Dopamīna receptoru ekspresija un izkliede dinamiski mainās žurku kodolā pēc izņemšanas no kokaīna pašregulācijas. (2010)

Olbaltumvielu saikne

Šī metode ir sīki aprakstīta iepriekš (Boudreau un vilks, 2005; Ferrario et al., 2010). Žurkām tika dekapitēts, viņu smadzenes tika ātri noņemtas, un visas NAc (vai kodola un čaumalas apakšreģioni) tika atdalītas uz ledus no 2mm koronālās sekcijas, kas iegūta, izmantojot smadzeņu matricu. Viss NAc audums nekavējoties tika sagriezts 400μm šķēlītēs, izmantojot McIllwain audu smalcinātāju (Vibratome, St. Louis, MO), bet mazākos kodolu un čaumalu apakšreģionus smalcināja ar roku, izmantojot skalpeli. Pēc tam audu pievienoja Eppendorf mēģenēm, kurās bija ledus auksts mākslīgs CSF, kas piestiprināts ar 2 mM bis (sulfosukcinimidil) suberātu (BS³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Saskares reakcijai tika ļauts turpināt 30 min 4 ° C temperatūrā ar maigu sajaukšanos, un pēc tam tika pārtraukta, pievienojot 100mM glicīnu (10 min 4 ° C). Audi tika granulēti ar īsu centrifugēšanu, atkārtoti suspendēti ledus aukstā līzes buferī, kas satur proteāzes un fosfatāzes inhibitorus, ar ultraskaņu 5 sek. Un atkal centrifugēja. Supernatanta alikvoti tika uzglabāti -80 ° C temperatūrā, līdz tika analizēta Western blotēšana.

Western blot analīze DARs šķērssaudzētajos audos

Paraugus (20-30μg kopējais proteīns / lizāts) elektroforezē ar 4-15% Tris-HCl gēliem (Biorad, Hercules, CA). Olbaltumvielas tika pārnestas uz polivinilidēnfluorīda membrānām imunoblotēšanai, izmantojot pastāvīgu strāvu (1.15mA) 1.5 h. Lai novērstu pārmērīgu karsēšanu, tika izmantota dzesēšanas spole. Pilnīga liela molekulmasa agregātu pārnešana tika apstiprināta ar krāsošanas gēliem pēc pārneses ar Coomassie blue. Bez tam, mēs pārbaudījām, ka krekinga želejā nav konstatēti savstarpēji saistīti DAR proteīni (dati nav parādīti). Pēc pārneses membrānas mazgāja ddH₂O, 1 h temperatūrā žāvē istabas temperatūrā (RT), atkārtoti hidratē ar 100% MeOH, mazgā 1x Tris buferētajā sāls šķīdumā (TBS) un iegremdēja 0.1M NaOH, pH 10 15 min. Pēc tam tos mazgāja TBS, bloķēja ar 3% liellopu seruma albumīnu (Sigma – Aldrich, St. Louis, MO) TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, 1 hr RT un inkubēja nakti. pie 4 ° C ar antivielām, kas atpazīst D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) un D3 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1786P). D4 un D5 DAR nav analizēti, jo trūkst antivielu, kas atpazīst gan savstarpēji saistītos, gan intracelulāros receptorus. Jāatzīmē, ka šajos eksperimentos izmantotās DAR antivielu partijas iegādājās 2005-06; pašreizējās šo antivielu partijas (2009-10) uzrāda atšķirīgus lentes modeļus, kas nav mainīti audos no DAR izlaistām pelēm (nepublicēti novērojumi). Pēc primārās antivielu inkubācijas membrānas mazgāja ar TBS-T šķīdumu, inkubēja 60 min ar HRP konjugētu anti-trušu IgG vai anti-peles IgG (1: 10,000; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), mazgā ar TBS- T, skalo ar ddH₂O, un iegremdē ķīmijuminescences noteikšanas substrātā (Amersham GE, Piscataway, NJ). Pēc tam, kad tika izveidoti bloti, attēli tika uzņemti ar Versa Doc attēlveidošanas programmatūru (Bio-Rad). Virsmas un intracelulāro joslu difūzo blīvumu noteica, izmantojot Quantity One programmatūru (Bio-Rad). Virsmas, intracelulāro un kopējo (virsmas + intracelulāro) olbaltumvielu līmeņu vērtības tika normalizētas kopējā olbaltumvielā joslā, kas noteikta, izmantojot Ponceau S (Sigma-Aldrich) un analizēja ar TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK). Virsmas / intracelulāro attiecību nebija nepieciešams normalizēt, jo abas vērtības tiek noteiktas vienā joslā. Lai pārbaudītu antivielu specifiskumu, tika veikti preabsorbcijas pētījumi par DAR antivielām ar peptīdu, ko izmantoja katras antivielas veidošanai. D1, D2 vai D3 DAR antivielas tika kombinētas ar 10 reizes lielāko peptīda koncentrāciju TBS 500μl, 4 hs maisījumā 4 ° C temperatūrā, atšķaidītu līdz galīgajam 20ml tilpumam, pievieno membrānai un inkubēja pa nakti 4 ° C.

