Synapse. 2008 May;62(5):358-69.
Perrotti LI, ויבר RR, רוביסון B, רנטאל W, Maze I, Yazdani S, אלמור RG, Knapp DJ, Selley DE, מרטין BR, סים סלי L, Bachtell RK, DW עצמי, Nestler EJ.
מָקוֹר
המחלקה לפסיכיאטריה, המרכז הרפואי של אוניברסיטת טקסס, דאלאס, טקסס 75390-9070, ארה"ב.
תַקצִיר
גורם התעתוק DeltaFosB מצטבר ונשאר במוח בתגובה לגירוי כרוני. הצטברות זו לאחר חשיפה כרונית לסמים מסוג "שימוש לרעה" הודגמה בעבר על ידי Western blot באופן דרמטי ביותר באזורים סטריאטליים, כולל הסטריאטום הגבי (קאודט/פוטמן) וגרעין האקומבנס. במחקר הנוכחי, השתמשנו באימונוהיסטוכימיה כדי להגדיר בדיוק אנטומי רב יותר את האינדוקציה של DeltaFosB במוח המכרסם לאחר טיפול תרופתי כרוני. כמו כן, הרחבנו מחקרים קודמים שכלל קוקאין, מורפין וניקוטין לשני סמים נוספים מסוג "שימוש לרעה", אתנול ודלתא(9)-טטרהידרוקנבינול (Delta(9)-THC, החומר הפעיל במריחואנה). אנו מראים כאן כי מתן כרוני, אך לא אקוטי, של כל אחד מארבעת הסמים מסוג "שימוש לרעה", קוקאין, מורפין, אתנול ודלתא(9)-THC, גורם באופן חזק לדלתאFosB בגרעין האקומבנס, אם כי דפוסים שונים בתת-האזורים הליבה לעומת הקליפה של גרעין זה היו ניכרים עבור הסמים השונים. התרופות נבדלו גם במידת האינדוקציה שלהן של DeltaFosB בסטריאטום הגבי. בנוסף, כל ארבע התרופות גרמו לדלתא-FosB בקליפת המוח הקדם-מצחית, כאשר ההשפעות הגדולות ביותר נצפו עם קוקאין ואתנול, וכל התרופות גרמו לדלתא-FosB במידה מועטה באמיגדלה. יתר על כן, כל התרופות גרמו לדלתא-FosB בהיפוקמפוס, ולמעט אתנול, רוב האינדוקציה הזו נצפתה במפרק הדנטלי. רמות נמוכות יותר של אינדוקציה של דלתא-FosB נצפו באזורים אחרים במוח בתגובה לטיפול תרופתי מסוים. ממצאים אלה מספקים ראיות נוספות לכך שאינדוקציה של דלתא-FosB בגרעין אקומבנס היא פעולה נפוצה כמעט בכל סמי השימוש לרעה, וכי מעבר לגרעין אקומבנס, כל תרופה גרמה לדלתא-FosB באופן ספציפי לאזור במוח.
מבוא
חשיפה חריפה לקוקאין גורמת להשראה חולפת של גורמי התעתוק c-Fos ו-FosB באזורים סטריאטליים (Graybiel et al., 1990; Hope et al., 1992; Young et al., 1991), בעוד שחשיפה כרונית לסם גורמת להצטברות של איזופורמים מיוצבים של ΔFosB, וריאנט שחבור מקוצר של הגן fosB (Hiroi et al., 1997; Hope et al., 1994; Moratalla et al., 1996; Nye et al., 1995). לאחר ההשראה, ΔFosB נותר באזורים אלה במשך מספר שבועות עקב היציבות יוצאת הדופן של החלבון. מחקרים עדכניים יותר הראו כי יציבותו של ΔFosB מתווכת על ידי היעדר דומייני degron המצויים בקצה ה-C של FosB באורך מלא וכל שאר חלבוני משפחת Fos (Carle et al., 2007) ועל ידי זרחון של ΔFosB בקצה ה-N שלו (Ulery et al., 2006). לעומת זאת, מתן תרופות כרוניות אינו משנה את שחבור ה-premRNA של fosB לתוך mRNA של ΔfosB וגם לא את יציבות ה-mRNA (Alibhai et al., 2007), דבר המצביע עוד על כך שהצטברות חלבון ΔFosB היא המנגנון העיקרי המעורב.
ראיות מתפתחות עולה כי אינדוקציה Δ FosB באזורים סטריאטליים, בפרט, הסטריאטום הגחון או גרעין accumbens, חשוב בהתייחסות היבטים של התמכרות. Overexpression של ΔFosB באזורים אלה של עכברים bitransgenic inucible, או באמצעות העברה גנטית מתווך ויראלי, מגביר את הרגישות של בעל חיים את ההשפעות המופעלות של תנועה של קוקאין ושל מורפין, ואילו ביטוי של אנטגוניסט שלילי דומיננטי של ΔFosB (המכונה Δc- יוני) יש השפעות הפוכות (Kelz et al., 1999; McClung ו Nestler, 2003, Peakman ואח ', 2003, Zachariou ואח', 2006). ΔFos Overexpression גם הוכח להגדיל את המוטיבציה תמריץ עבור קוקאין (Colby et al., 2003). יתר על כן, ΔFosB הוא המושרה מועדף על ידי קוקאין אצל בני נוער המתבגרים, אשר עשוי לתרום פגיעות מוגברת שלהם התמכרות (Ehrlich et al., 2002).
