה, ביטול כל השפעה פוטנציאלית של overexpression ΔFosB במהלך האימון על מבחן יחס פרוגרסיביים הבאים. קבוצה חדשה של חולדות הוכשרו, כמו קודם, וחולקו לקבוצות ניסוי מאוזנות על סמך הביצועים שלהם בימים האחרונים של האימון. בעלי חיים קיבלו לאחר מכן עירויים דו-צדדיים של HSV-ΔFosB או HSV-LacZ אל הליבה של ה- NAc ונבדקו על יחס פרוגרסיבי המגיב לאחר 5 d של overexpression. ניתוח סטטיסטי גילה ביטוי גנטי משמעותי על ידי אינטראקציה מנוף (F(1,12) = 14.91; p ≤ 0.01) (האיור 7א). חולדות שטופלו ב- HSV-ΔFosB ערכו תגובות פעילות יותר (p ≤ 0.01) בהשוואה לאלו שהוחדרו ב- HSV-LacZ, בעוד שהמענה על המנוף הלא פעיל לא נפגע. עולה בקנה אחד עם עלייה זו, חולדות infused עם HSV-ΔFosB גם היה נקודת מעבר גבוהה יותר (F(1,12) = 18.849; p ≤ 0.001) (האיור 7ב) מאשר בעלי חיים חדורים HSV-LacZ. לא הייתה השפעה של ΔFOS על הפעילות הבסיסית של תנועה לוקומוטורית שנבדקה 1 שעה לפני מבחן היחס המתקדמת (משלים איור 4A, זמין ב www.jneurosci.org כחומר משלים). כמו כן, לא נמצאו הבדלים במשקל הגוף ביום בדיקה פרוגרסיבית של יחס (משלים איור 4B, זמין ב www.jneurosci.org כחומר משלים). ממצאים אלה תומכים בתצפיות שלנו עם עכברים מהונדסים ΔFosB-overexpressing, ומראים כי overexpression סלקטיבי של ΔFosB ב NAC מספיקה כדי לשפר את המוטיבציה הקשורים למזון.
האיור 7.
השפעת עירויים של HSV-ΔFosB 5 ד לפני בדיקה על תגובה אינסטרומנטלית על פי לוח זמנים לחיזוק פרוגרסיבי. ת, תגובות מנוף. B, נקודת הפסקה. הנתונים מיוצגים כאמצעים ± SEM. *** p <0.001; ** p <0.01.
דיון
המחקר הנוכחי מדגים כי overexpression של ΔFosB בתוך NAC משפר התנהגות חיזקו אינסטרומנטלי התנהגותייצור חשיפה קודמת לקוקאין, אמפטמין, MDMA או ניקוטין משופרת הפיקה עלייה מתמשכת בביצועים האינסטרומנטליים הבאים. אלה חשיפות סמים גם הגדילה התנהגות מוטיבציה מזון תחת לוח זמנים יחס פרוגרסיביים של חיזוק. השפעות אלה של חשיפה לסמים קודמות חיקו על ידי overexpression מוגבר של ΔFOSB בסטריאטום, תוך שימוש בעכברים ביטרנסגניים (NSE-TTA × TetOP-ΔFosB), או באמצעות וקטור ויראלי חדש להביע ΔFosB באופן סלקטיבי ב- NAc. יש לציין, overexpression של ΔFosB ב הליבה NAC, לאחר התגובה אינסטרומנטלית כבר רכשה, מוטיבציה מוגברת למזון תחת לוח הזמנים יחס פרוגרסיבי. יחד, הממצאים שלנו לזהות ΔFosB בליבה NAC כמתווך פוטנציאלי של neuroadaptations המושרה על ידי תרופות שיכולים לקדם התנהגות אינסטרומנטלית, הרחבת תפקיד גורם שעתוק זה כדי לכלול תהליכים רלוונטיים להשפעות המוטיבציה על הביצועים של מזון חיזק מזון. הם גם להעלות את האפשרות כי התנאים המניעים ביטוי ΔFosB ב NAC עשוי להשפיע על תכונות המוטיבציה של שניהם טבעיים ומחזקים סמים.
