Grelīna loma pārtikas atlīdzībā: ghrelīna ietekme uz saharozes pašregulāciju un mezolimbisko dopamīnu un acetilholīna receptoru gēna ekspresiju (2012)

PMCID: PMC3298643

Šis raksts ir bijis citēts citiem PMC izstrādājumiem.

Iet uz:

Anotācija

Lēmumu ēst ļoti ietekmē nemodostatiski faktori, piemēram, ēdiena garša. Patiešām, ēdiena atalgojošā un motivējošā vērtība var ignorēt homeostatiskos signālus, izraisot palielinātu patēriņu un līdz ar to arī aptaukošanos. Ghrelin, no zarnām iegūts oreksigēns hormons, ir nozīmīga loma homeostatiskajā barošanā. Tomēr nesen tas ir parādījies kā spēcīgs mezolimbiskās dopamīnerģiskās atlīdzības ceļa modulators, kas liecina par grelīna lomu pārtikas atlīdzībā. Šeit mēs centāmies noteikt, vai grelīns un tā receptori ir svarīgi, lai pastiprinātu dabiskā cukura atlīdzības motivāciju, pārbaudot grelīna receptoru (GHS-R1A) stimulēšanas lomu un blokādi saharozes progresējošās attiecības operantu kondicionēšanai, procedūru, ko izmanto, lai izmērītu motivācijas iegūt atlīdzību. Perifērā un centrāli ievadīts grelīns ievērojami palielināja operanta reakciju un tāpēc stimulējošu motivāciju saharozei. Izmantojot GHS-R1A antagonistu JMV2959, mēs parādījām, ka GHS-R1A signalizācijas bloķēšana ievērojami samazināja operanta reakciju uz saharozi. Mēs turpinājām pētīt grelīna ietekmi uz galvenajiem mezolimbu atalgojuma mezgliem, ventrālo tegmentālo laukumu (VTA) un kodolu accumbens (NAcc), novērtējot hroniskas centrālās ghrelin ārstēšanas ietekmi uz tādu gēnu izpausmi, kas kodē galvenos atalgojuma neirotransmiteru receptorus, proti, dopamīnu un acetilholīnu. Grelīna ārstēšana bija saistīta ar paaugstinātu dopamīna receptoru D5 un acetilholīna receptoru nAChRβ2 gēnu ekspresiju VTA un samazinātu D1, D3, D5 un nAChRα3 ekspresiju NAcc. Mūsu dati norāda, ka grelīnam ir svarīga loma saharozes motivācijā un pastiprināšanā, kā arī ietekme uz dopamīnu un acetilholīnu kodējošo gēnu izpausmi mezolimbu atalgojuma shēmā. Šie atklājumi liecina, ka grelīna antagonistiem ir terapeitisks potenciāls aptaukošanās ārstēšanai un saldā ēdiena pārmērīga patēriņa nomākšanai.

atslēgvārdi: Acetilholīns, dopamīns, pārtikas motivācija, grelins, GHS-R1A, kondicioniera kondicionēšana

IEVADS

Ir vispāratzīts, ka cirkulējošajam hormonam ghrelin ir svarīga loma enerģijas līdzsvara regulēšanā (Kojima un citi. 1999; Nogueiras, Tschop & Zigman 2008). Izdalās galvenokārt ar kuņģi (Dornonvilla de la Cour un citi. 2001), ghrelin izraisa spēcīgu oreksigēno iedarbību gan grauzējiem, gan cilvēkiem (paceplītis un citi. 2000, 2001), stimulējot tās centrālās nervu sistēmas (CNS) receptoru (Salomeun citi. 2009a), augšanas hormona sekrēcijas receptoru (GHS-R1A) (Hovards un citi. 1996). Ghrelin patiešām ir vērsts uz hipotalāma un smadzeņu stumbra ķēdēm, kas iesaistītas barošanā un enerģijas homeostāzē (Diksons, Ļengs un Robinsons 1993; pils pagalms un citi. 2000; Hevsons un Diksons 2000; Faulconbridge un citi. 2003, 2008). Tomēr barošanas paradumus motivē ne tikai nepieciešamība pēc barības vielu papildināšanas (ti, nepieciešamība atjaunot homeostāzi); garšīgi ēdieni ar augstu tauku un / vai cukura saturu var motivēt uzņemšanu, neskatoties uz sāta stāvokli (Zheng un citi. 2009). Patīkamu dabisko stiprinājumu, piemēram, cukura, pārmērīgs patēriņš ir galvenais faktors, kas veicina pašreizējo aptaukošanās epidēmiju. Atliek noteikt, vai centrālā grelīna signalizācijas sistēma ir svarīga cukura patēriņam, kas nav homeostatisks, tādējādi nodrošinot potenciāli svarīgu terapeitisko mērķi, lai nomāktu kaloriju, garšīgu un atalgojošu saldo ēdienu uzņemšanu.

Iedvesmojoties no nesenajiem atklājumiem, ka ghrelīns mijiedarbojas ar mezolimbiskām zonām, kas iesaistītas ne homeostatiskā / atalgojuma barošanā (Jerlhags un citi. 2007), mēs centāmies novērtēt grelīna un tā receptoru lomu pārtikas motivācijā un mērķtiecīgā uzvedībā par saharozes atlīdzību. Šīs mezolimbiskās zonas jau ilgu laiku ir bijušas narkotiku atkarības pētījumu uzmanības centrā, jo tās ir galvenais mērķis lielākajai daļai ļaunprātīgas narkotiku (Engel 1977; Koob 1992). Ghrelin mērķa mezolimbiskais ceļš ietver dopamīna projicēšanu no ventrālā pamatviļņa (VTA) uz akumulatora kodolu (NAcc) (Jerlhags un citi. 2006, 2007), ceļš, kas piešķir atlīdzību gan no atkarību izraisošām ķīmiskām zālēm, gan dabiskām atlīdzībām, ieskaitot pārtiku (Koob 1992). Interesanti, ka GHS-R1A tiek ekspresēts uz dopamīnerģiskiem neironiem (Abizaid un citi. 2006), kas norāda uz grelīna iespējamo tiešo ietekmi uz VTA dopamīna sistēmu. Šos imūnhistoķīmiskos datus papildina uzkrājošie uzvedības un elektrofizioloģiskie pierādījumi par grelīna iedarbību VTA. Piemēram, grelīna ievadīšana VTA iekšienē palielina VTA dopamīna neironu aktivitāti (Abizaid un citi. 2006) un palielina dopamīna izdalīšanos NAcc (Jerlhags un citi. 2007). Ghrelin arī palielina holīnerģiskās un dopamīnerģiskās saites aktivitāti, kas ir svarīgs atlīdzības ceļš. Patiešām, šķiet, ka vismaz daļu grelīna ietekmes uz dopamīnu ietekmē holīnerģiskā sistēma (Jerlhags un citi. 2007).

Lai gan ir noteikts, ka ghrelinam ir spēcīga oreksigēna iedarbība, kad pārtika ir viegli pieejama, vēl nav zināms, vai ghrelīna oreksigēno iedarbību var paplašināt, iekļaujot motivācijas mainīšanu un dabisko stiprinājumu, piemēram, salda ēdiena, garšu pastiprinošus aspektus (ti, pieaugošu vēlmi un pūles / darbs, ko kāds vēlas ieguldīt, lai iegūtu saldu cienastu). Atkarības zāļu motivāciju un atalgojuma efektivitāti var novērtēt pašpārvaldes, operatīvās kondicionēšanas modelī. Operāciju kondicionēšana ir galvenā motivētas uzvedības analīzes procedūra, kurā tiek novērtēta iegūtā un brīvprātīgā rīcība, kas vērsta uz atlīdzības iegūšanu. Izmērot darba apjomu, kuru subjekts vēlas tērēt, lai iegūtu atlīdzību, tas piedāvā objektīvu atalgojuma vērtības izmēru (Hodos 1961). Mezolimbikas reģioniem ir izšķiroša nozīme uzvedības motivējošos aspektos, ieskaitot barošanu, un ir skaidrs, ka ghrelin ietekmē neironu darbību attiecīgajos mezolimbiskos reģionos. Tas, kas vēl nav parādīts, ir ghrelin tiešā ietekme uz pārtikas ar augstu cukura līmeni motivāciju. Mūsu pētījuma galvenais mērķis ir izpētīt, vai centrālajai grelinīna signālierīcei ir nozīme pārtikas paaugstināta cukura līmeņa hedoniskajās / motivējošajās vai pozitīvajās pastiprinošajās īpašībās un vai šīs sistēmas nomākšana, izmantojot jaunu selektīvo GHS-R1A antagonistu JMV2959 (Salomeun citi. 2009a), var nomāc motivāciju iegūt saldumus. GHS-R1A antagonisti pašlaik terapeitiski tiek vērtēti 2 tipa diabēta pacientiem, jo ​​ghrelin signālu nomākšana labvēlīgi ietekmē glikozes homeostāzi (Saule un citi. 2006), efektiem, kas būtu noderīgi arī ar samazinātu saldo ēdienu daudzumu. Vairākas pierādījumu līnijas liek domāt, ka dopamīnerģiskai un holīnerģiskai neirotransmisijai ir liela nozīme motivētā atalgojuma uzvedībā. Tāpēc, lai sīkāk raksturotu ghrelin ietekmi uz centrālo atalgojuma shēmu, mēs novērtējām ghrelin terapijas ietekmi uz dopamīna un acetilholīna receptoru gēnu ekspresijas izmaiņām galvenajos atalgojuma mezglos - VTA un NAcc - pēc ārstēšanas ar ghrelin.

METODES

Dzīvnieki

Pieauguši vīriešu kārtas Sprague-Dawley žurkas (200 – 250 g, Charles River, Vācija) tika izmitināti 12 stundu gaismas / tumsas ciklā ar regulāru ēdienu un ūdeni ad libitum, izņemot gadījumus, kad norādīts citādi. Visas procedūras dzīvniekiem tika veiktas ar ētisku atļauju un saskaņā ar Gēteborgas Universitātes Institucionālās dzīvnieku aprūpes un izmantošanas komitejas vadlīnijām.

