Neironu aktivācijas modeļi, kas ir bazolaterālās amigdalas ietekme uz intra-accumbens opioīdu virzītu patēriņa un ēstgribas uzvedību žurkām ar augstu tauku saturu (2015) - BINGE MECHANISM

Behav Neurosci. Autora manuskripts; pieejams PMC 2015 Dec 1.

Publicēts galīgajā rediģētā formā kā:

PMCID: PMC4658266

NIHMSID: NIHMS724902

Izdevēja galīgā rediģētā šī raksta versija ir pieejama vietnē Behav Neurosci
 

Anotācija

Šajā pētījumā tika pētīta amygdala loma mediācijas unikāla modeļa starpā, ko izraisa intra-accumbens (Acb) opioīdu aktivācija žurkām. Pagaidu inaktivācija bazolaterālā amigdala (BLA), izmantojot GABAA agonistu musimimola ievadīšanu, novērš palielinātu patēriņu pēc selektīvās µ-opioīdu agonista D-Ala2, NMe-Phe4, Glyol5-enkefalīna (DAMGO) opioīdu ievadīšanas, tomēr atstāj pārtikas pieeju izturēšanās, jo īpaši pēc patēriņa beigām. Viena interpretācija ir tāda, ka BLA inaktivācija selektīvi bloķē neirālo aktivitāti, kas ir pamatā DAMGO orientētajai patēriņam (patēriņam), bet ne ēstgribai (pieejai). Šie eksperimenti izmanto šo patēriņa un pieejas uzvedības laika disociāciju, lai izpētītu to saistīto neirālo aktivitāti. Pēc Acb sāls šķīduma ievadīšanas vai DAMGO ievadīšanas ar vai bez BLA muskimola ievadīšanas žurkām tika dota 2hr piekļuve ierobežotam daudzumam augsta tauku satura diētas. Tūlīt pēc barošanas sesijas žurkas tika nogalinātas, un smadzenes tika pārbaudītas, lai noteiktu neirālās darbības modeļus kritiskajos smadzeņu reģionos, kuri, kā zināms, regulē gan ēstgribas, gan barojošu barošanas uzvedību. Rezultāti rāda, ka Acb-DAMGO ievadīšana palielināja c-Fos aktivāciju oreksīna neironos hipotalāma perifornālajā zonā un ka šis aktivācijas pieaugums ir bloķēts BLA musimola inaktivācijā. Intra-Acb DAMGO ievadīšana ievērojami palielināja c-Fos aktivāciju vēdera tegmentālās zonas dopamīnerģiskajos neironos, salīdzinot ar sāls kontrolēm, un BLA inaktivācija neietekmēja šo pieaugumu. Kopumā šie dati nodrošina pamata shēmu, kas var būt par starpnieku starp BLA selektīvo ietekmi uz piedzimšanas, bet ne ēstgribas, barošanas uzvedības modeli hedoniski vadītas barošanas uzvedības modelī.

atslēgvārdi: motivēta uzvedība, sistēmas un ķēdes analīze, laboratorijas uzvedība (apetitīvs / atbaidošs), dzīvnieku modelis, opioīdu barošanas neironu aktivācijas modelis

Plaši pārbaudīts izplatītais tīkls, kas veicina intra-accumbens (Acb) opioīdu mediēto barošanu.; ; ; ), un basolaterālā amygdala (BLA) ieguldījumi ir bijuši īpaši interesanti. BLA pagaidu inaktivācija ar GABAA agonistu muskimols novērš spēcīgu augstu tauku uzņemšanas pieaugumu pēc selektīvās µ-opioīdu agonista D-Ala2, NMe-Phe4, glikol5 enkefalīna (DAMGO) ievadīšanas Acb, tomēr BLA inaktivācija neietekmē palielinātu barošanu, ko izraisa akūta 24hr pārtikas trūkums (). Šī BLA ietekme tieši uz hedoniskās barošanas modeļa starpniecību tika raksturota arī tā, ka BLA inaktivācija novērsa palielināto patēriņu, ko izraisīja Acb DAMGO, tomēr atstāja paaugstinātu uztura pieeju uzvedībā, jo īpaši pēc diētas patēriņa beigām. Lai gan ir sniegusi šo datu sīkāku raksturojumu un interpretāciju Šķiet, ka BLA inaktivācija traucē tikai tauku barošanas uzvedības fāzei, bet ne pārtikas pieejas fāzei, ko izraisa Acb opioīdu aktivācija.

Vēsturiski atalgojuma uzvedība ir iedalīta kategorijās apetīte posms, kas ietver pieejas uzvedību, kas saistīta ar tādu atalgojuma stimulu meklēšanu kā pārtika, un patērētājs fāzē, kas ietver tādu uzvedību kā pārtikas patēriņš (; ). Šī atšķirība ir novērota gadu desmitiem, un šodien tā joprojām ir populāra, jo attīstās ar pārtiku un citām atlīdzībām saistītas motivācijas teorijas (; ; ; ; ). Mēģinājumi noteikt fizioloģiju, kas ir šo atšķirīgo motivēto uzvedības fāžu pamatā, ir iekļauti modeļos, kuros ārstēšana ir traucējusi vienas fāzes izpausmi, neietekmējot otru (; ; ; ). Šajā pētījumā aplūkota unikāla barošanas uzvedības modeļa fizioloģija, kurā tika atdalīts uztura un apetītes posms.

Šie eksperimenti pētīja neironu darbības modeļus, kas balstās uz ēstgribu un patēriņa barošanas uzvedību, ko veicināja Acb DAMGO. Pirmkārt, sākotnējais konstatējums () tika atkārtots, lai izveidotu otrā eksperimenta priekšnoteikumu, tostarp nepieciešamību noteikt atbilstošu ierobežotā daudzuma diētu, kas jāsniedz otrajā pētījumā. Otrajā eksperimentā, katram no četriem dažādiem zāļu ārstēšanas apstākļiem, visiem subjektiem tika nodrošināta piekļuve ierobežotam daudzumam augsta tauku satura diēta, nodrošinot katrai ārstēšanas grupai, izņemot tikai DAMGO ārstēto grupu, lai sasniegtu sāta sajūtu (ti, daudzumi, kas novēroti reklāmā) no 1 eksperimenta). Tūlīt pēc 2hr barošanas sesijas žurkas tika nogalinātas, lai fiksētu neirālās aktivitātes modeļus, kas saistīti ar parādītajiem uzvedības modeļiem. Iepriekšējie dati parādīja, ka visa patēriņa un pārtikas tvertnes pieejas uzvedība notiek pirmajā testa sesijas 30 min laikā pēc visām procedūrām, tomēr Acb-DAMGO, ar vai bez BLA inaktivācijas, rada spēcīgu pārtikas pieejas uzvedības līmeni pēdējā 90 min. no 2hr testa sesijas (). Tāpēc, nervu darbība, kas saistīta ar motivāciju pieeja un patērēt jāatspoguļo žurkām, kuras saņem ārstēšanu ar Acb DAMGO bez BLA inaktivācijas. Turpretī neirālās aktivitātes modeļiem žurkām, kas saņem ārstēšanu ar Acb DAMGO ar BLA inaktivāciju, jāatspoguļo vienāda motivācija pieeja, bet atspoguļo mazāku motivāciju patērēt.