D1 DAR

WD45 nav konstatētas būtiskas atšķirības starp kokaīna un sāls grupu grupām. Tomēr kokaīna pašpārvaldes ietekme bija redzama WD1. Visa NAc analīze liecināja par ievērojami augstāku D1 DAR virsmas / intracelulāro attiecību WD1-Coc grupā, salīdzinot ar grupām, kas pašam ievadīja sāls šķīdumu (2a). Tas bija saistīts ar nelielu virsmas D1 DAR pieaugumu kombinācijā ar nelielu intracelulāro D1 DAR samazināšanos (neviena no šīm pēdējām divām sekām nebija statistiski nozīmīga), ja netika veiktas izmaiņas kopējā D1 DAR līmeņos (virsma + intracelulāra).2a). NAc kodolā netika konstatēta būtiska ietekme uz D1 DAR pasākumu (2b). Tomēr NAc korpusam bija izmaiņas, kas bija līdzīgas tām, kas novērotas visā NAc, bet nedaudz stingrākas (2c). WD1-Coc grupā palielinājās virsmas / intracelulārā D1 DAR attiecība sakarā ar ievērojamu virsmas D1 DAR ekspresijas pieaugumu. Intracelulārie līmeņi nemainījās, bet bija tendence palielināt kopējo D1 DAR līmeni. Kopumā lielākā daļa D1 DAR proteīna bija virsmas ekspresija WD1-Coc žurku NAc apvalkā, salīdzinot ar WD1-Sal žurkām. D1 DAR sadalījums atgriežas kontroles stāvoklī pēc 45 dienas, kad tika pārtraukta kokaīna lietošana.

Fig. 2

D1 DAR virsmas ekspresija tika palielināta NAc apvalkā pēc 1 izņemšanas dienas no kokaīna pašpārvaldes.

D2 DAR

Visā NAc galvenais novērotais efekts tika samazināts ar D2 DAR ekspresiju žurkām, kuras pašas lietoja kokaīnu, salīdzinot ar sāls kontrolēm (3a). Tas bija visizteiktākais uz WD45, kad novēroja samazinājumu virsmas joslā, visās trīs intracelulārajās joslās (~ 55, 75 un 100kDa), un kopējos D2 DAR līmeņos, salīdzinot ar sāls kontrolēm. WD2-Coc grupā virsmas / intracelulārā D45 DAR attiecība bija nedaudz, bet ievērojami palielinājusies, jo intracelulārā nekā virsmas D2 DAR samazinājās, iespējams, norādot, ka šūnas kompensē samazinātu D2 DAR izpausmi, sadalot lielāku daļu pieejamo D2 DAR uz virsmas. Ir svarīgi paturēt prātā, ka paaugstināta virsmas / intracelulārā attiecība neliecina par paaugstinātu D2 DAR pārraidi šajā konkrētajā gadījumā, jo tika samazināts virsmas izteiksmes D2 DAR absolūtais līmenis. WD1-Coc grupā vienīgais nozīmīgais efekts bija D2 DAR monomēra (~ 55kDa) intracelulāro līmeņu samazināšanās, salīdzinot ar WD45-Sal un WD1-Sal grupām, lai gan vairākiem citiem pasākumiem arī bija tendence samazināties (3a).

