Pertraukiamai patekus į saldų, riebų skystį, padidėja skonio ir motyvacijos vartoti žiurkių patekimo į kiaušinius modelį (2013)

Sylvie Lardeux, Jamesas J. Kimasir Saleem M. Nicola^*

Besaikio valgymo sutrikimams būdingi atskiri greito ir nesaikingo maisto vartojimo epizodai. Žiurkėms su pertraukomis prieiga prie saldaus riebaus maisto imituoja šį persivalgymo aspektą. Šiuose modeliuose paprastai naudojamas kietas maistas; tačiau bendras suvartojamas kiekis priklauso nuo motyvacijos, skonio ir sotumo, kuriuos sunku atskirti nuo kieto maisto. Priešingai, laižymo mikrostruktūros analizė gali būti naudojama šiems parametrams atskirti, kai geriamoji medžiaga yra skysta. Todėl mes sukūrėme besaikį modelį, naudodami skystą emulsiją, sudarytą iš kukurūzų aliejaus, riebios grietinėlės ir cukraus. Mes parodome, kad žiurkės, kurioms su pertrūkiais patenkama į šią riebią emulsiją, elgiasi kaip persivalgymas, panašus į tą, kuris anksčiau buvo pastebėtas vartojant kietą riebų maistą. Vienas iš šio elgesio bruožų buvo laipsniškas suvartojimo padidėjimas per 2.5 savaitės su pertrūkiais, o tai nebuvo akivaizdu žiurkėms, kurioms buvo duodama mažiau riebaus skysčio pagal tą patį prieigos grafiką. Licko mikrostruktūros analizė rodo, kad šį padidėjimą bent iš dalies lėmė tiek vartojimo motyvacijos, tiek skonio sukelto vartojimo padidėjimas.

2.1 Gyvūnai

Patinai Long-Evans žiurkės (n = 144), sveriančios 275–300 g, buvo paimtos iš Harlan ir laikomos patalpoje su 12 valandų įjungta ir 12 valandų išjungta šviesos ciklu. Eksperimentai buvo atlikti šviesos fazės metu. Prieš pradedant eksperimentus, gyvūnai buvo įpratę juos tvarkyti kasdien mažiausiai vieną savaitę. Per tą laiką kasdien buvo matuojamas čiaudo suvartojimas ir kūno svoris. Prieš pradedant eksperimentą, trys žiurkių grupės buvo suderintos pagal vidutinį suvartojamo čiaudo kiekį ir vidutinį kūno svorį. Visos procedūros su gyvūnais atitiko JAV nacionalinių sveikatos institutų laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo vadovą ir buvo patvirtintos Alberto Einšteino medicinos koledžo institucinio gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto.

2.2 elgesys

2.2.3. Pertraukiamos prieigos procedūra

Žiurkės buvo suskirstytos į tris grupes: protarpinės prieigos (išgėrimo) grupę (I_COS; n = 46), nuolatinės prieigos grupė (C_COS; n = 36) ir kontrolinė grupė neturi prieigos prie COS (N_COS; n=38). (Naudojamų žiurkių skaičius yra didelis, nes vėliau žiurkės buvo naudojamos farmakologiniams eksperimentams, siekiant palyginti vaistų poveikį skirtingoms grupėms; šie rezultatai čia nepateikiami.) 5 savaites I._COS ir C_COS grupės tris kartus per savaitę (pirmadienį, trečiadienį ir penktadienį; MWF) turėjo prieigą prie likometro, kuriame yra COS operacinėse kamerose, 90 min. C_COS grupė taip pat turėjo ad libitum prieiga prie COS visą laiką savo namų narvuose. Prieigos seansų metu buvo įrašytos laižymo laiko žymos ir COS suvartojimas. Kūno svoris, suvartojamo maisto kiekis ir (C_COS grupė) COS suvartojimas namų narve buvo registruojamas kasdien nuo pirmadienio iki penktadienio; todėl 25 savaičių eksperimento metu pranešama apie 5 matavimus (Fig. 2A, D, B, E; 3A, C). Pirmadieniais šios priemonės buvo padalintos iš trijų, kad normalizuotųsi savaitgaliui. Chow suvartojimo palyginimas dieną prieš ir dieną po prieigos seanso (Fig. 2C, F; 3B, D) buvo atliekami du kartus per savaitę (iš viso 10 palyginimų per 5 savaites). N_COS žiurkės buvo įsigytos tuo pačiu metu kaip ir kitos grupės ir buvo laikomos toje pačioje kolonijoje, tačiau joms nebuvo suteikta prieiga prie COS. Visos žiurkės turėjo ad libitum bet kuriuo metu prieiga prie maisto ir vandens namų narve.

 

2 pav

Kalorijų suvartojimui ir maisto suvartojimui įtakos turėjo prieigos grafikas ir suvartojamas kiekis

 

3 pav

Pertraukiama prieiga prie COS ar CS neturi įtakos svorio padidėjimui

Atskirame eksperimente vietoj COS buvo naudojamas mažiau kaloringas CS tirpalas. Šiame eksperimente buvo naudojamos trys žiurkių grupės (kiekviena n=8), I._CSC_CS ir N_CS, ir jie buvo traktuojami lygiai taip pat, kaip I_COSC_COS ir N_COS atitinkamai aukščiau aprašytos grupės, išskyrus tai, kad CS buvo pakeistas COS. N_COS ir N_CS grupės buvo traktuojamos vienodai (nebuvo prieigos prie COS ar CS); skirtumas buvo tas, kad N_COS grupė buvo išlaikyta kolonijoje kartu su I_COS ir C_COS grupės, tuo tarpu N_CS grupė buvo palaikoma kartu su I_CS ir C_CS grupės.

2.3. Duomenų analizė

2.3.1. Statistika

Pakartotinių matavimų ANOVA su vienu veiksniu (dienomis) arba dviem veiksniais (dienomis ir grupėje) buvo naudojamas norint palyginti persivalgymo ir kontrolės procedūrų poveikį. Po ANOVA sekė Holm-Sidak post-hoc testai; ir pakoreguotas p < 0.05 buvo laikomas reikšmingu skirtumu. ANOVA rezultatai pateikti Lentelė 1. Norint nustatyti, ar suvartojimas padidėjo per nuoseklius prieigos seansus, duomenys nuo 2 iki 8 dienos buvo pritaikyti tiesiniam modeliui, naudojant mažiausiųjų kvadratų regresiją. Šių dienų nuolydis buvo įvertintas dėl reikšmingo skirtumo nuo 0, o šlaitai buvo lyginami tarp I_COS ir aš_CS grupėse naudojant ANCOVA. Visos analizės buvo atliktos naudojant R programinės įrangos aplinką [43].