Neironu aktivitāte tika pētīta smadzeņu apgabalos, par kuriem zināms, ka tie ietekmē interesantās apetītes un patēriņa uzvedību, ieskaitot ventrālo tegmentālo zonu (VTA), dorsālo mediālo hipotalāmu (DMH), hipotalāma perifornālo zonu (PeF) un sānu hipotalāmu (LH) (; ; ). Intra-Acb DAMGO ievadīšana palielina c-Fos ekspresiju perifornālos hipotalāmos neironos, un šī izteiksme prasa oreksīna signalizāciju VTA ietvaros.). Kopumā šie un citi dati liecina, ka šis garšas izraisītās barošanas modelis, izmantojot Acb µ-opioīdu receptoru aktivāciju, var pieņemt darbā PeF oreksīna neironus un uzlabot oreksīna signalizāciju VTA ietvaros, kas savukārt var modulēt DA izplūšanu uz Acb un mPFC, vadot barošanas uzvedību (). Tiks pētīta BLA aktivācijas ietekme, lai novērotu Acb DAMGO tauku patēriņa palielināšanos, bet ne ar augstu tauku saturu.

Metodes

Žurkas

Trīsdesmit seši pieaugušie vīriešu Sprague – Dawley žurkas (Harlan Sprague-Dawley, Inc., Indianapolis, IN), kas sver 300 – 400 g, tika novietoti plexiglas būros pa pāriem klimata kontrolētā koloniju telpā 22 ° C temperatūrā. Žurkām tika saglabāts 12-hr gaismas cikls, un visi eksperimenti tika veikti gaismas fāzes (0700 – 1900) laikā starp 1200 un 1500 stundām. Ja vien nav norādīts citādi, žurkām pirms eksperimenta un tās laikā bija brīva piekļuve laboratorijas čau un dzeramajam ūdenim. Grupās bija žurkas 6 – 8. Visas eksperimentālās procedūras tika veiktas saskaņā ar Missouri Universitātes Institucionālo dzīvnieku aprūpes un lietošanas komitejas apstiprinātiem protokoliem.

Ķirurģija

Žurkas tika anestēzētas ar ketamīna un ksilazīna maisījumu (attiecīgi 90 mg / kg un 9 mg / kg; Sigma, St. Louis, MO) un 2 vadu nerūsējošā tērauda kanilu komplekti (23 gabarīts, 10 mm) divpusēji virs Acb serdeņa un sānu apvalka un BLA robežas un piestiprina pie galvaskausa ar nerūsējošā tērauda skrūvēm un vieglu izturīgu sveķi (New England, Boston). Pēc operācijas vadu kanālos tika ievietoti stieples stieņi, lai novērstu aizsprostošanos. Mērķa vietņu koordinātas ir šādas: Acb: AP, + 1.4; ML, ± 2.0; DV, -7.8; BLA: AP, -2.8; ML, ± 4.7; DV, -8.6 (DV koordinātes apzīmē 12.5mm injektora adatas izvietojumu, kas stiepjas no kanna).

Aparatūra

Barošanas uzvedības novērtējums tika veikts telpā, kas atdalīta no kolonijas telpas astoņās plexiglas (30.5 cm × 24.1 cm × 21.0 cm) kamerās (Med Associates, St. Albans, VT). Zirgiem bija pieejams ūdens ad libitum un aptuveni 35g garšīgs uzturs, izņemot gadījumus, kad tas bija norādīts. Barošanas kameras bija aprīkotas ar četrām infrasarkano staru kustības kustības staru kūļiem, kas atrodas 6 cm attālumā no kameras garuma un 4.3 cm virs grīdas. Pārtikas tvertnes automātiskā svēršanas skala uzraudzīja pārtikas patēriņu. Papildu infrasarkano staru kūlis, kas aptver ēdiena tvertnes ieeju, noteica katra galvas ieiešanas vietu tvertnes zonā. Pārtikas tvertne un ūdens pudele atradās vienas kameras sienas vienā pusē (pretējos stūros), un zem bāra grīdas atradās noņemams atkritumu kārbas. Mērījumi ietvēra lokomotorisko aktivitāti (horizontālo staru kūļa pārrāvumu skaits), tvertnes ieejas ilgumu (vidējais staru kūļa pārrāvuma ilgums pie tvertnes ieejas), tvertnes ieejas (staru pārrāvumu skaits pie ieejas tvertnē) un patērētā daudzuma ( grami uztura). Testa periodi bija uzvedības monitorings barošanas kamerās ar datoru, kurā darbojas Med-PC programmatūra (Med Associates Version IV, St. Albans, VT).

Procedūra

Zāļu mikroinjekcija

D-Ala2, NMe-Phe4, Glyol5-enkefalīns (DAMGO; Research Biochemicals, Natick, MA) un muscimol (Sigma, St. Louis, MO) tika izšķīdināti sterilā 0.9% sāls šķīdumā. Transportlīdzekļa kontrole vienmēr bija sterils 0.9% sāls šķīdums. Infūzijas tika piegādātas ar mikropūtes sūkni (Harvard Apparatus, South Natick, MA), kas savienota ar polietilēna caurulīti (PE-10), bet žurkām bija maigi rokas. Tika izmantoti trīsdimensiju 12.5-mm izsmidzinātāji, kas pagarināja 2.5 mm ārpus vadu kanulu gala. Injekcijas ātrums bija 0.32 µl / min Acb un 0.16 µl / min BLA gadījumā, un kopējais infūzijas ilgums bija 93 s, kā rezultātā tika iegūti attiecīgi 0.5-µl un 0.25-µl tilpumi. Difūzijai tika atļauta vēl viena minūte.