Fig. 3

Intracelulāro un virsmas D2 DAR līmenis NAc samazinājās pēc 45 dienas, kad tika pārtraukta kokaīna lietošana.

Kopējais D2 DAR izteiksmes samazinājums bija redzams arī NAc kodolapgabalos un apakškategorijās (3b un 3cattiecīgi), lai gan ietekme korpusā bija izteiktāka. Tādējādi koka D2 DAR līmenis kokaīna žurkām samazinājās tikai WD45 kodolā, bet WD1 un WD45 čaulā. Kopējie D2 DAR ievērojami samazinājās tikai apvalkā. Intracelulāro D2 DAR joslu samazināšanās notika abās izdalīšanās dienās gan kodolā, gan čaulā, lai gan bija atšķirības starp izdalīšanos un reģionu, attiecībā uz kuru intracelulāro joslu bija statistiski nozīmīga ietekme. Kopumā, pēc kokaīna devas ievadīšanas, NAc samazinājās D2 DAR virsmas un intracelulāro proteīnu līmenis. Daži samazinājumi jau bija redzami WD1.

Pēc kokaīna lietošanas pārtraukšanas D1 DAR virsmas ekspresija NAc apvalkā īslaicīgi palielinās

Pēc kokaīna devas ievadīšanas D1 DAR virsmas ekspresija tika palielināta NAc apvalkā WD1, bet normalizēta ar WD45, turpretim kodolā netika novērotas nekādas izmaiņas, kas liecina par pārejošu pieaugumu, kas aprobežojas ar čaumalu. Līdzīgi rezultāti iegūti iepriekšējos pētījumos, izmantojot receptoru autoradiogrāfiju. Ben-Shahar et al. (2007) konstatēts paaugstināts D1 DAR blīvums žurku 20 min NAc apvalkā (bet ne 14 vai 60 dienas) pēc pagarinātas piekļuves (6 hr / dienā) pašpārvaldes pārtraukšanas; - ievadīšana (2 hr / dienā). Nader et al. (2002) novēroja nelielu D1 DAR blīvuma pieaugumu čaumalās, bet ne rhesus pērtiķu kodolu, kas nogalināti pēc pēdējās 100 kokaīna pašpārvaldes sesijas. Pērtiķiem, kas bija 30 dienas pēc tam, kad tika pārtraukta viena un tā pati shēma, tika novērots paaugstināts D1 DAR blīvums rostrālā NAc un gan kodolā, gan čaulā, vairāk nekā caudālā līmenī, bet D1 DAR blīvums bija normalizēts ar 90 dienām (Beveridge et al., 2009). Visi šie rezultāti, tāpat kā mūsu rezultāti, liecina par pārejošu D1 DAR līmeņa paaugstināšanos, īpaši čaumalās, pēc kokaīna lietošanas pārtraukšanas. Tomēr agrākā pētījumā, ko veica šī grupa, tika konstatēts, ka D1 DAR blīvums NAs (visizturīgākais čaumalās) ir rēzus pērtiķiem, kuriem pašam tika ievadīts kokaīns daudz ilgāku laiku (18 mēneši; Moore et al., 1998a). Samazināta D1 DAR saistība ar NAc tika konstatēta arī 18 hr pēc paplašinātas piekļuves shēmas pārtraukšanas žurkām, lai gan kopējā pētījumā par kokaīna lietošanu šajā pētījumā bija augstāks līmenis nekā iepriekš aprakstītajos pētījumos ar žurkām (De Montis et al., 1998). Šie rezultāti liecina, ka D1 DAR pielāgojumi ir atkarīgi no daudziem kokaīna iedarbības aspektiem. Vēl viens apsvērums ir tas, ka receptoru autoradiogrāfija mēra kopējos šūnu receptorus, savukārt mūsu proteīnu šķērssaistīšanas eksperimenti var atšķirt virsmas un intracelulāros receptorus. Interesanti, ka imunoblotēšanas pētījumā konstatēja tendenci palielināt D1 DAR līmeni cilvēka kokaīna lietotāju NAc (Worsley et al., 2000).