ΔFosB מצטבר ב dynorphin- מבטאים נוירונים קוצני בינוני של שניהם הסטטיסטיקה NAC ו הגבי לאחר כרונית, אך לא חריפה, חשיפה לסמים של התעללות. דפוס זה האזורי של הביטוי משוכפל בעכברים ביטראנסגנטי ΔFosB-overexpressing בשימוש כאן. בעכברים האלה, רמות סטריאטליות גבוהות של ΔFosB מגבירות את הרגישות של בעלי החיים לקוקאין ומורפין, כפי שהיא נמדדת על פי העדפת מקום מותנה (Kelz ואח ', 1999; Zachariou ואח ', 2006). זה גם מגדיל יחס פרוגרסיבי להגיב קוקאין המציעה כי המוטיבציה עצמית קוקאין משופרת על ידי overexpression ΔFosB striatal (קולבי ואח ', 2003). כאן, מצאנו כי overexpression ΔFosB striatal בעכברים אלה גם הגדילה יחס פרוגרסיבי להגיב על חיזוק מזון וכי השפעות אלה היו לשכפל על ידי overexpression מוגבל ויראלי בתיווך מוגבל של ΔFosB ב הליבה NAC ב עכברוש. הנתונים שלנו מצביעים על כך ש- ΔFOSB עשוי לשמש כמאפנן תעתיק של מוטיבציה לחוזקים ראשוניים, בין אם הם מזון, תרופות או פעילות גופנית, רעיון העולה בקנה אחד עם תצפיות ראשוניות שהביטוי הסטריאטלי של ΔFOSB עולה לאחר גלגל כרוני או שתייה של סוכרוז (מקלאנג ואחרים, 2004). נתונים אלה מציעים כי overexpression NAC של ΔFosB יכול לשפר את ההשפעה המוטיבציה של שני חיזוקים טבעיים ותרופות.
שטחים של NAc כבר טענו כדי לתווך באופן דיפרנציאלי ההשפעה של תהליכי תמריץ pavlovian או אינסטרומנטלי על הביצועים האינסטרומנטליים (קורביט ואח ', 2001; de Borchgrave et al., 2002), בעוד שהשפעות מוטיבציה כלליות יותר על הביצועים האינסטרומנטליים עשויות להיות מקודדות על ידי אזורים אחרים, כגון הגרעין המרכזי של האמיגדלה (Corbit ו Balleine, 2005). עם זאת, הליבה של NAC הוצעה להיות אתר קריטי לרכישת למידה אינסטרומנטלית מכוונת מטרה (סמית 'רו וקלי, 2000; בולדווין ואח ', 2002a,b; קלי, 2004). אנו מראים השפעות מקבילות של חשיפות סמים קודמות וטרנסגנטלית סטריאטלית ΔFOSB overexpression על שיפור התנהגות אינסטרומנטלית. עירויים של HSV-ΔFosB המוגבלים לליבת ה- NAc הגבירו גם את היענות האינסטרומנטלית המחוזקת. למרות ניסויים אלה אינם שוללים תרומה של הסטריאטום הגב בהתנהגויות אלה, הם מאוד ממליצים כי שינויים ΔFos- המושרה ביטוי גנים בתוך NAC מספיקים כדי להגביר את התגובה מוטיבציה מזון. מכיוון ששיעור היחס המתמיד היה משופר גם כאשר ΔFOSB התבטא לאחר ביצועים אינסטרומנטליים יציבים שהושגו בעבר, נראה כי תפקיד ההשפעה המוטיבציונית על ההתנהגות האינסטרומנטלית. האפשרות שהמניפולציות שלנו משפיעות גם על תהליכי הלמידה האינסטרומנטליים אינה יכולה להיכלל לחלוטין. כדי לתמוך במסקנות שלנו, העלייה בביצועים האינסטרומנטליים שנצפו לאחר חשיפה קודמת של קוקאין אוראלי (מיילס ואח ', 2004) טענה לערב שינויים מוטיבציה עקבית עם היכולת של טיפול ניקוטין כרונית כדי להגדיל את היחס המתקדם להגיב בעכברים (ברונזל ואח ', 2006). יתר על כן, דופמין transporter לדפוק את עכברים, שבו רמות דופמין תאיים מוגברות, להציג הן משופר ΔFosB immunoreactivity מוטיבציה חיזוק מזון, אך לא השתנה למידה (קניארד ואח ', 2006). יתר על כן, מצאנו כי overexpression של ΔFOSB striatal בעכברים לא השפיע על הביצועים כאשר האוכל היה "פוחת" על ידי prefeeding. נתונים אלה מצביעים על כך שבעלי חיים היו רגישים לערך המוטיבציוני של החיזוק וכי התגובה הייתה מכוונת.