Ķirurģija

Uzvedības eksperimentiem, kuru mērķis ir CNS, trešā kambara virzošā kanula (26 gabarīts; Plastics One, Roanoke, VA, ASV; koordinātas: viduslīnijā, 2 mm aizmugurē pret bregmu un 5.5 mm vēderā līdz dura mater, ar inžektoru 7.5 mm ventrāls uz duru) tika implantēts ar izoflurāna anestēziju. Kanulas piestiprināja pie galvaskausa ar zobu akrila un juvelieru skrūvēm un aizvēra ar obturatoru, kā aprakstīts iepriekš (Skibicka, Alhadeff & Grill 2009). Kanula novietojums trešajā kambara tika pārbaudīts nedēļu pēc operācijas, izmērot simpatodadrenālā mediētā glikēmisko reakciju uz 5-tio-D-glikozes centrālo injekciju [210 μg nesēja (fizioloģiskā šķīduma) 2 μl) (Ritter, Slusser & Stone 1981. gads). Šajā ievietošanas pārbaudes protokolā subjekta iekļaušanai bija nepieciešams paaugstināt vismaz 100% no sākotnējā plazmas glikozes līmeņa pēc injekcijas. Gēnu ekspresijas eksperimentam žurkas tika anestēzijas (60 – 75 mg / kg Ketalar un 0.5 mg / kg Domitor ip; Pfizer, Zviedrija; Orion Co, Somija) un hronisku intracerebroventrikulāru (ICV) kanulu (Alzet Brain Infusion Kit II, DURECT Corp, Cupertino, CA, ASV) tika ievietots sānu kambara, izmantojot šādas koordinātas: 0.6 mm aizmugures no bregmas, 1.4 mm sānu virzienā no viduslīnijas, 2.3 ventrāls no galvaskausa. Kanēlis caur polietilēna katetru tika savienots ar osmotisko minipumpu (Alzet mini-osmotiskā sūkņa modelis 2002, Durect, Cupertino, plūsmas ātrums, 0.5 µl / stundā 14 dienām), kas implantēts zem ādas dzīvnieku aizmugurē.

Operantu kondicionēšanas modelis

Aparatūra

Operantu kondicionēšanas eksperimenti notika astoņās žurkām paredzētās operatīvās kondicionēšanas kamerās (30.5 × 24.1 × 21.0 cm; Medical-Associates, Džordžija, VT, ASV), kuras tika ievietotas skaņas novājētā, vāji apgaismotā skapī. Katrā kamerā bija metāla režģa grīda, divas izvelkamās sviras ar baltām spuldzēm virs tām un pārtikas granulu izsmidzinātājs, kas var piegādāt 45 mg saharozes granulas (GlaxoSmithKline, Test Diet, Richmond, IN, ASV) uz pārtikas paplātes. Datu vākšanu un apstrādi kontrolēja MED-PC programmatūra (Medical-Associates, Džordžija, VT, ASV).

treniņš

Procedūras kondicionēšanai izmantotā procedūra tika pielāgota no (la Fleur un citi. 2007) un (Tracy un citi. 2008). Visām žurkām tika piemērota viegla barības ierobežošanas paradigma, kuras laikā viņu sākotnējais ķermeņa svars vienas nedēļas laikā tika pakāpeniski samazināts līdz 90%. Žurkām, kuras kanulēja ar ICV, apmācība sākās nedēļu pēc operācijas. Pirms ievietošanas operantu kastēs žurkas vismaz divas reizes tika pakļautas saharozes granulām mājas būra vidē. Pēc tam žurkas iemācījās piespiest saharozes granulas saskaņā ar fiksētu attiecību FR1 grafiku ar divām sesijām dienā. Izmantojot FR1, vienreiz nospiežot uz aktīvās sviras, tika piegādāta viena saharozes granula. Visas FR sesijas ilga 30 minūtes vai līdz brīdim, kad žurkas nopelnīja 100 granulas, atkarībā no tā, kurš notika agrāk. Lielākā daļa žurku pēc 100 līdz 10 sesijām sasniedza 15 granulas uz vienu sesijas kritēriju. Tika reģistrēti neaktīvās sviras spiedieni, bet tiem nebija ieprogrammētu seku. Pēc FR1 grafika sesijām sekoja FR3 un FR5 (ti, attiecīgi trīs un pieci spiedieni uz granulu). Atkal bija nepieciešams vismaz 100 atbilžu skaits uz aktīvās sviras sesiju, lai pārietu uz nākamo grafiku; lielākajai daļai žurku, lai sasniegtu šo līmeni, bija nepieciešams tikai viens līdz divi FR3 un FR5 grafiki. Pēc FR5 grafika sekoja progresīvā koeficienta (PR) grafiks, kura laikā atlīdzības izmaksas tiek pakāpeniski palielinātas par katru nākamo atlīdzību, lai noteiktu darba daudzumu, kuru žurka vēlas ieguldīt balvas iegūšanā. Atbildes reakcijas prasības palielinājās saskaņā ar šādu vienādojumu: reakcijas attiecība = [5e (0.2 × infūzijas numurs)] - 5, izmantojot šādas sērijas: 1, 2, 4, 9, 12, 15, 20, 25, 32, 40, 50 , 62, 77, 95, 118, 145, 178, 219, 268, 328. PR sesija beidzās, kad žurka nebija spējusi nopelnīt atlīdzību 60 minūšu laikā. Lūzuma punkts tika definēts kā galīgā pabeigtā attiecība pirms sesijas beigām. Reakcija tika uzskatīta par stabilu, ja vienā sesijā nopelnīto pārtikas granulu skaits neatšķīrās vairāk par 15% trīs sesijās pēc kārtas. Vairumā gadījumu reaģēšana stabilizējās piecu līdz septiņu sesiju laikā. PR tests tika veikts vienu sesiju dienā. Sesijas ilga vidēji 75 minūtes, lai gan visas žurkas palika operantu kastēs līdz 120 minūtēm, lai visas sesijas varētu beigties. Pēc tam žurkas tika pārvietotas uz mājas būriem, lai vienu stundu mērītu brīvi barojošu čau daudzumu. Apmācības beigās un pirms pārbaudes žurkas tika nogādātas atpakaļ ad libitum barošanas grafiks.

Eksperimentālais dizains

Visas žurkas saņēma intraperitoneāli (IP) vai atsevišķā žurku grupā trešā kambara (trešā ICV) injekcijas gaismas cikla sākumā (grelin testiem) un ghrelin antagonistu eksperimenta 20 eksperimenta 48 gaismas cikla vēlās minūtes pirms sākuma. operātu testēšana. Visus apstākļus atdalīja vismaz XNUMX stundas un vadīja līdzsvarotā veidā (katra žurka saņēma visus nosacījumus atsevišķās pārbaudes dienās).

Eksperiments 1: perifēras vai centrālas grelīna ievadīšanas ietekme uz PR operantu, reaģējot uz saharozi žurkām

Visām žurkām sviru spiedošās atbildes tika pārbaudītas pēc diviem nosacījumiem: IP apstrādes ar fizioloģisko šķīdumu vai acilētu žurku grelīnu (Tocris, Bristole, UK; 0.33 mg / kg ķermeņa svara pie 1 ml / kg). Iepriekš tika pierādīts, ka izvēlētā IP grelēna deva inducē barošanas reakciju žurkām (paceplītis un citi. 2000), kā arī pelēm izraisīja uzkrāto dopamīna izdalīšanos un lokomotoro aktivitāti (Jerlhag 2008). Pēc operantu pārbaudes žurkām ļāva brīvi piekļūt barībai, un pēc vienas stundas tika mērīts čau uzņemšana. Tālāk atsevišķā žurku grupā mēs pārbaudījām atbildes pēc mērķtiecīgas CNS zāļu ievadīšanas pēc trim nosacījumiem šādi: kontroles nosacījums ar trešā kambara fizioloģisko šķīdumu, 0.5 µg vai 1.0 µg ar acilētu žurku grelinu (Tocris) 1 µl tilpumā. Iepriekš tika pierādīts, ka izvēlētās ghrelin devas izraisa barošanas reakciju (Nakazato un citi. 2001). Gan ICV, gan IP grelinu pētījumos sviras piespiešanas eksperimenti tika veikti piesātinātā stāvoklī (ti, kad ēdiena uzņemšanu vadīja nevis ēdiens, bet gan homeostatiskās piedziņas) pārtikas atalgojošās īpašības. Arī abos pētījumos pēc operantu pārbaudes žurkām ļāva brīvi piekļūt barībai, un pēc vienas stundas tika mērīts čau uzņemšana.

Eksperiments 2: perifēras vai centrālas ārstēšanas ar ghrelin receptoru (GHS-R1A) antagonistu (JMV2959) ietekme uz stimulējošu motivāciju saharozes atlīdzībai žurkām

PR operētās reakcijas tika pārbaudītas pēc trim nosacījumiem šādi: kontroles nosacījums ar IP fizioloģisko šķīdumu, 1 mg / kg vai 3 mg / kg JMV2959 (AEZS-123, AeternaZentaris GmBH, Frankfurte, Vācija). JMV2959 devas tika izvēlētas, pamatojoties uz Jerlhags un citi. (2009) Un Egecioglu un citi. (2010) un provizoriskie dati, par kuriem iepriekš tika pierādīts, ka tas samazina nosacītās vietas izvēles izturēšanos, bet tām nav neatkarīgas ietekmes uz lokomotoro darbību. Pēc operantu pārbaudes žurkām ļāva brīvi piekļūt barībai. Lai novērtētu tiešas akūtas centrālās antagonistu iedarbības sekas atsevišķā žurku grupā, operatīvā uzvedība tika pārbaudīta pēc šādiem trim nosacījumiem: kontroles nosacījums ar trešā kambara fizioloģiskā šķīduma injekciju, JNV5 10 μg vai 2959 μg 1 μl tilpumā. JMV2959 devas izvēlētās ICV devas tika balstītas uz Salomeun citi. (2009a), kurā tika bloķēta 1 µg ghrelin ievadītā ICV oreksigēnā darbība. Pēc operantu pārbaudes žurkām ļāva brīvi piekļūt barībai, un pēc vienas stundas laika, kā arī 24 stundās pēc sākotnējās injekcijas tika izmērīta čau uzņemšana. Pētījumi ar GHS-R1A antagonistu, atšķirībā no tiem, kas veikti ar ghrelin (skatīt iepriekš), tika veikti ar žurkām pēc 16 stundas barības ierobežojuma pirms injekcijām, lai nodrošinātu augstu endogēno cirkulējošā grelīna līmeni (Cummings un citi. 2001).