Vai pārejošais D1 DAR virsmas ekspresijas pieaugums, ko mēs novērojām NAc korpusā, ir svarīgs, lai inkubētu kokainu izraisītu kokaīna tieksmi? To ir grūti novērtēt, jo neviens pētījums nav pārbaudījis D1 DAR agonistu vai antagonistu iekšējās injekcijas ietekmi uz kokainu, kas izraisa kokaīna meklēšanu pēc mājas būru atcelšanas (vai cue-inducēta kokaīna atjaunošana pēc izzušanas apmācības). Tomēr D1 receptoriem mediālajā NAc (čaumalā un vidējā kodolā) ir iesaistīti kokaīna atjaunošanas darbi, kas tiek veikti pēc kokaīna meklējumiem pēc izzušanas, acīmredzot ar mehānismu, kas prasa kopīgu D1 un D2 DAR aktivāciju (Anderson et al., 2003; 2008; Bachtell et al., 2005; Schmidt un Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Kopā ar mūsu rezultātiem tas varētu likt domāt, ka neironi NAc apvalkā ir vairāk reaģē uz D1 DAR mediēto kokaīnu, kas meklē agrīnu izņemšanu pārejas D1R regulēšanas dēļ. Tomēr ir jāievēro piesardzība, veicot ekstrapolāciju no atjaunošanas uz inkubācijas pētījumiem, jo ​​izmiršanas apmācība un mājokļu izņemšana no apsaimniekošanas ir saistīta ar dažādām neiroadaptācijām NAc (Sutton et al., 2003; Ghasemzadeh et al., 2009; Vilks un Ferrario, 2010). Ir svarīgi atzīmēt, ka arī D1 DAR bazolaterālā amigdala un prefrontālā garozā ir svarīgi, lai atjaunotu kokainu meklēšanu (piemēram, Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt et al., 2006; Berglind et al., 2006).

Šūnu līmenī gan presinaptiskie, gan postinaptiskie DAR var modulēt vidējas smadzeņu neironus, kas ir dominējošais šūnu tips un NAc izejas neirons (Nicola et al., 2000; O'Donnell, 2003). Ir zināms, ka atkārtota nejauša kokaīna lietošana pastiprina dažus D1 DAR aktivācijas efektus NAc. Tādējādi vienu dienu līdz vienam mēnesim pēc kokaīna terapijas pārtraukšanas visā NAc tika novērota D1 DAR agonistu pastiprināta spēja inhibēt vidējas smadzeņu neironus (ko izraisa iontoforētiskais glutamāts).Henrijs un Balts, 1991; 1995). Tomēr šeit norādītā paaugstinātā D1 DAR virsmas izpausme, visticamāk, nespēs izskaidrot šos iepriekšējos rezultātus, jo tā attiecas tikai uz korpusu un ir pierādīta tikai WD1. Vienu dienu pēc kokaīna lietošanas 10-14 dienas pēc atkārtotu kokaīna injekciju pārtraukšanas, Beurrier un Maleka (2002) novērota DA-mediētas eksitējošo sinaptisko reakciju inhibīcijas uzlabošanās NAc vidēja smailes neironos, ko acīmredzot izraisīja presinaptīvi D1 līdzīgi DAR ar glutamāta nervu termināliem. Tomēr iespējamās iedarbības injekcijas sekas (piemēram, skat Boudreau et al., 2007 un Kourrich et al., 2007), apvienojumā ar sugu atšķirībām un ierakstu trūkumu kodolā, apgrūtina to rezultātu salīdzināšanu ar mūsu pašu. Jāatzīmē arī, ka DAR agonisti un antagonisti, ko lieto Henrijs un Balts (1991; 1995) un Beurrier un Malenka (2002) nenošķir D1 un D5 DAR.