חשיפה חוזרת ונשנית בעבר חוזרת יכולה גם להגביר את השליטה ההתנהגותית המופעלת על ידי גירויים מותנים הקשורים חיזוקים טבעיים, נמדד על ידי הגישה pavlovian (Harmer ו פיליפס, 1998; טיילור ו Jentsch, 2001; Olausson ואח ', 2003), חיזוק מותנה (טיילור והורגר, 1999; Olausson ואח ', 2004), ו pavlovian-to אינסטרומנטלי העברה (ויבל וברידג ', 2001). יש כעת ראיות משכנעות כי הליבה NAC, בניגוד לקליפה, מעורב בשליטה של התנהגות מוטיבציה סמים על ידי גירויים מותנה pavlovian (פרקינסון ואח ', 1999, 2002; Hall et al., 2001; דאלי ואח ', 2002; איטו ואח ', 2004). התוצאות שלנו עשויות להצביע על כך כי אינדוקציה המושרה על ידי תרופה של ΔFosB ב NAC עשויה להיות מנגנון אחד שבו שליטה התנהגותית משופרת בהליכים אלה. זה אפשרי גם כי pavlovian מותנה גירויים, מתנהג כמו חיזוקים מותנה, לתרום את ההשפעות ההתנהגותיות הנוכחיות. שליטה משופרת על התנהגות על ידי גירויים כאלה מותנה בתיווך על ידי העליות ΔFosB striatal עשוי גם לתרום את ההשפעה של החלבון על סמים המושרה (Kelz ואח ', 1999; Zachariou ואח ', 2006) ואת יחס פרוגרסיבי להגיב קוקאין (קולבי ואח ', 2003). שינויים בתהליכי המוטיבציה הונחו על מנת לתרום להתפתחות ולשמירה על התנהגות ממכרת (רובינסון וברידג ', 1993; ינטש וטיילור, 1999; רובינס ואוברט, 1999; נסלר, 2004). הנתונים הנוכחיים עולים בקנה אחד עם תיאוריות אחרות המדגישות תהליכים אינסטרומנטליים ופאבלוביים מרובים בהתנהגות ממכרת (אווריט ורובינס, 2005). נדרשת עבודה נוספת כדי להגדיר את התפקיד של נוירואדפטציות המושרות על ידי תרופות ו- ΔFosB ב- NAc ובתת-תחומים לימביים-סטראטליים אחרים ביחס לגורמים האסוציאטיביים או המוטיבציוניים הספציפיים, אשר עשויים להקל על הביצועים האינסטרומנטליים ולתרום להתנהגות כפייתית.
למרות המנגנונים המולקולריים המדויקים שבאמצעותם שינויים בתוך NAC להשפיע על התנהגות מונע על ידי חיזוקים ראשוני או מותנה אינם ידועים (קלי ברידג ', 2002), נוירונים קוצניים בינוני של GABAergic של NAC נחשבים מצע קריטי עבור פלסטיות התלות סמים ניסיון. כאן, קלט dopaminergic מן האזור tegmental הגחון קלט glutamatergic מ corticolimbic afferents להתכנס אל הדנדריטים המשותפים דנדריטים השדרה (ססק ופיקסל, 1990; סמית ובולאם, 1990). חשיפה כרונית מגביר את הצפיפות של קוצים כאלה על נוירונים פגז NAC ו הליבה (רובינסון וקולב, 1999; רובינסון ואח ', 2001; Li et al., 2003, 2004). לאחרונה, אינדוקציה של רגישות התנהגותית קשורה במיוחד עם עלייה הקוצים הדנדריטים בתוך הליבה NAC (Li et al., 2004). יש לציין, קוקאין הנגרמת עליות בצפיפות עמוד השדרה נמשכות רק D1נוירונים אופציונליים כי coexpress ΔFosB (רובינסון וקולב, 1999; לי ואח ', 2006). ΔFosB בליבת ה- NAC עשוי לתרום לפלסטיות סינפטית מתמשכת שעלולה להשפיע על התנהגות אינסטרומנטלית. אכן, תפקיד קריטי עבור דופאמין גלוטמט נוירוטרנסמינציה (סמית 'רו וקלי, 2000), חלבון קינאז פעילות (בולדווין ואח ', 2002a), ואת סינתזת חלבון דה נובו (הרננדס ואח ', 2002) בתוך הליבה NAC על ביצועים אינסטרומנטליים דווחו בעבר. כעת אנו מזהים את ΔFosB כגורם שעתוק שיכול לשפר בהתמדה את תגבורת המזון כאשר הוא מתבטא יתר על המידה בבסיס ה- NAc. הגנים או החלבונים הספציפיים המעורבים בהשפעות אלה נותרים מוגדרים במדויק. ΔFosB מסדיר את הביטוי של חלבונים מרובים ב NAC מעורב neuroplasticity (McClung ו Nestler, 2003). ניתוח microarray האחרונות מאופיין ביטוי גנים דפוסי NAC של עכברים bitransgenic להביע ΔFOSB בשימוש כאן, זיהה תת קבוצה של גנים שהיו מוסדר על ידי ביטוי לטווח קצר יחסית של ΔFB (McClung ו Nestler, 2003). BDNF היה גן אחד כזה, ו- BDNF במעגל עצבי זה ידוע כדי להגביר את התגובה לרמזים הקשורים לתרופות ולאוכל (הורגר ואח ', 1999; Grimm et al., 2003; Lu et al., 2004). גן נוסף של עניין הוא cyclin תלויי קינאז 5 (Bibb et al., 2001), אשר המושרה גם על ידי ΔFOSB, והוא יכול לווסת הן את הפלסטיות המושרה קוקאין המושרה (Norrholm et al., 2003) ומוטיבציה הנמדדת על ידי יחס פרוגרסיבי המגיב על חיזוקים טבעיים או תרופתיים (JR Taylor, תצפיות שלא פורסמו). עדיין מועמדים נוספים הם יחידת משנה GluR2 של קולטני גלוטמט AMPA (Kelz ואח ', 1999) ואת גורם שעתוק NFκB (גורם גרעיני κB) (אנג ואחרים, 2001). זה יהיה חשוב כדי להעריך את אלה ואחרים חלבונים מוסדרים ב תת אזורי NAC כמועמדים לתווך את ההשפעות ההתנהגותיות של ΔFosB על ביצועים אינסטרומנטליים ומוטיבציה.
