Grelino vaidmuo atlygio už maistą atveju: ghrelino poveikis sacharozės savarankiškam vartojimui ir mezolimbinės dopamino ir acetilcholino receptorių geno ekspresijai (2012)

Eiti į:

Abstraktus

Sprendimui valgyti didelę įtaką daro ne homeostaziniai veiksniai, tokie kaip maisto skonis. Iš tiesų, naudinga ir motyvuojanti maisto vertė gali nusverti homeostatinius signalus, todėl didėja vartojimas, taigi ir nutukimas. Grelinas, iš žarnyno gaunamas oreksigeninis hormonas, vaidina svarbų vaidmenį maitinant homeostatiniu būdu. Tačiau pastaruoju metu jis pasirodė kaip stiprus mezolimbinio dopaminerginio atlygio moduliatorius, o tai rodo grelino vaidmenį maisto atlygyje. Čia mes siekėme nustatyti, ar grelinas ir jo receptoriai yra svarbūs skatinant natūralų cukraus atlygį, nagrinėdami grelino receptorių (GHS-R1A) stimuliavimo ir sacharozės progresuojančio santykio operanto kondicionavimo blokavimo vaidmenį – procedūrą, naudojamą motyvaciniam potraukiui įvertinti. gauti atlygį. Periferiškai ir centralizuotai vartojamas grelinas žymiai padidino operantinį atsaką, taigi ir paskatą sacharozei. Naudodami GHS-R1A antagonistą JMV2959, parodėme, kad GHS-R1A signalizacijos blokavimas žymiai sumažino operantinį atsaką į sacharozę. Toliau tyrėme grelino poveikį pagrindiniams mezolimbiniams atlygio mazgams, ventralinei tegmentinei sričiai (VTA) ir branduoliui (NAcc), įvertindami lėtinio centrinio gydymo grelinu poveikį genų, koduojančių pagrindinius atlygio neurotransmiterių receptorius, būtent dopamino ir acetilcholino, ekspresijai. Gydymas ghrelinu buvo susijęs su padidėjusia dopamino receptorių D5 ir acetilcholino receptorių nAChRβ2 geno ekspresija VTA ir sumažėjusia D1, D3, D5 ir nAChRα3 ekspresija NAcc. Mūsų duomenys rodo, kad grelinas vaidina svarbų vaidmenį motyvuojant ir stiprinant sacharozę ir daro įtaką dopamino ir acetilcholino genų ekspresijai mezolimbinėje atlygio grandinėje. Šie atradimai rodo, kad grelino antagonistai turi terapinį potencialą gydant nutukimą ir slopina pernelyg didelį saldaus maisto vartojimą.

Raktiniai žodžiai: Acetilcholinas, dopaminas, maisto motyvacija, grelinas, GHS-R1A, operantinis kondicionavimas

ĮVADAS

Nustatyta, kad cirkuliuojantis hormonas grelinas vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant energijos balansą.Kojima et al. 1999; Nogueiras, Tschöp ir Zigman 2008 m). Išsiskiria daugiausia iš skrandžio (Dornonville de la Cour et al. 2001), grelinas sukelia stiprų oreksigeninį poveikį graužikams ir žmonėms (traškutis et al. 2000, 2001) stimuliuojant centrinės nervų sistemos (CNS) receptorius (Salomėjaet al. 2009a), augimo hormono sekreciją skatinantis receptorius (GHS-R1A) (Howard et al. 1996). Iš tiesų, grelinas nukreiptas į pagumburio ir smegenų kamieno grandines, susijusias su maitinimu ir energijos homeostaze (Dickson, Leng ir Robinson 1993 m; bailey et al. 2000; Hewsonas ir Dicksonas 2000 m; Faulconbridge et al. 2003, 2008). Tačiau šėrimo elgesį skatina ne tik būtinybė papildyti maistinėmis medžiagomis (ty būtinybė atkurti homeostazę); skanus riebus ir (arba) cukraus turintis maistas gali paskatinti jų vartojimą, nepaisant sotumo (Zheng et al. 2009). Per didelis skanių natūralių medžiagų, tokių kaip cukrus, vartojimas yra pagrindinis veiksnys, skatinantis dabartinę nutukimo epidemiją. Dar reikia nustatyti, ar centrinė grelino signalizacijos sistema yra svarbi nehomeostatiniam cukraus vartojimui, tokiu būdu suteikiant potencialiai svarbų terapinį tikslą, kad būtų sumažintas kaloringų, skanių ir naudingų saldžių maisto produktų suvartojimas.

Įkvėptas naujausių išvadų, kad grelinas sąveikauja su mezolimbinėmis sritimis, susijusiomis su nehomeostatiniu / atlygio maitinimu (Jerlhagas et al. 2007), siekėme įvertinti grelino ir jo receptorių vaidmenį maisto motyvacijoje ir į tikslą nukreiptame elgesyje už atlygį už sacharozę. Šios mezolimbinės sritys jau seniai buvo priklausomybės nuo narkotikų tyrimų dėmesio centre, nes jos yra pagrindinis daugelio piktnaudžiavimo narkotikais tikslas.Engel 1977 m; Koob 1992). Tikslinis grelino mezolimbinis kelias apima dopamino projekciją iš ventralinės tegmentinės srities (VTA) į nucleus accumbens (NAcc) (Jerlhagas et al. 2006, 2007), būdas, suteikiantis atlygį ir už priklausomybę sukeliančius cheminius vaistus, ir už natūralų atlygį, įskaitant maistą (Koob 1992). Įdomu tai, kad GHS-R1A ekspresuojamas dopaminerginiuose neuronuose (Abizaid et al. 2006), kuris gali turėti tiesioginį grelino poveikį VTA dopamino sistemai. Šiuos imunohistocheminius duomenis papildo besikaupiantys elgesio ir elektrofiziologiniai grelino poveikio VTA įrodymai. Pavyzdžiui, grelino skyrimas VTA viduje padidina VTA dopamino neuronų aktyvumą.Abizaid et al. 2006) ir padidina dopamino išsiskyrimą į NAcc (Jerlhagas et al. 2007). Grelinas taip pat padidina cholinerginio-dopaminerginio ryšio aktyvumą, kuris yra svarbus atlygio kelias. Iš tiesų, atrodo, kad bent dalį grelino poveikio dopaminui lemia cholinerginė sistema (Jerlhagas et al. 2007).

Nors nustatyta, kad grelinas turi stiprų oreksigeninį poveikį, kai maistas yra lengvai prieinamas, kol kas nežinoma, ar grelino oreksigeninį poveikį galima išplėsti, kad jis apimtų motyvacijos keitimą ir sustiprintų natūralių medžiagų, pavyzdžiui, skanaus saldaus maisto, aspektus (ty didina norą ir pastangų/darbo, kurį žmogus nori įdėti, kad gautų saldų skanėstą). Narkotikų nuo priklausomybės motyvaciją ir atlygio veiksmingumą galima įvertinti savarankiško vartojimo, operantinio kondicionavimo modeliu. Operantinis kondicionavimas yra pagrindinė motyvuoto elgesio analizės procedūra, kuri įvertina įgytą ir savanorišką elgesį, nukreiptą į atlygio gavimą. Matuojant darbo kiekį, kurį subjektas nori išleisti, kad gautų atlygį, jis siūlo objektyvų atlygio vertės matą (Hodos 1961). Mezolimbiniai regionai yra labai svarbūs motyvaciniams elgesio aspektams, įskaitant maitinimą, ir aišku, kad grelinas veikia neuronų aktyvumą atitinkamuose mezolimbiniuose regionuose. Tai, kas dar neįrodyta, yra tiesioginis grelino poveikis motyvacijai valgyti daug cukraus turinčio maisto. Pagrindinis mūsų tyrimo tikslas yra ištirti, ar centrinė grelino signalizacijos sistema turi įtakos hedoninėms / motyvacinėms ar teigiamoms atlygio už maistą, kuriame yra daug cukraus, savybėms, ir ar šios sistemos slopinimas, naudojant naują selektyvų GHS-R1A antagonistą JMV2959 (Salomėjaet al. 2009a), gali slopinti motyvaciją įsigyti saldumynų. GHS-R1A antagonistai šiuo metu terapiškai vertinami 2 tipo cukriniu diabetu sergantiems pacientams, nes grelino signalizacijos slopinimas turi teigiamą poveikį gliukozės homeostazei.Saulė et al. 2006), poveikis, kuris taip pat būtų naudingas sumažinus saldaus maisto vartojimą. Keletas įrodymų rodo, kad dopaminerginė ir cholinerginė neurotransmisija vaidina svarbų vaidmenį motyvuotame atlygio elgesyje. Todėl, norėdami toliau apibūdinti grelino poveikį centrinei atlygio grandinei, įvertinome gydymo grelinu poveikį dopamino ir acetilcholino receptorių genų ekspresijos pokyčiams pagrindiniuose atlygio mazguose, VTA ir NAcc, po gydymo grelinu.

METODAI

Gyvūnai

Suaugę Sprague-Dawley žiurkių patinai (200–250 g, Charles River, Vokietija) buvo laikomi 12 valandų šviesos / tamsos ciklu, reguliariai maitinant ir turint vandens. ad libitum, išskyrus atvejus, kai nurodyta kitaip. Visos procedūros su gyvūnais buvo atliekamos gavus etinį leidimą ir vadovaujantis Geteborgo universiteto institucinio gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto gairėmis.