Pēc kokaīna lietošanas pārtraukšanas DKNUMX DAR līmenis NAc samazinās

Mūsu pētījumā novērotā galvenā ietekme bija D2 DAR proteīna samazināšanās gan NAc kodolā, gan čaumalās pēc kokaīna lietošanas pārtraukšanas, salīdzinot ar sāls šķīduma kontroli. Tas bija izteiktāks korpusā, kur gan WD1, gan WD45 tika samazināts intracelulārais, virsmas un kopējais joslas. D2 DAR virsmas ekspresija tika samazināta tikai ar WD45 un kopējais D2 DAR līmenis būtiski nemazinājās. Vairākos citos pētījumos līdzīgi tika konstatēts, ka pēc kokaīna lietošanas pārtraukšanas D2 DAR ekspresija ir samazinājusies. Rēzus pērtiķiem, kuriem ir plaša kokaīna lietošanas pieredze, D2 DAR blīvums, mērot ar receptoru autoradiogrāfiju, daudzos striatāla reģionos, ieskaitot NAc serdi un apvalku, samazinājās, kad audi tika iegūti tūlīt pēc pēdējās sesijas (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002). Izmantojot PET, šis efekts bazālajos ganglijos tika konstatēts 1 nedēļā, kad tika uzsākta kokaīna pašapkalpošanās (Nader et al., 2006). D2 DAR līmeņa atgūšanās ātrums var būt atkarīgs no kopējā kokaīna lietošanas. Autoradiogrāfijas pētījumā D2 DAR līmenis NAc atguva kontroles vērtības pēc 30 vai 90 dienas pēc 100 sesiju pārtraukšanas no kokaīna pašpārvaldes (Beveridge et al., 2009). Tomēr PET pētījumā ar pērtiķiem ar ilgāku iedarbību (1 gads) un tādējādi lielāku kopējo kokaīna patēriņu 3 pērtiķiem 5 parādīja D2 DAR līmeņa atjaunošanos pēc 90 dienām, bet 2 pērtiķiem neizdevās atjaunoties pat pēc 12 mēnešiem (Nader et al., 2006). Kopumā šie rezultāti labi atbilst mūsu konstatētajiem D2 DAR līmeņiem visā zāļu izņemšanas laikā.