למרות ראיות אלה, נותרו שאלות חשובות. על אף שמנהלים כרוניים של מספר תרופות אחרות של התעללות, כולל אמפטמין, מתאמפטמין, מורפין, ניקוטין ופניקלסידין, דווחו כי הם גורמים ל - ΔFOSB באזורים סטריליים (Atkins et al., 1999; Ehrlich et al., 2002; McDaid et al. 2006, MNER ו- Unterwald, 2005, Nye et al, 1995, Nye ו- Nestler, 1996, Pich et al 1997, Zachariou ואח ', 2006), מידע מועט או חסר על פעולות האתנול ו- ΔXUMX-tetrahydrocannabinol (ΔXUMX-THC, המרכיב הפעיל במריחואנה). שני מחקרים קודמים הראו כי חיסונים דמויי FosB נגרמים בהיפוקמפוס ובאזורים מסוימים אחרים במוח במהלך נסיגת אתנול, אך עדיין לא ברור אם אימונו-אקטיביות זו מייצגת Δ FOSB או FosB באורך מלא (Bachtell et al., 9, Beckmann et al., 9 ). מחקר של אתנול ו (ΔXNXX-THC הם חשובים במיוחד, שכן אלה הן שתי התרופות הנפוצות ביותר של התעללות בארה"ב כיום (SAMHSA, 1999). יתר על כן, למרות התרופות או סמים של התעללות הוכחו לגרום ΔFosB ב אזורים מסוימים אחרים במוח מבודד, אשר, בנוסף לגרעין accumbens ו הסטריאטום הגבי, כוללים קליפת המוח הפריפרונטלית, האמיגדלה, pallidum הגחון, אזור הגחון הגחון, ואת ההיפוקמפוס (Liu ואח ', 1997, McDaid ואחרים, 9a, 2005b, Nye et al., 2007, Perrotti et al., 2006), לא היה מיפוי שיטתי של אינדוקציה Δ FOSB במוח בתגובה לחשיפה כרונית לסמים.
מטרת המחקר הנוכחי הייתה להשתמש בהליכים אימונוהיסטוכימיים למפות את אינדוקציה של ΔFOSB בכל המוח לאחר ניהול כרוני של ארבעה תרופות טיפוסיות של התעללות: קוקאין, מורפין, אתנול ו- ΔXUMX-THC.
חומרים ושיטות
בעלי חיים
כל הניסויים נערכו באמצעות עכברים ספרג דאגלי זכר (נהר צ'ארלס, קינגסטון, 250-275 ז). בעלי חיים שוכנו שני לכלוב והורגל לתנאי חדר בעלי החיים במשך שבוע אחד לפני תחילת הניסויים. היתה להם גישה חופשית למזון ולמים. הניסויים נערכו על פי פרוטוקולים הנסקרת על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש באוניברסיטת טקסס דרום מערב המרכז הרפואי בדאלאס.
טיפולים בסמים
קוקאין כרוני
חולדות (n = 6 לכל קבוצה) קיבלו פעמיים ביום זריקות של קוקאין הידרוכלוריד (15 מ"ג / ק"ג IP, המכון הלאומי על שימוש בסמים, Bethesda, MD) מומס 0.9% מלוחים עבור 14 ימים. חולדות הבקרה (n = 6 לכל קבוצה) קיבלו זריקות IP של מלוחים 0.9% תחת אותו הליך כרוני. כל הזריקות ניתנו בכלובי בית החיות. משטר טיפול זה הוכח לייצר התאמות התנהגותיות וביוכימיות חזקות (ראה Hope et al., 1994).
קוקאין עצמי הממשל
בעלי חיים (n = 6 לכל קבוצה) הוכשרו ללחוץ על מנוף עבור גלולה סוכרוז 45 mg. לאחר אימון זה, האכילו את בעלי החיים והשתילו בניתוח תחת הרדמה pentobarbital עם קטטר הצוואר כרונית (צינורות סילסטיים, גומי ירוק, וובורן, MA) כפי שתואר לעיל (Sutton et al., 2000). הצנתר עבר תת עורית כדי לצאת מאחור דרך צינורית 22-מד (פלסטיקה אחת, Roanoke, VA), מוטבע מלט cranioplastic, מאובטח עם רשת כירורגית מרלקס (בארד, Cranston, RI). מינהל עצמי התנהל בחדרי מבחן אופרנטיים (Med Associates, St. Alban, VT), שהיו שונים זה מזה מכלוב הבית של החיה וממוקם בחדר אחר. כל תא היה סגור בתא מקטין-קול המצויד במשאבת משאבת אינפוזיה המורכבת ממאגר Razel דגם A (Stamford, CT) ומזרק זכוכית 10 מ"ל המחובר לסיבוב נוזל (Instech, מפגש פלימאות ', PA) על ידי צינורות טפלון . צינורות טיגון חיברו את המסתובב אל מכלול הצנתרים של החיה, והיו מוקפים באביב מתכת. כל חדר אופרנטי הכיל שני מנופים (4 × 2 cm2, הממוקם 2 ס"מ מהרצפה). במהלך אימון עצמי, אחד 20 G מנוף לחץ על הידית הפעיל נמסר עירוי IV של קוקאין (0.5 מ"ג / ק"ג לכל עירוי 0.1 מ"ל) על מרווח עירוי 5- s. העירוי היה ואחריו 10- פסק זמן של פסק זמן, שבמהלכו אור הבית היה כבה להגיב להגיב לא תוצאות מתוכנתות. תאורה של אור הבית סימנה את סוף פרק הזמן הקצוב. לחץ המנוף על המנוף הלא פעיל לא הניב כל תוצאה. בעלי חיים עצמית קוקאין מנוהל במהלך 14 היומי 4-h פגישות הבדיקה (6 ימים / שבוע) במהלך מחזור כהה שלהם; הצריכה היומית הממוצעת הייתה 50 mg / kg. קבוצה של חיות מעופפות טופלו באופן זהה רק שקיבלו חליטות קוקאין כאשר עמיתיהם המנהלים את עצמם קיבלו סמים. קבוצה של בעלי חיים מלוחים הורשה ללחוץ על לחיצות מלוחים. משטר טיפול זה הוכח לייצר התאמות התנהגותיות וביוכימיות חזקות (ראה Sutton et al., 2000).
מורפיום כרוני
כדורי מורפיום (כל אחד מהם מכיל 75 מ"ג של מורפין בסיס, המכון הלאומי על שימוש בסמים) היו מושתלים sc פעם ביום עבור 5 ימים (n = 6). חולדות הבקרה עברו ניתוח דמה במשך 5 ימים רצופים (n = 6). משטר טיפול זה הוכח לייצר עיבודים התנהגותיים ביוכימיים חזקים (ראה Nye ו Nestler, 1996).
Δ9-THC
ΔXNXX-THC מומסו ב 9: 1: 1 פתרון של אתנול, emulphor, ומלח. עכברים הוזרקו תת עורית פעמיים ביום עם ΔXUMX-THC, או רכב עבור 18 ימים. המינון הראשוני של ΔXNXX-THC היה 9 מ"ג / ק"ג והמנה הוכפלה מדי שלושה ימים למינון סופי של 15 מ"ג / ק"ג. השתמשנו בעכברים עבור Δ9-THC, משום שמשטר הטיפול הזה הוכח כמייצר התאמות התנהגותיות וביוכימיות חזקות במין זה (סים-סלי ומרטין, 10).
