Corak pengaktifan saraf yang mendasari pengaruh amigdala basolateral pada tingkah laku intra-accumbens yang dipacu oleh opioid berdasarkan tingkah laku makan lemak tinggi pada tikus (2015) - MEKANISME BINGE

Behav Neurosci. Manuskrip penulis; boleh didapati di PMC 2015 Dec 1.

Diterbitkan dalam bentuk akhir yang diedit sebagai:

PMCID: PMC4658266

NIHMSID: NIHMS724902

Versi terakhir penerbitan artikel ini boleh didapati di Behav Neurosci
 

Abstrak

Kajian ini meneroka peranan amygdala dalam mengantarkan corak tingkah laku yang unik yang didorong oleh pengaktifan opioid intra-accumbens (Acb) dalam tikus. Pengaktifan sementara amygdala basolateral (BLA), melalui pentadbiran muskimol agonis GABAA, menghalang penggunaan yang semakin meningkat selepas pentadbiran intra-Acb opioid daripada agonis μ-opioid D-Ala2, NMe-Phe4, Glyol5-enkephalin (DAMGO) tingkah laku utuh, terutamanya selepas penggunaan telah berakhir. Satu tafsiran adalah bahawa aktiviti BLA secara aktif menghalang aktiviti saraf yang mendasari pengambilan (penggunaan) yang didorong oleh DAMGO, tetapi tidak mempunyai kelakuan (pendekatan) yang bersifat selera. Eksperimen-eksperimen ini mengambil kesempatan daripada pemisahan temporal penggunaan dan tingkah laku pendekatan untuk menyiasat aktiviti neural mereka yang berkaitan. Mengikuti sama ada salin intra-Acb atau pentadbiran DAMGO, dengan atau tanpa administrasi muscimol BLA, tikus diberi akses 2hr ke jumlah diet yang tinggi lemak. Sejurus selepas sesi pemakanan, tikus telah dikorbankan dan otak diuji untuk pola aktiviti saraf di kawasan-kawasan otak kritikal yang dikenali untuk mengawal selia tingkah laku pemakanan yang bersifat selera dan konsisten. Hasilnya menunjukkan bahawa pentadbiran intra-Acb DAMGO meningkatkan pengaktifan c-Fos dalam neuron orexin dalam kawasan perumahan hypothalamus dan peningkatan pengaktifan ini disekat oleh inaktifasi BLA muscimol. Pentadbiran DAMGO Intra-Acb meningkatkan pengaktifan c-Fos secara signifikan dalam neuron dopaminergik kawasan tegegalal ventral, berbanding dengan kawalan salin, dan penyahaktifan BLA tidak memberi kesan kepada kenaikan ini. Secara keseluruhannya, data-data ini menyediakan litar yang mendasari yang boleh memediasi pengaruh selektif BLA pada pemanduan yang berkhasiat, tetapi tidak berperilaku, tingkah laku makan dalam model tingkah laku makan yang dipandu hedonik.

Kata kunci: tingkah laku motivasi, sistem dan analisis litar, tingkah laku makmal (appetitive / aversive), Model Haiwan, pola pengaktifan saraf opioid

Rangkaian teragih yang menyumbang kepada pengambilan opioid yang diiktiraf dalam intra-accumbens (Acb) telah diperiksa secara meluas (; ; ; ), dan sumbangan amygdala basolateral (BLA) amat menarik. Pengaktifan sementara BLA dengan GABAA agonist muscimol menghalang peningkatan yang kuat dalam pengambilan lemak tinggi berikut pentadbiran intra-Acb dari agonis μ-opioid yang terpilih D-Ala2, NMe-Phe4, Glyol5-enkephalin (DAMGO), tetapi pengaktifan BLA tidak mempunyai pengaruh terhadap peningkatan makan yang didorong oleh akut Kekurangan makanan 24hr (). Pengaruh BLA terhadap pengantaraan model pemakanan hedonik ini secara khusus dicirikan untuk menunjukkan bahawa inaktivasi BLA menghalang peningkatan penggunaan yang didorong oleh intra-Acb DAMGO, namun meninggalkan tingkah laku pendekatan peningkatan makanan yang utuh, terutama setelah pengambilan diet telah berakhir. Manakala pencirian yang lebih teliti dan tafsiran data ini telah disediakan oleh , Inactivation BLA kelihatannya hanya mengganggu fasa penggunaan tingkah laku makan tinggi lemak, tetapi bukan fasa pendekatan makanan yang didorong oleh pengaktifan opioid Acb.

Dari segi sejarah, tingkah laku yang bermanfaat telah dikategorikan kepada seorang selera makan fasa, yang termasuk tingkah laku pendekatan yang terlibat dalam mencari rangsangan yang bermanfaat seperti makanan, dan pemadaman fasa, yang termasuk tingkah laku seperti penggunaan makanan (; ). Perbezaan ini telah diperhatikan selama beberapa dekad dan masih popular hari ini sebagai teori motivasi yang berkaitan dengan makanan dan ganjaran lain berkembang (; ; ; ; ). Percubaan dalam menentukan fisiologi yang mendasari fasa-fasa yang berbeza dari tingkah laku yang bermotivasi ini termasuk model di mana rawatan telah mengganggu ekspresi satu fasa tanpa mempengaruhi yang lain (; ; ; ). Kajian ini meneliti fisiologi asas model tingkah laku makan yang unik di mana fasa pemadatan dan selera makan dipisahkan.

