Kesan overexpression ΔFosB pada isyarat opioid dan cannabinoid yang diiktiraf dalam nukleus accumbens (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, MP Cassidy, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

Source

Jabatan Farmakologi dan Toksikologi dan Institut Pengajian Dadah dan Alkohol, Sekolah Perubatan Universiti Virginia Commonwealth, Richmond, VA 23298, Amerika Syarikat.

Abstrak

Faktor transkripsi yang stabil ΔFosB diinduksi dalam accubens nukleus (NAc) oleh pendedahan kronik kepada beberapa ubat penyalahgunaan, dan ekspresi transgenik ΔFosB di striatum meningkatkan sifat ganjaran morfin dan cocaine. Walau bagaimanapun, asas mekanistik untuk pemerhatian ini tidak difahami sepenuhnya. Kami menggunakan model tetikus bitransgenic dengan ekspresi termoden ΔFosB dalam dopamin D (1) reseptor / dynorphin yang mengandungi neuron striat untuk menentukan kesan ungkapan ΔFosB pada isyarat opioid dan cannabinoid di NAc. Hasilnya menunjukkan bahawa aktiviti protein G-protein mu-opioid dan perencatan silikon adenyilil dipertingkatkan dalam NAc tikus yang dinyatakan ΔFosB. Begitu juga, perencatan kappa opioid adenylisl cyclase telah dipertingkatkan dalam ΔFosB yang menyatakan tikus. Sebaliknya, wasnabinoid-mediated signaling tidak berbeza antara tikus overexpressing ΔFosB dan tikus kawalan. Tpenemuan ini menunjukkan bahawa isyarat opioid dan cannabinoid isyarat berbeza dengan modulasi oleh ekspresi ΔFosB, dan menunjukkan bahawa ekspresi ΔFosB dapat menghasilkan beberapa kesannya melalui penambahan mu dan kappa opioid isyarat di NAc.

Kata kunci: G-protein, adenylyl cyclase, striatum
Pergi ke:

1. Pengenalan

Reseptor opioid dan CB cannabinoid1 reseptor (CB1R) adalah sasaran neurobiologi untuk dua kelas dadah yang digunakan secara meluas termasuk morfin, heroin dan opioid preskripsi, dan ganja (Δ9-tetrahydrocannabinol (THC)). Kesan akut dari opioid dan cannabinoid diantara mediator oleh reseptor G-protein yang digabungkan terutamanya Gi / o protein dan menghasilkan tindak balas effector hiliran seperti penghambatan adenylil cyclase (Kanak-kanak, 1991, Childers, et al., 1992, Howlett, et al., 2002). Motor, kesan buruk dan kesan psikoaktif Δ9-THC dihasilkan oleh CB1R (Huestis, et al., 2001, Zimmer, et al., 1999), yang diedarkan secara meluas di dalam otak, dengan tahap tinggi dalam ganglia basal, hippocampus dan cerebellum (Herkenham, et al., 1991). Kesan analgesik dan ganjaran ubat-ubatan opioid yang paling klinikal yang berkaitan dan disalahgunakan terutamanya oleh reseptor mu opioid (MOR)Matthes, et al., 1996), yang diperkayakan dalam sistem limbik dan batang otak (Mansour, et al., 1994). Sistem mesolimbi, yang terdiri daripada unjuran dopaminergik dari kawasan tegar ventral (VTA) kepada nukleus accumbens (NAc), memainkan peranan penting dalam kesan ganjaran opioid dan cannabinoids (Bozarth and Wise, 1984, Vaccarino, et al., 1985, Zangen, et al., 2006), serta ubat penyalahgunaan yang lain (Koob dan Volkow, 2010). Selain itu, sistem opioid dan cannabinoid endogenus terlibat dalam kesan ganjaran pelbagai kelas ubat psikoaktif (Maldonado, et al., 2006, Trigo, et al., 2010). Oleh itu, adalah penting untuk menjelaskan mekanisme opioid dan CB1Isyarat R dikawal selia di NAc.

Persoalan utama dalam bidang penyalahgunaan dadah adalah untuk mengenal pasti protein yang menengahi peralihan dari kesan akut dan jangka panjang ubat psikoaktif. Faktor transkripsi AP-1 ΔFosB sangat menarik kerana ia merupakan produk varian sambatan yang stabil dipotong fosb gen yang terkumpul apabila pendedahan berulang kepada ubat penyalahgunaan atau ganjaran semulajadi (McClung, et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler, et al., 1999). Kami telah mendapati bahawa ΔFosB didorong di dalam otak berikut pendedahan berulang kepada morfin, Δ9-THC, kokain atau etanol, dengan setiap ubat menghasilkan corak serantau ΔFosB yang unik (Perrotti, et al., 2008). Tinjauan yang konsisten merentas dadah adalah bahawa ΔFosB sangat ditimbulkan di striatum, di mana semua empat ubat yang diinduksi ΔFosB dalam teras NAc dan semua kecuali Δ9-THC Terangkan dengan jelas dalam cengkerang NAc dan caudate-putamen.