Dizains

eksperiments 1

Izmantojot subjekta dizainu, visas žurku grupas saņēma katru no četrām ārstēšanas kombinācijām četrās atsevišķās ārstēšanas dienās pretbalansētā secībā. Visas uzvedības pārbaudes abos eksperimentos sākās 1 nedēļā pēc operācijas Med-Associates pārtikas uzņemšanas kontroles kamerās. Žurkām tika dota piekļuve šajās kamerās esošajai diētai 2hr dienā katru dienu pa 6 secīgām dienām. Uz 5th dienā, 10 mm injektoru ievietoja un atstāja vietā 2 min, bez ievadīta tilpuma. Uz 6th dienā tika ievietots 12.5-mm injektors un 93 s ievadīts sāls šķīdums. Katrā testa dienā BLA ievadīja muskimolu (divpusēji 20 ng / 0.25 µl / divpusēji) vai fizioloģisko šķīdumu, kam sekoja DAMGO (divpusēji 0.25 mg / 0.5 µl / s) vai sāls šķīdums Acb, tādējādi radot četru iespējamo ārstēšanu. kombinācijas. 2hr testa sesija sākās uzreiz pēc pēdējās injekcijas, un žurkām tika dota ad libitum piekļuve augsta tauku satura diētai. Starp ārstēšanas dienām bija vismaz 1 diena.

eksperiments 2

Četras žurku grupas, lietojot atšķirīgu priekšmetu dizainu, un katrai no tām bija divpusējas kanulas, kas vērstas uz Acb un BLA. Žurkām tika dota piekļuve šajās kamerās esošajai diētai 2hr dienā katru dienu 6 secīgās dienās, un injekcijas procedūras bija identiskas 1 eksperimentam, tomēr katrs žurkas saņēma tikai 1 no iespējamām 4 zāļu terapijas kombinācijām. Augsta tauku satura diētas patēriņš 6th sākotnējās ārstēšanas dienā tika izmantots, lai līdzsvarotu narkotiku ārstēšanas uzdevumu, lai nodrošinātu līdzīgus kontrolparaugu uzņemšanas modeļus. Uz 8th dienā, dzīvniekiem tika dota 1 iespējamā 4 zāļu terapija un 8g pieejams 2hr.

Cannula izvietojuma histoloģiskā pārbaude

Tūlīt pēc 2hr barošanas sesijas dzīvnieki tika izņemti no barošanas kamerām, kas tika dziļi anestezētas ar ketamīnu un ksilazīnu (90 mg / kg un 9 mg / kg), un transkardiāli perfūzēti. Smadzenes tika noņemtas un iegremdētas formalīnā (10%) nakti 4 ° C temperatūrā un pēc tam nosargātas, pārnesot uz saharozes šķīdumu (20%) pie 4 ° C. Saldētas sērijveida sekcijas (50 µm) tika savāktas visā injekcijas vietas apjomā, piestiprinot uz želatizētiem priekšmetstikliņiem, un kontrastēja ar krezila violetu. Pēc tam tika analizēti kanālu izvietojuma profili, lai precizētu datus, un dati par žurkām ar nepareizu kanulu netika iekļauti analīzēs.

Imūnhistoķīmija

Smadzenes tika sagrieztas 40 µm biezumā un uzglabātas 0.1M fosfāta buferšķīdumā (PB, pH 7.4) pie 4 ° C. Brīvais peldošais imunofluorescentais krāsošanas protokols bija šāds: Sekcijas tika mazgātas (3 × 10 min) PBS. Nespecifiskas saistīšanās vietas tika bloķētas, izmantojot bloķēšanas šķīdumu [maisījums 10% normāls kazu serums (Jackson Immuno Research, West Grove, PA) un 0.3% Triton X-100 (Sigma) PBS)] 2 hr. Tālāk sekcijas tika inkubētas kokteiļu maisījumā, kas satur trušu anti-c-Fos antivielu (1: 5000; Calbiochem) un vistas anti-tirozīna hidroksilāzi (VTA) vai peles anti-oreksīna-A (hipotalāmu). Sekcijas tika mazgātas (4 × 30 min) PBS, kas satur 0.05% Tween-20 (PBST). Tālāk sekcijas tika inkubētas 2 stundām bloķējošā buferšķīdumā ar sekundāro antivielu kokteili: Alexa Fluor 555 kazas Anti-trušu IgG un Alexa Fluor 488 kazas Anti-vistas IgG (Invitrogen). Visas sekundārās antivielas tika izmantotas ar ieteicamo 1 koncentrāciju: 500. Sekcijas tika mazgātas (4 × 30 min) PBST un PB (2 × 10 min). Sekcijas tika uzstādītas uz super-sala slaidiem (VWR International, ASV) un ļāva nožūt istabas temperatūrā, vienlaikus pasargājot no gaismas. Izmantojot ProLong Anti-Fade montāžas komplektu (Invitrogen), šķēlītes tika noslīdētas un uzglabātas 4 ° C. Visas inkubācijas tika veiktas istabas temperatūrā, izņemot primārās antivielas, kas tika inkubētas 4 ° C temperatūrā. Lai kontrolētu atšķirības imūnhistoķīmiskajā reakcijā, dažādu reaģēšanas grupu audi tika reaģēti kopā. Bez tam, kontroles eksperimentos netika iekrāsota krāsošana, neizmantojot primārās antivielas.

Uzvedības statistiskā analīze

Eksperimenta 1 gadījumā visi barošanas pasākumi visai 2-hr sesijai un dažādiem ārstēšanas apstākļiem tika analizēti ar divfaktoru ANOVA (ārstēšana ar Acb ārstēšanu X Amygdala), ar katra faktora līmeni, kas ir vai nu transportlīdzeklis, vai medikaments . Eksperimenta 2 gadījumā visi barošanas pasākumi tika analizēti, izmantojot divfaktoru ANOVA (ārstēšana ar Acb ārstēšanu X Amygdala), katram faktoram sasniedzot vai nu transportlīdzekli, vai narkotiku.

