Source
Jabatan Biologi Sel, Universiti Cincinnati, Cincinnati, Ohio, Amerika Syarikat.
Abstrak
LATAR BELAKANG:
Ketidakupayaan untuk menghalang tingkah laku apabila mereka menjadi maladaptive adalah komponen beberapa penyakit psikiatri, dan korteks prefrontal medial (mPFC) dikenalpasti sebagai pengantara berpotensi perencatan perilaku. Kajian semasa diuji jika mPFC terlibat dalam perencatan tingkah laku seksual apabila dikaitkan dengan hasil aversive.
KAEDAH:
Menggunakan tikus jantan, kesan lesi di kawasan infralimbik dan prelimbik mPFC mengenai ekspresi tingkah laku seksual dan keupayaan untuk menghalang mengawan diuji dengan menggunakan paradigma penghindaran kontingen-kontingen.
KEPUTUSAN:
Lesi korteks prefrontal medial tidak mengubah ekspresi tingkah laku seksual. Sebaliknya, luka-luka mPFC menyekat pengambilalihan pengejaran seks dan haiwan lesi yang berterusan, berbanding dengan perencatan perilaku yang mantap terhadap peradangan dalam haiwan mPFC yang utuh, yang mengakibatkan hanya 22% dari hewan lelaki yang utuh yang berterusan untuk pasangan. Walau bagaimanapun, tikus dengan luka mPFC mampu membentuk pilihan tempat yang dikondisikan untuk ganjaran seksual dan penghindaran tempat yang dikondisikan untuk litium klorida, menunjukkan bahawa luka-luka ini tidak mengubah pembelajaran bersekutu atau kepekaan untuk litium klorida.
KESIMPULAN:
Kajian semasa menunjukkan bahawa haiwan dengan lesi mPFC kemungkinan mampu membentuk hubungan dengan hasil yang tidak menyenangkan dari tingkah laku mereka tetapi tidak mempunyai kemampuan untuk menekan mencari ganjaran seksual dalam menghadapi akibat yang tidak disukai. Data ini dapat menyumbang kepada pemahaman yang lebih baik mengenai patologi umum yang mendasari gangguan kawalan impuls, kerana tingkah laku seksual kompulsif mempunyai prevalensi komorbiditas yang tinggi dengan gangguan psikiatri dan penyakit Parkinson.
PENGENALAN
Korteks prefrontal medial (mPFC) terlibat dalam banyak fungsi perintah tinggi sistem saraf mamalia termasuk peraturan emosional, kelakuan seperti kecemasan, serta fleksibiliti tingkah laku dan membuat keputusan (1-5). Pengambilan keputusan berasaskan ganjaran dianggap dikawal oleh litar neuron yang terdiri daripada mPFC, amygdala, dan striatum (6) di mana mPFC bertindak sebagai pengawal "bawah ke bawah" proses ini (7,8). Ciri utama pembuatan keputusan berasaskan ganjaran adalah keupayaan untuk menjejaki hubungan "tindak balas-hasil" dari masa ke masa (9). Dengan cara ini, apabila akibat yang berkaitan dengan tindakan tingkah laku menjadi tidak menguntungkan, kekerapan tindakan ini berkurang. Ini mengakibatkan penyesuaian tingkah laku positif, dan respons ini bergantung kepada fungsi mPFC yang utuh (8, 10). Ketidakupayaan untuk mengubah tindakan tingkah laku sebaik sahaja ia membawa kepada akibat buruk adalah gejala yang biasa dengan pelbagai gangguan ketagihan (11-15).
Tingkah laku seksual lelaki rodent adalah tingkah laku berasaskan ganjaran semula jadi di mana hubungan tindak balas hasil dipantau untuk mencapai matlamat penggolongan (16). Walau bagaimanapun, tikus jantan tidak bersandar apabila tingkah laku seksual dipasangkan dengan rangsangan litium klorida (LiCl; 17, 18). Aktiviti mPFC telah dikaitkan dengan tingkah laku seksual lelaki dalam tikus (19-25) dan manusia (26). Walau bagaimanapun, peranan sebenar mPFC dalam tingkah laku seksual masih tidak jelas. Matlamat kajian ini adalah untuk mencirikan kesan lesi mPFC terhadap ekspresi tingkah laku seksual, dan perolehan perencatan tingkah laku terhadap tingkah laku seksual dalam tikus menggunakan model penyekat kontingen-kontingen. Lessi termasuk nuklei infralimbik (IL) dan prelimbic (PL) mPFC, kerana sub-kawasan ini telah ditunjukkan untuk memperlihatkan kawasan-kawasan otak yang terlibat dalam pengawalan tingkah laku seksual (20). Keputusan dari kajian ini menunjukkan bahawa fungsi mPFC utuh tidak diperlukan untuk ungkapan normal tingkah laku seksual. Sebaliknya, keputusan menyokong hipotesis bahawa mPFC mengawal pelaksanaan perencatan tingkah laku terhadap tingkah laku seksual apabila tingkah laku ini dikaitkan dengan hasil yang aversive.