Kajian farmakologi menunjukkan bahawa pentadbiran bersama dopamin D1 reseptor (D1R) antagonis SCH 23390 menghalang induksi ΔFosB dalam NAc dan caudate-putamen selepas pengambilan kokain atau morfin yang berselang-seli, mencadangkan kepentingan penting D1R-mengekspresikan neuron (Muller dan Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). Kesan induksi ΔFosB terhadap tingkah laku ubatan-ubatan telah disiasat dengan menggunakan bitransgenic tikus yang menyatakan ΔFosB dalam populasi neuronal spesifik NAc dan striatum dorsal (Chen, et al., 1998). Tikus yang menyatakan ΔFosB dalam dynorphin / D1R positif neuron dalam stigat NAc dan dorsal (garis 11A) menunjukkan respons yang berubah kepada ubat-ubatan penderaan, terutamanya kepekaan yang lebih baik terhadap kesan ganjaran kokain atau morfin (Colby, et al., 2003, Kelz, et al., 1999, Zachariou, et al., 2006). Perubahan ini berlaku tanpa adanya perubahan dalam tahap MOR atau pelbagai subunit G-protein. Bagaimanapun, tahap mRNA dynorphin dikurangkan dalam NAc ΔFosB yang menyatakan tikus (Zachariou, et al., 2006), menunjukkan bahawa satu sasaran ΔFosB adalah pengekodan gen peptida opioid endogen. Induksi FosB juga boleh menghasilkan perubahan tingkah laku dengan mengawal isyarat penerima dalam NAc, tetapi kemungkinan ini belum disiasat. Oleh itu, kajian semasa menggunakan model tetikus bitransgenik untuk menentukan sama ada overexpression daripada ΔFosB dalam dynorphin / D1R yang mengandungi neuron striatal mengubah aktiviti G-protein MOR-mediated dan MOR- dan perencatan cyclase adenylil KOR-mediated di NAc. Kesan ΔFosB pada CB1Kegiatan protein G-mediated R juga dinilai kerana Δ9-Perkhidmatan pentadbiran mendorong ΔFosB dalam NAc (Perrotti, et al., 2008) dan sistem endokannabinoid diketahui mengawal litar ganjaran otak (Gardner, 2005, Maldonado, et al., 2006), tetapi kesan ΔFosB pada sistem endokannabinoid belum disiasat.

Pergi ke:

2. Bahan dan Kaedah

2.1. Reagen

[35S] GTPγS (1250 Ci / mmol), [α-32P] ATP (800 Ci / mmol) dan [3H] cAMP (26.4 Ci / mmol) dibeli dari PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, KDNK, KAMP, albumin serum lembu, creatine phosphokinase, papaverine, imidazole dan WIN-55212-2, telah dibeli dari Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPγS telah dibeli daripada Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO disediakan oleh Program Pembekalan Dadah Institut Kebangsaan Penyalahgunaan Dadah (Rockville, MD). Cecair scintillation Econo-1 diperolehi daripada Fisher Scientific (Norcross, GA). Cecair penipisan Ecolite diperolehi daripada ICN (Costa Mesa, CA). Semua bahan kimia lain diperolehi daripada Sigma Aldrich atau Fisher Scientific.

2.2. Tikus

Tikus bitransgenic lelaki berasal dari NSE-tTA (garis A) × TetOp-ΔFosB (garisan 11) dihasilkan seperti yang diterangkan dalam Kelz et al. (Kelz, et al., 1999). Tikus Bitransgenik dikandung dan dibangkitkan pada doxycycline (100 μg dalam air minuman) untuk menyekat ekspresi transgene. Pada usia 8 minggu, doxycycline telah diabaikan dari air untuk separuh daripada tikus untuk membolehkan ekspresi transgene, sementara tikus yang tinggal dikekalkan pada doxycycline untuk menyekat transgene. Otak dikumpulkan 8 minggu kemudian, masa di mana kesan transkrip ΔFosB adalah maksimum (McClung dan Nestler, 2003). Baris tetikus transgenik kedua digunakan di mana Δc-Jun, antagonis negatif dominan c-Jun, dinyatakan dalam D1R / dynorphin dan D2R / enkephalin sel striatum, hippocampus dan korteks parietal (Peakman, et al., 2003). C-Jun dan berkaitan dengan protein keluarga Jun dimeralisasi dengan protein keluarga Fos dan mengikat tapak gen AP sasaran-sasaran untuk mengawal transkripsi. Walau bagaimanapun, pemecahan N-terminus c-Jun (Δc-Jun) menjadikan kompleks secara transkrip tidak aktif dan dapat menghalang pengikatan DNA kompleks AP-1 aktif. Tikus bitransgenik yang berasal dari NSE-tTA (garis A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (garisan E) dihasilkan seperti yang diterangkan dalam Peakman et al. (Peakman, et al., 2003). Tikus Bitransgenik dikandung dan dibangkitkan pada doxycycline (100 μg dalam air minuman) untuk menyekat ekspresi transgene. Pups disapih pada minggu 3, genotip, dan dipisahkan ke dalam kumpulan, dengan separuh dikekalkan pada air yang mengandung doxycycline dan separuh pada air minuman tetap untuk menginduksi ekspresi FLAG-Δc-Jun. Otak dikumpulkan 6 beberapa minggu kemudian, masa di mana tahap maksimum FLAG-Δc-Jun telah diukur (Peakman, et al., 2003). Semua prosedur haiwan dijalankan mengikut Institut Panduan Kesihatan Nasional untuk Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Makmal.

2.3. Penyediaan Membran

Otak disimpan di -80 ° C sehingga hari ujian. Sebelum menguji, setiap otak telah dicairkan, dan NAc dibahagikan kepada ais. Setiap sampel diseragamkan dalam 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4 (penampan membran) dengan pukulan 20 dari homogenizer kaca pada 4 ° C. Homogenat tersebut telah disentrifugasi pada 48,000 × g pada 4 ° C untuk 10 min, resuspended dalam buffer membran, disentrifugasi semula pada 48,000 × g pada 4 ° C untuk 10 min dan resuspended dalam 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (buffer assffer). Tahap protein ditentukan oleh kaedah Bradford (Bradford, 1976) menggunakan albumin serum sapi (BSA) sebagai standard.

2.4. Agonist-Stimulated [35S] GTPγS Binding

Membran telah pra-diinkubasi untuk minit 10 pada 30 ° C dengan adenosin deaminase (3 mU / ml) dalam buffer asser. Membran (5-10 μg protein) kemudian diinkubasi untuk 2 jam di 30 ° C dalam buffer assay yang mengandungi 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [35S] GTPγS, KDNK μM 30 dan adenosine deaminase (3 mU / ml) dengan dan tanpa konsentrasi DAMGO atau WIN55,212-2 yang sesuai. Mengikat spesifik diukur dengan 20 μM GTPγS. Inkubasi itu ditamatkan oleh penapisan melalui penapis gentian kaca GF / B, diikuti dengan mencuci 3 dengan 3 ml ais 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Radioaktiviti terikat ditentukan oleh spektrofotometri pengawalan cecair selepas pengekstrakan semalaman penapis dalam cecair penipisan Econo-1.