Skaitīšanas procedūras, attēlveidošana un statistiskā analīze

Imunoreaktivitātes ekspresijas kvantitatīvajam novērtējumam hipotalāmā (ieskaitot sānu hipotalāmu, perifornālo zonu, dorsomediālo hipotalāmu) un VTA tika analizēti un vidēji aprēķināti katras puslodes trīs anatomiski paralēlas audu šķēlītes (6 kopā vienā reģionā). Visi attēli tika radīti, izmantojot 4 × vai 10 × mērķi ar konfokālu mikroskopu, izmantojot attēlveidošanas programmatūru Slidebook 4.3 (Intelligent Imaging Innovations, Denver, CO). Atkarībā no konkrētā reģiona fluorescējošā imunoreaktivitāte 40µm šķēlītē tika attēlota tikai ar c-Fos, c-Fos / TH vai c-Fos / OrexinA iezīmētiem kanāliem, kas atdalīti ar ekskluzīvu slieksni. Pēc tam attēli tika parādīti pilnekrāna režīmā, izmantojot java balstītu publisko domēnu brīvo programmatūru ImageJ (Nacionālie veselības institūti, Bethesda, MD, ASV), kā attēlu apstrādes un analīzes programmu, kas ļāva atzīmēt katru atsevišķo neironu un pozitīvi krāsot katru kanālu. skaitot no akla līdz ārstēšanai. Neironi tika klasificēti tikai kā c-Fos, tikai peptīds vai divkārši marķēti saskaņā ar iepriekšminēto fona antivielu reakcijas produkta klātbūtni šūnu kodolā.

Visas zonas tika noteiktas un kartētas, izmantojot The Rat Brain Atlas (Paxinos & Watson, 1998). Ventral Tegmental zona un tirozīna hidroksilāze; atlasītās sekcijas bija starp –5.2 un –5.5 mm priekšpusē bregmai. Katrā līmenī abās puslodēs skaitīja reģionu, kas satur tirozīna hidroksilāzes (TH-IR) šūnas un c-Fos-IR. Hipotalāms un oreksīns-A; atlasītās sekcijas bija starp –2.8 un –3.3 mm pirms bregmas. Hipotalāma reģions (starp −2.8 un −3.3 mm), kas satur oreksīna-A pozitīvas šūnas, tika sadalīts trīs reģionos no mediālā līdz sānu. Visas šūnas iekšpusē, ventrālā un mugurējā daļa līdz priekšgalam tika iekļautas vidējā reģionā, kas apzīmēts kā perifērijas (PeF). Orexin-A iezīmētās šūnas, kas atrodas sāniski uz šo reģionu, tika iekļautas sānu hipotalāmā (LH), un tās mediālās no fornix bija mediālajā grupā (DMH), kas pārklājās ar dorsomedial hipotalāmu. Neironi tika skaitīti abās puslodēs.

rezultāti

Visas ārstēšanas sekas ir norādītas, atsaucoties uz zāļu vai transportlīdzekļu ievadīšanas vietu (-ām) (ti, Acb-DAMGO). Tā kā visām žurkām tika nodrošināta piekļuve un patērēts ierobežots daudzums tauku saturoša diēta, visas saistītās barošanas uzvedības izmaiņas (Exp. 1 un 2) un neironu aktivācijas modeļi (Exp. 2) noteikti ir katra attiecīgā zāļu kombinācija ārstēšana un uzturs.

Barošanas uzvedība

eksperiments 1

BLA inaktivācijas ietekme uz augstu tauku barošanas uzvedību, ko izraisa Acb DAMGO ievadīšana.

patēriņš

Kā parādīts 1aANOVA, ko veica ar pārtikas patēriņa datiem, atklāja Acb ārstēšanas nozīmīgo ietekmi (F (1, 7) = 13.9, p <01), BLA ārstēšana (F (1, 7) = 8.6, p Mijiedarbība ar Acb × BLA (F (05, 1) = 7, p <.05). Post-hoc analīze atklāja, ka Acab DAMGO + intra-BLA fizioloģiskā šķīduma apstrāde izraisīja ievērojami augstāku patēriņa līmeni (p <.05), salīdzinot ar abām kontroles procedūrām (intra-Acb fizioloģiskais šķīdums + intra-BLA fizioloģiskais šķīdums; intra-Acb fizioloģiskais šķīdums + intra-BLA muskulimols), un intra-BLA muskulimola ārstēšana bloķēja šo pieaugumu (p <.05).

Skaitlis 1 

Uzvedības pārbaude: A) Patērētā diēta ar augstu tauku saturu (ad libitum piekļuve), B) kopējais pārtikas tvertnes ievešanas ilgums, C) kopējais pārtikas tvertņu ierakstu skaits un lokomotoriskās aktivitātes skaits (ti, horizontālais staru kūļa sadalījums). 4 terapijas tika ievadītas ...
Pārtikas tvertnes ievešanas ilgums

Kā parādīts 1bANOVA, ko veica pārtikas tvertnes ievadīšanas ilguma datiem, atklāja nozīmīgu Acb terapijas galveno iedarbību (F (1, 7) = 36.3, p <001), BLA ārstēšana (F (1, 7) = 12.1, p Mijiedarbība ar Acb × BLA (F (05, 1) = 7, p <.005). Post-hoc analīze parādīja, ka ārstēšana ar Acb DAMGO + intra-BLA muskulimolu izraisīja ievērojami lielāku kopējo pārtikas tvertnes ievadīšanas laiku salīdzinājumā ar visām pārējām ārstēšanas metodēm (p <.001), bez citas ārstēšanas, kas būtiski atšķiras viena no otras.

Pārtikas piltuves ieraksti

Kā parādīts 1c, ANOVA, kas tika veikta uz pārtikas tvertnes ievadīšanas datiem, atklāja Acb ārstēšanas nozīmīgo ietekmi (F (1, 7) = 10.6, p <, 05), savukārt BLA ārstēšana tuvojās nozīmībai (F (1, 7) = 3.89, p = .08) un Acb × BLA terapijas mijiedarbība (F (1, 7) = 7.9, p <.05). Post-hoc analīze parādīja, ka, ārstējot intra-Acb DAMGO + intra-BLA muskulimolu, salīdzinājumā ar visām pārējām ārstēšanas metodēm tika ievadīts ievērojami vairāk pārtikas tvertņu (p <.05), bez citas ārstēšanas, kas būtiski atšķiras viena no otras.

Locomotoriskā darbība

Kā parādīts 1c, ANOVA, kas tika veikta uz pārtikas tvertnes ievadīšanas datiem, atklāja Acb ārstēšanas nozīmīgo ietekmi (F (1, 7) = 23.5, p <, 005), bet nav galvenā BLA ārstēšanas efekta (F (1, 7) = 1.4, p > 05), un nav mijiedarbības ar Acb × BLA ārstēšanu (F (1, 7) = 056, p > .05).

eksperiments 2

BLA inaktivācijas ietekme uz augstu tauku barošanas uzvedību un nervu aktivācijas modeļiem, ko izraisa Acb DAMGO ievadīšana.

