Okseksīns veicina seksuālas uzvedības uzsākšanu seksuāli naivās žurkām, taču tas nav izšķirošs seksuālās veiktspējas ziņā (2011).

Horm Behav. Autora manuskripts; pieejams PMC 2011 Aug 1.

Publicēts galīgajā rediģētā formā kā:

PMCID: PMC2917508

Izdevēja galīgā rediģētā šī raksta versija ir pieejama vietnē Horm Behav

Skatiet citus PMC rakstus citāts publicēto rakstu.

Iet uz:

Anotācija

Hipotalāma neiropeptīds oreksīns veicina uzvedību, miegu un dabiski atalgojošu uzvedību, ieskaitot uzturu. Vīriešu seksuālo uzvedību maina oreksīna receptoru-1 agonisti vai antagonisti, kas liecina par oreksīna-A lomu šajā dabiski labvēlīgajā uzvedībā. Tomēr endogēnā oreksīna-A vai B specifiskā loma dažādos vīriešu seksuālās uzvedības elementos šobrīd nav skaidra. Tāpēc pašreizējos pētījumos tika izmantoti marķieri neironu aktivācijai un oreksīna šūnu specifiskiem bojājumiem, lai pārbaudītu hipotēzi, ka oreksīns ir būtisks seksuālās motivācijas un veiktspējas rādītājs žurku tēviņiem. Pirmkārt, cFos ekspresija oreksīna neironos tika parādīta pēc tam, kad tika prezentēta sievišķīga vai ne-uztveroša sieviete, nepārveidojot dažādus pārošanās elementus. Pēc tam oreksīna funkcionālā loma tika pārbaudīta, izmantojot oreksīna-B konjugēto saporīnu, kā rezultātā tika iegūti oreksīna šūnu ķermeņa bojājumi hipotalāmā. Bojājumi tika veikti seksuāli naiviem vīriešiem, un pēc tam tika novērota seksuāla uzvedība četru pārošanās izmēģinājumu laikā. Kaitējuma tēviņi parādīja saīsinātus latentumus, lai pirmo reizi, bet ne vēlāk, pārošanās pētījumos uzstādītu un iekļūtu, liecinot, ka bojājumi veicināja seksuālas uzvedības uzsākšanu seksuāli naivās, bet ne pieredzējušiem vīriešiem. Tāpat bojājumi neietekmēja seksuālo motivāciju pieredzējušiem vīriešiem, ko noteica skrejceļa testos. Visbeidzot, paaugstinātie labirints testi liecināja par mazāku trauksmes uzvedību bojātajos tēviņos, atbalstot oreksīna lomu trauksmē, kas saistīta ar sākotnējo sievietes iedarbību iepriekš nedzīviem dzīvniekiem. Kopumā šie atklājumi liecina, ka oreksīns nav izšķirošs vīriešu seksuālās veiktspējas vai motivācijas ziņā, bet tam var būt ietekme uz seksuālo uzvedību un naidīgu attieksmi pret naiviem.

atslēgvārdi: oreksīns, hipokretīns, seksuālā uzvedība, kopulācija, nervu aktivizācija, motivācija, hipotalāma, jaunums, arousal, trauksme

Ievads

Okseksīns, kas pazīstams arī kā hipokretīns, ir hipotalāma neiropeptīds, kas ir kritisks barošanas uzvedībai, (de Lecea et al., 1998; Sakurai et al; 1998, Sakurai, 2006; Benoit et al., 2008) arousal un miega (Chemelli et al., 1999; Lin et al., 1999, Sakurai, 2007; Furlong un Carrive, 2007; Furlong et al., 2009; Carter et al., 2009). Orexīna neironi ir lokalizēti sānu hipotalāmajā zonā (LHA) un perifornālajā dorsomediālajā hipotalāmā (PFA-DMH) un ražo divus neiropeptīdus - oreksīnu-A un B (de Lecea et al., 1998; Sakurai et al., 1998). Ir pierādīts, ka okseksīna neironi veido smadzeņu struktūras, kas iesaistītas arousal mediācijā, ieskaitot locus coeruleus, tuberomammillary kodolu un peduculopontine tegmental kodolu (Peyron et al., 1998; Hagan et al., 1999; Horvath et al., 1999; Baldo et al., 2003). Okseksīns ir saistīts arī ar atalgojumu un motivāciju, kas īpaši attiecas uz pārtiku un ļaunprātīgu izmantošanu (Aston-Jones et al., 2009a; Aston-Jones et al., 2009b) un oreksīna neironiem ir pierādīts, ka tas plāno atalgot saistītās smadzeņu struktūras mesolimbiskajā sistēmā, ieskaitot ventrālo tegmentālo zonu (VTA) un nucleus accumbens (NAc) (Peyron et al., 1998; Fadel un Deutch, 2002; Martin et al., 2002; Baldo et al., 2003). Orexīna neironus aktivizē ar nosacītu konteksta norādēm, kas saistītas ar pārtikas un zāļu atlīdzību (Harris et al., 2005; de Lecea et al., 2006; Choi et al., 2010), un ir pierādīts, ka tiem ir nozīme, balstoties uz atalgojuma \ tChoi et al., 2010). Turklāt oreksīna receptoru 1 (ORX1) antagonista intracerebroventrikulārais (ICV) vai intraperitoneāls ievadīšana samazina garšīgas pārtikas motivāciju.Thorpe et al., 2005; Nair et al., 2008), bet ICV orexin-A administrācija var atjaunot šo motivāciju (Boutrel et al., 2005).

Oreksīna loma citās atalgojošās uzvedībās pašlaik ir neskaidra, lai gan vairāki pētījumi ir bijuši saistīti ar oreksīna lomu, kontrolējot seksuālo uzvedību žurku tēviņiem. Iepriekš ir pierādīts, ka oreksīna neironi tiek aktivizēti, kopulējot vīriešu kārtas žurkas (Muschamp et al., 2007). Turklāt oreksīna-A ievadīšana mediālajā preoptiskajā zonā (mPOA) izraisīja pastiprinātu seksuālo sniegumu, ko apliecināja samazināts latentums, lai pieslēgtos un iekļūtu, kā arī palielinājās stiprinājumu un introminācijas biežums (Gulia et al., 2003). Turpretī orexin-A ICV ievadīšana mazināja seksuālo motivāciju, samazinot sieviešu vēlmes, lai gan tikai ļoti seksuāli motivēti vīrieši (Bai et al., 2009). Pētījumi, kuros izmanto ORX1 antagonistus, arī ir parādījuši pretrunīgus datus, jo ORX1 antagonista sistēmiska ievadīšana nedaudz pasliktināja seksuālo sniegumu, palielinot latentuma iestāšanās spēju, neietekmējot citus seksuālās uzvedības parametrus (Muschamp et al., 2007), bet ORX1 antagonista ievadīšana ICV neietekmēja seksuālo motivāciju (\ tBai et al., 2009). Kopā šie pētījumi liecina, ka eksogēnā oreksīna A lietošana ietekmē seksuālo sniegumu un motivāciju; tomēr endogēnais oreksīns nedrīkst būt nozīmīgs seksuālās uzvedības starpā (Bai et al., 2009). Tādēļ šī pētījuma mērķis bija noteikt, vai endogēnais oreksīns ir būtisks vīriešu žurku seksuālās motivācijas un darbības efektivitātei.

Pirmkārt, tika konstatēts, kad seksuālās uzvedības laikā oreksīna neironi tiek aktivizēti, pārbaudot hipotēzi, ka oreksīna neironi tiek aktivizēti, ieviešot atalgojošo stimulu. Turklāt, tā kā ir pierādīts, ka seksuālā pieredze ietekmē seksuālo sniegumu (Dewsbury, 1969) un seksuālās uzvedības atalgojošās īpašības (\ tTenk et al., 2009) tika konstatēts, vai seksuālā pieredze ietekmē oreksīna neironu aktivizēšanos pārošanās laikā. Visbeidzot, tika pārbaudīts, vai oreksīns spēlē izšķirošu lomu seksuālās motivācijas un veiktspējas ziņā, izmantojot šūnu ķermeņa specifiskus oreksīna neironu bojājumus.

Materiāli un metodes

Pieaugušo tēviņu Sprague Dawley žurkas (200 – 250g) ieguva no Harlanas (Indianapolis, IN) vai Charles River Laboratories (Sherbrooke, Quebec, Kanāda) un tika izmitinātas atsevišķi vai pa pāriem atkarībā no individuālā eksperimenta (skatīt turpmāk) Plexiglas būros. Kolonijas telpa tika uzturēta uz 12 / 12 apgrieztā apgaismojuma-tumšā cikla (gaismas izslēgšana pie 10 am), kā arī pārtika un ūdens bija pieejami ad libitum izņemot uzvedības testēšanas laikā. Sieviešu Sprague-Dawley žurkas tika iegūtas no Harlan (Indianapolis, IN) vai Charles River Laboratories (Sherbrooke, Quebec, Kanāda) divpusēji ovariektomizētas un implantētas subkutāni ar 5% 17-β-estradiola benzoāta silikāta kapsulām. Seksuālo uztveramību izraisīja subkutānas progesterona injekcijas (500 µg sezama eļļas 0.1ml) aptuveni 4 h pirms pārošanās. Visas procedūras apstiprināja Cincinati Universitātes un Rietumu Ontario Universitātes Dzīvnieku aprūpes komitejas un atbilst Valsts Veselības institūta un Kanādas Dzīvnieku aprūpes padomes izstrādātajām vadlīnijām. Visas uzvedības pārbaudes tika veiktas tumšās fāzes pirmajā pusē zemas sarkanā apgaismojumā, izņemot gadījumus, kad ir norādīts citādi.