 

Lentelė 1

ANOVA rezultatai.

3.1. Bendras suvartojimas ir kūno svoris

Žiurkės I_COS (Pertraukiama prieiga prie COS) grupė 5 savaites turėjo prieigą prie kremo (50 % t/t), aliejaus (50 % t/t) ir cukraus (8 % m/t) skystos emulsijos (COS) bandymo dienomis: pirmadieniais. , trečiadieniais ir penktadieniais (ir jokiu kitu metu nėra prieigos prie COS). COS buvo pristatytas per licometrą per 90 minučių prieigos laikotarpiais operacinėse kamerose. Per 5 nepertraukiamos prieigos savaites suvartojamo COS kiekis nuolat didėjo: 15 prieigos dieną (5^th savaitę), suvartotas kiekis buvo žymiai didesnis nei 1–10 dienomis, o 6–15 dienomis suvartotas kiekis buvo didesnis nei 1, 2 ar 3 dienomis (1A). Priešingai nei I_COS grupė, žiurkės C_COS grupė (Nuolatinė prieiga prie COS) turėjo prieigą prie COS ne tik operacinėje kameroje 90 minučių prieigos laikotarpiu, bet ir namų narve kitu metu. Kaip ir tikėtasi, C_COS grupė vartojo daug mažiau COS nei I_COS grupė operantinėse kamerose visuose seansuose po pirmojo ir neparodė jokių vartojimo skirtumų per 15 prieigos dienų (1A).

 

1 pav

COS, bet ne CS suvartojimas padidėjo per nuoseklias prieigos sesijas

Priešingai nei poveikis, pastebėtas I_COS grupėje suvartojamas kiekis reikšmingai nepadidėjo per savaites I_CS grupė, kuri turėjo prieigą prie CS – mažesnio riebumo grietinėlės/cukraus tirpalo. Šios žiurkės per pirmą prieigos seansą suvartojo mažai, ir nors vėlesnių seansų metu suvartojimas buvo didesnis (ir paprastai didesnis nei C._CS grupėje), per dienas daugiau nepadidėjo (1B). Statistiškai reikšmingo dienų poveikio nebuvimas I_CS grupė prieštarauja stipriam dienų poveikiui I_COS grupė (Lentelė 1); tačiau šis skirtumas teoriškai gali atsirasti dėl mažesnio tiriamųjų skaičiaus (taigi ir statistinės galios) I._CS grupė. Todėl sulaužėme I_COS suskirstyti į 6 pogrupius, kurių dydis panašus į I_CS grupė (N = 8 už 5 I_COS pogrupiai, N = 6 vienam pogrupiui; kiekvieno pogrupio tiriamieji buvo mokomi kartu). COS suvartojimas žymiai padidėjo 5 iš 6 I_COS pogrupiai (dienų poveikis: 1 grupė: F_(14,211) = 5.87, P < 0.001; 2 grupė: F_(14,210) = 4.06, p < 0.001; 3 grupė: F_(14,200) = 4.83, p < 0.001; 4 grupė: F_(14,196) = 7.98, p< 0.001; 5 grupė: F_(14,74) = 1.87, p < 0.05); Likusiame pogrupyje poveikis priartėjo prie reikšmingumo (F_(14,141) = 1.72, p = 0.058). I_CS grupėje, tačiau nebuvo įrodymų, rodančių net reikšmingo poveikio tendenciją (p = 0.56; Lentelė 1). Todėl reikšmingo dienų poveikio nebuvimas I_CS žiurkių vargu ar dėl statistinės galios stokos.

Šie rezultatai rodo, kad I_CS žiurkės išmoko vartoti CS ir įveikti neofobiją per vieną seansą, todėl jų suvartojimas pasiekė plato per antrąjį seansą. Kadangi pradinis mokymosi ir neofobijos poveikis turėtų būti panašus I_COS ir aš_CS grupėse, didelis vartojimo padidėjimas I_COS grupė nuo 1 dienos iki 2 dienos (1A) greičiausiai dėl pradinio mokymosi ir neofobijos sumažėjimo. Tačiau laipsniškesnis padidėjimas vėlesnėmis dienomis nesuderinamas su šiais procesais. Todėl, norint atskirti laipsnišką suvartojamo kiekio didėjimą (1A) ir kitos papildomos priemonės (Fig. 5 ir Ir6) 6) iš pradinio mokymosi ir neofobijos poveikio lyginame suvartojimą visomis atskiromis dienomis su pradiniu vartojimu 2 ir 3 dienomis.

 

5 pav

Laižymo delsa ir pradinis laižymo greitis pasikeitė per kelias dienas, kai buvo pertraukiama prieiga prie COS

 

6 pav

Serijos mikrostruktūra pasikeitė per kelias dienas, kai buvo pasiekiama COS, bet ne CS

Ankstyvojo plokščiakalnio efektas I_CS grupė ryškiai prieštarauja laipsniškam eskalavimui, pastebėtam I_COS grupė, kuri pasiekė plynaukštę iki 8 dienos. Tiesiogiai palyginti vartojimo padidėjimo greitį po pirmosios I dienos_COS ir aš_CS grupėse, mes apskaičiavome padidėjimo nuolydį nuo 2 dienos iki 8 dienos (1C). Tuo tarpu I nuolydis buvo teigiamas ir žymiai skyrėsi nuo 0_COS grupėje jis reikšmingai nesiskyrė nuo 0 I_CS grupė. Be to, reikšmingai teigiamas nuolydis buvo pastebėtas 5 iš 6 I_COS aukščiau aprašyti pogrupiai (neparodyta). Be to, lyginant I šlaitus_COS ir aš_CS grupėse, vartojusiose ANCOVA, nustatytas reikšmingas skirtumas tarp dviejų grupių (1C). Todėl I_COS grupė parodė laipsnišką vartojimo didėjimą per pertraukiamus prieigos laikotarpius, o tai negali būti lengvai paaiškinama kaip pradinio mokymosi ar neofobijos sumažėjimo pasekmė. Šis laipsniškas padidėjimas yra panašus į tą, kuris anksčiau buvo pastebėtas žiurkėms, kurios su pertraukomis galėjo gauti kieto riebaus maisto [5, 6, 10-12].

