Overexpression DeltaFosB dalam nukleus accumbens meniru fenotip ketagihan pelindung, tetapi bukan fenotip kemurungan pelindung pengayaan alam sekitar (2014)

Front Behav Neurosci. 2014; 8: 297.

Diterbitkan dalam talian Ogos 29, 2014. doi:  10.3389 / fnbeh.2014.00297

PMCID: PMC4148937

Abstrak

Pengayaan alam sekitar menghasilkan fenotip ketagihan dan ketahanan pada tikus. ΔFosB adalah faktor transkripsi yang mengawal ganjaran di otak dan disebabkan oleh tekanan psikologi serta dadah penyalahgunaan. Walau bagaimanapun, peranan yang dimainkan oleh ΔFosB dalam fenotip pelindung pengayaan alam sekitar tidak dipelajari dengan baik. Di sini, kami menunjukkan bahawa ΔFosB dikawal secara berbeza dalam tikus yang dipelihara dalam keadaan terisolasi (IC) berbanding dengan keadaan yang diperkaya (EC) sebagai tindak balas kepada tekanan pengekalan atau kokain.

Stres kronik atau rawatan kokain kronik masing-masing meningkatkan paras protein ΔFosB di dalam tikus IC (tikus IC), tetapi bukan tikus EC disebabkan oleh pengumpulan basal yang telah meningkat ΔFosB yang dilihat di bawah keadaan EC.

Overexpression-mediated ΔFosB dalam shell NAc tikus yang ditempatkan pasangan (iaitu, bebas daripada pengayaan / pengasingan persekitaran) meningkatkan pengendali bertindak balas terhadap sukrosa ketika dimotivasi oleh kelaparan, tetapi berkurang menanggapi dalam keadaan kenyang. Lebih-lebih lagi, overexpression ΔFosB mengurangkan pengambilan diri kokain, meningkatkan kepupusan mencari kokain, dan mengurangkan pengambilan kokain yang disebabkan oleh pengambilan diri kokain secara intravena; semua penemuan tingkah laku selaras dengan fenotip pengayaan.

Sebaliknya, bagaimanapun, overexpression ØFB tidak mengubah tindak balas tikus yang ditempatkan pasangan dalam beberapa ujian kecemasan dan tingkah laku yang berkaitan dengan kemurungan.

Oleh itu, ΔFosB dalam Cengkerang NAc meniru fenotip ketagihan pelindung, tetapi bukan fenotip kemurungan pelindung pengayaan alam sekitar.

Kata kunci: [kenaikan]FosB, pengayaan persekitaran, kemurungan, pentadbiran diri cocaine, virus berkaitan adeno (AAV), overexpression

Pengenalan

Pengalaman hidup, terutama pada peringkat awal kehidupan, mempunyai kesan yang mendalam terhadap tingkah laku haiwan sepanjang hayat. Alam sekitar memainkan peranan penting dalam kerentanan dan penentangan terhadap gangguan mental pada manusia (Elisei et al., 2013; Akdeniz et al., 2014; Kato dan Iwamoto, 2014; van Winkel et al., 2014). Dalam model tikus, hidup dalam persekitaran yang bertenaga daripada menyapu melalui dewasa muda dilaporkan menghasilkan penularan ketahanan dan fenotip kemurungan (Green et al., 2002, 2003, 2010; Laviola et al., 2008; Solinas et al., 2008, 2009; El Rawas et al., 2009; Thiel et al., 2009, 2010). Dalam paradigma ini, haiwan ditugaskan untuk sama ada keadaan yang diperkaya (EC) di mana haiwan adalah kumpulan yang ditempatkan dan mempunyai akses harian ke objek novel, atau keadaan terpencil (IC) di mana haiwan tunggal ditempatkan tanpa sesuatu yang baru atau hubungan sosial. Haiwan yang dibesarkan dalam keadaan yang diperkaya, yang termasuk hubungan sosial, senaman dan kebaharuan, mempamerkan kurang pengukuhan dan mencari kokain atau amphetamine dalam paradigma pengambilan diri ubat intravena (Green et al., 2002, 2010). Sebagai tambahan kepada fenotip ketagihan, pendedahan seperti pengayaan menghasilkan kesan seperti antidepresan dalam model kemurungan haiwan (Green et al., 2010; Jha et al., 2011). Ekspresi haiwan yang diperkaya secara spesifik menurunkan tingkah laku seperti anhedonia dalam ujian keutamaan sukrosa, kurang menarik sosial dalam ujian interaksi sosial, dan kurang immobility dalam ujian berenang paksa (FST). Walaupun kesan pengayaan anti-kecanduan dan antidepresan seperti pengayaan, mekanisme yang mendasari fenotip pelindung pengkayaan alam sekitar ini masih belum difahami sepenuhnya, walaupun penyelidikan terdahulu kami telah melibatkan peranan untuk menurunkan aktivitas faktor transkripsi, CREB, dalam nukleus accumbens (NAc ) dalam mengantara beberapa kesan pengayaan persekitaran (Green et al., 2010; Larson et al., 2011). Oleh itu, matlamat kajian pembezaan berbeza ini adalah menggunakan pendekatan sains asas untuk mengenal pasti mekanisme molekul daya tahan yang kemudiannya dapat diterjemahkan ke klinik. Pendekatan ini adalah bersamaan persekitaran dengan strategi genetik yang mantap seperti pembiakan selektif (McBride et al., 2014).

Di sini kita menumpukan perhatian kepada faktor transkripsi yang lain, ΔFosB, yang dipicu secara jelas dalam NAc oleh beberapa bentuk tekanan atau hampir semua ubat penyalahgunaan, termasuk kokain, morfin, alkohol, nikotin, dan amphetamine (Hope et al., 1992; Kelz dan Nestler, 2000; Perrotti et al., 2004, 2008). Sebagai faktor transkripsi, ΔFosB dimensi dengan protein keluarga Jun, lebih disukai JunD, untuk membentuk kompleks AP-1 aktif yang mengikat elemen tindak balas AP-1 untuk meningkatkan atau menindas transkripsi gen sasarannya (Nestler, 2001), walaupun penyelidikan baru menunjukkan bahawa ΔFosB juga boleh bertindak sebagai homodimer (Wang et al., 2012). Protein ΔFosB adalah varians sambatan yang dipenggal FosB gen, yang menyebabkan protein ΔFosB kekurangan dua domain degron C-terminal, menghalang protein ΔFosB dari degradasi pesat yang dilihat dengan FosB dan semua protein Fos-keluarga yang lain. Kerana ΔFosB sangat stabil di NAc, ΔFosB bertindak sangat berbeza sebagai tindak balas kepada rangsangan akut dan kronik berbanding dengan protein Fos yang lain. Dengan pendedahan berulang kepada ubat-ubatan penyalahgunaan atau tekanan ΔFosB protein secara beransur-ansur berkumpul dan berterusan selama beberapa hari, manakala FosB dan protein Fos lain diinduksi hanya dalam masa yang singkat (jam) dan mengembangkan induksi yang dilemahkan pada pendedahan berikutnya (Nestler et al., 2001; Nestler, 2008).

Kepentingan ΔFosB bukan sahaja disebabkan oleh dadah penyalahgunaan dan tekanan, tetapi manipulasi ΔFosB di otak telah ditunjukkan untuk mempengaruhi tingkah laku haiwan. Secara selektif menggalakkan ΔFosB dalam neuron berdenyut sederhana dynorphin pada tikus dewasa meningkatkan kepekaan lokomotor sebagai tindak balas terhadap kokain akut dan berulang, serta tindak balas yang memberi ganjaran kepada kokain di paradigma keutamaan tempat yang dikondisikan dan penguat dalam paradigma kendiri (Kelz et al., 1999; Kelz dan Nestler, 2000; Colby et al., 2003).

Walaupun fenotip kecanduan dan ketahanan pelindung telah diterangkan dengan terperinci untuk tikus diperkayakan alam sekitar, peranan yang mungkin untuk ΔFosB dalam mengantara fenotip perlindungan ini belum dinilai sepenuhnya. Kajian terdahulu tentang pengayaan alam sekitar menunjukkan bahawa, berbanding dengan persekitaran standard (SE), persekitaran yang bertambah baik meningkatkan paras ΔFosB basal dalam kedua-dua neuron berdenyut sederhana D1 dan D2 di kawasan-kawasan striatal di tikus (Solinas et al., 2009; Lobo et al., 2013). Di samping itu, tikus Wistar yang diperkayakan menunjukkan sel-sel positif ΔFosB dalam korteks NAc dan prefrontal berbanding dengan tikus SE, menunjukkan kemungkinan peranan ΔFosB dalam fenotip ketagihan pelindung kepada nikotin (Venebra-Muñoz et al., 2014). Tambahan pula, overexpressing ΔFosB di seluruh striatum tikus meningkatkan roda harian berjalan, yang mungkin sama dengan meningkatnya aktiviti tikus dalam persekitaran yang diperkaya (Werme et al., 2002).

Dalam kajian semasa, kami membuat hipotesis bahawa: (1) pengayaan alam sekitar akan meningkatkan pengumpulan asas ΔFosB dalam NAc; dan (2) pengumpulan ini ΔFosB akan menyumbang kepada kesan perlindungan pengayaan persekitaran.