Eksperimentālais dizains

cFos izteiksmes pētījumi

Vīriešu žurkas (n = 48) tika izmitinātas individuāli, un puse no dzīvniekiem ieguva seksuālu pieredzi mājas būrī 5 laikā divreiz nedēļas laikā. Pārošanās testi tika veikti mājas būrī, lai novērstu arousal un cFos ekspresiju, ko izraisa ekspozīcija citā pārošanās arēnā, un pakļaušana kondicionētiem signāliem, kas saistīti ar iepriekšēju pārošanos (Balfour et al., 2004). Vietējā būrī tika ievesta uztveroša sieviete, un vīriešiem tika atļauts līdz vienam ejakulācijai vai 60 minūtēm. Katra testa laikā tika novērota seksuālā uzvedība. Tika reģistrēts kopējais stiprinājumu un intromciju skaits, kā arī latentes pirmajai montāžai un intromīzijai (laiks no uztveres sievietes uzrādīšanas līdz pirmajam stiprinājumam vai intromīzijai) un ejakulācija (laiks no pirmā intromisijas līdz ejakulācijai), tika reģistrēti (Agmo, 1997). Atlikušie dzīvnieki palika seksuāli naivi. Šie dzīvnieki tika izmitināti tajā pašā telpā kā seksuāli pieredzējuši vīrieši, tie tika apstrādāti un pakļauti smakas un skaņas, kas saistītas ar pārošanos, tomēr nesakrita. Naivi un pieredzējuši dzīvnieki tika iedalīti 6 eksperimentālajās grupās (n = 4 grupā). 6 neārstētām un pieredzējušām grupām piederēja: Kontrolēt vīriešus bez seksuālas uzvedības (mājas būris); tēviņi, kas pakļauti neuzņemamai sievietei mājas būrī 15 minūtēm (anestēziska sieviete). Vīrieši varēja pētīt un mijiedarboties, tomēr viņi nespēja saskarties ar sievietes uztveres trūkumu; tēviņi, kas pakļauti uztverošas sievietes smaržām, kas ievietotas stiepļu sieta kārbā uz mājas būru virsmas 15 minūtes (Estrous Female); tēviņi, kas uzrāda stiprinājumus, bet ne intromas vai ejakulācija ar maksts maskētām mātītēm (Mount); tēviņi, kas parādīja tikai stiprinājumus un intromīcijas (Intromission); un tēviņi, kas pāroja vienu ejakulāciju (ejakulāciju). Vienu stundu pēc testa beigām tēviņi tika upurēti, lai analizētu cFos ekspresiju. Seksuāli pieredzējušās grupas tika saskaņotas ar seksuālās uzvedības parametriem, un pirms galīgā testa nebija būtisku atšķirību starp grupām. Turklāt pēdējo testu laikā nav notikušas būtiskas atšķirības starp naivām un pieredzējušām grupām.

Perfūzijas: cFos izteiksme

Visi vīrieši tika dziļi anestēti ar nātrija pentobarbitolu (270 mg / ml) un transkardiāli perfūzēti ar 4% paraformaldehīdu (500 mL; PFA). Pēc perfūzijas smadzenes tika nekavējoties izņemti un pēc stundas fiksēti vienā stundā tajā pašā fiksatorā, pēc tam pārnesot uz 20% saharozes šķīdumu krioprotekcijai. Smadzenes tika sasmalcinātas uz sasalšanas mikrotoma (Microm, Walldorf, Vācija) 35 µm koronālajās daļās un savāca 4 paralēlās sekcijas krioprotektanta šķīdumā (30% saharoze 0.1 M PB, kas satur 30% etilēnglikolu un 0.01% nātrija azīdu) un uzglabāja. pie -20 ° C līdz turpmākai apstrādei.

Imūnhistoķīmija

Visas inkubācijas tika veiktas istabas temperatūrā ar vieglu uzbudinājumu. Brīvās peldošās sekcijas tika plaši nomazgātas ar nātrija fosfāta sāls buferšķīdumu 0.1M (PBS). Sekcijas tika bloķētas ar 1% H2O2 (30% izejas šķīdums) PBS 10 minūtēm, pēc tam vēlreiz plaši skalo ar PBS. Sekcijas inkubēja ar inkubācijas šķīdumu (PBS, kas satur 0.1% liellopu seruma albumīnu un 0.4% Triton X-100) 1 stundai. Primārās antivielu inkubācijas inkubācijas šķīdumā tika veiktas naktī istabas temperatūrā. Sekojošas krāsošanas sekcijas tika izskalotas PBS, piestiprinātas pie uzpildītiem stikla priekšmetstikliņiem un pārklātas ar dibutilftalāta ksilolu (DPX).

cFos / Okseksīns

Viena sekciju sērija tika imunizēta cFos un orexin. Sekcijas tika inkubētas nakti ar truša paaugstinātu antivielu, atzīstot cFos (trušu anti-cFos, sc-52; 1: 10 000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), kam sekoja 1 stundu inkubācijas ar biotinilētu kazu anti-trušu (1: 500 , Vector Laboratories, Burlingame, CA) un avidīna mārrutku peroksidāzes komplekss (1: 1000, ABC komplekts, Vector Laboratories, Burlingame, CA). Sekcijas 10 minūtes inkubēja 0.02% diaminobenzidīnā (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) 0.1M fosfāta buferšķīdumā (PB), kas satur 0.012% ūdeņraža peroksīdu un 0.08% niķeļa sulfātu, kā rezultātā radās zilā-melnā reakcijas produkts. Tad sekcijas tika inkubētas nakti ar truša paaugstinātu antivielu, atpazīstot oreksīna-A (trušu anti-oreksīna-A, H-003-30; 1: 20 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA), kam sekoja 1 stundu inkubācija ar biotinilētu kazu anti - trušu un ABC, kā aprakstīts iepriekš. Visbeidzot, sekcijas tika inkubētas 10 minūtēm ar 0.02% DAB 0.1M PB, kas satur 0.012% ūdeņraža peroksīdu, radot sarkanīgi brūnu reakcijas produktu.

Visas antivielas iepriekš raksturotas (Chen et al., 1999; Satoh et al., 2004; Solomons et al., 2007). Imūnhistoķīmiskās kontroles ietvēra primāro antivielu izlaišanu, Western blot analīzi, kas demonstrēja atsevišķas joslas pie atbilstoša svara (cFos), un imūnhistoķīmisko oreksīna signāla zudumu ar oreksīna B-saporīna bojājumiem (oreksīnu).

Datu analīze

cFos / Okseksīns

Neironi, kas marķēti ar oreksīnu vai oreksīnu un cFos, tika uzskaitīti divpusēji trīs reprezentatīvās daļās katram dzīvniekam, par kuru zināms, ka tie satur maksimālo oreksīna neironālo populāciju skaitu.Sakurai et al., 1998) –2.3 mm līdz –3.6 mm no bregmas (Paxinos un Watson, 1998) (Skaitlis 1), izmantojot zīmēšanas cauruli, kas piestiprināta pie Leica mikroskopa (Leica Microsystems; Wetzlar Germany), novērojot, ka eksperimentālajām grupām tā ir akla. PFA-DMH un LHA tika definēti, pamatojoties uz fornix atrašanās vietu (1a attēls). Aprēķināja un vidēji aprēķināja oreksīna neironu procentuālo daudzumu, kas ekspresē cFos katram dzīvniekam, un tika aprēķināti grupas līdzekļi. Statistiskā nozīmība starp grupām tika noteikta, izmantojot divvirzienu ANOVA ar seksuālo pieredzi un seksuālo uzvedību gala testa laikā kā faktorus, kam sekoja Fisher's LSD testi ar 95% ticamības līmeni.

Skaitlis 1 

Oreksīna neironu atrašanās hipotalāmā. (A) Oreksīna neironu anatomiskā atrašanās vieta hipotalāmā. (Paxinos un Watson, 1998), Skalas josla: 200 µm. (B) Viena marķēta oreksīna neirons PFA-DMH nesaturētā kontroldzīvniekā. (C) Oreeksīns ...