Narkotiku ārstēšanas piešķiršana tika līdzsvarota ar augstu tauku uzņemšanas līmeni no 6th sākotnējās dienas. Šie uzņemšanas līmeņi bija šādi: SAL-SAL, 5.1g; SAL-DAM, 4.9g; MUSC-SAL, 4.9g; MUSC-DAM, 4.8g.

patēriņš

Kā parādīts 2aANOVA, ko veica ar pārtikas patēriņa datiem, atklāja Acb ārstēšanas nozīmīgo ietekmi (F (3, 24) = 26.60, p <.001), bet nav BLA ārstēšanas efekta (F (3, 24) = 0.02, ns) vai Acb × BLA terapijas mijiedarbība (F (3, 24) = 0.61, ns).

Skaitlis 2 

Uzvedības pārbaude: a) Iztērētais daudz tauku saturošā diēta (nojaukta līnija atspoguļo ierobežotu piekļuvi 8g); b) pārtikas piltuves ierakstu skaits, c) kopējais pārtikas tvertnes ievešanas ilgums; \ t d) lokomotoriskās aktivitātes rādītāji (ti, horizontālie staru kūļa pārtraukumi). 4 ārstēšana ...
Pārtikas piltuves ieraksti

Kā parādīts 2b, ANOVA, kas tika veikta, veicot kopējo piltuves ierakstu skaitu visā barošanas sesijā, atklāja nozīmīgu Acb terapijas galveno iedarbību (F (3, 24) = 8.55, p <01), bet nav BLA ārstēšanas ārstēšanas efekta (F (3, 24) = 1.68, ns) vai Acb × BLA terapijas mijiedarbība (F (3, 24) = 0.39, ns).

Pārtikas tvertnes ievešanas ilgums

Kā parādīts 2cANOVA, kas veikts visu tvertnes ierakstu kopējam ilgumam visā barošanas sesijā, atklāja nozīmīgu Acb terapijas galveno iedarbību (F (3, 24) = 12.45, p = .001), bet ne BLA terapijas ietekme (F (3, 24) = .62, ns) vai Acb × BLA terapijas mijiedarbība (F (3, 24) = 0.07, ns).

Locomotoriskā darbība

Kā parādīts 2dANOVA, kas tika veikta, veicot kopējo lokomotorisko aktivitāti visā barošanas sesijā, atklāja nozīmīgu Acb terapijas galveno iedarbību (F (3, 24) = 12.93, p = .001), bet ne BLA terapijas ietekme (F (3, 24) = .198, ns) vai Acb × BLA terapijas mijiedarbība (F (3, 24) = 0.61, ns).

Imūnhistoķīmija

Ventral Tegmental Area

Kā parādīts 3a, ANOVA, kas veikta uz c-Fos IR šūnām VTA, atklāja ievērojamu Acb ārstēšanas efektu (F (3, 24) =, 25.67 p <001), bet BLA ārstēšanas efektu nebija (F (3, 24) = 1.13, ns) vai mijiedarbība starp ārstēšanu (F (3, 24) = 2.80, ns). ANOVA, kas tika veikta ar TH-IR šūnu procentuālo daudzumu, kas parāda c-Fos IR, atklāja Acb ārstēšanas efektu (F (3, 24) = 6.33, p <05), bet BLA ārstēšanas neietekmēja TH- IR šūnas, kas parāda c-Fos IR (F (3, 24) = .07, ns) nav nozīmīgas mijiedarbības starp ārstēšanas veidiem (F (3, 24) = .63, ns).

Skaitlis 3 

a) C-Fos IR ekspresējošo VTA šūnu skaits; b) C-Fos IR ekspresējošo VTA TH-IR šūnu procentuālais daudzums. c) C-Fos-IR ekspresējošo šūnu skaits hipotalāma (PeF) perifornālajā apgabalā d) C-Fos-IR ekspresējošo PeF Orexin-A IR šūnu procentuālais daudzums. 4 ārstēšana ...

Perifornālais hipotalāms

Kā parādīts 3b, ANOVA, ko veica c-Fos IR PeF (analizētais reģions, kas attēlots 5b attēlā), atklāja Acb terapijas nozīmīgu ietekmi (F (3, 24) = 30.78, p <001), BLA ārstēšana (F (3, 24) = 30.52, p <.001) un mijiedarbība ar Acb × BLA (F (3, 24) = 8.75, p <.01). ANOVA, kas veikta ar tādu OrxA-IR šūnu procentuālo daudzumu, kurās ir c-Fos IR, atklāja ievērojamu Acb ārstēšanas efektu (F (3, 24) = 55.85, p <001), BLA ārstēšana (F (3, 24) = 23.52, p <.001) un Acb × BLA mijiedarbība ar ārstēšanu (F (3, 24) = 14.32, p <.001). 5.a un 5.b attēlā post hoc analīzes parāda, ka BLA inaktivācija ievērojami samazina intra-Acb DAMGO inducēto c-Fos ekspresiju un samazina oreksīna šūnu skaitu, kas ekspresē c-Fos (p <.05).

Dorsomedial hipotalāma

Kā parādīts Tabula 1, ANOVA, kas tika veikta c-Fos IR šūnu skaitam DMH, atklāja būtisku intra-Acb ārstēšanas efektu (F (3, 24) = 20.19, p <001), bet ne intra-BLA ārstēšanas efektu ( F (3, 24) = 1.63, ns) vai Acb × BLA terapijas mijiedarbība (F (3, 24) = 0.05, ns). ANOVA, kas veikta ar OrxA-IR šūnu procentuālo daudzumu, kas parāda c-Fos IR, atklāja nozīmīgu Acb ārstēšanas efektu (F (3, 24) = 13.39, p <001), BLA ārstēšanu (F (3, 24) = 5.85, p <05), bet nav mijiedarbības ar Acb × BLA (F (3, 24) = 89, p = 36).

Tabula 1 

To šūnu skaits, kas ekspresē c-Fos-IR (kopā) sānu hipotalāmā un dorsomediālajā hipotalāmā, un PeF Orexin-A IR šūnu procentuālā daļa, kas ekspresē c-Fos-IR (% oreksīna-A). Tika ievadītas 4 terapijas, ieskaitot Acb-DAMGO vai sāls šķīdumu (SAL) ...

