Clin Psychopharmacol Neurosci. 2012 gruodis; 10 (3): 136-43. doi: 10.9758 / cpn.2012.10.3.136. „Epub 2012“ gruodžio 20.
Šaltinis
Fishbergo neuromokslų skyrius ir Friedmano smegenų institutas, Mount Sinai medicinos mokykla, Niujorkas, JAV.
Abstraktus
Genų ekspresijos reguliavimas laikomas tikėtinu narkomanijos mechanizmu, atsižvelgiant į elgesio anomalijų, apibrėžiančių priklausomybės būseną, stabilumą. Pastarąjį ar du dešimtmečius priklausomybės procese dalyvavo daugybė transkripcijos faktorių - baltymų, kurie jungiasi prie specifinių genų reguliavimo sričių ir taip kontroliuoja jų ekspresijos lygius. Čia apžvelgiame didėjančius įrodymus, susijusius su kelių svarbių transkripcijos veiksnių, įskaitant Fos šeimos baltymą (ΔFosB), cAMP atsako elementą surišančiu baltymu (CREB) ir branduoliniu faktoriu kappa B (NFkB), be kitų, priklausomybe nuo narkotikų . Kaip bus matyti, kiekvienas veiksnys smegenų atlygio schemoje rodo labai skirtingą piktnaudžiavimo narkotikų reguliavimą ir savo ruožtu tarpininkauja skirtingais priklausomybės fenotipo aspektais. Dabartinės pastangos yra skirtos tikslinių genų, per kuriuos šie transkripcijos veiksniai sukelia savo funkcinį poveikį, diapazonui ir susijusiems molekuliniams mechanizmams suprasti. Šis darbas žada atskleisti iš esmės naują priklausomybės molekulinį pagrindą, kuris padės patobulinti priklausomybės ligų diagnostinius testus ir terapiją.
ĮVADAS
Tiriant priklausomybės transkripcinius mechanizmus, remiamasi hipoteze, kad genų ekspresijos reguliavimas yra vienas svarbus mechanizmas, pagal kurį lėtinis piktnaudžiavimo narkotikais poveikis sukelia ilgalaikius smegenų pokyčius, pagrindžiančius elgesio anomalijas, apibrėžiančias priklausomybės būklę.1,2) Išvada iš šios hipotezės yra ta, kad lėtiniu būdu skiriant lėtinius vaistus, pokyčiai, atsirandantys dėl kelių neurotransmiterių sistemų veikimo ir tam tikrų neuronų ląstelių tipų smegenyse, yra iš dalies susiję su genų ekspresijos pokyčiais.
Žinoma, ne visas narkotikų sukeltas nervų ir elgesio plastiškumas yra tarpininkaujamas genų ekspresijos lygyje, nes mes žinome, kokie svarbūs yra transliaciniai ir posttransliaciniai modifikacijos bei prekyba baltymais su priklausomybe susijusiems reiškiniams. Kita vertus, genų ekspresijos reguliavimas yra vienas pagrindinių mechanizmų ir greičiausiai bus ypač svarbus per visą gyvenimą trunkančioms anomalijoms, kurios apibūdina priklausomybę. Tiesą sakant, transkripcijos reguliavimas pateikia šabloną, ant kurio veikia šie kiti mechanizmai.