השמיים סדרה נוכחית של ניסויים מספק ראיות לכך overexpression של ΔFosB בתוך NAC יכול לשפר את התנהגות מוטיבציה מזון ובכך להסדיר את הביצועים האינסטרומנטליים, כפי שהוכח בעבר עבור rewards סמים. נתונים אלה מספקים ראיות חדשות לכך ש- ΔFOSB עשוי לפעול כמיתוג מולקולרי כללי הקשור לשיפורים בהיבטים המוטיבציוניים של חיזוקים על התנהגות מכוונת-מטרה. הממצאים שלנו מעלים את האפשרות כי אינדוקציה של NAC ΔFosB על ידי, למשל, תרופות ממכרות, מתח, או מזונות מתגמלים מאוד, עשויה להיות מנגנון קריטי שבו מצבים מניעים לא מתפקדים גורמים להפרעות פסיכיאטריות הקשורות להתנהגות כפייתית.
הערות שוליים
o קיבל את מרץ 15, 2006.
o העדכון התקבל ביוני 23, 2006.
o קיבל את אוגוסט 2, 2006.
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון הלאומי על שימוש בסמים, המכון הלאומי לבריאות הנפש, ואת המכון הלאומי של אלכוהול התעללות ואלכוהוליזם. אנו מודים בהכרת תודה לעזרתם של דיליה קרוגר, דרו קיראלי, ד"ר ראלף דיליאון, רוברט סירס וד"ר ג'ונתן הומל במחלקה לפסיכיאטריה, אוניברסיטת ייל. אנו מודים גם לד"ר ג'ניפר קווין וד"ר פול היצ'קוט על מתן הערות מועילות על כתב היד הזה.
התכתבות צריכה להיות מופנית אל ג'יין ר. טיילור, המחלקה לפסיכיאטריה, המחלקה לפסיכיאטריה מולקולרית, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ייל, מתקני מחקר של ריבקוף, מרכז בריאות הנפש של קונטיקט, רחוב 34 Park, New Haven, CT 06508.[מוגן בדוא"ל]
זכויות יוצרים © 2006 חברה עבור מדעי המוח 0270-6474 / 06 / 269196-09 $ 15.00 / 0
הפניות
1. ↵
1. אנג E,
2. חן JS,
3. Zagouras P,
4. מגנה H,
5. הולנד J,
6. Schaeffer E,
7. נסלר EJ
(2001) אינדוקציה של NFκB בגרעין Accumbens על ידי ממשל קוקאין כרונית. J Neurochem 79: 221-224.
2. ↵
1. Baldwin AE,
2. סאדג'יאן ק,
3. הולאן MR,
4. קלי AE
(2002a) למידה אינסטרומנטלית תיאטרונית נפגעת על ידי עיכוב של קינאז חלבון תלוי CAMP בתוך הגרעין accumbens. Neurobiol למד זיכרון 77: 44-62.
3. ↵
1. Baldwin AE,
2. סאדג'יאן ק,
3. קלי AE
(2002b) למידה אינסטרומנטלית תיאורטית דורשת הפעלה מקרית של NMDA ו- dopamine D1 קולטנים בתוך הקורטקס הפריפרונטלי המדיאלי. J Neurosci 22: 1063-1071.
4. ↵
1. Balleine B,
2. קילקרוס S
(1994) ההשפעות של נגעים חומצה איבוטנית של הגרעין accumbens על פעולה אינסטרומנטלית. התנהגות מוחית 65: 181-193.
5. ↵
1. Berke JD,
2. היימן SE
(2000) התמכרות, דופמין, והמנגנונים המולקולריים של הזיכרון. נוירון 25: 515-532.
6. ↵
1. Berridge KC,
2. רובינסון TE
(2003) ניתוח פרס. מגמות Neurosci 26: 507-513.
7. ↵
1. BIB JA,
2. חן J,
3. טיילור ג '
4. Svenningsson P,
5. Nishi A,
6. סניידר GL,
7. Yan Z,
8. Sagawa ZK,
9. Ouimet CC,
10. Nairn AC,
11. Nestler EJ,
12. Greengard P
(2001) ההשפעות של חשיפה כרונית לקוקאין מוסדרים על ידי חלבון נוירוני Cdk5. טבע 410: 376-380.