Galimas alternatyvus laipsniško vartojimo didėjimo I metais paaiškinimas_COS grupė yra ta, kad žiurkės palaipsniui išmoko gauti daugiau COS už vieną laižymą. Norėdami patikrinti šią hipotezę, palyginome laižymų skaičių viename mililitre skysčio, suvartoto per I_COS ir aš_CS grupėse ir per visas prieigos dienas, naudojant dviejų faktorių ANOVA. I_COS grupė laižė efektyviau nei I_CS grupė (bendras vidurkis per 15 seansų: COS: 315.0 ± 52.3 laižymo/mL; CS: 418.3 ± 106.4 laižymo/ml; F_(1,719) = 13.6; p < 0.001) ir atsirado prieigos dienų poveikis (F_(14,719) = 1.8; p = 0.04), bet nėra sąveikos (F_(14,719) = 0.5; p = 0.9). Post-hoc testai parodė, kad dienų poveikį lėmė reikšmingas efektyvumo padidėjimas nuo pirmos dienos iki antros, tačiau vėlesniuose užsiėmimuose daugiau nepadidėjo. Todėl laipsniškas vartojimo didėjimas I_COS grupė negali būti siejama su laižymo efektyvumo pokyčiais.

Kitas potencialiai klaidinantis veiksnys yra emulsiklio (natrio stearoilo laktilato) buvimas COS, bet ne CS: I_COS žiurkės iš pradžių galėjo vengti COS dėl emulsiklio buvimo. Kadangi neįmanoma pagaminti COS be emulsiklio, mes patikrinome hipotezę, kad žiurkės vengia emulsiklio, naudojamo COS ruošti, palygindami CS ir CS + 0.1, 1% natrio stearoilo laktilato suvartojimą (masė / tūris). Šeši naivūs žiurkių patinai 4.2 valandai buvo laikomi namų narve kartu su buteliais, kuriuose buvo abu skysčiai. Ši patirtis buvo pakartota du kartus po vienos dienos pripratimo; santykinė buteliuko padėtis buvo pakeista tarp dienų, kad būtų išvengta šoninio šališkumo. Per paskutinius du prieigos seansus žiurkės gėrė panašius kiekius CS (0.8 ± 5.4 ml) ir CS + emulsiklio (0.4 ± 0.05 ml; t testas p > XNUMX). Todėl žiurkės nevengia emulsiklio.

Per 5 savaites I_COS ir C_COS grupės vartojo vis mažiau laisvai prieinamą maistą namų narve. C_COS grupė vartojo palyginti mažai čio (2A), tačiau dėl didelio COS kiekio suvartojimo per dieną vis tiek suvartojau daugiau kalorijų nei N._COS kontrolinė grupė, kuri neturėjo prieigos prie COS (2B). I_COS grupėje buvo dideli ir reguliarūs čiau vartojimo svyravimai (2A), šios grupės žiurkės valgo daugiau maisto likus dienai iki patekimo į COS ir mažiau per 24 val.2C). Priešingai, nei N_COS nei C_COS grupės skyrėsi savo čiaudo suvartojimu prieš pat įėjimo laikotarpį ir po jo (2C). Dėl I_COS žiurkėms, grynasis rezultatas buvo toks, kad COS prieigos dienomis ši grupė suvartojo bendras kalorijas, panašias į C._COS grupėje, o dienomis be COS – I_COS grupė suvartojo šiek tiek mažiau nei N_COS grupė. Didelis kalorijų skaičius, kurį suvartoja I_COS grupė prieigos dienomis atsirado dėl COS vartojimo: 5 savaičių pabaigoje I_COS grupė suvartojo per 90 minučių šiek tiek daugiau nei pusę COS kiekio nei C_COS grupė suvartojo per visą dieną (15 prieigos dieną: I_COS: sunaudota 54.2 ± 4.0 kCal COS; C_COS: suvartota 97.7 ± 5.7 kCal COS). Dėl šių padarinių atsirado „pjūklo danties“ bendras suvartojamų kalorijų modelis per dienas I_COS grupė (2B). Pastarąjį poveikį taip pat galima pastebėti 2C (I_COS grupės maisto vartojimas prieš persivalgymą buvo mažesnis nei N_COS grupė). Šie rezultatai sutampa su kitų žmonių, naudojančių protrūkį prieigą prie kieto riebaus maisto, kaip graužikų persivalgymo elgesio modelį, išvadas.5, 10, 11, 16, 41, 42].

Svarbu tai, kad šis maitinimo modelis nebuvo pastebėtas I_CS žiurkėms, kurios turėjo prieigą prie mažesnio riebumo grietinėlės/cukraus tirpalo, o ne COS emulsijos: jų kasdieniniam valgymui įtakos neturėjo tai, ar žiurkėms buvo suteikta CS sesija (2D, F pav). Be to, „pjūklo danties“ kalorijų suvartojimo modelis buvo daug mažiau ryškus I._CS žiurkėmis nei I_COS žiurkės (palyginti 2E su 2B). Taigi, su pertrūkiais prieiga prie COS, bet ne su CS, buvo pastebėtas persivalgymo vartojimo modelis.

Nors žiurkių kūno svoris visose grupėse padidėjo per 5 savaites, C_COS grupės svoris padidėjo greičiau nei kitų grupių (3A). Stebėtina, kad nepaisant prieigos prie COS 3 dienas per savaitę, I_COS grupė nepriaugo daugiau svorio nei N_COS grupė (3A). I_COS Iš pažiūros normalus žiurkių kūno svorio reguliavimas gali būti susijęs su sumažėjusiu čiaudo vartojimu po COS vartojimo.2C): jų svoris dieną prieš patekimą į COS buvo daug didesnis nei dieną po prisijungimo (3B). Priešingai, C_COS ir N_COS grupės priaugo svorio pastoviu tempu (3B). Panašiai, naudojant grietinėlės/cukraus tirpalą, C_CS grupės svoris padidėjo greičiau nei I_CS ir N_CS grupės (3C,D pav). Šie rezultatai atitinka ankstesnius stebėjimus su kietu riebiu maistu [10, 11, 41]. Jie rodo, kad, kaip dažnai būna žmonių persivalgymo sutrikimų atveju [45, 46], besaikios žiurkės gali apriboti savo suvartojimą po to, kai suvartoja daug kaloringo maisto, net ir pakartotinai su pertraukomis gaudamos tokį maistą 5 savaites.