BAHAN DAN KAEDAH
haiwan
Lelaki dewasa (250-260 gram) Tikus Sprague Dawley yang diperolehi dari makmal Harlan (Indianapolis) ditempatkan secara berasingan di dalam bilik yang dilancarkan secara buatan pada kitaran cahaya / gelap yang terbalik (12: 12 h, dimatikan pada 10 AM) pada suhu 72 ° F. Makanan dan air disediakan sepanjang masa. Ovariectomized, estrogen (kapsul silastic sc dengan 5% 17-beta-estradiol benzoate) dan progesterone (sc suntikan 500 μg dalam 0.1 ml minyak bijan) yang dipakai wanita tikus Sprague Dawley (210-225 gram) bermula empat jam selepas permulaan tempoh gelap dan tingkah laku dijalankan dalam sangkar ujian Plexiglas segi empat tepat (60 × 45 × 50 cm) di bawah pencahayaan merah redup. Semua prosedur telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Universiti Cincinnati, University of Western Ontario Animal Care Committee, dan mematuhi garis panduan NIH dan CCAC yang melibatkan haiwan vertebrata dalam penyelidikan.
Pembedahan Lesion
Haiwan dinabadikan dengan dos 1-ml / kg (87 mg / kg Ketamine dan 13 mg / kg Xylazine). Haiwan ditempatkan dalam alat stereotaxic (instrumen Kopf, Tujunga, CA USA), satu insisi dibuat untuk mendedahkan tengkorak, dan lubang digerudi di atas tapak suntikan menggunakan gerudi dremmel (Dremmel, USA). Asid Ibotenik (0.25μl, 2% dalam PBS) telah digunakan secara dua hala menggunakan dua suntikan pada koordinat dorsoventral yang berlainan, masing-masing dalam tempoh minit 1.5 menggunakan suntikan 5μl Hamilton pada koordinat berikut berbanding Bregma (dengan tengkorak yang disingkat secara mendatar): Bagi PL dan IL lesi: AP = 2.9, ML = 0.6, DV = -5.0 dan -2.5. Luka syam dilakukan menggunakan kaedah yang sama, tetapi menggunakan suntikan kenderaan (PBS). Semua haiwan dibenarkan untuk pulih untuk 7-10 hari sebelum ujian tingkah laku.
reka bentuk
Ungkapan tingkah laku seksual
Luka PL dan IL dilakukan pada haiwan yang telah naif sebelum pembedahan. Selepas pemulihan, haiwan dibenarkan untuk berkahwin sekali seminggu sehingga memaparkan satu ejakulasi, selama empat minggu berturut-turut selepas pembedahan. Perbezaan dalam parameter seksual (iaitu latensi untuk melekakan, intromisi, ejakulasi, dan bilangan gunung dan intromisi) dalam setiap eksperimen dianalisis menggunakan ANOVA sehala dengan pembedahan luka sebagai faktor. Perbandingan pasca hoc telah dijalankan menggunakan ujian Fishers PLSD, semua dengan tahap penting 5%.
Eksperimen Plus Maze Ditambah
Haiwan yang mengalami luka atau rawatan palsu diuji di atas ditambah maze (EPM). Ujian ini dilakukan lima minggu selepas pembedahan dan satu minggu selepas sesi kawin terakhir. EPM dibuat daripada Plexiglas yang jelas dan terdiri daripada empat lengan panjang yang sama panjang dari arena tengah yang membentuk bentuk tanda tambah. Dua lengan labirin terbuka untuk persekitaran luaran dan dua lengan labirin yang lain diselubungi oleh lubang-lubang gelap (40cm tinggi) yang diregangkan sepanjang keseluruhan lengan. Sempadan antara kawasan tengah dan lengan ditakrifkan oleh jalur putih pada lengan yang terletak 12cm dari tengah labirin. Ujian EPM dijalankan di bawah pencahayaan redup, jam 1-4 selepas permulaan tempoh gelap. Perbezaan antara haiwan sham dan lesi telah ditentukan menggunakan ujian t-pelajar dengan tahap kepentingan 5%.
