Ilgalaikė didelio riebalų dieta sumažina dopamino pakartotinį įsisavinimą nesikeičiant DAT genų ekspresijos (2013)

  • Jackson J. Cone,
  • Elena H. Chartoff,
  • David N. Potter,
  • Stephanie R. Ebner,
  • Mitchell F. Roitman

Abstraktus

Dėl dietos sukeltos nutukimo (DIO) atsiradimas gali stipriai pakeisti daugelį dopamino signalizacijos aspektų, įskaitant dopamino transporterio (DAT) ekspresiją ir dopamino pakartotinį įsisavinimą. Tačiau mitybos sukeltų DAT raiškos ir funkcijos pokyčių trukmė ir tai, ar šie pokyčiai priklauso nuo DIO vystymosi, lieka neišspręsti. Čia mes šėrėme žiurkėms didelį (HFD) arba mažą (LFD) riebalų kiekį 2 arba 6 savaitėms. Pasibaigus dietai, žiurkės buvo anestezuotos uretanu ir striatalu DAT funkcija buvo vertinama elektriniu būdu stimuliuojant dopamino ląstelių kūnus ventralinio tegmental srityje (VTA) ir registruojant gautus dopamino koncentracijos pokyčius ventralinėje stiatumoje, naudojant greitojo nuskaitymo ciklinę voltammetriją. Mes taip pat kiekybiškai įvertinome HFD poveikį su membrana susijusiai DAT striatų ląstelių frakcijoms iš atskiros žiurkių grupės, veikiant tokiam pačiam dietos protokolui. Pažymėtina, kad nė viena iš mūsų gydymo grupių nesiskyrė kūno svorio. Po 6, bet ne 2 savaitės dietos ekspozicijos, HFD žiurkėms nustatyta, kad HFD žiurkių dopamino atpirkimo greitis buvo nepakankamas. Be to, sukeltas dopamino kiekis po farmakologinio kokaino poveikio HFD reikšmingai susilpnėjo, palyginti su LFD žiurkėmis. „Western blot“ analizė parodė, kad dietos poveikis visam DAT baltymui nebuvo. Tačiau 6 savaitės HFD ekspozicija žymiai sumažino 50 kDa DAT izoformą sinaptosominėje membranoje susijusioje frakcijoje, bet ne frakcijoje, susijusioje su perdirbimo endosomomis. Mūsų duomenys suteikia papildomų įrodymų dėl dietos sukeltų dopamino reabsorbcijos pokyčių nepriklausomai nuo DAT gamybos pokyčių ir parodo, kad tokie pokyčiai gali pasireikšti be DIO vystymosi. 

citavimo: „Cone JJ“, „Chartoff EH“, „Potter DN“, „Ebner SR“, „Roitman MF“ (2013) ilgai trunkanti mityba mažina dopamino pakartotinį įsisavinimą be pakeitimo DAT genų ekspresijos. PLOS ONE 8 (3): e58251. doi: 10.1371 / journal.pone.0058251

Redaktorius: Sidney Arthur Simon, Duke universiteto medicinos centras, Jungtinės Amerikos Valstijos

Gauta: Spalis 26, 2012; Priimta: Vasaris 5, 2013; Paskelbta: Kovo 13, 2013

Autorinės teisės: © 2013 Cone et al. Tai atviros prieigos straipsnis, platinamas pagal „Creative Commons Attribution License“ sąlygas, leidžiančias neribotam naudojimui, platinimui ir atgaminimui bet kurioje terpėje, jei įskaitomas originalus autorius ir šaltinis.

Finansavimas: Aprašytas projektas buvo paremtas Nacionaliniais sveikatos institutais (NIH), suteikiančiu DA025634 (MFR) ir T32-MH067631 iš biomedicinos neurologijos mokymo programos (JJC). Papildomą paramą suteikė Nacionalinis mokslinių tyrimų išteklių centras ir Nacionalinis vertimo mokslų centras, NIH, suteikiant UL1RR029877 (JJC) ir Čikagos biomedicininio konsorciumo paramą iš „Searle“ fondų „The Chicago Community Trust“ (JJC). Už turinį atsako tik autoriai ir nebūtinai reiškia oficialią NIH ar Čikagos biomedicinos konsorciumo nuomonę. Finansuotojai neturėjo jokio vaidmens studijų planavimo, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimo skelbti ar rengti rankraštį.

Konkuruojantys interesai: Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojančių interesų.

Įvadas

Antsvoris ir nutukimas sudaro vis didesnę JAV ir pasaulio gyventojų dalį [1], [2]. Nors yra daug būdų nutukimui, galbūt viena iš didžiausių grėsmių sveikam kūno svoriui yra labai skanių, tankiai kalorijų turinčių maisto produktų paplitimas ir vartojimas. [3]. Iš tiesų, maisto produktų energijos tankis (kcal / g) stipriai prisideda prie antsvorio ir nutukimo suaugusiems [4], [5]. Skanūs maisto produktai sukelia dopamino išsiskyrimą tiek žmonių, tiek ir ne gyvūnų gyvūnų striatume [6], [7], [8], [9] ir subjektyvūs mėsingumo rezultatai maisto produktuose teigiamai koreliuoja su nervinio atsako stiprumu ventralinėje stiatumoje [10]. Taigi, atrodo, kad dopaminas ir striatumas prisideda prie energijos tankių maisto produktų pasirinkimo. Pastaruoju metu buvo įrodyta, kad mitybos skirtumai gali sukelti vienalaikį striatrijos grandinės ir į maistą nukreipto elgesio pokyčius [11]. Tačiau turbūt mažiau vertinama tai, kad vis daugiau įrodymų, kad maisto produktų suvartojimo skirtumai, ypač riebalų atžvilgiu, gali turėti grįžtamąjį ryšį ir pakeisti striatalo dopamino signalizaciją.

Striatyvinis dopamino signalizavimas yra reguliuojamas keliais veiksniais, įskaitant dopamino gamybą fermento tirozino hidroksilazės, pre- ir postsinaptinių dopamino receptorių ir presinaptinių dopamino transporterių (DAT), kurie visi buvo susiję su nutukimu [12], [13]. DAT numerio ar funkcijos pakeitimai gali pakeisti išlaisvinto dopamino poveikio sferą ir dėl to striatų funkciją [14], [15]. Įrodyta, kad insulinas, atpalaiduojantis vartojant maistą, veikia DAT funkciją [16], [17]. Taigi, DAT yra vienas iš galimų dietos poveikio kandidatų.

Pastaruoju metu buvo ištirti ryšiai tarp nutukimo ir DAT prieinamumo bei dietos sukeltų DAT funkcijos pokyčių. Kūno masės indeksas (KMI) neigiamai koreliuoja su DAT prieinamumu žmogaus striatume [18]. DAT įpareigojimas, taigi ir prieinamumas, yra sumažintas didelio riebumo (HFD) šeriamų pelių [19]. HFD sukeltas nutukimas (DIO) yra susijęs su DAT sumažėjusiu dopamino atpirkimo greičiu žiurkėms [20]. Apskritai šie tyrimai rodo, kad HFD vartojimu nustatytas nutukimas gali stipriai paveikti kritinius presinaptinius dopamino signalizacijos reguliatorius, ypač DAT. Tačiau dietos sukeltų dopamino signalizacijos pokyčių trukmė ir tai, ar DIO vystymasis yra būtinas, kad pasikeistų manifestas, nežinoma. Mes ištyrėme DAT funkciją, sukeldami dopamino išsiskyrimą į ventralinę striatumą ir kiekybiškai įvertindami žiurkių reabsorbcijos greitį, naudojant greitojo nuskaitymo ciklinę voltammetriją. Norint nustatyti, ar sumažėjęs dopamino atpirkimas buvo sumažėjęs DAT geno ekspresija, mes matavome DAT mRNR ventralinio tegmental srityje ir materia nigra naudojant realaus laiko qRT-PCR. Be to, mes naudojome biocheminę frakcionavimo procedūrą ir Western blot analizę striatalų DAT lygių tyrimui neapdorotose sinaptosominėse ir endosominėse membranose. Žiurkės turėjo 2 arba 6 savaičių didelės arba mažai riebalinės dietos, tačiau visi matavimai buvo atlikti be DIO. Mūsų rezultatai rodo, kad ilgalaikis HFD vartojimas, nepriklausomai nuo DIO, sumažina dopamino atpirkimo greitį ventralinėje stiatumoje, nesumažinant DAT ekspresijos.