2.5. Adenylyl Cyclase Assay

Membran (5-25 μg protein) telah diberi preparasi dengan adenosine deaminase seperti yang diterangkan di atas, kemudian diinkubasi untuk min 15 pada 30 ° C di hadapan atau tidaknya forskolin 1μM, dengan atau tanpa DAMGO, U50,488H atau WIN55,212-2, 50 μM ATP, [α-32P] ATP (1.5 μCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 μM siklik AMP, 50 μM GTP, 0.2 mM papaverine, 5 mM phosphocreatine, 20 unit / ml creatine phosphokinase dan adenosine deaminase / ml) dalam jumlah akhir 3 μl. Di bawah keadaan ini, jumlah [α-32P] cAMP pulih umumnya kurang daripada 1% daripada jumlah ditambah [α-32P] ATP dalam setiap sampel. Reaksi ditamatkan dengan mendidih untuk 3 min dan [32P] Cyclic AMP diasingkan oleh rongga (Dowex dan alumina) kaedah Salomon (Salomon, 1979). [3H] cAMP (10,000 dpm) telah ditambah kepada setiap tiub sebelum kromatografi lajur sebagai piawai dalaman. Radioaktiviti ditentukan oleh spektrofotometri pengawalan cecair (kecekapan 45% untuk 3H) selepas ml 4.5 dari larutan telah dibubarkan dalam cecair scintilasi Ecolite 14.5 ml.

2.6. Analisis data

Melainkan dinyatakan sebaliknya, data dilaporkan sebagai nilai min ± SE eksperimen 4-8 yang berasingan, masing-masing dilakukan dalam tiga kali ganda. Rangsangan bersih [35S] GTPγS mengikat dikira sebagai pengikat terangsang agonis dikurangkan pengikat basal. Aktiviti siklase adenylil yang dirangsang forskolin bersih ditakrifkan sebagai aktiviti yang dirangsang forskolin - aktiviti basal (pmol / mg / min). Perencatan perencat aktiviti siklase adenylil yang dirangsang forskolin ditakrifkan sebagai aktiviti aktiviti yang dirangsang oleh forskolin jika tiada agonis - aktiviti stimulasi forskolin yang bersih dengan kehadiran aktiviti agonis / net untuk aktiviti stimulasi tanpa ketagihan agonis) × 100. Semua analisis lengkung dan statistik dijalankan menggunakan Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Kurva kesan-konsentrasi dianalisis dengan regresi non-linear berulang untuk mendapatkan EC50 dan Emaks nilai-nilai. Kepentingan statistik data kesan tumpuan ditentukan oleh analisis dua hala varians (ANOVA), menggunakan dos agonis dan induksi gen (dihidupkan atau dimatikan) sebagai faktor utama. Kepentingan statik nilai-nilai lengkung (Emaks atau EC50) ditentukan oleh ujian t Pelajar dua ekor yang tidak berpasangan, menggunakan pembetulan Welch atau transformasi akar kuadrat data di mana perlu untuk membetulkan perbezaan yang tidak sama (dikesan oleh ujian-F) di EC50 nilai-nilai.

Pergi ke:

3. Keputusan

3.1. Kesan ekspresi ΔFosB pada pengaktifan G-protein yang diiktiraf oleh opioid dan cannabinoid-mediated

Untuk menentukan sama ada MOR- atau CB1Pengaktifan G-protein R-pengantara telah diubah oleh ekspresi transgenik yang boleh diinduksi dari ΔFosB dalam NAc, yang dirangsang oleh agonis [35S] GTPγS mengikat diperiksa dalam membran terpencil yang disediakan dari rantau ini tikus bitransgenic menyatakan secara terperinci (ΔFosB pada) atau tidak menyatakan (ΔFosB off) ΔFosB transgene. DAMGO analog enkephalin selektif digunakan untuk mengaktifkan MOR dan cannabinoid aminoalkylindole WIN55,212-2 digunakan untuk mengaktifkan CB1R. Ligan ini sebelum ini ditunjukkan sebagai agonis penuh di MOR dan CB1R, masing-masingBreivogel, et al., 1998, Selley, et al., 1997). Ia tidak boleh dilakukan untuk memeriksa aktiviti protein G-mediated GOR kerana isyarat terlalu rendah dalam otak tikus (Childers, et al., 1998). Keputusan menunjukkan rangsangan bergantung tumpuan aktiviti G-protein oleh kedua-dua DAMGO dan WIN55,122-2 dalam NAc dari ΔFosB dan ΔFosB pada tikus (Rajah 1). Untuk aktiviti yang dirangsang DAMGO (Rajah 1A), ANOVA dua hala dari data kesan kepekatan menunjukkan kesan utama yang signifikan dari status ΔFosB (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) dan kepekatan DAMGO (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) tanpa interaksi signifikan (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Analisis regresi tidak linier pada keluk konsentrasi-kesan menunjukkan DAMGO E yang jauh lebih besarmaks nilai dalam ΔFosB pada tikus (Emaks = Rangsangan 73 ± 5.2) berbanding tikus ΔFosB (Emaks = 56 ± 4.1% rangsangan; p <0.05 berbeza dengan ΔFosB pada tikus dengan ujian t Pelajar). DAMGO EC50 nilai tidak berbeza antara ΔFosB pada dan ΔFosB dari tikus (302 ± 72 nM berbanding 212 ± 56 nM, masing-masing, p = 0.346).

Rajah 1 

Kesan ekspresi ΔFosB pada merangsang agonis [35S] GTPγS mengikat di NAc. Membran dari ΔFosB-expressing (ΔFosB on) atau kawalan (ΔFosB off) tikus telah diuji seperti yang diterangkan dalam Kaedah menggunakan kepekatan yang berbeza-beza ...