Pastarųjų ~ 15 metų darbas pateikė vis daugiau įrodymų apie genų ekspresijos vaidmenį priklausomybėje nuo narkotikų, nes buvo įtraukti keli transkripcijos veiksniai - baltymai, kurie jungiasi prie specifinių atsako elementų tikslinių genų promotoriaus regionuose ir reguliuoja tų genų raišką. narkotikų veikloje. Pagal šią schemą, parodytą Pav 1Piktnaudžiavimo narkotikai, atlikdami pradinius veiksmus sinapsėje, sukelia pokyčius neuronuose, kurie signalizuoja branduoliui ir reguliuoja daugelio transkripcijos veiksnių bei daugelio kitų tipų transkripcijos reguliavimo baltymų aktyvumą.3) A Šie branduoliniai pokyčiai palaipsniui ir palaipsniui kaupiasi pakartotinai veikiant vaistui ir lemia stabilius specifinių tikslinių genų ekspresijos pokyčius, kurie, savo ruožtu, prisideda prie ilgalaikių nervų funkcijos pokyčių, palaikančių priklausomybės būseną.1,4)
Šioje apžvalgoje daugiausia dėmesio skiriama keliems transkripcijos veiksniams, kurie, kaip įrodyta, vaidina svarbų vaidmenį priklausomybėje. Mes toliau sutelkiame dėmesį į narkotikų reguliuojamus transkripcijos veiksnius smegenų atlygio schemoje, smegenų srityse, kurios paprastai reguliuoja individo reakciją į natūralų atlygį (pvz., Maistą, lytį, socialinę sąveiką), tačiau yra sugadintos dėl ilgalaikio narkotikų poveikio, kad sukeltų priklausomybę. Ši smegenų atlygio schema apima dopaminerginius neuronus vidurio smegenų ventraliniame tegmentaliniame rajone ir keliuose jų inervuojamuose limbinių priekinių smegenų regionuose, įskaitant branduolio branduolį (ventral striatum), prefrontalinę žievę, amygdalą ir hipokampą. Kaip bus matyti, iki šiol didžioji dauguma transkripcijos priklausomybės mechanizmų tyrimų buvo sutelkta į accumbens branduolį.
ΔFosB
ΔFosB yra užkoduotas FosB geną ir dalijasi homologija su kitais Fos šeimos transkripcijos veiksniais, tarp kurių yra c-Fos, FosB, Fra1 ir Fra2.5) Šie „Fos“ šeimos baltymai heterodimerizuojasi su „Jun“ šeimos baltymais (c-Jun, JunB arba JunD), kad sudarytų aktyvaus aktyvatoriaus - 1 (AP1) transkripcijos faktorius, kurie jungiasi prie AP1 vietų, esančių tam tikrų genų promotoriuose, norėdami reguliuoti jų transkripciją. Šie Fos šeimos baltymai yra greitai ir laikinai indukuojami tam tikruose smegenų regionuose, ūmiai paskyrus daugelį narkotikų (Pav 2).2) Šie atsakai ryškiausiai pastebimi per branduolio branduolį ir nugarinę striatą, bet taip pat pastebimi keliose kitose smegenų srityse.6) Tačiau visi šie Fos šeimos baltymai yra labai nestabilūs ir per kelias valandas po vaisto skyrimo grįžta į bazinį lygį.
Labai skirtingi atsakai pasireiškia po ilgalaikio piktnaudžiavimo narkotikais (Pav 2). ΔFosB biochemiškai modifikuotos izoformos (Mr 35-37 kD) kaupiasi tose pačiose smegenų srityse po pakartotinio vaisto vartojimo, tuo tarpu visi „Fos“ šeimos nariai pasižymi tolerancija (tai yra sumažinta indukcija, palyginti su pradine vaisto ekspozicija).7-9) Toks ΔFosB kaupimasis buvo pastebėtas praktiškai visiems piktnaudžiaujantiems vaistams, nors skirtingi vaistai šiek tiek skiriasi santykiniu indukcijos laipsniu, matomu akumuliacinio branduolio branduolyje ir apvalkale, nugaros juosmeninėje dalyje ir kituose smegenų regionuose.2,6) Bent jau vartojant kai kuriuos piktnaudžiavimo vaistus, ΔFosB indukcija atrodo selektyvi vidurinių spygliuotų neuronų - tų, kurie daugiausia ekspresuoja D1 dopamino receptorius, - dalyse, esančiose striatų regionuose. 