Medžiagos ir metodai

Etikos ataskaita

Šis tyrimas buvo atliktas griežtai laikantis Nacionalinių sveikatos institutų laboratorinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo rekomendacijų. Protokolą patvirtino Ilinojaus universiteto Čikagos Gyvūnų priežiūros komitetas. Visa operacija buvo atlikta pagal uretano anesteziją, ir visos pastangos buvo skirtos sumažinti kančias.

Tematika

Buvo panaudoti standartiniai vyrų Sprague – Dawley žiurkės (n = 67), maždaug 2 mėnesių amžiaus ir sveriantys 225 – 275 g. Gyvūnai buvo atskirai laikomi plastikiniuose narveliuose (26.5 × 50 × 20 cm) kontroliuojamos aplinkos (22 ° C) ir drėgmės (30%) aplinkoje, naudojant 12∶12 h šviesą: tamsus ciklas (šviesos įsijungia 07∶00 h). Žiurkės aklimatizavosi po vieną savaitę ad libitum prieiga prie standartinės laboratorijos ir vandens.

Maisto ir kūno masės matavimai

Po aklimatizacijos žiurkės buvo sveriamos ir atsitiktinai priskiriamos 1 grupėms 4 grupėms, kurios buvo subalansuotos pradiniam kūno svoriui. Dvi grupės buvo palaikomos mažai riebalų turinčioje dietoje (LFD; mokslinių tyrimų dietos, New Brunswick, NJ; D12450B; 10% kilokalorijų iš riebalų (3.85 kcal / g)). Kitos 2 grupės buvo palaikomos HFD (mokslinių tyrimų dietos; D12492; 60% kilokalorijų iš riebalų (5.24 kcal / g)). Kiekvienai dietai žiurkės buvo laikomos 2 arba 6 savaitėmis (wks). Taigi 4 grupės buvo: LFD-2 wk (n = 18), HFD-2 wk (n = 16), LFD-6 wk (n = 16) ir HFD-6 wk (n = 17). Visos grupės turėjo ad libitum prieiga prie vandens. Maisto suvartojimas ir kūno masės matavimai atlikti tris kartus, o duomenys pateikiami atskirai žiurkėms, kurioms buvo atliekami voltametriniai įrašai arba DAT baltymų / pranešimų analizė.

Chirurginės procedūros ir dopamino matavimai

Po dietos ekspozicijos įrašams buvo paruoštas pogrupis žiurkių, kurios nesiskyrė kūno svoriu (LFD-2 sav. (N = 8), HFD-2 sav. (N = 6), LFD-6 sav. (N = 6). ir HFD-6 sav. (n = 7)) taikant anesteziją uretanu (1.5 g / kg) [kaip 9,21]. Kreipiamoji kaniulė (Bioanalytical Systems, West Lafayette, IL) buvo pastatyta virš ventralinio striatumo (1.3 mm priekinė, 1.5 mm šoninė nuo bregmos), chloruotojo sidabro vielos (Ag / AgCl) etaloninis elektrodas buvo implantuotas priešingojoje žievėje ir abu buvo pritvirtintas prie kaukolės nerūdijančio plieno varžtais ir dantų cementu. Mikromanipuliatorius su anglies pluošto elektrodu (CFE) buvo įkištas į kreipiamąją kaniulę, o elektrodas nuleistas į ventralinį striatumą. CFE ir etaloninis elektrodas buvo prijungti prie pakylos, o CFE potencialas buvo nuskaitytas nuo −0.4 iki +1.3 V (palyginti su Ag / AgCl) ir atgal (400 V / s; 10 Hz). Bipolinis stimuliuojantis elektrodas („Plastics One“, „Roanoke“, VA) po to palaipsniui nuleistas į ventralinį veiksmentinį plotą / „substantia nigra pars compacta“ (VTA / SNpc; 5.2 mm užpakalinis, 1.0 mm šoninis ir iš pradžių 7.0 mm ventralinis nuo bregmos) 0.2 mm žingsneliais. . Kiekvienu prieaugiu buvo pateiktas srovės impulsų traukinys (60 impulsų, 4 ms pulse, 60 Hz, 400 µA). Kai stimuliuojantis elektrodas yra VTA / SNpc, o CFE yra striatume, stimuliacija patikimai sukelia dopamino išsiskyrimą - išgaunamą iš voltamperinių duomenų, naudojant pagrindinę komponentų analizę [9], [22]; ir po kiekvieno CFE kalibravimo, po kiekvieno eksperimento, konvertuojama į koncentraciją [23]. Stimuliuojančiojo elektrodo padėtis buvo optimizuota maksimaliam išleidimui. Tada CFE buvo leista subalansuoti 10 min. Prieš pradedant eksperimentą. Dopamino išsiskyrimą sukėlė VTA / SNpc elektrinė stimuliacija (tie patys parametrai, kaip aukščiau), o gautieji dopamino koncentracijos pokyčiai buvo apskaičiuoti nuo -5 s iki 10 s, palyginti su stimuliacija. Nedelsiant po stimuliacijos žiurkėms buvo įšvirkšta kokaino hidrochlorido, ištirpinto 0.9% fiziologiniame tirpale (10 mg / kg ip), o 10 min vėliau, stimuliacija buvo pakartota. Taikomosios įtampos, duomenų gavimas ir analizė atlikti naudojant programinę įrangą, parašytą „LabVIEW“ („National Instruments“, „Austin“, „TX“, JAV) [22].

Dopamino atpirkimas

Dopamino reabsorbcija buvo modeliuota naudojant Demon Voltammetry analizės programinę įrangą (24; Wake Forest University, Winston-Salem NC). Čia mes pranešame apie pastovaus pastovumo tau kaip mūsų dopamino atpirkimo greičio matą. Tau gaunamas iš eksponentinės kreivės, kuri apima didžiausią dopamino klirenso kreivę ir yra labai koreliuojama (r = .9899) su Km- akivaizdus dopamino afinitetas DAT [24]. Siekiant nustatyti kokaino poveikį didžiausios dopamino koncentracijos lygiui, palyginome prieš ir po vartojimo gautas vertes (% pokytis).

Histologija

Po kiekvieno įrašymo nerūdijančio plieno elektrodas (AM Systems #571500, Sequim, WA) buvo sumažintas iki tokio pat gylio, kaip CFE ir padarytas pažeidimas (10 µA, 4 s), kad būtų pažymėta įrašymo vieta. Smegenys buvo pašalintos ir saugomos 10% formalinu. Šviesos mikroskopija buvo naudojama pažeistos vietos nustatymui ant koroninių sekcijų (50 µm) per striatum. Visi čia įrašyti įrašai buvo atlikti ventralinėje stiatumoje [25].

Striatalų audinio subcellulinė frakcionacija

Žiurkės (LFD-2 wk, HFD-2 wk, LFD-6 wk ir HFD-6 wk; n = 10 / grupė; kūno svorio skirtumai nebuvo nužudyti). Biocheminis frakcionavimas buvo atliktas naudojant protokolą, aprašytą [26], su nedideliais pakeitimais. Smegenys buvo greitai pašalintos, sušaldytos izopentane ir supjaustytos ant kriostato (HM505E, Microm, Walldorf, Vokietija, -20 ° C), kol pasieks striatum. Dvišalis 1-mm3 štampai per ventralinę striatumą (vidutinis audinio svoris: 15.2 mg) 20 s homogenizuoti 0.8 ml ledo šaltoje TEVP (10 mM Tris bazė, 5 mM NaF, 1 mM Na3VO41 mM EDTA, 1 mM EGTA, pH 7.4) + 320 mM sacharozės buferis. Išsaugota 100 µl bendrojo homogenato (H) alikvotinė dalis. Likusi H dalis centrifuguojama 800 × g 10 min., Esant 4 ° C temperatūrai. Granulė (P1, branduoliai ir didelės šiukšlės) buvo suspenduota 0.2 ml TEVP buferyje ir išsaugota. Supernatantas (S1) buvo pašalintas ir patalpintas į švarų vamzdelį ant ledo. S1 buvo centrifuguojamas 9200 × g 15 min. 4 ° C temperatūroje, kad susidarytų granulės (P2, neapdorotos sinaptosominės membranos) ir supernatantas (S2). P2 vieną kartą plaunama TEVP + 35.6 mM sacharozės buferiu ir po to resuspenduojama 0.25 ml TEVP + 35.6 mM sacharozės buferio, švelniai švirkščiant 3 s ir hipo-osmotiškai lizuojamas, laikant 30 min. Supernatantas (S2) buvo surenkamas ir sukamas 165,000 × g 2 h, kad susidarytų granulės (P3, šviesos membranos, perdirbimo endosomos), kurios buvo suspenduotos TEVP (0.1 ml) ir išsaugotos. Visi mėginiai buvo laikomi –80 ° C temperatūroje iki poliakrilamido gelio elektroforezės.