Aversion Sex Conditioned
Tikus lelaki tertakluk kepada tiga sesi kawin untuk mendapatkan pengalaman seksual sebelum pembedahan luka atau palsu. Haiwan yang memperlihatkan ejakulasi sekurang-kurangnya dua daripada tiga ujian mengawan pra-pembedahan telah dimasukkan ke dalam kajian ini dan secara rawak dibahagikan kepada empat kumpulan percubaan: Sham-LiCl, Lesion-LiCl, Sham-Saline, dan Lesion-Saline. Pembedahan lesion atau palsu dilakukan 3 hari selepas sesi latihan terakhir. Haiwan dibenarkan untuk pulih selama seminggu selepas pembedahan sebelum sesi penyaman udara bermula. Semasa sesi penyaman udara, separuh daripada lelaki sham dan lesioned menerima LiCl dengan segera selepas mengawan (Sham-LiCl dan Lesion-LiCl), sementara separuh lagi lelaki yang tidak bersuara dan lesioni berfungsi sebagai kawalan dan menerima salin dengan segera selepas mengawan (Sham-Saline dan Lesion-Saline). Pada hari penyejukan 1, haiwan dibenarkan untuk mengadakan satu ejakulasi dan disuntik dalam satu minit selepas ejakulasi dengan dos 20ml / kg sama ada 0.15M LiCl atau saline dan kemudian diletakkan semula ke dalam sangkar rumah mereka. Pada waktu pagi pada hari pengkonduksi 2, semua lelaki ditimbang dan haiwan yang dibekalkan saline diberikan 20ml / kg dos 0.15M LiCl, manakala LiCl haiwan yang dibekalkan disuntik dengan dos yang bersamaan dengan asin. Paradigma ini diulang selama dua puluh hari berturut-turut berjumlah sepuluh sesi penyaman lengkap. Parameter tingkah laku seksual telah direkodkan semasa setiap perbicaraan. Perbezaan dalam peratusan haiwan yang dipaparkan gunung dan intromisi, atau ejakulasi dianalisis untuk setiap percubaan menggunakan analisis Chi-Square dengan tahap signifikansi 5%. Oleh kerana tiada perbezaan dikesan antara kumpulan Sham-Saline dan Lesion-Saline dalam sebarang parameter, kedua-dua kumpulan digabungkan untuk analisis statistik (n = 9) dan dibandingkan dengan sama ada kumpulan Lesion-LiCl atau kumpulan Sham-LiCl.
Keutamaan Tempat yang Dikenakan
Haiwan seks naif yang menjalani pembedahan luka seperti yang diterangkan di atas dan dibenarkan pulih selama satu minggu sebelum ujian tingkah laku. Semua ujian tingkah laku bermula jam 4 selepas permulaan tempoh gelap. Peralatan keutamaan tempat yang dikondisi telah dibahagikan kepada tiga ruang dengan ruang tengah neutral. Satu sisi bilik mempunyai dinding putih dan lantai grid, manakala bahagian lain berwarna hitam dengan batang keluli tahan karat sebagai lantai, ruang tengah berwarna kelabu dengan lantai Plexiglas (Med Associates, St Albans, VT). Pertama, pra-ujian dilakukan untuk menentukan keutamaan semula jadi bagi setiap individu sebelum pengkondisian bermula, semua haiwan dimasukkan ke dalam ruang tengah dengan akses percuma ke semua dewan selama lima belas menit dan jumlah masa yang dihabiskan di setiap bilik dicatat. Pada hari berikutnya, iaitu hari penghawa 1, lelaki dikawinkan dengan satu ejakulasi di kandang rumah mereka di mana mereka segera ditempatkan ke dalam ruang yang tidak diutamakan pada mulanya selama tiga puluh menit tanpa akses ke bilik lain atau dimasukkan ke dalam ruang awal mereka yang disukai untuk tiga puluh minit tanpa tingkah laku seksual terdahulu. Pada hari penghawa kedua, lelaki menerima rawatan yang bertentangan. Paradigma penyaman ini diulang sekali lagi. Pada keesokan harinya, ujian pasca dijalankan yang secara prosentif sama dengan pra-ujian. Dua nilai berasingan digunakan untuk menentukan sama ada haiwan mPFC lesi membentuk pilihan tempat yang dikondisi untuk seks. Skor pertama adalah skor perbezaan, yang ditakrifkan sebagai perbezaan antara masa yang dibelanjakan pada ruang awal yang dipilih dan masa yang dibelanjakan pada ruang awal yang tidak disukai. Skor keutamaan ditakrifkan sebagai masa yang dibelanjakan pada ruang awal yang tidak disukai dibahagikan dengan masa yang dibelanjakan dalam ruang yang tidak dipilih pada mulanya ditambah dengan masa yang dibelanjakan dalam ruang yang lebih awal. Skor keutamaan dan perbezaan telah dibandingkan bagi setiap haiwan antara ujian pra dan ujian pasca menggunakan ujian t-pelajar berpasangan dengan tahap penting 5%. Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa perkawinan menghasilkan preferensi tempat yang dikondisikan dengan menggunakan paradigma ini, dan perawatan pengendalian tidak menghasilkan perubahan dalam preferensi (27-29).