35-37 kD izoformos ΔFosB daugiausia dimerizuojasi su JunD, kad susidarytų aktyvus ir ilgalaikis AP-1 kompleksas šiuose smegenų regionuose,7,10) nors yra keletas įrodymų iš in vitro tyrimai, kad ΔFosB gali sudaryti homodimerus.11) Panašu, kad ΔFosB indukcija į akumuliatorių branduolį yra atsakas į farmakologines vaisto savybes Rep ir nesusijęs su savanorišku narkotikų vartojimu, nes gyvūnams, kurie savarankiškai vartoja kokainą ar gauna narkotikų sušvirkštus narkotikus, pasireiškia lygiavertis šio transkripcijos faktoriaus indukcija šiame smegenų regione.6) Priešingai, ΔFosB indukcijai tam tikruose kituose regionuose, pavyzdžiui, orbitofrontalinėje žievėje, reikalingas savanoriškas vaistų vartojimas.12)
35-37 kD ΔFosB izoformos kaupiasi lėtiniu vaisto poveikiu dėl jų ypač ilgo pusinės eliminacijos periodo.7-13) Dėl stabilumo ΔFosB baltymas išlieka neuronuose mažiausiai keletą savaičių po to, kai nutraukiama vaisto ekspozicija. Dabar mes žinome, kad šį stabilumą lemia du veiksniai: 1), kad ΔFosB nėra dviejų degrono domenų, esančių viso ilgio „FosB“ ir visų kitų „Fos“ šeimos baltymų C gale ir nukreipiančių tuos baltymus į greitą irimą, ir 2) ΔFosB fosforilinimas N-gale kazeino kinazės 2 ir galbūt kitų baltymų kinazių pagalba.14-16) ΔFosB izoformų stabilumas suteikia naują molekulinį mechanizmą, pagal kurį vaisto sukelti genų ekspresijos pokyčiai gali išlikti, nepaisant gana ilgų vaistų vartojimo nutraukimo laikotarpių. Todėl mes pasiūlėme, kad ΔFosB veiktų kaip ilgalaikis „molekulinis jungiklis“, kuris padeda inicijuoti ir palaikyti priklausomą būseną.1,2)
Vaidmuo priklausomybėje
Įžvalga apie ΔFosB vaidmenį priklausomybėje nuo narkotikų daugiausia susidarė tiriant bitransgenines peles, kuriose ΔFosB gali būti selektyviai indukuojamas suaugusių gyvūnų branduolio branduolyje ir nugaros juosmenyje.17) Svarbu tai, kad šios pelės selektyviai ekspresuoja ΔFosB ekspozicijoje dinarorfino turinčiuose vidutiniuose dygliuotuose neuronuose, kur manoma, kad vaistai indukuoja baltymą. ΔFosB per daug ekspresuojančioms pelėms pasireiškė padidėjęs lokomotorinis atsakas į kokainą po ūmaus ir lėtinio vartojimo.17) Jie taip pat rodo padidėjusį jautrumą kokaino ir morfino teigiamai veikiantiems kondicionieriams,17-19) ir savarankiškai vartoti mažesnes kokaino dozes, o dirbti su kokainu - sunkiau, nei pakratai, kurie neekspresuoja ΔFosB.20) Be to, per didelis ΔFosB ekspresija branduolių akumuliatoriuose padidina fizinės opiatų priklausomybės vystymąsi ir skatina opiatų analgetiko toleranciją.19) Atvirkščiai, ΔFosB ekspresuojančios pelės yra normalios keliose kitose elgesio srityse, įskaitant erdvinį mokymąsi, įvertintą „Morris“ vandens labirinte.17) Konkretus nukrypimo nuo xFosB nukreipimas į akumuliacinius branduolius, naudojant viruso sukeltą genų perdavimą, davė lygiaverčius duomenis.19)
Atvirkščiai, nukreipus ΔFosB ekspresiją į enkepahlino turinčius vidutinius smaigalius neuronus, esančius akumuliaciniuose branduoliuose ir nugaros juosmenyje (tie, kurie daugiausia ekspresuoja D2 dopamino receptorius) skirtingose bitransgeninių pelių eilutėse, dauguma šių elgesio fenotipų neįrodo.19) Skirtingai nuo per didelio ΔFosB ekspresijos, mutacinio Jun baltymo (ΔcJun arba ΔJunD), kuris veikia kaip dominuojantis neigiamas AP1 tarpininkaujančios transkripcijos antagonistas, ekspresija naudojant bitransgenines peles ar viruso sukeltą genų perdavimą sukelia priešingą elgesio poveikį.18,19,21) Šie duomenys rodo, kad ΔFosB indukcija branduolio accumbens dinorfinų turinčiuose vidutiniuose dygliuotuose neuronuose padidina gyvūno jautrumą kokainui ir kitiems piktnaudžiavimo narkotikams ir gali būti santykinai ilgalaikio jautrinimo vaistams mechanizmas.