Bahan dan kaedah

haiwan

Bagi pengayaan alam sekitar, tikus Sprague-Dawley lelaki (Harlan, Houston, TX, USA) secara rawak diberikan kepada perumahan EC atau IC dari hari 21 ke hari 51. Tikus EC adalah kumpulan yang ditempatkan di dalam kumpulan (20 per sangkar) dalam sangkar logam besar (70 × 70 × 70 cm) dengan beberapa objek plastik keras (mainan kanak-kanak, bekas plastik, tiub PVC, dan lain-lain). Objek ini diganti dengan objek baru dan disusun semula menjadi konfigurasi novel setiap hari. Tikus IC telah ditempatkan dalam sangkar polikarbonat biasa. Tikus kekal dalam keadaan ini sepanjang eksperimen dan semua ujian tingkah laku dan ujian biokimia bermula selepas hari-hari 51 (iaitu sekurang-kurangnya pengayaan / pengasingan hari 30). Untuk overexpression daripada ΔFosB, tikus Sprague-Dawley lelaki (Harlan, Houston, TX, USA) diperoleh pada saiz 225-250 g dan sepasang ditempatkan dalam sangkar polikarbonat standard sebelum disuntik secara stereotactically dengan vektor viral yang berkaitan dengan adeno (AAV2) overexpressing ΔFosB dengan protein pendarfluor hijau (GFP) atau hanya GFP sebagai kawalan (lihat di bawah). Chow tikus dan air standard disediakan secara bebas untuk semua tikus kecuali semasa ujian tingkah laku dan peraturan makanan. Semua tikus dikekalkan dalam persekitaran terkawal (suhu, 22 ° C; kelembapan relatif, 50%; dan 12 h cahaya / kitaran gelap, lampu pada 600 h) dalam Persatuan Penilaian dan Akreditasi Makmal Haiwan Penjagaan (AAALAC) koloni yang diluluskan . Kesemua eksperimen mematuhi Panduan NIH untuk Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Makmal dan Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Institusi Cawangan Perubatan Universiti Texas.

Pengayaan alam sekitar adalah manipulasi kompaun yang terdiri daripada kebaruan, hubungan sosial dan senaman. Perumahan pasangan menyediakan hubungan sosial dan dengan itu mewakili EC (lihat Panduan NIH). Oleh itu, kumpulan kawalan yang sesuai untuk keadaan dengan kebaruan, hubungan sosial dan senaman akan menjadi kumpulan tanpa kebiasaan, hubungan sosial atau senaman, keadaan IC. Tikus IC menunjukkan tanda-tanda tekanan kronik yang lebih sedikit daripada tikus EC. Khususnya, tikus EC mempunyai adrenals yang lebih besar (Mlynarik et al., 2004), tanggapan CORT tumpul (tangga et al., 2011), induksi gen awal segera dilemahkan (Zhang et al., manuskrip dalam persediaan) dan pengumpulan FosB (Solinas et al., 2009; Lobo et al., 2013), semua tanda-tanda tekanan kronik (Crofton et al., dalam kajian semula).

Tekanan psikologi

Tikus yang diperkaya dan terpencil dimasukkan ke dalam pengikat tikus plastik lembut (DecapiCone®, Braintree Scientific Inc., MA, USA) untuk min 60 untuk hari-hari 1 (akut) atau 9 (berulang). Untuk ujian mRNA pendedahan pendek, tikus 30 (tikus 5 setiap kumpulan) dipenggal min 30 selepas permulaan tempoh tekanan tekanan yang terakhir, otak tikus diekstrak dan NAc dibedah untuk analisis mRNA. Untuk imunohistokimia, tikus 12 telah direbus dengan saline dan paraformaldehyde 4%, otak yang diekstrak, pasca tetap dalam 4% paraformaldehyde dan disimpan dalam gliserol 20% di 1xPBS pada 4 ° C. Otak tikus dihiris di 40 μm dengan microtome beku. Otak telah dituai 24 h selepas tekanan akhir untuk membolehkan protein FosB yang panjang untuk menurunkan (Perrotti et al., 2008).

Pengambilan diri kokain intravena dengan pengayaan alam sekitar

Implan kateter intravena

Tikus telah dibius dengan menggunakan ketamin (100 mg / kg IP) dan xylazine (10 mg / kg IP) dan kateter Silastic dimasukkan dan diamankan dalam urat jugular, keluar dari kulit pada belakang haiwan. Setiap hari, kateter diberikan dengan 0.1 ml larutan garam steril yang mengandungi heparin (30.0 U / ml), penisilin G kalium (250,000 U / ml) dan streptokinase (8000 IU / ml) untuk mengelakkan jangkitan dan menjaga ketat kateter sepanjang tempoh daripada eksperimen.

Cocaine sendiri pentadbiran dengan pengayaan alam sekitar

Tikus terisolasi dua puluh dan tikus 20 diletakkan di dalam ruang pengendali 30 × 24 × 21 cm (Med-Associates, St Albans, VT) dan dibenarkan untuk menekan tuas untuk pengambilan kokain (0.5 mg / kg / infusi, bekalan ubat NIDA, Penyelidikan Triangle Institute, NC, Amerika Syarikat) atau garam di bawah nisbah tetap 1 (FR1) untuk 2 h setiap hari untuk jumlah hari 14. Untuk mengekalkan pengambilan kokain yang sama antara kumpulan EC dan IC, terdapat maksimum inframerah 30 setiap sesi. Kapasiti pemprosesan tisu adalah terhad kepada sampel 30, jadi tikus yang paling rendah bertindak balas dari setiap kumpulan tidak diproses, meninggalkan Ns 8 untuk kokain dan 7 untuk kumpulan asin. Oleh itu, tidak ada perbezaan EC / IC dalam jumlah pengambilan kokain atau tempoh masa pencairan antara tikus EC dan IC. Otak tikus telah diekstrak 3 h selepas permulaan sesi pentadbiran diri terakhir dan NAc dibedah untuk analisis mRNA dan protein. Satu sisi NAc telah digunakan untuk pembaziran Barat, sebelah yang digunakan untuk qPCR.

Pentadbiran kokain bukan kontigen dengan pengayaan alam sekitar

Untuk perbandingan langsung kepada kesusasteraan yang diterbitkan sebelum ini (Hope et al., 1994; Chen et al., 1995), EC (N = 12) dan tikus IC (N = 12) disuntik dengan saline atau 20 mg / kg kokain intraperitoneally (IP) untuk hari 1 (akut) atau hari 9 (berulang). Satu sampel EC telah hilang semasa pemprosesan. Kumpulan akut menerima suntikan saline untuk hari 8 dan satu suntikan kokain pada hari 9 supaya semua tikus menerima jumlah suntikan yang sama. Otak diekstrak min 30 selepas suntikan terakhir dan NAc dibahagikan untuk analisis mRNA.

Kuantisasi mRNA menggunakan qPCR

RNA diekstrak dengan homogenisasi dalam RNA STAT-60 (Teltest, Friendswood, TX), memisahkan RNA dari DNA dan protein menggunakan kloroform, dan mempercepatkan RNA total dengan isopropanol. Pencemaran DNA telah dikeluarkan (TURBO DNA-Free, Life Technologies, CA, USA) dan 5 dan RNA yang disucikan adalah sebaliknya ditranskripsikan ke dalam cDNA (SuperScript III Synthesis Strata Pertama: Invitrogen catalog # 18080051). MRNA ΔFosB dikira menggunakan PCR masa nyata (SYBR Green: Applied Biosystems, Foster City, CA) pada Biokimia Terapan Biokimia 7500 termokikler cepat dengan primer yang direka untuk mengesan hanya ΔFosB (ke hadapan: AGGCAGAGCTGGAGTCGGAGAT; terbalik: GCCGAGGACTTGAACTTCACTCG) dan dinormalisasikan kepada primers yang direka untuk mengesan tikus GAPDH (ke hadapan: AACGACCCCTTCATTGAC; sebaliknya: TCCACGACATACTCAGCAC). Semua primer telah disahkan dan dianalisis untuk kekhususan dan linearity sebelum eksperimen (Alibhai et al., 2007).

Hapuskanlah Barat

Sisi kanan NAc dari kokain atau asid tikus EC dan tikus IC yang dikendalikan secara sendiri telah dihomogenkan dalam penampan yang mengandungi sukrosa, penampan Hepes, natrium fluorida, 10% SDS, dan inhibitor protease dan phosphatase (Sigma-Aldrich: P-8340, P -2850, P-5726). Kepekatan protein ditaksir menggunakan Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific, IL, USA). Oleh kerana protein yang diekstrak dari satu tikus tidak cukup untuk analisis, sampel 2 dari kumpulan yang sama dikumpulkan bersama, menghasilkan sampel 4 untuk setiap kumpulan. Sampel protein telah dinenakan pada 95 ° untuk min 5 dan dijalankan pada gel kecerunan polyacrylamide 10-20% (Kriteria TGX, Bio-Rad Laboratories, CA, Amerika Syarikat) kemudian dipindahkan ke membran polivinilidena fluorida (PVDF) (Millipore, MA, Amerika Syarikat ). Membran telah disekat dengan blocker-blocker kelas (susu kering tanpa lemak), diinkubasi dengan antibodi utama ΔFosB (arnab, 1: 1000, #2251, Teknologi Sinyal Cell, MA, Amerika Syarikat) dan antibodi utama β-actin (tetikus, 1: 1000 , Teknologi Penandaan Sel, MA, Amerika Syarikat), dibasuh dengan TBST dan kemudian diinkubasi dengan antibodi menengah fluorescent (kelinci anti kelinci (780 nm), kelawar anti keledek (680 nm), 1: 15000, Li-Cor Biosciences, USA). Blots Barat kemudian dicatatkan (Odyssey, Li-Cor Biosciences, NE, Amerika Syarikat) dan paras protein yang dikuantifikasi dengan perisian Odyssey.