Okseksīna bojājumu pētījumi

Ķirurģija

Tēviņi tika izmitināti individuāli un pirms viena bojājuma un viltus ķirurģiska iejaukšanās tika veikta viena pirms testēšanas pārošanās sesija ar uztverošu sievieti. Seksuālā uzvedība tika reģistrēta, kā aprakstīts iepriekš, un grupas tika saskaņotas, pamatojoties uz pārošanās paradumiem. Vīriešu žurkas anestezēja ar izoflurānu (Abbot Laboratories, St. Laurent, Quebec, Kanāda), izmantojot Surgivet Isotec4 gāzes aparātu (Smiths Medical Vet Division, Markham, Ontario, Kanāda) un ievietoja stereotaksiskajā aparatūrā (Kopf Instruments, Tujunga, CA) ar gāzes masku, kas aptver degunu un muti, lai saglabātu anestēziju. Tika veikts griezums, lai atklātu galvaskausu un lambda, un bregma tika konstatēta un noteikta kā līmenis. Galvaskausā tika izurbts caurums, izmantojot dremel drill (Dremel, Racine, WI) un stikla mikropipetes (40µm diametrs, World Precision Instruments Inc, Sarasota, FL), kas piepildīts ar mērķa toksīnu orexin-B saporin (IT-20, Advanced Mērķēšanas sistēmas, San Diego, CA, 200ng / µL PBS); vai nekonjugēts toksīns BLANK-saporin (IT-21, Advanced Targeting Systems, San Diego, CA; 200ng / µL PBS; sham kontrole) tika pazemināti hipotalāmā. Ir pierādīts, ka šis mērķa toksīns ar augstu afinitāti saistās ar šūnām, kas ekspresē oreksīna receptoru 2 (ORX2), un ar ievērojami zemāku afinitāti pret šūnām, kas ekspresē ORX1 (Gerashchenko et al., 2001), un ir pierādīts, ka hipotalāmā īpaši izplata oreksīna neironus (Frederick-Duus et al., 2007). 1 µL (2 uz puslodi) divpusējas infūzijas tika ievadītas šādās koordinātēs: AP = −2.8 un −3.2; ML = 0.7 un 0.8; DV = −9.0 (Paxinos un Watson, 1998). Pēc katras infūzijas adata tika atstāta vietā 3 minūtes, lai ļautu difūzijai. Adatas lēnām tika noņemtas un brūces tika aizvērtas ar brūču klipiem. Divas nedēļas pēc bojājumu operācijas visi vīrieši tika pārbaudīti seksuālai pieredzei četru pārošanās izmēģinājumu laikā un pēc tam tika pakļauti skrejceļam un / vai paaugstinātam labirints testam (skatīt zemāk). Ķirurģijas tika veiktas trīs dažādās grupās, kas atdalītas ar vairākām nedēļām, lai sasniegtu pietiekamu dzīvnieku skaitu katrā grupā.

Seksuālā uzvedība

Visiem vīriešiem tika veikta seksuālās uzvedības pārbaude 4 pārošanās sesijās, kas katru otro dienu notika mājas būrī. Katras sesijas laikā tēviņi pāroja ar sievišķīgu sievieti ar vienu ejakulāciju vai 60 minūtēm, atkarībā no tā, kas notika agrāk. Pārošanās uzvedība tika reģistrēta, kā aprakstīts iepriekš, un tika aprēķināta arī kopulācijas efektivitāte [intromisionu skaits (stiprinājumu skaits + intromciju skaits)]. Statistiskās atšķirības seksuālās veiktspējas parametros tika salīdzinātas starp bojājumiem un apgrūtinātajām grupām katram izmēģinājumam, izmantojot vienvirziena ANOVA ar bojājuma operāciju kā faktoru un Fišera LSD testu ar 95% ticamības līmeni, vai, ja vajadzīgs, neizmantojami parametri. Kruskal-Wallis vienvirziena ANOVA ar bojājuma operāciju kā faktors un Dunn tests ar 95% ticamības līmeni. Turklāt dati par katru grupu tika salīdzināti ar pirmsoperācijas datiem, izmantojot pārī t-testus.

Seksuālā motivācija: skrejceļa tests

Pēc seksuālās uzvedības pārbaudes, tagad seksuāli pieredzējušu vīriešu apakšgrupai tika veikta seksuālās motivācijas pārbaude, izmantojot taisnu skrejceļa aparātu (MED Associates Inc., St. Albans, VT) (120 cm garš; Lopez et al., 1999). Tēviņi, kas pieraduši pie skrejceļa aparāta divos turpmākajos 10 minūšu izmēģinājumos, kas veikti tajā pašā dienā. Pēc tam tika veikti divi izmēģinājumu izmēģinājumi. Pirmā izmēģinājuma laikā mērķa kastē ar perforētiem sadalītājiem skrejceļa beigās tika ievietots stimulējošs dzīvnieks (estrous female, anestrous female vai male). Tika izmantots ventilators, lai uzspridzinātu stimulējošo dzīvnieku smaržas vīriešiem. Eksperimentāli vīrieši tika ievietoti starta lodziņā, durvis tika atvērtas, lai varētu piekļūt skrejceļam, un tika reģistrēts laiks, lai sasniegtu mērķa lodziņu. Kad sasniegts mērķa lodziņš, vīriešiem tika dotas 30 sekundes, lai mijiedarbotos ar stimulējošo dzīvnieku aiz ekrāna. Identisks otrais pētījums tika veikts pēc 1 stundas vēlāk. Statistiskais nozīmīgums starp laikiem, lai sasniegtu mērķa lodziņu starp izmēģinājumu 1 un izmēģinājumu 2, tika analizēts, izmantojot pārī t-testus ar 95% ticamības līmeni. Statistiskā nozīmība starp grupām tika noteikta, izmantojot vienvirziena ANOVA ar bojājumu operāciju kā faktoru, kam sekoja Fisher's LSD testi ar 95% ticamības līmeni.

Trauksme līdzīga uzvedība: paaugstināta labirints

Šobrīd seksuāli pieredzējušu vīriešu apakšgrupai tika pārbaudīta trauksmes uzvedība, lai noteiktu, vai oreksīna bojājumu ietekme uz seksuālo sniegumu vai motivāciju bija saistīta ar trauksmes vai uzbudinājuma izmaiņām. Vīrieši tika pakļauti paaugstinātajam labirints aparātam (EPM; MED Associates Inc., St. Albans, VT) gaišā apgaismojuma telpā gaismas fāzes beigās. EPM sastāvēja no 4 rokām, katra 50 cm garumā, kas stiepjas no centrālā mezgla un paaugstināta 75 cm. Divas labirints rokas bija atvērtas ārējai videi, bet pārējās divas bija slēgtas ar tumšu apšuvumu 40 cm. Dzīvniekus novietoja uz EPM un uzrauga piecas minūtes. Laiks, kas pavadīts atklātās un aizvērtās rokās, un kopējais ierakstu skaits katrā grupā tika ierakstīts, izmantojot fotobeam blokus. Statistiskā nozīmība starp grupām tika noteikta, izmantojot vienvirziena ANOVA ar bojājumu kā faktoru, kam sekoja Fisher's LSD testi ar 95% ticamības līmeni.

Perfūzijas un pārošanās izraisīti cFos

Pēc visām uzvedības pārbaudēm visi vīrieši tika dziļi anestēti ar nātrija pentobarbitolu (270mg / ml) un transkardiāli tika perfūzēti ar 500 ml PNUMX% PFA bojājumu pārbaudei, kā aprakstīts iepriekš. Turklāt, lai pārbaudītu oreksīna bojājumu ietekmi uz pārošanās izraisītu cFos ekspresiju, fiktīvu un bojājumu grupas vīriešiem, kas bija līdzās vienai ejakulācijai. Viena stunda pēc ejakulācijas vīriešiem transkardiāli tika perfūzēti ar 4% PFA, kā aprakstīts iepriekš. Puse no šīs grupas tēviņiem netika ievesta mātītēm un tika izlaista no mājas būrī, lai kalpotu par nesaistītām kontrolēm.

Imūnhistoķīmija

Smadzenes tika sadalītas, izmantojot 4 paralēlās sērijas 35 µm koronālo sekciju sasalšanas mikrotomu un uzglabājami kā aprakstīts iepriekš. Attiecībā uz bojājumu pārbaudi viena no sekciju sērijām, kas satur hipotalāmu no visiem bojājumu eksperimentiem, bija viena etiķete ar oreksīnu, izmantojot to pašu iepriekš aprakstīto trušu anti-oreksīna-A un DAB protokolu. Viena sekciju sērija no dzīvniekiem, kas pāroja, tika krāsota cFos un orexin, kā aprakstīts iepriekš.

Kaitējuma pārbaude

Katrā dzīvniekā orexīna neironu skaits, kas imunoreaktīvi pret oreksīnu, tika aprēķināts divpusēji PFA-DMH un LHA 3 sekcijās, kas izsaka maksimālo oreksīna šūnu skaitu ne-ķirurģiskajās kontrolēs, −2.3 mm līdz –3.6 mm no bregmas, kā aprakstīts iepriekš. Katra puslodes šūnas tika aprēķinātas katram dzīvniekam, un tika aprēķināti grupas līdzekļi. Neoperācijas kontroles dzīvniekus (no cFos eksperimentiem) izmantoja, lai noteiktu neskartus / sākotnējos oreksīna neironu skaitļus, un datus izsaka procentos, salīdzinot ar vīriešiem, kas nav ķirurģiski kontrolēti (Skaitlis 2). Slimību grupā tika iekļauti vīrieši, kuriem bija mazāk par 20% oreksīna šūnām, salīdzinot ar bezoperācijas kontroles dzīvniekiem. Dzīvnieki ar lielāku nekā 20%, bet mazāk nekā 80% tika iekļauti daļējas bojājumu grupā. Sham kontrolēm nebija būtisku izmaiņu oreksīna šūnu skaitā. Statistiskais nozīmīgums starp fiktīvajiem, daļējiem un pilnīgiem bojājumiem dzīvniekiem tika aprēķināts, izmantojot vienvirziena ANOVA un Fisher LSD testu ar 95% ticamības līmeni.