Berbeza dengan hasil yang diperolehi dengan agonist DAMGO MOR, tidak ada perbezaan yang bergantung pada status ΔFosB dalam pengaktifan G-protein yang diperhatikan dengan agonis kannabinoid WIN55,212-2 (Rajah 1B). ANOVA dua hala dari data kesan kepekatan WIN55,212-2 mendedahkan kesan utama yang signifikan dari kepekatan WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), tetapi bukan status ΔFosB (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) dan tidak ada interaksi (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Begitu juga, tidak ada kesan status ΔFosB pada WIN55,212-2 Emaks nilai-nilai (103 ± 6% berbanding 108 ± 8% rangsangan dalam ΔFosB di atas dan di luar tikus, masing-masing, p = 0.813 oleh ujian t-Pelajar) atau EC50 nilai-nilai (103 ± 20 nM berbanding 170 ± 23 nM dalam tikus ΔFosB dan masing-masing, p = 0.123).

Berdasarkan bentuk lengkung dan fakta bahawa kajian terdahulu kami telah menunjukkan keluk-kesan kesan konsentrasi WIN55,212-2 dalam otak (Breivogel, et al., 1999, Breivogel, et al., 1998), lengkung WIN55,212-2 juga dianalisis menggunakan model dua tapak. Analisis data purata menunjukkan sedikit peningkatan dalam kebaikan sesuai menggunakan model dua tapak (R2 = 0.933 dan 0.914, jumlah kuadrat = 3644 dan 5463 dalam ΔFosB di atas dan di luar tikus) berbanding dengan model tapak tunggal (R2 = 0.891 dan 0.879, jumlah kotak = 6561 dan 6628 dalam tikus pada dan luar ΔFosB). Walau bagaimanapun, tiada perbezaan yang ketara didapati antara ΔFosB di dalam dan di luar tikus sama ada Emaks atau EC50 nilai-nilai laman web potensi tinggi atau rendah (Jadual Tambahan 1), walaupun ada trend ke arah EC yang lebih rendah50 nilai pada tapak potensi tinggi pada tikus dengan ΔFosB pada (EC50tinggi = 28.0 ± 10.6 nM) berbanding dengan yang mempunyai ΔFosB (EC50tinggi = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Selain itu, tiada kesan status ΔFosB pada basal [35S] GTPγS mengikat dalam membran NAc (253 ± 14 berbanding 226 ± 14 fmol / mg dalam ΔFosB di atas dan di luar tikus, p = 0.188). Data-data ini menunjukkan bahawa ekspresi transgenik indukible ΔFosB dalam NAc tikus telah meningkatkan pengaktifan protein G-protein MOR tanpa menjejaskan CB1Aktiviti R-pengantara atau basal G-protein.

3.2. Kesan ΔFosB pada perencatan opioid dan cannabinoid-mediated penghalang adenylyl cyclase

Untuk menilai kesan ungkapan transgenik yang boleh diinduksi oleh ΔFosB mengenai modulasi aktiviti pengelasan hiliran oleh MOR dan CB1R, menghalang aktiviti cyclase adenil perangsang 1 forskolin diperiksa dalam membran NAC. Selain MOR- dan CB1R-mediated inhibit aktiviti adenylil siklase, kesan aktiviti KOR juga diperiksa menggunakan agonis penuh KOR-U50,488 (Zhu, et al., 1997), kerana hasil sebelumnya menunjukkan bahawa mRNA dynorphin adalah sasaran ΔFosB dalam model bitransgenic (Zachariou, et al., 2006). Keputusan menunjukkan bahawa DAMGO, U50,488 dan WIN55,212-2 masing-masing menghasilkan perencatan yang bergantung kepada konsentrasi aktiviti adenylisl siklase dalam kedua-dua ΔFosB dan ΔFosB pada tikus (Rajah 2). Dua hala ANOVA DAMGO data kesan tumpuan (Rajah 2A) mendedahkan kesan utama yang signifikan dari status ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) dan kepekatan DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), tetapi tidak ada interaksi yang signifikan (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). Analisis regresi nonlinear terhadap keluk kepekatan kesan DAMGO menunjukkan DAMGO EC yang jauh lebih rendah50 nilai dalam ΔFosB pada tikus (101 ± 11 nM) berbanding dengan tikus ΔFosB (510 ± 182 nM, p <0.05 oleh ujian-t pelajar). Namun, tidak ada perbezaan yang signifikan dalam DAMGO Emaks nilai-nilai (20.9 ± 1.26% berbanding 19.8 ± 1.27% inhibit dalam ΔFosB di atas dan di luar tikus, masing-masing, p = 0.534).

Rajah 2 

Kesan ekspresi ΔFosB pada perencatan aktiviti adenylisl kitaran di NAc. Membran dari ΔFosB-expressing (ΔFosB on) atau kawalan (ΔFosB off) tikus telah diuji seperti yang dijelaskan dalam Kaedah-kaedah di hadapan 1 μM ...

Inhibisi adenylil cyclase yang dikendalikan KOR juga berbeza-beza sebagai fungsi ekspresi transgenik yang boleh dugaan ΔFosB (Rajah 2B). Data kesan kepekatan ANOVA dua arah U50,488 menunjukkan kesan utama yang signifikan dari status ΔFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) dan kepekatan U50,488 (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , tanpa interaksi yang signifikan (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Analisis regresi nonlinear pada keluk kepekatan-kesan menunjukkan U50,488 E yang lebih besarmaks nilai dalam ΔFosB pada tikus (18.3 ± 1.14% penghambatan) berbanding dengan tikus ΔFosB (12.5 ± 2.03% perencatan; p <0.05 berbeza dengan ΔFosB pada ujian t Pelajar), tanpa perbezaan yang signifikan dalam U50,488 EC50 nilai-nilai (310 ± 172 nM berbanding 225 ± 48 nM dalam tikus ΔFosB dan masing-masing, p = 0.324).

