Chất dẻo thần kinh opioid gây ra bởi các tế bào thần kinh dopaminergic ở vùng não thất ảnh hưởng đến phần thưởng tự nhiên và thuốc phiện (2014)

BÌNH LUẬN: Các nghiên cứu về DeltaFosB mà chúng ta thường trích dẫn đều tập trung vào nhân accumbens (trung tâm khen thưởng), và phát hiện ra rằng hoạt động tình dục kích hoạt các cơ chế não bộ tương tự như ma túy đá và cocaine. Từ nghiên cứu mang tính bước ngoặt của cùng nhà nghiên cứu này ( Phần thưởng tự nhiên và ma túy tác động lên các cơ chế dẻo dai thần kinh chung với ΔFosB là chất trung gian quan trọng (2013) ):

Do đó, phần thưởng tự nhiên và thuốc không chỉ hội tụ trên cùng một con đường thần kinh, chúng hội tụ trên cùng một chất trung gian phân tử và có khả năng trong cùng một tế bào thần kinh trong Nucleus Accumbens, để ảnh hưởng đến khả năng khuyến khích và “mong muốn” của cả hai loại phần thưởng

Sự biến mất: meth, cocaine và sex đều làm những điều cơ bản giống nhau cho cùng các tế bào thần kinh trong trung tâm khen thưởng (nhân accumbens), bất cứ điều gì chúng có thể làm khác ở nơi khác trong não. Điều này đã loại bỏ quan điểm thông thường rằng các phần thưởng và thuốc tự nhiên khác nhau về cơ chế và tác dụng.

Nghiên cứu mới này đã xem xét tác động của tình dục lên vùng VTA. VTA là nơi bắt đầu các tế bào thần kinh sản sinh dopamine – và chúng phân nhánh đến nhân accumbens, vỏ não trước và hạch hạnh nhân. Về cơ bản, VTA là nguồn gốc (suối nguồn) của hầu hết dopamine trong cơ thể chúng ta. Xem 2 hình ảnh về mạch phần thưởng này: Hình 1 , Hình 2

Các nhà nghiên cứu phát hiện ra rằng quan hệ tình dục (cực khoái) khiến các thân tế bào trong vùng VTA tạm thời bị co lại (ở nam giới). Thân tế bào và các nhánh thần kinh của chúng tạo nên chất xám của não. Đây chính xác là những gì nghiện heroin gây ra cho vùng VTA (không phải do sử dụng heroin một lần, mà là do sử dụng heroin mãn tính). Lưu ý rằng hiện tượng co lại tương tự của các thân tế bào VTA cũng xảy ra ở những người nghiện heroin.

Sự co rút tế bào do giới tính kéo dài ít nhất là 7 ngày. Những thay đổi do tình dục gây ra đã trở lại bình thường vào những ngày 30, nhưng các nhà nghiên cứu chỉ đánh giá các ngày 1, 7 và 30.

Sự co rút của các tế bào thần kinh trong chứng nghiện heroin dẫn đến lượng dopamine thấp hơn trong nhân accumbens – hay còn gọi là hiện tượng giảm nhạy cảm . Các nhà nghiên cứu đã cho chuột dùng morphine để đánh giá phản ứng của chúng (sau khi giao phối), nhưng không có gì xảy ra. Thông thường, chuột rất thích morphine, nhưng ở đây chúng tạm thời bị giảm nhạy cảm. Nói tóm lại, mạch phần thưởng của chuột sau khi xuất tinh không phản ứng với lượng heroin thấp. Các nhà nghiên cứu suy đoán rằng cần liều lượng cao hơn để tạo ra phản ứng “bình thường” ở chuột.

Tóm lại - Tình dục (tạm thời) thực hiện điều tương tự trong VTA cũng như nghiện heroin: co rút các cơ quan tế bào thần kinh sản xuất dopamine. Điều này dẫn đến giảm dopamine trong trung tâm khen thưởng và ít phản ứng với chất gây nghiện hơn - và phải mất ít nhất 7 ngày để não chuột hồi phục.

 

J Neurosci. 25 tháng 6 năm 2014;34(26):8825-36 . doi: 10.1523/JNEUROSCI.0133-14.2014.

Bình KK1, Coppens CM2, Sê-ri LN3, J đầy đủ hơn2, Vân S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Làm mát LM5.

Tóm tắt

Phần thưởng tự nhiên và các chất gây nghiện cùng hội tụ trên con đường mesolimbic và kích hoạt cơ chế chung của tính dẻo thần kinh trong nhân accumbens. Tiếp xúc mãn tính với thuốc phiện gây ra tính dẻo trong các tế bào thần kinh dopaminergic của vùng tegmental bụng (VTA), điều chỉnh khả năng dung nạp phần thưởng morphine.

Ở đây, chúng tôi kiểm tra các giả thuyết rằng việc giải phóng opioid nội sinh trong VTA gây ra sự thay đổi hình thái của các tế bào dopamine VTA ở chuột đực, từ đó điều chỉnh sự biểu hiện lâu dài của việc củng cố hành vi tình dục.

Thứ nhất, kinh nghiệm tình dục làm giảm kích thước tế bào dopamine VTA sau 1 và 7 ngày, nhưng không ảnh hưởng đến kết quả sau 30 ngày kể từ lần giao phối cuối cùng . Tác dụng này bị ngăn chặn bởi naloxone trước mỗi lần giao phối; do đó, tính dẻo dai của tế bào dopamine VTA phụ thuộc vào hoạt động của opioid nội sinh.

Đổi lại, độ dẻo của VTA có liên quan đến phần thưởng thuốc phiện thay đổi, vì nam giới có kinh nghiệm tình dục không hình thành ưu tiên nơi điều hòa cho 0.5 mg / kg morphin.

Tiếp theo, người ta xác định xem tác động của opioid nội sinh có đóng vai trò trung gian trong phần thưởng tình dục và trí nhớ ở chuột đực được điều trị bằng naloxone trong quá trình giao phối hay không, bằng cách tiêm toàn thân hoặc tiêm vào vùng VTA. Naloxone không ngăn chặn được sự gia tăng hành vi tình dục do trải nghiệm ban đầu gây ra trong các phiên giao phối lặp lại, hoặc sự ưu tiên địa điểm có điều kiện đối với việc giao phối. Tuy nhiên, việc điều trị bằng naloxone đã làm giảm biểu hiện lâu dài hơn của sự gia tăng hành vi tình dục do trải nghiệm gây ra và sự kích hoạt thần kinh ở các vùng mesolimbic do các tín hiệu có điều kiện liên quan đến giao phối gây ra.

Cùng với nhau, những dữ liệu này chứng minh rằng opioid nội sinh trong quá trình giao phối gây ra tính dẻo thần kinh trong các tế bào thần kinh dopamine VTA có vẻ quan trọng đối với phần thưởng morphin và trí nhớ dài hạn cho hành vi thưởng tự nhiên.

 

Giới thiệu

Các hành vi khen thưởng tự nhiên được trung gian bởi hệ thống mesocorticolimbic (Meisel và Mullins, 2006; Hoebel và cộng sự, 2009; Frohmader và cộng sự, 2010a; Bình và cộng sự, 2010a; Trẻ và cộng sự, 2011; Blum và cộng sự, 2012). Thuốc lạm dụng gây ra thay đổi thần kinh trong hệ thống này, từ đó góp phần vào sự phát triển và biểu hiện của lạm dụng chất (Thánh ca và cộng sự, 2006; Nestler, 2012). Trước đây chúng tôi đã xác định rằng trải nghiệm với hành vi khen thưởng tự nhiên, tức là trải nghiệm tình dục ở chuột đực, cũng gây ra tính dẻo thần kinh trong nhân accumbens (NAc), bao gồm cả gai gai tăng (Bình và cộng sự, 2010a) và deltaFosB (Bình và cộng sự, 2013). Đổi lại, tính dẻo gây ra giới tính này rất quan trọng đối với các tác động của trải nghiệm tình dục đối với việc giao phối tiếp theo, được biểu hiện như sự thuận lợi của việc bắt đầu và thực hiện hành vi tình dục (Bình và cộng sự, 2010b, 2012, 2013). Hơn nữa, trải nghiệm tình dục làm thay đổi khả năng đáp ứng với thuốc kích thích tâm thần, bao gồm cả sự nhạy cảm của hoạt động vận động và phần thưởng tăng cường (Frohmader và cộng sự, 2010a; Bình và cộng sự, 2010a, 2013).

NAc là một trong những mục tiêu hạ nguồn của các tế bào thần kinh dopaminergic trong vùng tegmental bụng (VTA). Các tế bào thần kinh dopamine VTA được kích hoạt trong quá trình giao phối và sau khi tiếp xúc với các tín hiệu có điều kiện dự báo phần thưởng tình dục ( Balfour et al., 2004 ; Frohmader et al., 2010a ), thông qua sự gắn kết của peptide opioid nội sinh (EOP) tại các thụ thể μ-opioid (MORs; Matthews và German, 1984 ; Johnson và North, 1992 ; Klitenick et al., 1992 ; Ikemoto et al., 1997 ; Balfour et al., 2004 ). Do đó, việc tiếp xúc với các tín hiệu có điều kiện dự đoán hành vi tình dục gây ra sự giải phóng EOP và kích hoạt tế bào dopamine VTA, tạo điều kiện thuận lợi cho động lực tình dục ( Mitchell và Stewart, 1990 ; van Furth và cộng sự, 1995 ; van Furth và van Ree, 1996 ) và giải phóng dopamine trong NAc ( Fiorino và cộng sự, 1997 ).