3.2. Vartojimo kursas seanso metu

Kai gaunama prieiga prie labai skanaus skysčio, žiurkės iš pradžių aistringai suvartoja mažiau, nes suvartota maistinė medžiaga (ir su ja susijęs sąlyginis skonio stimulas) suaktyvina sotumo mechanizmus.34]. Todėl paklausėme, ar COS vartojimas buvo panašus. Kaip parodyta 90 min. seanso laižymo laiko eigos diagramose (5 min. dėžėse), I_COS grupėje labai padidėjo bendras laižymosi dažnis per pirmąsias ~ 20 seanso minučių 5 savaitę, palyginti su 1 savaite (4A, B). I_COS žiurkių laižymo dažnis grįžo į žemą, atsitiktinį lygį maždaug po 30 minučių nuo seanso pradžios (4A, B), atitinka ankstesnius pastebėjimus [34]. Dėl dramatiško laižymo dažnio skirtumo pradinėse ir vėlesnėse prieigos seanso dalyse, tolesnėse laižymo modelių analizėse mes atskirai tiriame suvartojimą pirmąjį seanso ketvirtį (22.5 min.) ir paskutinius tris ketvirčius (68.5 min.).

 

4 pav

COS suvartojimo padidėjimas per kelias savaites, kai prieiga buvo su pertrūkiais, buvo sutelkta per pirmąjį sesijos ketvirtį

Kaip ir tikėtasi, pirmąjį sesijos ketvirtį išaugęs suvartojimas buvo daug mažesnis C_COS grupė (4B). Iš tiesų, šiek tiek stebina tai, kad C_COS žiurkės iš viso gėrė daug COS likometro kamerose, nes COS buvo laisvai prieinamas jų namų narvuose. Viena iš galimybių yra ta, kad šviežias COS buvo vartojamas daugiau nei COS namų narve, kuris buvo iki 24 valandų senumo. Tačiau naivi 6 žiurkių grupė, kuriai per 1 val. dviejų butelių pasirinkimo testus namų narve buvo duota šviežia COS ir vienadienė COS, nerodė pirmenybės šviežiam COS (šviežia COS: 2.9 ± 0.9 ml; vienadienių COS: 6.0 ± 1.8). t testas p > 0.05). Todėl padidėjęs pradinis COS suvartojimas C_COS grupė gali būti elgesio suaktyvinimo funkcija po patalpinimo į santykinai naują (palyginti su namų narvu) licometro kamerą.

3.3. Latencija iki pirmojo laižymo ir pradinis laižymo dažnis

Palaipsniui didėjantis suvartojimas per nepertraukiamą prieigą prie COS (Pav 1) gali būti iš dalies dėl padidėjusios motyvacijos vartoti ir (arba) dėl padidėjusio skonio nulemto vartojimo. Norėdami patikrinti šias hipotezes, ištyrėme pirmojo seanso laižymo delsą (motyvacijos indeksą) ir pradinį laižymo dažnį (manoma, kad tai atspindi skonį, lemiamą vartojimą).35-37]. Per nuoseklius prieigos seansus I_COS grupės delsa pradėti COS vartojimą tapo trumpesnė, o C_COS grupės delsa nepakito (5A). Be to, pirmojo laižymo delsa nuolat buvo žymiai ilgesnė C_COS grupė nei I_COS grupė (5A). Tačiau pažymėtina, kad pradinis laižymo dažnis per seansus padidėjo abiejose I_COS ir C_COS žiurkėms, ir paprastai tam tikrą dieną grupėse reikšmingai nesiskyrė (5C). Taigi, skirtingai nei motyvacijos matas, nuo skonio priklausomo vartojimo matas abiejose grupėse didėjo lygiagrečiai.

Kaip ir tikėtasi, atsižvelgiant į tai, kad I metais vartojimas nepadidėjo_CS grupė, nei aš_CS nei C_CS grupėse reikšmingai sumažėjo pirmojo apsilaižymo latentinis laikotarpis (5B) arba pradinio laižymo dažnio padidėjimas (5D pav). Apibendrinant galima pasakyti, kad dėl pertrūkių prieiga prie COS (bet ne CS) akivaizdžiai padidėjo motyvacija ir skonis, o tai lydėjo COS vartojimo padidėjimą.

3.4. Kadrų skaičius ir ilgis

Žiurkės laižo stereotipiniu ~ 7 Hz dažniu. Valgio metu laižymo pliūpsnius tokiu greičiu nutraukia pauzės, kurios paprastai yra > 1 sek.36, 37]. Nuo antrosios įėjimo dienos iki penkioliktos, laižymo dažnis I_COS grupė išliko stabili (6.7 ± 0.2 vs 6.9 ± 0.1 Hz, p > 0.05), o tai rodo, kad šioje grupėje pastebimas laipsniškas vartojimo didėjimas (1A).

Plyšių skaičiui prieinant prie skanaus skysčio įtakoja motyvacija vartoti, o pliūpsnių trukmę labiau įtakoja skysčio skonis.36, 37]. Remdamasis šia idėja, C_COS žiurkių sprogimų skaičius paprastai buvo mažesnis nei aš_COS žiurkės (6A,C pav). I_COS grupėje, serijų skaičius labai priklausė nuo prieigos seanso laiko: pirmąjį ketvirtį serijų skaičius labai padidėjo per 5 prieigos savaites, o per pastaruosius tris ketvirčius jis turėjo tendenciją mažėti (6A,C pav). Priešingai, I_CS žiurkės, kurių vartojimas nepadidėjo (1B), neparodė serijų skaičiaus pokyčių nei ankstyvoje, nei vėlyvoje fazėje (6B,D pav).

Skirtingai nuo serijos skaičiaus, serijos trukmė reikšmingai nesiskyrė tarp I_COS ir C_COS grupės bet kurią dieną (6E). Iš tiesų, tiek I_COS ir C_COS grupėse, serijos trukmė pailgėjo per 5 su pertraukomis pasiekiamas savaites (6E). Šių eskalavimo efektų nebuvo I_CS ir C_CS žiurkės (6F).

Apibendrinant, rezultatai rodo, kad per kelias savaites trukusią prieigą prie COS palaipsniui didėjo suvartojimas kiekvienos prieigos seanso pradžioje. Šį padidėjimą lydėjo trumpesnis vartojimo pradžios vėlavimas ir didesnis laižymo pliūpsnių skaičius (atsižvelgiant į padidėjusią motyvaciją vartoti), taip pat didesnis pradinis laižymo dažnis ir ilgesnė srovių trukmė (atsižvelgiant į padidėjusį skonį lemiantį vartojimą). Nepastebėta nei laipsniško vartojimo didėjančio, nei motyvacijos ir skonio rodiklių padidėjimo, kai žiurkėms buvo duodama CS, o ne COS. Apibendrinant galima teigti, kad į persivalgymą panašų vartojimą bent iš dalies lėmė laipsniškas motyvacijos ir skonio padidėjimas, nei tikėtasi. nuo pradinio mokymosi ir neofobijos sumažėjimo.