Imunohistokimia

Untuk Rajah Rajah11 (N = 3), sel-sel yang mengandungi ΔFosB divisualisasikan dan dikira melalui pelabelan immunohistochemical ΔFosB dalam kepingan NAc yang diwarnakan dengan kit DAB (substrat DAB peroksidase, Laboratorium Vektor, CA, Amerika Syarikat). Otak yang diekstrak, pasang tetap, cryoprotected dan dipotong ke dalam iris 40 μm yang mengandungi NAc pada microtome pembekuan gelongsor (Leica Biosystems, IL, USA). Irisan tetap terapung dan dibilas dengan 1xPBS sebelum peroksidase endogen dipadamkan, sebelum menyekat dengan serum kambing normal 3% (Jackson ImmunoResearch, PA, USA) dengan triton 0.3 dan avidin D (Vector Laboratories, CA, USA). Irisan NAc diinkubasi dengan antibodi utama FOSB semalaman (1: 1000, Santa Cruz Bioteknologi, Dallas, TX, Amerika Syarikat) dengan 3% serum kambing, 0.3% triton, 1xPBS, dan penyelesaian biotin (Vector Laboratories, CA, USA). Walaupun antibodi ini mengiktiraf kedua-dua FosB dan ΔFosB, sebelum kajian blot Barat menunjukkan bahawa pada stimulasi post 24, sebahagian besar isyarat imunohistokimia terdiri daripada ΔFosB kerana FosB merosot dengan baik sebelum 24 h (Perrotti et al., 2008). Selepas mencuci, irisan diinkubasi dengan antibodi antibodi kambing antibiotik biotinilated IgG (Vector Laboratories, CA, USA), serum kambing, dan 1xPBS. Kemudian, kepingan-kepingan diinkubasi dengan noda peroksidase kompleks avidin-biotin (ABC) untuk min 15 (Thermo Scientific, IL, USA). Akhirnya, kepingan-kepingan dipasang, dehidrasi menggunakan etanol dan CitriSolv (Fischer Scientific, MA, USA) dan meliputi dengan DPX (Fisher Scientific). Untuk pengiraan sel, bahagian telah dicontohi dari Bregma + 1.80 hingga + 1.44 dari setiap haiwan. Jumlah sel imunopositif ΔFosB dikira dari empat bahagian NAc dari inti dan shell setiap tikus.

Rajah 1  

tekanan dan [kenaikan]FosB di tikus EC dan IC. (A-D) Imunohistokimia perwakilan DAB pewarnaan ΔFosB dalam shell NAc dan teras IC (A and B) dan EC (C and D) tikus dengan (B and D) dan tanpa (A and C) mengulangi tekanan (N = 3). (E) Pengiraan ...

Adeno-associated virus overexpressing [kenaikan]FosB

Vektor berasaskan AAV2 yang menyatakan ΔFosB dan humanized renfin GFP (hrGFP; Winstanley et al., 2007, 2009a,b) atau vektor kawalan hrGFP (N = 10 masing-masing) disuntik secara bilateral ke NAc tikus. Oleh kerana tidak ada manusia IC, tikus yang ditempatkan pasangan digunakan selain tikus IC untuk kajian ini untuk meningkatkan relevansi kepada masyarakat saintifik dengan menunjukkan kesan ΔFosB bebas daripada paradigma EC / IC. AAV mengekspresikan hrGFP tetapi tidak mengungkapkan ΔFosB digunakan sebagai kawalan. Ungkapan ΔFosB dalam vivo disahkan oleh immunofluorescence pewarnaan dengan antibodi utama FosB (1: 200, Arnab, Teknologi Isyarat Sel, MA, Amerika Syarikat). AAV vektor telah disuntik ke dalam cangkerang NAc bilateral (1 μl / sampingan lebih 10 min) menggunakan koordinat (AP = 1.7, L = 2.0, D = -6.5). Ujian perilaku bermula minggu 3 selepas pembedahan stereotaxic. Penempatan tepat ditentukan secara immunohistokimia selepas kesimpulan ujian tingkah laku.

Neoplasia sorong

ΔFosB overexpressing tikus (N = 10) dan tikus kawalan (N = 8) dikendalikan untuk minggu 1 sebelum permulaan ujian tingkah laku. Untuk menguji kelakuan seperti kecemasan, tikus dinilai untuk neophobia dengan rasa baru (sukrosa). Tikus dipisahkan ke dalam sangkar individu dan air dikeluarkan di 1600 h. Botol air tikus piawai dipenuhi dengan larutan 1% w / v sukrosa dalam air biasa "ketuk" tikus dan ditimbang sebelum diletakkan pada setiap sangkar di 1800 h. Selepas 30 min botol dibuang dan ditimbang semula, dan perbezaan berat botol sukrosa sebelum dan selepas ujian dikira. Kemudian, sukrosa telah diganti pada sangkar untuk hari tambahan 2 untuk membiarkan tikus membiasakan rasa rasa sukrosa sebelum ujian sukrosa keutamaan.

Peningkatan ditambah maze

Satu lagi ujian kelakuan seperti kecemasan, ditambah dengan maze (EPM), telah diuji 2 hari selepas sukrosa neophobia. EPM mengukur tingkah laku penerokaan vektor yang diubahsuai dalam persekitaran yang menghasilkan novel dan kecemasan (Green et al., 2008). Dua lengan tertutup dan dua lengan terbuka (Med Associates Inc., VT, Amerika Syarikat) mengukur 12 × 50 cm adalah 75 cm di atas lantai dan mempunyai photobeams di pintu masuk setiap lengan. Masa yang dibelanjakan untuk lengan terbuka dipantau untuk 5 min oleh rehat photobeam menggunakan perisian Med-PC.

Tekanan denyut air yang disebabkan oleh tekanan

Pada hari selepas EPM, ujian kecemasan yang ketiga digunakan: pembiakan sebagai tindak balas kepada persekitaran yang sedikit tertekan (sejuk). Sangkar tetikus polikarbonat (33 × 17 × 13 cm) telah pra-sejuk di atas ais untuk min 10. Tikus diletakkan di dalam sangkar di atas ais untuk min 30 dan jumlah biji tahi dicatatkan setiap min 5.

Kenalan sosial

Pada hari berikutnya, tingkah laku seperti kemurungan diukur menggunakan ujian interaksi sosial. Tikus dipisahkan untuk 24 sebelum ujian. Pada hari ujian tikus diletakkan di dalam persekitaran novel (wadah plastik, 45 × 40 × 45 cm) dengan pasangan sangkar dan tingkah laku mereka adalah video direkodkan untuk 30 min. Jumlah masa pasangan tikus yang dibelanjakan dandanan satu sama lain diukur oleh penyiasat yang buta terhadap keadaan tikus.

Keutuhan salur

Selepas hubungan sosial, ujian keutamaan sukrosa digunakan sebagai model anhedonia. Tikus yang dipelihara pasangan dipisahkan pada 1600 h dengan makanan tetapi tidak dibenarkan masuk ke air untuk 2 h. Di 1800 h dua botol air pra-ditimbang diletakkan pada setiap sangkar, satu mengandungi air, satu lagi larutan sucrose 1% dalam air. Botol air diletakkan dalam kedudukan normal manakala sukrosa diletakkan kira-kira 10 cm jauhnya. Botol dikeluarkan dan ditimbang semula selepas min 15.

Aktiviti Locomotor

Tiga hari selepas keutamaan sukrosa, aktiviti locomotor dinilai di bawah keadaan cahaya biasa dengan meletakkan tikus dalam ruang Plexiglas yang jelas (40 × 40 × 40 cm) dengan lapisan katil nipis, dikelilingi oleh dua matriks XNOUM X XUMUM, satu 4 cm di atas tanah dan satu 4 cm di atas tanah untuk merakam ambulasi mendatar dan menegak (pemeliharaan) aktiviti. Pecahan Photobeam dipantau untuk 4 h oleh sistem aktiviti lapangan terbuka yang diubahsuai (San Diego Instruments, CA, Amerika Syarikat).

Ujian berenang paksa

Ujian tingkah laku spontan terakhir adalah FST, model yang sensitif terhadap antidepresan. Tikus diletakkan di dalam silinder Plexiglas yang dipenuhi dengan kira-kira 14 L suhu bilik (24 ± 0.5 °) untuk min 15 pada Sesi 1, dan min 5 pada Sesi 2 pada hari berikutnya. Tikus dikeringkan dan diletakkan semula ke dalam kandang rumah mereka. Aktiviti berenang adalah rakaman video dan kependaman pada tempoh imobilitas pertama (1 s) dan jumlah masa yang tidak bergerak telah ditentukan untuk Sesi 2 oleh penyiasat yang buta terhadap keadaan.