Eksperiments 3: ghrelin izraisītas izmaiņas ar dopamīnu un acetilholīnu saistīto gēnu ekspresijā VTA un NAcc

Šeit mēs divu nedēļu laikā noteicām hroniskas ICV grelīna infūzijas ietekmi uz atlasīto gēnu izpausmi, kas saistīti ar dopamīnerģisko un holīnerģisko pārnešanu divos galvenajos mezolimbisko atalgojuma ceļu mezglos - VTA un NAcc. Atlasītie ar dopamīnu saistītie gēni bija gēni, kas kodēja dopamīna receptorus (D1A, D2, D3, D5), katehol-O-metiltransferāzi, tirozīna hidroksilāzi (tikai VTA) un monoamīnoksidāzi A. Ar acetilholīnu saistīti gēni bija: nikotīna receptoru apakšvienības (α3 α6, β2, β3). Gēni, kurus mēs izvēlējāmies novērtēt, iepriekš ir bijuši saistīti ar grelīna iedarbību un / vai atalgojuma / motivācijas uzvedību (Kelley un citi. 2002; Figlēvičs un citi. 2006; Jerlhags un citi. 2006, 2007; Sibilija un citi. 2006; Dalley un citi. 2007; Kuzmins un citi. 2009; Patvērums un citi. 2009; Nimitvilai & Brodie 2010; Perello un citi. 2010). Lai palielinātu izredzes pamanīt ietekmi uz gēnu ekspresiju, priekšroka tika dota akūtai injekcijai, izmantojot hroniskas grelinīna / fizioloģiskā šķīduma infūzijas protokolu. turklāt, ja ghrelīns ilgtermiņā ir svarīgs atlīdzības sistēmas regulators, veicinot pārēšanās un aptaukošanos, tā hroniskajai ietekmei uz galveno atalgojuma mehānismu maiņu, visticamāk, būs ievērojama nozīme.

Zāļu ievadīšana un audu sadalīšana

Katetru un osmotisko sūkni piepildīja ar acetilēta cilvēka ghrelīna (dāvana no Rose Pharma, Kopenhāgena, Dānija) šķīdumu (8.3 µg / žurka / dienā) vai fizioloģiskā šķīduma nesējvielu (0.9% NaCl); iepriekš ir pierādīts, ka šī deva un ārstēšanas ilgums ietekmē gēnu ekspresiju hipotalāmā (Salomeun citi. 2009b). Četrpadsmit dienas pēc minipumpu implantācijas žurkas nonāvēja ar dekapitāciju. Smadzenes tika ātri noņemtas, un VTA un NAcc tika sadalīti, izmantojot smadzeņu matricu (katra reģiona robežas tika noteiktas, pamatojoties uz Paxinos & Watson 1986), sasaldē šķidrā slāpeklī un uzglabā –80 ° C temperatūrā, lai vēlāk noteiktu mRNS ekspresiju.

RNS izolācija un mRNS ekspresija

Atsevišķus smadzeņu paraugus homogenizēja Qiazol (Qiagen, Hilden, Vācija), izmantojot TissueLyzer (Qiagen). Kopējā RNS tika ekstrahēta, izmantojot RNeasy Lipid Tissue Mini Kit (Qiagen) vai RNeasy Micro Kit (Qiagen), abus ar papildu DNSse apstrādi (Qiagen). RNS kvalitāte un daudzums tika novērtēti ar spektrofotometriskiem mērījumiem (Nanodrop 1000, NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, ASV). CDNS sintēzei kopējais RNS tika apgriezts, pārrakstīts, izmantojot nejaušus heksamerus (Applied Biosystems, Sundbyberg, Zviedrija) un Superscript III reverso transkriptāzi (Invitrogen Life Technologies, Paisley, UK) saskaņā ar ražotāja aprakstu. Rekombinanto RNaseout ribonukleāzes inhibitoru (Invitrogen) pievienoja, lai novērstu RNāzes izraisītu noārdīšanos. Visas cDNS reakcijas tika veiktas trijos eksemplāros. Reālā laika reversās transkripcijas PCR tika veikta, izmantojot TaqMan Custom Array testus. Tie tika izstrādāti ar TaqMan zondi un primeru komplektiem mērķa gēniem, kas izvēlēti no tiešsaistes kataloga (Applied Biosystems). Katra TaqMan Array platformas osta tika ielādēta ar cDNS, kas atbilst 100 ng kopējam RNS, apvienojumā ar ūdeni, kurā nav nukleāzes, un 50 µl TaqMan Gene Expression Master Mix (Applied Biosystems) līdz galīgajam tilpumam 100 µl. TaqMan masīvi tika analizēti, izmantojot 7900HT sistēmu ar TaqMan Array Upgrade (Applied Biosystems). Termiskās riteņbraukšanas apstākļi bija: 50 ° C divas minūtes, 94.5 ° C 10 minūtes, kam sekoja 40 cikli 97 ° C 30 sekundes un 59.7 ° C vienu minūti.

Gēnu ekspresijas vērtības tika aprēķinātas, pamatojoties uz ΔΔCt metode (Livak & Schmittgen 2001), kurā fizioloģiskā šķīdumā apstrādāta grupa tika izraudzīta par kalibratoru. Īsi sakot, ΔCt apzīmē sliekšņa ciklu (Ct) no mērķa gēna mīnus atsauces gēna un ΔΔCt apzīmē ΔCt ghrelin apstrādātas grupas mīnus kalibratoram. Relatīvie daudzumi tika noteikti, izmantojot vienādojumu relatīvais daudzums = 2−ΔΔCt. Kalibratora paraugam vienādojums ir relatīvais daudzums = 2-0, kas ir 1; tāpēc visi citi paraugi ir izteikti attiecībā pret to. Par atsauces gēnu tika izmantota glicerraldehīda-3-fosfāta dehidrogenāze.

Statistika

Visi uzvedības parametri tika analizēti, analizējot dispersijas, kam sekoja post hoc Tukey tests vai t-testē pēc vajadzības. Statistiskās analīzes tika veiktas, izmantojot programmatūru Statistica (Tulsa, OK, ASV). Lai analizētu hroniskas centrālās ghrelin ārstēšanas ietekmi uz gēnu ekspresiju, t-tests tika izmantots, ar P-vērtības, kas aprēķinātas, izmantojot ΔCt-vērtības. Atšķirības tika uzskatītas par būtiskām plkst P <0.05. Datus izsaka kā vidējo ± SEM.

REZULTĀTI

Eksperiments 1: perifēras vai centrālas grelīna ievadīšanas ietekme uz PR operantu, reaģējot uz saharozi žurkām