Skaitlis 2 

Kaitējuma pārbaude. Reprezentatīvi attēli, kas attēlo oreksīna (A) un MCH (B) šūnas sāpīga dzīvnieka dzīvniekam, kas injicēts ar BLANK-saporin. Reprezentatīvie attēli, kas parāda oreksīna šūnu (C) zudumu, bet neskartas MCH šūnas (D) bojājuma dzīvniekam, kas injicēts ar oreksīnu ...

Kaitējuma specifiskums

Lai pārliecinātos, ka bojājumi bija ierobežoti ar oreksīna neironiem, viena sērija, kas satur hipotalāmu no aplamo un bojāto dzīvnieku apakšgrupas (n = 20), tika imunizēta melanocītu koncentrējošajam hormonam (MCH) - hipotalāmajam peptīdam, kam ir pārklāšanās vieta (bet ne kolokalizācija) ar oreksīna neironiem (Broberger et al., 1998), izmantojot trušu izraisītu antivielu, kas atpazīst MCH (trušu anti-MCH, H-070-47; 1: 150 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) un DAB, kā aprakstīts iepriekš. MCH neironi izsaka ORX1 (Bäckberg et al., 2002), bet ne ORX2 (Volgin et al., 2004), un pēc oreksīna B-saporīna terapijas būtiski nemazinās (\ tFrederick-Duus et al., 2007). MCH imunoreaktīvās šūnas tika skaitītas divpusēji divās daļās uz dzīvnieku (viltus: n = 7; bojājums n = 5), izmantojot alternatīvas sekcijas tām, kas analizētas oreksīna neironiem. Bojājumi būtiski nemazināja MCH neironu skaitu ne PFA-DMH, ne LHA (Tabula 1; 2b attēls, d; PFA-DMH: p = 0.47; LHA: p = 0.33). Turklāt pārošanās izraisītā cFos ekspresija tika uzskaitīta divpusēji vienā reprezentatīvā sadaļā katram dzīvniekam (fiktīvs: n = 4; bojājums n = 3), izmantojot alternatīvas sekcijas tām, kas analizētas oreksīna neironiem. Bojājumi neietekmēja pārošanās izraisītu cFos ekspresiju PFA-DMH vai LHA (Tabula 1; PFA-DMH: p = 0.53; LHA: p = 0.82). Visbeidzot, reprezentatīvās sekcijas, ko lieto oreksīna šūnu skaitam (dzīvnieki: viltība: n = 6; bojājums: n = 6), bija Nissl kontrastkrāsas, izmantojot krezila violetu (5 g krezola violeta acetāts (C-5042, Sigma, St. Louis, MO), Nātrija acetāta trihidrāta 0.5 g (S209, Thermo Fisher Scientific, Otava, Ontario, Kanāda), 1L dubultdestilēts ūdens ar ledus etiķskābi (AX0073-6, EMD Chemicals, Mississauga, Ontario, Kanāda) pie pH: 3.14). Nissl krāsoto neironu skaits tika veikts standarta analīzes apgabalos (250 µm × 200 µm) vispārējā oreksīna neironu atrašanās vietā. Nissl krāsoto neironu skaits neatšķīrās no viltus un bojātām grupām (Tabula 1; PFA-DMH: p = 0.23; LHA: p = 0.33).

Tabula 1 

Kaitējuma specifiskuma pārbaude: Nissl, MCH vai pārošanās inducēto cFos uzkrītošo neironu skaita analīze parādīja, ka vispār nav būtiski neironu zudumi, MCH šūnas vai pārošanās inducēta neirāla aktivācija PFA-DMH vai ...

Tā kā ir pierādīts, ka oreksīna deficīts veicina narkolepsiju pelēm (Chemelli et al., 1999), suņi (Lin et al., 1999) un cilvēkiem (Siegel, 1999; Nishino et al., 2000; Peyron et al., 2000; Thannickal et al., 2000) dzīvnieki tika novēroti, lai nodrošinātu narkoleptiskā fenotipa trūkumu. Dzīvnieki tika novēroti visu šajā pētījumā aprakstīto uzvedības testu laikā un tiem nebija nekādu narkolepsijas pazīmju.

Pārošanās izraisīta cFos ekspresija bojājumu dzīvniekiem

CFos-imunoreaktīvo šūnu skaits tika skaitīts divpusēji 3 sekcijās katram dzīvniekam standarta analīzes apgabalos ventrālā tegmentālā apgabalā (VTA; 900 × 900 µm), mPOA (400 × 600 µm); nucleus accumbens (NAc) kodols un apvalks (400 × 600 µm) un mediālās prefrontālās garozas (mPFC) prelimbiskais, infralimbiskais un priekšējais cingulējošais apakšreģions (600 × 800 µm uz vienu apakšreģionu), ko novēroja neredzētām eksperimentālajām grupām . Skaitļi tika aprēķināti katram dzīvniekam, un tika aprēķināti grupas līdzekļi. Statistiskā nozīmība tika aprēķināta, izmantojot divvirzienu ANOVA ar seksuālo pieredzi un bojājumu kā faktorus, kam sekoja Fisher's LSD tests ar 95% ticamības līmeni.

rezultāti

Orexīna neironu aktivizācija seksuālās uzvedības laikā

Pēc seksuālās uzvedības abos PFA-DMH (F.) Novēroja nozīmīgu cFos ekspresijas palielināšanos oreksīna neironos(5,31) 63.4; p <0.001; 3a attēls) un LHA (F(5,31) 10.4; p <0.001; Attēls 3b), bez seksuālās pieredzes ietekmes. Konkrēti, gan seksuāli naivos, gan pieredzējušos dzīvniekos visas vīriešu dzimuma eksperimentālās grupas, kurās parādās atšķirīgi seksuālās uzvedības parametri (anestēzisko sieviešu izmeklēšana, estētisku sieviešu smaku ekspozīcija, montāžas parādīšanās, introminācijas vai ejakulācija), parādīja vienādu cFos indukciju salīdzinājumā ar mājām būris kontrolē ar augstāku oreksīna šūnu procentuālo daļu, kas aktivizēta PFA-DMH (60 – 80%), salīdzinot ar LHA (14 – 33%), bez atšķirībām starp eksperimentālajām grupām. Šie rezultāti liecina, ka oreksīna neironi tiek aktivizēti pēc stimulēšanas sievietes iedarbības bez papildu aktivācijas seksuālās darbības laikā. Turklāt aktivācija nav atkarīga no stimulējošās sieviešu stimulēšanas, jo gan ne-uztverošas, gan uztverošas sievietes izraisa aktivāciju seksuāli pieredzējušiem vīriešiem.

Skaitlis 3 

Oxxin neironi PFA-DMH (A) un LHA (B) izteica cFos, ievērojot visus pārošanās paradumus naivos un pieredzējušos dzīvniekos. Saīsinājumi: HC, mājas būris; AF: sievišķīga sieviete; EF, estrous female; M, kalns; IM, Intromission; E, ejakulācija. ...

Oreksīna bojājumu ietekme

Seksuālā uzvedība

Orexīna bojājumi veicināja seksuālo uzvedību (mount latency: F(2,47) 3.962; p = 0.034; intromission latency: H = 9.104; p = 0.011). Pirmajā pārošanās pētījumā bojājumu tēviņi parādīja īsākus latentus, kas bija nepieciešami uzstādīšanai un intromīzijai, salīdzinot ar fiktīvajiem dzīvniekiem (mount latency: p = 0.03; intromission latency: p = 0.01; Attēls 4a – b) un salīdzinot ar latentiem pirmsoperācijas pārošanās izmēģinājuma laikā (mount latency: p = 0.02; intromission latency: p = 0.03; dati nav parādīti). Daļēji bojāti vīrieši būtiski neatšķīrās no viltus tēviņiem, un neviena grupa neatšķīrās no pirmsoperācijas pārošanās izmēģinājuma. Seksuālās pieredzes rezultātā bojājumu ietekme uz kalnu un introminācijas latentiem tika mazināta, jo starp grupām nevienā no turpmākajiem izmēģinājumiem (pētījumā 4 parādījās atšķirības) Attēls 4a – b). Ejakulācijas latences (Attēls 4c), stiprinājumu skaits (Attēls 4d) un intromissions (Attēls 4e), kā arī kopulācijas efektivitāte (Attēls 4f) nevienā pētījumā vai katrā grupā būtiski neatšķīrās starp pirmo pārošanās pētījumu un pirmsoperācijas testu.