Tiếp xúc lặp đi lặp lại với thuốc phiện ngoại sinh gây ra những thay đổi về hình thái ở VTA ( Mazei-Robison et al., 2011 ; Mazei-Robison và Nestler, 2012 ), giảm kích thước thân tế bào thần kinh dopamine ở VTA ( Sklair-Tavron et al., 1996 ; Spiga et al., 2003 ; Chu et al ., 2007 ; Russo et al., 2007 ; Mazei-Robison et al., 2011 ), giảm nồng độ protein neurofilament ( Beitner-Johnson et al., 1992 ), tăng tính kích thích của tế bào dopamine, và giảm vận chuyển axoplasmic và lượng dopamine đầu ra đến NAc ( Beitner-Johnson et al., 1992 ; Mazei-Robison et al., 2011 ). Những thay đổi ở tế bào thần kinh dopamine VTA này gây ra hiện tượng dung nạp phần thưởng morphine và chỉ là tạm thời, chúng sẽ biến mất trong vòng một tháng sau khi cai thuốc ( Russo et al., 2007 ). Hiện vẫn chưa rõ liệu tính dẻo dai của các tế bào thần kinh dopamine VTA chỉ xuất hiện do tác động của thuốc phiện hay chúng cũng được tạo ra bởi sự giải phóng EOP trong các hành vi tạo cảm giác thỏa mãn tự nhiên.

Ở đây, chúng tôi kiểm tra giả thuyết rằng trải nghiệm thưởng tự nhiên gây ra sự dẻo dai tương tự như do thuốc phiện gây ra, và do đó, thuốc phiện hội tụ một cơ chế dẻo rất quan trọng đối với hành vi khen thưởng tự nhiên và trí nhớ thưởng. Chúng tôi kiểm tra xem liệu trải nghiệm tình dục ở chuột đực có làm giảm kích thước soma của các tế bào thần kinh dopamine VTA thông qua một quá trình phụ thuộc vào hành động EOP trong VTA hay không. Hơn nữa, chúng tôi điều tra xem các thay đổi do EOP gây ra trong các tế bào thần kinh dopamine VTA có liên quan đến việc củng cố hành vi khen thưởng tự nhiên và quy kết sự khuyến khích đối với các tín hiệu liên quan đến phần thưởng tự nhiên, đồng thời gây ra sự dung nạp chéo đối với phần thưởng morphin.

Vật liệu và phương pháp

Động Vật

Chuột Sprague-Dawley đực trưởng thành (200–225 g) được mua từ Charles River và được nuôi nhốt theo cặp trong phòng chiếu sáng nhân tạo với chu kỳ sáng/tối 12 giờ trong tất cả các thí nghiệm (tắt đèn lúc 10:00 sáng, ngoại trừ thí nghiệm dung nạp morphine, tắt đèn lúc 5:00 chiều). Thức ăn và nước được cung cấp tự do, trừ khi đang tiến hành thử nghiệm hành vi. Chuột cái được sử dụng làm đối chứng được cắt bỏ buồng trứng và cấy dưới da viên nang SILASTIC chứa 5% 17-β-estradiol benzoate (đường kính trong 1.98 mm, chiều dài 0.5 cm, Dow-Corning). Tiêm progesterone (dưới da, 500 μg trong 0.1 ml dầu mè) được thực hiện 3–6 giờ trước khi thử nghiệm để kích thích khả năng tiếp nhận tình dục. Tất cả các quy trình đều được Ủy ban Chăm sóc Động vật của Đại học Western Ontario và Đại học Michigan phê duyệt, và tuân thủ các hướng dẫn của Hội đồng Chăm sóc Động vật Canada và Viện Y tế Quốc gia liên quan đến động vật có xương sống trong nghiên cứu.

Thời gian thay đổi kích thước soma VTA dopamine

Phiên giao phối hàng ngày.

Để nghiên cứu diễn biến theo thời gian của sự thay đổi kích thước thân tế bào thần kinh dopamine trong vùng VTA, các động vật đã có kinh nghiệm giao phối và chưa có kinh nghiệm giao phối được giết mổ vào các ngày thứ 1, 7 hoặc 31 ( n = 5–8 mỗi nhóm) sau ngày giao phối cuối cùng (nhóm đã có kinh nghiệm) hoặc ngày được xử lý cuối cùng (nhóm chưa có kinh nghiệm). Các nhóm đã có kinh nghiệm giao phối được ghép cặp dựa trên hành vi giao phối trong phiên giao phối cuối cùng, cũng như tổng số lần xuất tinh trong năm phiên (trung bình 5 lần cho mỗi nhóm), và không khác biệt ở bất kỳ thông số nào về hành vi giao phối.

Phiên giao phối.

Những con đực chưa từng giao phối được chia vào một trong hai điều kiện thí nghiệm: chưa từng giao phối hoặc đã từng giao phối. Những con vật đã từng giao phối được cho giao phối năm lần trong những ngày liên tiếp với con cái sẵn sàng giao phối trong lồng thử nghiệm hình chữ nhật (60 × 45 × 50 cm) cho đến khi xuất tinh hoặc tối đa 1 giờ (tùy điều kiện nào đến trước). Lồng được làm sạch kỹ lưỡng bằng dung dịch ethanol 70% và thêm lớp lót mới giữa các lần giao phối. Hành vi giao phối được thực hiện trong giai đoạn tối (2–6 giờ sau khi trời tối). Chỉ những con vật xuất tinh trong ít nhất bốn trong năm lần giao phối mới được coi là đã từng giao phối và được đưa vào thí nghiệm. Tất cả các lần giao phối đều được quan sát và hành vi giao phối được ghi lại. Số lần leo lên (M), số lần thâm nhập (IM), thời gian chờ leo lên (ML; thời gian từ khi đưa con cái vào đến lần leo lên đầu tiên), thời gian chờ thâm nhập (IL; thời gian từ khi đưa con cái vào đến lần thâm nhập đầu tiên) và thời gian chờ xuất tinh (EL; thời gian từ lần thâm nhập đầu tiên đến khi xuất tinh) được ghi lại ( Agmo, 1997 ). Các con vật chưa từng giao phối được đặt trong một lồng thử nghiệm sạch sẽ trong 1 giờ, đồng thời với những con đực đã có kinh nghiệm giao phối trong cùng một phòng, sao cho chúng được tiếp xúc với mùi của con cái ở xa, và chịu mức độ xáo trộn và môi trường mới lạ tương tự như những con đực đã có kinh nghiệm.

Ghi nhãn miễn dịch huỳnh quang.

Động vật được gây mê sâu bằng natri pentobarbital (270 mg/kg, tiêm phúc mạc) và được truyền dịch nội tim với 50 ml dung dịch muối sinh lý 0.9%, tiếp theo là 500 ml dung dịch paraformaldehyde 4% trong dung dịch đệm natri phosphat 0.1 M (PB). Não được lấy ra và cố định thêm 1 giờ ở nhiệt độ phòng (RT) trong cùng dung dịch cố định, sau đó được ngâm trong dung dịch sucrose 20% và natri azide 0.01% trong dung dịch đệm PB 0.1 M để bảo quản ở 4°C. Các lát cắt ngang được cắt ở độ dày 35 μm trên máy cắt lát đông lạnh (H400R, Microm) và được thu thập thành bốn loạt song song trong dung dịch bảo vệ đông lạnh (sucrose 30%, ethylene glycol 30% trong dung dịch đệm PB 0.1 M) rồi được bảo quản ở 20°C. Tất cả các bước ủ đều được thực hiện ở nhiệt độ phòng với sự khuấy nhẹ và rửa kỹ bằng dung dịch PBS 0.1 M, pH 7.35 giữa các lần ủ. Các lát cắt được tiếp xúc với dung dịch H₂O₂ 1% trong 10 phút để phá hủy các peroxidase nội sinh, sau đó được ủ trong dung dịch (PBS+: PBS chứa 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) và 0.1% albumin huyết thanh bò (Jackson Immuno Research Laboratories) trong 1 giờ. Tiếp theo, các lát cắt được ủ qua đêm ở nhiệt độ phòng với kháng thể tyrosine hydroxylase (TH) của chuột (tỷ lệ 1:20.000; Millipore ). Sau khi ủ với kháng thể chính, các lát cắt được ủ với kháng thể dê kháng chuột liên hợp AlexaFluor 555 (tỷ lệ 1:100; Invitrogen, Eugene, OR) trong 30 phút. Cuối cùng, các lát cắt được rửa bằng dung dịch PB 0.1 m, gắn lên lam kính Superfrost Plus, làm khô và phủ lam kính bằng gelvatol có chứa chất chống phai màu 1,4-diazabicyclo(2,2)octane (DABCO; 50 mg/ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978 ).

Phân tích dữ liệu: kích thước tế bào thần kinh.