Operasi Sucrose bertindak balas

Kawalan tikus AAV dan tikus ΔFosB-overexpressing dikawal selia dengan 85% berat makan percuma sepanjang hari 7. Semua tikus telah dilatih untuk menekan bar untuk pelet sucrose (Bio-Serv, NJ, USA) pada jadual pengukuhan FR1 untuk sesi min 15 pada hari-hari berturut-turut 5. Tikus kemudian diberi akses percuma untuk makanan untuk hari 3 dan sekali lagi dibenarkan untuk menekan bar untuk pelet sukrosa pada jadual FR1 untuk min 15, kali ini pada berat makanan-100%.

Cocaine diri pentadbiran

Perolehan

Satu minggu selepas pembedahan kateter (seperti yang diterangkan di atas), semua tikus (tikus kawalan 7 dan 10 ΔFosB overexpressing tikus, satu tikus kawalan telah hilang dari pembedahan kateter) diletakkan di dalam ruang operasi 30 × 24 × 21 cm (Med-Associates, St. Albans, VT) dan dibenarkan untuk mengendalikan sendiri dos 0.2 mg / kg / infus kokain untuk 2 h setiap sesi untuk hari 4; kemudian 0.5 mg / kg / infusi untuk hari 3 pada jadual FR1. Setiap infusi dihantar secara intravena dalam jumlah 0.01 ml lebih daripada 5.8 s. Penyerapan itu ditandai dengan pencahayaan dua lampu kiu untuk 20 s, yang menandakan tempoh tamat waktu di mana tidak ada infus lagi.

Kepupusan

Kerana pendedahan kokain kronik mungkin akan mendorong akumulasi ΔFosB dalam tikus kawalan, yang akan menyebabkan tikus dalam kedua-dua keadaan vektor mempunyai tahap ΔFosB yang tinggi di dalam otak, tikus-tikus itu terbatas pada kandang rumah mereka untuk hari-hari 4 tanpa pentadbiran sendiri untuk membolehkan Tahap protein ΔFosB untuk mengurangkan tikus kawalan vektor. Selepas makan siang 4, tikus diletakkan di dalam ruang pengendali dan dibenarkan untuk menyembuhkan salin bukan kokain di bawah jadual FR1 untuk sesi 1 untuk 3 hari berturut-turut.

Sambutan dos nisbah tetap

Setiap tikus (kawalan dan ΔFosB overexpressing) dibenarkan untuk mengendalikan diri sendiri 0.00325, 0.0075, 0.015, 0.03, 0.06, 0.125, 0.25, 0.5 mg / kg / infus kokain dalam urutan menaik pada jadual FR1 setiap hari untuk 5 berturut-turut hari. Tikus sendiri ditadbir setiap dos kokain untuk min 30.

Pengambilan semula kokain yang disebabkan

Tikus menjalani prosedur reinstatement dalam sesi. Tikus menerima 0.5 mg / kg / infusi pada jadual FR1 untuk min 60 diikuti oleh 3 h kepupusan (dengan isyarat kokain kontingen). Seterusnya mereka menerima suntikan IP (Green et al., 2010) kokain satu daripada lima dos (0, 2.5, 5, 10, atau 20 mg / kg) dalam susunan rawak untuk setiap tikus di seluruh sesi 5 pengembalian semula. Fasa 3 h terakhir sesi adalah reinstatement yang bertindak balas, sekali lagi dengan isyarat kokain tetapi masih tanpa campuran kokain. Selepas setiap sesi pengembalian semula kokain yang disebabkan oleh kokain, tikus-tikus menerima 2 hari intervensi dos yang tinggi (0.5 mg / kg / infusi) kokain pada jadual FR1 untuk 2 h untuk mengekalkan kadar yang tinggi dalam merespon sesi. Semasa proses pentadbiran diri cocaine, kateter dari beberapa tikus secara perlahan hilang patensi; Oleh itu, data tikus kawalan 6 dan tikus 7 ΔFosB-overexpressing digunakan dalam analisis ini.

Analisis statistik

Analisis dua hala varians (ANOVA) dan langkah-langkah ANOVA berulang dua hala dilakukan untuk membandingkan empat kumpulan rawatan dan perbandingan yang dirancang telah digunakan untuk membandingkan perbezaan di antara keadaan. Kepentingan antara hanya dua syarat dianalisis dengan menggunakan Pelajar t-test. Semua tData ujian melepasi ujian Shapiro-Wilk dari normal. Semua data dinyatakan sebagai min ± SEM. Kepentingan statistik telah ditetapkan pada p <0.05. Semua tikus yang diperkaya untuk satu eksperimen ditempatkan dalam satu sangkar tetapi diperlakukan sebagai subjek yang terpisah, memberikan implikasi mengenai isu kemungkinan pseudoreplikasi.

Hasil

Tikus EC memaparkan tahap asas yang lebih tinggi [kenaikan]FosB di NAc daripada tikus IC

Berbanding tikus IC, tikus EC mempunyai bilangan sel positif ΔFosB yang lebih tinggi dalam kedua-dua inti NAc (t(4) = -3.31, p <0.05) dan tempurung (t(4) = -6.84, p <0.05) (Angka 1A, C, E, F), mencadangkan nada basal ΔFosB lebih tinggi dalam tikus EC berbanding dengan tikus IC. Di samping itu, hasil blot Barat menunjukkan trend yang kuat untuk tikus saline EC yang mempunyai tahap asas protein ΔFosB yang lebih tinggi di NAc berbanding tikus saline IC (t(6) = -2.03, p = 0.089; Rajah Rajah2A) 2A) menggunakan ujian dua ekor. Walau bagaimanapun, memandangkan peningkatan ungkapan dalam Angka 1A-F dan peningkatan yang dilihat dalam kertas lain (Solinas et al., 2009), kami yakin dengan kesan ini. Hasil penembusan Barat juga mengesahkan bahawa hampir semua imunoreaktiviti seperti FosB yang dikesan oleh imunohistokimia adalah ΔFosB dan bukan FosB, yang tidak dapat dikesan pada 24 h.

Rajah 2  

Cocaine dan [kenaikan]FosB di tikus EC dan IC. (A-B) Minumlah protein ΔFosB (A) dan mRNA (B) (± SEM) dalam NAc selepas hari 14 garam atau pentadbiran diri kokain di IC dan tikus EC (N = 7-8). Band merah di Panel menunjukkan ...

[kenaikan]FosB secara beransur-ansur disebabkan oleh tikus EC dan IC oleh tekanan

Terdapat kesan utama yang signifikan terhadap tekanan sekatan yang diulangi di kedua-dua cangkang (F(1, 8) = 16.6, P <0.005) dan teras (F(1, 8) = 7.9, P <0.05) NAc dan kesan utama pengayaan alam sekitar dalam cengkerang (F(1, 8) = 22.3, P <0.005; Angka 1A-F). Lebih penting lagi, interaksi antara tekanan dan pengayaan alam sekitar juga penting dalam kedua-dua shell (F(1, 8) = 25.6, P <0.01) dan teras (F(1, 8) = 6.7, P <0.05). Interaksi sedemikian rupa sehingga, setelah tekanan pengekangan berulang, bilangan sel positif ΔFosB meningkat dengan ketara pada tikus IC, sementara jumlah ini tidak berubah pada tikus EC setelah tekanan berulang.

Untuk menyiasat lagi bagaimana ΔFosB dinamik dikawal oleh tekanan akut dan berulang dan untuk membolehkan perbandingan dengan penyelidikan terdahulu (Alibhai et al., 2007), induksi ΔFosB mRNA dikaji dengan tekanan tekanan akut dan berulang (Rajah (Rajah1G) .1G). Terdapat kesan utama tekanan (F(2, 24) = 31.9, P <0.001) dan pengayaan persekitaran (F(1, 24) = 5.1, P <0.05). Pada tikus IC, mFNA ΔFosB sangat disebabkan oleh tekanan pengekangan akut. Walau bagaimanapun, dengan tekanan berulang, induksi ΔFosB mRNA dilemahkan dengan ketara berbanding dengan aruhan akut. Terdapat juga interaksi yang signifikan (F(2, 24) = 4.6, P <0.05), menunjukkan bahawa induksi akut mFNA ΔFosB kurang pada tikus EC berbanding tikus IC. Oleh itu, tikus EC mempunyai tahap asas ΔFosB yang lebih tinggi protein soya dalam NAc, tetapi kurang ΔFosB mRNA induksi sebagai tindak balas kepada tekanan yang ketara.

[kenaikan]FosB secara berbeza disebabkan oleh kokain dalam tikus EC dan tikus IC

Untuk menentukan sama ada tikus EC dan IC bertindak balas dengan berbeza terhadap kokain, kami mengkaji peraturan protein ΔFosB dan mRNA dalam tikus NAc selepas kokain diri (Rajah 2A, B masing-masing). Blot Barat mendedahkan kesan utama kokain (F(1, 12) = 24.9, P <0.001) dan interaksi yang signifikan (F(1,12) = 5.5, P <0.05). Interaksi sedemikian rupa sehingga ΔFosB meningkat lebih banyak pada tikus IC daripada tikus EC (Gambar (Rajah2A) .2A). Malah, selepas pengambilan diri kokain sendiri, tahap protein ΔFosB meningkat dengan ketara hanyalah dalam tikus IC. Mengenai tahap mRNA, hasil qPCR juga menunjukkan kesan utama kokain (F(1, 26) = 47.1, P <0.001) dan kesan utama pengayaan persekitaran (F(1, 26) = 13.8, P <0.005). Walaupun tahap keseluruhan lebih rendah pada tikus EC, kedua-dua kumpulan meningkatkan mFNA ΔFosB (Gambar (Rajah2B2B).