ΔFosB indukcijos vaidmuo kituose smegenų regionuose yra mažiau suprantamas. Naujausi tyrimai parodė, kad ΔFosB indukcija orbitofrontalinėje žievėje sukelia toleranciją kai kuriems ūminio kokaino poveikio kognityviniams sutrikimams, kurie gali dar labiau skatinti narkotikų vartojimą.12,22)
ΔFosB tiksliniai genai
Kadangi ΔFosB yra transkripcijos veiksnys, manoma, kad jis sukuria šį įdomų elgesio fenotipą branduolyje, sustiprindamas ar slopindamas kitų genų ekspresiją. Naudodami mūsų indukuojamas, bitransgenines peles, kurios per daug ekspresuoja ΔFosB arba dominuojantį neigiamą ΔcJun, ir analizuodami Affymetrix lustų genų ekspresiją, mes parodėme, kad - branduolyje accumbens in vivo -ΔFosB pirmiausia veikia kaip transkripcijos aktyvatorius, tuo tarpu jis tarnauja kaip mažesnio geno pogrupio represorius.18) Šis tyrimas taip pat parodė, koks yra dominuojantis ΔFosB vaidmuo tarpininkaujant genominiam kokaino poveikiui: ΔFosB yra susijęs su beveik ketvirtadaliu visų genų, kuriuos lėtinio kokaino paveikia branduolių akumuliatoriai.
Šis požiūris į genomą, lygiagrečiai tiriant kelis genus kandidatus, nustatė kelis taikinius ΔFosB genus, kurie prisideda prie jo elgesio fenotipo. Vienas genas kandidatas yra GluA2, AMPA gliutamato receptoriaus subvienetas, kurį branduolio akumuliatoriuose indukuoja ΔFosB.17) Kadangi GluA2 turintys AMPA kanalai turi mažesnį bendrą laidumą, palyginti su AMPA kanalais, kuriuose nėra šio subvieneto, kokaino ir ΔFosB tarpininkaujantis GluA2 reguliavimas branduolio akumuliatoriuose bent jau iš dalies galėtų būti susijęs su sumažėjusiomis glutamaterginėmis reakcijomis, pastebėtomis šie neuronai po lėtinio vaisto poveikio.23)
Kitas kandidato taikytinas ΔFosB genas branduolio akumuliatoriuose yra opioidinis peptidas - dinorfinas. Prisiminkite, kad ΔFosB sukelia piktnaudžiavimo vaistai, ypač dynorfinus gaminančiose ląstelėse šiame smegenų regione. Piktnaudžiavimo vaistai daro sudėtingą poveikį dynorfinų ekspresijai, tačiau padidėja arba sumažėja priklausomai nuo naudojamų gydymo sąlygų. Mes parodėme, kad ΔFosB indukcija slopina dinorfinų geno ekspresiją branduolio akumuliatoriuose.19) Manoma, kad dynorfinas suaktyvina κ opioidinius receptorius ant ventralinio testo srities (VTA) dopamino neuronų ir slopina dopaminerginį perdavimą ir taip sumažina atlygio mechanizmus.24,25) Taigi ΔFosB dinorfino ekspresijos slopinimas galėtų prisidėti prie atlygio mechanizmų, kuriuos veikia šis transkripcijos faktorius, sustiprinimo. Dabar yra tiesioginių įrodymų, patvirtinančių dinamorfino genų represijų dalyvavimą ΔFosB elgesio fenotipe.19)