8. ↵
1. Brunzell DH,
2. Chang JR,
3. שניידר,
4. Olausson P,
5. טיילור ג '
6. Picciotto MR
(2006) Beta2-Subunit המכילים קולטני אצטילכולין ניקוטינים מעורבים מגביר ניקוטין המושרה חיזוק מותנה אבל לא יחס פרוגרסיבי להגיב על מזון C57BL / 6 עכברים. Psychopharmacology (ברל) 184: 328-338.
9. ↵
1. Cagniard B,
2. בלזם PD,
3. ברונר ד,
4. ג'ואנג X
(2006) עכברים עם תערובת דופמין מוגברת כרונית מוגברת מוטיבציה, אבל לא למידה, עבור פרס מזון. Neuropsychopharmacology 31: 1362-1370.
10. ↵
1. קרלזון WA ג 'וניור,
2. Thome J,
3. אולסון VG,
4. Lane-Ladd SB,
5. Brodkin ES,
6. הירוי N,
7. Duman RS,
8. נווה ר.ל.,
9. נסלר EJ
(1998) תקנה של פרס קוקאין על ידי CREB. מדע 282: 2272-2275.
11. ↵
1. חן J,
2. קלץ,
3. הופ BT,
4. Nakabeppu Y,
5. נסלר EJ
(1997) כרוני Fos הקשורים אנטיגנים: גרסאות יציב של ΔFOSB המושרה במוח על ידי טיפולים כרוניים. J Neurosci 17: 4933-4941.
12. ↵
1. חן J,
2. קלץ,
3. Zeng G,
4. Sakai N,
5. סטפן C,
6. שוקט PE,
7. Picciotto MR,
8. Duman RS,
9. נסלר EJ
חיות טרנסגניות עם ביטוי גנטי, ממוקד, במוח. Mol פרמקול 54: 495-503.
13. ↵
1. קולבי CR,
2. ויסלר ק,
3. סטפן C,
4. Nestler EJ,
5. DW עצמי
(2003) סוג תא ספציפי ספציפי overexpression של ΔFOSB משפר תמריץ קוקאין. J Neurosci 23: 2488-2493.
14. ↵
1. קורביט LH,
2. Balleine BW
(2005) דיסוציאציה כפולה של נגעים באזולדראליים ומרכזיים באמיגדלה על צורות כלליות של תולדה-אינסטרומנטלית. J Neurosci 25: 962-970.
15. ↵
1. קורביט LH,
2. Muir JL,
3. Balleine BW
(2001) תפקידו של הגרעין המתלונן בהתניה אינסטרומנטלית: עדות לדיסוציאציה תפקודית בין הליבה לבין הקליפה. J Neurosci 21: 3251-3260.
16. ↵
1. דאלי JW,
2. Chudasama Y,
3. Theobald DE,
4. Pettifer CL,
5. Fletcher CM,
6. רובינס TW
(2002) גרעין accumbens דופמין ו מופלים למידה גישה: אפקטים אינטראקטיביים של 6-hydroxydopamine נגעים וניהול apomorphine מערכתית. Psychopharmacology (ברל) 161: 425-433.
17. ↵
1. de Borchgrave R,
2. רולינס JN,
3. דיקינסון A,
4. Balleine BW
(2002) השפעות של גידולים ציטוטוקסיים נגעים נגועים על התאימות אינסטרומנטלית בחולדות. Exp Brain Res 144: 50-68.
18. ↵
1. Di Ciano P,
2. אווריט ב"ג
(2004a) אינטראקציות ישירות בין האמיגדלה הבזולטרלית לבין הליבה הגרעינית העומדת בבסיס התנהגות הקוקאין המבקשת על ידי חולדות. J Neurosci 24: 7167-7173.
19. ↵
1. Di Ciano P,
2. אווריט ב"ג
(2004b) תכונות חיזוק חיזוק של גירויים לזווג עם קוקאין עצמי, הרואין או סוכרוז: השלכות על ההתמדה של התנהגות ממכרת. נוירופרמקולוגיה 47 ([1]) 202-213.
20. ↵
1. דיקינסון א
(1985) פעולות והרגלים: התפתחות האוטונומיה ההתנהגותית. פילוס טרנס R Lond B Biol Sci 308: 67-78.
21. ↵
1. Everitt BJ,
2. רובינס TW
(2005) מערכות עצביות של חיזוק התמכרות לסמים: מפעולות הרגלים כדי כפייה. Nat Neurosci 8: 1481-1489.
22. ↵
1. פורה א '
2. הברלנד,
3. קונדה F,
4. אל מסיוי נ
(2005) הנגע למערכת דופאמין nigrostriatal משבש את ההרגל הרגל תגובה הגירוי. J Neurosci 25: 2771-2780.
23. ↵
1. Grimm JW,
2. Lu L,
3. הייאשי,
4. הופ BT,
5. סו TP,
6. שחם י
(2003) זמן תלוי עליות נגזר המוח הנוירוטרופי רמות חלבון גורם בתוך מערכת דופמין mesolimbic לאחר נסיגה מקוקאין: השלכות עבור הדגירה של השתוקקות קוקאין. J Neurosci 23: 742-747.