Chirurgija

Elgesio eksperimentams, nukreiptiems į CNS, naudojama trečioji skilvelio kreipiamoji kaniulė (26 gabaritų; Plastics One, Roanoke, VA, JAV; koordinatės: vidurinėje linijoje, 2 mm už bregmos ir 5.5 mm pilvo iki kietosios žarnos mater, injektorius nukreiptas į 7.5 mm ventralinis į kietąją žarną) buvo implantuotas taikant izoflurano nejautrą. Kaniulės buvo pritvirtintos prie kaukolės dantų akrilu ir juvelyro varžtais ir uždarytos obturatoriumi, kaip aprašyta anksčiau (Skibicka, Alhadeff & Grill 2009 m). Kaniulės įdėjimas į trečiąjį skilvelį buvo patikrintas praėjus savaitei po operacijos, matuojant simpatoadrenalinį glikemijos atsaką į centrinę 5-tio-D-gliukozės injekciją [210 µg 2 µl nešiklio (fiziologinio tirpalo)] (Ritter, Slusser ir Stone 1981 m). Šiame įdėjimo tikrinimo protokole, norint įtraukti tiriamąjį, po injekcijos reikėjo bent 100% padidinti pradinį gliukozės kiekį plazmoje. Genų ekspresijos eksperimentui žiurkės buvo anestezuotos (60–75 mg/kg Ketalar ir 0.5 mg/kg Domitor ip; Pfizer, Švedija; Orion Co, Suomija) ir lėtinė intracerebroventrikulinė (ICV) kaniulė (Alzet Brain Infusion Kit II, DURECT Corp, Cupertino, CA, JAV) buvo įterptas į šoninį skilvelį naudojant šias koordinates: 0.6 mm užpakalyje nuo bregmos, 1.4 mm į šoną nuo vidurinės linijos, 2.3 mm atstumu nuo kaukolės. Kaniulė per polietileno kateterį buvo sujungta su osmosiniu mini siurbliu (Alzet Mini-Osmotic Pump Model 2002, Durect, Cupertino, tėkmės greitis, 0.5 µl/val. 14 dienų), implantuotą po oda į gyvūnų nugarą.

Operantinio kondicionavimo modelis

Aparatūra

Operantinio kondicionavimo eksperimentai vyko aštuoniose operantinėse kondicionavimo kamerose, skirtose žiurkėms (30.5, 24.1 × 21.0, 45 × XNUMX, XNUMX cm; Medical-Associates, Džordžija, VT, JAV), kurios buvo patalpintos į garsą slopinamą, silpnai apšviestą spintelę. Kiekvienoje kameroje buvo metalinės grotelės, dvi ištraukiamos svirtys su baltomis lemputėmis virš jų ir maisto granulių dozatorius, galintis tiekti XNUMX mg sacharozės granules (GlaxoSmithKline, Test Diet, Richmond, IN, JAV) į maisto padėklą. Duomenų rinkimas ir apdorojimas buvo kontroliuojamas MED-PC programine įranga (Medical-Associates, Džordžija, VT, JAV).

mokymas

Operantiniam kondicionavimui naudojama procedūra buvo pritaikyta iš (la Fleur et al. 2007) ir (Tracy et al. 2008). Visoms žiurkėms buvo taikoma švelnaus maisto ribojimo paradigma, kurios metu jų pradinis kūno svoris per vieną savaitę buvo palaipsniui sumažintas iki 90%. Žiurkių, turinčių ICV kaniulę, mokymas prasidėjo praėjus savaitei po operacijos. Prieš patalpinant į operacines dėžutes, žiurkės mažiausiai du kartus buvo veikiamos sacharozės granulėmis namų narvo aplinkoje. Tada žiurkės išmoko svirtimis spausti sacharozės granules pagal fiksuoto santykio FR1 grafiką, du kartus per dieną. FR1 paspaudus vieną aktyviąją svirtį, buvo pristatyta viena sacharozės granulė. Visi FR seansai truko 30 minučių arba tol, kol žiurkės uždirbo 100 granulių, atsižvelgiant į tai, kas įvyko anksčiau. Dauguma žiurkių pasiekė 100 granulių per seansą kriterijų po 10–15 seansų. Neaktyvios svirties paspaudimai buvo užfiksuoti, bet neturėjo užprogramuotų pasekmių. Po FR1 tvarkaraščio seansų sekė FR3 ir FR5 (ty atitinkamai trys ir penki paspaudimai vienai granulei). Vėlgi, norint pereiti prie kito tvarkaraščio, per aktyvios svirties seansą reikėjo gauti mažiausiai 100 atsakymų; daugumai žiurkių reikėjo tik vieno ar dviejų FR3 ir FR5 tvarkaraščių, kad pasiektų šį lygį. Po FR5 tvarkaraščio buvo taikomas progresinio santykio (PR) grafikas, kurio metu atlyginimo kaina palaipsniui didinama už kiekvieną kitą atlygį, siekiant nustatyti darbo, kurį žiurkė nori įdėti, kad gautų atlygį, kiekį. Atsako poreikis padidėjo pagal šią lygtį: atsako koeficientas = [5e(0.2 × infuzijos skaičius)] – 5 per šias serijas: 1, 2, 4, 9, 12, 15, 20, 25, 32, 40, 50 , 62, 77, 95, 118, 145, 178, 219, 268, 328. PR sesija baigėsi, kai žiurkei nepavyko uždirbti atlygio per 60 minučių. Pertraukos taškas buvo apibrėžtas kaip galutinis užbaigtas santykis prieš pasibaigiant seansui. Atsakymas buvo laikomas stabiliu, kai per seansą uždirbtų maisto granulių skaičius nesiskyrė daugiau nei 15% tris seansus iš eilės. Daugeliu atvejų atsakas stabilizavosi per penkias ar septynias sesijas. PR testas buvo atliktas vieną sesiją per dieną. Vidutiniškai seansai truko 75 minutes, nors visos žiurkės operantinėse dėžutėse išbuvo iki 120 minučių, kad visi seansai galėtų baigtis. Vėliau žiurkės buvo perkeltos į namų narvus, kad būtų galima vieną valandą nemokamai šerti maistą. Treniruotės pabaigoje ir prieš bandymą žiurkės buvo grąžintos į ad libitum maitinimo grafikas.

Eksperimentinis dizainas

Visoms žiurkėms buvo sušvirkšta intraperitoninė (IP) arba atskira žiurkių grupė trečiojo skilvelio (trečiojo ICV) injekcijos šviesos ciklo pradžioje (grelino testams) ir šviesos ciklo pabaigoje grelino antagonisto eksperimentams 20 minučių iki pradžios. operantinio testavimo. Visos sąlygos buvo atskirtos mažiausiai 48 valandomis ir buvo vykdomos subalansuotu būdu (kiekviena žiurkė gavo visas sąlygas atskiromis bandymo dienomis).

1 eksperimentas: periferinio arba centrinio grelino vartojimo poveikis PR operantui, reaguojančiam į sacharozę žiurkėms

Visoms žiurkėms svirties paspaudimo atsakai buvo tiriami po dviejų sąlygų: IP apdorojimas fiziologiniu tirpalu arba acilintu žiurkės grelinu (Tocris, Bristolis, JK; 0.33 mg/kg kūno svorio esant 1 ml/kg). Anksčiau buvo įrodyta, kad pasirinkta IP grelino dozė sukelia žiurkių maitinimosi atsaką (traškutis et al. 2000) ir taip pat paskatinti susikaupusį dopamino išsiskyrimą ir pelių judėjimo aktyvumą (Jerlhagas 2008 m). Po operantinio testavimo žiurkėms buvo leista laisvai prieiti prie čiaudo, o po vienos valandos buvo išmatuotas čiaudo suvartojimas. Toliau, atskiroje žiurkių grupėje, ištyrėme atsakus po tikslinio CNS vaisto įvedimo po trijų sąlygų: kontrolinė būklė su trečiojo skilvelio fiziologiniu tirpalu, 0.5 µg arba 1.0 µg acilinto žiurkės grelino (Tocris) 1 µl tūryje. Anksčiau buvo įrodyta, kad pasirinktos grelino dozės sukelia maitinimo atsaką (Nakazato et al. 2001). Atliekant ICV ir IP grelino tyrimus, svirties paspaudimo eksperimentai buvo atlikti esant sočiai (ty kai maisto suvartojimą lemtų naudingos maisto savybės, o ne homeostatinės jėgos). Be to, abiejuose tyrimuose, atlikus operantinius tyrimus, žiurkėms buvo leista laisvai valgyti maistą, o valgymas buvo matuojamas po vienos valandos.

2 eksperimentas: periferinio arba centrinio gydymo grelino receptorių (GHS-R1A) antagonistu (JMV2959) įtaka žiurkių motyvacijai gauti atlygį už sacharozę

PR operantiniai atsakai buvo tiriami po trijų sąlygų: kontrolinė būklė su IP fiziologiniu tirpalu, 1 mg/kg arba 3 mg/kg JMV2959 (AEZS-123, AeternaZentaris GmBH, Frankfurtas, Vokietija). JMV2959 dozės buvo parinktos remiantis Jerlhagas et al. (2009) ir Egecioglu et al. (2010) ir preliminarūs duomenys, anksčiau įrodyta, kad jie sumažina sąlyginį vietos pirmenybės elgesį, bet neturi nepriklausomo poveikio judėjimo aktyvumui. Po operantinio tyrimo žiurkėms buvo leista laisvai prieiti prie čiaudo. Norint įvertinti tiesioginio ūmaus centrinio antagonisto poveikio poveikį, atskiroje žiurkių grupėje operantinis elgesys buvo tiriamas po šių trijų sąlygų: kontrolinė būklė su trečiojo skilvelio fiziologinio tirpalo injekcija, 5 µg arba 10 µg JMV2959 1 µl tūryje. Pasirinktos JMV2959 dozės ICV dozės buvo pagrįstos Salomėjaet al. (2009 m), kurioje buvo blokuotas 1 µg grelino vartojamo ICV oreksigeninis poveikis. Atlikus operantinius tyrimus, žiurkėms buvo leista laisvai patekti į maistą, o valgymas buvo išmatuotas po vienos valandos laikotarpio, taip pat praėjus 24 valandoms po pradinės injekcijos. Tyrimai su GHS-R1A antagonistu, priešingai nei atlikti su grelinu (žr. anksčiau), buvo atlikti su žiurkėmis po 16 valandų maisto apribojimo prieš injekcijas, siekiant užtikrinti aukštą endogeninio cirkuliuojančio grelino kiekį (Cummings et al. 2001).