Vis dar buvo nustatyta papildomų taikinių genų. ΔFosB slopina c-Fos genas, padedantis sukurti molekulinį perėjimą - nuo kelių trumpalaikių Fos šeimos baltymų indukcijos po ūmaus vaisto poveikio iki vyraujančio ΔFosB kaupimosi po lėtinio vaisto poveikio - minėta anksčiau.9) Priešingai, nuo ciklino priklausoma kinazė-5 (Cdk5) kaupiasi branduoliuose dėl lėtinio kokaino, o poveikis, kurį mes parodėme, yra ΔFosB.18,21,26) Cdk5 yra svarbus ΔFosB taikinys, nes jo ekspresija buvo tiesiogiai susijusi su dendritinio stuburo tankio padidėjimu branduolių akumuliatoriuose, vidutinio smaigalio neuronuose,27,28) branduolyje esančius akumuliatorius, susijusius su lėtiniu kokaino vartojimu.29,30) Iš tiesų pastaruoju metu įrodyta, kad ΔFosB indukcija yra būtina ir pakankama kokaino sukeltam dendritiniam stuburo augimui.31)
Neseniai mes panaudojome chromatino imunoprecipitaciją (ChIP), po to - promotoriaus lustą (ChIP-lustą) arba gilų sekos nustatymą (ChIP-seq), kad galėtume toliau identifikuoti FosB taikinius.32) Šie tyrimai kartu su anksčiau cituotomis DNR ekspresijos masyvais pateikia daugybę papildomų genų, į kuriuos tiesiogiai ar netiesiogiai gali nukreipti ΔFosB, sąrašą. Tarp šių genų yra papildomi neuromediatorių receptoriai, baltymai, dalyvaujantys pre- ir postsinapsinėje funkcijoje, daugybė jonų kanalų ir tarpląstelinių signalinių baltymų tipų, baltymai, reguliuojantys neuronų citoskeletą ir ląstelių augimą, ir daugybė baltymų, reguliuojančių chromatino struktūrą.18,32) Reikia patvirtinti visus šiuos baltymus kaip bona fide kokaino, veikiančio per ΔFosB, taikinius ir nustatyti tikslų vaidmenį, kurį vaidina kiekvienas baltymas tarpininkaujant sudėtiniams kokaino veikimo nervų ir elgesio aspektams.
CREB
Ciklinis AMP atsako elementą surišantis baltymas (CREB) yra vienas iš labiausiai tirtų neuromokslų transkripcijos veiksnių ir jis yra susijęs su įvairiais nervų plastiškumo aspektais.33) Tai formuoja homodimerus, kurie gali jungtis su genais prie ciklinio AMP atsako elementų (CRE), tačiau pirmiausia aktyvuoja transkripciją po to, kai ji yra fosforilinta Ser133 (bet kuri iš kelių baltymų kinazių), kas leidžia pasisavinti CREB surišantį baltymą (CBP), kuris tada skatina transkripciją. CREB aktyvacija slopina tam tikrų genų ekspresiją.