Eksperimen-eksperimen ini menyiasat corak aktiviti neural yang mendasari kelakuan pemakanan yang bersifat selera dan konsisten yang didorong oleh intra-Acb DAMGO. Pertama, penemuan awal () direplikasi untuk menubuhkan premis untuk eksperimen kedua, termasuk keperluan menentukan jumlah makanan yang terhad untuk menyediakan dalam kajian kedua. Dalam eksperimen kedua, mengikuti setiap empat keadaan rawatan ubat yang berbeza, semua subjek diberi akses kepada diet diet tinggi lemak yang terhad, menyediakan setiap kumpulan rawatan kecuali kumpulan yang dirawat hanya DAMGO, untuk mencapai kenyang (iaitu amaun yang diperhatikan di bawah iklan syarat lib dari Eksperimen 1). Sejurus selepas sesi pemakanan 2hr, tikus dikorbankan untuk menangkap corak aktiviti saraf yang berkaitan dengan corak tingkah laku yang dipaparkan. Data terdahulu menunjukkan bahawa keseluruhan kelakuan pendekatan penggunaan dan kelonggaran makanan berlaku dalam minit pertama 30 sesi ujian selepas semua rawatan, namun intra-Acb DAMGO, dengan atau tanpa aktiviti BLA tidak menghasilkan tingkah laku pendekatan tahap makanan yang teguh semasa min 90 akhir sesi ujian 2hr (). Oleh itu, aktiviti neural yang berkaitan dengan motivasi pendekatan and mengambil harus diwakili dalam tikus yang menerima rawatan intra-acb DAMGO tanpa inaktivasi BLA. Sebaliknya, corak aktiviti neural pada tikus yang menerima rawatan intra-Acb DAMGO dengan inactivation BLA harus mencerminkan motivasi yang sama pendekatan, tetapi mencerminkan motivasi yang dikurangkan kepada mengambil.

Aktiviti neural diperiksa di kawasan-kawasan otak yang dikenali untuk mengetengahkan kelakuan yang bersifat selera dan bersifat peramal, termasuk kawasan tegar ventral (VTA), dorsal medial hypothalamus (DMH), kawasan hipotalamus (PeF), dan hipothalamus lateral (LH); ; ). Pentadbiran DAMGO Intra-Acb meningkatkan ungkapan c-Fos dalam neuron hipotalamik periferal dan ungkapan ini memerlukan isyarat orexin dalam VTA (). Secara kolektif, data-data ini dan lain-lain menunjukkan bahawa model pemakanan yang disebabkan oleh palatability melalui pengaktifan reseptor Acb μ-opioid boleh merekrut neuron PeF orexin dan meningkatkan isyarat orexin dalam VTA yang mungkin memodulasi DA efflux ke Acb dan mPFC, memandu tingkah laku makan (). Kesan pengaktifan BLA yang diperlukan untuk memerhatikan peningkatan penggunaan intra-Acb DAMGO tinggi lemak, tetapi tidak mempunyai kelakuan pendekatan lemak tinggi, akan diterokai.

Kaedah

Tikus

Tiga puluh enam tikus Sprague-Dawley lelaki dewasa (Harlan Sprague-Dawley, Inc., Indianapolis, IN) dengan berat 300-400 g, ditempatkan secara berpasangan di dalam sangkar Plexiglas dalam bilik koloni terkawal iklim pada suhu 22 ° C. Tikus-tikus dikekalkan pada kitaran gelap-12-hr, dan semua eksperimen dilakukan semasa fasa cahaya (0700 -1900) antara jam 1200 dan 1500. Kecuali dinyatakan sebaliknya, tikus mempunyai akses percuma ke chow makmal dan air minuman sebelum dan sepanjang percubaan. Kumpulan mengandungi tikus 6-8. Semua prosedur percubaan dilakukan mengikut protokol yang diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Institusi Universiti Missouri.

Pembedahan

Tikus telah dibiakkan dengan campuran ketamin dan xylazine (90 mg / kg dan 9 mg / kg; Sigma, St Louis, MO), dan 2 set panduan kannalan keluli tahan karat (23 gauge, 10 mm) kedua-dua di atas sempadan teras Acb dan shell lateral dan BLA dan diamankan ke tengkorak dengan skru keluli tahan karat dan resin boleh sembuh ringan (Pembekalan Pergigian New England, Boston). Selepas pembedahan, stylet wayar diletakkan di kannula panduan untuk mengelakkan oklusi. Koordinat untuk tapak yang bertujuan adalah seperti berikut: Acb: AP, + 1.4; ML, ± 2.0; DV, -7.8; BLA: AP, -2.8; ML, ± 4.7; DV, -8.6 (Koordinat DV mewakili penempatan jarum penyuntik 12.5mm yang memanjangkan corong 2.5mm kanula).

Radas

Penilaian tingkah laku pemakanan berlaku di dalam bilik berasingan dari ruang koloni dalam lapan Plexiglas (30.5 cm × 24.1 cm × 21.0 cm) ruang makan (Med Associates, St Albans, VT). Tikus mempunyai akses kepada libitum ad air dan kira-kira 35g diet sedap kecuali yang dinyatakan. Bilik makan dilengkapi dengan empat balok aktiviti locomotor inframerah yang terletak 6 cm di sebalik panjang ruang dan 4.3 cm di atas lantai. Berat skala automatik untuk tongkat makanan memantau penggunaan makanan. Rasuk inframerah tambahan merangkumi pintu masuk penumpang makanan menentukan bilangan dan tempoh setiap masuk kepala ke kawasan hopper. Corong makanan dan botol air terletak di sebelah yang sama (sudut bertentangan) satu dinding ruang, dan dulang sisa yang dilepas terletak di bawah lantai bar. Pengukuran termasuk aktiviti locomotor (bilangan pecahan rasuk mendatar), tempoh penyertaan corong (purata tempoh rasuk di pintu masuk corong), penyertaan corong (bilangan rehat rasuk di pintu masuk corong), dan jumlah yang digunakan ( gram pemakanan yang digunakan). Tempoh ujian terdiri daripada pemantauan tingkah laku di ruang makan oleh komputer yang menjalankan perisian Med-PC (Med Associates Version IV, St Albans, VT).