Walaupun data protein menyokong hipotesis asal, ia telah dihipotesiskan daripada Rajah Rajah1G1G bahawa tikus EC akan menunjukkan kurang mRNA induksi daripada tikus terpencil dalam eksperimen kokain di atas, yang tidak berlaku, mungkin kerana Rajah Rajah1G1G menggunakan timepoint minit min 30 dan eksperimen kokain menggunakan timah 3 h. Untuk menginterogasi lagi hipotesis mRNA, titik masa min 30 digunakan untuk meneroka rawatan kokain akut dan berulang sebagai perbandingan yang lebih baik kepada Rajah Rajah1G.1G. Kerana pengambilan diri kokain akut adalah masalah yang bermasalah (iaitu, pembelajaran pemerolehan), tikus EC dan IC diberi hari suntikan IP kokain bukan kontan (9 mg / kg) akut atau 20. Sebagai hipotesis, terdapat kesan utama pengayaan persekitaran (F(1, 17) = 14.3, P <0.005), tetapi kesan utama rawatan kokain (F(2, 17) = 3.4, P = 0.057) dan interaksi (F(2, 17) = 3.4, P = 0.055) hanya menunjukkan trend yang kukuh dengan ujian dua ekor. Walau bagaimanapun, memandangkan kita mempunyai hipotesis berarah dari Rajah Rajah1G, 1G, kami sangat selesa dengan pendapat kami bahawa tikus EC menunjukkan kurang induksi daripada tikus IC (Rajah (Rajah2C2C).

Overexpression of [kenaikan]FosB dalam cangkang NAc meniru fenotip ketagihan yang disebabkan oleh pengayaan pengayaan

Untuk mengkaji kesan ΔFosB terhadap tingkah laku tikus yang bebas daripada pengayaan / pengasingan alam sekitar (iaitu, untuk membuat keputusan ini lebih relevan dengan kajian non-EC / IC), virus yang berkaitan dengan adeno (AAV) digunakan untuk mengatasi ΔFosB bilateral di NAc tikus-tikus yang tidak diperkayakan. Menurut kajian terdahulu kami, cengkerang NAc paling sensitif untuk mengawal tingkah laku yang berkaitan dengan kemurungan dan pengambilan dadah supaya mencari AAV vektor disuntik dalam cangkang NAc dalam kajian ini (Green et al., 2006, 2008, 2010). Angka 3A, B tunjukkan imunohistofluoresensi perwakilan ΔFosB dengan vektor kawalan (panel A; iaitu, ΔFosB ungkapan endogen) dan vektor ΔFosB-overexpressing (panel B) dalam shell NAc.

Rajah 3  

Overexpression of [kenaikan]FosB dalam cengkerang NAc meniru fenotip ketagihan perlindungan pengayaan alam sekitar. (A-B) Imunohistokimia perwakilan ΔFosB untuk kawalan hrGFP (A) dan ΔFosB-overexpressing (B) AAV vektor. ...

Setelah disahkan titer, dalam vivo ungkapan dan penempatan umum vektor virus, kita terlebih dahulu mengkaji kesan overexpression daripada ΔFosB dalam model kebimbangan. Overexpression daripada ΔFosB dalam cangkang NAc tidak mencukupi untuk menghasilkan kesan anxiogenik pengayaan alam sekitar dalam neofobia sukrosa dan paradigma pembekuan yang disebabkan tekanan sejuk (data tidak dipaparkan). Di samping itu, tiada kesan pada EPM (data tidak ditunjukkan). Oleh kerana pengayaan alam sekitar menghasilkan kesan seperti antidepresan pada tikus, kami seterusnya menjalankan ujian berkaitan kemurungan pada tikus ΔFosB-overexpressing. Serupa dengan model kecemasan, hasil menunjukkan bahawa ΔFosB overexpress dalam cangkang NAc tidak mencukupi untuk mengurangkan tingkah laku seperti kemurungan dalam ujian keutamaan sukrosa, ujian interaksi sosial, atau FST (data tidak dipaparkan).

Dalam paradigma pengayaan alam sekitar, tikus EC mempamerkan aktiviti locomotor basal yang lebih rendah daripada tikus IC (Bowling et al., 1993; Bowling dan Bardo, 1994; Smith et al., 1997; Green et al., 2003, 2010). Untuk mengkaji kesan overexpressing ΔFosB dalam shell NAc, aktiviti lokomotor spontan telah diuji untuk min 120. Dengan menggunakan ujian dua ekor, hasilnya menunjukkan bahawa ΔFosB overexpress dalam shell NAc menghasilkan trend yang kuat untuk menurunkan aktiviti lokomotor basal dalam tikus (Rajah (Rajah3C; 3C; t(16) = 1.84, p = 0.084). Walaupun tidak signifikan secara signifikan dengan ujian dua ekor, data ini masih menarik kerana mereka mematuhi hipotesis berarah eksplisit berdasarkan Green et al. (2010), yang konsisten dengan kesan pengayaan alam sekitar.

ISebaliknya dengan model kemurungan dan kecemasan, overexpression daripada ΔFosB dalam cangkang NAc dapat menghasilkan fenotip seperti EC dalam pelbagai paradigma ketagihan / penguat. Sayan ujian kendiri self-administration operator sukrosa, terdapat interaksi signifikan antara overexpression ΔFosB dan motivasi lapar tikus (F(1, 16) = 7.4, P <0.01). Tikus yang terlalu banyak mengekspresikan ΔFosB di cangkang NAc berlaku dengan ketara lebih pelet sucrose di bawah keadaan motivasi lapar (iaitu, pada berat badan suapan 85%), tetapi kurang pelet di bawah keadaan termotivasi rendah (iaitu, berat makanan 100% bebas; Rajah3D), 3D), yang meniru fenotip EC dengan sempurna (Green et al., 2010).

Dalam paradigma pengayaan persekitaran, tikus EC dipaparkan mengurangkan kelakuan kokain-mencari kepupusan dan reinstatement berasaskan kokain (Green et al., 2010). Oleh itu, pengambilan kokain dan mencari tingkah laku diukur dalam ΔFosB-mengekspresikan tikus menggunakan paradigma self-administration cocaine intravena. Sebagai model keinginan, paradigma kepupusan kokain mendedahkan bahawa overexpression ΔFosB dalam cangkang NAc menurunkan tindak pengambilan dadahr (F(1, 15) = 6.7, P <0.05; Gambar Rajah3E) .3E). Terdapat juga kesan utama sesi yang penting (F(2, 30) = 74.0, P <0.001). Untuk pemeliharaan yang bertindak balas di bawah jadual FR1, terdapat kesan utama dos yang ketara (F(7, 105) = 222.6, P <0.001) dan interaksi yang signifikan (F(7, 105) = 2.3, P <0.05) dalam pengambilan kokain kumulatif. Sifat interaksi sedemikian rupa sehingga perbezaan hanya dapat dilihat pada dos kokain yang lebih tinggi (Gambar (Rajah3F) .3F). Akhirnya, dalam pengambilan semula kokain disebabkan terdapat kesan utama dos penting (F(4, 44) = 15.5, P <0.001) dan trend untuk kesan utama ekspresi berlebihan ΔFosB menggunakan ujian dua-ekor (F(1, 11) = 4.1, P = 0.067). Walau bagaimanapun, memandangkan hipotesis berarah dari Green et al. (2010) dan keputusan statistik yang signifikan dan konsisten dalam Angka 3D, E, F, berkemungkinan bahawa ΔFosB menurunkan pengembalian semula (Rajah (Rajah3G) .3G). Menjawab dos 10 mg / kg adalah jauh lebih rendah untuk tikus ΔFosB yang menyatakan. Hasilnya secara keseluruhan menunjukkan bahawa overexpressing ΔFosB dalam tikus NAc tikus berkurangan mengambil kokain dan mencari tingkah laku, yang konsisten dengan kesan tingkah laku pengayaan alam sekitar.

Perbincangan

Kerentanan individu terhadap ketagihan dan kemurungan sangat dipengaruhi oleh faktor persekitaran. Pengayaan alam sekitar adalah paradigma yang memanipulasi persekitaran hidup haiwan, menghasilkan kesan perlindungan terhadap banyak keadaan psikiatri. ΔFosB memainkan peranan utama dalam mengawal fungsi ganjaran di pelbagai kawasan otak, termasuk stigat NAc dan dorsal (Koob et al., 1998; Bijaksana, 1998; Wallace et al., 2008; Grueter et al., 2013; Pitchers et al., 2013). Dalam projek ini, kami mengkaji peraturan dinamik ΔFosB dengan tekanan sekatan dan kokain dalam tikus diperkaya dan terpencil. Penemuan utama projek ini adalah:

(1) Tikus EC telah meningkatkan paras ΔFosB di NAc pada asas berbanding tikus IC;

(2) hanya tikus IC mengumpul protein ΔFosB tambahan dengan tekanan berulang;

(3) tikus EC memamerkan induksi ΔFosB mRNA yang dilemahkan selepas tekanan atau kokain; dan

(4) overexpressing ΔFosB dalam tikus tikus NAc yang ditempatkan pasangan meniru fenotip ketagihan pelindung, tetapi bukan fenotip kemurungan pelindung.