4.1. Santrauka

Besaikis valgymas pasireiškia atskirais epizodais (2 valandas ar mažiau), kai greitai ir besaikiu maistu suvartojama ne dėl alkio ar medžiagų apykaitos poreikio.2]. Norint ištirti persivalgymo poveikį nerviniams procesams, reguliuojantiems maisto suvartojimą, ankstesniuose tyrimuose su gyvūnais buvo naudojamasi periodiškai prieiga prie daug kalorijų turinčio maisto, ypač riebalų.5, 10, 11, 16, 41], nes žmonės, kenčiantys nuo persivalgymo sutrikimo ar bulimijos, paprastai valgo saldų riebų maistą [47-49]. Maistinių medžiagų turinčio maisto ir gėrimų suvartojimą lemia trys tarpusavyje susiję procesai: motyvacija, skonis ir sotumas. Norint ištirti nervinius mechanizmus, kuriais grindžiamas besaikis vartojimas, naudojant invazinius metodus (pvz., intrakranijinę vaistų mikroinjekciją), būtų naudinga šiuos procesus ištirti atskirai. Viena iš būdų tai padaryti yra ištirti vartojimo modelį laiko atžvilgiu, o tai labai palengvina skysto gėrimo tiekimas per licometrą. Todėl sukūrėme nepertraukiamo didelio riebumo skysčių vartojimo besaikio vartojimo modelį, pagrįstą Corwin ir jo kolegų iš pradžių sukurtais besaikio skysčių, naudojančių kietus riebalus, modeliais [11, 12], o vėliau išplėstas ir kietiems riebalų/cukraus mišiniams [10, 13, 16]. Kadangi ingestantą sudaro nebrangūs, plačiai prieinami ingredientai (prekybos centre grietinėlė, kukurūzų aliejus ir cukrus) ir jo paruošimui nereikia specialios įrangos, mūsų modelis gali būti naudojamas vėlesniuose eksperimentuose, siekiant gauti įrodymų apie nervinių manipuliacijų poveikį sotumui, motyvacijai ir skonis besaikio vartojimo metu.

4.2. Vartojimo modelis ir ryšys su ankstesniais pertraukiamos prieigos besaikio modeliais

Mūsų rezultatai yra panašūs į tuos, kurie buvo nustatyti anksčiau žiurkėms, kurioms su pertrūkiais buvo suteikta galimybė gauti kieto saldaus riebaus maisto. Visų pirma, kai žiurkėms su pertrūkiais buvo suteikta prieiga prie COS (grietinėlė / aliejus / cukrus, I_COS grupė), suvartojimas prieigos laikotarpiu laipsniškai didėjo per kelias prieigos dienas, atsižvelgiant į ankstesnius stebėjimus [5-12]. Be to, I_COS žiurkėms pasireiškė „pjūklo danties“ suvartojamų kalorijų modelis, o po prieigos prie COS sumažėjo maisto suvartojimas. Šie poveikiai buvo pastebėti nepaisant procedūrinių skirtumų nuo ankstesnių modelių, įskaitant pertraukiamą prieigą prie namų narvelio prie kaloringų maisto produktų ir tuo pačiu metu galimą maistą. tyrimai, bet ne mūsų (kuriuose COS prieiga buvo suteikta atskirose kamerose). Įdomu tai, kad žiurkių, turinčių nuolatinę prieigą prie COS, kalorijų suvartojimas per 24 valandas pasiekė lygius, panašius į tą, kuris buvo stebimas per XNUMX valandas, o maisto suvartojimas po prieigos prie COS buvo sumažintas iki mažesnio lygio, kuris buvo nustatytas žiurkėms, kurioms COS visiškai nebuvo prieinama. Šie rezultatai atitinka ankstesnius duomenis naudojant kietą riebų maistą [5, 10, 13, 50]. Dideli suvartojamų kalorijų svyravimai sukėlė lygiagrečius svorio svyravimus, todėl I_COS žiurkės priaugo svorio ne greičiau nei žiurkės, kurios turėjo prieigą tik prie čiaudo. Apibendrinant, šie rezultatai atspindi ankstesnius stebėjimus naudojant su pertrūkiais prieigą prie kieto riebaus maisto [5, 10-13, 50] ir rodo, kad pertraukiamas prieiga prie skysto COS sukelia persivalgymo elgesį, kuris yra nepaprastai panašus į tą, kurį sukelia kietas riebus maistas.

Stebėtina, kad žiurkėms su pertrūkiais buvo suteikta prieiga prie mažiau kaloringo grietinėlės ir cukraus tirpalo (CS; I_CS grupė) neparodė nei laipsniško vartojimo didėjimo, nei ryškaus pjūklo danties modelio, pastebėto žiurkėms, vartojusiems COS. Šie rezultatai rodo, kad norint vystytis į besaikį elgesį pagal šį grafiką, būtinas didelis riebalų ir (arba) kalorijų kiekis. Tačiau rezultatai neatmeta galimybės, kad persivalgymo vystymasis priklauso nuo laižymo efektyvumo (skysčio kiekio, gauto per laižymą), kuris buvo didesnis COS nei CS. Šio skirtumo priežastis nežinoma, bet greičiausiai ji susijusi su skirtingomis fizinėmis COS ir CS savybėmis. Didesnis kalorijų suvartojimas, kurį skatina didesnis laižymo efektyvumas, gali prisidėti prie vartojimo padidėjimo I._COS grupė. Be to, kukurūzų aliejuje esantys specifiniai riebalų tipai, kaip ir riebalų forma (emulsija), gali prisidėti prie žiurkių jautrumo persivalgyti. Iš tiesų, žiurkės kukurūzų aliejaus emulsijas vartoja dar labiau nei 100 % kukurūzų aliejaus, kukurūzų aliejaus emulsijos sunaudoja panašų kiekį kaip ir kietieji riebalai, o saldintos kukurūzų aliejaus emulsijos – dar daugiau.51-53]. Taigi, kadangi daugelyje ankstesnių persivalgymo tyrimų buvo naudojamas kietų riebalų ir cukraus mišinys [5, 16], emulsuoto kukurūzų aliejaus buvimas gali būti lemiamas veiksnys, suteikiantis COS, bet ne CS, gebėjimą sukelti besaikį vartojimą. Šią hipotezę būtų galima patikrinti nustatant, ar saldintos kukurūzų aliejaus/vandens emulsijos (be grietinėlės) sukelia persivalgymą, panašų į COS sukeliamą elgesį. Tačiau net jei taip būtų, COS gali būti geriau naudoti būsimuose eksperimentuose, nes paruošimas Kukurūzų aliejaus/vandens emulsijų, turinčių ilgalaikį stabilumą, gamybai reikalinga brangi įranga (mikrofluidizatorius), o COS paruošimui nereikia sudėtingesnio aparato nei vielos plaktuvas.