Šeit mēs izmantojam paradigmu, ko izmanto atkarības pētījumos, lai novērtētu ghrelin lomu dabīgā saldo ēdienu motivācijā un cukura stiprinošajās īpašībās. Konkrēti, lai noteiktu perifēras grelīna ievadīšanas nozīmi saharozes atalgojuma efektivitātē, mēs pārbaudījām saharozes pašievadīšanu progresīvās atbildes shēmā žurkām 20 minūtes pēc nesēja vai ghrelin injekcijas IP. Visi akcenta uzvedības rādītāji žurkām tika ievērojami palielināti pēc akūtas perifēras grelin injekcijas: aktīva sviras nospiešana (P <0.05 par visiem laika punktiem), nopelnīto cukura granulu skaits (P <0.005 visiem laika punktiem) un 120 minūšu pārtraukuma punkts (P <0.005, 32.53 ± 3.4 un 41 ± 4.3 attiecīgi transportlīdzeklim un grelīnam; 1a, b). Literatūra galvenokārt atbalsta centrālo darbības vietu ghrelin orexigenic iedarbībai. Tomēr GHS-R1A tiek izteikts arī ārpus CNS vietās, kas ir nozīmīgas pārtikas uzņemšanas kontrolei, piemēram, uz vagusa nerva; tāpēc nevar izslēgt, ka daļu no novērotajiem IP grelīna efektiem nodrošina šie perifērie receptori. Zema grelīna tilpuma un devas centrālā injekcija tomēr stimulē tikai CNS GHS-R1A. Tāpēc, lai noteiktu tiešu ghrelin ietekmi uz saharozes atlīdzības efektivitāti CNS, mēs veicām paralēlu pētījumu, kurā nesējs vai grelīns tika ievadīts ar trešā kambara injekciju, arī 20 minūtes pirms operanta paradigmas. Saskaņā ar efekta hipotēzes centrālo vietu akūta ICV grelīna injekcija žurkām (gan 0.5 µg, gan 1.0 µg devas) būtiski palielināja visus iepriekš minētos operanta uzvedības pasākumus (2a, b). Laika gaitā notiekošās aktīvās sviras reakcijas ICV ghrelin pētījumā atklāja, ka, lai gan efekts lēnām parādījās 10 un 30 minūšu laika punktos, tas sasniedza nozīmīgumu 60 minūtēs [aktīvā svira: 10 minūtes F(2, 24) = 0.94, P = 0.41, 30 minūtes F(2, 24) = 3.13, P = 0.06, 60 minūtes F(2, 24) = 5.86, P <0.01, 90 minūtes F(2, 24) = 6.42, P <0.01, 120 minūtes F(2, 24) = 6.03, P <0.01; nopelnītās atlīdzības: 10 minūtes F(2, 24) = 0.26, P = 0.78, 30 minūtes F(2, 24) = 2.76, P = 0.08, 60 minūtes F(2, 24) = 8.31, P <0.005, 90 minūtes F(2, 24) = 10.16, P <0.001, 120 minūtes F(2, 24) = 11.93, P <0.001; un pārtraukuma punkts: F(2, 24) = 7.22, P <0.005 (17.31 ± 1.53, 33.15 ± 5.52, 36 ± 6.95 transportlīdzeklim, attiecīgi 0.5 µg un 1.0 µg grelīna)], laika kurss, kas atbilst citiem ziņojumiem par grelīna izraisītu barošanas latentumu, ja tiek piegādāts pa šo ceļuFaulconbridge un citi. 2003). Abos eksperimentos aktivitāte pie neaktīvās sviras bija neliela un būtiski neatšķīrās starp dažādām apstrādes grupām (attiecīgi IP 4.1 ± 1.1, 4.1 ± 1.1 transportlīdzeklim un ghrelin; ICV 3.9 ± 1.1, 2.1 ± 0.7, 3.5 ± 1.6) nesējs, attiecīgi 0.5 µg un 1.0 µg ghrelin), kas liek domāt, ka apstrāde nerada nespecifiskas aktivitātes, kas nav vērstas uz mērķi. Tūlīt pēc operācijas pārbaudes žurkas tika atgrieztas savās mājas būros un ļāva brīvi piekļūt barībai; žurkām, kurām injicēts grelīns, neatkarīgi no tā, vai tās ievadītas perifēriski (P <0.05) vai centralizēti [F(2, 24) = 12.64, P <0.001], pirmās stundas laikā gandrīz divkāršoja savu chow uzņemšanu, salīdzinot ar grupām, kas tika ārstētas ar nesējiem (1.c un 2.c att). Saskaņā ar iepriekšējiem datiem (Faulconbridge un citi. 2003), norādot, ka lielākā daļa akūtas centrālās grelēna injekcijas hiperfaģiskā efekta notiek trīs stundu laikā pēc injekcijas, mūsu pētījumā netika novērota ietekme uz čau uzņemšanu trīs līdz 24 stundās pēc tam, kad ICV tika ievadīta kāda no grelēna devām [17.4 ± 1.12, 18.42 ± 1.34, 19.12 ± 1.43 nesējs, 0.5 µg un 1.0 µg ghrelin, attiecīgi, F(2, 24) = 2.27, P = 0.13].

Skaitlis 1 

Perifēra grelīna injekcija palielina motivāciju iegūt garšīgu ēdienu PR proporcijas operanta kondicionēšanas modelī. Atbilžu skaitu uz aktīvo sviru (a) un iegūto 45 mg saharozes atlīdzību skaitu (b) ievērojami palielina ...
Skaitlis 2 

CNS (trešā ICV) ghrelin piegāde palielina saharozes atalgojošo vērtību PR attiecības operanta kondicionēšanas modelī. Par trešdaļu ievērojami palielinās reakciju skaits uz aktīvo sviru (a) un iegūto 45 mg saharozes atlīdzības skaits (b). ...

Eksperiments 2: perifēras vai centrālas ārstēšanas ar ghrelin receptoru (GHS-R1A) antagonistu (JMV2959) ietekme uz stimulējošu motivāciju saharozes apmaksai žurkām

Tālāk mēs izpētījām GHS-R1A farmakoloģiskās blokādes ietekmi uz saharozes atalgojuma efektivitāti. Tādējādi žurkām, kurām ierobežota barība bija ierobežota ar nakti, saharozes pašievadīšana progresīvās atbildes shēmā tika pārbaudīta, lai nodrošinātu augstu endogēno cirkulējošā grelīna līmeni 20 minūtēs pēc nesēja IP ievadīšanas vai 1 mg / kg vai 3 mg / kg JMV2959, GHS. -R1A antagonists. Visi perifērās JMV2959 injekcijas laikā žurkām visi operētās uzvedības rādītāji tika ievērojami samazināti [aktīvā svira: piecas minūtes F(2, 24) = 11.53 P <0.0005, 120 minūtes F(2, 24) = 11.27, P <0.001; nopelnītās atlīdzības: piecas minūtes F(2, 24) = 23.39 P <0.0005, 120 minūtes F(2, 24) = 9.26, P <0.001 un pārtraukuma punkts pie 120: F(2, 24) = 5.98, P <0.01 (45.31 ± 6.45, 42.08 ± 5.80, 30.0 ± 5.89 nesējam, attiecīgi 1 mg / kg un 3 mg / kg JMV2959)]. Post hoc analīze atklāja, ka galveno efektu izraisīja 3 mg / kg deva (3a, b). Lai noteiktu centrālā grelīna receptora lomu saharozes atalgojuma efektivitātē, tika veikts līdzīgs pētījums, kurā nesējs vai JMV2959 (5 µg vai 10 µg) tika ievadīts trešā kambara 20 minūtēs pirms operatora mērījumiem. Visi iepriekš minētie operatīvās uzvedības rādītāji žurkām tika ievērojami samazināti pēc abu JMV2959 devu akūtas trešā kambara infūzijas (4a, b). Novērotā ietekme bija tūlītēja post hoc analīze atklāja būtiskas atšķirības starp ārstniecības grupām tikai pēc 10 darbības minūtēm operantu kamerā, kas tika uzturētas visu pārbaudes laiku [aktīvā svira: 10 minūtes F(2, 24) = 10.16, P <0.0005, 30 minūtes F(2, 24) = 11.48, P <0.0005, 60 minūtes F(2, 24) = 9.11, P <0.001, 90 minūtes F(2, 24) = 8.30, P <0.001, 120 minūtes F(2, 24) = 4.95, P <0.05; nopelnītās atlīdzības: 10 minūtes F(2, 24) = 21.23, P <0.0001, 30 minūtes F(2, 24) = 25.08, P <0.0001, 60 minūtes F(2, 24) = 19.24, P <0.0001, 90 minūtes F(2, 24) = 20.04, P <0.0001, 120 minūtes F(2, 24) = 5.44, P <0.01; un pārtraukuma punkts: F(2, 24) = 3.78, P <0.05 (51.4 ± 8.58, 38.13 ± 5.07, 33.67 ± 5.21 nesējam, attiecīgi 5 µg un 10 µg JMV2959)].

Skaitlis 3 

Grelīna receptoru antagonista JMV2959 perifērā ievadīšana. samazina motivāciju iegūt garšīgus ēdienus PR koeficienta kondicionēšanas modelī. Reakciju skaits uz aktīvo sviru (a) un iegūto 45 mg saharozes reižu skaits ...
Skaitlis 4 

GHS-R1A centrālā bloķēšana ar JMV2959 samazina motivāciju saņemt atlīdzību par pārtiku PR koeficienta kondicionēšanas modelī. Ievērojami samazinās reakciju skaits uz aktīvo sviru (a) un iegūto 45 mg saharozes ieguvumu skaits (b). ...

Kā gaidīts (Hodos 1961; Jewett un citi. 1995) visās ārstēšanas grupās, ieskaitot gan IP, gan ICV ievadīšanas veidus, bija acīmredzama pārtikas trūkuma ietekme uz operatīvo reakciju uz saharozi (3.a un 4.a attēls) un ir pretstatā tam, kas novērots piesātinātā stāvoklī (1.a un 2.a attēls). Aktivitāte uz neaktīvo sviru bija neliela (IP 9.6 ± 3.0, 6.8 ± 2.2, 5.6 ± 1.9 transportlīdzeklim un 1 mg / kg vai 3 mg / kg JMV2959; ICV 6.4 ± 1.3, 4.6 ± 1.3, 4.4 ± 1.7, 5 ± 10 ± 2959 ± 2959 JgVXNUMX μg un XNUMX μg attiecīgi) un neatkarīgi no tā, vai JMVXNUMX tika ievadīts perifēriski vai centrāli, tam nebija būtiskas ietekmes uz šo aktivitāti (šī aktivitāte dažādās ārstēšanas grupās būtiski neatšķīrās). ICV pētījumam tūlīt pēc operantu pārbaudes žurkas tika atgrieztas viņu mājas būros un ļāva brīvi piekļūt barībai; interesanti, ka stundas laikā (4c) vai 24 stundas laika punkts (dati nav parādīti). Tas varētu norādīt uz to, ka, lai gan atteicības izraisīta ēdiena motivācija ir nepieciešama ghrelin signalizēšanai, tā nav būtiska bezmaksas pabarošanai, ko izraisa 16 stundu ilgs pārtikas trūkums, iespējams, tāpēc, ka citi lieki mehānismi aktivizēti atņemšanas periodā. Visi bezmaksas barošanas mērījumi notika 140 minūtes pēc zāļu injicēšanas, un tāpēc mēs nevaram izslēgt, ka efekta trūkums daļēji ir saistīts ar zāļu izmazgāšanu.

Eksperiments 3: ghrelin izraisītas izmaiņas ar dopamīnu un acetilholīnu saistīto gēnu ekspresijā VTA un NAcc

Šajā pētījumā mēs arī izpētījām, vai ghrelīns izmaina ar dopamīnu un acetilholīnu saistītos gēnus galvenajos mezolimbiskos mezglos, VTA un NAcc, pārbaudot hroniskas centrālās ghrelin apstrādes ietekmi uz izvēlēto dopamīna receptoru un iesaistīto enzīmu ekspresiju. dopamīna ražošanā un metabolismā paradigmā, kas jau izveidota, lai izraisītu ar grelin saistītās izmaiņas gēnu ekspresijā hipotalāmā (Salomeun citi. 2009b). VTA dopamīna receptorā D5 un nikotīna acetilholīna receptorā (nAChRβ2) bija palielināta mRNS ekspresija žurīnās apstrādātām žurkām, salīdzinot ar fizioloģisko šķīdumu ārstēto grupu (5a). NAcc bija samazināta gēnu, kas kodē dopamīna receptorus D1A, D3 un D5, mRNS ekspresija, kā arī ar nikotīna acetilholīna receptoru nAChRα3 ghrelin ārstētām žurkām, salīdzinot ar fizioloģisko šķīdumu apstrādātajā grupā (5b).