Pengunduran Tempat Keadaan
Haiwan yang naif seksual mengalami pembedahan luka atau pembedahan seperti yang dijelaskan di atas dan dibenarkan untuk pulih selama seminggu sebelum ujian tingkah laku. Semua ujian tingkah laku bermula jam 4 selepas permulaan tempoh cahaya. Menggunakan alat CPP yang diterangkan di atas, suntikan LiCl atau salin dipadankan dengan ruang awal yang dipilih atau tidak disukai semasa dua ujian penghawa dingin di kaunter yang seimbang. Ujian pra dan pasca dijalankan dan data dianalisis seperti yang dijelaskan di atas menggunakan ujian t-pelajar berpasangan dengan tahap signifikansi 5%.
Pengesahan Lesion
Bagi haiwan pengesahan lesi yang dipancarkan transcardially dengan 4% paraformaldehyde dan otak dipotong (coronally). Bahagian-bahagian telah dan imunoprosesi untuk penanda neuronal NeuN menggunakan antiserum utama dalam penyelesaian inkubasi mengenal pasti NeuN (monoclonal anti-NeuN antiserum; 1: 10,000; Chemicon) dan kaedah imunoperoxidase standard19). Lokasi dan saiz lesi ibotenik ditentukan dengan menganalisis kawasan di bahagian mPFC yang bersebelahan tanpa pewarnaan neuron NeuN. Luka mPFC biasanya merentang jarak dari AP + 4.85 hingga + 1.70 berbanding bregma (Rajah 1A-C). Lesi dianggap lengkap jika 100% daripada IL dan 80% PL dimusnahkan, dan hanya haiwan yang mempunyai lesi lengkap termasuk dalam analisis statistik (eksperimen tingkah laku seksual, lesi n = 11, sham n = 12; eksperimen EPM, lesi n = 5, sham n = 4, eksperimen penghindaran seks yang dikondisi, sham-saline n = 4, sham-LiCl n = 9, lesi-saline n = 5, lesi-LiCl n = 12; ; eksperimen penghindaran tempat yang terkondisi, sham n = 5, lesi n = 12).
Rajah 1
KEPUTUSAN
Kelakuan Seksual
Luka PL / IL tidak menjejaskan apa-apa parameter seksual yang diuji pada lelaki yang telah naif sebelum pembedahan (Rajah 1D-F). Kesimpulannya, tiada kesan lesi PL / IL terhadap tingkah laku seksual yang dikesan dalam lelaki yang berpengalaman seksual termasuk dalam eksperimen penghindaran seks yang dikekang, semasa percubaan pertama, maka sebelum pasangan LiCl dengan tingkah laku seksual (Jadual 1). Oleh itu, luka PL / IL tidak mempengaruhi tingkah laku seks bebas daripada pengalaman seksual.
Jadual 1
Ditambah Maze Plus
Dalam persetujuan dengan laporan terdahulu (27-29), tikus lelaki dengan luka mPFC lelaki dipaparkan lebih banyak entri ke tangan terbuka EPM berbanding kawalan (Rajah 1G), menunjukkan bahawa fungsi mPFC adalah kritikal untuk situasi yang memerlukan penilaian risiko.