Kadangi mūsų COS persivalgymo modelis suteikia žiurkėms galimybę tris dienas per savaitę valgyti daug riebalų turinčių maisto produktų, per ateinančias 24 valandas galėjome pastebėti, kad maistas sumažėjo, o per kitas 24 valandas jis atsigavo. Chow suvartojimas per 24 valandas po pertrūkių prieigos prie COS (bet ne CS) buvo žymiai mažesnis nei 24 valandas kontrolinės grupės, neturinčios prieigos prie COS (N_COS grupė), atitinka ankstesnius pranešimus apie riebų ir saldžiai riebų maistą [10, 12, 13]. Kartu su mūsų išvadomis šie rezultatai rodo, kad besaikis vartojimas suaktyvina ilgalaikį sotumo procesą, kuris riboja vartojimą valandomis po labai trumpo vartojimo epizodo prieigos laikotarpiu. Šie rezultatai yra intriguojantys, atsižvelgiant į išvadas, kad žiurkės per daug suvartoja riebų maistą, palyginti su daug angliavandenių turinčiu vienodo kalorijų tankio maistu.28, 29, 54-58]. Intragastrinis išankstinis riebalų apkrovimas sumažina vėlesnio vartojimo slopinimą nei išankstinis apkrovimas naudojant izokalorinę angliavandenių dozę [29], ir šis poveikis trunka ilgai (iki vienos dienos) [28]. Taigi, žiurkės iš dalies suvartoja per daug riebalų, nes riebalai yra mažiau veiksmingi (vienai kalorijai) suaktyvinant postingestive sotumo mechanizmus. Šie tyrimai rodo, kad cukraus kiekis COS ir kituose riebalų/cukraus mišiniuose, naudojamuose nepertraukiamos prieigos procedūrose, gali labai prisidėti prie valgymo slopinimo po persivalgymo. Norint išsiaiškinti skirtingą riebalų ir cukraus vaidmenį ilgalaikėje sotumo jausme, kurį sukelia persivalgymas, reikia atlikti tolesnius tyrimus, kurie tiesiogiai palygintų cukraus ir riebalų turinčių maisto produktų poveikį.

COS vartojimas palaipsniui didėjo per pirmąsias 8 dienas (2.5 savaitės), kai buvo naudojamasi su pertrūkiais. Pažymėtina, kad žiurkėms, kurioms buvo suteikta pertraukiama prieiga prie CS, nebuvo panašaus laipsniško padidėjimo, nors tiek COS, tiek CS pertraukiamos prieigos grupės žymiai padidino suvartojimą nuo pirmosios iki antrosios prieigos dienos. Kadangi abiejų grupių žiurkės turi išmokti prieiti prie likometro ir įveikti pradinę neofobiją, pradinis (nuo 1 iki 2 dienos) suvartojimo padidėjimas gali būti siejamas su šiais procesais. Tačiau toliau laipsniškai didėjant I_COS grupė nesuderinama su šiais procesais, nes tai nebuvo pastebėta I_CS grupė. Buvo pranešta apie panašų laipsnišką padidėjimą žiurkėms, vartojusioms saldų ir (arba) riebų maistą arba skysčius 3 dienas per savaitę arba kasdien su pertrūkiais.9-12, 14, 59]. Šie rezultatai labai skiriasi nuo rezultatų, gautų iš žiurkių, turinčių nuolatinę prieigą prie didelio kaloringumo maisto: kasdienis suvartojimas palaipsniui mažėja nuo pradinio piko.5, 6, 10], kaip ir mūsų tyrime (Pav 3), arba išlieka pastovus [12, 14]. Taigi perteklinį suvartojimą per pertraukiamą prieigą iš dalies lemia vartojimo padidėjimas, kurio nėra neribojamiems subjektams; Kadangi šis poveikis priklauso nuo suvartojamo maisto riebalų ir (arba) kalorijų kiekio, mūsų rezultatai rodo, kad padidėjimas nėra paprasta mokymosi vartoti ar neofobijos įveikimo pasekmė. Atvirkščiai, palaipsniui didėjantį suvartojimą greičiausiai lemia kiti procesai, atsirandantys dėl fizinių ir (arba) maistinių COS savybių, išskiriančių jį nuo CS.

Ankstesni žiurkių persivalgymo modeliai naudojo kasdienę protarpinę prieigą prie riebaus maisto kaip kontrolę 3 dienas per savaitę „persivalgymo“ prieigai [6, 11, 12, 15, 16, 40, 42, 60-63]. Tačiau kituose tyrimuose buvo naudojama kasdienė su pertraukomis prieiga prie modelio persivalgymo [9, 10, 13, 14, 35, 59]; Pažymėtina, kad kaloringų gėrimų vartojimas dažnai didėja per kasdienius prieigos laikotarpius, nors šis padidėjimas gali būti ne toks ryškus nei vartojant 3 dienas per savaitę [6]. Taigi kyla painiavos dėl to, kas yra idealūs persileidimo ir valdymo prieigos protokolai. Mūsų rezultatai suteikia galimą sprendimą: jie rodo, kad kontrolinė grupė, kuriai suteikta protarpinė prieiga prie CS pagal tą patį tvarkaraštį, kaip ir COS persivalgymo grupė, nerodo padidėjusio vartojimo. Patyręs I_COS žiurkės per prieigos laikotarpius suvartoja daugiau kalorijų nei aš_CS žiurkėms, todėl šių grupių palyginimas leidžia daryti išvadą, kad I_COS žiurkės atitinka operatyvinį besaikio valgymo apibrėžimą (ribotą laikotarpį suvartoja daugiau kalorijų, nei per panašų laikotarpį suvartoja nevalgius). Taigi, COS ir CS (arba, apskritai, daug ir mažai kalorijų arba daug ir mažai riebalų turinčių skysčių) naudojimas gali būti naudingas tolesniems eksperimentams, kai reikia kontroliuoti besaikį vartojimą. Šis modelis turi papildomą pranašumą, kad jis atspindi žmonių besaikį valgymą, nes žmonės valgo riebų ir kaloringą maistą, o nevalgymas paprastai apima mažiau kalorijų turinčio maisto vartojimą. Kita vertus, persivalgę žmonės vartoja kietą ir pusiau kietą maistą, o COS ir CS yra skysčiai.