Skaitlis 5 

Ar dopamīnu un acetilholīnu saistīta gēnu ekspresija VTA (a) un NAcc (b) pēc hroniskas ICV ghrelin vai nesēja apstrādes. Dati norāda vidējo reizes izmaiņas salīdzinājumā ar fizioloģisko šķīdumu. D1, dopamīna D1 receptors; D2 dopamīna D2 receptors; D3, dopamīns ...

DISKUSIJA

Šeit mēs atklājam centrālās grelīna signalizācijas sistēmas lomu stimulējošās motivācijas modulācijā un saharozes atlīdzības pastiprinošās īpašībās un norādām uz hroniskas centrālās ghrelin ārstēšanas ietekmi uz dopamīnerģisko un holīnerģisko receptoru gēnu ekspresiju galvenajos mezolimbiskās atlīdzības mezglos. Rezultāti parāda, ka gan centrālā, gan perifēriskā ghrelin piegāde ievērojami palielina darba daudzumu, ko dzīvnieks vēlas darīt, lai iegūtu saharozes atalgojumu. Turklāt sistēmiska vai centrāla grelin receptoru blokāde nomāc operāta reakciju uz saharozi. Tādējādi mēs varam secināt, ka endogēnās grelinīna signālam ir liela nozīme stimulējošā motivācijā saharozes atlīdzībai. Mūsu atklājumi saskan ar hipotēzi, ka centrālā grelinu signalizācijas sistēmas svarīga loma ir atlīdzību, ieskaitot pārtiku, stimulējošās vērtības palielināšanai. Ņemot vērā, ka pārtikas ierobežojumi palielina saharozes atalgojošo vērtību (Hodos 1961; Jewett un citi. 1995) un ka īslaicīga pārtikas ierobežojuma laikā paaugstināts ghrelin līmenis (Gualillo un citi. 2002), iespējams, ka pārtikas ierobežošanas / trūkuma apstākļos ghrelin ir viens no veicinošajiem faktoriem, kas palielina pārtikas atalgojošo vērtību / ēdiena motivāciju. Patiešām, perifēra ghrelin iedarbība palielināja operatīvo uzvedību līdz līmenim, kāds bija novērots žurkām, kurām trūkst barības, un, tieši pretēji, ghrelin signālu bloķēšana samazināja operējošo uzvedību līdz līmenim, kāds novērots žurkām, kurām trūkst barības.

Tagad šķiet skaidrs, ka problemātiski palielinātais ēdiena patēriņš, iespējams, atspoguļo atalgojuma galveno mehānismu disregulēšanu, iekļaujot gan hedoniskos, gan motivācijas aspektus. Tā kā brīva barošana un atalgota barošana šķiet divas atdalāmas parādības ar diferenciāli kontrolējošiem neiroanatomiskiem substrātiem (Salamone un citi. 1991), ir svarīgi pārbaudīt abus, novērtējot barības uzvedībā iesaistīto aģentu lomu. Ghrelin spēcīgā orexigenic ietekme lielā mērā ir pētīta brīvās barošanas piekļuves modeļos, kuros būtu grūti atšķirt tā lomu barības vielu papildināšanā salīdzinājumā ar atalgojuma motivētu barošanu. Šajā pētījumā mēs atklājām, ka GHS-R1A ligandi traucē saharozes atlīdzības motivāciju, izmantojot eksperimentālu modeli, kas izmantots citos kontekstos, lai parādītu vēlmi un motivāciju atkarību izraisošām narkotikām. Motivētas uzvedības pieaugums ir kopīgs gan ķīmiskajai narkotiku atkarībai, gan kaloriju ierobežošanai, un tas, iespējams, ietver neirobioloģisko mehānismu pārklāšanos. Šajā pētījumā mēs arī atklājām grelīna izraisītu normālas chow pārtikas bezmaksas barošanas pieaugumu tiem pašiem dzīvniekiem, kas operanta kamerā iztērēja ievērojami vairāk pārtikas. Tāpēc mūsu dati kopā ar iepriekšējiem ziņojumiem par grelīna iedarbību bezmaksas barošanas modeļos (paceplītis un citi. 2000), norāda, ka grelinam ir iespēja modulēt gan bezmaksas barošanu, gan arī barošanas motivāciju.

Ņemot vērā, ka ghrelin receptors GHS-R1A atrodas galvenajos hipotalāmu, pakaļējo smadzeņu un mezolimbisko apgabalos, kas iesaistīti enerģijas līdzsvarā un atlīdzībā (Zigmans un citi. 2006) un ka GHS-R1A ligandu centrālā ventrikulārā injekcija, iespējams, plaši piekļūst šīm CNS zonām, šeit parādītajam ghrelin saharozes atdeves motivācijas efektam varētu būt vairāki neiroanatomiski substrāti. Liekas, ka ghrelin tieši iedarbojas uz galvenajiem mezolimbiskajiem apgabaliem, jo ​​ghrelin aktivizē VTA dopamīna neironus (Abizaid un citi. 2006) un tieša grelīna ievadīšana VTA palielina uzkrāto dopamīna izdalīšanos (Jerlhags un citi. 2007). Atbilstoši tam, mēs jau iepriekš esam ziņojuši par iekšējā VTA ghrelin ietekmi, lai palielinātu atalgojoša / garšīga ēdiena patēriņu pēc brīvas izvēles barošanas paradigmām, kā arī par to, ka VTA blāvi grelēna izraisītas garšas pārtikas izpētes uzvedībaEgecioglu un citi. 2010). NAcc var būt arī tiešs mērķis ghrelīnam, modulējot pārtikas uzņemšanas motivācijas aspektus; injicējot tieši šajā vietā, grelīns izraisa barošanas reakciju (Naleids un citi. 2005), lai gan citi izmeklētāji nav aprakstījuši GHS-R1A klātbūtni šajā jomā grauzējiem (Zigmans un citi. 2006), un tāpēc tas ir jāprecizē.

Konsekventi, tā kā tai ir būtiska loma motivētā uzvedībā, vairākus gēnus dopamīna sistēmā mainīja centrālā terapija ar grelīnu. Šie dati rada iespēju, ka dopamīna receptoru ekspresijas regulēšana ir ilgtermiņa mehānisms, ar kura palīdzību ghrelin ietekmē ar atlīdzību saistīto funkciju un signalizāciju. Dopamīna receptoru novērtēšana ir svarīga ne tikai izdalīšanās vietā, piemēram, NAcc, bet arī VTA, jo tas ir saistīts ar dendritiskā dopamīna izdalīšanos (Krags un Grīnfīlds 1997), iespējams, ka tā darbojas lokāli, lai ietekmētu motivētu uzvedību. Šeit mēs atradām paaugstinātu D5 ekspresiju VTA pēc ārstēšanas ar ghrelin. Dopamīna D5 receptori atrodas uz dopamīnerģisko VTA neironu (Ciliax un citi. 2000) un to darbība ir nepieciešama, lai atjaunotu VTA dopamīna neironu aktivitāti pēc desensibilizācijas perioda (Nimitvilai & Brodie 2010). NAcc mēs atzīmējām samazinātu D1 izpausmi. Faktiski pēdējā laikā samazināta šī receptora ekspresija ir parādīta NAcc ar aptaukošanos, bet ne pret aptaukošanos izturīgām žurkām ar diētu ar augstu tauku saturu, kas norāda uz tā potenciālo lomu NAcc aptaukošanās un pārmērīga patēriņa gadījumā (Alsio un citi. 2010). Arī ghrelin samazināja D3 kodējošo gēnu ekspresiju, kas ir īpaši interesants atradums, ņemot vērā D2 / D3 receptoru samazinātu pieejamību gan žurku, gan cilvēku narkotiku lietotājiem, un tas ir saistīts ar paaugstinātu impulsivitāti (Dalley un citi. 2007; Patvērums un citi. 2009). Interesanti, ka mēs neredzējām būtiskas izmaiņas fermentos, kas iesaistīti dopamīna sintēzē vai ražošanā.

Acetilholīna sistēmas nozīmīgā loma narkotiku un pārtikas ieguvumos ir labi dokumentēta; šeit mēs parādām, ka ārstēšana ar grelinu bija saistīta ar izmaiņām to gēnu ekspresijā, kas kodē vairākas acetilholīna nikotīna receptoru apakšvienības, nodrošinot citu ceļu, pa kuru ghrelin var potenciāli mainīt atlīdzību funkciju. Ghrelin var netieši regulēt VTA dopamīnerģiskos neironus, izmantojot savu darbību uz holīnerģiskajiem neironiem laterodorsālajā tegmentālajā apgabalā (LDTg), apgabalā, kas bagāts ar GHS-R1A, kas ir svarīgs alkohola ieguvumam, kas saistīts ar holīnerģisku projekciju VTA dopamīna sistēmā. Faktiski iepriekš mēs parādījām, ka divpusēja grelinīna injekcija pelēm LDTg stimulē dopamīna izdalīšanos no holīnerģiski atkarīgā veidā (Jerlhags un citi. 2007, 2008) un palielina alkohola patēriņu pēc brīvas izvēles (alkohola / ūdens) dzeršanas paradigmas (Jerlhags un citi. 2009). Nesenie pētījumi patiešām ir saistīti ar holīnerģisko – dopamīnerisko atalgojuma saikni ar pārtiku (Dickson un citi. 2010). Vēl viena interesanta iespēja ir tā, ka grelīns var uzlabot holīnerģisko signālu pārnešanu VTA, paaugstinot holīnerģisko receptoru darbību. Patiešām, mūsu pašreizējie gēnu ekspresijas dati, šķiet, atbalsta šo mehānismu, jo VTA nAChRβ2 mRNS līmenis tika palielināts žurīnās ārstētajām žurkām.