Gelio elektroforezė ir Western Blotting

Baltymų kiekis buvo nustatytas naudojant „Bio-Rad DC Protein Assay“ rinkinį (Hercules, CA), ir kiekvieno mėginio koncentracija buvo sureguliuota iki 0.3 mg / ml baltymo. NuPAGE LDS (ličio dodecilsulfato) mėginio buferis (Invitrogen, Carlsbad, CA) ir 50 mM ditiotreitolis buvo pridedami prie kiekvieno mėginio prieš kaitinant 70 ° C temperatūroje 10 min. Norint pakrauti ekvivalentišką baltymų kiekį kiekvienai frakcijai, 3 µg kiekvieno mėginio buvo įkeltas į „NuPAGE Novex“ 4–12% „Bis-Tris“ gelius („Invitrogen“), kad juos būtų galima atskirti elektroforezės būdu. Baltymai vėliau buvo perkelti į polivinilidenfluorido membraną (PVDF) (PerkinElmer Life Sciences, Bostonas, MA). Nespecifinės rišimosi vietos buvo blokuojamos 2 valandas kambario temperatūroje blokavimo buferyje (5% neriebaus sauso pieno PBS ir 0.02% Tween 20 [PBS-T]). Blotai buvo inkubuoti pirminiuose antikūnuose (1 3000 2 pelės monokloninių anti-NR05B [# 920–1, Millipore], 5000 2231 1 triušių anti-DAT [# AB1000, Millipore] ir 13 6800 3 97 pelės monokloninių anti-transferino receptorių ( TfR) [# 46–97, Invitrogen]. Blotai buvo supjaustyti į 46 dalis: didelio (> 2 kDa), vidutinio (180–75 kDa) ir mažo (<64 kDa) svorio, o kiekviena dalis tiriama antikūnais, kurie atpažino baltymai tame svorio diapazone. Matomi panaudotų antikūnų molekuliniai svoriai yra: NR50B, 95 kDa; DAT, 62.5, 2 ir 100 kDa; TrfR, 6.8 kDa. Išbandžius DAT vidutinio svorio diapazono antikūnus, antikūnai buvo nuimami inkubuojant su nuplovimo buferiu (15 mM Tris, 50% SDS, 2 mM β-merkaptoetanolis, pH XNUMX) XNUMX min. XNUMX ° C temperatūroje. Vėliau blotai buvo užblokuoti ir tiriami anti-TfR. SeeBlue Plus XNUMX (Invitrogen) iš anksto buvo apskaičiuoti dažyti standartai.

Baltymų imunoblotai buvo analizuojami naudojant „Carestream Molecular Imaging Software 5.0“. Kiekvienai juostai buvo nustatytas grynasis intensyvumas (pikselių suma palūkanų juostoje, atėmus fono taškų sumą). Kad būtų galima palyginti blotus, duomenys buvo normalizuoti pagal LFD kontrolę 2 ir 6 wks. Duomenys išreiškiami vidutine indukcija, lyginant su LFD ± SEM.

Kiekybinis realaus laiko atvirkštinės transkriptazės polimerazės grandinės reakcija (qRT-PCR)

Surinkus smegenų štampus vakarų blot analizei, užšaldytos smegenys buvo koronaliai suskirstytos į mikrotomą, kol pasiekia VTA / SN. Dvišalis 1-mm3 VTA ir SN audinių štampai (vidutinis audinio svoris = 15.0 mg) ir RNR ekstrahuota naudojant PureLink RNA Mini Kit (Invitrogen). RNR kokybė ir kiekis buvo įvertinti naudojant RNA 6000 Nano Chip (Agilent, Santa Clara, CA) Agilent Bioanalyzer 2100. Visiems mėginiams RNR vientisumo numeris (RIN) viršijo 7, o tai rodo aukštą kokybę. Vienas mikrogramas viso RNR buvo naudojamas cDNA sintezei naudojant iScript cDNA sintezės rinkinį (BioRad) ThermoHybaid iCycler (Thermo Scientific). specifiniai DAT gruntai (Slc6a3; Persiųsti Gruntas: GGAAGCTGGTCAGCCCCTGCTT, Grįžtamieji gruntas: GAATTGGCGCACCTCCCCTCTG), β-aktino (Nba; Persiųsti gruntas: AGGGAAATCGTGCGTGACAT; Atvirkštinė Gruntas: AAGGAAGGCTGGAAGAGAGC) ir Tata dėžutė surišantis baltymas (Tbp; priekį Gruntas: ACCTAAAGACCATTGCACTTCGTGCC; Atvirkštinė gruntas : GCTCCTGTGCACACCATTTTCCC) genai (Genbank prisijungimo numeriai NM_012694, NM_031144 ir NM_001004198) buvo sukurti naudojant NCBI Primer-BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/) ir įsigyti iš integruotų DNR technologijų (Coralville, Iowa). Lydymosi kreivės analizė ir poliakrilamido gelio elektroforezė patvirtino pradmenų specifiškumą. DAT, β-aktinas ir Tbp amplikonai yra atitinkamai 266, 182 ir 136 bazinės poros.

Buvo naudojamas Q-PCR rinkinys (iQ SybrGreen Supermix, BioRad). Reakcija buvo atlikta MyiQ Single Color realaus laiko PCR aptikimo sistemoje (BioRad) 20 µl tūrio, 2 µL 3 µM ​​į priekį ir atvirkštinius pradmenis ir 4 µL cDNA mėginį, atskiestą 1∶10. PCR ciklo sąlygos buvo 95 ° C 5 min; 40 ciklai 94 ° C, 15 s, 60 ° 15 s, 72 ° C 15 s. Duomenys buvo renkami 84 ° 15 temperatūros rodmenų temperatūroje pagal amplikono lydymosi temperatūrą. Standartinės praskiedimo kreivės buvo sukurtos kiekvienam gruntui, serijiniam praskiedimui (1.00, 0.2, 0.04 ir 0.008 kartus) pagrindinės cDNA atsargos, apimančios vienodą visų gydymo grupių cDNR mišinį. Žurnalas10 skiedimo vertės buvo parodytos pagal standartinių kreivių ribinių verčių vertes. Duomenims analizuoti naudojama „MyiQ Optical System Software“ („BioRad“). Mėginiai, kuriuose nėra cDNR šablono ir cDNR reakcijų, neturinčių atvirkštinės transkriptazės, mėginiai buvo atlikti kaip genų DNR užteršimo ir amplifikacijos kontrolė. Ataskaitos buvo normalizuotos pagal vidinius vidinių standartų ß-aktino ir Tbp dydžius kiekvienam mėginiui. Duomenys išreiškiami vidutiniais santykiniais DAT / vidinių standartų mRNR ± SEM lygiais.

Statistinė analizė

DAT išraiška dinamiškai keičiasi gyvavimo ciklo metu abiem žmonėms [27] ir žiurkėms [28], [29]. Be to, dopamino ir elgesio atsakas į kokainą taip pat keičiasi, kai jaunos žiurkės subrendo [30]. Taigi DAT matavimai gali skirtis priklausomai nuo amžiaus ir neleisti prasmingai palyginti 2 wk ir 6 wk grupes. Todėl grupei skiriant maistą, kūno svorį, didžiausią dopamino koncentraciją, tau,% pokytį ir santykinę geno ekspresiją buvo lyginamos atskirai 2 ir 6 wk grupėms, naudojant studento nesusijusį t-testą. Vakarų blot analizėms grupių skirtumai normalizuotose DAT juostos intensyvumo dalyse buvo lyginami atskirai 2 ir 6 wk grupėms, naudojant dvipusius pakartotinius matavimus ANOVA (dietXfraction). Visos statistinės analizės buvo atliktos diagramoje Pad 5 (Prism Inc.).

rezultatai

HFD skatina padidėjusį riebalų suvartojimą

Prieš pradedant vartoti dietą 2 wk (LFD: 275.22 +/− 4.1 g; HFD: 280.87 +/− 4.8 g) pradinio kūno svorio skirtumai nebuvo; p = 0.37) arba 6 savaitės (LFD: 287.31 +/− 4.9 g; HFD: 289.44 +/− 5.1 g; 6 sav.) p = 0.97) grupės. Nepaisant to, kad vartojame drastiškai skirtingos sudėties dietas, po 2 arba 6 savaičių nerasta jokių kūno svorio skirtumų tarp dietų grupių (1a – b; abu ns). Taip pat nebuvo jokio skirtumo tarp bendrų kcal, suvartojamų tarp grupių, vartojusių tiek 2, tiek 6 dozes (1c – d pav; ns). Tačiau HFD žiurkės iš riebalų sunaudojo žymiai daugiau kcal (1e – f pav; 2 wks: t (32) = 25.59; 6 wks: t (31) = 27.54; p<0.0001 abiem dietos trukmėms).

miniatiūrų

Download:

„PowerPoint“ skaidrė

didesnis vaizdas

originalus vaizdas

1 pav. Maisto ir kūno masės matavimai.