Skaitlis 4 

Oksekss bojājumi saīsināja latentumus, lai 1 izmēģinājuma laikā pievienotos un iekļūtu seksuāli naivās tēviņos. Oxxin bojājumi neietekmēja pārošanos pētījuma 4 laikā, kad vīrieši ieguva seksuālu pieredzi. (A) Novietojiet latentumu. (B) Intromission latency. (C) Ejakulācija ...
Skrejceļa tests

Orexīna bojājumi neietekmēja seksuālo motivāciju, kas novērtēta taisnā skrejceļa testā seksuāli pieredzējušiem vīriešiem. Divu testu laikā bojājumu tēviņi otrajā pētījumā, salīdzinot ar pirmo izmēģinājumu, bija ievērojami ātrāk, salīdzinot ar estētisko sievieti (p = 0.03; Skaitlis 5). Šāds palielināts darbības laiks norāda uz seksuālo motivāciju (Lopez et al., 1999). Pētījuma 2 (p = 0.03) laikā daļēji bojājumi un fiktīvi vīrieši skrēja arī straujāk pret estētisko sievieti (p = 0.052), lai gan tas nespēja sasniegt nozīmīgumu tēviņiem vīriešiem (p = 2). Neviena no grupām neparādīja palielinātu ātrumu, lai pētītu 1 izmēģinājumu pret anestēziju. Turklāt nav novērotas būtiskas atšķirības starp vaigiem, daļējiem un bojātiem vīriešiem ar ātrumu, lai darbotos uz jebkuru stimulu dzīvnieku ne ne 2 pētījumā, ne pētījumā XNUMX, pierādot atšķirības vispārējā aktivitātē uz skrejceļa.

Skaitlis 5 

Orexīna bojājumi neietekmēja seksuālo motivāciju vīriešiem ar seksuālu pieredzi. Parādīti laiki, lai sasniegtu estrous sieviete skrejceļa testā gan 1, gan 2 izmēģinājumu laikā. * norāda uz ievērojamu laika samazinājumu, lai sasniegtu sievietes 2 pētījumā, salīdzinot ar ...
Trauksmes uzvedība

Līdz šim iegūtie rezultāti liecina, ka bojājumi var veicināt seksuālās uzvedības uzsākšanu naivos dzīvniekos, potenciāli ietekmējot reakciju uz novitāti un / vai trauksmi līdzīgu uzvedību, kad vīrieši saskaras ar jaunu sievieti. Atbalstot, bojājumu tēviņiem bija vērojama samazināta trauksmes uzvedība uz EPM, kas tika uzskatīta par samazinātu procentuālo daļu laika, kas pavadīts slēgtajās ieročos (p = 0.012; Skaitlis 6) un palielināto laika daļu uz atklātām rokām (p = 0.023; Skaitlis 6), salīdzinot ar fiktīviem vīriešiem. Daļējiem bojājumiem nebija būtiskas ietekmes. Šie dati vēl vairāk apstiprina, ka bojājums mazināja trauksmes uzvedību.

Skaitlis 6 

Orexīna bojājumi mazināja trauksmes uzvedību paaugstinātajā labirintā. Slēgtajās ieročos (kreisajā pusē) pavadītā laika procentuālais daudzums tika samazināts un atklātās rokās (labajā pusē) palielinājās bojāto vīriešu skaits. * norāda uz būtisku atšķirību ...
cFos izteiksme

Lai novērtētu, vai endogēnais oreksīns veicina pārošanās izraisītu neironu aktivāciju oreksīna inervētajos smadzeņu reģionos, tika veikta pārošanās izraisītas cFos ekspresijas analīze VTA, NAc kodolā un apvalkā, mPOA un mPFC. Gan bojājumos, gan tēviņos vīriešiem pārošanās ievērojami palielināja cFos visās analizētajās smadzeņu zonās, salīdzinot ar nepārbaudītajām kontrolēm (Tabula 2). Kaitējumi neietekmēja neironu aktivāciju, jo vaigs un bojājumi dzīvnieki neatšķīrās no sākotnējā vai pārošanās izraisītā cFos ekspresijas.

Tabula 2 

Indivēto cFos pārošana viltus, daļējas un bojātas grupas, salīdzinot ar to pašu bojājumu statusa nesaskaņošanas kontroli.

diskusija

Šie pētījumi pētīja endogēno oreksīna lomu dzimumtieksmē un motivācijā vīriešu kārtas žurkām. Tika konstatēts, ka oreksīns nav būtisks seksuālās motivācijas vai snieguma ziņā. Tā vietā, oreksīna neironus aktivizē sievietes stimuls, neatkarīgi no sievietes hormonālā stāvokļa vai vīriešu seksuālās pieredzes. Turklāt endogēnā oreksīna noņemšana ar oreksīna šūnu specifiskiem bojājumiem mazināja trauksmes uzvedību un veicināja seksuālās uzvedības uzsākšanu seksuāli naivos tēviņos. Tādējādi šī pētījuma rezultāti liecina par orexin lomu arousal (de Lecea et al., 2006; Harris un Aston-Jones, 2006; Sakurai, 2007; Boutrel et al., 2009; Furlong un Carrive, 2009; Furlong et al., 2009) un trauksme (Suzuki et al., 2005; Davis et al., 2009; Li et al., 2010), bet neatbalsta orexin kritisko lomu seksuālās motivācijas vai snieguma ziņā.

Šo pētījumu rezultāti vēl vairāk izskaidro endogēnā oreksīna lomu un acīmredzamos iepriekšējo pētījumu kontrastējošos konstatējumus, kuros pētīta oreksīna loma vīriešu seksuālajā uzvedībā, izmantojot farmakoloģiskos līdzekļus. Eksogēnās oreksīna-A iekšējās mPOA infūzijas izraisīja palielinātu seksuālo uzbudinājumu un uzlabotu seksuālo sniegumu, liekot domāt, ka orexin var darboties mPOA, lai palielinātu seksuālās uzvedības motivāciju un sniegumu (Gulia et al., 2003). Tomēr, pretēji, ICV infūzijas ar oreksīna-A vājina seksuālo motivāciju un arousal (Bai et al., 2009), bet oreksīna receptoru antagonists neietekmēja seksuālo uzbudinājumu (Bai et al., 2009), norādot, ka endogēnais oreksīns nevar būt seksuālās motivācijas lomā. Visbeidzot, tika pierādīts, ka ORX1 blokāde ar sistēmiskām injekcijām tikai nedaudz pasliktina kopulācijas darbību (Muschamp et al., 2007). No šiem pretrunīgajiem pētījumiem var izdarīt dažus secinājumus. Pirmkārt, eksogēnā oreksīna-A lietošana var ietekmēt uzvedību, bet ORX1 blokāde nav nozīmīga, kas liecina par nelielu endogēnā oreksīna lomu vīriešu seksuālās uzvedības regulēšanā (Bai et al., 2009). Pašreizējie rezultāti atbalsta šo iespēju. Pašreizējie pētījumi, kuros oreksīna šūnu specifiskie bojājumi ir novērsti ar oreksīnu, liecina, ka endogēnais oreksīns nav būtisks seksuālās motivācijas vai darbības nodrošināšanai, ņemot vērā novērojumus, ko veic Bai et al (2009). Tomēr ir svarīgi atzīmēt, ka oreksīna bojājumu ietekme uz seksuālo motivāciju skrejceļā var būt saistīta ar to, ka dzīvnieki pirms seksuālās motivācijas testēšanas ir guvuši seksuālu pieredzi, tāpēc, iespējams, nebija ietekmes uz skrejceļa testu. vīriešu seksuālo pieredzi. Turpmākie eksperimenti var risināt šo problēmu, pārbaudot orexin bojājumu ietekmi uz seksuālo motivāciju naiviem vīriešiem.

Iespējams, ka divi oreksīna ligandi un divi oreksīna receptoru apakštipi (ORX1 un ORX2; Sakurai et al., 1998) var regulēt seksuālo uzvedību pretējos virzienos. Izmantojot oreksīna šūnu bojājumu paņēmienus, abos oreksīna receptoru apakštipu ligandos (oreksīns-A un B) šajā pētījumā tika novērsti. Abi receptoru apakštipi ir izteikti dažādās smadzeņu zonās (Trivedi et al., 1998; Marcus et al., 2001), un ir pierādīts, ka tie atšķirīgi regulē atmiņas par kokainu meklēšanu (\ tSmith et al., 2009). Iepriekšējie seksuālās uzvedības pētījumi galvenokārt ir vērsti uz orexin-A un ORX1 lomu (skatīt iepriekš minēto diskusiju). Līdz šim pētījumos izmantotais oreksīna receptoru antagonists SB334867 īpaši attiecas uz ORX1, kam ir augsta afinitāte pret oreksīna-A un ievērojami zemāku afinitāti pret oreksīnu-B (Sakurai et al., 1998). Tāpat arī iepriekšējos pētījumos oreksīns-A ir izmantots kā eksogēns oreksīns.Gulia et al., 2003; Bai et al., 2009). Turpmākie pētījumi ir nepieciešami, lai izpētītu orexin-B un ORX2 lomu vīriešu seksuālās uzvedības regulēšanā.