Penghindaran seks yang teratur
Kesan penyejukan LiCl terhadap tingkah laku seksual
Pengkondisian LiCl mengakibatkan pengurangan ketara peratusan lelaki palsu yang memperlihatkan pemasangan, intromisi, atau ejakulasi berbanding kawalan palsu garam (Rajah 2A-B). Bagaimanapun, luka mPFC menyekat sepenuhnya perencatan yang disebabkan oleh penyejukan LiCl. Analisis Chi-square mendedahkan perbezaan ketara antara kumpulan yang dikesan dalam peratusan haiwan yang dipaparkan gunung (Rajah 2A), intromisi (tidak ditunjukkan; data yang sama dengan Rajah 2A), atau ejakulasi (Rajah 2B). Khususnya, peratusan lelaki yang menampakkan gunung, intromisi, atau ejakulasi jauh lebih rendah dalam kumpulan Sham-LiCl berbanding dengan haiwan kawalan yang dirawat Saline (Sham dan Lesion), yang menunjukkan kesan yang mengganggu pengaduan LiCl terhadap peraduan di haiwan Sham. Sebaliknya, tiada kesan penyejukan LiCl diperhatikan dalam lelaki Lesion-LiCl (Angka 2A-B). Oleh itu, fungsi mPFC adalah kritikal untuk pengambilalihan penghambaan yang terkondisi terhadap tingkah laku seksual. Walau bagaimanapun, adalah mungkin bahawa luka PL / IL melemahkan pembelajaran bersekutu yang dikaitkan dengan ganjaran seksual, oleh itu dalam kesan pembelajaran berasingan luka-luka PL / IL atas pengambilan pilihan tempat yang dikondisikan untuk ganjaran seksual diuji.
Rajah 2
Keutamaan dan Keengganan Tempat yang terkondisi
Tikus dengan luka mPFC dipaparkan pembelajaran asosiasi biasa mengenai konteks yang dipasangkan dengan ganjaran seksual, seperti yang ditunjukkan oleh skor perbezaan yang meningkat dan skor keutamaan semasa ujian pasca (Rajah 3A-B). Selain itu, lesi tidak menjejaskan pembelajaran asosiasi isyarat kontekstual dengan kelemahan yang disebabkan oleh LiCl, yang ditunjukkan dengan penurunan yang signifikan dalam perbezaan dan skor keutamaan semasa ujian pasca (Rajah 3C-D).
Rajah 3
PERBINCANGAN
Dalam kajian ini, kami melaporkan bahawa luka-luka IL dan kawasan PL mPFC tidak mempengaruhi ekspresi tingkah laku seksual, atau pengambilan pilihan tempat yang dikondisikan kepada ganjaran seksual. Sebaliknya, luka-luka menghalang pemerolehan seks yang menghindari seks. Hasil ini memberikan bukti berfungsi untuk hipotesis bahawa keupayaan untuk membuat perubahan tingkah laku adaptif dikawal oleh IL dan subkumpulan PL mPFC.
Data sebelumnya dari makmal kami menunjukkan bahawa neuron mPFC diaktifkan semasa tingkah laku seksual dalam tikus lelaki (20). Walau bagaimanapun, tikus luka mPFC dalam kajian ini tidak dapat dibezakan daripada tikus kawalan palsu di mana-mana parameter dianalisis tingkah laku seksual. Dalam persetujuan dengan laporan terdahulu (30, 32) Luka mPFC menghasilkan kesan anxiolytic seperti yang dinilai oleh prestasi pada peningkatan ditambah labirin, yang menunjukkan bahawa protokol lesi kita berkesan. Oleh itu, keputusan semasa mencadangkan pengaktifan IL dan PL subdivisi dalam mPFC semasa tingkah laku seksual tidak perlu untuk ungkapan normal tingkah laku seksual. Sebaliknya, kajian sebelumnya oleh Agmo dan rakan sekerja menunjukkan bahawa luka-luka di kawasan cingulate anterior (ACA) meningkatkan lekapan lekukan dan intromisi dan mengurangkan peratusan lelaki yang berkolaborasi (25). Oleh itu, adalah mungkin bahawa BPR memainkan peranan dalam prestasi tingkah laku seksual, sementara IL dan PL menghalang perencatan tingkah laku sekali dikaitkan dengan hasil yang aversive.