HFD ir LFD nesiskyrė galutinio kūno svorio (a – b) arba suvartotos bendros kilokalorijos (c – d) po 2 arba 6 savaitės dietos. (e – f) HFD žiurkės suvartojo žymiai daugiau kilokalorijų iš riebalų nei LFD žiurkėms 2 ir 6 savaitės sąlygomis (***p

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g001

Ilgalaikis HFD sumažina DA pakartotinio įsisavinimo greitį

Voltammetriniai įrašai buvo atlikti ventraliniame stiatume (2 pav). 3 pav rodo reprezentatyvius elektriniu būdu sukeltus dopamino koncentracijos pokyčius, gautus iš žiurkių po 6 dietos. Pradiniame etape sukeltos dopamino koncentracijos dietos grupėse ir skirtingose ​​dietos trukmėse nesiskyrė (4a – b, abu ns). Tačiau atskirų pavyzdžių patikrinimas parodė, kad po 6 dozių, vartojusių maistą, dietos grupėse po poodinės dopamino koncentracijos pailgėjo.3 pav a – b pavyzdžių). Skilimo greitis pirmiausia susijęs su dopamino klirensu pagal DAT [31], kurį mes modeliavome kaip vieną fazę, eksponentiškai nustatant tau. Nebuvo jokių skirtumų tarp dietinių grupių, vartojusių 2 vaisto dozę (4c). Tačiau po 6 dozavimo dietos, tau buvo žymiai didesnis HFD-6 wk žiurkėms, palyginti su LFD-6 wk (4d; t (11) = 2.668; p<0.05). Taigi, 6 savaites HFD sumažina dopamino klirensą ventraliniame striatume, palyginti su gyvūnais, kurie vartojo LFD.

miniatiūrų

Download:

„PowerPoint“ skaidrė

didesnis vaizdas

originalus vaizdas

2 pav. Įrašymo vietų histologinis patikrinimas, kad būtų galima atlikti pakartotinio absorbavimo analizę.

LFD šeriamų žiurkių įrašymo vietos yra koduojamos pilkomis trikampėmis ir HFD žiurkėms juodaisiais apskritimais. Skaičiai nurodo atstumą mm Bregmos priekyje. Paveikslas pritaikytas Paxinos ir Watson 2006.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g002

miniatiūrų

Download:

„PowerPoint“ skaidrė

didesnis vaizdas

originalus vaizdas

3 pav. VTA / SNc elektrinė stimuliacija sukelia fazinę dopamino koncentracijos smailę.

Reprezentatyvūs duomenys, gauti po 6 savaitės dietos. a) Fono išskaičiuotas spalvų grafikas rodo VTA / SNc elektrinės stimuliacijos (STIM) skirtumus prieš skirtingus elektrodo potencialus prieš (–5 iki 0 s, palyginti su pradžia) ir po (0.1 iki 10 s). Laikas yra abscisas, elektrodo potencialas yra ordinatas, o srovės pokyčiai koduojami netikromis spalvomis. Dopaminas [atpažįstamas pagal oksidacijos (+ 0.6 V; žalia) ir redukcijos (-0.2 V; mėlynos) savybes] laikinai padidėjo, reaguojant į šios LFD-6 žiurkės stimuliavimą. b) Panašiai kaip ir a), išskyrus HFD-6 žiurkės. c) Dopamino koncentracija, kaip laiko funkcija, išgaunama iš spalvų sklypo a) ir tau nustatoma kreivės tinka. Du raudoni taškai žymi smailę ir dopamino koncentraciją tau pasiekimo momentu. Tau rodomas dešinėje. d) Panašiai kaip ir c), bet duomenys ištraukiami iš b).

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g003

miniatiūrų

Download:

„PowerPoint“ skaidrė

didesnis vaizdas

originalus vaizdas

4 pav. Šešių savaičių riebalų dietos sumažina dopamino atgavimo greitį ir sumažina dopamino atsaką į kokainą.

Vidutinė didžiausia dopamino koncentracija, kurią sukelia VTA / SNpc stimuliacija po 2 (a) arba 6 savaitės (b) dietos poveikio prieš kokaino injekciją. c – d) Vidutinis Tau po 2 (c) wks arba 6 wks (d) dietos. Tau buvo žymiai didesnis HFD-6 wk žiurkėms, palyginti su LFD-6 wk žiurkėmis (*p e – f) Procentinis didžiausio sukeltos dopamino koncentracijos pokytis po kokaino injekcijos 2 (\ te) ir 6 (f) mitybos poveikio savaitės. Procentinis pokytis buvo žymiai mažesnis HFD-6 wk, palyginti su LFD-6 wk žiurkėmis (**p

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g004

Ilgalaikis šiltnamio efektą sukeliančių dujų kiekis mažina atsaką į kokainą

Norėdami toliau tirti dietos sukeltus DAT pokyčius, mes švirkštėme DAT blokatorių kokainą. Didžiausia dopamino koncentracija po elektrinės stimuliacijos atsiranda dėl dopamino išsiskyrimo, tačiau taip pat ribojama tuo pačiu metu pašalinus dopamino DAT. [21]. Mes apibūdinome kokaino poveikį dopamino perdavimui apskaičiuojant sukeltos dopamino kiekio pokyčius, lyginant su prieš vaistą veikiančiomis reikšmėmis (% pokytis). Du HFD kiekiai nepaveikė% pokyčio, palyginti su LFD (4e; ns). Tačiau po 6 dozės, kai maistas buvo suvartotas,% PFD reikšmingai sumažėjo, palyginti su LFD (4f; t (10) = 4.014; p<0.01). Mūsų rezultatai rodo, kad 6, bet ne 2 savaitės HFD ekspozicija sumažina dopamino reakciją į kokainą.

Ilgalaikis HFD poveikis sumažina DAT baltymų ekspresiją sinaptosominėse membranose

Norint nustatyti, ar ilgalaikio HFD poveikis atsirado dėl DAT skaičiaus pokyčių, DAT baltymų kiekis buvo kiekybiškai įvertintas bendrojo audinio homogenatuose (H frakcija), sinaptosominėse membranose (P2 frakcijoje) ir intraceluliniuose perdirbimo endosomuose (P3 frakcija). DAT yra Nsujungtas glikoproteinas, kurio molekulinė masė yra tarp 50 ir 80 kDa dėl didėjančio glikozilinimo lygio, kai baltymas brandina [32]. Frakciją patvirtino NMDA receptoriaus NR2B subvieneto praturtėjusi ekspresija sinaptosominėje membraninėje frakcijoje ir transferino receptorių endosominėje frakcijoje (pvz. 5b). Nerasta jokių skirtumų iš viso DAT baltymų po 2 ir 6 dozių su mityba (duomenys nerodomi). Norėdami ištirti specifinius DAT baltymų skirtumus, mes naudojome dvipusius pakartotinius matavimus ANOVA (dietXfraction). Suderinus su voltammetrijos eksperimentais, 2 mitybos ekspozicija buvo nepakankama, kad pakeistų bet kurio DAT izoformo lygį P2 arba P3 frakcijose (Pav 5. c, e, g; visi ns). Vis dėlto po 6 dozės vartojimo, buvo pastebėta didelė mitybos koncentracijos sąveika (F(1,18) = 8.361, p<0.01); 5d) DAT 50 kD izoformai. Taigi, ilgalaikis HFD žymiai sumažino DAT 50 kD izoformą P2 frakcijoje ir sukėlė tendenciją padidinti P3 frakciją. Mes nerado dietos ar frakcijos poveikio nei 64 kD (5f; ns) arba 70 kD (5h; ns) DAT izoformos.

miniatiūrų

Download:

„PowerPoint“ skaidrė

didesnis vaizdas

originalus vaizdas

5 pav. Vartojant daug riebalų turinčią dietą, sumažėja su membrana susijęs DAT baltymas ventralinėje stiatumoje.