Prosedur

Drug Microinjection

D-Ala2, NMe-Phe4, Glyol5-enkephalin (DAMGO; Penyelidikan Biokimia, Natick, MA) dan muscimol (Sigma, St Louis, MO) kedua-duanya dibubarkan dalam garam 0.9% steril. Kawalan kenderaan sentiasa salin 0.9% garam. Infus disampaikan dengan pam microdrive (Harvard Apparatus, South Natick, MA), yang disambungkan melalui tiub polyethylene (PE-10), manakala tikus perlahan-lahan genggam. Penyuntik 12.5-mm tiga puluh meter digunakan, memanjangkan 2.5 mm di luar hujung kannula panduan. Kadar suntikan adalah 0.32 μl / min untuk Acb dan 0.16 μl / min untuk BLA, dengan jumlah keseluruhan infusi menjadi 93 s, menghasilkan jumlah 0.5-μl dan 0.25-μl, masing-masing. Satu minit tambahan dibenarkan untuk penyebaran.

reka bentuk

eksperimen 1

Menggunakan reka bentuk dalam subjek, semua kumpulan tikus menerima setiap empat kombinasi rawatan dadah pada empat hari rawatan berasingan dalam urutan yang seimbang. Semua ujian tingkah laku untuk kedua-dua eksperimen ini bermula selepas pembedahan pasca minggu 1 di ruang pemantauan pengambilan makanan Med-Associates. Tikus telah diberikan akses kepada diet di bilik ini selama 2hr setiap hari selama 6 berturut-turut hari. Pada 5th hari, penyuntik 10-mm dimasukkan dan dibiarkan di tempat untuk min 2, tanpa jumlah yang disuntik. Pada 6th hari, penyuntik 12.5-mm dimasukkan, dan salin diberikan untuk 93 s. Pada setiap hari ujian, muscimol (20 ng / 0.25 μl / bil bilateral) atau saline dimasukkan ke dalam BLA, diikuti oleh DAMGO (0.25 mg / 0.5 μl / bil bilateral) atau asid ke Acb, kombinasi. Sesi ujian 2hr bermula dengan segera selepas suntikan terakhir dan tikus diberikan akses libitum iklan kepada diet tinggi lemak. Terdapat sekurang-kurangnya hari 1 antara hari rawatan.

eksperimen 2

Empat kumpulan tikus, menggunakan reka bentuk antara subjek, dengan masing-masing mempunyai kanal dua hala yang ditujukan kepada Acb dan BLA. Tikus telah diberi akses kepada diet di dalam bilik-bilik ini untuk 2hr setiap hari selama 6 berturut-turut hari dan prosedur suntikan adalah sama dengan Eksperimen 1, namun setiap tikus hanya akan menerima 1 dari kombinasi rawatan ubat 4 mungkin. Penggunaan diet tinggi lemak pada hari 6th rawatan asas telah digunakan untuk mengimbangi pengalihan rawatan dadah untuk memastikan corak pengambilan kawalan dasar yang sama. Pada 8th hari, hewan diberi 1 4 rawatan dadah yang mungkin dan akses ke 8g diet sedap untuk 2hr.

Pengesahan Histologi Penempatan Cannula

Sejurus selepas sesi makan 2hr, haiwan dibuang dari bilik makan, sangat disumbang dengan ketamin dan xylazine (90 mg / kg dan 9 mg / kg), dan transcardially perfused. Otak dikeluarkan dan direndam dalam formalin (10%) semalaman di 4 ° C dan kemudian disembunyikan oleh pemindahan ke larutan sukrosa (20%) pada 4 ° C. Bahagian siri beku (50 μm) dikumpulkan melalui keseluruhan luas tapak suntikan, dipasang pada slaid gelatin, dan diwarnai dengan cresyl violet. Profil penempatan Cannula kemudian dianalisis untuk ketepatan dan data dari tikus dengan kannula yang tidak kena pada tempatnya tidak termasuk dalam analisis.

Imunohistokimia

Otak diiris pada ketebalan 40 μm dan disimpan dalam larutan penyangga fosfat 0.1M (PB, pH 7.4) pada 4 ° C. Protokol pewarnaan imunofluoresen terapung percuma adalah seperti berikut: Bahagian dibasuh (3 × 10 min) di PBS. Laman-laman mengikat yang tidak spesifik telah disekat dengan menggunakan penyelesaian menyekat [campuran serum kambing normal 10% (Jackson Immuno Research, West Grove, PA) dan 0.3% Triton X-100 (Sigma) di PBS)] untuk 2 hr. Seterusnya, bahagian-bahagian itu diinkub dalam campuran koktail yang mengandungi antibodi anti-c-Fos arnab (1: 5000; Calbiochem) dan ayam anti-Tyrosine Hydroxylase (VTA) atau tetikus anti-orexin-A (hypothalamus) Seksyen dibasuh (4 × 30 min) di PBS yang mengandungi 0.05% Tween-20 (PBST). Seterusnya, bahagian-bahagian diinkubasi untuk jam 2 dalam penampan penyekat, dengan koktel antibodi sekunder: Alexa Fluor 555 kambing Anti-arnab IgG dan Alexa Fluor 488 kambing IgG Anti-ayam (Invitrogen). Semua antibodi sekunder digunakan pada kepekatan 1 yang disyorkan: 500. Seksyen dibasuh (4 × 30 min) di PBST dan PB (2 × 10 min). Bahagian-bahagian dipasang pada slaid super-frost (VWR International, USA) dan dibenarkan kering pada suhu bilik sementara terlindung dari cahaya. Menggunakan kit pelekap anti-pudar ProLong (Invitrogen) kepingan itu meliputi lipatan dan disimpan di 4 ° C. Semua inkubasi dilakukan pada suhu bilik kecuali antibodi utama yang diinkubasi pada 4 ° C. Untuk mengawal variasi dalam tindak balas imunohistokimia, tisu dari kumpulan rawatan yang berbeza telah bertindak balas bersama. Selain itu, pewarnaan tidak hadir dalam eksperimen kawalan dengan penolakan antibodi utama.

Analisis Perilaku Tingkah Laku

Untuk percubaan 1, semua langkah pemakanan untuk sesi 2-hr dan pelbagai syarat rawatan dianalisis dengan ANOVA dua faktor dalam rawatan (Acb Treatment X Amygdala Rawatan), dengan tahap untuk setiap faktor sama ada kenderaan atau dadah . Untuk percubaan 2, semua langkah pemakanan dianalisis menggunakan dua faktor antara-subjek ANOVA (Rawatan Acb Rawatan X Amygdala), dengan tahap bagi setiap faktor sama ada kenderaan atau dadah.