4.3. Motyvacija, skonis ir sotumas besaikio vartojimo metu

Apskritai, trijų skirtingų procesų pokyčiai gali lemti laipsnišką vartojimo padidėjimą per pertraukiamas prieigos dienas: (1) vartojimas gali padidėti dėl skonio; (2) gali padidėti motyvacija pradėti vartoti; ir (arba) (3) sotumo mechanizmų veiksmingumas gali sumažėti, todėl pailgėja „valgymas“ prieigos laikotarpiu. Mūsų rezultatai pateikia įtikinamų įrodymų, kad dėl skonio priklausomas vartojimas ir motyvacija vartoti didėja. Visų pirma, laipsniškas COS vartojimo padidėjimas per kelias dienas, kai buvo su pertrūkiais prieiga, buvo sumažėjęs pirmojo laižymo delsimas, didesnis laižymo pliūpsnių skaičius, padidėjęs laižymo greitis pirmąją prieigos minutę ir ilgesni laižymo pliūpsniai. Pirmieji du laikomi motyvacijos rodikliais, o pastarieji du – skonio rodikliais [36, 37, 64]. Kiekvienas iš jų per dienas labai padidėjo, nes vartojimas smarkiai išaugo. Kadangi kiekvienas iš šių laižymo modelio pokyčių padidintų vartojimą, darome išvadą, kad išaugęs vartojimas per prieigos seansus yra bent iš dalies šių struktūrinių pokyčių, taigi ir padidėjusios motyvacijos bei skonio pasekmė. Be to, šis motyvacijos ir skonio padidėjimas nebuvo pastebėtas I_CS grupėje, kuri neparodė padidėjusio vartojimo. Todėl padidėjusi motyvacija ir skonis greičiausiai yra didelio COS kalorijų ir (arba) riebalų kiekio pasekmė, palyginti su CS.

Kas galėtų lemti pastebėtą laipsnišką motyvacijos ir skonio didėjimą? Motyvacija nėra išskirtinis smegenų procesas, o psichologinis konstruktas, atspindintis kelių nervinių mechanizmų veiklą. Pavyzdžiui, alkis skatina motyvaciją valgyti, tačiau tokį patį motyvuotą elgesį gali sukelti stimulas, susijęs su maistu, net ir tiems, kurie nėra alkani, kaip ir valgant sąlyginį maistą.65]. Specifinis nervinis mechanizmas, lemiantis padidėjusį persivalgymų žiurkių motyvaciją, nežinomas. Neabejotinai įmanoma, kad dalyvauja kondicionavimo procesas, kai dirgikliai prieigos kameroje susiejami su COS ir dėl to vėlesnėse sesijose sukelia motyvaciją ieškoti COS, kreiptis į jį ir pradėti jį vartoti, kai tik gyvūnas patenka į kamera. Taigi, palaipsniui didėjanti motyvacija, kurią demonstruoja I_COS žiurkės gali būti besąlyginio stimulo (COS) stiprinimo jėgos funkcija; CS sprendimas gali būti nepakankamai stiprinamas, kad padidėtų vartojimas po pradinio mokymosi.

Stimulo sukeltas požiūris dažnai priklauso nuo dopamino projekcijos į nucleus accumbens [66-69], o besaikis sacharozės vartojimas lydi tarpląstelinio dopamino padidėjimą kūnuose [19]. Be to, į besaikį vartojimą panašus vartojimas sukelia keletą ilgalaikių pakitimų accumbens dopamino sistemoje, įskaitant padidėjusį D1 receptorių ir dopamino transporterio ekspresiją bei sumažėjusią D2 receptorių ekspresiją.8], o tai rodo, kad ilgalaikiai dopamino aktyvumo pokyčiai yra susiję su persivalgymu. Iš tiesų, žiurkėms, kurioms buvo suteikta ilgalaikė ir pertraukiama prieiga prie riebalų, buvo didesni lūžio taškai laipsniško riebalų stiprinimo santykio tvarkaraštyje.70]. Šis pastebėjimas ne tik tvirtai patvirtina mūsų išvadą, kad persivalgius sustiprėja motyvacija valgyti skanų maistą, bet ir pateikia papildomų įrodymų, kad mezolimbinis dopamino kiekis yra susijęs, nes progresinio santykio užduočių atlikimas priklauso nuo accumbens dopamino.71]. Tačiau reikia atlikti tolesnius tyrimus, siekiant nustatyti, ar yra priežastinis ryšys tarp dopamino aktyvumo pilvo srityje ir padidėjusios motyvacijos vartoti, kai atsiranda persivalgymas.

Be elgsenos pokyčių, atitinkančių padidėjusią motyvaciją, mes taip pat pastebėjome poveikį, kurį lengviausia paaiškinti dėl skonio sukelto vartojimo padidėjimo (padidėjęs pradinis laižymo dažnis ir ilgesnis laižymo pliūpsnio ilgis). Daugybė smegenų struktūrų yra susijusios su skoniais skatinamu vartojimu, įskaitant nucleus accumbens, pavienio trakto branduolį, migdolinį kūną, ventralinį blyškumą, ventralinę tegmentinę sritį ir šoninį pagumburį.72-74]. Visų pirma, μ opioidų receptoriai, ypač akubenuose [44, 75-78] gali prisidėti prie skonio priklausomo vartojimo. Įdomu tai, kad į persivalgymą panašus vartojimas yra susijęs su sureguliuotais μ receptoriais pilvo srityje [8], o tai rodo, kad padidėjusi opioiderginė neurotransmisija gali būti atsakinga už padidėjusį skonį, kurį sukelia vartojimas, pastebėtas per besaikį prieigą. Šios hipotezės laukia tolesnių bandymų su invazinėmis opioidų receptorių funkcijos manipuliacijomis persivalgusiems gyvūnams.