אתנול
אתנול (ממניות 95%, Aaper, Shelbyville, KY) ניתנה באמצעות דיאטה נוזלית שלמה מבחינה תזונתית. זה תקן אתנול נוהל דיאטה כרוכה 7 של משקל 17 (משקל / נפח (wt / vol)] אתנול בתזונה lactalbumin / dextrose מבוסס עבור 8 ימים, שבמהלכו הזמן חולדות בדרך כלל צורכים אתנול ב 12-200 גרם / ק"ג / יום ו להשיג רמות אתנול בדם עד 1993 mg / dl (Criswell and Breese, 1981, Frye et al., 1998, Knapp et al., 1998). הדיאטה הייתה משלימה מבחינה תזונתית (עם ריכוז של ויטמינים, מינרלים וחומרים מזינים אחרים שמקורם בדיאטות מחקר של ICN ומאוזנים באופן קלורי (עם דקסטרוז) על פני עכברושים שטופלו באתנול ועכברושי בקרה. כמות הדיאטה המקבילה לצריכה הממוצעת של העכברושים שטופלו בדיאטה אתנול יום קודם לכן, שתי הקבוצות הצליחו לעלות במשקל במהלך תקופת החשיפה של אתנול (לא מוצג) .משטר טיפול זה הוכח כמייצר התאמות התנהגותיות וביוכימיות חזקות (ראה Knapp et al., XNUMX).
אימונוהיסטוכימיה
שמונה עד 24 ש לאחר הטיפול האחרון שלהם, בעלי חיים היו מורדמים עמוקות עם הידרציה כלורל (סיגמא, סנט לואיס, MO) ו perfused intracardially עם 200 מ"ל של 10 mM פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) ואחריו 400 מ"ל של פרפורמלדהיד 4% PBS. המוח הוסרו מאוחסן לילה performaldehyde 4% ב 4 ° C. למחרת בבוקר, המוח הועברו לגליסרול 20% ב 0.1 M PBS פתרון cryoprotection. סעיפים העטרה (40 מיקרומטר) נחתכו על microtome מקפיא (לייקה, Bannockburn, IL) ולאחר מכן מעובד עבור אימונוהיסטוכימיה. ΔFosB ו FosB immunoreactivities התגלו באמצעות שני ארנב פוליקלון שונה ארנב. אחד האנטיסרומים, העלו כנגד מסוף ה- FosB C שנמצא ב- ΔFosB (A 317-334), מזהה FosB באורך מלא, אך לא ΔFOSB (Perrotti et al., 2004). האנטי-סרום השני, נוגדן "פאן-פוזב", הועלה כנגד אזור פנימי של FosB ומזהה הן את FosB והן את ΔFOSB (sc-48, סנטה קרוז ביוטכנולוגיה, סנטה קרוז, קליפורניה).
FosB כמו מכתים התגלה על ידי שימוש של avidin-biotin peroxidase שיטה מורכבת. עבור הליך זה, סעיפים במוח טופלו לראשונה עם 0.3% H2O2 להרוס peroxidases אנדוגני ולאחר מכן מודגרות עבור 1 ש ב 0.3% Triton X-100 ו 3% בסרום עזים נורמלי כדי למזער תיוג לא ספציפי. מקטעי רקמות הודגרו בן לילה בטמפרטורת החדר ב 1% בסרום עיזים רגיל, 0.3% טריטון X-100 ונוגדן פאן FosB (1: 5000). סעיפים נשטפו, הניח עבור 1.5 ח 1: דילול 200 של immunotlobulin עז ביוטרינאטד ביוטין (DakoCytomation, Carpinteria, CA), שטף, והניח עבור 1.5 ש ב 1: דילול 200 של avidin- ביוטין מורכבים מן עילית Kit (וקטור מעבדות, Burlingame, CA). פעילות Peroxidase היה דמיינו על ידי תגובה עם diaminobenzidine (וקטור מעבדות). שקפים מקודדים שימשו לספור את מספר תאים FosB- immunoreactive. הקוד לא נשבר עד שהניתוח של ניסוי יחיד הושלם.
לאחר זיהום אימונו-אקטיביות של FosB, זוהתה תווית ניאון כפולה עם FosB ספציפי (C-Termus, 1: 500) ונוגדן פאן-פוזב (SC-48, 1: 200) נערך כדי לקבוע אם החלבון המושרה אכן היה ΔFosB. פרוטוקול שפורסם שימש (Perrotti et al., 2005). החלבונים היו דמיינו באמצעות CY2 ו CY3 fluorophore שכותרתו נוגדנים משניים (מעבדות ג 'קסון ImmunoResearch, ווסט גרוב, הרשות הפלסטינית). לוקליזציה של ביטוי חלבון בוצעה על מיקרוסקופ confocal (Axiovert 100, LSM 510 עם אורכי גל פליטה META של 488, 543, ו 633, Zeiss, Thornwood, NY). התמונות המוצגות כאן נתפסו על מערכת זו ולייצג קטע 1 מיקרומטר עבה דרך מטוס Z.
ניתוח סטטיסטי
אינדוקציה משמעותית של תאי ΔFosB + הוערכה באמצעות בדיקות t או ANOVA חד כיווניות ואחריה מבחן ניומן-קילס כניתוח פוסט-הוק. כל הניתוחים תוקנו לצורך השוואה מרובה. הנתונים באים לידי ביטוי כממוצע ± SEM. משמעות סטטיסטית הוגדרה כ- P <0.05.