24. ↵
1. אולם J,
2. פרקינסון JA,
3. קונור TM,
4. דיקינסון A,
5. אווריט ב"ג
(2001) מעורבות של הגרעין המרכזי של האמיגדלה ואת הליבה הגרעין הליבה בתיווך השפעות Pavlovian על התנהגות אינסטרומנטלית. אור J Neurosci 13: 1984-1992.
25. ↵
1. Harmer CJ,
2. פיליפס GD
(1998) התניה משופרת של תיאבון בעקבות טיפול חוזר ונשנה ב- d-amphetamine. התנהגות פרמקול 9: 299-308.
26. ↵
1. הרננדז PJ,
2. סאדג'יאן ק,
3. קלי AE
(2002) איחוד מוקדם של למידה אינסטרומנטלית דורש סינתזת חלבון בגרעין accumbens. Nat Neurosci 5: 1327-1331.
27. ↵
1. Hommel JD,
2. Sears RM,
3. ג'ורג'סקו D,
4. סימונס DL,
5. דיליאון
(2003) נוקדן הגן המקומי במוח באמצעות הפרעות RNA ויראלי בתיווך. Nat Med 9: 1539-1544.
28. ↵
1. הורגר BA,
2. Shelton K,
3. Schenk S
(1990) Preexposure רגיש לחולדות על ההשפעות המתגמלות של קוקאין. פרמקול Biochem Behav 37: 707-711.
29. ↵
1. הורגר BA,
2. ח"כ ג'יילס,
3. Schenk S
(1992) Preexposure כדי amphetamine וניקוטין predisposes חולדות עצמית לנהל מנה נמוכה של קוקאין. Psychopharmacology (ברל) 107: 271-276.
30. ↵
1. הורגר BA,
2. אייאסאר קליפורניה,
3. Berhow MT,
4. מסר סי ג'יי,
5. Nestler EJ,
6. טיילור ג'יי אר
(1999) שיפור הפעילות של התנועה ואת הגמול המותנה קוקאין על ידי גורם נוירוטרופי נגזר המוח. J Neurosci 19: 4110-4122.
31. ↵
1. Ito R,
2. Robbins TW,
3. אווריט ב"ג
(2004) דיפרנציאלי שליטה על התנהגות קוקאין המבקשים על ידי גרעין accumbens הליבה ואת הקליפה. Nat Neurosci 7: 389-397.
32. ↵
1. Jentsch JD,
2. טיילור ג'יי אר
(1999) אימפולסיביות הנובעת מליקוי פרונטוסטריאטלי בשימוש בסמים: השלכות על השליטה בהתנהגות על ידי תמריצים הקשורים לתגמול. Psychopharmacology (ברל) 146: 373-390.
33. ↵
1. קלי AE
(2004) שליטה הגחון הגחון של מוטיבציה תיאבון: תפקיד בהתנהגות בלידה למידה קשורה גמול. Neurosci Biobehav Rev 27: 765-776.
34. ↵
1. Kelley AE,
2. ברידג 'ק
(2002) מדעי המוח של תגמולים טבעיים: רלוונטיות לתרופות ממכרות. J Neurosci 22: 3306-3311.
35. ↵
1. קלץ,
2. חן J,
3. קרלזון WA ג 'וניור,
4. ויסלר ק,
5. גילדן L,
6. בקמן,
7. סטפן C,
8. ג 'אנג YJ,
9. Marotti L,
10. עצמי DW,
11. Tkatch T,
12. Baranauskas G,
13. Surmeier DJ,
14. נווה ר.ל.,
15. Duman RS,
16. Picciotto MR,
17. נסלר EJ
(1999) ביטוי של גורם שעתוק ΔFosB במוח שולט ברגישות לקוקאין. טבע 401: 272-276.
36. ↵
1. קונראדי סי,
2. קול RL,
3. Heckers S,
4. היימן SE
(1994) אמפטמין מסדיר ביטוי גנים בסטריאטום חולדה באמצעות גורם שעתוק CREB. J Neurosci 14: 5623-5634.
37. ↵
1. Lee KW,
2. קים Y,
3. קים א,
4. הלמין ק,
5. Nairn AC,
6. Greengard P
(2006) קוקאין- Induced השדרה הדנדריטים הדגימה D1 ו D2 דופאמין קולטן המכילים נוירונים קוצניים בינוניים בגרעין accumbens. Proc Natl Acad Sci USA 103: 3399-3404.
38. ↵
1. Li Y,
2. קולב ב '
3. רובינסון TE
(2003) המיקום של שינויים מתמשכים אמפטמין המושרה בצפיפות של הקוצים הדנדריטים על נוירונים קוצניים בינוניים בגרעין accumbens ו caudate-putamen. Neuropsychopharmacology 28: 1082-1085.