NAcc holīnerģisko neironu un acetilholīna funkcija NAcc, no otras puses, ir daudz diskutablāka ar dažiem ziņojumiem, kas norāda uz acetilholīna lomu uz atlīdzību orientētas uzvedības palielināšanā (Pratt & Kelley 2005; Pratt & Blackstone 2009), bet citi norāda, ka Ach NAcc var kavēt barošanu un piedalīties sāta mehānismā (Stūre un citi. 2003; Hoebel un citi. 2007). Patiešām, mūsu rezultāti, šķiet, saskan ar pēdējo, jo grelīna ārstēšana bija saistīta ar vienas no nikotīna receptoru apakšvienībām nAChRα3 samazinātu ekspresiju. Ir svarīgi atzīmēt, ka gēnu ekspresijas pētījumi, lai arī ir ļoti vērtīgi, lai norādītu potenciālos grelīna pakārtotos mērķus, tikai norāda uz attiecību veidu (paaugstināšana vai samazināšana), kas nepieciešams oreksigēnu / atalgojuma orientētas reakcijas izpausmei, bet to nenosaka jo būtu grūti norobežoties no kompensējošām izmaiņām. Tāpēc mūsu gēnu ekspresijas pētījumi norāda uz saikni un nodrošina platformu turpmākajiem ģenētiskajiem un farmakoloģiskajiem pētījumiem, kas nosaka šo gēnu lomu grelīna ietekmē uz brīvu un atalgotu motivētu barošanu.

Kaut arī hipotalāmu un smadzeņu stumbra zonas, visticamāk, veicina homeostatisko barošanu, mēs nevaram izslēgt hipotalāma un / vai smadzeņu stumbra afektīvo sistēmu netiešo lomu ghrelin izraisītā ēdiena atlīdzināšanas motivācijā. Oreksinerģiskie neironi, sākot ar sānu hipotalāmu, līdz mezolimbiskas atlīdzības shēmai, ieskaitot VTA un NAcc (Toshinai un citi. 2003; Harris un citi. 2005; Perello un citi. 2010). Lokveida kodola neiropeptīdu Y (NPY) / AgRP neironi, vēl viens GHS-R1A ligandu mērķis (Diksons un Lakmens 1997; Kīns-Reinharts un Bārtness 2007a,b), arī var būt nozīmīga loma. Ir pierādīts, ka NPY palielina čau, kā arī saharozes (Brown, Fletcher & Coscina 1998), tā kā AgRP, šķiet, palielina atalgojuma efektivitāti tikai ar augstu tauku saturu pārtikas produktiem (Tracy un citi. 2008). Ghrelin, šķiet, ir nozīme gan saharozes atlīdzībā (šis pētījums), gan atlīdzībā par augstu tauku saturu (Perello un citi. 2010); tomēr joprojām ir jānoskaidro NPY / AgRP neironu relatīvā nozīme šiem ghrelin efektiem. Rezumējot, ghrelīnam ir pārtikas motivācijas īpašības, kas attiecas uz visiem uztura komponentiem, un tas, visticamāk, ietekmē vairākas smadzeņu zonas, lai sinhronizētu koordinētu uzvedības reakciju, lai veicinātu barošanu.

Kaut arī grelinu transports smadzenēs ir ierobežots (Bankām un citi. 2002), šķiet, ka perifēriskais grelins sasniedz un mērķa apgabalus, piemēram, hipokampu (Diano un citi. 2006) un VTA (Jerlhag 2008). Lai gan joprojām pastāv dažas diskusijas par vagusa nerva nozīmi kā netiešu ceļu uz grelīna centrālo iedarbību (Dornonvilla de la Cour un citi. 2005; datums un citi. 2002; Arnolds un citi. 2006), šķiet, ka tieša darbība CNS, jo perifēra grelīna iedarbību uz uzturu var nomāc, ievadot VH iekšēji ghrelin antagonistus (Abizaid un citi. 2006). Ghrelin tiek ražots smadzenēs (Kovlijs un citi. 2003), lai gan vēl ir jānosaka, kā tas tiek regulēts un vai smadzenēs iegūtais grelīns nodrošina svarīgu centrāli ģenerētu signālu par ēdiena uzņemšanu un motivāciju ēst. Kopā ar faktu, ka ghrelin receptors GHS-R1A ir konstitutīvi aktīvs (ti, tam ir aktivitāte, ja nav ghrelin ligandu) (Holsts un citi. 2003), rodas jautājums, vai cirkulējošais grerelīns nodrošina fizioloģiski nozīmīgu signālu zarnu un smadzenēs stimulējošai motivācijai ēdiena atlīdzībai. Šī pētījuma rezultāti, kas parāda līdzīgu iedarbību uz saharozes atalgojuma darbu, var tikt iegūti, centrāli un perifēriski ievadot GHS-R1A ligandus, varētu norādīt, ka gan centralizēti izdalīts, gan perifēriski atbrīvots grelīns var potenciāli ietekmēt ēdiena motivāciju.

Noslēgumā mūsu jaunie dati sniedz jaunus pierādījumus tam, ka grelīna signalizācija ir svarīga, lai motivētu iegūt saharozes atlīdzību un ietekmētu dopamīnerģisko un holīnerģisko gēnu ekspresiju mezolimbu atlīdzības ceļā. Mūsu atklājumi iedvesmo svarīgus jautājumus par endogēnā grelīna lomu, nosakot stimulējošo vērtību dabīgai atlīdzībai, piemēram, cukuram, normālai ēstgribas uzvedībai un ēšanas traucējumu un aptaukošanās patofizioloģijai. Lai gan joprojām ir ievērojams darbs, lai cēloņsakarībā saistītu dopamīna un acetilholīna sistēmas molekulārās izmaiņas ar grelīna ietekmi uz atlīdzību, mūsu dati potenciāli norāda uz jaunu mehānismu, ar kuru ghrelin ietekmē atlīdzības uzvedību. Izpratne par grelīna lomu atlīdzības procesos ir svarīga, lai izprastu ēšanas traucējumu un atkarības no narkotikām neirobioloģiju, kas pārklājas, un sniedz potenciālu ceļu šo slimību etioloģijas izpratnei un jaunu terapiju izstrādei. Visbeidzot, iespējai nomākt garšīgu saldu ēdienu problemātisku pārēšanās, izmantojot GHS-R1A antagonistus, var būt klīniski un terapeitiski nozīmīga attiecībā uz šādu savienojumu iespējamo labvēlīgo ietekmi uz glikozes līmeni asinīs (Saule un citi. 2006) 2 tipa diabēta pacientiem (Eslers un citi. 2007).

Pateicības

Pētījums, ko atbalsta Zviedrijas Medicīnas pētījumu padome (VR 2006-5663; 2009-S266), Eiropas Savienības 7th Framework (FP7-HEALTH-2009-241592; FP7-KBBE-2009-3-245009), ALF Göteborg Zviedrijas institūts un Zviedrijas Stratēģisko pētījumu fonds Sahlgrenska sirds un asinsvadu un metabolisma pētījumu centram (A7601-305). Mēs arī vēlamies pateikties Dr. Daniel Perrissoud (AeternaZentaris, GmBH, Vācija) par GHS-R188A antagonistu JMV1 un Andersa Friberga nodrošināšanu par palīdzību iesniegšanā.

Autora ieguldījums

KPS ierosināja, izstrādāja, veica un analizēja visus uzvedības pētījumus. CH veica un analizēja visus gēnu ekspresijas pētījumus. EE deva ieguldījumu pētījuma uzsākšanā. SLD bija vecākais autors un sniedza uzraudzību un finansiālu atbalstu visiem pētījumiem. Manuskriptu izveidoja KPS un SLD, visi autori sniedza ieguldījumu gala teksta tapšanā.