תוצאות
אינדוקציה של ΔFosB במוח
כדי להשוות ישירות את הדפוסים של אינדוקציה Δ FOSB במוח בתגובה לסוגים שונים של סמים של התעללות, ניהלנו ארבעה תרופות טיפוסיות, קוקאין, מורפין, אתנול, ו ΔXUMX-THC, ובחן ΔFOSB הביטוי 9-18 h לאחר חשיפה לסמים האחרון . השתמשנו במשטרי טיפול תרופתי סטנדרטיים, אשר הוכחו בספרות לייצר sequelae התנהגותיים ביוכימיים של חשיפה כרונית לסמים (ראה חומרים ושיטות סעיף). רמות של ΔFosB היו לכמת על ידי אימונוהיסטוכימיה, עם דגש על המוח התיכון ואזורי המוח הקדמיים מעורב בסמים התמכרות. זה מיפוי בסדר של אינדוקציה ΔFosB בוצעה עם נוגדן פאן FosB, אשר מזהה הן ΔFOSB ו FosB באורך מלא. עם זאת, אנו יודעים כי כל immunoreactivity שנצפה, עבור כל אחת מהתרופות, נובע אך ורק ΔFosB, שכן סלקטיבי נוגדנים עבור FosB באורך מלא (ראה חומר ושיטות בסעיף) לא זוהה תאים חיוביים. יתר על כן, כל immunoreactivity זוהה על ידי נוגדן פאן FosB אבד עכברים נוקאאוט fosB, אשר מאשרת את הספציפיות של נוגדן זה עבור מוצרים גן fosB בניגוד חלבונים משפחה אחרים פוס. בקרות אלה מוצגים עבור קוקאין בתרשים 24, אך נצפו עבור כל התרופות האחרות גם כן (לא מוצג). ממצאים אלה אינם מפתיעים, מכיוון שבנקודת הזמן 1-18 h המשמשת במחקר זה כל ה- FosB באורך מלא, הנגרם על ידי מינהל התרופות האחרון, צפוי להיות מושפל, ויניח את ה- Δ FOSB יציב יותר כגן fosB היחיד המוצר נשאר (ראה חן ואח ', 24, הופעה ואח', 1995).
האיור 1
תיוג כפול של אימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית באמצעות נוגדן אנטי- FosB (pan-FosB, Santa-Cruz) או anti-FosB (C-terminus) דרך הגרעין של בעלי חיים שטופלו בקוקאין חריף או כרוני ועכברוש בקרה. כתמי הנוגדן של pan-FosB (עוד ...)
סיכום של הממצאים הכלליים של מחקר זה ניתן בטבלה I. כל אחת מארבע התרופות נמצאה באופן משמעותי כדי לגרום ΔFosB במוח, אם כי עם דפוסים שונים ברורים של אינדוקציה לראות עבור כל תרופה.
טבלה I
אינדוקציה של ΔFOSB במוח על ידי סמים של התעללות
אינדוקציה של ΔFOSB באזורים סטריאטליים
האינדוקציה הדרמטית ביותר של ΔFosB נראתה בגרעין האקומבנס ובסטריאטום הגבי (caudate / putamen), שבו כל ארבעת התרופות גרמו לחלבון (איור 2-Fig 4). זה מוצג כמותית באיור 5. Δ FOSB אינדוקציה היה לראות הן את הליבה ואת הקליפה subregions של גרעין accumbens, עם אינדוקציה שולית יותר לראות את הליבה עבור רוב התרופות. אינדוקציה חזקה של ΔFOSB נצפתה גם בסטריאטום הגבי של מרבית התרופות. היוצא מן הכלל היה ΔXNXX-THC, אשר לא גרמה באופן משמעותי ל- ΔFosB בקליפת הגרעין או בסטראטום הגב למרות מגמות חזקות (ראה איור 9, טבלה I). מעניין, אתנול המיוצר האינדוקציה הגדולה ביותר של ΔFosB בגרעין Accumbens הגרעין לעומת טיפולים אחרים.
האיור 2
אינדוקציה של ΔFosB בגרעין החולדות מצטברת בחולדת בקרה (A) או לאחר טיפול כרוני באתנול (B), מורפיום (C) או קוקאין (D). רמות החיסון הדומה ל- FosB נותחו על ידי אימונוהיסטוכימיה באמצעות נוגדן pan-FosB. (יותר …)
האיור 4
אינדוקציה של ΔFosB במוח העכבר לאחר טיפול Δ9-THC כרוני. רמות החיסון הדומה ל- FosB נותחו על ידי אימונוהיסטוכימיה באמצעות נוגדן פאן-FosB בשליטה (A, C, E) ובעלי חיים Δ9-THC (B, D, F) כרוניים. הערה (עוד ...)
האיור 5
כימות של אינדוקציה ΔFosB באזורים סטריאטליים לאחר מורפיום כרוני, Δ9-THC, אתנול וקוקאין. תרשימי העמודות מציגים את המספר הממוצע של תאי ΔFosB + בבעלי שליטה ובבעלי חיים המורפין למורפיום כרוני, (עוד ...)
אינדוקציה של ΔFosB על ידי חשיפה סמויה לעומת סמים בכפייה
בהינתן האינדוקציה הדרמטית של ΔFosB באזורים סדירים, היינו מעוניינים לקבוע האם היכולת של תרופה לגרום לחלבון באזורים אלו משתנה כפונקציה של חשיפה לחשיפה לסמים. כדי לענות על שאלה זו, למדנו קבוצה של חולדות כי עצמית מנוהל קוקאין עבור 14 ימים והשווה אינדוקציה Δ FOSB בבעלי חיים אלה לאלה שקיבלו חליטות מעושן של קוקאין ואלה שקיבלו מלוחים בלבד. כפי שמוצג בתרשים 6, קוקאין מנוהל על ידי גופרית המושרה בחוזקה ΔFosB בגרעין accumbens (הן הליבה ואת הקליפה תת אזורים) ו הסטריאטום הגבי, עם מעלות מקבילות של אינדוקציה לראות עצמית מנוהל לעומת תרופה מנוהלת yoked. ההיקף של אינדוקציה Δ FosB לראות בשתי קבוצות אלה של בעלי חיים היה גדול יותר מזה שנראה עם זריקות IP של קוקאין (ראה איור 5), כנראה בשל הרבה יותר גדול של כמויות של קוקאין בניסוי הממשל העצמי (מינון יומי: 50 מ"ג / ק"ג iv לעומת 30 מ"ג / ק"ג IP).
האיור 6
כימות של אינדוקציה ΔFosB באזורים סטריאטליים לאחר ניהול עצמי של קוקאין כרוני. תרשימי העמודות מציגים את המספר הממוצע של תאי ΔFosB + בבעלי שליטה ובבעלי חיים המושפעים מטיפולי הקוקאין, בליבה (ועוד ...)