39. ↵
1. Li Y,
2. Acerbo MJ,
3. רובינסון TE
(2004) אינדוקציה של רגישות התנהגותית קשורה פלסטיות מבנית המושרה קוקאין בליבה (אבל לא פגז) של הגרעין accumbens. אור J Neurosci 20: 1647-1654.
40. ↵
1. Lu L,
2. Dempsey J,
3. Liu SY,
4. בוסרט JM,
5. שחם י
(2004) עירוי אחד של גורם נוירוטרופי המופק מהמוח לתוך אזור tegmental הגחון גורם potentiation לטווח ארוך של קוקאין המבקשים לאחר הנסיגה. J Neurosci 24: 1604-1611.
41. ↵
1. מק'לנג CA,
2. נסלר EJ
(2003) תקנה של ביטוי גנים קוקאין פרס על ידי CREB ו ΔFOSB. Nat Neurosci 6: 1208-1215.
42. ↵
1. מק'לנג CA,
2. Ulery PG,
3. Perrotti LI,
4. זכריו V,
5. ברטון O,
6. נסלר EJ
(2004) Δ FOSB: מתג מולקולרי עבור הסתגלות לטווח ארוך במוח. המוח res Mol המוח resn 132: 146-154.
43. ↵
1. מיילס FJ,
2. Everitt BJ,
3. דאלי JW,
4. דיקינסון א
(2004) פעילות תנאי וחיזוק אינסטרומנטלי לאחר צריכת אוראלי לטווח ארוך של קוקאין על ידי חולדות. התנהגות Neurosci 118: 1331-1339.
44. ↵
1. נסלר EJ
(2004) מנגנונים מולקולריים של התמכרות לסמים. נוירופרמקולוגיה 47 ([1]) 24-32.
45. ↵
1. Nestler EJ,
2. בארו M,
3. DW עצמי
(2001) ΔFosB: מתג מולקולרי מתמשך להתמכרות. Proc Natl Acad Sci USA 98: 11042-11046.
46. ↵
1. Norhholm SD,
2. BIB JA,
3. Nestler EJ,
4. Ouimet CC,
5. טיילור ג '
6. Greengard P
(2003) התפשטות קוקאין המושרה של הקוצים הדנדריטים בגרעין accumbens תלויה בפעילות של קינאז תלוי cinase-5. Neuroscience 116: 19-22.
47. ↵
1. Nye HE,
2. הופ BT,
3. קלץ,
4. Iadarola M,
5. נסלר EJ
(1995) מחקרים פרמקולוגיים של הרגולציה של אינדוקציה כרונית FOS הקשורים אינדוקציה על ידי קוקאין ב striatum ואת הגרעין accumbens. J Pharmacol Exp 275 1671: 1680-XNUMX.
48. ↵
1. Olausson P,
2. Jentsch JD,
3. טיילור ג'יי אר
(2003) חשיפה ניקוטין חוזרת משפר למידה קשורה לתגמל בעכברוש. Neuropsychopharmacology 28: 1264-1271.
49. ↵
1. Olausson P,
2. Jentsch JD,
3. טיילור ג'יי אר
(2004) חשיפת ניקוטין חוזרת מגבירה תגובה עם חיזוק מותנה. Psychopharmacology (ברל) 173: 98-104.
50. ↵
1. פרקינסון JA,
2. אולמסטד MC,
3. ברנס LH,
4. Robbins TW,
5. אווריט ב"ג
(1999) דיסוציאציה בהשפעות של נגעים של הליבה הגרעינית הגרעינית ופגז על התנהגות פבלובית מתוחכמת בגישה של חיזוקים מותנים ופעילות תנועה על ידי d-amphetamine. J Neurosci 19: 2401-2411.
51. ↵
1. פרקינסון JA,
2. דאלי JW,
3. הקרדינל RN,
4. במפורד,
5. Fehnert B,
6. Lachenal G,
7. Rudarakanchana N,
8. Halkerston KM,
9. Robbins TW,
10. אווריט ב"ג
(2002) גרעין Accumbens דלדול דופמין פוגעת הן רכישה וביצועים של התנהגות התנהגות פבלובית appetovian: השלכות על תפקוד דופמין mesoaccumbens. התנהגות מוחית 137: 149-163.
52. ↵
1. Paxinos G,
2. ווטסון ג
(1986) המוח חולדה בקואורדינטות stereotaxic (אקדמי, סידני).
53. ↵
1. Perrotti LI,
2. האדישי Y,
3. Ulery PG,
4. בארו M,
5. מונטגיה L,
6. Duman RS,
7. נסלר EJ
(2004) אינדוקציה של ΔFosB במבנים מוחיים הקשורים לגמול לאחר לחץ כרוני. J Neurosci 24: 10594-10602.
54. ↵
1. Piazza PV,
2. Deminiere JM,
3. le Moal M,
4. סיימון ח
(1990) הרגישות ההתנהגותית והפרמקולוגית המושרה מגבירה את הפגיעות לרכישת אדמיניסטרציה עצמית של אמפטמין. רזולוציית המוח 514: 22-26.