Hình ảnh các tế bào thần kinh phản ứng miễn dịch TH (TH-IR) trong VTA được chụp ở độ phóng đại 40× ở ba mức từ trước ra sau ( Balfour et al., 2004 ). Không phát hiện thấy sự khác biệt giữa các tế bào ở các mức khác nhau. Kích thước thân tế bào thần kinh TH-IR được phân tích bằng phần mềm ImageJ (Viện Y tế Quốc gia). Diện tích trung bình, chu vi và độ tròn được đo như mô tả bởi Sklair-Tavron et al. (1996) . Trung bình 25 tế bào trên mỗi con vật (kết hợp cả 3 mức VTA) được phân tích và chỉ những tế bào có nhân nhìn thấy rõ mới được đưa vào. Đối với mỗi con vật, diện tích trung bình, chu vi và độ tròn được tính toán. Để phân tích thống kê, phương pháp ANOVA hai chiều được sử dụng [các yếu tố: kinh nghiệm tình dục (đã từng quan hệ tình dục hoặc chưa từng quan hệ tình dục) và thời gian (1, 7 hoặc 31 ngày)] tiếp theo là so sánh hậu kiểm bằng phương pháp Holm–Sidak với mức ý nghĩa 0.05.

VTA không thay đổi dopamine

Phiên giao phối hai tuần một lần.

Để kiểm tra xem liệu kinh nghiệm tình dục trong các phiên giao phối hàng ngày có cần thiết để giảm kích thước tế bào thần kinh TH-IR hay không, các tế bào thần kinh VTA dopamine của động vật đã giao phối trong năm phiên giao phối hai tuần một lần đã được phân tích. Các phiên giao phối đã được mô tả ở trên, nhưng trong khoảng thời gian 2.5 tuần. Não được thu thập 7 d sau lần giao phối hoặc xử lý cuối cùng.

Ghi nhãn miễn dịch.

Ngoài ra, người ta cũng đã thử nghiệm xem việc sử dụng các kỹ thuật nhuộm nhạy cảm với phát hiện miễn dịch peroxidase và chất tạo màu có cho phép quan sát được sự thay đổi kích thước thân tế bào TH-IR hay không. Quá trình tưới máu và xử lý mô được tiến hành như mô tả ở trên. Sau khi xử lý bằng 1% H₂O₂ và PBS + , các lát cắt được ủ qua đêm ở nhiệt độ phòng với kháng thể tyrosine hydroxylase (TH) đa dòng của chuột (1:20 000; Millipore ). Sau khi ủ kháng thể chính, các lát cắt được ủ với kháng thể IgG dê chống thỏ liên hợp biotin (1 giờ, tỷ lệ 1:500 trong PBS+; Vector Laboratories), avidin-biotin-peroxidase cải ngựa (1 giờ, ABC elite; tỷ lệ 1:1000 trong PBS; Vector Laboratories), và 3,3′-diaminobenzidine tetrahydrochloride (10 phút, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich) được tăng cường bằng nickel sulfate (0.02% trong 0.1 m PB) với hydrogen peroxide (0.015%). Các lát cắt được rửa kỹ trong 0.1 m PB để kết thúc phản ứng và được gắn lên các lam kính Superfrost plus đã được mã hóa (Fisher) với 0.3% gelatin trong ddH2O . Sau khi khử nước, tất cả các lam kính được phủ bằng chất gắn DPX (dibutyl phthalate xylene; Sigma-Aldrich).

Phân tích dữ liệu: kích thước tế bào thần kinh.

Các tế bào TH-IR được phân tích về diện tích, chu vi và độ tròn như đã mô tả ở trên. Ngoài ra, các tế bào TH-IR trong chất đen (SN), trong cùng các lát cắt được sử dụng để phân tích các tế bào TH-IR ở VTA, cũng được phân tích. Cuối cùng, sau khi phân tích các tế bào TH-IR ở VTA và SN, các lát cắt được nhuộm đối chứng bằng cresyl violet và các tế bào không phải TH-IR được phân tích bằng các phương pháp tương tự như đã mô tả ở trên. Sự khác biệt giữa nhóm chưa được huấn luyện và nhóm đã được huấn luyện được so sánh bằng phép thử t Student hai phía với mức ý nghĩa 0.05.

Tác dụng của naloxone đối với việc giảm kích thước soma dopamine gây ra

Để xác định xem thụ thể MOR có đóng vai trò trong những thay đổi về kích thước thân tế bào thần kinh dopamine do kinh nghiệm tình dục gây ra hay không, thụ thể MOR đã được ức chế trong quá trình hành vi tình dục. Một nửa số động vật được cho trải nghiệm tình dục, trong khi nửa còn lại được xử lý nhưng vẫn chưa có kinh nghiệm tình dục. Những động vật đã có kinh nghiệm tình dục được cho giao phối trong 5 ngày liên tiếp. Trong cả nhóm đã có kinh nghiệm tình dục và nhóm chưa có kinh nghiệm tình dục, các động vật được điều trị bằng chất đối kháng thụ thể MOR không chọn lọc naloxone (10 mg/kg, tiêm dưới da; Sigma-Aldrich, hòa tan trong dung dịch muối sinh lý 0.9%) hoặc dung dịch muối sinh lý 30 phút trước khi đưa con cái vào (nhóm đã có kinh nghiệm) hoặc trước khi xử lý (nhóm chưa có kinh nghiệm); từ đó tạo ra bốn nhóm thí nghiệm: nhóm chưa có kinh nghiệm tình dục được điều trị bằng dung dịch muối sinh lý (Naive Sal), nhóm chưa có kinh nghiệm tình dục được điều trị bằng naloxone (Naive NLX), nhóm đã có kinh nghiệm tình dục được điều trị bằng dung dịch muối sinh lý (Exp Sal), và nhóm đã có kinh nghiệm tình dục được điều trị bằng naloxone (Exp NLX; n = 5–8 mỗi nhóm). Điều trị bằng naloxone không có tác động đáng kể về mặt thống kê đối với bất kỳ thông số nào của hành vi tình dục, trong bất kỳ ngày nào trong 5 ngày, và các nhóm được điều trị bằng naloxone và dung dịch muối sinh lý có kinh nghiệm tình dục giống hệt nhau. Tất cả các động vật đều bị giết bằng phương pháp truyền dịch nội tim 7 ngày sau lần giao phối cuối cùng. Việc cắt lát, nhuộm miễn dịch và phân tích dữ liệu (phân tích phương sai hai chiều; các yếu tố: kinh nghiệm giới tính và điều trị bằng thuốc) về kích thước thể soma dopamine được tiến hành như mô tả ở trên.

Ưu tiên địa điểm điều hòa Morphine

Thiết kế thử nghiệm.

Trước đây, Russo et al. (2007) đã chỉ ra rằng sử dụng morphine mãn tính gây ra hiện tượng dung nạp với phần thưởng morphine. Vì kinh nghiệm tình dục và sử dụng morphine mãn tính gây ra sự giảm kích thước thân tế bào thần kinh dopamine trong VTA tương tự nhau, nên ý nghĩa chức năng của những thay đổi hình thái do tình dục gây ra đối với phần thưởng morphine đã được kiểm tra. Các động vật đã có kinh nghiệm tình dục và chưa có kinh nghiệm tình dục được chia thành sáu nhóm thí nghiệm khác nhau ( n = 9–13 mỗi nhóm) dựa trên hành vi tình dục (chưa có kinh nghiệm tình dục hoặc đã có kinh nghiệm) và liều morphine (0.5, 5.0 hoặc 10.0 mg/kg, tiêm phúc mạc) và được kiểm tra về sự ưa thích vị trí có điều kiện (CPP) do morphine gây ra.

Morphine-CPP.