Pašreizējais pētījums pārbaudīja oreksīna ilgtermiņa zaudējumu ietekmi. Muschamp et al. (2007) ierosināja, ka ilgstoša oreksīna samazināšana pēc kastrācijas var izraisīt seksuālās motivācijas un snieguma zudumu. Šī hipotēze bija pretrunā ar pašreizējiem konstatējumiem, jo ​​oreksīna šūnu bojājumi nesamazināja seksuālo motivāciju vai veiktspēju. Iespējams, ka ilgstošais oreksīna zudums pašreizējā pētījumā varēja izraisīt kompensācijas mehānismus, lai gan netika konstatētas izmaiņas pārošanās izraisītā neirālā aktivācijā ķēdē, kas mediē seksuālo uzvedību. Tomēr ir skaidrs, ka samazināts oreksīna vai tā trūkums neierobežo seksuālo uzvedību. Turklāt pašreizējā pētījuma rezultāti neatbalsta orexin nozīmīgo lomu cFos izpausmes izraisīšanā seksuālās uzvedības rezultātā. Ir skaidri pierādīts, ka oreksīns veicina neironu aktivāciju VTA (Korotkova et al., 2003; Borgland et al., 2006; Narita et al., 2006; Vittoz et al., 2008). Tomēr oreksīna šūnu bojājumi neizslēdza pārošanās izraisīto neirālo aktivāciju VTA vai citos ar atalgojumu saistītos smadzeņu reģionos, neskatoties uz oreksīna-imūnreaktīvo šķiedru klātbūtni tuvu vīriešu aktivētiem neironiem. Tādējādi, pārošanās izraisīta neirāla aktivizācija šajos smadzeņu reģionos nešķiet atkarīga no oreksīna iedarbības.

Nedaudz negaidīts pašreizējā pētījuma rezultāts bija oreksīna bojājumu ietekme uz seksuālās uzvedības uzsākšanu seksuāli naivos, bet ne pieredzējušos dzīvniekos. Tika pierādīts, ka tas ir saistīts ar trauksmes uzvedības samazināšanos. Tādēļ oreksīna bojājumu ietekme uz seksuālo motivāciju un sniegumu var būt sekundāra tā ietekmei uz trauksmi un uzbudinājumu. Patiešām, iepriekšējie pētījumi liecina par oreksīna lomu trauksmē, jo oreksīna-A ICV infūzija samazināja laiku EPM atklātajās rokās pelēm (Suzuki et al., 2005). Oreksīna-A infūzija tēviņu tēviņu paraventrikulārajā kodolā samazināja laiku, kas pavadīts atklātā lauka kameras centrā, un samazināta jauna objekta izpēte, norādot, ka oreksīns var būt iesaistīts trauksmes uzvedības veidošanā (Li et al., 2010). Turklāt dominējošiem vīriešu kārtas žurkas, kas uzrāda lielāku risku uz EPM, ir palielinājuši ORX1 mRNS līmeni mPFC (Davis et al., 2009). Ir pierādīts arī, ka oreksīns maina reakciju uz stresu (Ida et al., 1999; Ida et al., 2000), un oreksīna receptoru stimulēšana palielina kortikotropīna atbrīvojošā faktora izdalīšanos (\ tAl-Barazanji et al., 2001; Singareddy et al., 2006), kortikosterons (Ida et al., 2000; Kuru et al., 2000) un adrenokortikotropo hormonu (\ tKuru et al., 2000). Orexīna antagonisti šobrīd tiek veikti klīniskos pētījumos bezmiega ārstēšanai, kas bieži vien ir saistīti ar trauksmes traucējumiem (Sullivan un Neria, 2009), un tiek pieņemts, ka oreksīna antagonisti varētu tikt izmantoti trauksmes traucējumu ārstēšanai.Mathew et al., 2008). Ņemot vērā pieaugošo pierādījumu skaitu par oreksīna lomu trauksmē un uzbudinājumā, šķiet, ka oreksīna bojājumi var veicināt seksuālās uzvedības uzsākšanu naivās tēviņos, samazinot trauksmes reakcijas, kas saistītas ar jauna stimula, ti, sievietes, ieviešanu.

Pēc seksuālas uzbudinājuma un seksuālas uzvedības gan seksuāli naivos, gan pieredzējušos dzīvniekos tika novērota nozīmīga oreksīna neironu aktivizācija gan PFA-DMH, gan LHA, ar 60-80% un 14-33% oreksīna šūnām, kas ekspresē cFos. Ir pierādījumu kopums, kas apstiprina oreksīna neironālo funkciju dichotomiju oreksīna šūnu populācijā, jo PFA-DMH ir kritiski iesaistīts arousal un LHA ir kritiska ar atalgojumu saistītā uzvedībā (Harris et al., 2005; Harris un Aston-Jones, 2006, Aston-Jones, 2009a). Līdz ar to PFA-DMH oreksīna šūnu aktivizēšana ar sieviešu stimulu atbalsta hipotēzi, ka oreksīns tiek aktivizēts un ir būtisks arousal, ieskaitot seksuālo uzbudinājumu naivos un pieredzējušos vīriešos, un trauksmi, kas saistīta ar jauniem sieviešu stimuliem naiviem vīriešiem. Tomēr PFA-DMH šūnas tika aktivētas līdzīgā līmenī neatkarīgi no vīriešu pieredzes un sievietes hormonālā stāvokļa, kas liecināja, ka PFA-DMH šūnas tika aktivizētas vispārējās arousācijas laikā, nevis tieši ar seksuālo uzbudinājumu. Turklāt mūsu pētījumi pilnībā neatbalsta pilnīgi dichomātisku oreksīna šūnu populāciju, jo LHA ​​pēc tam, kad bija pakļauts visiem seksuālās uzbudinājuma un darbības parametriem, bija ievērojama aktivācija neatkarīgi no tā, vai uzvedība bija saistīta ar atlīdzību. Tādējādi pieredzējušiem vīriešiem, kas pakļauti anestēzijai, bija vienāds oreksīna šūnu aktivācijas līmenis LHA, salīdzinot ar pieredzējušiem tēviņiem, kas kopēja ar ejakulāciju. Tomēr tikai pēdējā grupa izveidos nosacītu vietu izvēli pārošanai (Tenk et al., 2009); liecina, ka kopēšana ar ejakulāciju ir izdevīgāka nekā citi pārošanās elementi. Pašreizējā pētījumā netika īpaši pārbaudīta oreksīna loma seksuālā atlīdzībā; tāpēc ir vajadzīgi turpmāki pētījumi, lai risinātu šo jautājumu.

Kopumā šo pētījumu rezultāti liecina, ka oreksīns nav kritisks seksuālās darbības vai motivācijas ziņā. Tā vietā tika pierādīts, ka oreksīna šūnu bojājumi mazina trauksmi, liekot domāt, ka endogēnais oreksīns ir iesaistīts trauksmes palielināšanā. Turklāt oreksīna izņemšana veicināja seksuālas uzvedības ierosināšanu seksuāli naivos tēviņos, kas liecina, ka endogēnais oreksīns var kavēt pārošanās uzsākšanu, iespējams, palielinot trauksmi, reaģējot uz jaunajiem stimuliem, ti, sievietēm. Šie atklājumi vēl vairāk izskaidro neirālo shēmu, kas saistīta ar seksuālo sniegumu un trauksmi, un arvien vairāk literatūras par orexīna lomu arousal un nemiers.

Pateicības

Šo pētījumu atbalstīja valsts veselības institūtu (R01 DA014591), Kanādas Veselības izpētes institūtu (RN 014705) un Kanādas Nacionālo zinātņu un inženierzinātņu pētniecības padome (Discovery Grant (341710)) LMC.

Zemsvītras piezīmes

Izdevēja atruna: Šis ir PDF fails, kurā nav publicēta manuskripta, kas ir pieņemts publicēšanai. Kā pakalpojums mūsu klientiem sniedzam šo rokraksta agrīno versiju. Manuskripts tiks pakļauts kopēšanu, apkopošanu un iegūto pierādījumu pārskatīšanu, pirms tas tiek publicēts tā galīgajā citējamajā formā. Lūdzu, ņemiet vērā, ka ražošanas procesa laikā var rasties kļūdas, kas var ietekmēt saturu, un attiecas uz visiem žurnālam piemērojamiem juridiskajiem atrunas.