a) Reprezentatyvus vaizdas, rodantis (2) 1 × 1 mm audinių štampus, paimtus iš ventralinės striatos, kurios buvo sujungtos DAT baltymų analizei. VStr = Ventral Striatum; DStr = Dorsal Striatum; cc = corpus callosum; ac = priekinė komisija. b) Reprezentatyvūs vakarų blotai, pateikiami c – h. L = LFD; H = HFD; TfR = transferino receptorius; NR2B = NMDA receptoriaus NR2B subvienetas. c) 50 kD DAT baltymų skirtumų nepastebėta nei P2, nei P3 frakcijų po 2 savaitės dietos. d) 50 kD DAT baltymų P2 žymiai sumažėja (* = p<05), bet ne pilvo striato audinio P3 dalis HFD-6 sav., Palyginti su LFD-6 sav. Žiurkėmis. Nebuvo skirtumų tarp 64 kD DAT baltymo po 2 (e) arba 6 savaitės (f) dietos. 70 kD DAT baltymo skirtumai po 2 (g) arba 6 savaitės (h) dietos.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g005

Siekiant nustatyti, ar sumažėjęs DAT baltymo kiekis P2 frakcijoje buvo iš dalies susijęs su DAT transkripcijos sumažėjimu, VTA / SNc DAT mRNR koncentracija buvo išmatuota tose pačiose žiurkėse, kaip nurodyta pirmiau (6a pavyzdžiui). Mes stebėjome, kad tarp 2 ar 6 dozių su mityba tarp vidurinės smegenų DAT mRNR nesiskyrė jokių skirtumų.6b – c pav; abu ns). Taigi, mažai tikėtina, kad DAT baltymų kiekio skirtumai ventralinėje stiatumoje atsiranda dėl DAT gamybos deficito.

miniatiūrų

Download:

„PowerPoint“ skaidrė

didesnis vaizdas

originalus vaizdas

6 pav. DAT mRNR lygiai nekeičia didelio riebalų kiekio. a)

Reprezentatyvus vaizdas, rodantis 1 × 1 mm audinių štampus, paimtus iš VTA / SN ir sujungtas DAT mRNR analizei. cp = smegenų susitraukimas; pc = užpakalinė komisija; MM = medinis mamutinės branduolys. Santykinių DAT mRNR lygių skirtumų po 2 savaičių nebuvo.b) arba 6 savaitės dietosc).

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g006

Diskusija

Ilgalaikis HFD vartojimas gali sukelti DIO ir plastiškumą centrinėje nervų sistemoje. Atrodo, kad dopamino neuronai ir striatrijos dopamino receptoriai yra vienas iš centrinių nervų sistemos tikslų, kuriuos veikia HFD ir nutukę asmenys. [11], [13], [33]. Čia pranešime, kad HFD sumažino dopamino atpirkimo greitį ventralinėje stiatumoje ir šis poveikis priklausė nuo ekspozicijos trukmės. Svarbu tai, kad HFD poveikis DAT funkcijai įvyko be DIO. Nors šiame tyrime mes tiesiogiai nenustatėme kūno riebalų žymeklių, gyvūnai tradiciškai buvo klasifikuojami kaip DIO arba nuo dietos atsparūs, remiantis tik kūno svorio padidėjimu po sąlyčio su HFD [34]. Ilgalaikis HFD žymiai susilpnino kokaino, kuris kišasi į DAT, gebėjimą sustiprinti dopamino išsiskyrimo mastą. Mes nustatėme DAT baltymų koncentraciją ventralinėje striatumoje, naudojant Western blot analizę - atskiriant DAT, esančią subcellulinėse frakcijose, praturtintose plazmos membranoje arba perdirbimo endosomose. Mes nustatėme reikšmingą nesubrendusios DAT izoformos, susijusios su plazmos membrana, sumažėjimą. Taigi, pailgėjęs HFD sumažina dopamino atpirkimo greitį per DAT, galbūt trukdydamas DAT prekybai ar galbūt brandinimui, bet ne mažinant DAT geno ekspresiją ar DAT mRNR stabilumą. Be to, nuo dviejų iki šešių savaičių trukmės poveikio HFD laikotarpiui, atrodo, yra ankstyviausias dietos sukelto plastiškumo DAT atžvilgiu taškas.

Nutukimas siejasi su keliais striatalo dopamino signalizacijos aspektais, įskaitant DAT prieinamumą abiejuose žmonėms [18] ir pelėms [19]. Tačiau tik neseniai buvo įrodyta, kad DIO vystymasis keičia dopamino reabsorbcijos greitį žiurkėms [20]. Nors šis tyrimas parodė, kad po eksogeniškos dopamino po HFD savaitės sumažėjo dopamino pakartotinis įsisavinimas, gyvūnai, kurie buvo laikomi HFD, buvo atrinkti remiantis pradiniu svorio padidėjimu ir tokiu būdu galėtų būti unikali populiacija. Laikantis šio požiūrio, HFD gyvūnai ir toliau vartojo daugiau kalorijų ir daugiau svorio, palyginti su LFD kontrolėmis. Kitas neseniai atliktas tyrimas parodė, kad po 4 savaitės po HFD atsiradusios dopamino pakartotinio įsisavinimo sumažėjo žiurkės, iš kurių buvo užauginta [35]. Tačiau tarp gyvūnų, kurie buvo šeriami HFD, buvo reikšmingų kūno svorio skirtumų, palyginti su standartine laboratorine chow dieta, kai buvo atlikti pakartotinio suvartojimo matavimai. Todėl neaišku, ar dopamino pakartotinio įsisavinimo sutrikimai atsiranda kaip tiesioginis DIO vystymosi rezultatas. Priešingai nei šiose neseniai pateiktose ataskaitose, neatlikę kūno svorio ar bendro kcal vartojimo skirtumų tarp mūsų dietos grupių, kai buvo atlikti pakartotinio suvartojimo matavimai. Tai, kad po 6, bet ne 2, nustatėme dopamino pakartotinio įsisavinimo skirtumus, rodo, kad HFD savaitės rodo, kad dietos sukeltas dopamino reabsorbcijos pokytis yra atsakas į lėtinius, bet ne ūmus pokyčius dietos sudėtyje. Be to, mūsų rezultatai rodo, kad vietoj nutukimo rezultatas, dėl dietos sukeltų DAT pokyčių, gali prisidėti prie ligos vystymosi. Būsimose studijose reikės išsiaiškinti, ar gyvūnų populiacijos, kurios yra diferencijuojamos DIO [34] turėti skirtingus DAT išraiška / funkcijos skirtumus arba yra skirtingai jautrūs dietos sukeltiems DAT pokyčiams.

Mūsų žiniomis, tai yra pirmasis tyrimas, įrodantis, kad HFD mažina dopamino atsaką į kokainą. Atsižvelgiant į dopamino vaidmenį atlygio už narkotikus srityje, mūsų rezultatai atitinka ankstesnius darbus, įrodančius, kad žiurkėms, maitinusioms HFD maždaug 6 savaites, pasireiškia lėtesnis kokaino suvartojimas, nei gyvūnai, šeriami kontroline dieta [36]. Svarbu tai, kad šis poveikis taip pat nepriklausė nuo DIO plėtros. Be to, žiurkėms, selektyviai augintoms dėl jautrumo DIO, pasireiškia sumažėjęs kokaino vietos pasirinkimas, o tai rodo, kad kokaino naudingosios savybės šiuose gyvūnuose yra neryškios. [37]. Sumažėjęs atsakas į kokainą, kurį stebėjome HFD-6 wk žiurkėms, gali būti dėl sumažėjusio striatalų DAT. Tačiau kokainas taip pat didina dopamino signalizaciją per nuo DAT priklausančius mechanizmus. Konkrečiai, HFD galėjo sumažinti kokaino sukeltą atsarginių dopamino vezikulių mobilizaciją [38]. Kokainas taip pat slopina GABA transliaciją į dopamino neuronus VTA [39] ir sukelia svyravimus dopamino ląstelių kūno degimo spartoje [40]. Visus arba visus šiuos procesus taip pat galėjo paveikti ŠVD. Būsimi moksliniai tyrimai turės spręsti mechanizmus, kuriais grindžiama, kaip ŠVD keičia kokaino atlyginimo aspektus ir (arba) galimą narkotikų sukeliamą nervų adaptaciją. [18]. HFD vartojimas susilpnina tiek elgesį [41] ir dopamino atsakas [20], [42] amfetamino, kuris taip pat trukdo DAT. Svarbu tai, kad žiurkėms, kurių HFD vartojimas buvo kaloriškai suderintas su žiurkėmis, maitinančiomis kontrolinę dietą, DIO nesukuria, tačiau vis dar nesugeba sukurti amfetamino sąlygojamos pirmenybės vietos [41]. Kartu su čia pateiktais duomenimis, atrodo, kad HFD vartojimas sukelia reakciją į psichostimuliatorius. Visi piktnaudžiavimo vaistai daro įtaką dopamino sistemai, o manoma, kad narkotikų sukeliamas dopamino signalizacijos stiprinimas yra svarbus priklausomybės vystymuisi [43]. Taigi sumažėjęs atsakas į kokainą HFD žiurkėms atitinka pranešimus, kad nutukę žmonės turi gerokai mažesnę visą gyvenimą trunkančią riziką, susijusią su piktnaudžiavimo narkotikais sutrikimu. [44]. Būsimame darbe reikės išsiaiškinti, ar subjektyvus kokaino atlygio reitingas nutukusiems asmenims skiriasi nuo normalios svorio kontrolės.