Quá trình huấn luyện diễn ra 1 ngày sau phiên giao phối cuối cùng và các nhóm được ghép cặp dựa trên hiệu suất tình dục trong phiên giao phối cuối cùng. Mô hình CPP được sử dụng bao gồm một bài kiểm tra trước, các ngày huấn luyện và bài kiểm tra sau, và thiết bị được dựa trên nghiên cứu của Tenk et al. (2009) . Tóm lại, thiết bị CPP (MED Associates) bao gồm ba buồng riêng biệt. Giữa mỗi phiên, thiết bị được làm sạch kỹ lưỡng bằng dung dịch ethanol 70% để giảm thiểu các tín hiệu khứu giác còn sót lại. Để xác định sở thích cá nhân, một bài kiểm tra trước đã được tiến hành, trong đó các con vật được tự do tiếp cận toàn bộ thiết bị trong 15 phút. Nhìn chung, các con vật không thể hiện sự ưa thích đáng kể đối với một buồng cụ thể nào, nhưng mỗi con vật riêng lẻ đều có một sự ưa thích ban đầu nhẹ. Những con chuột thể hiện sự ưa thích đáng kể đối với một trong các buồng (>200 giây khác biệt giữa thời gian ở mỗi buồng; <5% số động vật) trong bài kiểm tra trước đã bị loại khỏi nghiên cứu. Trong quá trình huấn luyện, thuốc được ghép với buồng ban đầu được ưa thích hoặc không được ưa thích bằng cách sử dụng mô hình không thiên vị ( Tzschentke, 2007 ) và động vật được nhốt trong các buồng trong 30 phút. Động vật được tiêm dung dịch muối sinh lý (tiêm phúc mạc) vào buổi sáng (9:00 AM đến 12:00 PM) và được nhốt trong buồng được ghép với dung dịch muối sinh lý (buồng đối chứng). Vào buổi chiều (1:00–4:00 PM), động vật được tiêm morphin (tiêm phúc mạc, 0.5 mg/kg, 5.0 mg/kg hoặc 10.0 mg/kg; morphin sulfat hòa tan trong dung dịch muối sinh lý 0.9%, Johnson Matthey) và được nhốt trong buồng được ghép với morphin. Động vật được trải qua hai ngày huấn luyện. Ngày hôm sau (3 ngày sau ngày giao phối cuối cùng), một bài kiểm tra sau huấn luyện, về mặt thủ tục giống hệt bài kiểm tra trước huấn luyện, đã được tiến hành. Để phân tích thống kê, thời gian ở trong buồng được ghép cặp với morphine trong giai đoạn sau thử nghiệm được so sánh với thời gian ở trong buồng được ghép cặp với dung dịch muối sinh lý trong giai đoạn sau thử nghiệm đối với con đực chưa từng giao phối hoặc đã từng giao phối trong mỗi liều lượng bằng cách sử dụng phép kiểm định t cặp đôi . Giá trị p < 0.05 được coi là có ý nghĩa thống kê. Các nhóm đối chứng bổ sung gồm các động vật chưa từng giao phối và đã từng giao phối được tiêm dung dịch muối sinh lý trong cả buồng được ghép cặp và không được ghép cặp để làm nhóm đối chứng âm tính. Không phát hiện thấy sự khác biệt về thời gian ở giữa các buồng đối với cả hai nhóm.

Tác dụng của naloxone toàn thân đối với việc tạo điều kiện thuận lợi cho hành vi tình dục

Thiết kế thử nghiệm.

Kinh nghiệm tình dục dẫn đến sự thúc đẩy hành vi tình dục được duy trì trong ít nhất 1 tháng ( Pitchers et al., 2012 ). Để phân tích tác động của việc ngăn chặn MOR đối với sự thúc đẩy hành vi tình dục do kinh nghiệm gây ra, các động vật đã có kinh nghiệm tình dục được tiêm naloxone hoặc dung dịch muối sinh lý trước năm phiên giao phối liên tiếp ( n = 12 mỗi phiên) như mô tả ở trên. Một tuần sau phiên giao phối cuối cùng, một thử nghiệm giao phối cuối cùng được tiến hành, trong đó tất cả các động vật được phép giao phối cho đến khi xuất tinh một lần hoặc tối đa 1 giờ. Không có phương pháp điều trị naloxone hoặc dung dịch muối sinh lý nào được sử dụng trước khi giao phối vào ngày thử nghiệm cuối cùng. Các thông số giao phối được so sánh để xác định xem naloxone có ảnh hưởng đến sự thúc đẩy giao phối do kinh nghiệm tình dục gây ra (ngày 1 so với ngày 5) hoặc sự duy trì của sự thúc đẩy này (ngày 5 so với thử nghiệm) bằng cách sử dụng phân tích phương sai hai chiều (ANOVA hai chiều) [các yếu tố: phương pháp điều trị (dung dịch muối sinh lý so với naloxone) và ngày (ngày 1, ngày 5 hoặc thử nghiệm)] và phương pháp Holm–Sidak để so sánh hậu kiểm . Đối với tất cả các phép kiểm định thống kê, giá trị p < 0.05 được coi là có ý nghĩa thống kê.

Thí nghiệm kiểm soát bổ sung

Naloxone toàn thân vào ngày thử nghiệm.

Để chứng minh rằng sự thay đổi hành vi tình dục vào ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng không phải do thiếu naloxone, chúng tôi đã tiêm naloxone hoặc dung dịch muối sinh lý vào ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng cho những con vật được giao phối kèm theo naloxone trong quá trình tích lũy kinh nghiệm tình dục. Cụ thể, tất cả các con vật đều được tiêm naloxone (10 mg/kg, tiêm dưới da) 30 phút trước khi giao phối và xuất tinh một lần trong 5 ngày liên tiếp. Vào ngày thử nghiệm 7 ngày sau đó, khoảng một nửa số con vật được tiêm naloxone (10 mg/kg, n = 7) hoặc dung dịch muối sinh lý ( n = 6) 30 phút trước khi đưa con cái sẵn sàng giao phối vào. Hành vi tình dục được quan sát và ghi lại. Các thông số giao phối được so sánh để xác định xem naloxone có ảnh hưởng đến sự thúc đẩy giao phối do kinh nghiệm giới tính gây ra (ngày 1 so với ngày 5) hay duy trì sự thúc đẩy này (ngày 5 so với thử nghiệm) bằng cách sử dụng phân tích phương sai hai chiều (ANOVA hai chiều) [các yếu tố: điều trị (nước muối sinh lý so với naloxone) và ngày (ngày 1, ngày 5 hoặc thử nghiệm)] và phương pháp Holm-Sidak để so sánh hậu kiểm . Đối với tất cả các phép thử thống kê, p < 5% được coi là có ý nghĩa thống kê.

Tác dụng của naloxone trên biểu hiện ngắn hạn của hành vi tình dục được tạo điều kiện.

Tác dụng của việc điều trị bằng naloxone (10 mg/kg, tiêm dưới da) trong quá trình giao phối đã được kiểm tra trên hành vi tình dục tiếp theo trong ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng, được tiến hành chỉ 1 ngày sau lần giao phối cuối cùng (dung dịch muối sinh lý, n = 5; naloxone, n = 4).

Tiền xử lý naloxone toàn thân.

Để xác định xem việc điều trị lặp lại bằng naloxone có gây suy giảm hành vi tình dục 7 ngày sau lần điều trị cuối cùng hay không, các động vật chưa từng giao phối được tiêm naloxone (10 mg/kg, tiêm dưới da) hoặc dung dịch muối sinh lý năm lần mỗi ngày trong các ngày liên tiếp trước khi tiến hành thử nghiệm giao phối 7 ngày sau lần tiêm naloxone hoặc dung dịch muối sinh lý cuối cùng. Vào ngày thử nghiệm cuối cùng này, các động vật không được tiêm bất kỳ loại thuốc nào. Hành vi tình dục được quan sát và ghi lại như mô tả ở trên. Các thông số giao phối được so sánh giữa các nhóm bằng cách sử dụng phép kiểm định t không ghép cặp . Đối với tất cả các phép kiểm định thống kê, p < 5% được coi là có ý nghĩa thống kê.

Naloxone toàn thân và phần thưởng tình dục.

Một khả năng cho các tác dụng làm suy giảm của naloxone trên màn hình duy trì hành vi tình dục được tạo điều kiện là naloxone ngăn chặn các tác động bổ ích của hành vi tình dục. Để kiểm tra khả năng này, mô hình CPP đã được tiến hành cho hành vi tình dục ngay sau khi tiêm naloxone hoặc tiêm nước muối ở nam giới không có kinh nghiệm tình dục trước đó. Thủ tục CPP tương tự như mô tả ở trên đối với morphin-CPP, bao gồm cả trước, ngày điều hòa và sau thử nghiệm.

Hành vi giao phối được ghép cặp với buồng ban đầu không được ưa thích. Theo cách cân bằng, mỗi con vật được tiêm naloxone ( n = 12) hoặc nước muối sinh lý ( n = 11) 30 phút trước khi được tiếp cận với con cái sẵn sàng giao phối. Thời gian trung bình của phiên giao phối là khoảng 13 phút. Một phút sau khi xuất tinh, con vật được đặt vào buồng ghép cặp trong 30 phút. Vào ngày huấn luyện khác, các con vật được tiêm naloxone hoặc nước muối sinh lý (tùy thuộc vào loại chúng đã được tiêm trước khi giao phối), và được đặt vào buồng không ghép cặp trong 30 phút. Tiếp theo, một bài kiểm tra sau được tiến hành, giống hệt bài kiểm tra trước. Để xác định sự ưa thích buồng, thời gian dành trong buồng ghép cặp trong bài kiểm tra trước và sau được so sánh. Để phân tích thống kê, các phép kiểm định t ghép cặp được sử dụng để so sánh điểm ưa thích và điểm khác biệt, và thời gian ở trong buồng ghép cặp trong bài kiểm tra trước và sau để xác định xem có hình thành CPP đáng kể đối với hành vi tình dục hay không. p < 0.05 được coi là có ý nghĩa thống kê.

Tác dụng của naloxone trong VTA đối với việc tạo điều kiện thuận lợi cho hành vi tình dục

Thiết kế thử nghiệm.