Berbeza dengan kesan yang diperhatikan dengan MOR dan KOR, tidak terdapat kesan yang signifikan dari ekspresi ΔFosB transgenik yang boleh diinduksi pada penghambatan adenylil siklase oleh agonis cannabinoid WIN55212-2 (Rajah 2C). Data kesan ANOVA dua hala WIN55,212-2 menunjukkan kesan kepekatan ubat yang signifikan (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), tetapi bukan status ΔFosB (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) dan tidak ada interaksi yang signifikan (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Tambahan pula, tidak ada kesan status ΔFosB pada aktiviti siklase adenylyl yang dirangsang forskolin atau forskolin sekiranya tiada agonis. Aktiviti basil adenylyl basal adalah 491 ± 35 pmol / mg / min pada ΔFosB pada tikus berbanding 546 ± 44 pada tikus ΔFosB (p = 0.346 oleh ujian-t Pelajar). Begitu juga, aktiviti adenylyl cyclase dengan kehadiran 1 µM forskolin adalah 2244 ± 163 pmol / mg / min dalam ΔFosB pada tikus berbanding 2372 ± 138 pmol / mg / min pada ΔFosB pada tikus (p = 0.555).

3.3. Kesan ΔcJun pada perencatan opioid dan cannabinoid-mediated penghalang adenylyl cyclase

Kerana ungkapan ekspresi transgenik induksi, ΔFosB meningkatkan transduksi isyarat perencatan dari MOR dan KOR kepada adenylisl siklase dalam NAc, adalah kepentingan untuk menentukan sama ada perencat negatif yang dominan transkripsi-mediated ΔFosB akan memodulasi isyarat reseptor opioid secara bertentangan. Untuk menangani soalan ini, perencatan aktiviti siklase adenylil yang dirangsang forskolin oleh DAMGO dan U50,488 telah diperiksa dalam membran yang disediakan dari NAc tikus bitransgenic yang menyatakan ΔcJun secara kondisional. Hasilnya tidak menunjukkan kesan yang ketara terhadap ekspresi ΔcJun terhadap perencatan aktiviti siklase adenylis dengan MOR atau KOR (Rajah 3). Lengkung kesan kepekatan ANOVA dua arah DAMGO menunjukkan kesan utama kepekatan DAMGO yang signifikan (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), tetapi bukan status ΔcJun (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) dan tidak ada interaksi yang signifikan (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Begitu juga, tidak ada perbezaan yang signifikan dalam Emaks atau EC50 nilai antara tikus dengan ΔcJun pada (Emaks = 23.6 ± 2.6%; EC50 = 304 ± 43 nM) atau ΔcJun off (Emaks = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC50 = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Hasil yang serupa dilihat dengan U50,488, sehingga ANOVA dua arah dari keluk kepekatan-konsentrasi menunjukkan kesan kepekatan yang signifikan (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), tetapi bukan status ΔcJun (p = 0.127) , F = 2.391, df = 1) dan tidak ada interaksi yang signifikan (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Begitu juga, tidak ada perbezaan yang signifikan dalam Emaks atau EC50 nilai antara tikus dengan ΔcJun pada (Emaks = 14.8 ± 2.9%; EC50 = 211 ± 81 nM) atau matikan (Emaks = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC50 = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Rajah 3 

Kesan ekspresi ΔcJun terhadap perencatan aktiviti adenylisl kitaran di NAc. Membran dari ΔcJun-expressing (ΔcJun on) atau kawalan (ΔcJun off) tikus diinkubasi dengan kehadiran DAMGO (A), U50,488H (B) atau WIN55,212-2 ...

Ekspresi ΔcJun juga tidak banyak mempengaruhi perencatan adenylyl cyclase di NAc oleh agonis kanabinoid. ANOVA dua hala dari keluk kesan kepekatan WIN55,212-2 menunjukkan kesan utama yang signifikan kepekatan WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), tetapi bukan genotip (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) dan tidak ada interaksi yang signifikan (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Begitu juga, tidak ada perbezaan yang signifikan dalam WIN55,212-2 Emaks nilai-nilai (13.0 ± 2.3% dan 13.6 ± 0.9% inhibit dalam ΔcJun pada lawan tikus, masing-masing, p = 0.821) dan atau EC50 nilai (208 ± 120 nM dan 417 ± 130 nM dalam ΔcJun pada lawan tikus, masing-masing, p = 0.270). Oleh itu, walaupun ada kecenderungan sedikit ke arah penurunan potensi WIN55,212-2 pada tikus yang menyatakan ΔcJun, transgene tidak mengubah secara signifikan perencatan cannabinoid adenylyl cyclase. Selain itu, tidak terdapat kesan status ΔcJun pada aktiviti basil adenylil basal atau forskolin yang dirangsang. Aktiviti basil adenylil basil adalah 1095 ± 71 pmol / mg / min dan masing-masing 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) pada tikus dengan ΔcJun. Aktiviti cyclase adenylil yang dirangsang oleh fornolin 1 μM adalah 4185 ± 293 pmol / mg / min berbanding 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) pada tikus dengan ΔcJun atau mematikan.

3.4. Perbincangan

Hasil kajian ini menunjukkan peningkatan pengaktifan G-protein MOR yang dipertingkatkan dan penghambatan adenylisl siklase dalam NAc tikus dengan ekspresi transgenik yang boleh diindikasikan ΔFosB dalam dynorphin / D1R mengandungi neuron. Perencatan kort yang dihalang oleh KOR aktiviti adenylisl cyclase juga dipertingkatkan dalam NAc ΔFosB yang menyatakan tikus, menunjukkan bahawa ΔFosB mengawal sistem opioid endogen dalam NAc. The DAMGO Emaks nilai lebih besar untuk dirangsang MOR [35S] GTPγS mengikat, dan ECnya50 nilai lebih rendah untuk penghambatan adenylisl siklase, dalam tikus yang lebih tinggi ΔFosB berbanding tikus kawalan. Penemuan ini mencadangkan kemungkinan reseptor rizab untuk modulator effector tetapi tidak pengaktifan protein G di bawah keadaan assay diperiksa. Penemuan bahawa perencatan maksima adenylisl siklase oleh agonis KOR terjejas oleh ekspresi Δ FosB mencadangkan rizab penerima reseptor rendah untuk tindak balas KOR-mediated, selaras dengan tahap rendah tapak KOR mengikat di otak tikus (Unterwald, et al., 1991). Sebaliknya, CB1Kegiatan protein G-mediated dan penghambatan adenylil siklase tidak dipengaruhi oleh ekspresi ΔFosB, menunjukkan bahawa sistem opioid dan cannabinoid berbeza dalam tindak balas mereka terhadap ΔFosB dalam neuron NAc ini.