PET pētījumi par cilvēku kokaīna atkarīgajiem ir arī konstatējuši, ka D2 DAR daudzums ir samazinājies daudzos striatāla reģionos, tostarp ventrālajā striatumā, kas bija acīmredzams agrīnā izņemšanas laikā, kā arī pēc 3-4 detoksikācijas mēnešiem (Volkow et al., 1990, 1993, 1997). Tomēr uzvedības nozīme ir neskaidra, jo D2 DAR pieejamība nesakrīt ar kokaīna pozitīvo subjektīvo ietekmi vai lēmumu par vairāk kokaīna lietošanu pēc primārās devas (Martinez et al., 2004). Svarīgi atzīmēt, ka, lai gan kokaīna izraisītā tieksme izraisa laika atkarību no atcelšanas (“inkubācija”), kokaīna ieguves gadījumos, kad tiek veikta kokaīna lietošana, tas nenotiek (Lu et al., 2004a). Tāpēc rezultāti Martinez et al. (2004) Atstājiet atvērtu iespēju, ka D2 DAR pieejamība var korelēt ar cue izraisītu kokaīna meklēšanu, kas ir šeit pētīta inkubācijas modeļa uzmanības centrā. Zema D2 DAR pieejamība cilvēka kokaīna lietotājiem korelē ar samazinātu frontālās kortikālo metabolismu (Volkow et al., 1993). Līdztekus citām izmaiņām, tas var veicināt kontroles zudumu, kas rodas, ja narkomāni ir pakļauti narkotiku vai zāļu pārojuma norādēm, kā arī lielāka narkotiku īpašība salīdzinājumā ar atlīdzību, kas nav atkarīga no narkotikām (Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). Jāatzīmē, ka samazināts D2 DAR līmenis PET pētījumā var liecināt par paaugstinātu DA izdalīšanos, nevis samazinātu D2 DAR līmeni, bet jaunākie rezultāti liecina par šo skaidrojumu kokaīna atkarīgo pacientu gadījumā.Martinez et al., 2009). Turklāt pēcdzemdību pētījumā par cilvēka kokaīna lietotājiem konstatēja tendenci samazināt D2 DAR līmeni NAc, izmantojot imunoblotēšanu (Worsley et al., 2000).

Pētījumi ar cilvēkiem, kuri ir atkarīgi no kokaīna, nevar noteikt, vai D2 DAR pieejamība ir pazeminoša iezīme vai kokaīna iedarbības rezultāts, bet citi rezultāti liecina, ka abas ir patiesas. No vienas puses, eksperimenti ar cilvēkiem, kas nelieto narkotikas, ir atklājuši apgrieztu korelāciju starp D2 DAR pieejamību un ziņojumiem par „narkotiku izvēli”, lietojot metilfenidātu (Volkow et al., 1999; 2002). Šie rezultāti liecina, ka zemā D2 DAR pieejamība var palielināt atkarību no atkarības. Līdzīgu secinājumu apstiprina pētījumi ar rēzus pērtiķiem. Sociāli novietotos pērtiķos sociālā dominējošā stāvokļa sasniegšana palielina D2 DAR pieejamību strijā, un tas ir saistīts ar zemāku jutību pret kokaīna pastiprinošo iedarbību, salīdzinot ar pakārtotiem pērtiķiem (Morgan et al., 2002). Sociālais statuss ir atkarīgs arī no striatāla D2 DAR pieejamības brīvprātīgajiem brīvprātīgajiem cilvēkiem (Martinez et al., 2010). No otras puses, gan PET, gan receptoru autoradiogrāfijas pētījumi liecina, ka ilgtermiņa kokaīna pašapkalpošanās samazina striatāla D2 DAR receptoru pieejamību individuāli novietotos pērtiķos, kā minēts iepriekš (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002; Nader et al., 2006). Šķiet, ka hroniska kokaīna pašapkalpošanās samazina D2 DAR pieejamību dominējošos sociāli novietotos pērtiķos (Czoty et al., 2004). Tādējādi pēc ilgstošas ​​kokaīna pašpārvaldes vairs nebija būtisku atšķirību D2 receptoru pieejamībā vai kokaīna pastiprinošās iedarbības ziņā starp dominējošiem un pakārtotiem pērtiķiem (Czoty et al., 2004). Tomēr atturēšanās laikā dominējošajiem pērtiķiem paaugstināts D2 DAR līmenis samazinājās, un tas bija saistīts ar ilgāku latentumu, reaģējot uz novitāti, pazīmi, kas paredz samazinātu jutību pret kokaīna pastiprinošajām sekām (Czoty et al., 2010).