אינדוקציה של ΔFOSB באזורי מוח אחרים
מעבר למכלול הסטריאטלי, מתן כרוני של סמים של התעללות גרם ל- ΔFosB בכמה אזורי מוח אחרים (ראה טבלה I). אנו צריכים להדגיש כי הנתונים המוצגים בטבלה I הם סמיקוונטיטיביים, ואינם מייצגים כימות מדויק של אינדוקציה ΔFosB, כפי שבוצעו עבור אזורים סטריאטליים (איור 5 ואיור 6). עם זאת, אנו בטוחים באינדוקציה של ΔFosB באזורים הלא-סטריאטליים הללו: ΔFosB כמעט ולא ניתן לזהות באזורים אלה בתנאים בסיסיים, כך שהזיהוי העקבי של ΔFosB לאחר חשיפה לתרופות כרוניות הוא מובהק סטטיסטית (P <0.05 על ידי ~ 2).
אינדוקציה איתנה על ידי כל התרופות נראתה בקורטקס הפריפרונטלי, כאשר מורפין ואתנול נראה כי הם מייצרים את ההשפעות החזקות ביותר בשכבות ביותר (איור 4 ואיור 7). כל ארבע התרופות גרמו גם לרמות נמוכות של אינדוקציה של Δ FosB בגרעין המיטות של מסוף המיתרים (BNST), הגרעין הבין-גופי של האיבר האחורי של המעי הקדמי (IPAC), ולכל אורך תסביך האמיגדלה (איור 8). השפעות נוספות, ספציפיות לתרופות מסוימות, נצפו גם הם. קוקאין ואתנול, אבל לא מורפין או Δ9-THC, נראה לגרום רמות נמוכות של ΔFOS ב מחיצת לרוחב, ללא אינדוקציה לראות מחיצת המדיאלי. כל התרופות המושרה ΔFosB בהיפוקמפוס, למעט אתנול, רוב האינדוקציה הזו נראתה בגירוס המשוננת (טבלה I ו- 9). לעומת זאת, אתנול המושרה מעט מאוד ΔFosB ב gyrus משוננים במקום המושרה רמות גבוהות של החלבון בתת-שדות CA3-CA1. קוקאין, מורפין ואתנול, אך לא Δ9-THC, גרם לרמות נמוכות של אינדוקציה של ΔFosB באפור periaqueductal, ואילו רק קוקאין המושרה ΔFosB באזור הטגמנטלית הגחון, ללא אינדוקציה הנראית בתת-סטאנטיה (ראה טבלה I ).
האיור 7
אינדוקציה של ΔFosB בקליפת המוח הקדם חזיתית בחולדה בקרה (A) או לאחר טיפול כרוני באתנול (B), מורפיום (C) או קוקאין (D). רמות החיסון הדומה ל- FosB נותחו על ידי אימונוהיסטוכימיה באמצעות נוגדן pan-FosB. תיוג (עוד ...)
האיור 8
אינדוקציה של ΔFosB בגרעינים המדיאליים הצדדיים והמרכזיים של האמיגדלה של חולדת בקרה (A) או בחולדות שקיבלו טיפולים אתנול כרוניים (B), מורפיום (C) או קוקאין (D). רמות החיסון הדומה ל- FosB נותחו על ידי אימונוהיסטוכימיה (עוד ...)
האיור 9
אינדוקציה של ΔFosB בהיפוקמפוס של חולדת בקרה (A) או בחולדות שקיבלו טיפולי אתנול כרוניים (B), מורפיום (C) או קוקאין (D). רמות החיסון הדומה ל- FosB נותחו על ידי אימונוהיסטוכימיה באמצעות נוגדן pan-FosB. תיוג (עוד ...)
דיון
מחקרים רבים הראו כי מתן כרוני של מספר סוגים של סמים המשמשים להתמכרות, כולל קוקאין, אמפטמין, מתאמפטמין, מורפין, ניקוטין ופנציקלידין, גורם לגורם שעתוק, ΔFosB, בגרעין האקומבנס ובסטריאטום הגבי (ראה סעיף מבוא להפניות; סקירה ב-McClung et al., 2004; Nestler et al., 2001). אינדוקציה של ΔFosB באזורים הסטריאטליים נצפתה גם לאחר צריכה כרונית של תגמולים טבעיים, כגון התנהגות ריצה על גלגלים (Werme et al., 2002). בנוסף, דווחו מספר פעמים על רמות נמוכות יותר של אינדוקציה של ΔFosB באזורים מסוימים אחרים במוח, כולל קליפת המוח הקדם-מצחית, האמיגדלה, הפלידום הגחוני, אזור הטגמנטל הגחוני והיפוקמפוס (Liu et al., 2007; McDaid et al., 2006a,2006b; Nye et al., 1996; Perrotti et al., 2005), בתגובה לחלק מסמי ההתמכרות הללו. עם זאת, מעולם לא בוצע מיפוי שיטתי של אינדוקציה של ΔFosB במוח על ידי תרופות. יתר על כן, למרות החקירה של רוב סמי ההתמכרות, שניים מהחומרים הנפוצים ביותר, אתנול ו-Δ9-THC, לא נבדקו עד כה ביכולתם לגרום ל-ΔFosB. מטרת המחקר הנוכחי הייתה לבצע מיפוי ראשוני של ΔFosB במוח בתגובה למתן כרוני של ארבעה סמי התמכרות אב טיפוסיים: קוקאין, מורפין, אתנול ו-Δ9-THC.
הממצאים העיקריים של מחקרנו הם שאתנול ו-Δ9-THC, כמו כל סם אחר, גורמים לרמות גבוהות של ΔFosB באופן כללי בתוך הקומפלקס הסטריאטלי. תוצאות אלו מבססות עוד יותר את אינדוקציית ΔFosB באזורים אלה כהסתגלות כרונית שכיחה כמעט לכל סמי השימוש (McClung et al., 2004). דפוס האינדוקציה בתוך הקומפלקס הסטריאטלי היה שונה במקצת עבור הסמים השונים. כולם גרמו ל-ΔFosB בצורה חזקה בליבת גרעין האקומבנס, בעוד שכל הסמים - למעט Δ9-THC - גרמו באופן משמעותי ל-ΔFosB גם בקליפת גרעין האקומבנס ובסטריאטום הגבי, והיו מגמות חזקות ל-Δ9-THC לייצר השפעות דומות באזורים האחרונים הללו. ליבת גרעין האקומבנס והקליפת הם אזורי גמול חשובים במוח, אשר הוכחו כמתווכים קריטיים של פעולות הגמול של סמי שימוש. באופן דומה, הסטריאטום הגבי נקשר לאופי הכפייתי או ההרגלי של צריכת סמים (Vanderschuren et al., 2005). ואכן, הוכח כי אינדוקציה של ΔFosB באזורים אלה מגבירה את התגובות המתגמלות לקוקאין ולמורפין, וכן מגבירה את התגובות לתגמולים טבעיים כגון התנהגות ריצה על גלגלים וצריכת מזון (Colby et al., 2003; Kelz et al., 1999; Olausson et al., 2006; Peakman et al., 2003; Werme et al., 2003; Zacharou et al., 2006). נדרשת עבודה נוספת כדי לקבוע האם אינדוקציה של ΔFosB באזורים אלה מתווכת התאמות תפקודיות דומות ברגישותו של אדם להשפעות המתגמלות של סמים אחרים המשמשים להתמכרות.