3 eksperimentas: grelino sukelti su dopamino ir acetilcholinu susijusių genų ekspresijos pokyčiai VTA ir NAcc

Čia mes nustatėme dviejų savaičių lėtinės ICV grelino infuzijos poveikį pasirinktų genų, dalyvaujančių dopaminerginiame ir cholinerginiame perdavime, ekspresijai dviejuose pagrindiniuose mezolimbinio atlygio kelio mazguose, VTA ir NAcc. Atrinkti su dopaminu susiję genai buvo genai, koduojantys dopamino receptorius (D1A, D2, D3, D5), katechol-O-metiltransferazę, tirozino hidroksilazę (tik VTA) ir monoamino oksidazę A. Su acetilcholinu susiję genai buvo: nikotino receptorių subvienetai. (α3 α6, β2, β3). Genai, kuriuos pasirinkome įvertinti, anksčiau buvo susiję su grelino poveikiu ir (arba) apdovanoti / motyvuojančiu elgesiu (Kelley et al. 2002; Figlevičius et al. 2006; Jerlhagas et al. 2006, 2007; Sibilia et al. 2006; Dalley et al. 2007; Kuzminas et al. 2009; Užuovėja et al. 2009; Nimitvilai ir Brodie 2010 m; Perello et al. 2010). Lėtinės grelino/fiziologinio tirpalo infuzijos protokolas buvo naudojamas vietoj ūmaus injekcijos, kad padidėtų tikimybė pastebėti poveikį genų ekspresijai; be to, jei grelinas yra svarbus atlygio sistemos reguliatorius ilgalaikėje perspektyvoje, skatinantis persivalgymą ir nutukimą, jo lėtinis poveikis, keičiantis pagrindinius atlygio mechanizmus, greičiausiai bus labai svarbus.

Vaistų skyrimas ir audinių išpjaustymas

Kateteris ir osmosinis siurblys buvo užpildyti acetilintu žmogaus grelinu (dovana iš Rose Pharma, Kopenhaga, Danija) tirpalu (8.3 µg/žiurkei per dieną) arba druskos tirpalu (0.9 % NaCl); Anksčiau buvo įrodyta, kad ši dozė ir gydymo trukmė turi įtakos genų ekspresijai pagumburyje (Salomėjaet al. 2009b). Praėjus keturiolikai dienų po mini pompų implantavimo, žiurkės buvo nužudytos nukirtus galvą. Smegenys buvo greitai pašalintos, o VTA ir NAcc buvo išpjaustyti naudojant smegenų matricą (kiekvieno regiono ribos buvo nustatytos remiantis Paxinos & Watson 1986 m), užšaldytas skystame azote ir laikomas –80 °C temperatūroje, kad vėliau būtų galima nustatyti mRNR ekspresiją.

RNR išskyrimas ir mRNR ekspresija

Atskiri smegenų mėginiai buvo homogenizuoti Qiazole (Qiagen, Hilden, Vokietija), naudojant TissueLyzer (Qiagen). Bendra RNR buvo išgauta naudojant RNeasy Lipid Tissue Mini Kit (Qiagen) arba RNeasy Micro Kit (Qiagen), abu su papildomu DNR apdorojimu (Qiagen). RNR kokybė ir kiekis buvo įvertinti spektrofotometriniais matavimais (Nanodrop 1000, NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, JAV). cDNR sintezei visa RNR buvo atvirkštinė transkribuota naudojant atsitiktinius heksamerus (Applied Biosystems, Sundbyberg, Švedija) ir Superscript III atvirkštinę transkriptazę (Invitrogen Life Technologies, Paisley, JK) pagal gamintojo aprašymą. Buvo pridėtas rekombinantinis RNaseout ribonukleazės inhibitorius (Invitrogen), kad būtų išvengta RNazės sukelto skilimo. Visos cDNR reakcijos buvo vykdomos trimis egzemplioriais. Realaus laiko atvirkštinės transkripcijos PGR buvo atlikta naudojant TaqMan Custom Array tyrimus. Jie buvo sukurti naudojant TaqMan zondą ir pradmenų rinkinius tiksliniams genams, pasirinktiems iš internetinio katalogo (Applied Biosystems). Į kiekvieną TaqMan Array platformų prievadą buvo įdėta cDNR, atitinkanti 100 ng bendros RNR, kartu su vandeniu be nukleazės ir 50 µl TaqMan Gene Expression Master Mix (Applied Biosystems) iki galutinio 100 µl tūrio. TaqMan masyvai buvo analizuojami naudojant 7900HT sistemą su TaqMan Array Upgrade (Applied Biosystems). Šiluminio ciklo sąlygos buvo: 50 °C dvi minutes, 94.5 °C 10 minučių, po to 40 ciklų 97 °C 30 sekundžių ir 59.7 °C vieną minutę.

Genų ekspresijos reikšmės buvo apskaičiuotos remiantis ΔΔCt metodas (Livak & Schmittgen 2001 m), kur fiziologiniu tirpalu apdorota grupė buvo paskirta kalibratoriumi. Trumpai, ΔCt reiškia slenksčio ciklą (Ct) tikslinio geno atėmus etaloninio geno ir ΔΔCt reiškia ΔCt grelinu gydytos grupės atėmus kalibravimo priemonę. Santykiniai dydžiai buvo nustatyti naudojant lygtį santykinis kiekis = 2−ΔΔCt. Kalibratoriaus mėginiui lygtis yra santykinis kiekis = 2-0, kuris yra 1; todėl kiekviena kita imtis išreiškiama atsižvelgiant į tai. Gliceraldehido-3-fosfato dehidrogenazė buvo naudojama kaip etaloninis genas.

Statistika

Visi elgesio parametrai buvo išanalizuoti dispersijos analize, po to post-hoc Tukey testas arba t- jei reikia, atlikti bandymus. Statistinė analizė buvo atlikta naudojant Statistica programinę įrangą (Tulsa, OK, JAV). Siekiant išanalizuoti lėtinio centrinio grelino gydymo poveikį genų ekspresijai, t-testas buvo naudojamas, su P-vertės, apskaičiuotos naudojant ΔCt- vertybes. Skirtumai buvo laikomi reikšmingais P < 0.05. Duomenys išreiškiami kaip vidurkis ± SEM.

REZULTATAI

1 eksperimentas: periferinio arba centrinio grelino vartojimo poveikis PR operantui, reaguojančiam į sacharozę žiurkėms