Atsauces

  • Abizaid A, Liu ZW, Andrews ZB, Shanabrough M, Borok E, Elsworth JD, Roth RH, Sleeman MW, Picciotto MR, Tschop MH, Gao XB, Horvath TL. Ghrelin modulē vidus smadzeņu dopamīna neironu aktivitāti un sinaptisko ievades organizāciju, vienlaikus veicinot apetīti. J Clin Invest. 2006: 116: 3229 – 3239. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Alsio J, Olszewski PK, Norback AH, Gunnarsson ZE, Levine AS, Pickering C, Schioth HB. Dopamīna D1 receptoru gēna ekspresija samazinās kodolkrāsās pēc ilgstošas ​​ēdienreizes un atšķiras atkarībā no uztura izraisīta aptaukošanās fenotipa žurkām. Neirozinātne. 2010: 171: 779 – 787. [PubMed]
  • Arnolds M, Mura A, Langhans W, Gērijs N. Zarnu trakta pretestības nav vajadzīgas žurkām intraperitoneāli ievadītas grelēna ēšanas stimulējošajam efektam. J Neurosci. 2006; 26: 11052 – 11060. [PubMed]
  • Beilija ART, Von Englehardt N, Leng G, Smith RG, Dickson SL. Augošā hormona sekrēcijas lokālā kodola un smadzeņu stumbra aktivizēšana notiek pa noradrenerģisku ceļu. J Neuroendokrinols. 2000; 12: 191 – 197. [PubMed]
  • Bankas WA, Tschop M, Robinson SM, Heiman ML. Grīnīna pārvadāšanas intensitāti un virzienu pāri asins-smadzeņu barjerai nosaka tā unikālā primārā struktūra. J Pharmacol Exp Ther. 2002; 302: 822 – 827. [PubMed]
  • Brown CM, Fletcher PJ, Coscina DV. Neuropeptīdu Y izraisītais operants, kas reaģē uz saharozi, nav starpnieks dopamīna ietekmē. Peptīdi. 1998; 19: 1667 – 1673. [PubMed]
  • Ciliax BJ, Nash N, Heilman C, Sunahara R, Hartney A, Tiberi M, Rudzu DB, Caron MG, Niznik HB, Levey AI. Dopamīna D (5) receptoru imunolokalizācija žurkām un pērtiķu smadzenēm. Sinapse. 2000: 37: 125 – 145. [PubMed]
  • Cowley MA, Smith RG, Diano S, Tschop M, Pronchuk N, Grove KL, Strasburger CJ, Bidlingmaier M, Esterman M, Heiman ML, Garcia-Segura LM, Nillni EA, Mendez P, Low MJ, Sotonyi P, Friedman JM, Liu HY, Pinto S, Colmers WF, Cone RD, Horvath TL. Ghrelin sadalījums un darbības mehānisms CNS parāda jaunu hipotalāma shēmu, kas regulē enerģijas homeostāzi. Neirons. 2003; 37: 649 – 661. [PubMed]
  • Cragg SJ, Greenfield SA. Diferenciālā autoreceptora kontrole somatodendrīta un axon terminālā dopamīna izdalīšanā materiālajā nigrā, ventrālajā tegmentālajā apgabalā un striatumā. J Neurosci. 1997: 17: 5738 – 5746. [PubMed]
  • Cummings DE, Purnell JQ, Frayo RS, Schmidova K, Wisse BE, Weigle DS. Preprandiālais grelinīna līmeņa paaugstināšanās plazmā norāda uz lomu ēdienreizes sākšanā cilvēkiem. Cukura diabēts. 2001; 50: 1714 – 1719. [PubMed]
  • Dalley JW, Fryer TD, Brichard L, Robinson ES, Theobald DE, Laane K, Pena Y, Murphy ER, Shah Y, Probst K, Abakumova I, Aigbirhio FI, Richards HK, Hong Y, Baron JC, Everitt BJ, Robbins TW . Kodolu uzkrāšanās D2 / 3 receptori prognozē iezīmju impulsivitāti un kokaīna pastiprināšanos. Zinātne. 2007; 315: 1267 – 1270. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Datums Y, Murakami N, Toshinai K, Matsukura S, Niijima A, Matsuo H, Kangawa K, Nakazato M. Kuņģa aferentā vagālā nerva loma žirīna izraisītajā barošanā un augšanas hormona sekrēcijā žurkām. Gastroenteroloģija. 2002; 123: 1120 – 1128. [PubMed]
  • Diano S, Farr SA, Benoit SC, McNay EC, da Silva I, Horvath B, Gaskin FS, Nonaka N, Jaeger LB, Banks WA, Morley JE, Pinto S, Sherwin RS, Xu L, Yamada KA, Sleeman MW, Tschop MH, Horvāta TL. Ghrelin kontrolē hipokampāla mugurkaula sinapses blīvumu un atmiņas veiktspēju. Dabas neirozinātne. 2006; 9: 381 – 388. [PubMed]
  • Dickson SL, Hrabovszky E, Hansson C, Jerlhag E, Alvarez-Crespo M, Skibicka KP, Molnar CS, Liposits Z, Engel JA, Egecioglu E. Centrālā nikotīna acetilholīna receptoru signālu bloķēšana mazina ghrelin izraisītu pārtikas devu grauzējiem. Neirozinātne. 2010; 171: 1180 – 1186. [PubMed]
  • Dickson SL, Leng G, Robinson ICAF. Sistēmiska augšanas hormonu atbrīvojoša peptīda ievadīšana aktivizē hipotalāma arkuātu neironus. Neirozinātne. 1993; 53: 303 – 306. [PubMed]
  • Dickson SL, Luckman SM. C-fos messenger ribonukleīnskābes indukcija neiropeptīdā Y un augšanas hormona (GH) atbrīvojošā faktora neironos žurkas loka kodolā pēc GH sekrēcijas, GH atbrīvojošā peptīda-6, sistēmiskas injekcijas. Endokrinoloģija. 1997; 138: 771 – 777. [PubMed]
  • Dornonville de la Cour CD, Björkqvist M, Sandvik AK, Bakke I, Zhao CM, Chen D, Håkanson R. A līdzīgas šūnas žurku kuņģī satur grelinu un nedarbojas gastrīna kontrolē. Regul Pept. 2001; 99: 141 – 150. [PubMed]
  • Dornonville de la Cour CD, Lindqvist A, Egecioglu E, Tung YCL, Surve V, Ohlsson C, Jansson JO, Erlanson-Albertsson C, Dickson SL, Hakanson R. Ghrelin ārstēšana apvērš svara pieauguma un ķermeņa tauku samazinājumu pelēm, kurām noņemta galviņa. Zarnas. 2005; 54: 907 – 913. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Egecioglu E, Jerlhag E, Skibicka S, Salomé N, Haage D, Bohlooly YM, Andersson D, Bjursell M, Perrissoud D, Engel JA, Dickson SL. Ghrelin palielina gardo ēdienu uzņemšanu grauzējiem. Atkarīgais Biols. 2010; 15: 304 – 311. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Engel JA. Jaunākie sasniegumi alkoholisma izpētē (Excerpta Medica International Congress Series) Amsterdama: Excerta Medica; 1977. Neatkarīgi no narkotikām izraisītie eiroforijas neiroķīmiskie aspekti; 16 – 22 lpp.
  • Eslers WP, Rūdolfs J, Claus TH, Tang WF, Barucci N, Brown SE, Bullock W, Daly M, DeCarr L, Li YX, Milardo L, Molstad D, Zhu J, Gardell SJ, Livingston JN, Sweet LJ. Mazu molekulu grelinīna receptoru antagonisti uzlabo glikozes toleranci, nomāc apetīti un veicina svara zudumu. Endokrinoloģija. 2007; 148: 5175 – 5185. [PubMed]
  • Faulconbridge LF, Cummings DE, Kaplan JM, Grill HJ. Smadzeņu stumbra grelēna hiperfaģiskā iedarbība. Cukura diabēts. 2003; 52: 2260 – 2265. [PubMed]
  • Faulconbridge LF, Grill HJ, Kaplan JM, Daniels D. Caudal ghrelin smadzeņu stumbra piegāde ierosina fos ekspresiju vieninieku trakta kodolā, bet ne hipotalāmu arkveida vai paraventrikulāros kodolos. Brain Res. 2008; 1218: 151 – 157. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Figlewicz DP, Bennett JL, Naleid AM, Davis C, Grimm JW. Intraventrikulārais insulīns un leptīns samazina saharozes pašregulāciju žurkām. Physiol Behav. 2006: 89: 611 – 616. [PubMed]
  • Gualillo O, Caminos JE, Nogueiras R, Seoane LM, Arvat E, Ghigo E, Casanueva FF, Dieguez C. Pārtikas ierobežojuma ietekme uz grelinu normāli braucošām žurku mātītēm un grūtniecēm. Obes Res. 2002; 10: 682 – 687. [PubMed]
  • Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Sānu hipotalāma oreksīna neironu loma atalgojuma meklējumos. Daba. 2005: 437: 556 – 559. [PubMed]
  • Helm KA, Rada P, Hoebel BG. Holecistokinīns kombinācijā ar serotonīnu hipotalāmā ierobežo dopamīna izdalīšanos, vienlaikus palielinot acetilholīnu: iespējams piesātinājuma mehānismu. Brain Res. 2003: 963: 290 – 297. [PubMed]
  • Hewson AK, Dickson SL. Ghrelin sistēmiska ievadīšana inducē Fos un Egr-1 olbaltumvielas tukšā dūšā un barotu žurku hipotalāma arkuāta kodolā. J Neuroendokrinols. 2000; 12: 1047 – 1049. [PubMed]
  • Hodos W. Progresīvais rādītājs kā atlīdzības stipruma mērs. Zinātne. 1961: 134: 943 – 944. [PubMed]
  • Hoebel BG, Avena NM, Rada P. Accumbens dopamīna-acetilholīna līdzsvars un novēršana. Curr Opin Pharmacol. 2007: 7: 617 – 627. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Holst B, Cygankiewicz A, Jensen TH, Ankersen M, Schwartz TW. Ghrelin receptoru spēcīga signalizācija - spēcīga apgrieztā agonista identificēšana. Mol endokrinols. 2003; 17: 2201 – 2210. [PubMed]
  • Hovards AD, Feighner SD, Cully DF, Arena JP, Liberator PA, Rosenblum CI, Hamelīns M, Hreniuk DL, Palyha OC, Anderson J, Paress PS, Diaz C, Chou M, Liu KK, McKee KK, Pong SS, Chaung LY , Elbrecht A, Dashkevicz M, Heavens R, Rigby M, Sirinathsinghji DJS, Dean DC, Melillo DG, Patchett AA, Nargund R, Griffin PR, DeMartino JA, Gupta SK, Schaeffer JM, Smith RG, VanderPloeg LHT. Receptors hipofīzē un hipotalāmā, kas darbojas augšanas hormona atbrīvošanā. Zinātne. 1996; 273: 974 – 977. [PubMed]