Mengira prosedur, pengimejan, dan analisis statistik

Untuk penilaian kuantitatif ungkapan immunoreactivity dalam hypothalamus (termasuk hypothalamus lateral, kawasan perindustrian, hypothalamus dorsomedial) dan VTA, tiga kepingan tisu paralel anatomis dari setiap hemisfera (jumlah 6 setiap rantau) dianalisis dan diverifikasikan. Semua imej dihasilkan melalui 4 × atau 10 × objektif dengan mikroskop confocal menggunakan perisian pengimejan Slidebook 4.3 (Inovasi Pengimejan Pintar, Denver, CO). Bergantung pada rantau tertentu, immunoreactivity fluorescent dalam kepingan 40μm dicatatkan untuk sama ada c-Fos sahaja, c-Fos / TH, atau saluran berlabel c-Fos / OrexinA, dipisahkan dengan set ambang eksklusif. Imej kemudian dipaparkan pada skrin penuh menggunakan perisian percuma domain awam berasaskan java ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA), sebagai program pemprosesan imej dan analisis yang membolehkan penandaan setiap neuron individu dan pewarnaan positif untuk setiap saluran adalah dikira dalam fesyen buta-ke-rawatan. Neuron diklasifikasikan sebagai c-Fos sahaja, hanya peptida, atau berlabel dua mengikut kehadiran produk tindak balas antibodi latar belakang di dalam nukleus sel.

Semua kawasan dirancang dan dipetakan menggunakan The Rat Brain Atlas (Paxinos & Watson, 1998). Kawasan Ventral Tegmental dan Tyrosine Hydroxylase; bahagian yang dipilih adalah antara −5.2 dan .5.5mm anterior ke bregma. Pada setiap tingkat, wilayah yang mengandung sel tirosin hidroksilase (TH-IR) dan c-Fos-IR dihitung di kedua belahan. Hypothalamus dan Orexin-A; bahagian yang dipilih adalah antara −2.8 dan .3.3 mm anterior ke bregma. Kawasan hipotalamus (antara −2.8 dan −3.3 mm) yang didapati mengandungi sel positif orexin-A dibahagikan kepada tiga kawasan dari medial hingga lateral. Semua sel di dalam, ventral, dan punggung ke fornix termasuk kawasan tengah yang dilabel sebagai perifornical (PeF). Sel berlabel Orexin-A lateral ke rantau ini dimasukkan ke dalam hipotalamus lateral (LH), dan medial dari fornix berada dalam kumpulan medial (DMH), yang bertindih dengan hipotalamus dorsomedial. Neuron dikira di kedua belahan otak.

Hasil

Semua kesan rawatan dinyatakan dalam rujukan ke lokasi (s) ubat atau pentadbiran kenderaan (iaitu intra-Acb DAMGO). Memandangkan semua tikus juga diberi akses kepada dan menggunakan jumlah diet yang tinggi lemak, semua perubahan dalam tingkah laku makan yang berkaitan (Exp 1 dan 2) dan corak pengaktifan saraf (Exp 2) semestinya kesan gabungan setiap ubat masing-masing rawatan dan pemakanan yang digunakan.

Tingkah laku makan

eksperimen 1

Pengaruh inactivation BLA terhadap tingkah laku makan tinggi lemak yang didorong oleh pentadbiran intra-Acb DAMGO.

Penggunaan

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1a, ANOVA yang dijalankan pada data penggunaan makanan menunjukkan kesan utama yang signifikan dalam rawatan Acb (F (1, 7) = 13.9, p <.01), rawatan BLA (F (1, 7) = 8.6, p <.05), dan interaksi rawatan Acb × BLA (F (1, 7) = 8.9, p <.05). Analisis post-hoc mendedahkan bahawa rawatan garam intra-Acb DAMGO + intra-BLA menyebabkan tahap penggunaan yang jauh lebih tinggi (p <.05) berbanding dengan kedua-dua rawatan kawalan (intra-Acb saline + intra-BLA saline; intra-Acb saline + intra-BLA muscimol), dan rawatan intra-BLA muscimol menyekat peningkatan ini (p <.05).

Rajah 1 

Pemeriksaan tingkah laku: A) Jumlah diet tinggi lemak yang digunakan (akses libitum iklan) B) jumlah masuk makanan harimau, C) jumlah penyertaan beg makanan, dan jumlah aktiviti locomotor (iaitu pecah rasuk mendatar). Rawatan 4 ditadbir masuk ...
Tempoh kemasukan makanan harimau

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1b, ANOVA yang dijalankan pada data catatan masuk makanan harimau menunjukkan kesan utama yang signifikan dalam rawatan Acb (F (1, 7) = 36.3, p <.001), rawatan BLA (F (1, 7) = 12.1, p <.05), dan interaksi rawatan Acb × BLA (F (1, 7) = 16.5, p <.005). Analisis post-hoc menunjukkan bahawa rawatan intra-Acb DAMGO + intra-BLA muscimol menyebabkan jumlah masa masuk hopper makanan yang jauh lebih tinggi berbanding dengan semua rawatan lain (p <.001), tanpa rawatan lain yang berbeza antara satu sama lain.

Penyertaan hopper makanan

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1c, ANOVA yang dijalankan ke atas data masuk makanan hopper menunjukkan kesan utama yang signifikan dalam rawatan Acb (F (1, 7) = 10.6, p <.05), sementara rawatan BLA menghampiri kepentingan (F (1, 7) = 3.89, p = .08), dan interaksi rawatan Acb × BLA (F (1, 7) = 7.9, p <.05). Analisis post-hoc menunjukkan bahawa rawatan intra-Acb DAMGO + intra-BLA muscimol menyebabkan kemasukan hopper makanan lebih banyak berbanding semua rawatan lain (p <.05), tanpa rawatan lain yang berbeza antara satu sama lain.

Aktiviti Locomotor

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1c, ANOVA yang dijalankan ke atas data masuk makanan hopper menunjukkan kesan utama yang signifikan dalam rawatan Acb (F (1, 7) = 23.5, p <.005), tetapi tiada kesan utama rawatan BLA (F (1, 7) = 1.4, p > .05), dan tiada interaksi rawatan Acb × BLA (F (1, 7) = .056, p > .05).

eksperimen 2

Pengaruh inactivation BLA terhadap tingkah laku makan tinggi lemak dan pola pengaktifan saraf yang didorong oleh pentadbiran intra-Acb DAMGO.

Tugasan rawatan dadah adalah seimbang oleh tahap pengambilan lemak tinggi dari 6th hari asas. Tahap pengambilan ini adalah seperti berikut: SAL-SAL, 5.1g; SAL-DAM, 4.9g; MUSC-SAL, 4.9g; MUSC-DAM, 4.8g.