Orang mungkin mengharapkan dari kesusasteraan yang diterbitkan, yang menunjukkan bahawa ΔFosB transexic menunjukkan betapa sensitifitas terhadap ganjaran kokain dan pentadbiran diri pada dos ubat yang rendahKelz et al., 1999; Colby et al., 2003; Vialou et al., 2010; Robison et al., 2013), bahawa tikus ΔFosB-overexpressing dalam eksperimen semasa akan memaparkan kecenderungan yang meningkat untuk kokain diri dan pencarian cocaine. INamun eksperimen semasa, bagaimanapun, terlalu menekankan ΔFosB dalam shell NAc menurunkan pengambilan kokain dan kokain yang dicari semasa kepupusan dan pengembalian semula, menunjukkan motivasi yang dikurangkan untuk kokain. Perbezaannya mungkin disebabkan oleh fakta bahawa tikus transgenik dinyatakan ΔFosB sepanjang seluruh striatum, tetapi hanya dalam dynorphin + cells (Colby et al., 2003). Dalam eksperimen semasa ΔFosB telah diekspresikan melalui vektor AAV yang menjejaskan dynorphin + dan enkephalin + neuron. Kedua, kajian semasa memberi tumpuan kepada cengkerang NAc dan bukannya seluruh wilayah striatal.

Sebagai tambahan kepada fenotip ketagihan, pengayaan alam sekitar menghasilkan profil antidepresan dan anxiogenik seperti tikus (Green et al., 2010; Vialou et al., 2010). Dalam kajian semasa, overexpression daripada ΔFosB dalam NAc gagal menghasilkan kesan dalam mana-mana tiga kemurungan atau tiga ujian kecemasan. Walaupun terdapat banyak kemungkinan faktor yang boleh menyumbang kepada ΔFosB meniru ketagihan pengayaan tetapi bukan fenotip kemurungan, adalah mungkin bahawa cangkang NAc lebih dominan untuk tingkah laku berkaitan ketagihan sementara tingkah laku yang berkaitan dengan kemurungan boleh diurus dengan lebih mantap oleh kawasan lain. Penemuan sekarang bertentangan dengan kajian di Malaysia tikus di mana ΔFosB overexpression di NAc (di mana seseorang tidak boleh membezakan antara shell vs. core) yang dihasilkan kesan-kesan seperti antidepresan yang kuat dalam beberapa ujian tingkah laku (Vialou et al., 2010). Satu sebab yang mungkin adalah lebih mudah untuk melihat kesan ΔFosB pada model tingkah laku tekanan yang teruk seperti tekanan kekalahan sosial. Kajian overexpression semasa menyiasat tingkah laku seperti depresi tanpa ketegangan yang teruk.

Secara konsisten sepanjang kajian ini, tahap tinggi ΔFosB (contohnya, dari pengayaan, tekanan berulang atau kokain) berkorelasi dengan induksi berikutnya ΔFosB. Ini mungkin mewakili kesan siling, tanpa induksi lanjut mungkin di atas tahap asas protein yang tinggi. Ia juga mungkin bahawa paras terkumpul ΔFosB mungkin memberi makan kembali untuk menghalang induksi selanjutnya ΔFosB mRNA selepas tekanan atau kokain sebagai gelung maklum balas negatif. Sebagai contoh, ETikus C mempunyai paras ΔFosB yang tinggi dan menunjukkan induksi ΔFosB yang dilemahkan selepas tekanan atau kokain. Ini menggariskan korelasi negatif antara paras protein ΔFosB dan induksi mRNA. Maklum balas negatif terkumpul ΔFosB juga menyumbang induksi yang dilemahkan oleh ΔFosB dengan tekanan berulang dalam tikus IC.

Untuk jelas, kami tidak membuat sebarang tuntutan bahawa paradigma pengayaan persekitaran mempunyai perkaitan translasi langsung, kerana terdapat sedikit sekali anak yang dibangkitkan dalam kekurangan sebenar (harus diperhatikan bahwa kekurangan sosio-ekonomi tidak sama dengan kekurangan alam sekitar). Penggunaan paradigma ini adalah bukan manipulasi dadah, bukan pembedahan, manipulasi bukan genetik yang menghasilkan fenotip tingkah laku pelindung untuk ketagihan dan kemurungan yang boleh dieksploitasi dalam persekitaran yang dikawal oleh makmal sebagai alat sains asas untuk mengenal pasti mekanisme molekul ketahanan terhadap keadaan psikiatri. Kajian terdahulu telah menerangkan fenotip tingkah laku secara terperinci (Bowling et al., 1993; Bowling dan Bardo, 1994; Bardo et al., 1995; Green et al., 2002, 2003; El Rawas et al., 2009) dan lebih banyak kajian terkini (Solinas et al., 2009; Green et al., 2010; Lobo et al., 2013), bersama-sama dengan kajian semasa, memberikan petunjuk mengenai mekanisme transkrip yang mendasari fenotip tingkah laku ini. Gen sasaran / protein sasaran hiliran yang menghasilkan fenotipe pelindung sedang disiasat (Fan et al., 2013a,b; Lichti et al., 2014).

Pengkonsepsi kami terhadap pengayaan alam sekitar adalah bahawa pengayaan adalah satu kontinum dengan pengasingan di hujung yang rendah dan pengayaan penuh pada akhir yang tinggi. "Pengayaan penuh "dalam kes ini ditakrifkan sebagai satu persekitaran di mana subjek-subjek terdedah kepada kebaruan, hubungan sosial yang tidak mengancam dengan konflik, dan dibenarkan ruang dan objek untuk bersenam. Tketiga-tiga faktor ini mewakili keadaan kompaun "pengayaan" kerana mereka masing-masing memberi ganjaran dan setiap pembebasan dopamine di NAc, dan oleh itu, mengaktifkan litar neurobiologi biasa (Louilot et al., 1986; Calcagnetti dan Schechter, 1992; Crowder dan Hutto, 1992; Rebec et al., 1997; Bevins et al., 2002). Dalam konsep ini, pengasingan dianggap sebagai kumpulan kawalan kerana ia mewakili ketiadaan manipulasi (iaitu pengayaan, Crofton et al., Dalam kajian semula). Walau bagaimanapun, konseptualisasi lain adalah mungkin. Dalam satu konseptualisasi alternatif, kontinum adalah sama, tetapi kumpulan pengasingan adalah kumpulan eksperimen dan kumpulan diperkaya adalah kawalan. Sayan model ini, merendahkan subjek pengayaan biasa is manipulasi sebenar. In kes ini, bukannya mengatakan bahawa pengayaan adalah pelindung, seseorang akan mengatakan bahawa pengasingan memberikan kerentanan. Masih konseptualisasi ketiga berpendapat bahawa tidak ada kontinum dan pengayaan dan pengasingan adalah dua manipulasi asas yang berbeza. Dalam pandangan ini, pengayaan dan pemisahan perlu dipisahkan dan kedua-duanya berbanding kawalan sepasang. Kekurangan konsensus sejagat mengenai sifat pengayaan mewakili batasan paradigma, namun memberikan arahan untuk kajian masa depan. Walau apa pun, keputusan eksperimen ini berdiri teguh tanpa mengira tafsiran berikutnya.

Pengalaman alam sekitar dan kehidupan mempunyai pengaruh yang kuat terhadap perkembangan dan ekspresi banyak keadaan psikiatri. Memahami mekanisme kecanduan dan fenotip kemurungan pengayaan alam sekitar menangani soalan asas dalam penyelidikan gangguan mental - iaitu sumbangan alam sekitar untuk kerentanan atau daya tahan terhadap keadaan psikiatri. Kajian ini menggariskan kepentingan ΔFosB dalam mengawal selia tingkah laku yang berkaitan dengan ketagihan. Dalam kajian masa depan, tindakan ΔFosB dan kesan pengaktifan dan penghambaannya terhadap gen sasaran tertentu perlu diterokai dengan lebih lanjut dalam model pengayaan persekitaran.

Pembiayaan dan pendedahan

Yafang Zhang, tiada; Elizabeth J. Crofton, tidak ada; Dingge Li, tiada; Mary Kay Lobo, tiada; Fan Fan, tidak ada; Eric J. Nestler, R37DA007359; Thomas A. Green, DA029091.

Pernyataan konflik kepentingan

Penulis mengisytiharkan bahawa penyelidikan itu dijalankan tanpa adanya sebarang hubungan komersial atau kewangan yang boleh ditafsirkan sebagai potensi konflik kepentingan.

Penghargaan

Eksperimen ini dibiayai oleh pemberian dari Institut Kebangsaan Penyalahgunaan Dadah, DA029091 dan R37DA007359. Cocaine yang disediakan oleh Institut Kebangsaan Penyalahgunaan Dadah.