Čia mes naudojame paradigmą, naudojamą priklausomybės tyrimuose, kad įvertintume grelino vaidmenį natūralaus saldaus maisto motyvacijoje ir stiprinančiose cukraus savybes. Tiksliau, norėdami nustatyti periferinio grelino skyrimo vaidmenį sacharozės atlygio veiksmingumui, žiurkėms ištyrėme savaiminį sacharozės vartojimą pagal progresyvaus atsako grafiką praėjus 20 minučių po nešiklio arba grelino injekcijos IP. Visi operantinio elgesio rodikliai žiurkėms po ūminės periferinės grelino injekcijos žymiai padidėjo: aktyvus svirties paspaudimas (P < 0.05 visiems laiko taškams), uždirbtų cukraus granulių skaičius (P < 0.005 visiems laiko taškams) ir 120 minučių pertraukos taškas (P < 0.005, 32.53 ± 3.4 ir 41 ± 4.3 atitinkamai nešikliui ir grelinui; 1a, b). Literatūroje pirmiausia remiamas centrinis grelino oreksigeninio poveikio veiksnys. Tačiau GHS-R1A taip pat išreiškiamas už CNS ribų vietose, svarbiose maisto suvartojimo kontrolei, pavyzdžiui, klajoklio nerve; todėl negalima atmesti galimybės, kad dalį stebimo IP grelino poveikio sukelia tie periferiniai receptoriai. Tačiau centrinė mažo tūrio ir dozės grelino injekcija stimuliuoja tik CNS GHS-R1A. Todėl, norėdami nustatyti tiesioginį grelino poveikį CNS sacharozės atlygio veiksmingumui, atlikome lygiagretų tyrimą, kurio metu nešiklis arba grelinas buvo švirkščiamas į trečiąjį skilvelį, taip pat 20 minučių prieš operantinę paradigmą. Atsižvelgiant į centrinės poveikio vietos hipotezę, ūminė ICV grelino injekcija žiurkėms (tiek 0.5 µg, tiek 1.0 µg dozės) žymiai padidino visus anksčiau minėtus operantinio elgesio rodiklius.2a, b). Aktyvių svirties atsakų laiko eiga ICV grelino tyrime atskleidė, kad nors poveikis išryškėjo lėtai per 10 ir 30 minučių laiko taškus, jis pasiekė reikšmingumą po 60 minučių [aktyvus svirtis: 10 minučių F(2, 24) = 0.94, P = 0.41, 30 minučių F(2, 24) = 3.13, P = 0.06, 60 minučių F(2, 24) = 5.86, P < 0.01, 90 minučių F(2, 24) = 6.42, P < 0.01, 120 minučių F(2, 24) = 6.03, P < 0.01; pelnyta premija: 10 min F(2, 24) = 0.26, P = 0.78, 30 minučių F(2, 24) = 2.76, P = 0.08, 60 minučių F(2, 24) = 8.31, P < 0.005, 90 minučių F(2, 24) = 10.16, P < 0.001, 120 minučių F(2, 24) = 11.93, P < 0.001; ir lūžio taškas: F(2, 24) = 7.22, P < 0.005 (atitinkamai 17.31 ± 1.53, 33.15 ± 5.52, 36 ± 6.95 transporto priemonėms, 0.5 µg ir 1.0 µg grelino)], laiko eiga atitinka kitus pranešimus apie grelino sukeltą maitinimosi delsos būduFaulconbridge et al. 2003). Abiejuose eksperimentuose aktyvumas prie neaktyvios svirties buvo nedidelis ir skirtingose ​​gydymo grupėse reikšmingai nesiskyrė (atitinkamai nešiklio ir grelino IP 4.1 ± 1.1, 4.1 ± 1.1; ICV 3.9 ± 1.1, 2.1 ± 0.7, 3.5 ± 1.6). nešiklio, atitinkamai 0.5, 1.0 µg ir XNUMX, XNUMX µg grelino), o tai rodo, kad gydymas nesukelia nespecifinių, į tikslą nukreiptų aktyvumo pokyčių. Iš karto po operantinio tyrimo žiurkės buvo sugrąžintos į savo namų narvus ir leido laisvai prieiti prie čiaudo; žiurkėms, kurioms buvo sušvirkštas grelinas, nepriklausomai nuo to, ar jis buvo sušvirkštas periferiškai (P < 0.05) arba centralizuotai [F(2, 24) = 12.64, P < 0.001], beveik padvigubino maisto suvartojimą per pirmą valandą, palyginti su grupėmis, gydytomis nešikliu (1c ir 2c pav). Remiantis ankstesniais duomenimis (Faulconbridge et al. 2003), nurodant, kad didžioji dalis ūminės centrinės grelino injekcijos hiperfaginio poveikio pasireiškia per tris valandas po injekcijos, mūsų tyrime nepastebėta jokio poveikio valgymui, praėjus 24–17.4 valandoms po bet kurios grelino dozės suleidimo ICV [1.12 ± 18.42, atitinkamai 1.34 ± 19.12, 1.43 ± 0.5 nešiklio, 1.0 µg ir XNUMX µg grelino, F(2, 24) = 2.27, P = 0.13].

1 pav 

Periferinė grelino injekcija padidina motyvaciją gauti skanų maistą PR santykio operantinio kondicionavimo modelyje. Atsakymų skaičius ant aktyvios svirties (a) ir gautų 45 mg sacharozės atlygių skaičius (b) žymiai padidėja ...
2 pav 

CNS (trečiojo ICV) grelino pristatymas padidina sacharozės naudingumą PR santykio operantinio kondicionavimo modelyje. Atsakymų skaičius ant aktyvios svirties (a) ir gautų 45 mg sacharozės atlygių skaičius (b) žymiai padidėja trečdaliu ...

2 eksperimentas: periferinio arba centrinio gydymo grelino receptorių (GHS-R1A) antagonistu (JMV2959) įtaka skatinamajai motyvacijai gauti atlygį už sacharozę žiurkėms

Toliau ištyrėme farmakologinės GHS-R1A blokados poveikį sacharozės atlygio veiksmingumui. Taigi, žiurkėms, kurioms buvo ribojamas maistas, buvo ištirtas savaiminis sacharozės skyrimas pagal laipsniško atsako schemą, siekiant užtikrinti aukštą endogeninio cirkuliuojančio grelino kiekį praėjus 20 minučių po nešiklio arba 1 mg/kg arba 3 mg/kg JMV2959, GHS, injekcijos. -R1A antagonistas. Po periferinės JMV2959 injekcijos žiurkėms visi operantinio elgesio rodikliai žymiai sumažėjo [aktyvi svirtis: penkios minutės F(2, 24) = 11.53 P < 0.0005, 120 minučių F(2, 24) = 11.27, P < 0.001; pelnyta premija: penkios minutės F(2, 24) = 23.39 P < 0.0005, 120 minučių F(2, 24) = 9.26, P < 0.001 ir lūžio taškas ties 120: F(2, 24) = 5.98, P < 0.01 (atitinkamai 45.31 ± 6.45, 42.08 ± 5.80, 30.0 ± 5.89 nešikliui, 1 mg/kg ir 3 mg/kg JMV2959)]. Post hoc analizė parodė, kad pagrindinį poveikį lėmė 3 mg/kg dozė (3a, b). Siekiant nustatyti centrinio grelino receptoriaus vaidmenį sacharozės atlygio veiksmingumui, buvo atliktas panašus tyrimas, kurio metu nešiklis arba JMV2959 (5 µg arba 10 µg) buvo įvesta į trečiąjį skilvelį 20 minučių prieš operantinius matavimus. Visi pirmiau minėti operantinio elgesio rodikliai buvo reikšmingai susilpnėję žiurkėms po ūminės abiejų JMV2959 dozių infuzijos į trečiąjį skilvelį.4a, b). Pastebėtas poveikis buvo iš karto, kaip post-hoc analizė atskleidė reikšmingus skirtumus tarp gydymo grupių tik po 10 minučių aktyvumo operacinėje kameroje, kuri buvo palaikoma visą bandymo laikotarpį [aktyvi svirtis: 10 minučių F(2, 24) = 10.16, P < 0.0005, 30 minučių F(2, 24) = 11.48, P < 0.0005, 60 minučių F(2, 24) = 9.11, P < 0.001, 90 minučių F(2, 24) = 8.30, P < 0.001, 120 minučių F(2, 24) = 4.95, P < 0.05; pelnyta premija: 10 min F(2, 24) = 21.23, P < 0.0001, 30 minučių F(2, 24) = 25.08, P < 0.0001, 60 minučių F(2, 24) = 19.24, P < 0.0001, 90 minučių F(2, 24) = 20.04, P < 0.0001, 120 minučių F(2, 24) = 5.44, P < 0.01; ir lūžio taškas: F(2, 24) = 3.78, P < 0.05 (atitinkamai 51.4 ± 8.58, 38.13 ± 5.07, 33.67 ± 5.21 transporto priemonei, 5 µg ir 10 µg JMV2959)].

3 pav 

Periferinis grelino receptorių antagonisto JMV2959 pristatymas. sumažina motyvaciją gauti skanų maistą PR santykio operantinio kondicionavimo modelyje. Atsakymų ant aktyvios svirties (a) skaičius ir gautų 45 mg sacharozės apdovanojimų skaičius ...
4 pav 

Centrinė GHS-R1A blokada su JMV2959 sumažina motyvaciją gauti maisto atlygį PR santykio operantinio kondicionavimo modelyje. Žymiai sumažėja aktyvios svirties (a) atsakymų skaičius ir gautų 45 mg sacharozės atlygių skaičius (b). ...

Kaip tikėtasi (Hodos 1961; Jewett et al. 1995), visose gydymo grupėse, įskaitant ir IP, ir ICV vartojimo būdus, maisto trūkumo poveikis operacinei reakcijai į sacharozę buvo akivaizdus (3a ir 4a pav) ir skiriasi nuo stebimo sočios būsenos (1a ir 2a pav). Neaktyvios svirties aktyvumas buvo nedidelis (IP 9.6 ± 3.0, 6.8 ± 2.2, 5.6 ± 1.9 transporto priemonei ir 1 mg/kg arba 3 mg/kg JMV2959; ICV 6.4 ± 1.3, 4.6 ± 1.3, 4.4 ± 1.7 Atitinkamai µg ir 5 µg JMV10) ir nesvarbu, ar JMV2959 buvo vartojamas periferiškai, ar centralizuotai, tam aktyvumui reikšmingo poveikio neturėjo (šis aktyvumas skirtingose ​​gydymo grupėse reikšmingai nesiskyrė). Atliekant ICV tyrimą, iš karto po operantinio tyrimo žiurkės buvo grąžintos į savo namų narvus ir jiems buvo leista laisvai patekti į maistą; Įdomu tai, kad per vieną valandą nepastebėta jokio poveikio valgymui čiau (4c) arba 24 valandų laiko tašką (duomenys nerodomi). Tai gali reikšti, kad nors grelino signalizacija reikalinga maisto trūkumo sukeltai motyvacijai, jis nėra būtinas nemokamam maitinimui, kurį sukelia 16 valandų maisto trūkumas, greičiausiai dėl kitų perteklinių mechanizmų, suaktyvėjusių trūkumo laikotarpiu. Visi nemokamo maitinimo matavimai buvo atlikti praėjus 140 minučių po vaisto suleidimo, todėl negalime atmesti galimybės, kad poveikio trūkumą iš dalies lemia vaisto išplovimas.