Penggunaan

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2a, ANOVA yang dijalankan pada data penggunaan makanan menunjukkan kesan utama yang signifikan dalam rawatan Acb (F (3, 24) = 26.60, p <.001), tetapi tiada kesan rawatan BLA (F (3, 24) = 0.02, ns) atau interaksi rawatan Acb × BLA (F (3, 24) = 0.61, ns).

Rajah 2 

Pemeriksaan tingkah laku: a) Jumlah diet tinggi lemak yang dimakan (garis putus-putus mencerminkan akses terhad 8g); b) bilangan penyertaan beg makanan, c) jumlah masuk makanan harimau, dan d) bilangan aktiviti locomotor (iaitu rehat rasuk mendatar). Rawatan 4 ...
Penyertaan hopper makanan

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2b, ANOVA yang dijalankan ke atas jumlah penyertaan corong di seluruh sesi makan menunjukkan kesan utama yang signifikan dalam rawatan Acb (F (3, 24) = 8.55, p <.01), tetapi tiada kesan rawatan rawatan BLA (F (3, 24) = 1.68, ns) atau interaksi rawatan Acb × BLA (F (3, 24) = 0.39, ns).

Tempoh kemasukan makanan harimau

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2c, satu ANOVA yang dijalankan sepanjang tempoh semua penyertaan corong di seluruh sesi makan menunjukkan kesan utama yang signifikan dalam rawatan Acb (F (3, 24) = 12.45, p = .001), tetapi tiada kesan rawatan BLA (F (3, 24) = .62, ns) atau interaksi rawatan Acb × BLA (F (3, 24) = 0.07, ns).

Aktiviti Locomotor

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2d, ANOVA yang dijalankan ke atas jumlah lokomotor di seluruh sesi makan menunjukkan kesan utama yang signifikan dalam rawatan Acb (F (3, 24) = 12.93, p = .001), tetapi tiada kesan rawatan BLA (F (3, 24) = .198, ns) atau Acb × BLA interaksi rawatan (F (3, 24) = 0.61, ns).

Imunohistokimia

Kawasan Tegmen Ventral

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3a, ANOVA yang dilakukan pada sel IR c-Fos di VTA mendedahkan kesan yang signifikan terhadap rawatan Acb (F (3, 24) =, 25.67 p <.001), tetapi tidak ada kesan rawatan BLA (F (3, 24) = 1.13, ns) atau interaksi antara rawatan (F (3, 24) = 2.80, ns). ANOVA yang dilakukan pada peratusan sel TH-IR yang menunjukkan c-Fos IR menunjukkan kesan rawatan Acb (F (3, 24) = 6.33, p <.05), tetapi tidak ada kesan rawatan BLA pada peratusan TH- Sel IR yang menunjukkan c-Fos IR (F (3, 24) = .07, ns) tidak ada interaksi yang signifikan antara rawatan (F (3, 24) = .63, ns).

Rajah 3 

a) Bilangan sel VTA yang menyatakan c-Fos IR; b) Peratusan sel TH-IR VTA yang menyatakan c-Fos IR. c) Bilangan sel yang menyatakan c-Fos-IR di kawasan hipotalamus (PeF) d) Peratusan sel PeF Orexin-A yang mengekspresikan c-Fos-IR. Rawatan 4 ...

Hipotalamus perindustrian

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3b, ANOVA yang dijalankan pada IR-IR dalam PeF (rantau yang dianalisis yang digambarkan dalam Rajah 5b) menunjukkan kesan yang ketara terhadap rawatan Acb (F (3, 24) = 30.78, p <.001), rawatan BLA (F (3, 24) = 30.52, p <.001) dan interaksi rawatan Acb × BLA (F (3, 24) = 8.75, p <.01). ANOVA yang dilakukan pada peratusan sel OrxA-IR yang menunjukkan c-Fos IR menunjukkan kesan yang signifikan terhadap rawatan Acb (F (3, 24) = 55.85, p <.001), rawatan BLA (F (3, 24) = 23.52, p <.001), dan interaksi rawatan Acb × BLA (F (3, 24) = 14.32, p <.001). Dalam Gambar 5a dan 5b, analisis post hoc menunjukkan bahawa pengaktifan BLA secara signifikan mengurangkan ekspresi c-Fos yang disebabkan oleh DAMGO intra-Acb dan mengurangkan bilangan sel orexin yang menyatakan c-Fos (p <.05).

Dorsomedial hypothalamus

Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 1, ANOVA yang dilakukan untuk bilangan sel IR c-Fos dalam DMH menunjukkan kesan yang signifikan terhadap rawatan intra-Acb (F (3, 24) = 20.19, p <.001), tetapi tidak ada kesan rawatan intra-BLA ( F (3, 24) = 1.63, ns) atau interaksi rawatan Acb × BLA (F (3, 24) = 0.05, ns). ANOVA yang dilakukan pada peratusan sel OrxA-IR yang menunjukkan c-Fos IR menunjukkan kesan yang signifikan terhadap rawatan Acb (F (3, 24) = 13.39, p <.001), rawatan BLA (F (3, 24) = 5.85, p <.05), tetapi tidak ada interaksi rawatan Acb × BLA (F (3, 24) = .89, p = .36).

Jadual 1 

Bilangan sel yang menyatakan c-Fos-IR (jumlah) dalam hipotalamus lateral dan dorsomedial hypothalamus dan peratusan sel PeF Orexin-A yang mengekspresikan c-Fos-IR (% orexin-A). Rawatan 4 ditadbir, termasuk intra-Acb DAMGO atau saline (SAL) dengan segera ...

Hipothalamus lateral

Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 1, ANOVA yang dilakukan untuk bilangan sel IR c-Fos di LH menunjukkan tiada kesan rawatan Acb ((F (3,24) = .11, ns) atau BLA ((F (3, 24 = 6.82, p <) .05) dan tidak ada interaksi (F (3,24) = .26, ns). ANOVA dilakukan pada peratusan sel OrxA-IR yang menunjukkan c-Fos IR tidak menunjukkan kesan yang signifikan terhadap rawatan Acb (F (3, 24 ) = .64, ns), rawatan BLA (F (3, 24) = .08, ns), atau interaksi rawatan (F (3, 24) = .77, ns.)