Mūsų „Western blot“ analizė rodo, kad ilgalaikis HFD vartojimas nedaro įtakos viso striatalo DAT baltymui, bet sumažina ne glikozilinto 50 kDa DAT izoformo integraciją į sinaptosomines membranas. Nors DAT glikozilinimas pagerina dopamino transportavimo greitį ir padidina membranos paviršiaus stabilumą [45], [46], [47], ne glikozilintas DAT iš žmonių [45], [46] taip pat žiurkėms [47] lengvai transportuoja dopaminą. Be to, imunologinio žymėjimo eksperimentai parodė, kad glikozilinto DAT koncentracija yra didesnė ventralyje, palyginti su dorsaliniu striatumu abiejose beždžionėse ir žmonėms. [47]. Kartu šie tyrimai leidžia manyti, kad sumažėjęs 50 kDa DAT membranos kiekis gali prisidėti prie 6 wk HFD žiurkių regeneracijos trūkumo. Mūsų duomenys atitinka ankstesnį tyrimą, rodantį, kad HFD vartojimas sumažina DAT prieinamumą pelių stemplėje [19]. Tačiau šis tyrimas nenustatė DAT lokalizacijos skirtingose ​​ląstelėse. Be to, mūsų rezultatai atitinka tyrimą, rodantį, kad ląstelių paviršiaus DAT sumažėjimas DIO žiurkių striatume [20]. Šis tyrimas taip pat pranešė, kad DIO modelio mityba neapėmė viso DAT baltymų kiekio. Išplėsime šią išvadą, kad būtų parodyta, kad bendras DAT baltymas taip pat neturi įtakos išaugintų žiurkių HFD. Todėl ilgalaikis HFD vartojimas nekeičia DAT ekspresijos, tačiau gali trukdyti prekiauti DAT ar brandinti.

Skirtumų tarp VTA / SNpc DAT mRNR lygių po 2 arba 6 WF poveikio trūkumas dar labiau patvirtina, kad mūsų mitybos manipuliacijos neturėjo įtakos bendram DAT lygiui. Šis rezultatas skiriasi nuo ankstesnės ataskaitos, rodančios sumažintą DAT mRNR pelės VTA po 17 savaitės HFD vartojimo [12]. Tačiau šiame tyrime DAT mRNR koncentracijos buvo matuojamos po to, kai 12 savaitės dietos grupės kūno svoris skyrėsi. Taigi, jų rezultatai greičiausiai atspindi „DIO“ pakeitimus. Apibendrinant galima pasakyti, kad mūsų duomenys rodo, kad HFD poveikis sukelia funkcijų pokyčius striatrijos dopamino pakartotiniame suvartojime mažinant su membrana susijusių DAT, nekeičiant viso DAT ekspresijos. Svarbu tai, kad mes pranešame, kad dietos sukeliami sutrikimai DAT gali pasireikšti prieš prasidedant DIO, o tai rodo, kad šie pokyčiai gali prisidėti prie nutukimo.

Mūsų duomenys papildo augančią literatūrą, kuri apima dopamino funkcijos reguliavimą, ir pateikia papildomų įrodymų, kad dėl dietos sukeltų pokyčių DAT ekspresijoje atsiranda funkciškai svarbių dopamino signalizacijos pokyčių. Dietos sukeltas striatalo dopamino signalizacijos dinamika per DAT gali turėti įtakos šėrimo elgsenai. Su maistu susiję dirgikliai sukelia striatinio dopamino fazinį padidėjimą [9], [48], [49], kuri greičiausiai sustiprins ir sustiprins su maistu susijusius veiksmus [50]. Čia parodome, kad 6 savaitės HFD vartojimas pailgina fazinio dopamino išsiskyrimo trukmę mažindami su membrana susijusius DAT sluoksniuose striatum regione, kur dopamino funkcija yra būtina maisto vartojimui. [51]. Nuo dietos priklausantys pokyčiai DAT gali paskatinti į priekį nukreiptą mechanizmą, kai ilgai trunkantys dopamino signalai, kuriuos sukelia maisto stimulai, padidintų mažo afiniteto striatrijos dopamino D1 receptorių aktyvumą, kurie yra labai svarbūs požiūrio elgsenai. [52], [53], [54]. Laikui bėgant ilgalaikis striatalo dopamino padidėjimas gali paskatinti prisitaikymą, pvz., Dopamino D2 receptorių mažėjimą (D2R), kuris buvo įrodytas ir žmonių, ir graužikų modeliuose. [11], [33]. Mūsų tyrimas rodo, kad nutukimo raida nėra būtina priemonė dopamino pakartotiniam įsisavinimui pakeisti. Tokiu būdu su mityba susijęs sumažėjęs membranos DAT sumažėjimas gali paskatinti ir prisidėti prie D2R slopinimo, nutukimo ir kompulsinio maitinimo elgesio, kuris išsivysto per HFD vartojimą [11].

Padėka

Norime padėkoti dr. Jamie D. Roitman ir James E. McCutcheon už naudingas pastabas apie ankstesnes rankraščio versijas. Už šio dokumento turinį atsako tik autoriai ir nebūtinai reiškia oficialią NIH ar Čikagos biomedicinos konsorciumo nuomonę.

Autoriaus įnašai

Suprojektuoti ir suprojektuoti eksperimentai: JJC EHC MFR. Atlikti eksperimentai: JJC DNP SRE. Analizuojami duomenys: JJC EHC SRE MFR. Parašė: JJC EHC MFR.