Kesan ΔFosB pada isyarat-mediated mediated reseptor opioid adalah konsisten dengan laporan terdahulu kami bahawa ekspresi ΔFosB dalam striatum mengubah kesan akut dan kronik morfin (Zachariou, et al., 2006). Satu penemuan kajian itu ialah tikus dengan ungkapan transgenik ΔFosB dalam dynorphin / D1R saraf striatal lebih sensitif kepada morfin di tempat penyaman daripada kawalan. Tambahan pula, kesan ini ditiru oleh ekspresi ΔFosB yang disederhanakan oleh suntikan spesifik tapak ke NAc. Pengamatan ini selaras dengan keputusan semasa yang menunjukkan isyarat MOR yang dipertingkatkan di NAc.

Kami sebelum ini mengenal pasti pengekodan gen dynorphin sebagai sasaran ΔFosB, dan mencadangkan bahawa dikurangkan dynorphin akan selaras dengan ciri-ciri ganjaran morfin yang lebih baik dalam tikus bitransgenic ΔFosB (Zachariou, et al., 2006). Keputusan sekarang menunjukkan bahawa perencatan KOR-mediated adenylyl cyclase dalam NAc dipertingkatkan dalam ΔFosB mengekspresikan tikus, yang mungkin mencerminkan peningkatan pampasan dalam kepekaan KOR berikutan penurunan dynorphin. Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa KOR dikendalikan di kawasan otak tertentu prodynorphin tikus kalah mati, termasuk NAc (Clarke, et al., 2003).

Berbeza dengan ΔFosB, ekspresi transgenik indukible dari ΔcJun, mutan negatif yang dominan negatif dari ΔFosB mengikat pasangan cJun, tidak mengubah perencat adenylisl cyclase oleh MOR atau agonis KOR. Keputusan ini menunjukkan bahawa tahap bas ekspresi ΔFosB, yang agak rendah, tidak memainkan peranan penting dalam mengekalkan isyarat reseptor opioid pada tahap transduksi isyarat di NAc. Hakikat bahawa kesan penghargaan berkhasiat morfin telah menurun dengan ekspresi ΔcJun dalam kajian terdahulu kami (Zachariou, et al., 2006) mencadangkan sama ada induksi morfin ΔFosB semasa prosedur penyaman adalah penting dalam mengawal tindak balas tingkah laku terhadap ubat atau kesan transkrip dari ΔFosB selain daripada yang memberi kesan kepada isyarat proksimal oleh reseptor opioid mungkin mempengaruhi ganjaran opioid. Dalam apa jua keadaan, hasil kajian ini menunjukkan dengan jelas bahawa, apabila ungkapan ΔFosB dinaikkan di atas paras basal dalam dynorphin / D statik1R-mengekspresikan neuron, terdapat peningkatan yang kukuh dalam gandingan MOR dan KOR untuk menghalang adenylisl kitaran di NAc.

Mekanisme-mekanisme yang mana isyarat MOR- dan KOR-mediated dipertingkatkan oleh ekspresi overexpression ΔFosB adalah tidak jelas, tetapi kami telah menunjukkan sebelumnya bahawa tahap MOR, dinilai oleh [3H] naloxone mengikat, tidak berbeza dalam NAc ΔFosB pada lawan tikus (Zachariou, et al., 2006). Kajian yang sama mendapati bahawa GαiTahap protein 1 dan 2 tidak terjejas di rantau ini oleh ekspresi ΔFosB. Walau bagaimanapun, analisis pelbagai ekspresi gen gen menunjukkan bahawa Gαo mRNA dikawal selia dalam NAc ΔFosB pada tikus (McClung dan Nestler, 2003). Ia akan menjadi kepentingan dalam kajian masa depan untuk mengkaji secara menyeluruh kesan ekspresi ΔFosB transgenik pada ekspresi subunit G-protein di peringkat protein serta pada ekspresi banyak protein modulasi G-protein.

Adalah menarik bahawa ekspresi ΔFosB tidak meningkatkan CB1Isyarat R-pengantara dalam NAc. Ada kemungkinan perubahan di CB1Isyarat R berlaku dalam populasi neuron diskret yang dikaburkan dalam persediaan NAC. Sebagai contoh, pentadbiran Δ9- THC secara signifikan mendorong ΔFosB dalam inti, tetapi bukan shell, dari NAc (Perrotti, et al., 2008). SayaNamun, ia telah menunjukkan bahawa cabaran dengan Δ9-THC berikut pentadbiran berulang Δ9-THC meningkatkan pelepasan dopamin dalam inti NAc, tetapi penurunan pelepasan dalam cangkang (Cadoni, et al., 2008). Ia juga penting untuk ambil perhatian bahawa tikus bitransgenic 11A menyatakan ΔFosB hanya dalam dynorphin / D1R positif neuron berduri sederhana striatum, tetapi CB1R dinyatakan dalam dynorphin / D1R dan enkephalin / D2Neuron stromatal positif (Hohmann dan Herkenham, 2000), serta pada terminal aorten kortikal (Robbe, et al., 2001). Ungkapan pengatur negatif yang dominan dari Transkripsi-mediasi ΔFosB, ΔcJun, juga tidak mempunyai pengaruh signifikan pada isnabinoid signaling receptor, walaupun ΔcJun secara induktif dinyatakan dalam kedua-d1 dan D2- mengandungi populasi neuron berduri sederhana dalam tikus ini (Peakman, et al., 2003). Walau bagaimanapun, mungkin bahawa ungkapan ΔFosB basal cukup rendah bahawa ΔcJun tidak akan memberi kesan kepada isyarat reseptor, seperti yang dicadangkan oleh keputusan dengan MOR dan KOR. Ia juga mungkin CB1Isyarat R secara sederhana dipertingkatkan oleh ekspresi ΔFosB asas, dengan demikian menambah ekspresi ΔFosB yang lebih tinggi atau menyekat tindakannya dengan ΔcJun hanya mempunyai sedikit kesan yang tidak mencapai tahap kepentingan statistik. Sokongan tidak langsung untuk tafsiran ini dapat dilihat dengan membandingkan WIN55,212-2 EC50 nilai antara tikus yang menyatakan ΔcJun berbanding ΔFosB. Nisbah WIN55,212-2 EC50 nilai untuk perencatan siklase adenylisl pada tikus dengan ekspresi teraruh dari ΔcJun ke ECnya50 Nilai untuk pengaktifan G-protein pada tikus dengan ekspresi teraruh dari ΔFosB adalah 4.0, sedangkan nisbah yang sama pada tikus tanpa induksi sama ada transgene adalah 1.2.