Để xác định xem tác động của EOP, đặc biệt là ở vùng VTA, có chịu trách nhiệm cho những thay đổi do kinh nghiệm tình dục gây ra đối với hành vi tình dục hay không, các động vật đã được tiêm naloxone hoặc dung dịch muối sinh lý vào vùng VTA trước năm phiên giao phối hàng ngày. Mô hình hành vi tương tự như thí nghiệm naloxone toàn thân. Các động vật đã có kinh nghiệm tình dục được phép giao phối trong 5 ngày liên tiếp cho đến khi xuất tinh một lần hoặc tối đa 1 giờ. Mười lăm phút trước khi đưa chuột cái sẵn sàng giao phối vào, chuột đực được tiêm hai bên naloxone (10 μg/μl mỗi bán cầu; thể tích 0.5 μl; hòa tan trong dung dịch muối sinh lý 0.9%) hoặc dung dịch muối sinh lý (0.5 μl mỗi bán cầu). Tiêm vi lượng hai bên được thực hiện với tốc độ dòng chảy 0.5 μl/phút trong khoảng thời gian 1 phút, sau đó giữ nguyên ống tiêm tại chỗ thêm 1 phút để khuếch tán. Sau đó, ống tiêm được thay thế bằng ống tiêm giả và nắp đậy. Một tuần sau ngày giao phối cuối cùng (ngày thử nghiệm), tất cả các con vật đều giao phối thêm một lần nữa cho đến khi xuất tinh mà không cần truyền naloxone hoặc dung dịch muối sinh lý. Hình 3A mô tả thiết kế thí nghiệm. Phân tích dữ liệu được tiến hành như mô tả trong thí nghiệm naloxone toàn thân.

Phẫu thuật can thiệp.

Chuột đực được gây mê bằng cách tiêm phúc mạc (0.1 ml/kg) ketamine (0.87 mg/ml) và xylazine (0.13 mg/ml), sau đó đặt vào thiết bị định vị não (Kopf Instruments). Hai ống dẫn hướng 21-gauge (Plastics One) được hạ xuống qua các lỗ khoan nhỏ trên hộp sọ vào não hướng về vùng VTA ở vị trí -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML so với bregma và -7.8 mm DV so với đỉnh hộp sọ theo Paxinos và Watson (2013) . Các ống dẫn được cố định bằng nhựa acrylic nha khoa dính vào ba vít được gắn vào hộp sọ. Các con vật được cho thời gian phục hồi 2 tuần và được xử lý hàng ngày để làm quen với các thủ tục thao tác và tiêm được sử dụng trong quá trình thử nghiệm hành vi.

Xác minh vị trí Cannula.

Vị trí đặt ống thông được kiểm tra bằng phương pháp nhuộm miễn dịch TH để xác nhận vùng VTA được nhắm mục tiêu chính xác. Chỉ những động vật có vị trí đặt ống thông chính xác mới được đưa vào phân tích (kích thước nhóm cuối cùng: nhóm dùng dung dịch muối sinh lý n = 8; nhóm dùng naloxone n = 6). Ba động vật khác được tiêm naloxone nội VTA nhưng hướng ra ngoài VTA được gộp chung vào nhóm "tiêm hụt". Nhóm tiêm hụt được phân tích riêng để làm nhóm đối chứng về mặt giải phẫu và phép thử Mann–Whitney U được sử dụng để so sánh hành vi vào ngày thử nghiệm cuối cùng với nhóm chuột đực đã được điều trị bằng naloxone và dung dịch muối sinh lý.

Biểu hiện PERK do ngữ cảnh liên kết giao phối

Thiết kế thử nghiệm.

Việc tiếp xúc với lồng mà trong đó con đực có được kinh nghiệm giao phối đã được chứng minh là gây ra sự kích hoạt MOR trong VTA và hoạt động thần kinh trong VTA và NAc ( Balfour et al., 2004 ). Do đó, môi trường giao phối đóng vai trò là tín hiệu có điều kiện dự báo phần thưởng tình dục. Nghiên cứu hiện tại đã kiểm tra xem liệu sự kích hoạt MOR trong quá trình trải nghiệm tình dục có cần thiết cho sự kích hoạt thần kinh do tín hiệu có điều kiện gây ra sau đó hay không. Naloxone hoặc dung dịch muối sinh lý được tiêm toàn thân (tiêm phúc mạc) 30 phút trước khi đặt vào đấu trường giao phối và đưa con cái sẵn sàng giao phối vào (đã có kinh nghiệm), hoặc trước khi thực hiện thao tác kiểm soát bao gồm việc đặt vào lồng xử lý mà không có sự xuất hiện của con cái (môi trường trung tính; chưa có kinh nghiệm). Do đó, bốn nhóm thí nghiệm đã được tạo ra: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​và Exp NLX. Một tuần sau phiên giao phối cuối cùng, một nửa số động vật trong mỗi nhóm được đưa vào lồng giao phối (con đực nhóm thí nghiệm: tín hiệu có điều kiện liên quan đến giới tính) hoặc lồng thao tác (con đực nhóm đối chứng: tín hiệu không nổi bật/trung tính), trong khi nửa còn lại không được tiếp xúc với bất kỳ tín hiệu nào và thay vào đó vẫn ở trong lồng nuôi (để xác định biểu hiện pERK cơ bản). Mô hình thí nghiệm này tạo ra 8 nhóm: Naive Sal-No Cue, Naive Sal+Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX+Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal+Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX+Cue ( mỗi nhóm n = 4 ngoại trừ nhóm Naive NLX-No Cue, n = 3). Các động vật được gây mê 10–15 phút sau khi tiếp xúc với tín hiệu. Các động vật đối chứng được đưa ra khỏi lồng nuôi và gây mê đồng thời.

Hóa mô miễn dịch.

Việc cắt lát và nhuộm miễn dịch mô học được tiến hành như mô tả ở trên. Ở đây, chúng tôi đã sử dụng kháng thể đa dòng thỏ chống lại p42 và p44 MAP Kinase ERK1 và ERK2 (pERK; 1:4000; Cell Signaling Technology). Kháng thể chính đã được mô tả chi tiết trong tài liệu ( Roux và Blenis, 2004 ; Murphy và Blenis, 2006 ; Frohmader et al., 2010b ). Hơn nữa, việc bỏ qua kháng thể chính đã ngăn chặn mọi phản ứng miễn dịch và phân tích Western blot trên mô não chuột cho thấy hai dải ở trọng lượng phân tử thích hợp.

Phân tích dữ liệu.

Số lượng tế bào phản ứng miễn dịch pERK (-IR) được đếm trong một số vùng não bằng cách sử dụng ống vẽ camera lucida gắn vào kính hiển vi Leica DMRD: NAc [vùng lõi (C) và vùng vỏ (S); 400 × 600 μm; vỏ não trước trán giữa; mPFC; vùng cingulate trước (ACA); vỏ não trước viền (PL); vỏ não dưới viền (IL); mỗi vùng 600 × 800 μm], nhân đuôi-vỏ não (CP; 800 × 800 μm), và hạch hạnh nhân đáy bên (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004 ; Frohmader et al., 2010b ; Pitchers et al., 2010b ). Hai phần được đếm cho mỗi vùng não và số lượng tế bào trong các vùng phân tích tiêu chuẩn sau đó được tính toán dưới dạng số lượng tế bào trên mm² . Hai lần đếm được tính trung bình cho mỗi con vật để tính toán giá trị trung bình của nhóm. Giá trị trung bình của nhóm trong các nhóm đã có hoặc chưa có kinh nghiệm tình dục được so sánh bằng phân tích phương sai hai chiều (ANOVA hai chiều) [các yếu tố: điều trị bằng thuốc (NLX hoặc Sal) và tín hiệu (có tín hiệu hoặc không có tín hiệu)] tiếp theo là so sánh hậu kiểm bằng cách sử dụng kiểm định tổng Holm–Sidak hoặc Mann–Whitney khi thích hợp với mức ý nghĩa p < 0.05. Trong vỏ NAc của các con vật đã có kinh nghiệm tình dục, có xu hướng mạnh mẽ về sự có ý nghĩa thống kê của các yếu tố, do đó, các so sánh từng cặp được tiến hành để chỉ so sánh nhóm dùng dung dịch muối sinh lý (Sal-Không có tín hiệu) và nhóm dùng dung dịch muối sinh lý có tín hiệu (Sal+Có tín hiệu).

Hình ảnh.

Hình ảnh kỹ thuật số được chụp bằng camera CCD (Macrofire, Optronics) gắn trên kính hiển vi Leica (DM5000B) với các thiết lập camera cố định. Hình ảnh được nhập vào phần mềm Adobe Photoshop 9.0. Hình ảnh không được chỉnh sửa theo bất kỳ cách nào ngoại trừ điều chỉnh độ sáng và độ tương phản.