Sānu hipotalāma

Kā parādīts Tabula 1, ANOVA, kas veikta c-Fos IR šūnu skaitam LH, neuzrādīja ne Acb ((F (3,24) = 11, ns), ne BLA ārstēšanas ((F (3, 24 = 6.82, p <)) ietekmi. .05) un nav mijiedarbības (F (3,24, 26) =, 3, ns). ANOVA, kas veikta ar OrxA-IR šūnu procentuālo daudzumu, kas parāda c-Fos IR, neatklāja nozīmīgu Acb ārstēšanas efektu (F (24, 64 ) = .3, ns), BLA ārstēšana (F (24, 08) = .3, ns) vai ārstēšanas mijiedarbība (F (24, 77) = .XNUMX, ns.)

diskusija

Saskaņā ar ad libitum augsta tauku piekļuves nosacījumiem, BLA inaktivācija samazināja Acb DAMGO radīto paaugstināto tauku uzņemšanu, atstājot pārspīlētu pārtikas uztvērēju pieeju uzvedībā, apstiprinot iepriekšējo ziņojumu (). Otrajā eksperimentā tika aplūkotas šīs pašas parādības, bet ar ierobežotiem augsta tauku satura uztura nosacījumiem, ļaujot visām ārstēšanas grupām, izņemot tikai Acb-DAMGO ārstēto grupu, sasniegt sāta sajūtu (ti, patērēt daudzumus, kas novēroti ad lib apstākļos Exp. 1). Intra-Acb sāls šķīdumā apstrādātie dzīvnieki ar BLA inaktivāciju vai bez tās patērēja līdzīgu augsta tauku satura diētu un parādīja līdzīgu pieejas uzvedību, kā prognozēts. Divas īpaši nozīmīgas ārstēšanas grupas - tās, kas saņēma Acb DAMGO ar BLA inaktivāciju vai bez tās, patērēja gandrīz visu 30hr testa sesijas pirmajā 2 minūšu pieejamo diētu ar augstu tauku saturu un parādīja identiskus uzvedības paradumus (ti, pārtikas produktu rezervuāru ievešanas ilgums), galīgajā 90 min. Ārstēšana Acb DAMGO ārstēšanā pārspīlēja gan pārtikas tvertnes pieejas paradumu skaitu, gan ilgumu neatkarīgi no BLA inaktivācijas, salīdzinot ar abām Acb sāls šķīduma grupām, kā aprakstīts iepriekš (). Svarīgi, kā tika novērots eksperimentā 1 un iepriekš (, ), ārstēšana ar Acb DAMGO bez BLA inaktivācijas noved pie tā, ka patēriņa līmenis ir vismaz divreiz lielāks par ierobežoto piekļuves nosacījumu. Tādēļ neirālās darbības modeļiem žurkām, kas saņēma Acb DAMGO ārstēšanu bez BLA inaktivācijas, jāatspoguļo gan motivācija pieeja un patērēt papildu pārtiku, kas pārsniedz pieejamo. Turpretī neirālās aktivitātes modeļiem žurkām, kas saņem ārstēšanu ar Acb DAMGO, ar BLA inaktivētu, jāatspoguļo paaugstināta motivācija pieeja pārtiku, bet mazāku motivāciju patērēt papildu pārtika, salīdzinot ar žurkām, kas tika ārstētas ar Acb DAMGO bez BLA inaktivācijas. Tas ir svarīgi ne tikai dizaina loģikai, bet arī pašreizējo datu interpretācijai. Pieejamā diēta tika izvēlēta ne tikai, lai grupās varētu uzturēt ierobežotu patēriņa līmeni, bet arī nodrošināt, lai katras ārstēšanas grupas žurkām, izņemot tikai DAMGO grupu, tiktu sasniegts vai tuvināts piesātinājums (kā noteikts eksperimentā 1 un iepriekš. konstatējumi, skat ).

Acb-DAMGO ievadīšana nozīmīgi palielināja VTA c-Fos IR dopamīnerģiskajos neironos, salīdzinot ar sāls kontroles režīmu, un intra-BLA muskimola ievadīšana neietekmēja šo pieaugumu. Iepriekšējie pētījumi liecina, ka c-Fos IR palielināšanās VTA un jo īpaši VTA dopamīna (DA) neironiem ir centrāla loma atalgojumā, motivācijā un narkomānijā (; ; ). Dopamīna antagonistu ievadīšana Acb blokos ēstgribas pieejas uzvedībai, tomēr neietekmē bada izraisīto čau patēriņu () vai Acb DAMGO tauku patēriņš (). Dopamīna agonistu ievadīšana Acb iekšienē palielina progresējošu attiecību, reaģējot uz pārtiku, bet neietekmē brīvu barošanu (). Šie dati un citi liecina, ka pārmērīgas ēstgribas uztveres uzvedība, kas novērota abās ārstēšanas grupās, ievadot Acb DAMGO, ar BLA inaktivāciju un bez tās, ir saistīta ar pastiprinātu aktivitāti VTA dopamīnerģiskajos neironos.

PeF orexin-A neironu aktivitātes modelis atbilst patēriņa modeļiem, kas parasti tiek novēroti pēc šīm pašām ārstēšanas sekām ad lib piekļuves nosacījumos (, ), ārstēšana ar Acb DAMGO, kas izraisa lielāku patēriņu nekā jebkura cita ārstēšana. Mēs arī konstatējām, ka Acb-DAMGO palielināja DMH c-Fos aktivitāti neatkarīgi no BLA ārstēšanas, bet tikai intra-DAMGO tikai palielināja oreksīna neironu īpatsvaru, kas izsaka c-Fos, salīdzinot ar kontrolēm. Neskatoties uz tās lomu DAMGO izraisītā barošanas uzvedībā (; ), DAMGO būtiski nepalielināja LH c-Fos aktivitāti, lai gan neļāva dzīvniekiem sasniegt sāta sajūtu.