3 eksperimentas: grelino sukelti su dopamino ir acetilcholinu susijusių genų ekspresijos pokyčiai VTA ir NAcc

Šiame tyrime taip pat ištyrėme, ar grelinas keičia su dopaminu ir acetilcholinu susijusius genus pagrindiniuose mezolimbiniuose mazguose, VTA ir NAcc, nagrinėdami lėtinio centrinio gydymo grelinu poveikį pasirinktų dopamino receptorių ir dalyvaujančių fermentų ekspresijai. dopamino gamyboje ir metabolizme, jau nustatyta paradigma, kuri sukelia su grelinu susijusius genų ekspresijos pokyčius pagumburyje (Salomėjaet al. 2009b). VTA dopamino receptorių D5 ir nikotino acetilcholino receptorių (nAChRβ2) mRNR ekspresija buvo didesnė grelinu gydytose žiurkėse, palyginti su fiziologiniu tirpalu gydytų žiurkių grupe.5a). NAcc buvo sumažėjusi genų, koduojančių dopamino receptorius D1A, D3 ir D5, taip pat nikotino acetilcholino receptorių nAChRα3, mRNR ekspresija grelinu gydomose žiurkėse, palyginti su fiziologiniu tirpalu gydytų žiurkių grupe.5b).

5 pav 

Su dopaminu ir acetilcholinu susijusi genų ekspresija VTA (a) ir NAcc (b) po lėtinio ICV grelino ar nešiklio gydymo. Duomenys rodo vidutinį pokytį, palyginti su apdorojimu fiziologiniu tirpalu. D1, dopamino D1 receptorius; D2 dopamino D2 receptorius; D3, dopaminas ...

DISKUSIJA

Čia atskleidžiame centrinės grelino signalizacijos sistemos vaidmenį moduliuojant skatinamąją motyvaciją ir stiprinančias sacharozės atlygio savybes ir nurodome lėtinio centrinio grelino gydymo poveikį dopaminerginių ir cholinerginių receptorių genų ekspresijai pagrindiniuose mezolimbiniuose atlygio mazguose. Rezultatai rodo, kad tiek centrinis, tiek periferinis grelino tiekimas žymiai padidina darbo, kurį gyvūnas nori atlikti, kad gautų sacharozės atlygį, kiekį. Be to, sisteminė arba centrinė grelino receptorių blokada slopino operantą, reaguojantį į sacharozę. Taigi galime daryti išvadą, kad endogeninis grelino signalizavimas yra svarbus skatinant sacharozės atlygį. Mūsų išvados atitinka hipotezę, kad svarbus centrinės grelino signalizacijos sistemos vaidmuo yra padidinti atlygio, įskaitant maistą, skatinamąją vertę. Atsižvelgiant į tai, kad maisto apribojimas padidina sacharozės naudingumą (Hodos 1961; Jewett et al. 1995) ir kad grelino kiekis padidėja trumpalaikio maisto apribojimo metu (Gualillo et al. 2002), gali būti, kad esant maisto ribojimo / trūkumo būsenai, grelinas yra vienas iš veiksnių, didinančių maisto / maisto motyvacijos naudingą vertę. Iš tiesų, periferinė grelino ekspozicija padidino operacinį elgesį iki lygio, panašaus į tą, kuris buvo stebimas maisto negaunančioms žiurkėms, ir atvirkščiai, grelino signalizacijos blokada sumažino operacinį elgesį iki lygio, pastebėto nestokojančioms žiurkėms.

Dabar atrodo aišku, kad problemiškai padidėjęs maisto suvartojimas greičiausiai atspindi centrinių atlygio už maistą mechanizmų reguliavimo sutrikimą, apimantį ir hedoninius, ir motyvacinius aspektus. Kadangi nemokamas maitinimas ir motyvuotas maitinimas už atlygį yra du atskiri reiškiniai su skirtingais neuroanatominiais substratais (Salamone et al. 1991), svarbu išnagrinėti abu, vertinant šėrimo elgsenoje dalyvaujančių agentų vaidmenį. Ghrelino stiprus oreksigeninis poveikis iš esmės buvo tiriamas taikant laisvo maitinimo prieigos modelius, kuriuose būtų sunku atskirti jo vaidmenį papildant maistines medžiagas nuo maitinimo, skatinančio atlygį. Šiame tyrime mes nustatėme, kad GHS-R1A ligandai trukdo sacharozės atlygio motyvacijai, naudojant eksperimentinį modelį, kuris buvo naudojamas kituose kontekstuose, siekiant parodyti norą ir motyvaciją piktnaudžiauti priklausomybę sukeliančiais vaistais. Motyvuoto elgesio padidėjimas būdingas tiek priklausomybei nuo cheminių medžiagų, tiek kalorijų apribojimui ir greičiausiai susijęs su persidengiančiais neurobiologiniais mechanizmais. Šiame tyrime taip pat aptikome grelino sukeltą laisvo šėrimo normaliu čiaudu padidėjimą tiems patiems gyvūnams, kuriems operacinėje kameroje buvo skirta žymiai daugiau darbo. Todėl mūsų duomenys, kartu su ankstesniais pranešimais apie grelino poveikį nemokamo maitinimo modeliuose (traškutis et al. 2000), rodo, kad grelinas turi galimybę moduliuoti tiek nemokamą maitinimą, tiek maitinimo motyvaciją.

Atsižvelgiant į tai, kad grelino receptorius GHS-R1A yra pagrindinėse pagumburio, užpakalinių smegenų ir mezolimbinėse srityse, susijusiose su energijos balansu ir atlygiu (Zigmanas et al. 2006) ir kad GHS-R1A ligandų injekcija į centrinį skilvelį greičiausiai gaus plačią prieigą prie šių CNS sričių, čia parodytam grelino sacharozės atlygio motyvaciniam poveikiui gali būti keli svarbūs neuroanatominiai substratai. Tikėtina, kad grelinas tiesiogiai veikia pagrindines mezolimbines sritis, nes grelinas aktyvuoja VTA dopamino neuronus.Abizaid et al. 2006) ir tiesioginis grelino skyrimas VTA padidina susikaupusio dopamino išsiskyrimą (Jerlhagas et al. 2007). Atsižvelgdami į tai, anksčiau pranešėme apie vidinio VTA grelino poveikį, didinantį naudingo / skanaus maisto vartojimą laisvai pasirenkamo maitinimosi paradigmose, taip pat apie VTA buko grelino sukeltą skanaus maisto tiriamąjį elgesį (Egecioglu et al. 2010). NAcc taip pat gali būti tiesioginis grelino taikinys, moduliuojant motyvacinius maisto vartojimo aspektus; Sušvirkštas tiesiai į šią sritį, grelinas sukelia maitinimosi atsaką (Naleid et al. 2005), nors kiti tyrėjai neaprašė GHS-R1A buvimo šioje srityje graužikams (Zigmanas et al. 2006), todėl reikia papildomo paaiškinimo.

Nuosekliai, atsižvelgiant į esminį vaidmenį motyvuotame elgesyje, keli dopamino sistemos genai buvo pakeisti gydant centriniu grelinu. Šie duomenys kelia galimybę, kad dopamino receptorių ekspresijos reguliavimas yra ilgalaikis mechanizmas, per kurį grelinas veikia su atlygiu susijusią funkciją ir signalizaciją. Dopamino receptorių įvertinimas yra svarbus ne tik išsiskyrimo vietoje, pvz., NAcc, bet ir VTA dėl dendritinio dopamino išsiskyrimo.Cragg & Greenfield 1997 m), tikėtina, kad jis veikia lokaliai, kad paveiktų motyvuotą elgesį. Čia mes nustatėme padidėjusį D5 ekspresiją VTA po gydymo grelinu. Dopamino D5 receptoriai yra dopaminerginių VTA neuronų ląstelių kūnuose (Ciliax et al. 2000) ir jų aktyvumas reikalingas VTA dopamino neuronų aktyvumui atkurti po desensibilizacijos laikotarpio (Nimitvilai ir Brodie 2010 m). NAcc pastebėjome sumažėjusią D1 išraišką. Tiesą sakant, neseniai buvo įrodyta, kad sumažėjusi šio receptoriaus raiška yra nutukimui linkusių, bet neatsparių žiurkių NAcc, kurios laikosi riebaus maisto, o tai rodo galimą jo vaidmenį NAcc nutukimo ir perteklinio vartojimo atveju.Alsio et al. 2010). Be to, grelinas sumažino D3 koduojančių genų ekspresiją, o tai ypač domina, atsižvelgiant į sumažėjusį D2/D3 receptorių prieinamumą tiek žiurkėms, tiek žmonėms narkotikų vartotojams, koreliuoja su padidėjusiu impulsyvumu.Dalley et al. 2007; Užuovėja et al. 2009). Įdomu tai, kad mes nepastebėjome jokių reikšmingų fermentų, dalyvaujančių dopamino sintezėje ar gamyboje, pokyčių.

Svarbus acetilcholino sistemos vaidmuo teikiant atlygį už vaistus ir maistą yra gerai dokumentuotas; Čia parodome, kad gydymas grelinu buvo susijęs su genų, koduojančių kelis acetilcholino nikotino receptorių subvienetus, ekspresijos pokyčiais, suteikiant kitą būdą, kuriuo grelinas gali pakeisti atlygio funkciją. Grelinas gali netiesiogiai reguliuoti VTA dopaminerginius neuronus, veikdamas cholinerginius neuronus laterodorsalinėje tegmentinėje srityje (LDTg), kurioje gausu GHS-R1A, kuri yra svarbi alkoholio atlygiui, susijusiam su cholinergine projekcija į VTA dopamino sistemą. Tiesą sakant, anksčiau mes parodėme, kad dvišalė grelino injekcija į LDTg pelėms stimuliuoja dopamino išsiskyrimą cholinerginiu būdu.Jerlhagas et al. 2007, 2008) ir didina alkoholio vartojimą pagal laisvo pasirinkimo (alkoholio/vandens) gėrimo paradigmą (Jerlhagas et al. 2009). Iš tiesų, naujausi tyrimai parodė cholinerginio ir dopaminerinio atlygio ryšį su maisto atlygiu (Diksonas et al. 2010). Kita įdomi galimybė yra ta, kad grelinas gali sustiprinti cholinerginį signalizavimą VTA, padidindamas cholinerginių receptorių reguliavimą. Iš tiesų, atrodo, kad mūsų dabartiniai genų ekspresijos duomenys patvirtina šį mechanizmą, nes VTA nAChRβ2 mRNR lygis buvo padidėjęs grelinu gydomose žiurkėse.