  • Jerlhag E. Ghrelin sistēmiska ievadīšana izraisa kondicionētas vietas izvēli un stimulē uzkrāto dopamīnu. Atkarīgais Biols. 2008; 13: 358 – 363. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Dickson SL, Andersson M, Svensson L, Engel JA. Ghrelin stimulē lokomotorisko aktivitāti un uzkrāto dopamīna pārplūdi caur centrālajām holīnerģiskajām sistēmām pelēm: ietekme uz tā iesaistīšanos smadzeņu atalgojumā. Atkarīgais Biols. 2006; 11: 45 – 54. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Dickson SL, Douhan A, Svensson L, Engel JA. Ghrelin ievadīšana pamatviļņos stimulē lokomotoro aktivitāti un palielina ārpusšūnu dopamīna koncentrāciju akumulācijas kodolā. Atkarīgais Biols. 2007; 12: 6 – 16. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Dickson SL, Svensson L, Engel JA. Alfa-konotoksīniem, kas ir jutīgi pret MII, nikotīna acetilholīna receptori, kas piedalās grelīna ierosinātās lokomotorās stimulācijas un dopamīna pārplūdes starpniecībā starp kodolu akumulātiem. Eur neiropsiofarmols. 2008; 18: 508 – 518. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Landgren S, Salomé N, Heilig M, Moechars D, Datta R, Perrissoud D, Dickson SL, Engel JA. Nepieciešamība pēc centrālās grelēna signalizācijas par alkohola atlīdzību. Proc Natl Acad Sci ASV A. 2009; 106: 11318 – 11323. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Jewett DC, Cleary J, Levine AS, Schaal DW, Thompson T. Neiropeptīda Y, insulīna, 2-deoksiglikozes un pārtikas trūkuma ietekme uz pārtikas motivētu uzvedību. Psihofarmakoloģija. 1995: 120: 267 – 271. [PubMed]
  • Keen-Rhinehart E, Bartness TJ. MTII mazina ghrelin un pārtikas trūkuma izraisīto pārtikas uzkrājumu un pārtikas patēriņa pieaugumu. Horms Behavs. 2007a; 52: 612 – 620. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Keen-Rhinehart E, Bartness TJ. NPY Y1 receptors ir iesaistīts grelēna un badošanās izraisītā barības palielināšanā, pārtikas uzkrāšanā un uzņemšanā. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2007b; 292: R1728 – 1737. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Kelley AE, Bakshi VP, Haber SN, Steininger TL, Will MJ, Zhang M. Opioīdu modulācija garšas hedonikā vēdera strijā. Physiol Behav. 2002: 76: 365 – 377. [PubMed]
  • Kojima M, Hosoda H, Y datums, Nakazato M, Matsuo H, Kangawa K. Ghrelin ir augšanas hormona atbrīvojošs acilēts peptīds no kuņģa. Daba. 1999; 402: 656 – 660. [PubMed]
  • Koob GF. Ļaunprātīgas lietošanas narkotikas - atlīdzības ceļu anatomija, farmakoloģija un funkcija. Tendences Pharmacol Sci. 1992; 13: 177 – 184. [PubMed]
  • Kuzmin A, Jerlhag E, Liljequist S, Engel J. Subvienību selektīvo nACh receptoru ietekme uz operatīvā etanola pašpārvaldi un recidīva veida etanola dzeršanu. Psihofarmakoloģija. 2009; 203: 99 – 108. [PubMed]
  • la Fleur SE, Vanderschuren LJ, Luijendijk MC, Kloeze BM, Tiesjema B, Adan RA. Savstarpēja mijiedarbība starp uztura apsvērumiem balstītu uzvedību un uztura izraisītu aptaukošanos. Int J Obes. 2007; 31: 1286 – 1294. [PubMed]
  • Lī B, Londonas ED, Poldrack RA, Farahi J, Nacca A, Monterosso JR, Mumford JA, Bokarius AV, Dahlbom M, Mukherjee J, Bilder RM, Brody AL, Mandelkern MA. Striatālā dopamīna d2 / d3 receptoru pieejamība ir samazināta atkarībā no metamfetamīna un ir saistīta ar impulsivitāti. J Neurosci. 2009; 29: 14734 – 14740. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Livak KJ, Schmittgen TD. Relatīvā gēna ekspresijas datu analīze, izmantojot reālā laika kvantitatīvo PCR un 2 (-delta delta C (T)) metodi. Metodes. 2001; 25: 402 – 408. [PubMed]
  • Nakazato M, Murakami N, Y datums, Kojima M, Matsuo H, Kangawa K, Matsukura S. Ghrelin loma barošanas centrālajā regulācijā. Daba. 2001; 409: 194 – 198. [PubMed]
  • Naleid AM, Grace MK, Cummings DE, Levine AS. Ghrelin ierosina barošanos mezolimbiskā atalgojuma ceļā starp ventrālo tegmentālo zonu un kodolu uzkrāšanos. Peptīdi. 2005; 26: 2274 – 2279. [PubMed]
  • Nimitvilai S, Brodie MS. Ventrālās tegmentālās zonas dopamīnerģisko neironu ilgstošas ​​kavēšanas nomaiņa. J Pharmacol Exp Ther. 2010; 333: 555 – 563. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Nogueiras R, Tschöp MH, Zigman JM. Centrālās nervu sistēmas enerģijas metabolisma regulēšana - ghrelin pret leptin. Ann NY Acad Sci. 2008; 1126: 14 – 19. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Paxinos G, Watson C. Žurkas smadzenes stereotaksiskās koordinātēs. Ņujorka: Academic Press, Ņujorka; 1986.
  • Perello M, Sakata I, Birnbaum S, Chuang JC, Osborne-Lawrence S, Rovinsky SA, Woloszyn J, Yanagisawa M, Lutter M, Zigman JM. Ghrelin palielina atalgojošo diētu ar augstu tauku saturu no oreksīna atkarīgā veidā. Biol psihiatrija. 2010; 67: 880 – 886. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Pratt WE, Blackstone K. Kodols akumulē acetilholīnu un pārtikas daudzumu: samazināts muskarīna tonis samazina barošanu, bet nemeklē barību. Behav Brain Res. 2009; 198: 252 – 257. [PubMed]
  • Pratt WE, Kelley AE. Striatāla muskarīna receptoru antagonisms samazina 24-h uzņemšanu saistībā ar samazinātu preproenkefalīna gēna ekspresiju. Eur J Neurosci. 2005: 22: 3229 – 3240. [PubMed]
  • Ritter RC, Slusser PG, Stone S. Glikoreceptori, kas kontrolē barošanu un asiņu – glikozes atrašanās vietu pakaļējā smadzenē. Zinātne. 1981; 213: 451 – 453. [PubMed]
  • Salamone JD, Steinpreis RE, McCullough LD, Smith P, Grebel D, Mahan K. Haloperidol un dopamīna izsīkuma kodols aizkavē sviras nospiešanu pārtikai, bet palielina brīvu pārtikas patēriņu jaunās pārtikas izvēles procedūrā. Psihofarmakoloģija. 1991: 104: 515 – 521. [PubMed]
  • Salomé N, Haage D, Perrissoud D, Moulin A, Demange L, Egecioglu E, Fehrentz JA, Martinez J, Dickson SL. Jaunu grelīna receptoru (GHS-R1A) antagonistu anoreksigēnas un elektrofizioloģiskas darbības žurkām. Eur J Pharmacol. 2009a; 612: 167 – 173. [PubMed]
  • Salome N, Hansson C, Taube M, Gustafsson-Ericson L, Egecioglu E, Karlsson-Lindahl L, Fehrentz JA, Martinez J, Perrissoud D, Dickson SL. Par centrālo mehānismu, kas ir pamatā grelīna hroniskajai aptaukošanās ietekmei žurkām: jauna atziņa no pētījumiem, kuros izmantots spēcīgs grelīna receptoru antagonists. J Neuroendokrinols. 2009b; 21: 777–785. [PubMed]
  • Sibilia V, Lattuada N, Rapetti D, Pagani F, Vincenza D, Bulgarelli I, Locatelli V, Guidobono F, Netti C. Ghrelin nomāc iekaisīgas sāpes žurkām: iesaistīšana opioīdu sistēmā. Neirofarmakoloģija. 2006; 51: 497 – 505. [PubMed]
  • Skibicka KP, Alhadeff AL, Grill HJ. Hindbrain kokaīna un amfetamīna regulēts stenogramma izraisa hipotermiju, ko mediē GLP-1 receptori. J Neurosci. 2009; 29: 6973 – 6981. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Saule Y, Asnicar M, Saha PK, Chan L, Smith RG. Ghrelin ablācija uzlabo ob / ob peļu diabētisko, bet ne aptaukojušos fenotipu. Šūnu metabolisms. 2006; 3: 379 – 386. [PubMed]
  • Toshinai K, Y datums, Murakami N, Shimada M, Mondal MS, Shimbara T, Guan JL, Wang QP, Funahashi H, Sakurai T, Shioda S, Matsukura S, Kangawa K, Nakazato M. Ghrelin izraisītais pārtikas patēriņš tiek mediēts caur oreksīna ceļš. Endokrinoloģija. 2003; 144: 1506 – 1512. [PubMed]
  • Tracy AL, Clegg DJ, Johnson JD, Davidson TL, Benoit SC. Melanokortīna antagonists AgRP taukiem, bet ne (83 – 132) palielina apetīti reaģējošo ogļhidrātu pastiprinātāju. Pharmacol Biochem Behav. 2008; 89: 263 – 271. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Wren AM, Seal LJ, Cohen MA, Brynes AE, Frost GS, Murphy KG, Dhillo WS, Ghatei MA, Bloom SR. Ghrelin uzlabo ēstgribu un palielina pārtikas uzņemšanu cilvēkiem. J Clin endokrinola metabolisms. 2001; 86: 5992 – 5995. [PubMed]
  • Wren AM, Small CJ, Ward HL, Murphy KG, Dakin CL, Taheri S, Kennedy AR, Roberts GH, Morgan DGA, Ghatei MA, Bloom SR. Jaunais hipotalāma peptīda grelīns stimulē barības uzņemšanu un augšanas hormona sekrēciju. Endokrinoloģija. 2000; 141: 4325 – 4328. [PubMed]
  • Zheng H, Lenard NR, Shin AC, Berthoud HR. Apetītes kontrole un enerģijas līdzsvara regulēšana mūsdienu pasaulē: uz atlīdzību balstītas smadzenes ignorē papildināšanas signālus. Int J Obes. 2009; 33 (piegādā. 2): S8 – S13. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Zigman JM, Jones JE, Lee CE, Saper CB, Elmquist JK. Ghrelin receptora mRNS ekspresija žurku un peļu smadzenēs. J Comp Neurol. 2006; 494: 528 – 548. [PubMed]