Nuorodos

  1. 1. Flegal KM, Carroll MD, Kit BK, Ogden CL (2012) Nutukimo ir kūno masės indekso pasiskirstymo paplitimas tarp JAV suaugusiųjų, 1999 – 2010. JAMA 307: 491 – 497.
  2. 2. Ogden CL, Carroll MD, Curtin LR, McDowell MA, Tabak CJ ir kt. (2006) Antsvorio ir nutukimo paplitimas JAV, 1999 – 2004. JAMA 295: 1549 – 1555.
  3. Žiūrėti straipsnį
  4. PubMed / NCBI
  5. "Google Scholar"
  6. 3. Drewnowski A, Almiron-Roig E (2010) Žmogaus suvokimas ir preferencijos riebiems maisto produktams. In: Montmayeur JP, le Coutre J, redaktoriai. Riebalų aptikimas: skonis, tekstūra ir po valgymo, 11 skyrius. Boca Raton, FL: CRC Press.
  7. Žiūrėti straipsnį
  8. PubMed / NCBI
  9. "Google Scholar"
  10. Žiūrėti straipsnį
  11. PubMed / NCBI
  12. "Google Scholar"
  13. Žiūrėti straipsnį
  14. PubMed / NCBI
  15. "Google Scholar"
  16. Žiūrėti straipsnį
  17. PubMed / NCBI
  18. "Google Scholar"
  19. Žiūrėti straipsnį
  20. PubMed / NCBI
  21. "Google Scholar"
  22. Žiūrėti straipsnį
  23. PubMed / NCBI
  24. "Google Scholar"
  25. Žiūrėti straipsnį
  26. PubMed / NCBI
  27. "Google Scholar"
  28. Žiūrėti straipsnį
  29. PubMed / NCBI
  30. "Google Scholar"
  31. Žiūrėti straipsnį
  32. PubMed / NCBI
  33. "Google Scholar"
  34. Žiūrėti straipsnį
  35. PubMed / NCBI
  36. "Google Scholar"
  37. Žiūrėti straipsnį
  38. PubMed / NCBI
  39. "Google Scholar"
  40. Žiūrėti straipsnį
  41. PubMed / NCBI
  42. "Google Scholar"
  43. Žiūrėti straipsnį
  44. PubMed / NCBI
  45. "Google Scholar"
  46. Žiūrėti straipsnį
  47. PubMed / NCBI
  48. "Google Scholar"
  49. Žiūrėti straipsnį
  50. PubMed / NCBI
  51. "Google Scholar"
  52. Žiūrėti straipsnį
  53. PubMed / NCBI
  54. "Google Scholar"
  55. Žiūrėti straipsnį
  56. PubMed / NCBI
  57. "Google Scholar"
  58. Žiūrėti straipsnį
  59. PubMed / NCBI
  60. "Google Scholar"
  61. Žiūrėti straipsnį
  62. PubMed / NCBI
  63. "Google Scholar"
  64. Žiūrėti straipsnį
  65. PubMed / NCBI
  66. "Google Scholar"
  67. Žiūrėti straipsnį
  68. PubMed / NCBI
  69. "Google Scholar"
  70. 4. Rolls BJ (2009) Maisto energijos tankio ir suvartojamos energijos santykis. Fiziologija ir elgesys 97: 609–15.
  71. 5. Ledikwe JH, Blanck HM, Kettel Khan L, Serdula MK, Seymour JD, et al. (2006) Mitybos energijos tankis siejamas su energijos suvartojimu ir svoriu JAV suaugusiems. „American Journal of Clinical Nutrition 83“: 1362 – 8.
  72. Žiūrėti straipsnį
  73. PubMed / NCBI
  74. "Google Scholar"
  75. Žiūrėti straipsnį
  76. PubMed / NCBI
  77. "Google Scholar"
  78. Žiūrėti straipsnį
  79. PubMed / NCBI
  80. "Google Scholar"
  81. Žiūrėti straipsnį
  82. PubMed / NCBI
  83. "Google Scholar"
  84. Žiūrėti straipsnį
  85. PubMed / NCBI
  86. "Google Scholar"
  87. Žiūrėti straipsnį
  88. PubMed / NCBI
  89. "Google Scholar"
  90. Žiūrėti straipsnį
  91. PubMed / NCBI
  92. "Google Scholar"
  93. Žiūrėti straipsnį
  94. PubMed / NCBI
  95. "Google Scholar"
  96. Žiūrėti straipsnį
  97. PubMed / NCBI
  98. "Google Scholar"
  99. Žiūrėti straipsnį
  100. PubMed / NCBI
  101. "Google Scholar"
  102. Žiūrėti straipsnį
  103. PubMed / NCBI
  104. "Google Scholar"
  105. Žiūrėti straipsnį
  106. PubMed / NCBI
  107. "Google Scholar"
  108. Žiūrėti straipsnį
  109. PubMed / NCBI
  110. "Google Scholar"
  111. Žiūrėti straipsnį
  112. PubMed / NCBI
  113. "Google Scholar"
  114. Žiūrėti straipsnį
  115. PubMed / NCBI
  116. "Google Scholar"
  117. Žiūrėti straipsnį
  118. PubMed / NCBI
  119. "Google Scholar"
  120. Žiūrėti straipsnį
  121. PubMed / NCBI
  122. "Google Scholar"
  123. Žiūrėti straipsnį
  124. PubMed / NCBI
  125. "Google Scholar"
  126. Žiūrėti straipsnį
  127. PubMed / NCBI
  128. "Google Scholar"
  129. Žiūrėti straipsnį
  130. PubMed / NCBI
  131. "Google Scholar"
  132. Žiūrėti straipsnį
  133. PubMed / NCBI
  134. "Google Scholar"
  135. Žiūrėti straipsnį
  136. PubMed / NCBI
  137. "Google Scholar"
  138. Žiūrėti straipsnį
  139. PubMed / NCBI
  140. "Google Scholar"
  141. Žiūrėti straipsnį
  142. PubMed / NCBI
  143. "Google Scholar"
  144. Žiūrėti straipsnį
  145. PubMed / NCBI
  146. "Google Scholar"
  147. Žiūrėti straipsnį
  148. PubMed / NCBI
  149. "Google Scholar"
  150. Žiūrėti straipsnį
  151. PubMed / NCBI
  152. "Google Scholar"
  153. Žiūrėti straipsnį
  154. PubMed / NCBI
  155. "Google Scholar"
  156. 6. Mažas DM, Jones-Gotman M, Dagher A (2003) Pašarų sukeltas dopamino išsiskyrimas į nugaros striatumą koreliuoja su sveikų savanorių sveikata. NeuroImage 19: 1709 – 1715.
  157. 7. „Bassero V“, „Di Chiara G“ (1999) Dopamino pernešimo į maisto stimulus skirtingumas reaguojant į branduolių akumelius. Neurologija 89: 637 – 41.
  158. 8. „Roitman MF“, „Wheeler RA“, „Wightman RM“, „Carelli RM“ (2008) Realaus laiko cheminiai atsakai į branduolį accumbens išskiria naudingus ir aversinius stimulus. Gamtos neurologija 11: 1376 – 7.
  159. 9. „Brown HD“, „McCutcheon JE“, „Cone JJ“, „Ragozzino ME“, „Roitman MF“ („2011“) Pirminis maisto atlygio ir užmokesčio nuspėjamasis stimulas sukelia skirtingus fazinio dopamino signalizacijos modelius visoje striatume. Europos neurologijos žurnalas 34: 1997 – 2006.
  160. 10. „Grabenhorst F“, „Rolls ET“, „Parris BA“, „Souza AA“ (2010) Kaip smegenys atitinka riebalų atlyginimų vertę burnoje. Smegenų žievė 20: 1082 – 91.
  161. 11. „Johnson PM“, „Kenny PJ“ (2010) Dopamino D2 receptoriai priklausomybei priklausančiose atlygio disfunkcijose ir kompulsinis valgymas nutukusioms žiurkėms. Gamtos neurologija 13: 635 – 41.
  162. 12. Vucetic Z, Carlin JL, Totoki K, Reyes TM (2012) Epigenetinis dopamino sistemos reguliavimas dietos sukeltame nutukime. Neurochemijos žurnalas 120: 891 – 84.
  163. 13. „Stice E“, „Spoor S“, „Bohon C“, mažas DM (2008) „Nutukimo“ ir „blunted striatos“ atsako į maistą santykį reguliuoja TaqIA A1 alelis. Mokslas 322: 449 – 452.
  164. 14. „Cragg SJ“, „Rice ME“ („2004“) Šokinėja per „DAT“ DA sinapse. Neurologijos tendencijos 27: 270 – 7.
  165. 15. Dreyer JK, Herrik KF, Berg RW, Hounsgaard JD (2010) Fazinio ir toninio dopamino išsiskyrimo įtaka receptorių aktyvacijai. Neurologijos žurnalas 30: 14273 – 83.
  166. 16. Figlewicz DP, Szot P, Chavez M, Woods SC, Veith RC (1994) Intraventrikulinis insulinas padidina dopamino transporterio mRNR žiurkės VTA / substia nigra. Smegenų tyrimas 644: 331 – 4.
  167. 17. „Mebel DM“, „Wong JC“, „Dong YJ“, „Borgland SL“ (2012) Ventralinio tegmentalioje zonoje insulinas mažina hedoninį šėrimą ir slopina dopamino koncentraciją padidėjusio atpirkimo metu. Europos neurologijos žurnalas 36: 2336 – 46.
  168. 18. Chen PS, Yang YK, Yeh TL, Lee IH, Yao WJ ir kt. (2008) Kūno masės indekso ir striatalo dopamino transporterio prieinamumo sveikiems savanoriams - SPECT tyrimas. NeuroImage 40: 275 – 9.
  169. 19. Pietų T, Huang XF (2008) Didelis riebalų kiekis maiste didina dopamino D2 receptorių ir sumažina dopamino transporterio receptorių surišimo tankį pelių branduolyje ir caudate putamen. Neurocheminiai tyrimai 33: 598 – 605.