Rujukan

  1. Akdeniz C., Tost H., Meyer-Lindenberg A. (2014). Neurobiologi risiko alam sekitar sosial untuk skizofrenia: bidang penyelidikan yang berkembang. Soc. Psychiatry Psychiatr. Epidemiol. 49, 507-517 10.1007 / s00127-014-0858-4 [PubMed] [Cross Ref]
  2. Alibhai IN, Green TA, Potashkin JA, Nestler EJ (2007). Peraturan pernyataan mRNA fosB dan DeltafosB: dalam kajian vivo dan in vitro. Brain Res. 1143, 22-33 10.1016 / j.brainres.2007.01.069 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  3. Bardo MT, Bowling SL, Rowlett JK, Manderscheid P., Buxton ST, Dwoskin LP (1995). Pengayaan alam sekitar mencapai sensitisasi locomotor, tetapi tidak dalam pembebasan dopamin, yang disebabkan oleh amphetamine. Pharmacol. Biochem. Behav. 51, 397-405 10.1016 / 0091-3057 (94) 00413-d [PubMed] [Cross Ref]
  4. Bevins RA, Besheer J., Palmatier MI, Jensen HC, Pickett KS, Eurek S. (2002). Tempat penyiasatan objek novel: proses perilaku dan dopaminergik dalam bentuk ganjaran yang baru. Behav. Brain Res. 129, 41-50 10.1016 / s0166-4328 (01) 00326-6 [PubMed] [Cross Ref]
  5. Bowling SL, Bardo MT (1994). Locomotor dan kesan ganjaran amphetamine dalam tikus yang diperkaya, sosial dan terpencil. Pharmacol. Biochem. Behav. 48, 459-464 10.1016 / 0091-3057 (94) 90553-3 [PubMed] [Cross Ref]
  6. Bowling SL, Rowlett JK, Bardo MT (1993). Kesan pengayaan alam sekitar terhadap aktiviti lokomotif amfetamin-dirangsang, sintesis dopamin dan pembebasan dopamin. Neuropharmacology 32, 885-893 10.1016 / 0028-3908 (93) 90144-r [PubMed] [Cross Ref]
  7. Calcagnetti DJ, Schechter MD (1992). Tempat penyaman udara mendedahkan aspek interaksi sosial dalam tikus remaja. Physiol. Behav. 51, 667-672 10.1016 / 0031-9384 (92) 90101-7 [PubMed] [Cross Ref]
  8. Chen J., Nye HE, Kelz MB, Hiroi N., Nakabeppu Y., Hope BT, et al. (1995). Peraturan protein delta FosB dan FosB dengan penyitaan electroconvulsive dan rawatan kokain. Mol. Pharmacol. 48, 880-889 [PubMed]
  9. Colby CR, Whisler K., Steffen C., Nestler EJ, Self DW (2003). Overprestasi jenis spesifik sel Striatal terhadap DeltaFosB meningkatkan insentif untuk kokain. J. Neurosci. 23, 2488-2493 [PubMed]
  10. Crowder WF, Hutto CW (1992). Langkah-langkah penyelenggaraan tempat pengendalian diperiksa menggunakan dua penguat nondrug. Pharmacol. Biochem. Behav. 41, 817-824 10.1016 / 0091-3057 (92) 90233-6 [PubMed] [Cross Ref]
  11. Elisei S., Sciarma T., Verdolini N., Anastasi S. (2013). Ketahanan dan masalah kemurungan. Psychiatr. Danub. 25 (Suppl 2), S263-S267 [PubMed]
  12. El Rawas R., Thiriet N., Lardeux V., Jaber M., Solinas M. (2009). Pengayaan alam sekitar menurunkan ganjaran tetapi bukan kesan pengaktifan heroin. Psychopharmacology (Berl) 203, 561-570 10.1007 / s00213-008-1402-6 [PubMed] [Cross Ref]
  13. Fan X., Li D., Lichti CF, Green TA (2013a). Protein dinamik nucleus accumbens sebagai tindak balas kepada tekanan psikologi akut dalam tikus diperkayakan dan terisolasi alam sekitar. PLoS One 8: e73689 10.1371 / journal.pone.0073689 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  14. Fan X., Li D., Zhang Y., Green TA (2013b). Peraturan phosphoproteome yang berlainan bagi nukleus akrab dalam tikus yang diperkayakan dan dikelilingi oleh alam sekitar sebagai tindak balas terhadap tekanan akut. PLoS One 8: e79893 10.1371 / journal.pone.0079893 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  15. Green TA, Alibhai IN, Hommel JD, Dileone RJ, Kumar A., ​​Theobald DE, et al. (2006). Induksi ekspresi pencegahan awal kAMP diucapkan dalam nukleus yang ditimbulkan oleh tekanan atau amphetamine meningkatkan tindak balas tingkah laku terhadap rangsangan emosi. J. Neurosci. 26, 8235-8242 10.1523 / jneurosci.0880-06.2006 [PubMed] [Cross Ref]
  16. Green TA, Alibhai IN, Roybal CN, Winstanley CA, Theobald DE, Birnbaum SG, et al. (2010). Pengayaan alam sekitar menghasilkan fenotip tingkah laku yang diantarkan oleh unsur tindak balas elemen tindak balas adenosin monofosphat siklik rendah (CREB) dalam nukleus accumbens. Biol. Psikiatri 67, 28-35 10.1016 / j.biopsych.2009.06.022 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  17. Green TA, Alibhai IN, Unterberg S., Neve RL, Ghose S., Tamminga CA, et al. (2008). Induksi mengaktifkan faktor transkripsi (ATF) ATF2, ATF3 dan ATF4 dalam nukleus accumbens dan peraturan kelakuan emosi mereka. J. Neurosci. 28, 2025-2032 10.1523 / jneurosci.5273-07.2008 [PubMed] [Cross Ref]
  18. Green TA, Cain ME, Thompson M., Bardo MT (2003). Pengayaan alam sekitar menurunkan hiperaktif akibat nikotin pada tikus. Psychopharmacology (Berl) 170, 235-241 10.1007 / s00213-003-1538-3 [PubMed] [Cross Ref]
  19. Green TA, Gehrke BJ, Bardo MT (2002). Pengayaan alam sekitar menurunkan pentadbiran amfetamin intravena pada tikus: fungsi tindak balas dosis untuk jadual nisbah tetap dan progresif. Psychopharmacology (Berl) 162, 373-378 10.1007 / s00213-002-1134-y [PubMed] [Cross Ref]
  20. Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC (2013). ΔFosB memodulatkan nukleus berbeza mengakibatkan fungsi laluan langsung dan tidak langsung. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 110, 1923-1928 10.1073 / pnas.1221742110 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  21. Hope B., Kosofsky B., Hyman SE, Nestler EJ (1992). Peraturan ekspresi gen awal segera dan AP-1 mengikat dalam nukleus tikus akrab dengan kokain kronik. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 5764-5768 10.1073 / pnas.89.13.5764 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  22. Hope BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y., et al. (1994). Induksi kompleks AP-1 yang berpanjangan terdiri daripada protein seperti Fos yang diubah dalam otak oleh kokain kronik dan rawatan kronik yang lain. Neuron 13, 1235-1244 10.1016 / 0896-6273 (94) 90061-2 [PubMed] [Cross Ref]
  23. Jha S., Dong B., Sakata K. (2011). Rawatan alam sekitar yang diperkemasan memburukkan tingkah laku seperti kemurungan dan memulihkan kemerosotan hippocampal neurogenesis dan tahap protein faktor neurotropik yang berasal dari otak pada tikus yang tidak mempunyai ekspresi melalui promoter IV. Translated. Psikiatri 1: e40 10.1038 / tp.2011.33 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  24. Kato T., Iwamoto K. (2014). Analisis metilasi dan analisis hidroksimetilasi DNA yang komprehensif di dalam otak manusia dan implikasinya dalam gangguan mental. Neuropharmacology 80, 133-139 10.1016 / j.neuropharm.2013.12.019 [PubMed] [Cross Ref]
  25. Kelz MB, Chen J., Carlezon WA, Whisler K., Gilden L., Beckmann AM, et al. (1999). Ekspresi faktor transkripsi deltaFosB di otak mengawal kepekaan terhadap kokain. Alam 401, 272-276 10.1038 / 45790 [PubMed] [Cross Ref]
  26. Kelz MB, Nestler EJ (2000). deltaFosB: suis molekular yang mendasari kepekaan neural jangka panjang. Curr. Pendapat. Neurol. 13, 715-720 10.1097 / 00019052-200012000-00017 [PubMed] [Cross Ref]
  27. Koob GF, Sanna PP, Bloom FE (1998). Neuroscience of addiction. Neuron 21, 467-476 [PubMed]
  28. Larson EB, Graham DL, Arzaga RR, Buzin N., Webb J., TA TA, et al. (2011). Overexpression dari CREB dalam shell accumbens nuklear meningkatkan tetulang kokain dalam tikus sendiri yang mentadbir. J. Neurosci. 31, 16447-16457 10.1523 / JNEUROSCI.3070-11.2011 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  29. Laviola G., Hannan AJ, Macrì S., Solinas M., Jaber M. (2008). Kesan persekitaran diperkaya pada model haiwan penyakit neurodegenerative dan gangguan psikiatri. Neurobiol. Dis. 31, 159-168 10.1016 / j.nbd.2008.05.001 [PubMed] [Cross Ref]