אינדוקציה של ΔFosB באזורים הסטריאטליים אינה פונקציה של צריכת התרופה באופן רצוני . לפיכך, הראינו כי מתן עצמי של קוקאין גרם לאותה מידה של ΔFosB בגרעין האקומבנס ובסטריאטום הגבי כפי שנראה בבעלי חיים שקיבלו זריקות שוות ערך של התרופה באמצעות עול. תוצאות אלו מראות כי אינדוקציה של ΔFosB בסטריאטום מייצגת פעולה פרמקולוגית של סמי שימוש לרעה, ללא תלות בשליטת בעל החיים על החשיפה לתרופה. בניגוד בולט, הראינו לאחרונה כי מתן עצמי של קוקאין גורם לרמות גבוהות פי כמה של ΔFosB בקליפת המוח האורביטופרונטלית בהשוואה למתן קוקאין באמצעות עול (Winstanley et al., 2007). השפעה זו הייתה ספציפית לקליפת המוח האורביטופרונטלית, מכיוון שרמות שוות ערך של אינדוקציה של ΔFosB נצפו בקליפת המוח הקדם-מצחית תחת שני תנאי טיפול אלו. לפיכך, למרות שאינדוקציה של ΔFosB אינה קשורה לשליטה רצונית על צריכת סמים באזורים הסטריאטליים, נראה שהיא מושפעת מגורמי מוטיבציה כאלה במרכזים קורטיקליים גבוהים יותר מסוימים.
אנו מציגים גם נתונים סמי-כמותיים לפיהם כל ארבעת הסמים המשמשים להתמכרות גורמים ל-ΔFosB במספר אזורים במוח מחוץ לקומפלקס הסטריאטלי, אם כי באופן כללי במידה פחותה. אזורי מוח אחרים אלה כללו את קליפת המוח הקדם-מצחית, האמיגדלה, IPAC, BNST והיפוקמפוס . אינדוקציה של ΔFosB על ידי סמים בקליפת המוח הקדם-מצחית ובהיפוקמפוס עשויה להיות קשורה לחלק מההשפעות של סמים המשמשים להתמכרות על ביצועים קוגניטיביים, אם כי הדבר טרם נחקר ישירות. האמיגדלה, IPAC ו-BNST נמצאו כולן קשורות לוויסות תגובותיו של אדם לגירויים מרתיעים. זה מעלה את האפשרות שאינדוקציה של ΔFosB באזורים אלה לאחר מתן כרוני של סם שימוש מתווכת את ויסות ההתנהגות הרגשית על ידי סמים הרבה מעבר לגמול. יהיה מעניין לבחון אפשרויות אלה במחקרים עתידיים.
ארבע התרופות של התעללות שנחקרו כאן הפיקו גם השפעות ספציפיות לסמים. קוקאין ייחודי המושרה ΔFosB באזור tegmental הגחון, כפי שדווח בעבר (Perrotti et al., 2005). כמו כן, קוקאין ואתנול ייחודי המושרה רמות נמוכות של ΔFosB מחיצת לרוחב. Δ9-THC היה ייחודי עבור השפעות דרמטיות פחות על אינדוקציה Δ FosB, בהשוואה לסמים אחרים של התעללות, בקליפה של גרעין אקומבנס וסטריאטום הגב, כאמור. Δ9-THC היה ייחודי גם בחשיפה הכרונית לתרופה זו, בניגוד לכל האחרים, לא גרם לרמות נמוכות של Δ FOSB באפור periaqueductal. בהינתן התפקיד של ההיפוקמפוס והמחיצות בתפקוד הקוגניטיבי, ותפקידם של אזורים אלה, כמו גם את האפור הפריאקוודוקטאלי בוויסות תגובות של בעל חיים למצבים מלחיצים, אינדוקציה ספציפית לאזור ולסמים של ΔFOSB באזורים אלו יכולה לתווך היבטים חשובים של פעולה סמים על המוח.
לסיכום, אינדוקציה של ΔFosB באזורי גמול במוח הסטריאטלי הודגמה באופן נרחב כהסתגלות כרונית משותפת לסמים הנגרמים משימוש לרעה. הרחבנו תפיסה זו על ידי כך שהראה כאן ששני סמים נוספים ונמצאים בשימוש לרעה באופן נרחב, אתנול ו-Δ9-THC, גם הם גורמים ל-ΔFosB באזורי מוח אלה . אנו מזהים גם מספר אזורים אחרים במוח, המעורבים בתפקוד קוגניטיבי ובתגובות ללחץ, אשר מראים דרגות שונות של אינדוקציה של ΔFosB בתגובה לחשיפה כרונית לסמים. חלק מהתגובות הללו, כמו אינדוקציה של ΔFosB באזורים הסטריאטליים, נפוצות בכל הסמים הנגרמים משימוש לרעה שנחקרו כאן, בעוד שתגובות באזורי מוח אחרים ספציפיות יותר לסמים. ממצאים אלה יכוונו כעת חקירות עתידיות לאפיון תפקידה של אינדוקציה של ΔFosB באזורי מוח אחרים אלה. הם גם עוזרים להגדיר את התועלת הפוטנציאלית של אנטגוניסטים של ΔFosB כטיפול נפוץ לתסמונות התמכרות לסמים.