Kết quả

Những thay đổi do trải nghiệm tình dục trong các tế bào dopamine VTA

Trải nghiệm tình dục dẫn đến giảm kích thước soma VTA dopamine (Sung. 1AC). Trải nghiệm tình dục làm giảm đáng kể diện tích và chu vi của soma của các tế bào VTA TH-IR (khu vực: F(1,31) = 23.068, p <0.001; chu vi, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Cũng có một tác động đáng kể chính của thời gian (khu vực: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; chu vi, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) và tương tác đáng kể giữa kinh nghiệm và thời gian (khu vực: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; chu vi, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Các so sánh theo cặp cho thấy diện tích và chu vi của các tế bào TH-IR đã giảm đáng kể 1 và 7 d sau ngày cuối cùng của hành vi tình dục ở động vật có kinh nghiệm tình dục so với các biện pháp kiểm soát tình dục ngây thơ [Sung. 1B, khu vực: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 đ); C, chu vi: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 đ)]. Tác động của hành vi tình dục biến mất khi tiếp theo là khoảng thời gian kiêng thưởng vì kích thước soma của tế bào thần kinh TH-IR trở lại mức cơ bản 31 ngày sau lần giao phối cuối cùng (Sung. 1B, khu vực: p = 0.798; C, chu vi: p = 0.785). Những thay đổi do trải nghiệm tình dục không được phát hiện theo vòng tròn tại bất kỳ thời điểm nào (Sung. 1D). Giảm kích thước soma VTA dopamine không phụ thuộc vào các phiên giao phối hàng ngày, vì kinh nghiệm giao phối trong năm phiên giao phối hai tuần một lần cũng tạo ra kích thước soma VTA dopamine giảm (Sung. 2A,B, ETHER H, khu vực: p = 0.004; chu vi: p <0.001). Ngược lại, kinh nghiệm quan hệ tình dục không ảnh hưởng đến kích thước soma TH-IR ở con thỏ con (substantia nigra) (Sung. 2C, Tôi gọi J, khu vực: p = 0.13; chu vi: p = 0.16) cũng không thay đổi kích thước soma trong các tế bào thần kinh VTA không phải TH-IR gần đó (Sung. 2D, ETHER H, khu vực: p = 0.46; chu vi: p =

Hình 1. 

Thay đổi kích thước soma opioid gây ra nội sinh của các tế bào thần kinh VTA dopamine. A, Hình ảnh đại diện của các tế bào thần kinh VTA dopamine từ các động vật ngây thơ và có kinh nghiệm tình dục cho thấy sự giảm kích thước soma 7 d sau phiên giao phối cuối cùng. Thanh tỷ lệ, 5 mm. Dữ liệu định lượng cho thấy trải nghiệm tình dục (Exp, thanh màu đen) gây ra giảm đáng kể diện tích (B; trong m2) và chu vi (C; tính bằng mm) của các tế bào dopamine VTA, 1 d (Naive, Exp; n = 6) và 7 d (Ngây thơ, n = 5; Exp n = 6), nhưng không phải 31 d (Ngây thơ, n = 6; Exp n = 8) sau khi giao phối cuối cùng, so với các điều khiển ngây thơ tình dục (Ngây thơ, thanh trắng). Diện tích đã giảm xuống còn 84% ở những con đực có kinh nghiệm so với các đối chứng ngây thơ tại 1 hoặc 7 d. Chu vi đã giảm xuống còn 91.6 và 90% trong các nhóm có kinh nghiệm so với kiểm soát tại 1 và 7 d resp. Không có ảnh hưởng đến tính tuần hoàn (D). Độ dẻo tế bào dopamine này trong khu vực (E) và chu vi (F) đã được ngăn chặn bởi naloxone (NLX, n = 8), nhưng không phải nước muối (Sal, n = 7) điều trị trong quá trình giao phối, 7 d sau phiên giao phối cuối cùng so với các biện pháp kiểm soát ngây thơ tình dục (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Dữ liệu đại diện cho giá trị trung bình ± SEM; * cho thấy sự khác biệt đáng kể so với các kiểm soát ngây thơ tình dục trong cùng một ngày (B, C) hoặc so sánh với các biện pháp kiểm soát tình dục ngây thơ được điều trị bằng nước muối và nam giới có kinh nghiệm tình dục được điều trị bằng naloxone (E, F).

Hình 2. 

Kinh nghiệm tình dục không làm giảm kích thước soma trong các tế bào thần kinh provia nigra dopamine hoặc tế bào thần kinh VTA nondopamine. Vùng soma thần kinh VTA TH-IR (A; trong m2) và chu vi (B; tính bằng μm) ở động vật ngây thơ tình dục (trắng) và có kinh nghiệm (đen) có được kinh nghiệm bằng cách giao phối hai lần mỗi tuần thay vì trong những ngày liên tiếp. Substantia nigra TH-IR khu vực soma (C) và khu vực soma không TH-IR của VTA (D) ở động vật ngây thơ tình dục (trắng) và có kinh nghiệm (đen). Dữ liệu đại diện cho giá trị trung bình ± SEM; * chỉ ra sự khác biệt đáng kể so với các kiểm soát ngây thơ tình dục. Hình ảnh đại diện cho thấy các tế bào thần kinh TH-IR (màu nâu) trong VTA của ngây thơ tình dục (E) và có kinh nghiệm (F) con đực. G, H, Một hình ảnh phóng đại cao hơn của tế bào thần kinh được chỉ định bởi mũi tên trong E và F tương ứng. Các tế bào thần kinh nhuộm Nissl được hiển thị màu xanh lam trong những hình ảnh này. Hình ảnh đại diện cho thấy tế bào thần kinh TH-IR trong SN của ngây thơ tình dục (I) và có kinh nghiệm (J) con đực. Thanh tỷ lệ: E–J, 20 m.

Giảm kích thước soma do kinh nghiệm tình dục của các tế bào thần kinh VTA dopamine phụ thuộc vào kích hoạt thụ thể opioid

Việc giảm kích thước tế bào thần kinh VTA dopamine gây ra bởi kinh nghiệm tình dục đã bị chặn bởi chất đối kháng MOR không chọn lọc naloxone, được quản lý trước mỗi phiên giao phối. Điều trị bằng Naloxone trước khi giao phối có ảnh hưởng đáng kể đến diện tích (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) và có xu hướng ảnh hưởng đáng kể đến chu vi (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Một sự tương tác đáng kể giữa kinh nghiệm và điều trị naloxone đã được tìm thấy cho khu vực (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) và chu vi (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). So sánh theo chiều ngang cho thấy kinh nghiệm tình dục ở động vật được điều trị bằng nước muối làm giảm đáng kể diện tích và chu vi của các tế bào thần kinh VTA dopamine 7 d sau phiên giao phối cuối cùng so với con đực ngây thơ được điều trị bằng nước muối (Sung. 1E, khu vực: p = 0.018; F, chu vi: p = 0.007). Ngược lại, động vật được điều trị bằng naloxone có kinh nghiệm tình dục không khác với những con đực ngây thơ được điều trị bằng naloxone (Sung. 1E, khu vực: p = 0.483; F, chu vi: p = 0.330). Ngoài ra, kích thước soma của động vật nhiễm mặn có kinh nghiệm đã giảm đáng kể so với động vật naloxone có kinh nghiệm (Sung. 1E, khu vực: p = 0.002; F, chu vi: p = 0.002). Tác dụng này của naloxone đặc biệt đối với trải nghiệm tình dục, vì chỉ điều trị bằng naloxone không ảnh hưởng đến kích thước soma tế bào TH-IR ở nam giới được điều trị bằng naloxone ngây thơ tình dục so với đối chứng được điều trị bằng nước muối (Sung. 1E,F). Hơn nữa, tác dụng này của naloxone trong việc giảm kích thước soma do kinh nghiệm không phải do tác dụng của naloxone đối với hành vi tình dục, vì hành vi giao phối không khác biệt đáng kể giữa nam giới được điều trị bằng naloxone và nước muối, ngoại trừ thời gian dài hơn để bắt đầu giao phối sau khi xuất tinh. (khoảng thời gian xuất tinh) ở nam giới được điều trị bằng naloxone trong phiên giao phối thứ nhất và thứ năm (p = 0.03 và p = 0.004, tương ứng). Cả nam giới được điều trị bằng nước muối và naloxone đều bị xuất tinh trong mỗi năm phiên giao phối.

Kinh nghiệm tình dục - chịu đựng morphine thưởng khoan dung

Tác động của kinh nghiệm tình dục lên kích thước tế bào dopamine VTA thông qua hoạt động của EOP trong VTA tương tự như những tác động đã được báo cáo đối với thuốc phiện ngoại sinh ( Sklair-Tavron et al., 1996 ; Russo et al., 2007 ). Do đó, người ta đã kiểm tra xem tính dẻo dai của tế bào dopamine VTA do phần thưởng tự nhiên gây ra có ảnh hưởng đến phần thưởng đối với thuốc phiện morphine hay không. Thật vậy, kinh nghiệm tình dục gây ra hiện tượng dung nạp phần thưởng morphine, tương tự như tác động của thuốc phiện mãn tính ( Russo et al., 2007 ). Những con đực đã có kinh nghiệm tình dục không phát triển được CPP đối với liều morphine 0.5 mg/kg; trong khi đó, những con đực chưa có kinh nghiệm tình dục lại hình thành CPP đối với liều này, được thể hiện bằng việc chúng dành nhiều thời gian hơn trong buồng được ghép nối với morphine so với buồng được ghép nối với dung dịch muối sinh lý trong quá trình kiểm tra sau đó ( Hình 3 ; p = 0.039). Cả nhóm chưa từng quan hệ tình dục và nhóm đã từng quan hệ tình dục đều dành thời gian nhiều hơn đáng kể trong buồng được ghép cặp với morphine so với buồng được ghép cặp với dung dịch muối sinh lý ở liều morphine cao hơn: 5.0 mg/kg ( Hình 3 ; Chưa từng quan hệ: p = 0.029; Đã từng quan hệ: p = 0.012) và 10.0 mg/kg ( Hình 3 ; Chưa từng quan hệ: p < 0.001; Đã từng quan hệ: p = 0.002).