Sebagai alternatif, cannabinoids mungkin mendorong ekspresi ΔFosB tanpa sebarang kesan langsung ke atas CB1R isyarat. Dalam senario ini, cannabinoids dapat memodulasi tindak balas terhadap kesan psikoaktif dari ubat-ubatan lain melalui regulasi transkripasi ΔFoB. Sayan fakta, pentadbiran Δ9-THC menghasilkan penyebaran silang kepada opioid dan amfetamin (Cadoni, et al., 2001, Lamarque, et al., 2001), selaras dengan hipotesis ini. Selain itu, pentadbiran agonis cannabinoid yang berulang CP55,940 dilaporkan meningkatkan pengaktifan protein G-mediated MOR di NAc, sama seperti tikus yang secara tidak sengaja menyatakan ΔFosB dalam kajian ini (Vigano, et al., 2005). Kesan ungkapan ΔFosB pada Δ9Tingkah laku-mediasi THC belum dinilai, tetapi hasil sekarang tidak menghalang interaksi. Keputusan ini dan kajian terdahulu kami (Zachariou, et al., 2006) menunjukkan ΔFosB-disebabkan perubahan dalam MOR dan KOR / dynorphin di striatum. Kesan ganjaran dari Δ9-THC, seperti yang diukur oleh keutamaan tempat, dimansuhkan dalam tikus nilam MOR, sedangkan penghapusan KOR dilemahkan Δ9-Tindakan tempat-tempat teruk dan terungkap Δ9Keutamaan tempat-THC (Ghozland, et al., 2002). Begitu juga penghindaran tempat yang dikondisikan kepada Δ9-THC tidak hadir dalam knockout pro-dynorphin berbanding tikus jenis liar (Zimmer, et al., 2001). Data ini menunjukkan bahawa Δ9-THC mungkin lebih bermanfaat selepas induksi ΔFosB dan petunjuk induksi MOR yang terhasil dengan pengurangan ekspresi dynorphin.

Dalam summary, hasil kajian ini menunjukkan ungkapan ΔFosB dalam D1R / dynorphin neuron striatal positif dipertingkatkan isyarat MOR- dan KOR-mediated pada tahap protein G-perencatan pengaktifan aktiviti adenylisl kitaran di NAc. Temuan ini selaras dengan kajian yang telah menunjukkan peranan untuk sistem opioid endogen dalam ganjaran (Trigo, et al., 2010), dan menyediakan satu mekanisme yang berpotensi untuk kesan-kesan yang dimediasi oleh FosB pada ganjaran. Sebaliknya, CB1Isyarat R-pengantara dalam NAc tidak terjejas dengan ketara oleh ekspresi ΔFosB striatal di bawah syarat-syarat yang diperiksa, walaupun kajian lebih lanjut adalah perlu untuk menentukan kesan induksi ΔFosB pada sistem endokannabinoid.

Penyelidikan Sorotan

  • Isyarat MOR dipertingkatkan dalam nukleus akustik tikus yang menyatakan ΔFosB
  • Perencatan kOR adenylisl cyclase juga dipertingkatkan dalam tikus yang menyatakan ΔFosB
  • Ungkapan ΔFosB tidak mengubah CB1R memberi isyarat dalam nukleus accumbens
Pergi ke:

Bahan Tambahan

Pergi ke:

Penghargaan

Penulis mengucapkan terima kasih kepada Hengjun He, Jordan Cox dan Aaron Tomarchio untuk bantuan teknikal dengan [35S] GTPγS mengikat assays. Kajian ini disokong oleh USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) dan P01 DA08227 (EJN).

Pergi ke:

Nota kaki

Penafian Penerbit: Ini adalah fail PDF bagi manuskrip yang tidak diedit yang telah diterima untuk penerbitan. Sebagai perkhidmatan kepada pelanggan kami, kami menyediakan versi awal manuskrip ini. Manuskrip akan menjalani penyalinan, menaip, dan mengkaji semula bukti yang dihasilkan sebelum ia diterbitkan dalam bentuk yang boleh dihukum akhir. Harap maklum bahawa semasa kesalahan proses produksi dapat ditemukan yang dapat mempengaruhi konten, dan semua penafian hukum yang berlaku untuk pertain jurnal.