Tiek psichostimuliatoriai (kokainas ir amfetaminas), tiek opiatai padidina CREB aktyvumą ūmiai ir chroniškai - matuojant padidėjusiu fosfo-CREB (pCREB) arba reporterio geno aktyvumu CRE-LacZ transgeninėse pelėse - daugelyje smegenų regionų, įskaitant branduolį accumbens ir nugaros striatumą. .34-36) Šios aktyvacijos laikas labai skiriasi nuo parodytos ΔFosB. Kaip pavaizduota Pav 2, CREB aktyvinimas yra labai trumpalaikis reaguojant į ūmų vaistą ir grįžta į normalų lygį per dieną ar dvi po nutraukimo. Be to, CREB aktyvacija vyksta ir dinorfinų, ir enkefalino potipiuose, turinčiuose vidutinius spyglių neuronus.34) Priešingai nei kokainas ir opiatai, CREB reaguoja į sudėtingesnius ir įvairesnius narkotikus.4)
Eksperimentai, susiję su indukuojamu CREB arba dominuojančio neigiamo mutanto per daug ekspresija bitransgeninėse pelėse arba su virusiniais vektoriais, parodė, kad CREB aktyvacija - ryškiai priešingai nei ΔFosB - branduolyje accumbens sumažina naudingą kokaino ir opiatų poveikį, vertinant vietoje tyrimai.37,38) Nepaisant to, CREB aktyvacija, kaip ir ΔFosB indukcija, skatina vaisto vartojimą savarankiškai.39) Svarbu tai, kad dominuojančio neigiamo CREB poveikis buvo patvirtintas sukeliant endogeninio CREB aktyvumo numušimą.39-41) Įdomu tai, kad abu transkripcijos veiksniai lemia savanorišką vaistų vartojimą; spėjama, kad ΔFosB tai daro per teigiamą armavimą, tuo tarpu CREB sukelia šį fenotipą per neigiamą armavimą. Pastaroji galimybė atitinka nemažus įrodymus, kad CREB veikla šiame smegenų regione sukelia neigiamą emocinę būseną.34,42)
CREB aktyvumas buvo tiesiogiai susijęs su branduolio kaupimosi ir vidutinio smaigalio neuronų funkciniu aktyvumu. Padidėja CREB raiška, o dominuojančiam-neigiamam CREB sumažėja vidutinio smaigalio neuronų elektrinis jaudrumas.43) Galimi skirtumai tarp dinorfino ir enkefalino neuronų dar nebuvo ištirti. Pastebėjimas, kad viruso sukelta per didelė K ekspresija+ kanalo subvienetas branduolio akumuliatoriuose, dėl kurio sumažėja vidutinis smaigaus neurono jaudrumas, sustiprėja lokomotorinės reakcijos į kokainą, todėl CREB rodo pertrauką įjautrinant elgesį su kokainu padidinant neuronų jaudrumą.43)
Piktnaudžiavimo vaistai aktyvina CREB keliose smegenų srityse už branduolio branduolio ribų. Vienas iš pavyzdžių yra ventralinė pagrindinė sritis, kurioje lėtinis kokaino ar opiatų vartojimas aktyvina CREB dopaminerginiuose ir nedopaminerginiuose neuronuose. Panašu, kad šis poveikis skatina ar susilpnina naudingą narkotikų, susijusių su piktnaudžiavimu, reakcijas, atsižvelgiant į paveiktos ventralinės galvos srities subregioną.
Taikant tiek atvirojo tipo, tiek kandidato genų metodus, buvo nustatyta daugybė CREB taikinių genų, kurie tarpininkauja šiam ir kitam poveikiui branduolio viduryje esantiems nerviniams neuronams ir susidarančiam CREB elgesio fenotipui.18,32,36) Ryškūs pavyzdžiai yra opioidinis peptidas dinorfinas,37) kuris maitina ir slopina dopaminerginį signalą į akumuliacinį branduolį, kaip minėta anksčiau.24,25) Taip pat yra susiję tam tikri glutamato receptorių subvienetai, tokie kaip GluA1 AMPA subvienetas ir GluN2B NMDA subvienetas, taip pat K+ ir Na+ jonų kanalų subvienetai, kurie kartu turėtų kontroliuoti branduolio akumuliatorių ląstelių jaudrumą.43,44) BDNF yra dar vienas CREB taikinys genas branduolių akumuliatoriuose, be to, jis taip pat yra tarpininkaujantis CREB elgesio fenotipui.35) Taip pat įrodyta, kad CREB indukcija prisideda prie kokaino sukeltų dendritinių stuburų branduolio branduolio vidutinio storumo neuronuose.45)