Perbincangan

Di bawah ad libitum keadaan akses lemak tinggi, inaktivasi BLA mengurangkan pengambilan lemak tinggi yang dihasilkan oleh intra-Acb DAMGO, sambil meninggalkan tingkah laku pendekatan penunggang makanan yang dibesar-besarkan, mengesahkan laporan sebelumnya (). Eksperimen kedua meneliti fenomena yang sama ini, tetapi di bawah keadaan akses diet yang berlemak tinggi, membolehkan semua kumpulan rawatan kecuali kumpulan DAMGO intra-Acb sahaja yang dirawat, untuk mencapai kenyang (iaitu mengambil jumlah yang diperhatikan di bawah syarat-syarat ad lib di Exp 1). Haiwan intra-Acb yang dirawat dengan asid amino, dengan atau tanpa pengaktifan BLA, mengamalkan tahap pemakanan yang tinggi lemak dan mempamerkan tahap tingkah laku pendekatan seperti yang diramalkan. Kedua-dua kumpulan rawatan yang mempunyai minat khusus, yang menerima intra-Acb DAMGO dengan atau tanpa aktifasi BLA, memakan hampir semua diet tinggi lemak yang terdapat pada min 30 pertama sesi ujian 2hr dan menunjukkan pola identik kelakuan yang selera (iaitu nombor penyertaan makanan harimau makanan, tempoh kemasukan makanan harimau) sepanjang min 90 akhir, seperti yang diramalkan. Rawatan DAMGO Intra-Acb membesar-besarkan kedua-dua bilangan dan tempoh tingkah laku pendekatan corong makanan tanpa mengira aktifitas BLA, berbanding kedua-dua kumpulan yang dirawat di dalam intra Acb seperti yang dilaporkan sebelum ini (). Yang penting, seperti yang diperhatikan dalam eksperimen 1 dan sebelumnya (, ), rawatan intra-Acb DAMGO, tanpa pengaktifan BLA, membawa kepada tahap penggunaan sekurang-kurangnya dua kali ganda jumlah yang disediakan di bawah keadaan akses terhad. Oleh itu, corak aktiviti neural pada tikus yang menerima rawatan intra-Acb DAMGO tanpa inactivation BLA harus mencerminkan kedua-dua motivasi pendekatan and mengambil makanan tambahan di luar apa yang ada. Sebaliknya, corak aktiviti neural dalam tikus yang menerima rawatan intra-Acb DAMGO, dengan BLA yang tidak diaktifkan, harus mencerminkan peningkatan motivasi untuk pendekatan makanan, tetapi motivasi yang dikurangkan mengambil makanan tambahan, berbanding tikus yang dirawat dengan DAMGO intra-Acb tanpa inaktifasi BLA. Ini penting untuk bukan sahaja rasional untuk reka bentuk, tetapi tafsiran data semasa. Tahap diet yang ada dipilih bukan sahaja untuk memegang tahap penggunaan dalam julat yang terhad di seluruh kumpulan, tetapi juga untuk memastikan tikus dalam setiap kumpulan rawatan, kecuali kumpulan DAMGO sahaja, mencapai atau mendekati tahap (seperti yang ditentukan oleh Eksperimen 1 dan sebelumnya penemuan, lihat ).

Pentadbiran DAMGO Intra-Acb dengan ketara meningkatkan VTA c-Fos IR dalam neuron dopaminergik berbanding rawatan kawalan salin, dan pentadbiran muscimol intra-BLA tidak mempunyai pengaruh terhadap kenaikan ini. Kajian terdahulu menunjukkan bahawa peningkatan c-Fos IR dalam VTA dan khususnya, neuron VTA dopamin (DA), memainkan peranan utama dalam ganjaran, motivasi, dan penagihan dadah (; ; ). Pentadbiran antagonis dopamin ke dalam acb blok pendekatan tingkah laku makan selera tetapi tidak mempunyai kesan ke atas penggunaan chow disebabkan oleh kelaparan () atau penggunaan lemak intra-Acb DAMGO (). Pentadbiran intra-Acb agonis dopamin meningkatkan nisbah progresif yang bertindak balas untuk penguat makanan, tetapi tidak memberi kesan kepada pemberian makanan percuma (). Data-data ini dan lain-lain mencadangkan tingkah laku pendekatan makanan selera makan yang diperhatikan dalam kedua-dua kumpulan rawatan yang ditadbir oleh DAMGO intra-Acb, tanpa dan tanpa aktif BLA, dimediasi dengan peningkatan aktiviti dalam neuron dopaminergik VTA.

Corak aktiviti neuron PeF orexin-A sepadan dengan corak penggunaan biasanya diperhatikan berikutan kesan rawatan yang sama di bawah keadaan akses ad lib (, ), dengan rawatan DAMGO intra-Acb yang membawa kepada penggunaan yang lebih tinggi daripada apa-apa rawatan lain. Kami juga mendapati bahawa intra-Acb DAMGO meningkatkan aktiviti DMH c-Fos tanpa mengira rawatan BLA, tetapi hanya intra-DAMGO sahaja meningkatkan nisbah neuron orexin yang menyatakan c-Fos berbanding kawalan. Walaupun peranannya dalam tingkah laku makan yang disebabkan oleh DAMGO (; ), DAMGO tidak meningkatkan aktiviti LH c-Fos secara signifikan, walaupun tidak membenarkan haiwan mencapai kenyang.

Hipotalamus telah lama dianggap sebagai pusat untuk peraturan autonomi dari homeostasis tenaga; termasuk peraturan makan, gairah, dan ganjaran (, ). Neuron yang menyatakan peptida orexin-A orexin-A dan hormon menumpukan melanin (MCH) diketahui padat memasuki kawasan sisi hipotalamus (), khususnya kawasan perindustrian. Penggunaan diet tinggi lemak diperhatikan didorong oleh orexin-A yang dikendalikan secara berpusat (A) disekat oleh pentadbiran terlebih dahulu terhadap neroxone antagonis opioid (), mencadangkan interaksi peptida opioid dan orexin dalam pengantara penggunaan makanan yang enak. Pentadbiran intra-VTA orexin-A juga merangsang neuron dopamin (Borgland et al., 2006). Menyekat isyarat orexin dalam VTA mengurangkan pemakanan DAMGO yang disebabkan oleh diet tinggi lemak (), tetapi sejauh mana ini adalah dengan mengurangkan kelakuan selera yang boleh menyumbang kepada peningkatan penggunaan tidak diketahui. Oleh itu, penemuan semasa bahawa aktiviti dopaminergik VTA yang meningkat berikutan intra-Acb DAMGO tidak terjejas oleh inaktifasi BLA, walaupun mengurangkan aktiviti PeF orexin, menimbulkan kepentingan pencirian tingkah laku kedua-dua fasa selera makan dan tingkah laku. Di samping itu, data-data ini memberikan hipotesis yang boleh diuji untuk mengkaji pengaruh modulasi dopaminergik PeF orexin dan VTA terhadap pendekatan didorong oleh opioid dan fasa penyediaan makanan.