Kita vertus, NAcc cholinerginių neuronų ir acetilcholino funkcija NAcc buvo prieštaringesnė, nes kai kuriose ataskaitose nurodomas acetilcholino vaidmuo didinant į atlygį orientuotą elgesį.Pratt & Kelley 2005 m; Pratt & Blackstone 2009 m), bet kiti rodo, kad NAcc esantis Ach gali slopinti maitinimąsi ir atlikti sotumo mechanizmą (Šalmas et al. 2003; Hoebel et al. 2007). Iš tiesų, atrodo, kad mūsų rezultatai atitinka pastarąjį, nes gydymas grelinu buvo susijęs su sumažėjusia vieno iš nikotino receptorių subvienetų, nAChRα3, ekspresija. Svarbu pažymėti, kad genų ekspresijos tyrimai, nors ir labai vertingi nurodant galimus grelino taikinius pasroviui, tik siūlo ryšio tipą (padidėjęs reguliavimas arba sumažinimas), reikalingo oreksigeniniam / į atlygį orientuotam atsakui išreikšti, bet jo neapibrėžia. nes būtų sunku tiesiogiai atsiriboti nuo kompensuojamųjų pokyčių. Todėl mūsų genų ekspresijos tyrimai rodo ryšį ir suteikia platformą būsimiems genetiniams ir farmakologiniams tyrimams, nustatantiems tų genų vaidmenį grelino poveikiui nemokamam ir motyvuotam maitinimui.

Nors pagumburio ir smegenų kamieno sritys greičiausiai prisideda prie homeostatinio maitinimo, negalime atmesti netiesioginio pagumburio ir (arba) smegenų kamieno aferentinių sistemų vaidmens grelino sukeltame maisto atlygio motyvacijoje. Iš tiesų, oreksinerginiai neuronai projektuojasi iš šoninio pagumburio į mezolimbinę atlygio grandinę, įskaitant VTA ir NAcc (Tošinai et al. 2003; Harris et al. 2005; Perello et al. 2010). Lankinio branduolio neuropeptido Y (NPY)/AgRP neuronai, dar vienas GHS-R1A ligandų taikinys (Dickson & Luckman 1997 m; Keen-Rhinehart & Bartness 2007a,b), taip pat gali atlikti svarbų vaidmenį. Įrodyta, kad NPY padidina atlygio už čiaumą ir sacharozės veiksmingumą (Brownas, Fletcheris ir Coscina 1998 m), kadangi atrodo, kad AgRP padidina atlygio veiksmingumą tik už riebų maistą (Tracy et al. 2008). Atrodo, kad grelinas turi įtakos tiek sacharozės atlygiui (dabartinis tyrimas), tiek didelio riebumo atlygiui (Perello et al. 2010); tačiau santykinė NPY / AgRP neuronų svarba šiems grelino poveikiams dar turi būti išaiškinta. Apibendrinant galima pasakyti, kad grelinas turi maisto motyvuojančių savybių, apimančių visus mitybos komponentus, ir greičiausiai veikia kelias smegenų sritis, kad sinchronizuotų koordinuotą elgsenos atsaką, kad būtų skatinamas maitinimas.

Nors grelino pernešimas į smegenis yra ribotas (Bankai et al. 2002), atrodo, kad periferinis grelinas pasiekia ir nukreipia tokias sritis kaip hipokampas (Diano et al. 2006) ir VTA (Jerlhagas 2008 m). Nors tebėra diskusijų dėl klajoklio nervo, kaip netiesioginio grelino centrinio poveikio kelio, svarbos.Dornonville de la Cour et al. 2005; Data et al. 2002; Arnoldas et al. 2006), tikėtinas tiesioginis poveikis CNS, nes periferinio grelino poveikis maistui gali būti slopinamas į VTA skiriant grelino antagonistų (Abizaid et al. 2006). Grelinas gaminamas smegenyse (Cowley et al. 2003), nors dar reikia išsiaiškinti, kaip tai reguliuojama ir ar iš smegenų gautas grelinas yra svarbus centralizuotai generuojamas signalas apie maisto suvartojimą ir motyvaciją valgyti. Kartu su tuo, kad grelino receptorius GHS-R1A yra konstituciškai aktyvus (ty veikia, kai nėra grelino ligando) (Holstas et al. 2003), kyla klausimas, ar cirkuliuojantis grelinas yra fiziologiškai svarbus žarnyno ir smegenų signalas, skatinantis atlygį už maistą. Šio tyrimo rezultatai, rodantys panašų poveikį sacharozės atlygio darbui, gali būti gaunami centriniu ir periferiniu GHS-R1A ligandų skyrimu, gali reikšti, kad tiek centralizuotai, tiek periferiškai išsiskiriantis grelinas gali turėti įtakos maisto motyvacijai.

Apibendrinant galima pasakyti, kad mūsų nauji duomenys suteikia naujų įrodymų, kad grelino signalizacija yra svarbi motyvacijai gauti atlygį už sacharozę ir paveikti dopaminerginio ir cholinerginio geno ekspresiją mezolimbiniame atlygio kelyje. Mūsų išvados įkvepia svarbių klausimų, susijusių su endogeninio grelino vaidmeniu nustatant natūralių atlygių, tokių kaip cukrus, skatinamąją vertę, normalų apetitą ir valgymo sutrikimų bei nutukimo patofiziologiją. Nors dar reikia daug nuveikti, siekiant priežastingai susieti molekulinius dopamino ir acetilcholino sistemos pokyčius su grelino poveikiu atlygiui, mūsų duomenys gali rodyti naują mechanizmą, kuriuo grelinas veikia atlygio elgesį. Grelino vaidmens atlygio procesuose supratimas yra svarbus norint suprasti persidengiančią valgymo sutrikimų ir cheminių narkotikų priklausomybės neurobiologiją ir suteikia galimybę suprasti šių ligų etiologiją ir kurti naujus gydymo būdus. Galiausiai, galimybė slopinti probleminį skanaus saldaus maisto persivalgymą naudojant GHS-R1A antagonistus gali turėti klinikinės ir terapinės reikšmės atsirandančiam tokių junginių teigiamam poveikiui gliukozės kiekiui kraujyje kontroliuoti.Saulė et al. 2006) 2 tipo cukriniu diabetu sergantiems pacientams (Esleris et al. 2007).

Padėka

Moksliniai tyrimai remiami Švedijos medicinos tyrimų tarybos (VR 2006-5663; 2009-S266), Europos Sąjungos 7-osios programos (FP7-HEALTH-2009-241592; FP7-KBBE-2009-3-245009), ALF Göteborg, (SU7601) Švedijos institutas ir Švedijos strateginių tyrimų fondas Sahlgrenska širdies ir kraujagyslių bei medžiagų apykaitos tyrimų centrui (A305-188). Taip pat norėtume padėkoti dr. Danieliui Perrissoudui (AeternaZentaris, GmBH, Vokietija) už GHS-R1A antagonisto JMV2959 suteikimą ir Andersui Fribergui už pagalbą pateikiant.

Autorių indėlis

KPS inicijavo, suprojektavo, atliko ir analizavo visus elgsenos tyrimus. CH atliko ir išanalizavo visus genų ekspresijos tyrimus. EE prisidėjo prie tyrimo inicijavimo. SLD buvo vyresnysis autorius, teikęs visų studijų priežiūrą ir finansinę paramą. Rankraštį kūrė KPS ir SLD, visi autoriai prisidėjo prie galutinio teksto.