Walaupun luka mPFC dilaporkan mengganggu pelbagai bentuk penyatuan ingatan (33, 34), kesan lesi mPFC terhadap peranan tingkah laku yang dilaporkan di sini tidak boleh dianggap sebagai defisit pembelajaran. Dalam satu eksperimen eksperimen berasingan lelaki lesbian mPFC telah diuji untuk keupayaan untuk mewujudkan keutuhan tempat yang dikondisi terhadap kelakuan seks. Pembelajaran bersekutu berkaitan dengan ganjaran tetap utuh dalam haiwan lesi mPFC kerana lelaki-lelaki ini dapat membentuk keutamaan tempat yang dikondisikan kepada ruang ganjaran seks yang dipasangkan. Penemuan ini adalah selaras dengan kajian terdahulu yang mengkaji peranan PL atau mPFC lengkap untuk pemerolehan psikostimulan CPP yang disebabkan (35, 36), Selain itu, pembelajaran bersekutu untuk rangsangan rangsangan LiCl tidak terjejas oleh lesi mPFC, selaras dengan laporan terdahulu bahawa luka-luka PFC tidak menghalang pengambilalihan penghindaran rasa yang disesuaikan (34). Data-data ini secara kolektif mencadangkan bahawa pengaktifan PL / IL subdivisi sebelum ini diperhatikan dalam mPFC (20) tidak perlu untuk memperoleh pemerolehan pembelajaran bersekutu berkaitan dengan ganjaran, namun perlu untuk penggunaan informasi ini yang tepat karena berkaitan dengan pelaksanaan pengendalian tingkah laku. Idea ini adalah selaras dengan perbalahan semasa bahawa fungsi IL utuh adalah perlu untuk meninjau dan bertindak terhadap input-input perencatan dan penggambaran yang menyampaikan maklumat tentang kontinjensi-keengganan ganjaran (37). Selain itu, haiwan dengan PL (35) atau IL (8, 37, 38) lesi memaparkan pembelajaran kepupusan biasa walaupun ketidakupayaan untuk menggunakan maklumat ini untuk membuat keputusan yang diarahkan oleh matlamat.
Kesimpulannya, kajian semasa menunjukkan bahawa haiwan yang mempunyai lesi mPFC mungkin mampu membentuk persatuan dengan hasil yang melampau dari tingkah laku mereka, tetapi tidak mempunyai keupayaan untuk menindas mencari ganjaran seksual dalam menghadapi akibat-akibat aversif. Pada manusia rangsangan seksual adalah pengalaman yang kompleks di mana pemprosesan maklumat kognitif-emosional berfungsi untuk menentukan apakah sifat hedonik rangsangan tertentu cukup untuk bertindak sebagai insentif seksual (39). Data semasa menunjukkan bahawa disfungsi mPFC boleh menyumbang kepada pengambilan risiko seksual atau untuk mencari tingkah laku seksual secara kompulsif. Selain itu, disfungsi mPFC telah dikaitkan dengan beberapa gangguan psikiatri (13, 40) yang mencadangkan bahawa disfungsi mPFC mungkin merupakan patologi yang mendasari yang dikongsi dengan gangguan lain dan bahawa tingkah laku seksual yang kompulsif mungkin dikaitkan dengan gangguan lain. Sesungguhnya, pada manusia, hiperseksual atau tingkah laku seksual yang kompulsif telah dilaporkan mempunyai kelaziman yang tinggi terhadap komorbiditi dengan keadaan psikiatri (termasuk penyalahgunaan, kebimbangan, dan gangguan mood)41), dan prevalensi% kira-kira10 dalam Penyakit Parkinson bersama-sama dengan pembelian, perjudian dan makan secara kompulsif (42-44).
Nota kaki
Penafian Penerbit: Ini adalah fail PDF bagi manuskrip yang tidak diedit yang telah diterima untuk penerbitan. Sebagai perkhidmatan kepada pelanggan kami, kami menyediakan versi awal manuskrip ini. Manuskrip akan menjalani penyalinan, menaip, dan mengkaji semula bukti yang dihasilkan sebelum ia diterbitkan dalam bentuk yang boleh dihukum akhir. Harap maklum bahawa semasa kesalahan proses produksi dapat ditemukan yang dapat mempengaruhi konten, dan semua penafian hukum yang berlaku untuk pertain jurnal.
;