Pergi ke:

Rujukan

  • Bozarth MA, Bijaksana RA. Bidang reseptor anatomi yang berbeza merangsang ganjaran dan pergantungan fizikal. Sains. 1984;224: 516-517. [PubMed]
  • Bradford MM. Kaedah yang pesat dan sensitif untuk kuantifikasi kuantiti mikrogram protein yang menggunakan prinsip pengikat protein-dye. Dubur. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
  • Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Delta kronik9Rawatan -tetrahydrocannabinol menghasilkan kehilangan nutrien-protein G-protein yang boleh diaktifkan secara berkala di otak. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
  • Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Cannabinoid reseptor keberkesanan agonis untuk merangsang [35S] GTPγS mengikat ke membran cerebellar tikus berkorelasi dengan penurunan agonis yang disebabkan oleh afiniti KDNK. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
  • Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Pemekaan kelakuan selepas pendedahan berulang kepada Delta 9-tetrahydrocannabinol dan penyebaran silang dengan morfin. Psychopharmacology (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
  • Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Pemekaan perilaku kepada delta 9-tetrahydrocannabinol dan penyebaran silang dengan morfin: perubahan kebiasaan pada cacing accumbal dan penghantaran dopamin teras. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, PE Shockett, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Haiwan transgenik dengan ekspresi gen yang disasarkan dan dijangka di dalam otak. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
  • Childers SR. Pesakit kedua yang menerima reseptor Opioid. Sains hidup. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
  • Kanak-kanak SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid dan reseptor cannabinoid menghalang adenylisl siklase di otak. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
  • Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Rangsangan reseptor kappa opioid [35S] GTPγS mengikat otak babi guinea: Kekurangan bukti untuk kappa2- pengaktifan protein G-g. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
  • Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Wilayah regulasi terpilih pengawalan mikro, delta dan kappa-opioid tetapi bukan reseptor 1 reseptor seperti reseptor opioid dalam otak tikus enkephalin dan dynorphin. Neurosains. 2003;122: 479-489. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Overprestasi jenis spesifik sel Striatal terhadap DeltaFosB meningkatkan insentif untuk kokain. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
  • Gardner EL. Sistem isyarat endokannabinoid dan ganjaran otak: penekanan pada dopamin. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
  • Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Kesan motivasi dari cannabinoids diantara mediator mu-opioid dan kappa-opioid. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
  • Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Pencirian dan lokalisasi reseptor cannabinoid pada otak tikus: kajian in vitro autoradiographic kuantitatif. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
  • Hohmann AG, Herkenham M. Penyetempatan reseptor mRNA cannabinoid CB (1) dalam subpopulations neuronal tikus striatum: kajian dua hibrid dalam kajian hibrid situ. Sinaps. 2000;37: 71-80. [PubMed]
  • Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Kesatuan Antarabangsa Farmakologi. XXVII. Klasifikasi reseptor cannabinoid. Kajian Farmakologi. 2002;54: 161-202.
  • Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Sekatan kesan ganja merokok oleh antagonis reseptor cannabinoid CB1-selektif SR141716. Arch. Gen. Psikiatri. 2001;58: 322-328. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Nestler EJ. Ekspresi faktor transkripsi deltaFosB di otak mengawal kepekaan terhadap kokain. Alam semula jadi. 1999;401: 272-276. [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND. Neurocircuitry ketagihan. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  • Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Rawatan kronik dengan Delta (9) -tetrahydrocannabinol meningkatkan tindak balas locomotor kepada amphetamine dan heroin. Implikasi untuk kelemahan ketagihan dadah. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
  • Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Penglibatan sistem endokannabinoid dalam penagihan dadah. Trend Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. Mu-Opioid mRNA reseptor ekspresi dalam tikus CNS: perbandingan kepada mu-reseptor mengikat. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
  • Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Kehilangan analgesia akibat morfin, kesan ganjaran dan gejala pengeluaran pada tikus yang tidak mempunyai gen reseptor μ-opioid. Alam semula jadi. 1996;383: 819-823. [PubMed]
  • McClung CA, Nestler EJ. Peraturan ekspresi gen dan ganjaran kokain oleh CREB dan DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: suis molekular untuk penyesuaian jangka panjang di dalam otak. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Muller DL, Unterwald EM. Reseptor dopamine D1 memodulasi induksi deltaFosB dalam striatum tikus selepas pentadbiran morfin yang terputus-putus. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
  • Nestler EJ. Tinjauan. Mekanisme penagihan ketagihan: peranan DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: pengantara molekular untuk kepekaan neural dan tingkah laku jangka panjang. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
  • Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Kajian farmakologi terhadap peraturan induksi antigen yang berkaitan dengan FOS kronik oleh kokain di striatum dan nukleus accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, , Schaeffer E. Abah, ekspresi spesifik rantau otak mutan negatif dominan c-Jun dalam tikus transgenik mengurangkan kepekaan terhadap kokain. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, DW Self, Nestler EJ. Corak berbeza induksi DeltaFosB di otak oleh dadah penyalahgunaan. Sinaps. 2008;62: 358-369. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  • Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Penyetempatan dan mekanisme tindakan reseptor cannabinoid pada sinaps glutamatergik nukleus akusatif. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
  • Salomon Y. Adenylate cyclase assay. Adv. Resin Nukleotida Cyclic Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
  • Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid reseptor-dirangsang [35S] GTPγS mengikat tikus tikus dan garis sel yang berbudaya: Mekanisme transduksi isyarat yang mendasari keberkesanan agonis. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
  • Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Sistem opioid endogen: substrat yang biasa dalam ketagihan dadah. Ubat Alkohol. 2010;108: 183-194. [PubMed]
  • Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Penyetempatan neuroanatomis dari reseptor opioid κ1 dan κ2 dalam tikus dan otak babi guinea. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Sekatan nukleus menimbulkan reseptor serasi yang membekalkan ganjaran heroin intravena pada tikus. Psychopharmacology (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
  • Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Mekanisme molekular yang terlibat dalam interaksi asimetri antara sistem cannabinoid dan opioid. Psychopharmacology (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
  • Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Peranan penting untuk DeltaFosB dalam nukleus akrab dalam tindakan morfin. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
  • Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Bijaksana RA. Dua tapak otak untuk ganjaran cannabinoid. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
  • Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Pengaktifan reseptor kappa opioid manusia yang diklonkan oleh agonis meningkatkan [35S] GTPγS mengikat kepada membran: penentuan potensi dan ligan ligaya. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
  • Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Tidak ada delta -9-tetrahydrocannabinol kesan dysphoric dalam tikus kekurangan dynorphin. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
  • Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Peningkatan kematian, hipokaktiviti, dan hipoalgesia dalam cannabinoid CB1 reseptor tikus kalah mati. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999;96: 5780-5785. [Artikel percuma PMC] [PubMed]