CREB yra tik vienas iš kelių susijusių baltymų, kurie suriša CRE ir reguliuoja tikslinių genų transkripciją. Keli ciklinio AMP atsako elemento moduliatoriaus (CREM) geno produktai reguliuoja transkripciją, kurią vykdo CRE. Kai kurie produktai (pvz., CREM) yra transkripcijos aktyvatoriai, o kiti (pvz., ICER arba indukuojamas ciklinis AMP represorius) veikia kaip endogeniniai dominuojantys neigiami antagonistai. Be to, keli aktyvuojantys transkripcijos veiksniai (ATF) gali iš dalies paveikti genų ekspresiją, jungdamiesi prie CRE vietų. Naujausi tyrimai šiuos įvairius transkripcijos veiksnius įtraukė į reakcijas į vaistus. Amfetaminas sukelia ICER ekspresiją accumbens branduolyje, o per didelis ICER ekspresija šiame regione, naudojant viruso sukeltą genų perdavimą, padidina gyvūno jautrumą elgesiui su vaistu.46) Tai atitinka aukščiau nurodytus atradimus, kad vietinis dominuojančių neigiamų CREB mutantų ekspresija arba vietinis CREB numušimas daro panašų poveikį. Amfetaminas taip pat indukuoja ATF2, ATF3 ir ATF4 branduolių akumuliatoriuose, tuo tarpu ATF1 ar CREM jokio poveikio nepastebima.47) ATF2 per didelis ekspresija šiame regione, kaip ir ICER, padidina elgesio reakcijas į amfetaminą, tuo tarpu ATF3 arba ATF4 perdėta raiška turi priešingą poveikį. Labai mažai žinoma apie šių įvairių CREB šeimos baltymų tikslinius genus, tai yra svarbi būsimų tyrimų kryptis.
NFκB
Branduolinis faktorius-KB (NFκB), transkripcijos faktorius, kurį greitai suaktyvina įvairūs dirgikliai, geriausiai tiriamas dėl jo vaidmens uždegime ir imuninės reakcijos. Neseniai įrodyta, kad tai yra svarbus sinapsinis plastiškumas ir atmintis.48) Kartotinai vartojant kokainą, NFκB susidaro akumuliatorių branduolyje,49,50) kur to reikia norint, kad kokainas sukeltų branduolio branduolio dendritinius stuburus vidutinio dydžio spygliuotus neuronus. Tokia NFκB indukcija prisideda prie jautrinančio vaisto poveikio jautrinimo.50) Pagrindinis dabartinių tyrimų tikslas yra nustatyti taikinius genus, per kuriuos NFKB sukelia šį ląstelių ir elgesio plastiškumą.
Įdomu tai, kad kokaino NFκB indukcija yra tarpininkaujama per ΔFosB: ΔFosB perdėta ekspresija branduolių akumuliatoriuose sukelia NFκB, o dominuojančių ΔcJun neigiamų reikšmių blokavimas blokuoja kokaino transkripcijos faktoriaus indukciją.21,49) NFkB reguliavimas ΔFosB iliustruoja sudėtingas transkripcines kaskadas, susijusias su vaisto veikimu. Taip pat NFKB buvo susijęs su kai kuriais neurotoksiniais metamfetamino poveikiais striatinėse srityse.51) NFκB vaidmuo vidutinio smailaus neurono spinogenezėje neseniai išplėstas į streso ir depresijos modelius,52) išvados yra ypač svarbios atsižvelgiant į depresijos ir priklausomybės gretutinius susirgimus ir gerai ištirtą streso sukeltą recidyvo prie narkotikų atvejį.