Hipotalāmu jau sen uzskata par enerģijas homeostāzes autonomas regulēšanas centru; ieskaitot barošanas regulējumu, uzbudinājumu un atalgojumu (, ). Ir zināms, ka neironi, kas ekspresē oreksigēnus peptīdus oreksīna-A un melanīna koncentrējošā hormona (MCH), blīvi aizpilda hipotalāmu sānu laukumus (), jo īpaši perifornisko apgabalu. Augsta tauku satura diēta, ko novēroja centralizēti ievadīta oreksīna A lietošana (\ t) ir bloķēts, iepriekš ievadot opioīdu antagonistu naloksonu (\ t), kas liecina par opioīdu un oreksīna peptīdu mijiedarbību ar garšīgu pārtikas patēriņu. Intra-VTA oreksīna-A ievadīšana arī ierosina dopamīna neironus (Borgland et al., 2006). Oreksīna signalizācijas bloķēšana VTA samazina DAMGO izraisītu barību ar augstu tauku saturu (), tomēr, cik lielā mērā tas notiek, samazinot apetīti uzvedību, kas var veicināt patēriņa palielināšanos, nav zināms. Tāpēc pašreizējais konstatējums, ka BLA inaktivācija neietekmēja palielināto VTA dopamīnerģisko aktivitāti pēc Acb DAMGO, neskatoties uz PeF oreksīna aktivitātes samazināšanos, palielina gan uzvedības uzvedības, gan ēstgribīgo un patēriņa posmu uzvedības raksturojumu. Turklāt šie dati sniedz pārbaudāmas hipotēzes, lai pārbaudītu PeF oreksīna un VTA dopamīnerģiskās modulācijas ietekmi uz opioīdu vadītu pieeju un barošanas barošanas fāzēm.

Pašreizējā pētījumā tika izmantota ierobežota pieeja diētai (ti, pieejami grami), lai kontrolētu diferenciālo patēriņa līmeņu ietekmi pēc dažādām ārstnieciskām zālēm. Pētījumā tika ierobežota arī viena diēta; līdz ar to pastāv iespēja, ka līdzīgi var regulēt citu garšīgu diētu opioīdu vadīšanu. Augsta tauku satura diētas izvēli noteica agrākā raksturīgā saistītā tīkla raksturojums, kas atklāja, ka tas ir Acb DAMGO augsta tauku satura barošana (; pārskatīšanai), it īpaši BLA lomu (, ). Nav zināms, vai šie konstatējumi ir raksturīgi diētai ar augstu tauku saturu, vai arī tie būtu novēroti, izmantojot alternatīvu diētu. Interesanti, ka nesen veiktais pētījums atklāja, ka pat ļoti garšīgu uzturu vidū ir izteikta atšķirība c-fos aktivācijas modeļos galvenajos mezokortikolimbiskās ķēdes barošanas regulējošajos reģionos (). Turpmākie pētījumi būs nepieciešami, lai noteiktu, vai pašreizējie konstatējumi ir raksturīgi ar augstu tauku saturu.

Kopumā šie dati sniedz ieskatu par to, kā BLA reaģē uz Acb opioīdu aktivizēšanu, lai īpaši virzītu patēriņu, bet ne uzvedību, kas saistīta ar augstu tauku saturu. Dati liecina, ka patēriņa uzvedība, ko izraisa Acb-DAMGO, var būt saistīta ar palielinātu oreksīna-A neironu aktivitāti PeF, bet palielināta uztura pieeja uzvedībai šķiet saistīta ar paaugstinātu VTA dopamīnerģisko aktivitāti, un BLA aktivācija ir nepieciešama tikai, lai ievērotu patēriņa fāzē. Šie dati sniedz labāku izpratni par divām atdalāmām barošanas metodēm labi raksturotā barošanas modelī. Šis pētījums paplašina mūsu zināšanas par nervu shēmu, kas ir ļoti svarīga garšas sajūtu veicinošai barošanai, un veicina to, kā izprast aptaukošanās un pārtikas atkarības uzvedības attīstību.

​

Skaitlis 4 

Shematiski līniju zīmējumi, kas pielāgoti no Paxinos & Watson (1998) atlanta, attēlojot koronālos griezumus, kas satur analizētus smadzeņu reģionus, kas izklāstīti zilā zonā (pelēkā zonā) un palielināti tieši zemāk. Reģioni: () ventrālā tegmentālā zona, VTA; (B) dorsomedial ...

Pateicības

Autori vēlētos atzīt atbalstu DA024829 no Nacionālā narkomānijas institūta MJW.

Zemsvītras piezīmes

Autori paziņo, ka nav interešu konflikta.