Atsauces

  1. Agmo A. Vīriešu žurkas seksuālā uzvedība. Brain Res Brain Res Protoc. 1997: 1: 203 – 209. [PubMed]
  2. Al-Barazanji KA, Wilson S, Baker J, Jessop DS, Harbuz MS. Centrālā oreksīna-A aktivizē hipotalāma-hipofīzes-virsnieru asi un stimulē hipotalāmu kortikotropīna atbrīvojošo faktoru un arginīna vazopresīna neironus apzinātajos žurkām. J Neuroendokrinols. 2001: 13: 421 – 424. [PubMed]
  3. Aston-Jones G, Smith RJ, Moorman DE, Richardson KA. Sānu hipotalāma oreksīna neironu loma atalgojuma apstrādē un atkarībā. Neirofarmakoloģija. 2009a, 56 Suppl 1: 112 – 121. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  4. Aston-Jones G, Smith RJ, Sartor GC, Moorman DE, Massi L, Tahsili-Fahadan P, Richardson KA. Sānu hipotalāma oreksīna / hipokretīna neironi: nozīme atalgojuma meklēšanā un atkarībā. Brain Res. 2009b; 1314: 74 – 90. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  5. Bai YJ, Li YH, Zheng XG, Han J, Yang XY, Sui N. Orexin A mazina bezsamaņas seksuālo motivāciju žurku tēviņiem. Pharmacol Biochem Behav. 2009: 91: 581 – 589. [PubMed]
  6. Bäckberg M, Hervieu G, Wilson S, Meister B. Orexin receptoru-1 (OX-R1) imunoreaktivitāte ķīmiski identificētos hipotalāmu neironos: koncentrēties uz oreksīna mērķiem, kas saistīti ar pārtikas un ūdens uzņemšanu. Eur J. Neurosci. 2002: 15: 315 – 328. [PubMed]
  7. Baldo BA, Daniel RA, Berridge CW, Kelley AE. Oreksīna / hipokretīna un dopamīna-beta-hidroksilāzes imūnreaktīvo šķiedru pārklāšanās ar žurku smadzeņu reģioniem, kas izraisa arousal, motivāciju un stresu. J Comp Neurol. 2003: 464: 220 – 237. [PubMed]
  8. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Seksuāla uzvedība un ar dzimumu saistīti vides norādījumi aktivizē mesolimbisko sistēmu žurku tēviņiem. Neiropsihofarmakoloģija. 2004: 29: 718 – 730. [PubMed]
  9. Benoit SC, Tracy AL, Davis JF, Choi D, Clegg DJ. Oreksigēnu hipotalāmu peptīdu jaunās funkcijas: no gēniem līdz uzvedībai. Uzturs. 2008: 24: 843 – 847. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  10. Borgland SL, Taha SASF, Fields HL, Bonci A. Orexīns A VTA ir būtisks, lai izraisītu sinaptisku plastiskumu un uzvedību attiecībā uz kokaīnu. Neirons. 2006, 49 (4): 589 – 601. [PubMed]
  11. B, Cannella N, de Lecea L. Hipokretīna loma uzvedības un mērķtiecīgas uzvedības vadīšanā. Brain Res. 2009 [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  12. Boutrel B, Kenny PJ, Specio SE, Martin-Fardon R, Markou A, Koob GF, de Lecea L. Loma hipokretīnam stresa izraisītas kokaīna atgūšanas atjaunošanā. Proc Natl Acad Sci US A. 2005, 102: 19168 – 19173. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  13. Broberger C, De Lecea L, Sutcliffe JG, Hokfelt T. Hipocretīna / oreksīna un melanīna koncentrācijas hormoni ekspresējošās šūnas veido atšķirīgas populācijas grauzēju sānu hipotalāmā: saistība ar neiropeptīdu Y un agouti gēnu saistītām proteīnu sistēmām. J Comp Neurol. 1998: 402: 460 – 474. [PubMed]
  14. Carter ME, Borg JS, de Lecea L. Smadzeņu hipokretīni un to receptori: allostatisko uzbudinājumu starpnieki. Curr Opin Pharmacol. 2009: 9: 39 – 45. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  15. Chemelli RM, Willie JT, Sinton CM, Elmquist JK, Scammell T, Lee C, Richardson JA, Williams SC, Xiong Y, Kisanuki Y, Fitch TE, Nakazato M, Hammer RE, Saper CB, Yanagisawa M. : miega regulēšanas molekulārā ģenētika. Šūna. 1999: 98: 437 – 451. [PubMed]
  16. Chen CT, Dun SL, Kwok EH, Dun NJ, Chang JK. Orexīna A līdzīga imūnreaktivitāte žurku smadzenēs. Neurosci Lett. 1999: 260: 161 – 164. [PubMed]
  17. Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. Oreksīna-A loma pārtikas motivācijā, atalgojumā balstītā barošanas uzvedībā un pārtikas izraisīta neironu aktivizācija žurkām. Neirozinātne. 2010: 167: 11 – 20. [PubMed]
  18. Davis JF, Krause EG, Melhorna SJ, Sakai RR, Benoit SC. Dominējošie žurki ir dabiski apdraudēti cilvēki, un viņiem ir lielāka motivācija pārtikas atlīdzībai. Neirozinātne. 2009: 162: 23 – 30. [PubMed]
  19. de Lecea L, Jones BE, Boutrel B, Borgland SL, Nishino S, Bubser M, DiLeone R. Addiction and arousal: alternatīvas hipotalāmu peptīdu lomas. J. Neurosci. 2006, 26 (41): 10372 – 10375. [PubMed]
  20. de Lecea L, Kilduff TS, Peyron C, Gao X, Foye PE, Danielson PE, Fukuhara C, Battenberg EL, Gautvik VT, Bartlett FS, 2nd, Frankel WN, van den Pol AN, Bloom FE, Gautvik KM, Sutcliffe JG. Hipokretīni: hipotalāmu specifiski peptīdi ar neuroeksitatīvām aktivitātēm. Proc Natl Acad Sci US A. 1998, 95: 322 – 327. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  21. Dewsbury DA. Žurku (Rattus norvegicus) kopulējoša uzvedība kā iepriekšējas kopulācijas pieredzes funkcija. Anim Behav. 1969: 17: 217 – 223. [PubMed]
  22. Fadel J, Deutch AY. Oreksīna-dopamīna mijiedarbības anatomiskie substrāti: sānu hipotalāma projekcijas uz vēdera apvalka zonu. Neirozinātne. 2002: 111: 379 – 387. [PubMed]
  23. Frederick-Duus D, Guyton MF, Fadel J. Pārtikas izraisītais kortikālā acetilholīna izdalīšanās pieaugums prasa oreksīna pārraidi. Neirozinātne. 2007: 149: 499 – 507. [PubMed]
  24. Furlong TM, Carrive P. Neirotoksiskie bojājumi, kas vērsti uz perifornālo hipotalāmu, atceļ sirds un asinsvadu un uzvedības reakcijas no nosacītās bailes uz kontekstu, bet ne ierobežojumu. Brain Res. 2007: 1128: 107 – 119. [PubMed]
  25. Furlong TM, Vianna DM, Liu L, Carrive P. Hipocretīns / oreksīns veicina dažu, bet ne visu veidu stresa un uzbudinājuma izpausmi. Eur J Neurosci. 2009: 8: 1603 – 1614. [PubMed]
  26. Gerashchenko D, Kohls MD, Greco M, Waleh NS, Salin-Pascual R, Kilduff TS, Lappi DA, Shiromani PJ. Hipokretīna-2-saporīna bojājumi sānu hipotalāmā rada narkoleptisku līdzīgu miega uzvedību žurkām. J Neurosci. 2001: 21: 7273 – 7283. [PubMed]
  27. Gulia KK, Mallick HN, Kumar VM. Orexin A (hipokretīna-1) pielietojums mediālajā preoptiskajā zonā pastiprina vīriešu seksuālo uzvedību žurkām. Neirozinātne. 2003: 116: 921 – 923. [PubMed]
  28. Hagans, JJ, Leslie, RA, Patel, S, Evans, ML, Wattam, TA, Holmes, S, Benham, CD, Taylor, SG, Routledge, C, Hemmati, P, Munton, RP, Ashmeade, TE, Shah, AS, Hatcher, JP, Hatcher, PD, Jones, DN, Smith, MI , Piper DC, Hunter AJ, Porter RA, Upton N. Orexin A aktivizē locus coeruleus šūnu šaušanu un palielina arousalību žurkām. Proc Natl Acad Sci US A. 1999, 96: 10911 – 10916. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  29. Harris GC, Aston-Jones G. Arousal un atalgojums: dichotomija oreksīna funkcijā. Tendences Neurosci. 2006: 29: 571 – 577. [PubMed]
  30. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Sānu hipotalāma oreksīna neironu loma atalgojuma meklējumos. Daba. 2005, 437 (7058): 556 – 559. [PubMed]
  31. Horvath TL, Peyron C, Diano S, Ivanov A, Aston-Jones G, Kilduff TS, van Den Pol AN. Hipokretīna (oreksīna) aktivācija un sinusiskā inervācija lokus coeruleus noradrenergic sistēmā. J Comp Neurol. 1999: 415: 145 – 159. [PubMed]