Nuorodos

  • Abizaid A, Liu ZW, Andrews ZB, Shanabrough M, Borok E, Elsworth JD, Roth RH, Sleeman MW, Picciotto MR, Tschop MH, Gao XB, Horvath TL. Grelinas moduliuoja vidurinių smegenų dopamino neuronų aktyvumą ir sinaptinį įvesties organizavimą, tuo pačiu skatindamas apetitą. J Clin Invest. 2006;116:3229–3239. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Alsio J, Olszewski PK, Norback AH, Gunnarsson ZE, Levine AS, Pickering C, Schioth HB. Dopamino D1 receptorių genų ekspresija sumažina branduolio akumbensą ilgą laiką veikiant skaniam maistui ir skiriasi priklausomai nuo dietos sukelto nutukimo fenotipo žiurkėms. Neurologija. 2010: 171: 779 – 787. [PubMed]
  • Arnoldas M., Mura A., Langhansas W., Geary N. Žarnyno vagaliniai aferentai nėra būtini žiurkėms į pilvaplėvės ertmę suleisto grelino valgymą stimuliuojančiam poveikiui. J Neurosci. 2006;26:11052–11060. [PubMed]
  • Bailey ART, von Englehardt N, Leng G, Smith RG, Dickson SL. Arkinio branduolio ir smegenų kamieno augimo hormono sekreciją skatinantis aktyvavimas vyksta ne noradrenerginiu keliu. J Neuroendokrinolis. 2000;12:191–197. [PubMed]
  • Bankai WA, Tschop M, Robinson SM, Heiman ML. Grelino pernešimo per hematoencefalinį barjerą mastą ir kryptį lemia jo unikali pirminė struktūra. J Pharmacol Exp Ther. 2002;302:822–827. [PubMed]
  • Brown CM, Fletcher PJ, Coscina DV. Neuropeptido Y sukeltas operantas, reaguojantis į sacharozę, nėra tarpininkaujantis dopaminu. Peptidai. 1998;19:1667–1673. [PubMed]
  • Ciliax BJ, Nash N, Heilman C, Sunahara R, Hartney A, Tiberi M, Rye DB, Caron MG, Niznik HB, Levey AI. Dopamino D (5) receptorių imunolokalizacija žiurkių ir beždžionių smegenyse. Sinapsija. 2000: 37: 125 – 145. [PubMed]
  • Cowley MA, Smith RG, Diano S, Tschop M, Pronchuk N, Grove KL, Strasburger CJ, Bidlingmaier M, Esterman M, Heiman ML, Garcia-Segura LM, Nillni EA, Mendez P, Low MJ, Sotonyi P, Friedman JM, Liu HY, Pinto S, Colmers WF, Cone RD, Horvath TL. Grelino pasiskirstymas ir veikimo mechanizmas CNS rodo naują pagumburio grandinę, reguliuojančią energijos homeostazę. Neuronas. 2003;37:649–661. [PubMed]
  • Cragg SJ, Greenfield SA. Diferencialinė somatodendritinio ir aksoninio galinio dopamino išsiskyrimo autoreceptoriaus kontrolė materia nigra, ventralinio tegmental srityje ir striatum. J Neurosci. 1997: 17: 5738 – 5746. [PubMed]
  • Cummings DE, Purnell JQ, Frayo RS, Schmidova K, Wisse BE, Weigle DS. Grelino koncentracijos plazmoje padidėjimas prieš valgį rodo, kad žmogus pradeda valgyti. Diabetas. 2001;50:1714–1719. [PubMed]
  • Dalley JW, Fryer TD, Brichard L, Robinson ES, Theobald DE, Laane K, Pena Y, Murphy ER, Shah Y, Probst K, Abakumova I, Aigbirhio FI, Richards HK, Hong Y, Baron JC, Everitt BJ, Robbins TW . Nucleus accumbens D2/3 receptoriai prognozuoja bruožų impulsyvumą ir kokaino sustiprinimą. Mokslas. 2007; 315: 1267–1270. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Data Y, Murakami N, Toshinai K, Matsukura S, Niijima A, Matsuo H, Kangawa K, Nakazato M. The role of the gastric afferent vagal nerve in ghrelin-induced feeding and growth hormone secretion in rats. Gastroenterologija. 2002;123:1120–1128. [PubMed]
  • Diano S, Farr SA, Benoit SC, McNay EC, da Silva I, Horvath B, Gaskin FS, Nonaka N, Jaeger LB, Banks WA, Morley JE, Pinto S, Sherwin RS, Xu L, Yamada KA, Sleeman MW, Tschop MH, Horvath TL. Ghrelin kontroliuoja hipokampo stuburo sinapsės tankį ir atminties veikimą. Gamtos neuromokslai. 2006;9:381–388. [PubMed]
  • Dickson SL, Hrabovszky E, Hansson C, Jerlhag E, Alvarez-Crespo M, Skibicka KP, Molnar CS, Liposits Z, Engel JA, Egecioglu E. Centrinio nikotino acetilcholino receptorių signalizacijos blokada susilpnina ghrelin-induced food intake in rodents. Neurologijos. 2010;171:1180–1186. [PubMed]
  • Dickson SL, Leng G, Robinson ICAF. Sisteminis augimo hormoną atpalaiduojančio peptido vartojimas suaktyvina pagumburio lankinius neuronus. Neurologijos. 1993;53:303–306. [PubMed]
  • Dickson SL, Luckman SM. C-fos pasiuntinio ribonukleino rūgšties indukcija neuropeptide Y ir augimo hormoną (GH) atpalaiduojančio faktoriaus neuronuose žiurkės lankiniame branduolyje po sisteminės GH sekrecijos stimuliatoriaus, GH atpalaiduojančio peptido-6, injekcijos. Endokrinologija. 1997;138:771–777. [PubMed]
  • Dornonville de la Cour CD, Björkqvist M, Sandvik AK, Bakke I, Zhao CM, Chen D, Håkanson R. A tipo ląstelėse žiurkės skrandyje yra grelino ir jos neveikia kontroliuojant gastriną. Regulas Pept. 2001;99:141–150. [PubMed]
  • Dornonville de la Cour CD, Lindqvist A, Egecioglu E, Tung YCL, Surve V, Ohlsson C, Jansson JO, Erlanson-Albertsson C, Dickson SL, Hakanson R. Ghrelin gydymas sumažina pelių, kurioms buvo pašalintas skrandis, svorio padidėjimo ir kūno riebalų sumažėjimą. Žarnynas. 2005;54:907–913. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Egecioglu E, Jerlhag E, Skibicka S, Salomé N, Haage D, Bohlooly YM, Andersson D, Bjursell M, Perrissoud D, Engel JA, Dickson SL. Grelinas padidina graužikams skanaus maisto suvartojimą. Addict Biol. 2010;15:304–311. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Engel JA. Naujausi alkoholizmo tyrimo pasiekimai (Excerpta Medica tarptautinių kongresų serija) Amsterdamas: Excerta Medica; 1977. Priklausomybę sukeliančių vaistų sukeltos euroforijos neurocheminiai aspektai; 16–22 p.
  • Esler WP, Rudolph J, Claus TH, Tang WF, Barucci N, Brown SE, Bullock W, Daly M, DeCarr L, Li YX, Milardo L, Molstad D, Zhu J, Gardell SJ, Livingston JN, Sweet LJ. Mažos molekulės grelino receptorių antagonistai gerina gliukozės toleranciją, slopina apetitą ir skatina svorio mažėjimą. Endokrinologija. 2007;148:5175–5185. [PubMed]
  • Faulconbridge LF, Cummings DE, Kaplan JM, Grill HJ. Hiperfaginis smegenų kamieno grelino vartojimo poveikis. Diabetas. 2003;52:2260–2265. [PubMed]
  • Faulconbridge LF, Grill HJ, Kaplan JM, Daniels D. Grelino uodeginis smegenų kamienas sukelia fos ekspresiją pavienio trakto branduolyje, bet ne arkiniuose ar paraventrikuliniuose pagumburio branduoliuose. Brain Res. 2008;1218:151–157. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Figlewiczius DP, Bennett JL, Naleid AM, Davis C, Grimm JW. Intraventrikulinis insulinas ir leptinas sumažina sacharozės įsisavinimą žiurkėms. Fizinis elgesys. 2006;89:611–616. [PubMed]
  • Gualillo O, Caminos JE, Nogueiras R, Seoane LM, Arvat E, Ghigo E, Casanueva FF, Dieguez C. Maisto apribojimo poveikis grelinui normaliai cikluojančių žiurkių patelėms ir nėštumo metu. Obes Res. 2002;10:682–687. [PubMed]
  • Harrisas GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Šoninių hipotalaminių oreksinų neuronų vaidmuo. Gamta. 2005: 437: 556 – 559. [PubMed]
  • Helm KA, Rada P, Hoebel BG. Cholecistokininas kartu su serotoninu pagumburyje riboja accumbens dopamino išsiskyrimą ir padidina acetilcholiną: galimas sotumo mechanizmas. Brain Res. 2003; 963: 290–297. [PubMed]
  • Hewson AK, Dickson SL. Sisteminis grelino vartojimas nevalgiusių ir šertų žiurkių pagumburio arkiniame branduolyje sukelia Fos ir Egr-1 baltymus. J Neuroendokrinolis. 2000;12:1047–1049. [PubMed]
  • Hodosas W. Progresyvus santykis kaip atlygio stiprumo matas. Mokslas. 1961: 134: 943 – 944. [PubMed]
  • Hoebel BG, Avena NM, Rada P. Accumbens dopamino ir acetilcholino pusiausvyra. Curr Opin Pharmacol. 2007: 7: 617 – 627. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Holst B, Cygankiewicz A, Jensen TH, Ankersen M, Schwartz TW. Didelis konstitucinis grelino receptoriaus signalizavimas – stipraus atvirkštinio agonisto identifikavimas. Molis endokrinolis. 2003;17:2201–2210. [PubMed]
  • Howard AD, Feighner SD, Cully DF, Arena JP, Liberator PA, Rosenblum CI, Hamelin M, Hreniuk DL, Palyha OC, Anderson J, Paress PS, Diaz C, Chou M, Liu KK, McKee KK, Pong SS, Chaung LY , Elbrecht A, Dashkevicz M, Heavens R, Rigby M, Sirinathsinghji DJS, Dean DC, Melillo DG, Patchett AA, Nargund R, Griffin PR, DeMartino JA, Gupta SK, Schaeffer JM, Smith RG, VanderPloeg LHT. Hipofizės ir pagumburio receptorius, atsakingas už augimo hormono išsiskyrimą. Mokslas. 1996;273:974–977. [PubMed]