Tāpat kā cilvēkiem un pērtiķiem, pētījumi ar žurkām liecina, ka zema D2 DAR pieejamība ir kokaīna ievainojamības riska faktors. Tādējādi PET pētījumi ar žurkām ar augstu impulsivitāti (iezīme, kas saistīta ar paaugstinātu kokaīna pašapkalpošanos) liecina par samazinātu D2 / D3 DAR pieejamību vēdera strijā (Dalley et al., 2007). Žurkām, kas uzrāda lielu lokomotorisko reakciju uz novitāti, vēl viena pazīme, kas saistīta ar atkarības ievainojamību, arī samazina D2 DAR līmeni NAc.Hooks et al., 1994). Mūsu rezultāti žurkām liecina, ka samazināts D2 DAR līmenis NAc var būt arī atkārtotas kokaīna iedarbības sekas, kas atbilst pētījumiem pērtiķiem un cilvēkiem (iepriekš). Tomēr divi receptoru autoradiogrāfijas pētījumi ar žurkām atklāja rezultātus, kas atšķiras no mūsu. Ben-Shahar et al. (2007) pēc atcelšanas (2 min, 20 dienas 14 dienas) no D60 DAR līmeņa pazemināšanās pēc paplašinātās piekļuves kokaīna pašregulācijas režīmam, kas bija līdzīgs mūsu pašu (6 hr / dienā), lai gan tika novērots samazinājums NAc apvalkā pēc ierobežota piekļuves režīma (2 hr / dienā) un 14 izņemšanas dienām (Ben-Shahar et al., 2007). Stéfanski et al. (2007) D2 DAR līmeņu izmaiņas kodolā vai čaumalās 24 h pēc ierobežotas piekļuves kokaīna lietošanas pārtraukšanas (2 hr / dienā) nav konstatētas, lai gan D2 DAR līmeņi samazinājās kokaīna kontrolē. Kā minēts iepriekš, receptoru autoradiogrāfija mēra kopējos šūnu receptorus, bet PET un proteīnu savstarpējās saiknes pētījumi mēra šūnu virsmas receptorus.

Kopumā pētījumi par saistību starp D2 DAR līmeni un kokaīna pašpārvaldi atbalsta modeli, kurā D2 DAR parasti ierobežo kokaīna pašpārvaldi. Tāpēc mēs iesakām, ka samazinātie D2 DAR līmeņi, kas novēroti mūsu eksperimentos, var veicināt kokaīna meklēšanu pēc kokaīna lietošanas. Konkrētāk, fakts, ka D2 DAR virsmas ekspresija NAc kodolā tika samazināta WD45, bet ne WD1 kombinācijā ar galveno lomu NAc kodam cueinducētā kokaīna meklēšanā, liek domāt, ka laika atkarīgs D2 DAR samazinājums NAc kodolā var būt veicina laika atkarīgu kokaīna meklējumu pastiprināšanu. Tas varētu paredzēt, ka D2 agonista infūzija NAc iekšienē atsaukšanas laikā samazinātu cēloni izraisītu kokaīna meklēšanu. Diemžēl nevienā pētījumā netika pētīta NAX D2 DAR zāļu ietekme uz inkubācijas modeli. No otras puses, pētījumi par kokaīna atkārtotu atjaunošanu liecina, ka D1 un D2 DAR korpusa un mediālā kodolā sadarbojas, lai veicinātu kokaīna meklēšanu (Anderson et al., 2003; Bachtell et al., 2005; Schmidt un Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Pamatojoties uz šiem konstatējumiem, var prognozēt, ka mūsu eksperimentos novērotā D2 DAR ekspresija samazina kokaīna meklēšanu, tas ir, rada tādu efektu, kas ir pretējs atkarībai no atkarības pastiprināšanas, kas faktiski novērota. Atšķirība var atspoguļot problēmas, kas radušās, vispārinot no kokaīna iedarbības atjaunošanas pēc izzušanas apmācības līdz kokainu izraisītajam kokaīnam, kas meklē pēc izņemšanas.

Pēc kokaīna pašpārvaldes pārtraukšanas NAc kodolā rodas laika atkarīgs D3 DAR virsmas ekspresijas pieaugums.