55. ↵
1. Pich EM,
2. Pagliusi SR,
3. Tessari M,
4. טלבוט-אייר ד,
5. Hooft van Huijsduijnen R,
6. Chiamulera C
(1997) מצעים עצביים נפוצים למאפיינים ממכרים של ניקוטין וקוקאין. מדע 275: 83-86.
56. ↵
1. Robbins TW,
2. אווריט ב"ג
(1999) התמכרות לסמים: הרגלים רעים להוסיף. טבע 398: 567-570.
57. ↵
1. רובינסון TE,
2. ברידג 'ק
(1993) הבסיס העצבי של השתוקקות לתרופות: תורת תמריץ-רגישות של התמכרות. המוח מוח Res Res Rev 18: 247-291.
58. ↵
1. רובינסון TE,
2. קולב ב
(1999) שינויים במורפולוגיה של הדנדריטים ושל הקוצים הדנדריטים שבגרעין האקומבנס וקורטקס הפריפרונטלי לאחר טיפול חוזר עם אמפטמין או קוקאין. אור J Neurosci 11: 1598-1604.
59. ↵
1. רובינסון TE,
2. Gorny G,
3. מיטון E,
4. קולב ב
(2001) קוקאין עצמי הממשל משנה את המורפולוגיה של הדנדריטים ואת הקוצים הדנדריטים ב גרעין accumbens ו neocortex. סינפסה 39: 257-266.
60. ↵
1. ס.ס.ר.
2. פיקל VM
(1990) ב עכברוש המדיאלי גרעין accumbens, מסופים בהיפוקמפוס ו catecholaminergic להתכנס על נוירונים קוצניים והם ב appose אחד לשני. רזולוציית המוח 527: 266-279.
61. ↵
1. שו-לוצ'מן TZ,
2. Impey S,
3. סטורם D,
4. נסלר EJ
(2003) תקנה של תעתיק CRE בתיווך במוח העכבר על ידי אמפטמין. סינפסה 48: 10-17.
62. ↵
1. Smith,
2. בולם ג'יי
(1990) הרשת העצבית של הגרעינים הבסיסיים כפי שנחשף על ידי מחקר של קשרים סינפטיים של נוירונים מזוהים. מגמות Neurosci 13: 259-265.
63. ↵
1. Smith-Roe SL,
2. קלי AE
(2000) הפעלה מקרית של NMDA ודופמין D1 קולטנים בתוך הליבה הגרעינית נדרשת ללמידה אינסטרומנטלית. J Neurosci 20: 7737-7742.
64. ↵
1. טיילור ג '
2. הורגר BA
(1999) תגובה משופרת לתגמול מותנה המיוצר על ידי intra-accumbens amphetens הוא potentiated לאחר רגישות קוקאין. Psychopharmacology (ברל) 142: 31-40.
65. ↵
1. טיילור ג '
2. Jentch JD
(2001) ניהול חוזר ונשנה לסירוגין של תרופות ממריצים פסיכומוטורית משנה את הרכישה של התנהגות הגישה pavlovian בחולדות: השפעות דיפרנציאליות של קוקאין, d-amphetamine ו 3,4-methylenedioxymethamphetamine ("אקסטזי") Biol Psychiatry 50: 137-143.
66. ↵
1. וזינה P,
2. לוריין DS,
3. ארנולד GM,
4. אוסטין JD,
5. Suto N
(2002) רגישות של תגובת נוירון דופאמין של המוח התיכון מקדמת את המרדף אחר אמפטמין. J Neurosci 22: 4654-4662.
67. ↵
1. Werme M,
2. Messer C,
3. אולסון L,
4. גילדן L,
5. Thoren P,
6. Nestler EJ,
7. ברן ס
(2002) ΔFOSB מסדיר את פעולת הגלגל. J Neurosci 22: 8133-8138.
68. ↵
1. Wyvell CL,
2. ברידג 'ק
(2001) רגישות תמריץ על ידי חשיפה אמפטמין הקודם: מוגברת רמז "מופעלות" רצויה עבור פרס סוכרוז. J Neurosci 21: 7831-7840.
69. ↵
1. Yin HH,
2. Knowlton BJ,
3. Balleine BW
(2004) נגעים של הסטריאטום dorsolateral לשמר תוחלת התוצאה, אבל לשבש את היווצרות הרגל בלמידה אינסטרומנטלית. אור J Neurosci 19: 181-189.
70. ↵
1. זכריו V,
2. Bolanos CA,
3. סלי DE,
4. Theobald D,
5. קאסידי MP,
6. קלץ,
7. שו-לוצ'מן ט,
8. ברטון O,
9. Sim-Selley LJ,
10. Dileone RJ,
11. קומאר א,
12. נסלר EJ
(2006) תפקיד חיוני עבור ΔFBB בגרעין accumbens בפעולה מורפיום. Nat Neurosci 9: 205-211.
;