MEF2
Buvo rastas miocitus stiprinantis faktorius 2 (MEF2) dėl jo vaidmens kontroliuojant širdies miogenezę. Dar rečiau, kad MEF2 buvo susijęs su smegenų funkcija.53) Kelios MEF2 izoformos yra ekspresuojamos smegenyse, įskaitant branduolio akumuliatoriuose esančius vidutinius smaigalius neuronus, kur jie sudaro homo- ir heterodimerus, kurie gali suaktyvinti arba slopinti genų transkripciją, priklausomai nuo jų įdarbinamų baltymų pobūdžio. Neseniai atliktame darbe aprašomas galimas mechanizmas, kuriuo lėtinis kokainas slopina MEF2 aktyvumą branduolyje iš dalies per D1 receptorius, priklausančius nuo CAMP, slopinantį kalcineuriną, Ca2.+-priklausoma baltymų fosfatazė.28) Gali būti įtrauktas ir Cdk5 kokaino reguliavimas, kuris taip pat yra kokaino ir ΔFosB taikinys, kaip minėta anksčiau. Šis MEF2 aktyvumo sumažėjimas reikalingas kokaino indukcijai dendritiniams stuburokams ant vidutinio smaigalio neuronų. Svarbus dabartinio darbo tikslas yra nustatyti tikslinius genus per „MEF2“.
ATEITIES NUOSTATOS
Aukščiau aptarti transkripcijos veiksniai yra tik keli iš daugelio, kurie per daugelį metų buvo ištirti priklausomybės modeliuose. Kiti priklausomybės atvejai yra gliukokortikoidų receptorius, branduolio akumuliatorių 1 transkripcijos faktorius (NAC1), ankstyvojo augimo reakcijos faktoriai (EGR) ir signalo keitikliai bei transkripcijos aktyvatoriai (STAT).1,2) Kaip vienas iš pavyzdžių, gliukokortikoidų receptoriai yra reikalingi dopaminocepciniuose neuronuose, norintiems ieškoti kokaino.54) Būsimų tyrimų tikslas yra gauti išsamesnį vaizdą apie transkripcijos veiksnius, sukeltus branduolio akumuliatoriuose ir kituose smegenų apdovanojimų regionuose, reaguojant į lėtinį piktnaudžiavimo narkotikais poveikį, ir apibrėžti tikslinius genus, kuriuos jie veikia, kad galėtų prisidėti prie elgesio fenotipo. priklausomybės.
Kitas svarbus būsimų tyrimų tikslas yra apibrėžti tikslias molekulines pakopas, kuriomis šie įvairūs transkripcijos veiksniai reguliuoja jų taikinius. Taigi, mes dabar žinome, kad transkripcijos veiksniai kontroliuoja genų ekspresiją, pasitelkdami į jų taikinius genus serijų koaktyvatorių arba korepressorių baltymų, kurie kartu reguliuoja chromatino struktūrą aplink genus ir paskesnį RNR polimerazės II komplekso, kuris katalizuoja, įdarbinimą. transkripcija.4) Pavyzdžiui, naujausi tyrimai parodė, kad ΔFosB gebėjimas indukuoti cdk5 geną atsiranda kartu su histono acetiltransferazės ir susijusių chromatino baltymų rekonstravimo baltymų pritraukimu į geną.55) Priešingai, ΔFosB gebėjimas atremti c-Fos geną atsiranda kartu su histono deacetilazės ir, tikėtina, kelių kitų represinių baltymų, tokių kaip represinė histono metiltransferazė (Pav 3).2,9,31) Atsižvelgiant į tai, kad šimtai chromatiną reguliuojančių baltymų greičiausiai yra įdarbinami į geną kartu su jo aktyvinimu ar slopinimu, šis darbas yra tik ledkalnio viršūnė su didžiuliu informacijos kiekiu, kurį reikia sužinoti per ateinančius metus.
Kadangi padaryta pažanga nustatant tikslinius vaistus reguliuojamų transkripcijos veiksnių genus, ši informacija pateiks vis išsamesnį šabloną, kurį galima naudoti vadovaujantis narkotikų atradimo pastangomis. Tikimasi, kad bus sukurtas naujas gydymas vaistais, remiantis šiomis dramatiškomis pažintimis dėl priklausomybės transkripcijos mechanizmų.