האיור 3
אינדוקציה של ΔFosB בחולדות הזנב חולדה בחולדה בקרה (A) או לאחר טיפול כרוני באתנול (B), מורפיום (C) או קוקאין (D). רמות החיסון הדומה ל- FosB נותחו על ידי אימונוהיסטוכימיה באמצעות נוגדן pan-FosB. (יותר …)
תודות
חוזה מענק החסות: המכון הלאומי על שימוש בסמים.
ביבליוגרפיה
1. Alibhai IN, גרין ת"א, Nestler EJ. תקנה של ביטוי fosB ו Δosb mRNA: ב vivo ובמחקרים חוץ גופית. מוח מוחי. 2007; 11: 4322-4333.
2. אטקינס JB, אטקינס J, קרלזון WA, Chlan J, Nye HE, Nestler EJ. אזור ספציפי אינדוקציה של ΔFosB על ידי ניהול חוזרות של תרופות אנטיפסיכוטיות טיפוסיות לעומת טיפוסיות. סינפסה. 1999; 33: 118-128. [PubMed]
3. Bachtell RK, וואנג YM, פרימן P, Risinger FO, Ryabinin AE. שתיית אלכוהול מייצרת שינויים במוח באזור סלקטיבי בביטויים של גורמים שעתוק inducable. מוח מוחי. 1999; 847: 157-165. [PubMed]
4. Beckmann AM, Matsumoto I, Wilce PA. AP-1 ו- EGR DNA מחייב פעילויות מוגברת במוח חולדה במהלך נסיגה אתנול. ניורוצ'ם. 1997; 69: 306-314. [PubMed]
5. קרל TL, אליבהאי IN, וילקינסון MB, קומאר, נסלר EJ. פרוטאזום מנגנונים תלויים עצמאיים עבור יציבות FosB: זיהוי תחומים FosB degron והשלכות על יציבות FOSB Δ. Eur J Neurosci. 2007; 25: 3009-3019. [PubMed]
6. חן JS, Nye HE, Kelz MB, הירוי N, Nakabeppu Y, הופ BT, Nestler EJ. תקנה של חלבונים דמויי ΔFosB ו- FosB על ידי התקפים אלקטרו-פולסביים (ECS) וטיפולי קוקאין. מול פרמקול. 1995; 48: 880-889. [PubMed]
7. קולבי קר, ויסלר ק', סטפן סי, נסלר אי-ג'יי, עצמי ד"ו. ΔFOSB משפר תמריץ לקוקאין. J Neurosci. 2003; 23: 2488-2493. [PubMed]
8. קריסוול, בריס ג. השפעות דומות של אתנול ו flumazenil על רכישת התגובה תיבת המעבורת הימנעות במהלך הנסיגה מטיפול אתנול כרוני. בר פארמקול. 1993; 110: 753-760. [מאמר חינם PMC] [PubMed]
9. Ehrlich ME, זומר J, Canas E, Unterwald EM. עכברים periadolescent להראות משופר ΔFosB upregulation בתגובה קוקאין ואמפטמין. J Neurosci. 2002; 22: 9155-9159. [PubMed]
10. Frye GD, Chapin RE, Vogel RA, Mailman RB, קילטס CD, Mueller RA, Breese GR. ההשפעות של טיפול חריף 1,3-butanediol אקוטי וכרוני על מערכת העצבים המרכזית פונקציה: השוואה עם אתנול. פארמקול. 1981; 216: 306-314. [PubMed]
11. גרייבל, מורטלה, רוברטסון. אמפטמינים וקוקאין גורמים לפעולה ספציפית לתרופות של הגן c-fos במחיצות סטריאו-מטריסטיות ובתת-מחלקות לימביות של הסטריאטום. פרוט נטל. 1990; 87: 6912-6916. [מאמר חינם PMC] [PubMed]
12. הירואי N, בראון J, היילה C, יה H, גרינברג ME, Nestler EJ. עכברים מוטנטים של FosB: איבוד של קוקאין כרונית השראה של חלבונים הקשורים ל- FOS ורגישות מוגברת להשפעותיו הפסיכו-מוטוריות והמגמלות של קוקאין. פרוט נטל. 1997; 94: 10397-10402. [מאמר חינם PMC] [PubMed]
13. תקווה BT, Kosofsky B, היימן SE, Nestler EJ. תקנה של ביטוי מוקדם של הגן מוקדם AP-1 מחייב בגרעין עכברוש accumbens על ידי קוקאין כרונית. Proc Natl Acad Sci US A. 1992, 89: 5764-5768. [מאמר חינם PMC] [PubMed]
14. התקווה BT, Nye HE, Kelz MB, עצמי DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. השראה של מורכבות AP-1 ארוכת טווח המורכבת מחלבונים דמויי FOS דמויי מוח במוח על ידי קוקאין כרוני וטיפולים כרוניים אחרים. נוירון. 1994; 13: 1235-1244. [PubMed]
15. Kelz MB, חן JS, קרלזון WA, ויסלר K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, ג 'אנג YJ, Marotti L, עצמי DW, Tkatch R, Baranauskas G, Surmeier DJ, נווה RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ . ביטוי של גורם שעתוק Δ FOSB במוח שולט ברגישות לקוקאין. הטבע. 1999; 401: 272-276. [PubMed]
16. קנאפ DJ, דאנקן ג 'נרל אלקטריק, צוותי FT, Breese GR. אינדוקציה של חלבונים דמויי FOS וקולות קוליים במהלך נסיגת אתנול: ראיות נוספות לחרדה הנגרמת משימוש. אלכוהול Clin Exp. 1998; 22: 481-493. [PubMed]
17. Liu HF, ג'ואו WH, Zhu HQ, Lai MJ, חן WS. Microinjection של M (5) קולטן muscarinic antisense oligonucleotide לתוך VTA מעכב ביטוי FosB ב NAC ואת ההיפוקמפוס של חולדות רגישות של הרואין. Neurosci בול. 2007; 23: 1-8. [PubMed]
18. McClung CA, Nestler EJ. תקנה של ביטוי גנים קוקאין פרס על ידי CREB ו ΔFOSB. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208-1215. [PubMed]
19. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, זכריו V, ברטון O, Nestler EJ. ΔFosB: מתג מולקולרי להתאמה ארוכת טווח במוח. Mol המוח מוחל. 2004; 132: 146-154. [PubMed]