Kajian semasa menggunakan akses diet terhad (iaitu gram yang ada) untuk mengawal pengaruh tahap penggunaan perbezaan mengikuti pelbagai rawatan ubat. Kajian itu juga menghadkan peperiksaannya kepada satu diet; Oleh itu, kemungkinan bahawa makanan yang didorong oleh opioid dari diet yang lain boleh dikawal sama seperti yang sama. Pemilihan diet lemak tinggi didorong oleh pencirian masa lalu rangkaian yang berkaitan yang mendedahkan kepada pemberian lemak tinggi intra-Acb DAMGO (; untuk semakan), terutamanya peranan BLA (, ). Tidak diketahui sama ada penemuan sekarang adalah spesifik untuk diet tinggi lemak, atau sama ada ia juga akan diperhatikan menggunakan diet alternatif. Menariknya, kajian baru-baru ini mendapati bahawa walaupun di antara diet yang sangat sedap, terdapat perbezaan yang jelas dalam corak pengaktifan c-fos di seluruh kawasan pengawalan pemakanan utama litar mesokortikolimbik (). Kajian masa depan diperlukan untuk menentukan sama ada penemuan semasa adalah khusus untuk diet tinggi lemak.

Secara ringkasnya, data-data ini memberi gambaran tentang bagaimana BLA bertindak balas terhadap pengaktifan opioid Acb untuk memacu penggunaan secara khusus, tetapi tidak mendekati tingkah laku, yang berkaitan dengan diet tinggi lemak. Data menunjukkan bahawa kelakuan penggunaan yang didorong oleh intra-Acb DAMGO mungkin disebabkan oleh peningkatan aktiviti neuron orexin-A dalam PeF, manakala peningkatan tingkah laku pendekatan makanan kelihatan dikaitkan dengan peningkatan aktiviti dopaminergik VTA, dengan pengaktifan BLA hanya diperlukan untuk mematuhi fasa penggunaan. Data-data ini memberikan pemahaman yang lebih baik tentang dua tingkah laku pemakanan yang disosialisasikan dalam model pemakanan yang terkenal. Penyelidikan ini memperluaskan pengetahuan tentang litar saraf yang kritikal terhadap pemakanan yang didorong oleh keseronokan dan membawa implikasi untuk memahami tingkah laku makan maladaptive yang terlibat dalam pembangunan obesiti dan tingkah laku ketagihan makanan.

​

Rajah 4 

Lukisan garis skematik, diadaptasi dari atlas Paxinos & Watson (1998), yang menggambarkan bahagian koronal yang mengandungi kawasan otak yang dianalisis yang digariskan di kawasan biru (kawasan kelabu) dan diperbesar secara langsung di bawah. Kawasan: (A) kawasan tegar ventral, VTA; (B) dorsomedial ...

Penghargaan

Penulis ingin mengiktiraf sokongan pemberian DA024829 dari Institut Penyalahgunaan Dadah Kebangsaan ke MJW.

Nota kaki

Penulis mengisytiharkan tiada konflik kepentingan.