Atsauces

  1. Badiani A, Leone P, Noel MB, Stewart J. Ventral tegmental apgabala opioīdu mehānismi un norīšanas uzvedības modulācija. Smadzeņu izpēte. 1995, 670 (2): 264 – 276. [PubMed]
  2. Baldo BA, Sadeghian K, Basso AM, Kelley AE. Selektīvās dopamīna D1 vai D2 receptoru blokādes sekas kodolkrāsu apakšreģionos uz norietīgu uzvedību un ar to saistīto motorisko aktivitāti. Behav Brain Res. 2002 Dec 2; 137 (1 – 2): 165 – 177. [PubMed]
  3. Baldo BA, Pratt WE, Will MJ, Hanlon EC, Bakshi VP, Cador M. Motivācijas principi, ko atklāj dažādas funkcijas, kas saistītas ar neirofarmakoloģiskiem un neuroanatomiskiem substrātiem, kas balstās uz barošanas uzvedību. Neurosci Biobehav Rev. 2013 Nov; 37 (9 Pt A): 1985 – 1998. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  4. Ball GF, Balthazart J. Cik noderīga ir apetīte un uztura atšķirība mūsu izpratnei par seksuālās uzvedības neuroendokrīno kontroli? Horm Behav. 2008 Feb; 53 (2): 307 – 311. autora atbilde 315-8. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  5. Berridge KC. Motivācijas koncepcijas uzvedības neirozinātnē. Physiol Behav. 2004 Apr., 81 (2): 179 – 209. Pārskatīšana. [PubMed]
  6. Berridge KC. “Patīk” un “vēlas” pārtiku: smadzeņu substrāti un lomas ēšanas traucējumos. Fizioloģija un uzvedība. 2009; 97 (5): 537–550. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  7. Cason AM, Smith RJ, Tahsili-Fahadan P, Moorman DE, Sartor GC, Aston-Jones G. Oreksīna / hipokretīna loma atlīdzības meklēšanā un atkarībā: ietekme uz aptaukošanos. Fizioloģija un uzvedība. 2010, 100 (5): 419 – 428. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  8. Clegg DJ, Air EL, Woods SC, Seeley RJ. Ēšana, ko izraisa oreksīna-A, bet ne melanīna koncentrējošais hormons, ir opioīds. Endokrinoloģija. 2002, 143 (8): 2995 – 3000. [PubMed]
  9. Craig W. Apetīti un atriebības kā instinktu sastāvdaļas. Bioloģiskais biļetens. 1918: 34: 91 – 107. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  10. Datums Y, Ueta Y, Yamashita H, Yamaguchi H, Matsukura S, Kangawa K, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakazato M. Okseksi, oreksigēnās hipotalāma peptīdi mijiedarbojas ar autonomām, neuroendokrīnām un neiroregulatīvām sistēmām. Proc Natl Acad Sci USA. 1999, 96 (2): 748 – 753. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  11. Dela Cruz JA, Kokss T, Karagiorgis T, Sampson C, Icaza-Cukali D, Kest K, Ranaldi R, Bodnar RJ. c-Fos inducēšana mezotelencālo dopamīna ceļa projekcijas mērķos un muguras striatum pēc žurku cukuru un tauku iekšķīgas lietošanas. Brain Res Bull. 2015 Feb; 111: 9 – 19. [PubMed]
  12. Lauki HL, Hjelmstad GO, Margolis EB, Nicola SM. Ventral tegmental area neironi, kas mācās apetīti un pozitīvi pastiprināti. Gada pārskats par neiroloģiju. 2007: 30: 289 – 316. [PubMed]
  13. Hanlon EC, Baldo BA, Sadeghian K, Kelley AE. GABAergiskā, opioīdu vai dopamīnerģiskā kodola stimulācijas izraisītā pārtikas patēriņa palielināšanās vai pārtikas meklējumi: vai tas ir bads? Psihofarmakoloģija (Berl) 2004 Mar; 172 (3): 241 – 247. [PubMed]
  14. Harris GC, Aston-Jones G. Arousal un atalgojums: dichotomija oreksīna funkcijā. Neiroloģijas tendences. 2006, 29 (10): 571 – 577. [PubMed]
  15. Ikemoto S, Panksepp J. Atšķirības starp ēstgribīgām un lietojošām atbildēm, izmantojot farmakoloģiskas manipulācijas ar atalgojumu saistītiem smadzeņu reģioniem. Behav Neurosci. 1996 Apr., 110 (2): 331 – 345. [PubMed]
  16. Jager G, Witkamp RF. Endokannabinoīdu sistēma un apetīte: atbilstība pārtikas atlīdzībai. Nutr Res Rev. 2014 Jun 2; 27 (1): 172 – 185. [PubMed]
  17. Jennings JH, Ung RL, Resendez SL, Stamatakis AM, Taylor JG, Huang J, Veleta K, Kantak PA, Aita M, Shilling-Scrivo K, Ramakrishnan C, Deisseroth K, Otte S, Stuber GD. Hipotalāmu tīkla dinamikas vizualizēšana apetītām un patērējošām uzvedībām. Šūna. 2015 Jan 29, 160 (3): 516 – 527. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  18. Kalra SP, Dube MG, Pu S, Xu B, Horvath TL, Kalra PS. Mijiedarbība ar ēstgribu regulējošiem ceļiem ķermeņa svara hipotalāmajā regulēšanā. Endokrīnās atsauksmes. 1999, 20 (1): 68 – 110. [PubMed]
  19. Kelley AE, Baldo BA, Pratt WE, Will MJ. Corticostriatal-hipotalāma shēma un pārtikas motivācija: enerģijas, rīcības un atlīdzības integrācija. Physiol Behav. 2005 Dec 15; 86 (5): 773 – 795. [PubMed]
  20. Lorenz K. Salīdzinošā metode iedzimtu uzvedības modeļu izpētei. Symp. Soc. Exp. Biol. 1950: 4: 221 – 268.
  21. Nicola SM, Deadwyler SA. Kodolu accumbens neironu šaušanas ātrums ir atkarīgs no dopamīna un atspoguļo kokainu meklējošās uzvedības laiku žurkām, izmantojot progresējošu pastiprinājuma grafiku. J Neurosci. 2000 Jul 15; 20 (14): 5526 – 5537. [PubMed]
  22. Park TH, Carr KD. Fos līdzīga imunoreaktivitātes neiranatomiskie modeļi, ko inducē ar garšīgu maltīti un ēdienu pārī savienotu vidi sālsūdens un naltreksona ārstētām žurkām. Smadzeņu izpēte. 1998: 805: 169 – 180. [PubMed]
  23. Vai MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Nucleus accumbens mu-opioīdi regulē augsta tauku satura diētas uzņemšanu, aktivizējot izplatītu smadzeņu tīklu. J Neirozinātne. 2003, 23 (7): 2882 – 2888. [PubMed]
  24. Vai MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Amygdala ir būtiska, lai izdalītu tauku opioīdu starpniecību. Neiroreport. 2004, 15 (12): 1857 – 1860. [PubMed]
  25. Vai MJ, Pratt WE, Kelley AE. Augu tauku barošanas farmakoloģiskais raksturojums, ko izraisa ventrālā striatuma opioīdu stimulācija. Physiol Behav. 2006 septembris 30, 89 (2): 226 – 234. [PubMed]
  26. Vai MJ, Pritchett CE, Parker KE, Sawani A, Ma H, Lai AY. Amigdala iesaistīšanās uzvedības raksturojums mediācijas iekšējās uzvedības opioīdu iedarbībā. Uzvedības neirozinātne. 2009, 123 (4): 781 – 793. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  27. Yamanaka A, Kunii K, Nambu T, Tsujino N, Sakai A, Matsuzaki I, Miwa Y, Goto K, Sakurai T. Orexīna izraisīta pārtikas uzņemšana ietver neiropeptīdu Y ceļu. Smadzeņu izpēte. 2000, 859 (2): 404 – 409. [PubMed]
  28. Zhang M, Kelley AE. Pastiprināta augsta tauku satura uztura uzņemšana pēc striatāla stimulācijas: mikroinjekcijas kartēšana un fos ekspresija. Neirozinātne. 2000, 99 (2): 267 – 277. [PubMed]
  29. Zhang M, Kelley AE. Saharīna, sāls un etanola šķīdumu uzņemšana palielinās, ieviešot mu opioīdu agonistu kodolu accumbens. Psihofarmakoloģija (Berl) 2002, 159 (4): 415 – 423. [PubMed]
  30. Zhang M, Balmadrid C, Kelley AE. Nucleus accumbens opioīds, GABaergic un dopamīnerģiska garšīgas pārtikas motivācijas modulācija: kontrastējošas iedarbības, ko atklāj progresīvā attiecība pētījumā ar žurkām. Behav Neurosci. 2003 Apr., 117 (2): 202 – 211. [PubMed]
  31. Zheng H, Patterson LM, Berthoud HR. Orexīna signalizācija vēdera apvalka zonā ir nepieciešama, lai palielinātu tauku apetīti, ko izraisa kodolskābes opioīdu stimulācija. J Neiroloģijas. 2007, 27 (41): 11075 – 11108. [PubMed]