Pētījumi par D3 DAR-preferējošām zālēm kokaīna pašregulācijas un atjaunošanas paradigmās liecina, ka D3 DAR antagonisti var būt noderīgi kokaīna atkarības ārstēšanā, un jo īpaši, samazinot reaktivitāti ar kokaīna lietošanu saistītām norādēm (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll et al., 2005; Xi un Gardner, 2007). Šie rezultāti liecina, ka D3 DAR aktivācija ar endogēno DA var būt iesaistīta medikamentu izraisītā kokaīna meklēšanā. Mūsu rezultāti rāda, ka D3 DAR virsmas ekspresija NAc kodolā nemainās pēc WD1, pateicoties plašākai piekļuvei kokaīna pašapkalpošanās procesam, bet palielinoties WD45, kopā ar kokaīna alkas inkubāciju. D3 DAR virsmas ekspresija korpusā būtiski nepalielinājās, lai gan bija neliels, bet nozīmīgs virsmas / intracelulāro attiecību pieaugums. Ņemot vērā D3 DAR pārraides lomu, reaģējot uz ar kokaīnu saistītām norādēm, kā arī kodola nozīmi ķēdes izraisītā kokaīna meklēšanā, ir vilinoši spekulēt, ka palielināta D3 DAR virsmas izpausme NAc kodolā veicināja bišu izraisītā kokaīna inkubāciju. tieksme, kas novērota WD45. Tomēr nav konstatēta neironu vieta, kurā D3 DAR antagonisti darbojas, lai samazinātu kokaīna meklēšanu. Konkrētāk, nevienā pētījumā netika pētīta D3 DAR iekšējās injekcijas ietekme, dodot priekšroku medikamentiem, kas izraisa kokaīna meklēšanu. Citā modelī Schmidt et al. (2006) konstatēja, ka D3 preferējošā agonista PD 128,907 ievadīšana kodolā vai čaulā neradīja kokaīna atjaunošanos pēc izzušanas apmācības.

Mūsu rezultāti kopumā atbilst receptora autoradiogrāfijas pētījumiem, kas pēc kokainas iedarbības mērīja kopējo D3 DAR līmeni NAc. Staley un Mash (1996) ziņots, ka D3 DAR saistīšanās bija lielāka kokaīna pārdozēšanas upuru vidū, salīdzinot ar vecuma atbilstības kontrolēm. Pēc kokaīna iedarbības ar nosacītu vietu preferenču paradigmu un trīs dienu pārtraukšanu, pelēm parādījās palielināta D3 DAR saistīšanās NAc kodolā un apvalkā (Le Foll et al., 2002). Neisewander et al. (2004) izmērīta D3 DAR saistīšanās ar žurkām ar plašu kokaīna pašpārvaldes pieredzi, kuras tika pārbaudītas, lai atjaunotu kokainu pēc dažādiem izdalīšanās periodiem un pēc tam nogalinātu 24 h vēlāk. D3 DAR saistīšanās ar NAC nemainījās WD1, bet palielinājās pēc ilgāka laika (WD31-32), kas atbilst mūsu laika atkarīgā pieauguma novērošanai. Turklāt medikamentu terapija zāļu lietošanas pārtraukšanas laikā, kas samazina kokaīna meklēšanu, arī mazināja D3 DAR saistīšanās palielināšanos, kas liecināja, ka D3 DAR augšupejoša darbība ir funkcionāli saistīta ar kokaīna meklēšanu. Jāatzīmē, ka D3 DAR palielinās Neisewander et al. (2004) bija nozīmīgi kodolā, bet tikai čaumalās novēroja tendences, bet apakšreģioni tika analizēti NAc rostrālajā daļā, kur kodols un apvalks ir mazāk atšķirīgi. Mūsu analīze tika veikta uz kodola un čaumalas no NAc rostrālās un caudālās daļas.

Šo darbu atbalstīja DA009621, DA00453 un NARSAD izcilā pētnieka apbalvojums MEW, DA020654 uz MM, kā arī nacionālā pētniecības dienesta balva DA021488 uz KLC