Hình 3. 

Ảnh hưởng của kinh nghiệm tình dục đến phần thưởng morphine. Thời gian ở trong buồng được ghép cặp với dung dịch muối sinh lý (Sal) hoặc morphine (Mor; 0.5, 5 hoặc 10 mg/kg trọng lượng cơ thể) trong giai đoạn sau thử nghiệm ở nam giới chưa có kinh nghiệm tình dục (Naive, n = 10–13) hoặc đã có kinh nghiệm (Exp, n = 9–13). Dữ liệu được trình bày dưới dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn; * cho biết sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với buồng được ghép cặp với Sal trong cùng một cá thể. NS, Không có ý nghĩa thống kê.

Tạo thuận lợi cho trải nghiệm tình dục của hành vi giao phối phụ thuộc vào kích hoạt thụ thể opioid

Các phát hiện cho đến nay chứng minh rằng EOP hoạt động trong VTA trong các phiên giao phối ngắn hàng ngày của 5 gây ra tính dẻo của các tế bào thần kinh dopamine VTA tương tự như tác dụng của việc tự điều trị morphin hoặc heroin mãn tính (Russo và cộng sự, 2007; Mazei-Robison và cộng sự, 2011). Chúng tôi đã đưa ra giả thuyết rằng việc giảm kích thước soma của VTA dopamine là rất quan trọng để học tập có thưởng và đặc biệt là tạo thuận lợi cho trải nghiệm tình dục của hành vi tình dục về động lực và hiệu suất. Giả thuyết này đã được kiểm tra bằng cách ngăn chặn MOR bằng naloxone trong quá trình giao phối và kiểm tra các tác động của việc tạo thuận lợi cho hành vi tình dục gây ra bởi kinh nghiệm tình dục trong năm phiên giao phối hàng ngày. Dữ liệu được trình bày trong Hình 4 chỉ dành cho phiên giao phối thứ nhất và thứ năm, vì đây là những dữ liệu minh họa rõ nhất cho sự thuận lợi do kinh nghiệm gây ra đối với hành vi giao phối. Hơn nữa, hiệu quả lâu dài của điều trị naloxone trong các phiên giao phối được kiểm tra để duy trì sự thuận lợi do kinh nghiệm gây ra đối với hành vi giao phối, trong thử nghiệm giao phối cuối cùng trong tuần sau đó. Hình 4A cho thấy các thiết kế thử nghiệm. Có một tác động chính đáng kể của phiên giao phối đối với tất cả các thông số về hành vi tình dục (độ trễ gắn kết: F(2,55) = 11.286, p <0.001; độ trễ intromission: F(2,55) = 8.767, p <0.001; độ trễ xuất tinh: F(2,55) = 10.368, p <0.001) và xử lý naloxone về độ trễ để gắn kết (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) và giới thiệu (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). So sánh theo chiều ngang cho thấy điều trị bằng naloxone ảnh hưởng đến hành vi tình dục trong phiên giao phối đầu tiên vì động vật naloxone có độ trễ dài hơn đáng kể so với lần đầu tiên gắn kết (p = 0.002) và giới thiệu (p = 0.002) so với kiểm soát mặn trong ngày đầu tiên giao phối. Tác dụng naloxone này đối với hành vi tình dục ban đầu bị giảm đi bởi trải nghiệm tình dục và không được quan sát trong bất kỳ phiên giao phối nào sau đó (Bảng 1). Hơn nữa, quản trị naloxone trước mỗi năm phiên giao phối không ngăn cản sự thuận lợi ban đầu của hành vi tình dục với kinh nghiệm tình dục. Phù hợp với các tác dụng củng cố của trải nghiệm tình dục, nam giới được điều trị bằng nước muối biểu hiện giảm độ trễ để gắn kết (Sung. 4B; p = 0.032) giới thiệu (Sung. 4C; p = 0.033) và xuất tinh (Sung. 4D; p <0.001) trong lần giao phối thứ năm so với lần giao phối đầu tiên, điều này cho thấy sự tạo điều kiện thuận lợi cho hành vi tình dục. Tương tự, những con đực được điều trị bằng naloxone hiển thị thời gian chờ ngắn hơn đáng kể để gắn kết (Sung. 4B; p <0.001), intromission (Sung. 4C; p <0.001), và xuất tinh (Sung. 4D; p = 0.017) vào ngày thứ năm so với ngày đầu tiên. Hơn nữa, con đực được điều trị bằng naloxone không khác với kiểm soát mặn trong bất kỳ độ trễ nào trong phiên giao phối thứ năm.

Hình 4. 

Opioid nội sinh đóng vai trò quan trọng trong việc thúc đẩy hành vi tình dục do trải nghiệm gây ra. A , Thiết kế thí nghiệm. B – D , Các thông số hành vi tình dục ở con đực được điều trị bằng dung dịch muối sinh lý (Sal, cột màu trắng, n = 11) hoặc naloxone (NLX; cột màu đen, n = 12) bằng đường toàn thân. Dữ liệu được hiển thị là thời gian chờ giao phối ( B ; giây), thời gian thâm nhập ( C ; giây) và thời gian xuất tinh ( D ; giây) vào ngày 1 và ngày 5 trong năm ngày giao phối liên tiếp. Ngoài ra, dữ liệu được hiển thị cho thử nghiệm giao phối cuối cùng, 7 ngày sau phiên giao phối thứ năm. Dữ liệu được trình bày dưới dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn; + cho biết sự khác biệt đáng kể giữa ngày 1 và ngày 5 trong cùng một phương pháp điều trị; * cho biết sự khác biệt đáng kể giữa ngày thử nghiệm và ngày 5 trong cùng một phương pháp điều trị; # cho biết sự khác biệt đáng kể giữa nhóm naloxone và nhóm dung dịch muối sinh lý trong cùng một ngày.

Bảng 1. 

Quản trị Naloxone trước khi giao phối tăng độ trễ để gắn kết và chỉ xâm nhập vào ngày đầu tiên giao phối

Ngược lại, điều trị naloxone trong phiên trải nghiệm tình dục đã phá vỡ sự duy trì sự thuận lợi do kinh nghiệm gây ra đối với hành vi tình dục trong ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng. Ngày thử nghiệm được tiến hành 7 d sau phiên giao phối cuối cùng trong trường hợp không tiêm naloxone. Nam giới kiểm soát được điều trị bằng nước muối cho thấy sự thuận lợi do kinh nghiệm gây ra đối với hành vi tình dục. Cụ thể, độ trễ để gắn kết, giới thiệu và xuất tinh không khác nhau giữa phiên giao phối thứ năm và ngày thử nghiệm cuối cùng (Sung. 4Bẻ D). Trong khi đó, nam giới được điều trị bằng naloxone cho thấy sự gia tăng đáng kể về độ trễ để gắn kết (Sung. 4B; p = 0.033), giới thiệu (Sung. 4C; p = 0.036) và xuất tinh (Sung. 4D; p = 0.049) vào ngày thử nghiệm so với phiên giao phối thứ năm. Ngoài ra, vào ngày thử nghiệm, động vật naloxone được phát hiện chậm hơn đáng kể so với con đực được điều trị bằng nước muối như được hiển thị bởi độ trễ dài hơn để gắn kết (Sung. 4B; p = 0.017) và giới thiệu (Sung. 4C; p = 0.043). Do đó, điều trị bằng naloxone đã ngăn chặn việc duy trì, nhưng không phải là sự phát triển ban đầu của việc tạo thuận lợi cho hành vi tình dục. Những phát hiện này cho thấy một vai trò quan trọng đối với tính dẻo của tế bào thần kinh VTA dopamine do EOP gây ra trên biểu hiện dài hạn của việc củng cố hành vi khen thưởng tự nhiên.