  32. Ida T, Nakahara K, Katayama T, Murakami N, Nakazato M. Apetītes stimulējošas neiropeptīda, oreksīna un neiropeptīda Y, sānu cerebroventrikulārās injekcijas ietekme uz dažādām žurku uzvedības aktivitātēm. Brain Res. 1999: 821: 526 – 529. [PubMed]
  33. Ida T, Nakahara K, Murakami T, Hanada R, Nakazato M, Murakami N. Iespējama oreksīna iesaistīšanās stresa reakcijā žurkām. Biochem Biophys Res Commun. 2000: 270: 318 – 323. [PubMed]
  34. Korotkova TM, Sergeeva OA, Eriksson KS, Haas HL, Brown RE. Oreksīnu / hipokretīnu izraisītie ventrālā tegmentālā apgabala dopamīnerģiskie un nondopamīnerģiskie neironi. J Neurosci. 2003, 23 (1): 7 – 11. [PubMed]
  35. Kuru M, Ueta Y, Serino R, Nakazato M, Yamamoto Y, Shibuya I, Yamashita H. Centrāli ievadīts oreksīns / hipokretīns aktivizē HPA asi žurkām. Neiroreport. 2000: 11: 1977 – 1980. [PubMed]
  36. Li Y, Li S, Wei C, Wang H, Sui N, Kirouac GJ. Emocionālās uzvedības izmaiņas, ko rada oreksīna mikroinjekcijas talavusa paraventriculārajā kodolā. Pharmacol Biochem Behav. 2010: 95: 121 – 128. [PubMed]
  37. Lin L, Faraco J, Li R, Kadotani H, Rogers W, Lin X, Qiu X, de Jong PJ, Nishino S, Mignot E. Miega traucējumi suņu narkolepsiju izraisa mutācija hipocretīna (oreksīna) receptoru 2 gēnā. . Šūna. 1999: 98: 365 – 376. [PubMed]
  38. Lopez HH, Olster DH, Ettenberg A. Seksuālā motivācija vīriešu kārtas žurkām: primāro stimulu un kopulācijas pieredzes loma. Horm Behav. 1999: 36: 176 – 185. [PubMed]
  39. Marcus JN, Aschkenasi CJ, Lee CE, Chemelli RM, Saper CB, Yanagisawa M, Elmquist JK. Oreksīna receptoru 1 un 2 diferenciāla ekspresija žurku smadzenēs. J Comp Neurol. 2001: 435: 6 – 25. [PubMed]
  40. Martin G, Fabre V, Siggins GR, de Lecea L. Hipokretīnu mijiedarbība ar neirotransmiteriem kodolā. Regulēšanas panelis. 2002: 104: 111 – 117. [PubMed]
  41. Mathew SJ, Cena RB, Charney DS. Nesenie sasniegumi trauksmes traucējumu neirobioloģijā: ietekme uz jaunām terapijām. Am J Med Genet C Semin Med Genet. 2008; 148C: 89 – 98. [PubMed]
  42. Muschamp JW, Dominguez JM, Sato SM, Shen RY, Hull EM. Hipokretīna (oreksīna) loma vīriešu seksuālajā uzvedībā. J Neurosci. 2007: 27: 2837 – 2845. [PubMed]
  43. Nair SG, Golden SA, Shaham Y. Hipokretīna 1 receptoru antagonista SB 334867 atšķirīgās iedarbības ietekme uz augstu tauku satura pārtikas produktu ievadīšanu un ēdiena meklējuma atjaunošanu žurkām. Br J Pharmacol. 2008: 154: 406 – 416. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  44. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Tieša oreksinergisko sistēmu iesaistīšanās mezolimbiskā dopamīna ceļa aktivācijā un ar to saistītā uzvedība, ko izraisa morfīns. J Neurosci. 2006: 26: 398 – 405. [PubMed]
  45. Nishino S, Ripley B, Overeem S, Lammers GJ, Mignot E. Hipocretīna (oreksīna) deficīts cilvēka narkolepsijas gadījumā. Lancet. 2000: 355: 39 – 40. [PubMed]
  46. Paxinos G, Watson C. Žurku smadzenes stereotaksiskās koordinātās. San Diego, CA: Academic Press; 1998.
  47. Peyron C, Faraco J, Rogers W, Ripley B, Overeem S, Charnay Y, Nevsimalova S, Aldrich M, Reynolds D, Albin R, Li R, Hungs M, Pedrazzoli M, Padigaru M, Kucherlapati M, Fan J, Maki R , Lammers GJ, Bouras C, Kucherlapati R, Nishino S, Mignot E. Mutācija agrīnā narkolepsijas gadījumā un vispārējs hipokretīna peptīdu trūkums cilvēka narkoleptiskajos smadzenēs. Nat Med. 2000: 6: 991 – 997. [PubMed]
  48. Peyron C, Tighe DK, van den Pol AN, de Lecea L, Heller HC, Sutcliffe JG, Kilduff TS. Neironi, kas satur hipokretīna (oreksīna) projektu vairākām neironu sistēmām. J Neurosci. 1998: 18: 9996 – 10015. [PubMed]
  49. Sakurai T. Oreksīnu un oreksīna receptoru loma barošanas uzvedības un enerģijas homeostāzes centrālajā regulēšanā. CNS Neurol Disord narkotiku mērķi. 2006: 5: 313 – 325. [PubMed]
  50. Sakurai T. Oreksīna neirālā ķēde (hipokretīns): miega un modrības saglabāšana. Nat Rev Neurosci. 2007: 8: 171 – 181. [PubMed]
  51. Sakurai T, Amemiya A, Ishii M, Matsuzaki I, Chemelli RM, Tanaka H, ​​Williams SC, Richardson JA, Kozlowski GP, Wilson S, Arch JR, Buckingham RE, Haynes AC, Carr SA, Annans RS, McNulty DE, Liu WS , Terrett JA, Elshourbagy NA, Bergsma DJ, Yanagisawa M. Orexīni un oreksīna receptori: hipotalāmu neiropeptīdu un G proteīnu saistītu receptoru grupa, kas regulē barošanas uzvedību. Šūna. 1998: 92: 573 – 585. [PubMed]
  52. Satoh S, Matsumura H, Fujioka A, Nakajima T, Kanbajashi T, Nishino S, Shigeyoshi Y, Yoneda H. FOS ekspresija oreksīna neironos pēc preoptiskās zonas musmimola perfūzijas. Neiroreport. 2004: 15: 1127 – 1131. [PubMed]
  53. Siegel JM. Narkolepsija: hipokretīnu (oreksīnu) šūnas galvenā loma. 1999: 98: 409 – 412. [PubMed]
  54. Singareddy R, Uhde T, Commissaris R. Hipokretīnu atšķirīgā ietekme uz trokšņa līmeni, salīdzinot ar potenciālu pārsteiguma reakciju. Physiol Behav. 2006: 89: 650 – 655. [PubMed]
  55. Smith RJ, Skatīt RE, Aston-Jones G. Oksekss / hipokretīna signalizācija pie oreksīna 1 receptora regulē cue-izsaukto kokaīna meklēšanu. Eur J Neurosci. 2009: 30: 493 – 503. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  56. Solomons A, De Fanti BA, Martinez JA. Perifēra ghrelin mijiedarbojas ar oreksīna neironiem glikostatiskajā signalizācijā. Regulēšanas panelis. 2007: 144: 17 – 24. [PubMed]
  57. Sullivan GM, Neria Y. Farmakoterapija pēctraumatiskā stresa traucējumā: pierādījumi no randomizētiem kontrolētiem pētījumiem. Curr Opin Investig Narkotikas. 2009: 10: 35 – 45. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  58. Suzuki M, Beuckmann CT, Shikata K, Ogura H, Sawai T. Orexin-A (hipokretīns-1), iespējams, ir iesaistīts trauksmes uzvedības veidošanā. Brain Res. 2005: 1044: 116 – 121. [PubMed]
  59. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Seksuāla atlīdzība žurku tēviņiem: seksuālās pieredzes ietekme uz sasaistīto vietu izvēli, kas saistīta ar ejakulāciju un intromations. Horm Behav. 2009: 55: 93 – 97. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  60. Thannickal TC, Moore RY, Nienhuis R, Ramanathan L, Gulyani S, Aldrich M, Cornford M, Siegel JM. Samazināts hipokretīna neironu skaits cilvēka narkolepijā. Neirons. 2000: 27: 469 – 474. [PubMed]
  61. Thorpe AJ, Cleary JP, Levine AS, Kotz CM. Centrāli ievadītā oreksīna A palielina saldo granulu motivāciju žurkām. Psihofarmakoloģija (Berl) 2005; 182: 75 – 83. [PubMed]
  62. Trivedi P, Yu H, MacNeil DJ, Van der Ploeg LH, Guan XM. Oreksīna receptoru mRNS sadalījums žurku smadzenēs. FEBS Lett. 1998: 438: 71 – 75. [PubMed]
  63. Vittoz NM, Schmeichel B, Berridge CW. Hipocretīns / oreksīns dod priekšroku caudomediālās vēdera tegmentālās zonas dopamīna neironiem. Eur J Neurosci. 2008: 28: 1629 – 1640. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  64. Volgin DV, gulbis J, Kubin L. Viena šūnu RT-PCR gēna ekspresija. disociēti un imūnsistēmiski identificēti centrālie neironi. J. Neurosci metodes. 2004: 136: 229 – 236. [PubMed]