  • Jerlhag E. Sisteminis grelino vartojimas skatina sąlyginę vietą ir skatina susikaupusį dopaminą. Addict Biol. 2008;13:358–363. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Dickson SL, Andersson M, Svensson L, Engel JA. Grelinas stimuliuoja lokomotorinį aktyvumą ir susikaupusio dopamino perpildymą per centrines cholinergines sistemas pelėms: jo dalyvavimo smegenų atlygyje pasekmės. Addict Biol. 2006;11:45–54. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Dickson SL, Douhan A, Svensson L, Engel JA. Grelino skyrimas į tegmentines sritis stimuliuoja lokomotorinį aktyvumą ir padidina tarpląstelinę dopamino koncentraciją branduolyje. Addict Biol. 2007;12:6–16. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Dickson SL, Svensson L, Engel JA. Alfa-konotoksinui MII jautrūs nikotino acetilcholino receptoriai dalyvauja tarpininkaujant grelino sukeltai lokomotorinei stimuliacijai ir dopamino pertekėjimui nucleus accumbens. Eur Neuropsychopharmacol. 2008;18:508–518. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Landgren S, Salomé N, Heilig M, Moechars D, Datta R, Perrissoud D, Dickson SL, Engel JA. Centrinio grelino signalizacijos reikalavimas norint gauti atlygį už alkoholį. Proc Natl Acad Sci US A. 2009;106:11318–11323. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Jewett DC, Cleary J, Levine AS, Schaal DW, Thompson T. Neuropeptido Y, insulino, 2-deoksigliukozės ir maisto trūkumo poveikis maisto motyvuotam elgesiui. Psichofarmakologija. 1995: 120: 267 – 271. [PubMed]
  • Keen-Rhinehart E, Bartness TJ. MTII sumažina grelino ir maisto trūkumo sukeltą maisto kaupimo ir suvartojamo maisto padidėjimą. Horm Behav. 2007a;52:612–620. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Keen-Rhinehart E, Bartness TJ. NPY Y1 receptorius dalyvauja grelino ir nevalgius sukeltame maisto paieškos, maisto kaupimo ir maisto suvartojimo padidėjime. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2007b;292:R1728–1737. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Kelley AE, Bakshi VP, Haber SN, Steininger TL, Will MJ, Zhang M. Opioidų skonio hedonikos moduliavimas ventralinėje stiatumoje. Physiol Behav. 2002: 76: 365 – 377. [PubMed]
  • Kojima M, Hosoda H, Date Y, Nakazato M, Matsuo H, Kangawa K. Ghrelin yra augimo hormoną atpalaiduojantis aciluotas peptidas iš skrandžio. Gamta. 1999;402:656–660. [PubMed]
  • Koob GF. Piktnaudžiavimo vaistais – anatomija, farmakologija ir atlygio būdų funkcija. Trends Pharmacol Sci. 1992;13:177–184. [PubMed]
  • Kuzmin A, Jerlhag E, Liljequist S, Engel J. Subvieneto selektyvių nACh receptorių poveikis operantiniam etanolio savarankiškam vartojimui ir į recidyvą panašiam etanolio gėrimo elgesiui. Psichofarmakologija. 2009;203:99–108. [PubMed]
  • la Fleur SE, Vanderschuren LJ, Luijendijk MC, Kloeze BM, Tiesjema B, Adan RA. Abipusė sąveika tarp maisto motyvuoto elgesio ir dietos sukelto nutukimo. Int J Obes. 2007;31:1286–1294. [PubMed]
  • Lee B, Londono ED, Poldrack RA, Farahi J, Nacca A, Monterosso JR, Mumford JA, Bokarius AV, Dahlbom M, Mukherjee J, Bilder RM, Brody AL, Mandelkern MA. Juostinių dopamino d2/d3 receptorių prieinamumas sumažėja esant priklausomybei nuo metamfetamino ir yra susijęs su impulsyvumu. J Neurosci. 2009;29:14734–14740. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Livak KJ, Schmittgen TD. Santykinių genų ekspresijos duomenų analizė, naudojant kiekybinę PGR realiu laiku ir 2(-delta delta C(T)) metodą. Metodai. 2001;25:402–408. [PubMed]
  • Nakazato M, Murakami N, Date Y, Kojima M, Matsuo H, Kangawa K, Matsukura S. A role for ghrelin in the central Regulation of feeding. Gamta. 2001;409:194–198. [PubMed]
  • Naleid AM, Grace MK, Cummings DE, Levine AS. Grelinas skatina maitinimąsi mezolimbiniu atlygio keliu tarp ventralinės tegmentinės srities ir nucleus accumbens. Peptidai. 2005;26:2274–2279. [PubMed]
  • Nimitvilai S, Brodie MS. Ventrinės tegmentinės srities dopaminerginių neuronų ilgalaikio dopamino slopinimo panaikinimas. J Pharmacol Exp Ther. 2010;333:555–563. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Nogueiras R, Tschöp MH, Zigman JM. Centrinės nervų sistemos energijos apykaitos reguliavimas - grelinas prieš leptiną. Ann NY Acad Sci. 2008;1126:14–19. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Paxinos G, Watson C. Žiurkės smegenys stereotaksinėse koordinatėse. Niujorkas: Academic Press, Niujorkas; 1986 m.
  • Perello M, Sakata I, Birnbaum S, Chuang JC, Osborne-Lawrence S, Rovinsky SA, Woloszyn J, Yanagisawa M, Lutter M, Zigman JM. Grelinas, priklausomai nuo oreksino, padidina riebios dietos naudingumą. Biol Psichiatrija. 2010;67:880–886. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Pratt WE, Blackstone K. Nucleus accumbens acetilcholinas ir maisto suvartojimas: sumažėjęs muskarino tonusas sumažina maitinimąsi, bet ne maisto ieškojimą. Behav Brain Res. 2009;198:252–257. [PubMed]
  • Pratt WE, Kelley AE. Striatalaus muskarino receptorių antagonizmas mažina 24-h maisto suvartojimą kartu su sumažėjusia preproenkefalino geno ekspresija. Eur J Neurosci. 2005: 22: 3229 – 3240. [PubMed]
  • Ritter RC, Slusser PG, Stone S. Gliukoreceptoriai, kontroliuojantys maitinimąsi ir kraujo – gliukozės – vietą užpakalinėse smegenyse. Mokslas. 1981;213:451–453. [PubMed]
  • Salamone JD, Steinpreis RE, McCullough LD, Smith P, Grebel D, Mahan K. Haloperidolio ir nucleus accumbens dopamino išeikvojimas slopina svirties spaudimą maistui, bet padidina nemokamo maisto suvartojimą naujo maisto pasirinkimo procedūroje. Psichofarmakologija. 1991;104:515–521. [PubMed]
  • Salomé N, Haage D, Perrissoud D, Moulin A, Demange L, Egecioglu E, Fehrentz JA, Martinez J, Dickson SL. Naujų grelino receptorių (GHS-R1A) antagonistų anoreksigeninis ir elektrofiziologinis poveikis žiurkėms. Eur J Pharmacol. 2009a;612:167–173. [PubMed]
  • Salomé N, Hansson C, Taube M, Gustafsson-Ericson L, Egecioglu E, Karlsson-Lindahl L, Fehrentz JA, Martinez J, Perrissoud D, Dickson SL. Apie centrinį mechanizmą, kuriuo grindžiamas lėtinis grelino nutukimą skatinantis poveikis žiurkėms: naujos įžvalgos iš tyrimų, kuriuose naudojamas stiprus grelino receptorių antagonistas. J Neuroendokrinolis. 2009b;21:777–785. [PubMed]
  • Sibilia V, Lattuada N, Rapetti D, Pagani F, Vincenza D, Bulgarelli I, Locatelli V, Guidobono F, Netti C. Ghrelin slopina uždegiminį skausmą žiurkėse: opioidų sistemos įtraukimas. Neurofarmakologija. 2006;51:497–505. [PubMed]
  • Skibicka KP, Alhadeff AL, Grill HJ. Užpakalinių smegenų kokaino ir amfetamino reguliuojamas transkriptas sukelia hipotermiją, kurią sukelia GLP-1 receptoriai. J Neurosci. 2009;29:6973–6981. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Sun Y, Asnicar M, Saha PK, Chan L, Smith RG. Grelino abliacija pagerina diabetinių, bet ne nutukusių ob/ob pelių fenotipą. Ląstelės metab. 2006;3:379–386. [PubMed]
  • Toshinai K, Date Y, Murakami N, Shimada M, Mondal MS, Shimbara T, Guan JL, Wang QP, Funahashi H, Sakurai T, Shioda S, Matsukura S, Kangawa K, Nakazato M. Grelino sukeltas maisto vartojimas yra tarpininkaujamas per oreksino kelias. Endokrinologija. 2003;144:1506–1512. [PubMed]
  • Tracy AL, Clegg DJ, Johnson JD, Davidson TL, Benoit SC. Melanokortino antagonistas AgRP, skirtas riebalams, bet ne (83–132), padidina apetitą reaguojantį angliavandenių kiekį, stiprintuvą. Pharmacol Biochem Behav. 2008;89:263–271. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Wren AM, Seal LJ, Cohen MA, Brynes AE, Frost GS, Murphy KG, Dhillo WS, Ghatei MA, Bloom SR. Grelinas padidina apetitą ir padidina maisto suvartojimą žmonėms. J Clin Endocrinol Metab. 2001;86:5992–5995. [PubMed]
  • Wren AM, Small CJ, Ward HL, Murphy KG, Dakin CL, Taheri S, Kennedy AR, Roberts GH, Morgan DGA, Ghatei MA, Bloom SR. Naujasis pagumburio peptidas grelinas skatina maisto suvartojimą ir augimo hormono sekreciją. Endokrinologija. 2000;141:4325–4328. [PubMed]
  • Zheng H, Lenard NR, Shin AC, Berthoud HR. Apetito kontrolė ir energijos balanso reguliavimas šiuolaikiniame pasaulyje: atlygio skatinamos smegenys nepaiso pasipildymo signalų. Int J Obes. 2009;33(2 priedas):S8–S13. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  • Zigmanas JM, Jonesas JE, Lee CE, Saper CB, Elmquist JK. Grelino receptoriaus mRNR ekspresija žiurkės ir pelės smegenyse. J Comp Neurol. 2006;494:528–548. [PubMed]