Įdomu tai, kad skonio rodikliai padidėjo ne tik I_COS žiurkės, bet C_COS grupė taip pat. Todėl šie rezultatai leidžia manyti, kad ilgesnė prieiga prie COS, o ne prieigos pertrūkis, padidina skonį dėl vartojimo. Vienas skirtumas tarp C_COS ir aš_COS grupės yra tai, kad C_COS žiurkės priaugo svorio, kaip ir būtų galima tikėtis atsižvelgiant į tai ad libitum galimybė valgyti daug riebios dietos sukelia nutukimą [41, 79, 80]. Taigi, mūsų rezultatai rodo, kad nutukusiems asmenims gali padidėti saldaus riebaus maisto vartojimas, kurį lemia skonis. Ankstesni tyrimai parodė sudėtingą nutukimo poveikį skoniui. Vienu atveju mažesnė riebalų ir sacharozės koncentracija nutukusioms žiurkėms buvo mažiau skani nei liesoms žiurkėms, o didesnės koncentracijos buvo šiek tiek skanesnės [79]. Kitame tyrime nutukimas visiškai neturėjo įtakos sacharozės skoningumui (spudžio dydžiui).81], o dar kitoje, nutukusių žiurkių padermės skonio rodikliai sumažėjo [82]. Svarbus skirtumas tarp mūsų tyrimo ir ankstesnių tyrimų yra tas, kad mes išbandėme to paties riebaus maisto, kurį gyvūnai turėjo 24 valandas nepertraukiamai prieiti, skonį (ty išbandėme dietos, kuri sukėlė nutukimą, skonį), o kiti tyrimai parodė. gyvūnams skirtas riebus maistas namų narve, tačiau patikrintas aliejaus arba sacharozės tirpalų skonis. Šios konstrukcijos gali sukelti neigiamą kontrasto poveikį, kuris gali neleisti aptikti padidėjusio skonio mechanizmo. Eksperimentiniai modeliai, kurie sumažina kontrasto poveikį, turėtų būti naudojami siekiant plačiau patikrinti hipotezę, kad nutukusių asmenų vartojimas sustiprėja dėl skonio.

Pastebėjimas, kad žiurkėms, kurioms buvo suteikta nuolatinė prieiga prie COS, suvartojimas padidėjo dėl skonio, tačiau sumažėjo bendras suvartojamų kalorijų kiekis (ir COS suvartojimas) nuo pirmos dienos.Pav 2). Dėl to kyla klausimas, ar sotumo mechanizmai yra veiksmingesni patyrusiems žmonėms, nei žiurkėms, nesirgiančioms COS.^th pertraukos prieigos savaitę, I_COS žiurkių suvartojimas smarkiai sumažėjo per pirmąsias 20–30 minučių nuo prieigos laikotarpio pradžios. Šį sumažėjimą greičiausiai lėmė sąlyginis ir besąlyginis sotumas [34], ir įrodo, kad žiurkių, sergančių bulimija, sotumo mechanizmai yra stiprūs.83]. Nors nuosmukio tempas 5 savaitę yra greitesnis nei ankstesnėmis savaitėmis (ypač 1 savaitę), šiai priemonei įtakos gali turėti skirtingi pradinio vartojimo dažniai ankstyvose ir vėlyvose sesijose (tai yra motyvacijos ir skonio funkcijos). Todėl norint įvertinti, ar sotumo mechanizmų skirtumai gali prisidėti prie laipsniško vartojimo padidėjimo per pertraukiamas prieigos dienas, būtinas papildomas darbas, galbūt naudojant intragastrinį išankstinį įkrovimą. Nepaisant to, ryškus vartojimo mažėjimas sesijos metu gali būti naudojamas būsimuose tyrimuose kaip sotumo matas, kai tiriamas nervinių manipuliacijų poveikis nustatytam besaikiam vartojimui.

4.4. Išvados

Mes parodome, kad saldus riebus skystis gali būti naudojamas žiurkėms, kad būtų skatinamas persivalgymas, panašus į tą, kuris anksčiau buvo pastebėtas nepertraukiamos prieigos modeliuose, naudojant kietą riebų maistą. Skysto ingestanto naudojimas yra naudingas keliais būdais. Pirma, mažiau kalorijų turintis skystis gali būti duodamas pagal tą patį prieigos grafiką kaip ir besaikio vartojimo kontrolės priemonė. Antra, laikinasis tikslumas, suteikiamas matuojant suvartojimą likometrais, palengvins tolesnius persivalgymo elgesio tyrimus, ypač naudojant besielgiančių gyvūnų elektrofiziologiją. Galiausiai, naudojant skystą, daug riebalų turintį gėrimą, galima atlikti laižymo mikrostruktūros analizę, kuri gali būti naudojama norint surinkti įrodymus, patvirtinančius arba paneigiančius persivalgiusių žiurkių sotumo, motyvacijos ir skonio skirtumus po invazinių nervinių manipuliacijų (pvz., vietinės neuroaktyvių junginių mikroinjekcijų). Čia mes naudojame mikrostruktūrinę analizę, kad parodytume, kad laipsniškas vartojimo padidėjimas nuosekliais prieigos laikotarpiais bent iš dalies yra susijęs su didėjančia motyvacija pradėti vartoti ir didėjantį skonį skatinantį vartojimą. Tolesnis šių procesų tyrimas COS persivalgymo žiurkėse padės geriau suprasti nervinius mechanizmus, kuriais grindžiamas besaikis vartojimas.

Dėkojame dr. Gary Schwartz ir Nicole Avena už naudingas diskusijas, Dr. Schwartz ir Niujorko nutukimo mitybos tyrimų centro gyvūnų energijos balanso fenotipų nustatymo centras už operantinių kamerų naudojimą ir Niacet Corporation už dosnią natrio stearoilo laktilato dovaną. Šis tyrimas buvo paremtas Klarmano šeimos fondo, NARSAD ir NIH (MH092757) dotacijomis SMN ir Hildos ir Prestono Daviso fondo stipendija SL.

Leidėjo atsisakymas: Tai PDF failas iš neregistruoto rankraščio, kuris buvo priimtas paskelbti. Kaip paslauga mūsų klientams teikiame šią ankstyvą rankraščio versiją. Rankraštis bus kopijuojamas, užrašomas ir peržiūrimas gautas įrodymas, kol jis bus paskelbtas galutinėje cituotojoje formoje. Atkreipkite dėmesį, kad gamybos proceso metu gali būti aptiktos klaidos, kurios gali turėti įtakos turiniui, ir visi su žurnalu susiję teisiniai atsakymai.