20. McDaid J, Dallimore JE, Mackie AR, Napier TC. שינויים ב pCREB pumere ו pallre pallidal ו ΔFOS ב עכברים רגישים מורפיום: קורלציות עם קולטנים עורר אמצעים אלקטרופיאליים בתוך pallidum הגחון. Neuropsychopharmacology. 2006a; 31: 1212-1226. [מאמר חינם PMC] [PubMed]
21. McDaid J, גרהאם MP, TCier Napier. Mammamphetamine- המושרה רגישות משנה דיפרנציאלי משנה pCREB ו Δ-FosB לאורך מעגל הלימבית של המוח יונקים. מול פרמקול. 2006b; 70: 2064-2074. [PubMed]
22. Moratalla R, אליבול R, Vallejo M, Graybiel AM. שינויים ברמת הרשת בביטוי של חלבונים Fos-Jun inucible ב striatum במהלך טיפול קוקאין כרונית נסיגה. נוירון. 1996; 17: 147-156. [PubMed]
23. Muller DL, Unterwald EM. קולטני דופאמין D1 מווסתים אינדוקציה FΔB ב הסטריאטום חולדה לאחר ניהול מורפיום לסירוגין. פארמקול. 2005; 314: 148-154. [PubMed]
24. נסלר EJ, Barrot M, עצמי DW. ΔFosB: מתג מולקולרי מתמשך להתמכרות. פרוט נטל. 2001; 98: 11042-11046. [מאמר חינם PMC] [PubMed]
25. Nye HE, Nestler EJ. השראה של אנטיגנים כרוניים Fos הקשורים במוח חולדה על ידי ניהול מורפיום כרונית. מול פרמקול. 1996; 49: 636-645. [PubMed]
26. Nye HE, הופ BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. מחקרים פרמקולוגיים של הרגולציה על ידי קוקאין של כרוני FRA (FOS הקשורים אנטיגן) אינדוקציה ב striatum ו גרעין accumbens. פארמקול. 1995; 275: 1671-1680. [PubMed]
27. Olausson P, Jentsch JD, טרונסון N, נווה R, Nestler EJ, טיילור FR. ΔFosB בגרעין הנבדק מווסת את ההתנהגות האינסטרומנטלית והמוטיבציה המחזקת את המזון. J Neurosci. 2006; 26: 9196-9204. [PubMed]
28. פיקמן מיל, קולבי C, פרוטי לי, טאקומלה P, קרל ט, אולרי P, צ'או J, Duman C, סטפן C, מונטגיה L, אלן MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. inucible, ביטוי לאזור ספציפי למוח של מוטציה שלילית דומיננטית של c-Jun בעכברים מהונדס מקטין את הרגישות קוקאין. מוח מוחי. 2003; 970: 73-86. [PubMed]
29. Perrotti LI, Hadeishi Y, Barrot M, Duman RS, Nestler EJ. אינדוקציה של ΔFosB במבני מוח הקשורים לגמול לאחר לחץ כרוני. J Neurosci. 2004; 24: 10594-10602. [PubMed]
30. Perrotti LI, Boloos CA, Choi KH, Russo SJ, אדוארדס S, Ulery PG, Wallace D, DW עצמי, Nestler EJ, Barrot מ ΔFOSB מצטבר באוכלוסייה תא GABAergic בזנב האחורי של אזור tegmental הגחון לאחר טיפול psychostimulant. Eur J Neurosci. 2005; 21: 2817-2824. [PubMed]
31. Pich EM, Pagliusi SR, Tessari M, Talabot-Ayer D, Hooft van Huijsduijnen R, Chiamulera C. מצעים עצביים נפוצים תכונות ממכר של ניקוטין וקוקאין. מדע. 1997; 275: 83-86. [PubMed]
32. SAMHSA. O. o. מחקרים, מסלקה הלאומית עבור אלכוהול מידע על סמים. Rockville, MD: NSDUH סדרה H-28; 2005. תוצאות מתוך סקר 2004 הלאומי על שימוש בסמים ובריאות: ממצאים לאומיים.
33. Sim-Selley LJ, מרטין בר. (Mnyl) pyrrolo [2,3, 5-de] -3-b enzoxazinyl] - (1,2-naphthalenyl) methylone mesylate (xnumx-dihydro-xNUMX-methyl-xNUMX - (WIN3-1,4) או דלתא (1) -Tetrahydrocannabinol על הסתגלות קולטן קנבינואידים בעכברים. פארמקול. 55,212; 2: 9-2002. [מאמר חינם PMC] [PubMed]
34. סאטון MA, DA קרני, עצמי DW. גורמים אשר קובעים נטייה להתנהגות של קוקאין המבקשת במהלך ההתנזרות בחולדות. Neuropsychopharmacology. 2000; 22: 626-641. [PubMed]
35. אולרי PG, Rudenko G, Nestler EJ. תקנה של יציבות ΔFosB על ידי זרחון. J Neurosci. 2006; 26: 5131-5142. [PubMed]
36. Vanderschuren LJ, די Ciano P, אווריט BJ. מעורבות של הסטריאטום הגבי ב מבוקרת קוקאין המבקשים. J Neurosci. 2005; 25: 8665-8670. [PubMed]
37. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thorén P, Nestler EJ, Brené S. ΔFOSB מסדיר את פעולת הריצה. J Neurosci. 2002; 22: 8133-8138. [PubMed]
38. וינסטלי CA, LaPlant ש, TheOBDD DEH, גרין ת"א, Bachtell RK, Perrotti LI, DLeone FJ, רוסו SJ, Garth WJ, DW עצמי, Nestler EJ. אינדוקציה ΔFosB בקורטקס אורביטופרונאלי מתווך סובלנות לתפקוד הקוגניטיבי המושרה על ידי קוקאין. J Neurosci. 2007; 27: 10497-10507. [PubMed]
39. יאנג ST, Porrino LJ, Iadarola MJ. קוקאין גורם ל- c-fos-immunoreactive חלבונים באמצעות dopaminergic קולטנים D1. פרוט נטל. 1991; 88: 1291-1295. [מאמר חינם PMC] [PubMed]
40. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, קאסידי MP, קלץ MB, שו-לוצ'מן T, ברטון O, סים- Selley LJ, DiLeone RJ, קומאר, נסלר EJ. ΔFosB: תפקיד חיוני עבור ΔFBB בגרעין accumbens בפעולה מורפיום. Nat Neurosci. 2006; 9: 205-211. [PubMed]