  30. Lichti CF, Fan X., Bahasa Inggeris RD, Zhang Y., Li D., Kong F., et al. (2014). Pengayaan alam sekitar mengubah ungkapan protein serta tindak balas proteomik terhadap kokain dalam nukleus akusatif. Depan. Behav. Neurosci. 8: 246 10.3389 / fnbeh.2014.00246 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  31. Lobo MK, Zaman S., Damez-Werno DM, Koo JW, Bagot RC, Dinieri JA, et al. (2013). ΔFoB induksi dalam subtipe neuron menengah sederhana striatal sebagai tindak balas kepada rangsangan farmakologi, emosi dan optogenetik kronik. J. Neurosci. 33, 18381-18395 10.1523 / JNEUROSCI.1875-13.2013 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  32. Louilot A., Le Moal M., Simon H. (1986). Kereaktifan pembezaan neuron dopaminergik dalam nukleus bertindak sebagai tindak balas kepada situasi tingkah laku yang berbeza. Kajian in vivo voltammetric dalam tikus bergerak bebas. Brain Res. 397, 395-400 10.1016 / 0006-8993 (86) 90646-3 [PubMed] [Cross Ref]
  33. McBride WJ, Kimpel MW, Mcclintick JN, Ding ZM, Edenberg HJ, Liang T., et al. (2014). Perubahan dalam ekspresi gen dalam amygdala lanjutan berikut minuman beralkohol seperti pewter alkohol yang lebih suka (P). Pharmacol. Biochem. Behav. 117, 52-60 10.1016 / j.pbb.2013.12.009 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  34. Mlynarik M., Johansson BB, Jezova D. (2004). Persekitaran yang diperkaya mempengaruhi tindak balas adrenokortikal terhadap cabaran imun dan ekspresi gen reseptor glutamat di hippocampus tikus. Ann. NY Acad. Sci. 1018, 273-280 10.1196 / annals.1296.032 [PubMed] [Cross Ref]
  35. Nestler EJ (2001). Neurobiologi molekular ketagihan. Am. J. Penagih. 10, 201-217 10.1080 / 105504901750532094 [PubMed] [Cross Ref]
  36. Nestler EJ (2008). Tinjauan. Mekanisme penagihan ketagihan: peranan DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 363, 3245-3255 10.1098 / rstb.2008.0067 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  37. Nestler EJ, Barrot M., Self DW (2001). DeltaFosB: suis molekul yang berterusan untuk ketagihan. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 11042-11046 10.1073 / pnas.191352698 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  38. Perrotti LI, Hadeishi Y., Ulery PG, Barrot M., Monteggia L., Duman RS, et al. (2004). Induksi deltaFosB dalam struktur otak berkaitan ganjaran selepas tekanan kronik. J. Neurosci. 24, 10594-10602 10.1523 / jneurosci.2542-04.2004 [PubMed] [Cross Ref]
  39. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B., Renthal W., Maze I., Yazdani S., et al. (2008). Corak berbeza induksi DeltaFosB di otak oleh dadah penyalahgunaan. Sinaps 62, 358-369 10.1002 / syn.20500 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  40. Pitchers KK, Vialou V., Nestler EJ, Laviolette SR, Lehman MN, Coolen LM (2013). Ganjaran semulajadi dan dadah bertindak pada mekanisme kepekaan neural yang biasa dengan ΔFosB sebagai mediator utama. J. Neurosci. 33, 3434-3442 10.1523 / jneurosci.4881-12.2013 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  41. Rebec GV, Christensen JR, Guerra C., Bardo MT (1997). Perbezaan serantau dan temporal dalam efflux dopamin masa sebenar dalam nukleus accumbens semasa novelistik pilihan bebas. Brain Res. 776, 61-67 10.1016 / s0006-8993 (97) 01004-4 [PubMed] [Cross Ref]
  42. Robison AJ, Vialou V., Mazei-Robison M., Feng J., Kourrich S., Collins M., et al. (2013). Respons tindak balas tindakbalas dan struktur terhadap kokain kronik memerlukan gelung feedforward yang melibatkan ΔFosB dan kinase II yang bergantung kepada kalsium / calmodulin di dalam shell nukleus accumbens. J. Neurosci. 33, 4295-4307 10.1523 / jneurosci.5192-12.2013 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  43. Smith JK, Neill JC, Costall B. (1997). Keadaan perumahan selepas kesan mempengaruhi kesan tingkah laku kokain dan d-amphetamine. Psychopharmacology (Berl) 131, 23-33 10.1007 / s002130050261 [PubMed] [Cross Ref]
  44. Solinas M., Chauvet C., Thiriet N., El Rawas R., Jaber M. (2008). Membalikkan ketagihan kokain oleh pengayaan alam sekitar. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105, 17145-17150 10.1073 / pnas.0806889105 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  45. Solinas M., Thiriet N., El Rawas R., Lardeux V., Jaber M. (2009). Pengayaan alam sekitar semasa peringkat awal kehidupan mengurangkan kesan tingkah laku, neurokimia dan molekul kokain. Neuropsychopharmacology 34, 1102-1111 10.1038 / npp.2008.51 [PubMed] [Cross Ref]
  46. Tangga DJ, Prendergast MA, Bardo MT (2011). Perbezaan yang disebabkan oleh alam sekitar dalam blokade reseptor kortikosteron dan glucocorticoid amphetamine self-administration dalam tikus. Psychopharmacology (Berl) 218, 293-301 10.1007 / s00213-011-2448-4 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  47. Thiel KJ, Pentkowski NS, Peartree NA, Painter MR, Neisewander JL (2010). Keadaan hidup alam sekitar yang diperkenalkan semasa pantang paksa meminda tingkah laku mencari cocaine dan ekspresi protein Fos. Neurosains 171, 1187-1196 10.1016 / j.neuroscience.2010.10.001 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  48. Thiel KJ, Sanabria F., Pentkowski NS, Neisewander JL (2009). Kesan anti-keinginan pengayaan persekitaran. Int. J. Neuropsychopharmacol. 12, 1151-1156 10.1017 / s1461145709990472 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  49. van Winkel M., Peeters F., Van Winkel R., Kenis G., Collip D., Geschwind N., et al. (2014). Kesan variasi dalam gen BDNF terhadap sensitiviti tekanan sosial dan kesan penyerapan emosi positif: replikasi dan penyambungan antara interaksi gen-alam sekitar. Eur. Neuropsychopharmacol. 24, 930-938 10.1016 / j.euroneuro.2014.02.005 [PubMed] [Cross Ref]
  50. Venebra-Muñoz A., Corona-Morales A., Santiago-García J., Melgarejo-Gutiérrez M., Caba M., García-García F. (2014). Persekitaran yang diperkuatkan melancarkan pentadbiran diri nikotin dan mendorong perubahan dalam ekspresi ΔFosB dalam korteks prefrontal tikus dan accumbens nukleus. Neuroreport 25, 694-698 10.1097 / wnr.0000000000000157 [PubMed] [Cross Ref]
  51. Vialou V., Robison AJ, QC Laplant, Covington HE, Dietz DM, Ohnishi YN, et al. (2010). DeltaFosB dalam rangkaian ganjaran otak mengantara daya tahan terhadap tekanan dan tindak balas antidepresan. Nat. Neurosci. 13, 745-752 10.1038 / nn.2551 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  52. Wallace DL, Vialou V., Rios L., Carle-Florence TL, Chakravarty S., Kumar A., ​​et al. (2008). Pengaruh DeltaFosB dalam nukleus akrab dengan tingkah laku yang berkaitan dengan imbalan semula jadi. J. Neurosci. 28, 10272-10277 10.1523 / jneurosci.1531-08.2008 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  53. Wang Y., Cesena TI, Ohnishi Y., Burger-Caplan R., Lam V., Kirchhoff PD, et al. (2012). Pemeriksaan molekul kecil mengenal pasti pengawal selia faktor transkripsi ΔFosB. ACS Chem. Neurosci. 3, 546-556 10.1021 / cn3000235 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  54. Werme M., Messer C., Olson L., Gilden L., Thorén P., Nestler EJ, et al. (2002). Delta FosB mengawal roda berjalan. J. Neurosci. 22, 8133-8138 [PubMed]
  55. Winstanley CA, Bachtell RK, Theobald DE, Laali S., TA TA, Kumar A., ​​et al. (2009a). Peningkatan impulsif semasa pengeluaran dari kokain diri: peranan untuk DeltaFosB dalam korteks orbitofrontal. Cereb. Cortex 19, 435-444 10.1093 / cercor / bhn094 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  56. Winstanley CA, Green TA, Theobald DE, Renthal W., LaPlant Q., DiLeone RJ, et al. (2009b). Induksi DeltaFosB dalam korteks orbitofrontal berpotensi membuat sensitisasi locomotor walaupun melemahkan disfungsi kognitif yang disebabkan oleh kokain. Pharmacol. Biochem. Behav. 93, 278-284 10.1016 / j.pbb.2008.12.007 [Artikel percuma PMC] [PubMed] [Cross Ref]
  57. Winstanley CA, LaPlant Q., Theobald DE, Green TA, Bachtell RK, Perrotti LI, et al. (2007). Induksi DeltaFosB dalam korteks orbitofrontal mengantarkan toleransi kepada disfungsi kognitif akibat cocaine. J. Neurosci. 27, 10497-10507 10.1523 / jneurosci.2566-07.2007 [PubMed] [Cross Ref]
  • Bijak RA (1998). Pengaktifan dadah jalur ganjaran otak. Ubat Alkohol. 51, 13-22 10.1016 / s0376-8716 (98) 00063-5 [PubMed] [Cross Ref]