Rujukan

  1. Badiani A, Leone P, Noel MB, Stewart J. Ventral, mekanisme opioid kawasan tegangan dan modulasi tingkah laku ingestif. Penyelidikan Otak. 1995; 670 (2): 264-276. [PubMed]
  2. Baldo BA, Sadeghian K, Basso AM, Kelley AE. Kesan dopamine terpilih D1 atau sekatan reseptor D2 dalam inti subgenag menujukkan pada tingkah laku pencernaan dan aktiviti motor yang berkaitan. Behav Brain Res. 2002 Dec 2; 137 (1-2): 165-177. [PubMed]
  3. Baldo BA, Pratt WE, Akan MJ, Hanlon EC, Bakshi VP, Cador M. Prinsip-prinsip motivasi yang ditunjukkan oleh pelbagai fungsi substrat neuropharmacological dan neuroanatomical yang mendasari tingkah laku makan. Neurosci Biobehav Rev. 2013 Nov; 37 (9 Pt A): 1985-1998. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  4. Ball GF, Balthazart J. Betapa bergunanya perbezaan dan selera makan untuk pemahaman kita terhadap kawalan neuroendokrin terhadap tingkah laku seksual? Horm Behav. 2008 Feb; 53 (2): 307-311. jawapan pengarang 315-8. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  5. Berridge KC. Konsep motivasi dalam neurosains tingkah laku. Physiol Behav. 2004 Apr; 81 (2): 179-209. Tinjauan. [PubMed]
  6. Berridge KC. Ganjaran makanan 'Suka' dan 'Mahukan': substrat otak dan peranan dalam gangguan makan. Fisiologi dan Tingkah Laku. 2009; 97 (5): 537–550. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  7. Cason AM, Smith RJ, Tahsili-Fahadan P, Moorman DE, Sartor GC, Aston-Jones G. Peranan orexin / hypocretin dalam pencarian ganjaran dan ketagihan: implikasi untuk obesiti. Fisiologi dan Perilaku. 2010; 100 (5): 419-428. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  8. Clegg DJ, Air EL, Woods SC, Seeley RJ. Makan yang ditimbulkan oleh orexin-A, tetapi tidak melanin-menumpukan hormon, adalah pengantara opioid. Endokrinologi. 2002; 143 (8): 2995-3000. [PubMed]
  9. Craig W. Appetites dan aversion sebagai penyokong naluri. Buletin Biologi. 1918; 34: 91-107. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  10. Tarikh Y, Ueta Y, Yamashita H, Yamaguchi H, Matsukura S, Kangawa K, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakazato M. Orexins, peptida hipotalamik orexigenik, berinteraksi dengan sistem autonomi, neuroendokrin dan neuroregulatory. Proc Natl Acad Sci USA. 1999; 96 (2): 748-753. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  11. Dela Cruz JA, Coke T, Karagiorgis T, Sampson C, Icaza-Cukali D, Kest K, Ranaldi R, Bodnar RJ. c-Fos induksi dalam sasaran unjuran jalur dopamin mesotelencephalic dan striatum dorsal berikutan pengambilan gula dan lemak pada tikus. Bruce Res Bull. 2015 Feb; 111: 9-19. [PubMed]
  12. Bidang HL, Hjelmstad GO, Margolis EB, Nicola SM. Neuron kawasan tegeg ventral dalam tingkah laku selera dan pengukuhan positif. Kajian Tahunan Neurosains. 2007; 30: 289-316. [PubMed]
  13. Hanlon EC, Baldo BA, Sadeghian K, Kelley AE. Meningkatkan pengambilan makanan atau tingkah laku mencari makanan yang disebabkan oleh rangsangan GABAergik, opioid, atau dopaminergik dari accumbens nukleus: adakah ia lapar? Psychopharmacology (Berl) 2004 Mar; 172 (3): 241-247. [PubMed]
  14. Harris GC, Aston-Jones G. Arousal dan ganjaran: dikotomi dalam fungsi orexin. Trend dalam Neuroscience. 2006; 29 (10): 571-577. [PubMed]
  15. Ikemoto S, Panksepp J. Dissociations antara tanggapan selera dan penyesuaian oleh manipulasi farmakologi bagi kawasan otak yang berkaitan dengan ganjaran. Behav Neurosci. 1996 Apr; 110 (2): 331-345. [PubMed]
  16. Jager G, Witkamp RF. Sistem endokannabinoid dan selera makan: kesesuaian untuk ganjaran makanan. Nutr Res Rev. 2014 Jun 2; 27 (1): 172-185. [PubMed]
  17. Jennings JH, Ung RL, Resendez SL, Stamatakis AM, Taylor JG, Huang J, Veleta K, Kantak PA, Aita M, Shilling-Scrivo K, Ramakrishnan C, Deisseroth K, Otte S, Stuber GD. Menggambarkan dinamika rangkaian hypothalamic untuk tingkah laku selera dan perakaunan. Sel. 2015 Jan 29; 160 (3): 516-527. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  18. Kalra SP, Dube MG, Pu S, Xu B, Horvath TL, Kalra PS. Mengendalikan selera makan yang mengawal selia dalam peraturan hipotalamik berat badan. Ulasan Endokrin. 1999; 20 (1): 68-110. [PubMed]
  19. Kelley AE, Baldo BA, Pratt WE, Will MJ. Litar corticostriatal-hypothalamic dan motivasi makanan: integrasi tenaga, tindakan dan ganjaran. Physiol Behav. 2005 Dec 15; 86 (5): 773-795. [PubMed]
  20. Lorenz K. Kaedah perbandingan dalam mengkaji corak tingkah laku semula jadi. Symp. Soc. Exp. Biol. 1950; 4: 221-268.
  21. Nicola SM, Deadwyler SA. Kadar penembusan nukleus accumbens neuron adalah bergantung kepada dopamine dan mencerminkan masa tingkah laku mencari kokain pada tikus dengan jadual nisbah progresif tetulang. J Neurosci. 2000 Jul 15; 20 (14): 5526-5537. [PubMed]
  22. Park TH, Carr KD. Corak Neuratraktikkan imunoreaktiviti seperti Fos yang disebabkan oleh makanan yang enak dan persekitaran yang dipasangkan dengan makanan dalam tikus saline dan naltrexone yang dirawat. Penyelidikan Otak. 1998; 805: 169-180. [PubMed]
  23. Akan MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Nukleus accumbens mu-opioids mengawal pengambilan diet tinggi lemak melalui pengaktifan rangkaian otak yang diedarkan. J Neuroscience. 2003; 23 (7): 2882-2888. [PubMed]
  24. Akan MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Amigdala adalah kritikal untuk penganan opioid-mediated makan lemak. Neuroreport. 2004; 15 (12): 1857-1860. [PubMed]
  25. Akan MJ, Pratt WE, Kelley AE. Pencirian farmakologi pemakanan lemak tinggi yang disebabkan oleh rangsangan opioid striatum ventral. Physiol Behav. 2006 Sep 30; 89 (2): 226-234. [PubMed]
  26. Akan MJ, Pritchett CE, Parker KE, Sawani A, Ma H, Lai AY. Pencirian tingkah laku penglibatan amygdala dalam mengantarkan tingkah laku pemacu yang didorong oleh opioid intra-accumbens. Neurosains Tingkah Laku. 2009; 123 (4): 781-793. [Artikel percuma PMC] [PubMed]
  27. Yamanaka A, Kunii K, Nambu T, Tsujino N, Sakai A, Matsuzaki I, Miwa Y, Goto K, pengambilan Sakurai T. Orexin yang melibatkan pengambilan neuropeptida Y. Penyelidikan Otak. 2000; 859 (2): 404-409. [PubMed]
  28. Zhang M, Kelley AE. Pengambilan makanan tinggi lemak berikutan rangsangan mu-opioid yang teguh: pemetaan microinjection dan ekspresi fos. Neurosains. 2000; 99 (2): 267-277. [PubMed]
  29. Zhang M, Kelley AE. Pengambilan penyelesaian sakarin, garam, dan etanol ditingkatkan dengan penyerapan agonis mu opioid ke dalam accumbens nukleus. Psychopharmacology (Berl) 2002; 159 (4): 415-423. [PubMed]
  30. Zhang M, Balmadrid C, Kelley AE. Nucleus accumbens opioid, GABaergic, dan modulasi dopaminergik motivasi makanan yang sedap: kesan yang berbeza didedahkan oleh kajian nisbah progresif dalam tikus. Behav Neurosci. 2003 Apr; 117 (2): 202-211. [PubMed]
  31. Zheng H, Patterson LM, Berthoud HR. Isyarat Orexin di kawasan tegegalal ventral diperlukan untuk selera makan tinggi yang disebabkan oleh rangsangan opioid nukleus accumbens. J Neuroscience. 2007; 27 (41): 11075-11108. [PubMed]