  170. 20. Speed ​​N, Saunders C, Davis AR, Owens WA, Matthies HJG ir kt. (2011) Sutrikusios striatrijos Akt signalizacija sutrikdo dopamino homeostazę ir didina šėrimą. PloS vienas 6: e25169.
  171. 21. „Roitman MF“, „Wescott S“, „Cone JJ“, „McLane MP“, „Wolfe HR“ (2010) MSI-1436 sumažina ūminį maisto suvartojimą nedarant įtakos dopamino transporterio aktyvumui. Farmakologija Biochemija ir elgesys 97: 138 – 43.
  172. 22. „Heien MLAV“, „Johnson MA“, „Wightman RM“ („2004“). Analitinė chemija 76: 5697 – 704.
  173. 23. Sinkala E, McCutcheon JE, Schuck MJ, Schmidt E, Roitman MF ir kt. (2012) Elektrodų kalibravimas naudojant mikrofluidinį srauto elementą, kad būtų galima greitai nuskaityti ciklinį voltammetriją. „Lab“ ant lusto 12: 2403 – 08.
  174. 24. Jorgason JT, España RA, Jones SR (2011) Demon voltammetrijos ir analizės programinė įranga: kokaino sukeltų dopamino signalizacijos pokyčių analizė, naudojant įvairias kinetines priemones. Neurologijos metodų žurnalas 202: 158 – 64.
  175. 25. Paxinos G ir Franklin KBJ (2004) Žiurkės smegenys stereotaksinėse koordinatėse. San Diegas, CA: Academic Press.
  176. 26. Hallett PJ, Collins TL, Standaert DG, Dunah AW (2008) Biocheminis smegenų audinių frakcionavimas, skirtas receptorių pasiskirstymui ir prekybai jais. Dabartiniai protokolai neurologijoje / redakcinėje kolegijoje, Jacqueline N. Crawley… [et al.] 1 skyrius: 1.16 blokas.
  177. 27. Meng SZ, Ozawa Y, Itoh M, Takashima S (1999) Dopamino transporterio ir dopamino D1 bei D2 receptorių vystymosi ir amžiaus pokyčiai žmogaus baziniuose gangliuose. Smegenų tyrimas 843: 136 – 144.
  178. 28. Moll GH, Mehnert C, Wicker M, Bock N, Rothenberger A ir kt. (2000) Su amžiumi susiję pokyčiai presinaptinių monoamino transporterių tankiuose įvairiuose žiurkių smegenų regionuose nuo ankstyvo nepilnamečio gyvenimo iki vėlyvos suaugusiųjų. „Development Brain Research“ 119: 251 – 257.
  179. 29. Cruz-Muros I, Afonso-Oramas D, Abreu P, Perez-Delgado MM, Rodriguez M, et al. (2009) Senėjimo poveikis dopamino transporterio ekspresijai ir kompensaciniams mechanizmams. Senėjimo 30: 973 – 986 neurobiologija.
  180. 30. Badanich KA, Adler KJ, Kirstein CL (2006) Paaugliai skiriasi nuo suaugusiųjų kokainą sąlygojančių vietų ir kokaino sukeltas dopamino kiekis branduolyje accumbens septi. Europos farmakologijos žurnalas 550: 95 – 106.
  181. 31. Jones SR, Garris PA, Kilts CD, Wightman RM (1995) Dopamino įsisavinimo bazolateriniame amygdaloidiniame branduolyje, caudate-putamen ir žiurkės branduolių palyginimas. Neurochemijos žurnalas 64: 2581 – 9.
  182. 32. Rao A, Simmons D, Sorkin A (2011) Diferencialinis endosominių skyrių ir dopamino transporterio pasiskirstymas dopaminerginiuose neuronuose. Molekulinė ir ląstelinė neurologija 46: 148 – 58.
  183. 33. Wang GJ, Volkow ND, Thanos PK, Fowler JS (2009) Smegenų dopamino takų vaizdavimas: pasekmės, skirtos suprasti nutukimą. Priklausomybės medicinos žurnalas 3: 8 – 18.
  184. 34. Levin BE, Dunn-Meynell AA, Balkan B, Keesey RE (1997) Selektyvus dietos sukeltos nutukimo ir atsparumo Sprague-Dawley žiurkėms auginimas. American Journal of Physiology 273: R725 – 730.
  185. 35. Morris JK, Bomhoff GL, Gorres BK, Davis VA, Kim J et al. (2011) Insulino atsparumas slopina nigrostriali dopamino funkciją. Eksperimentinė neurologija 231: 171 – 80.
  186. 36. Wellman PJ, Nation JR, Davis KW (2007) Kokaino savarankiško vartojimo žiurkėms, kurių riebalų kiekis buvo didelis, sumažėjimas. Farmakologija, biochemija ir elgesys 88: 89 – 93.
  187. 37. Thanos PK, Kim R, Cho J, Michaelides M, Anderson BJ ir kt. (2010) Nutukimui atsparios S5B žiurkės labiau pasirinko kokaino sąlygotas vietas nei linkusios į nutukimą OM žiurkės. Fiziologija ir elgesys 101: 713–8.
  188. 38. Venton BJ, Seipel AT, Phillips PEM, Wetsel WC, Gitler D, et al. (2006) Kokainas padidina dopamino išsiskyrimą, mobilizuodamas nuo synapsin priklausomą atsargų fondą. Neurologijos žurnalas 26: 4901 – 04.
  189. 39. Steffenson SC, Taylor SR, Horton ML, Barber EN, Lyte LT (2008) Kokainas slopina dopamino neuronus ventraliniame tegmenal plote, naudojant nuo GABA neuronų įtampos jautrių natrio kanalų priklausomą blokadą. Europos žurnalas Neuroscience 28: 2028 – 2040.
  190. 40. Shi WX, Pun CL, Zhou Y (2004) Psichostimuliantai sukelia žemo dažnio svyravimus dopamino neuronų degimo veikloje. Neuropsichofarmakologija 29: 2160 – 2167.
  191. 41. Davis JF, Tracy AL, Schurdak JD, Tschop MH, Lipton JW, et al. (2008) Padidėjęs riebalų kiekis maiste sumažina psichostimuliatoriaus atlygį ir mezolimbinę dopamino apyvartą žiurkėse. Elgesio neurologija 122: 1257 – 63.
  192. 42. Geiger BM, Haburcak M, Avena NM, Moyer MC, Hoebel BG ir kt. (2009) Mesolimbinio dopamino neurotransmisijos trūkumai žiurkių mitybos nutukime. Neurologija 159: 1193 – 9.
  193. 43. „Hyman SE“, „Malenka RC“, „Nestler EJ“ (2006) priklausomybės neuronų mechanizmai: su mokymu susijusio mokymosi ir atminties vaidmuo. Priklausomybė 29: 565 – 598.
  194. 44. Simon GE, Von Korff M, Saunders K, Miglioretti DL, Crane PK ir kt. (2006) Asociacija tarp nutukimo ir psichikos sutrikimų suaugusiems JAV. Bendrosios psichiatrijos archyvas 63: 824 – 30.
  195. 45. Torres GE, Carneiro A, Seamans K, Fiorentini C, Sweeney A ir kt. (2003) Žmogaus dopamino transporterio oligomerizacija ir prekyba. Biologinės chemijos leidinys 278: 2731 – 2739.
  196. 46. Li LB, Chen N, Ramamoorthy S, Chi L, Cui XN ir kt. (2004) N-glikozilinimo vaidmuo žmogaus dopamino transporterio funkcijoje ir paviršiaus prekyboje. Biologinės chemijos leidinys 279: 21012 – 21020.
  197. 47. Afonso-Oramas D, Cruz-Muros I, de la Rosa DA, Abreu P, Giraldez T ir kt. (2009) Dopamino transporterio glikozilinimas koreliuoja su vidutinio smegenų dopaminerginių ląstelių pažeidžiamumu Parkinsono liga. Ligos neurobiologija 36: 494 – 508.
  198. 48. „Roitman MF“, „Stuber GD“, „Phillips PEM“, „Wightman RM“, „Carelli RM“ („2004“) „Dopamine“ veikia kaip maisto paklausos moduliatorius. Neurologijos žurnalas 24: 1265 – 71.
  199. 49. McCutcheon JE, Beeler JA, Roitman MF (2012) Sacharozės nuspėjamieji užuominos sukelia didesnį fazinį dopamino išsiskyrimą nei sacharino nuspėjamieji ženklai. „Synapse 66“: „346 – 51“.
  200. 50. Flagel SB, Clark JJ, Robinson TE, Mayo L, Czuj A ir kt. (2011) Selektyvus dopamino vaidmuo skatinant mokymąsi. Gamta 469: p53 – 7d.
  201. 51. Szczypka MS, Mandel RJ, Donahue BA, Snyder RO, Leff SE, et al. (1999) Virusinis geno pristatymas selektyviai atkuria šėrimą ir neleidžia pelėms mirti nuo dopamino trūkumo. Neuronas 22: 167 – 78.
  202. 52. Di Ciano P, kardinolas RN, „Cowell RA“, „Little SJ“, „Everitt BJ“ (2001) NMDA, AMPA / kainato ir dopamino receptorių diferencijuotas dalyvavimas branduolio branduolyje brandinant pavlovišką požiūrį. Neurologijos žurnalas 21: 9471 – 9477.
  203. 53. Kravitz AV, Freeze BS, Parker PRL, Kay K, Thwin MT ir kt. (2010) Parkinsono motorinio elgesio reguliavimas, valdant bazinę ganglijų grandinę. Gamta 466: 622 – 6.
  204. 54. Kravitz AV, Tye LD, Kreitzer AC (2012) Tiesioginiai ir netiesioginiai striatrių neuronų neuronų įtvirtinimai. Gamtos neurologija 15: 816 – 818.