Một số thí nghiệm kiểm soát bổ sung đã được tiến hành để xác định rằng tác động của phong tỏa thụ thể opioid đối với việc mất củng cố lâu dài hành vi tình dục xảy ra độc lập với việc thiếu naloxone trong ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng (Sung. 5A,B), cụ thể là mất khả năng duy trì lâu dài, nhưng không phải là duy trì thuận lợi trong giao phối (Sung. 5E,F), không phải do tiếp xúc hàng ngày với naloxone đơn thuần (Sung. 5C,D) và không phải do mất phần thưởng tình dục ở nam giới được điều trị bằng naloxone (Sung. 5G,H). Đầu tiên, để chỉ ra rằng hành vi tình dục đã thay đổi trong thử nghiệm giao phối cuối cùng không phải do không có naloxone, naloxone hoặc nước muối được sử dụng trong ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng đối với động vật được ghép đôi với naloxone trong khi chúng có được kinh nghiệm tình dục (Sung. 5A). Có một ảnh hưởng chính đáng kể của ngày giao phối đến độ trễ để gắn kết (Sung. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) và giới thiệu (Bảng 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Không có tác dụng chính của ngày giao phối đối với độ trễ xuất tinh (Bảng 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Tương tự như mô tả ở trên, điều trị naloxone trong quá trình giao phối không ảnh hưởng đến việc tạo điều kiện cho hành vi tình dục trong năm phiên trải nghiệm tình dục ban đầu. Cả hai nhóm (nhóm được điều trị bằng nước muối và naloxone được xác định bằng điều trị nhận được trong thử nghiệm giao phối cuối cùng; cả hai đều nhận được naloxone trong quá trình giao phối) đã chứng minh hành vi tình dục được tạo điều kiện vào ngày 5 so với ngày 1 và cho thấy độ trễ ngắn hơn đáng kể so với lần đầu tiên (Sung. 5B; nước muối: p = 0.033; naloxone: p = 0.014) và giới thiệu (Bảng 2; nước muối: p = 0.034; naloxone: p = 0.026). Động vật nhận được naloxone hoặc nước muối trong ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng có thời gian trễ dài hơn để gắn kết (Sung. 5B; nước muối: p = 0.018; naloxone: p = 0.029) và giới thiệu (Bảng 2; nước muối: p = 0.019; naloxone: p = 0.020) so với ngày thứ năm của kinh nghiệm giao phối. Do đó, việc sử dụng naloxone hoặc nước muối vào ngày thử nghiệm ngay trước khi giao phối không ảnh hưởng đến hiệu quả của việc điều trị naloxone trong các buổi trải nghiệm tình dục và suy giảm sự thuận lợi lâu dài của hành vi tình dục là giống hệt như ở động vật không được tiêm vào ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng (Sung. 4).

Hình 5. 

Opioid nội sinh đóng vai trò quan trọng trong biểu hiện lâu dài của sự kích thích hành vi tình dục do kinh nghiệm gây ra. A , Thiết kế thí nghiệm về tác dụng của điều trị NLX vào ngày thử nghiệm. B , Thời gian chờ giao phối vào ngày 1 và ngày 5 trong năm ngày giao phối liên tiếp và ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng (Thử nghiệm) sau khi tiêm dung dịch muối sinh lý (màu xám) hoặc naloxone (màu đen). Dữ liệu biểu thị giá trị trung bình ± sai số chuẩn. * cho biết sự khác biệt đáng kể giữa ngày 1 và ngày 5 trong cùng một phương pháp điều trị. # cho biết sự khác biệt đáng kể giữa ngày Thử nghiệm và ngày 5 trong cùng một phương pháp điều trị. C , Thiết kế thí nghiệm để kiểm tra tác dụng của việc điều trị trước bằng naloxone mà không có kinh nghiệm tình dục đối với hành vi giao phối. D , Thời gian chờ giao phối vào ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng, 7 ngày sau 5 ngày tiêm dung dịch muối sinh lý hoặc naloxone mà không có giao phối. Dữ liệu biểu thị giá trị trung bình ± sai số chuẩn. E , Thiết kế thí nghiệm để kiểm tra xem việc điều trị bằng naloxone có ảnh hưởng đến biểu hiện ngắn hạn của hành vi tình dục được kích thích ở động vật đã có kinh nghiệm tình dục hay không. F , Thời gian chờ giao phối vào ngày 1 và ngày 5 trong năm ngày giao phối liên tiếp và ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng, 1 ngày sau ngày 5, khi có mặt dung dịch muối sinh lý (màu xám) hoặc naloxone (màu đen). Dữ liệu biểu thị giá trị trung bình ± sai số chuẩn. * cho biết sự khác biệt đáng kể giữa ngày 1 và ngày 5 trong cùng một nhóm điều trị. G , Thiết kế thí nghiệm để kiểm tra xem việc điều trị bằng naloxone có ngăn chặn tác dụng gây hưng phấn của hành vi tình dục hay không. H , Thời gian dành trong buồng giao phối (tính bằng giây) trong giai đoạn trước thử nghiệm (màu trắng) và sau thử nghiệm (màu đen) đối với các động vật được tiêm naloxone hoặc dung dịch muối sinh lý trước khi giao phối. Dữ liệu biểu thị giá trị trung bình ± sai số chuẩn; * cho biết sự khác biệt đáng kể so với giai đoạn trước thử nghiệm.

Bảng 2. 

Dữ liệu được hiển thị là độ trễ đối với sự xâm nhập và xuất tinh (giây) từ các thí nghiệm kiểm soát được thực hiện để xác định rằng tác động của phong tỏa MOR đối với việc mất củng cố lâu dài hành vi tình dục xảy ra độc lập với việc thiếu naloxone trong ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng

Để xác định xem liệu việc điều trị bằng naloxone kết hợp với kinh nghiệm tình dục, chứ không phải chỉ riêng naloxone, có gây ra suy giảm hành vi tình dục 7 ngày sau lần điều trị cuối cùng hay không, các động vật chưa từng quan hệ tình dục đã được tiêm naloxone hoặc dung dịch muối sinh lý năm lần mỗi ngày trước khi tiến hành thử nghiệm giao phối cuối cùng 7 ngày sau đó ( Hình 5 C ). Không có sự khác biệt đáng kể nào được phát hiện đối với bất kỳ thông số giao phối nào giữa nhóm được điều trị trước bằng dung dịch muối sinh lý và nhóm được điều trị trước bằng naloxone ( Hình 5 D ; thời gian chờ leo lên; thời gian chờ thâm nhập: dung dịch muối sinh lý 139.7 ± 40.3 so với naloxone 121.83 ± 42.55; thời gian chờ xuất tinh: dung dịch muối sinh lý 887.9 ± 70.0 so với naloxone 1050.8 ± 327.31). Những kết quả này cho thấy rằng chỉ riêng naloxone không đủ để làm thay đổi hành vi tình dục sau đó, tương tự như việc chỉ riêng naloxone không có tác dụng đối với tính dẻo dai của tế bào thần kinh dopamine VTA.

Chúng tôi đưa ra giả thuyết rằng việc điều trị bằng naloxone trong quá trình thu nhận kinh nghiệm tình dục sẽ phá vỡ biểu hiện dài hạn của việc tạo thuận lợi cho trải nghiệm tình dục do hành vi tình dục gây ra. Để kiểm tra điều này hơn nữa, hiệu quả của điều trị naloxone trong quá trình giao phối đã được kiểm tra đối với hành vi tình dục tiếp theo trong thử nghiệm giao phối cuối cùng, chỉ được thực hiện 1 d sau lần giao phối cuối cùng (thiết kế thử nghiệm; Sung. 5E). Có một tác động chính đáng kể của ngày giao phối trên thú cưỡi (Sung. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) và độ trễ intromission (Bảng 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Không có ảnh hưởng chính đáng kể nào trong ngày đến độ trễ xuất tinh (Bảng 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Tương tự như mô tả ở trên, tất cả nam giới (mặc dù điều trị bằng nước muối hoặc naloxone) cho thấy sự thuận lợi của hành vi tình dục trong năm phiên trải nghiệm tình dục được chỉ định bởi độ trễ ngắn hơn đáng kể để gắn kết (Sung. 5F; nước muối: p = 0.002; naloxone: p = 0.018) và giới thiệu (Bảng 2; nước muối: p = 0.006; naloxone: p = 0.009) vào ngày 5 so với ngày 1. Tương tự, hành vi tình dục được tạo điều kiện đã được chứng minh vào ngày thử nghiệm so với ngày 1 được biểu thị bằng độ trễ ngắn hơn đáng kể để gắn kết (Sung. 5F; nước muối: p = 0.001; naloxone: p = 0.020) và giới thiệu (Bảng 2; nước muối: p = 0.004; naloxone: p = 0.009). Quan trọng hơn, điều trị naloxone trong quá trình giao phối không ảnh hưởng đáng kể đến việc tạo điều kiện thuận lợi cho hành vi tình dục khi thử nghiệm 1 d sau khi trải nghiệm tình dục, độc lập với điều trị naloxone trong ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng này.

Cuối cùng, chúng tôi đã kiểm tra khả năng tác dụng làm giảm của naloxone đối với biểu hiện lâu dài của hành vi tình dục được thúc đẩy là do tác dụng ngăn chặn của naloxone đối với các đặc tính gây hưng phấn của hành vi tình dục. Tuy nhiên, việc sử dụng naloxone ngay trước khi giao phối không làm thay đổi sự hình thành CPP đối với giao phối ( Hình 5G ) , cho thấy rằng việc điều trị bằng naloxone không làm thay đổi phần thưởng tình dục. Cả nhóm được điều trị bằng nước muối sinh lý và nhóm được điều trị bằng naloxone đều hình thành CPP đáng kể đối với hành vi tình dục, được thể hiện bằng thời gian dành trong buồng ghép đôi giới tính tăng lên đáng kể ( Hình 5H ; nước muối sinh lý: p = 0.038; naloxone: p = 0.002) trong thử nghiệm sau so với thử nghiệm trước. Do đó, naloxone không gây ra tác động bất lợi đối với việc duy trì hành vi tình dục được thúc đẩy bằng cách ngăn chặn phần thưởng liên quan đến hành vi tình dục.

Tạo thuận lợi cho hành vi tình dục phụ thuộc vào hành động EOP trong VTA

Để xác nhận rằng EOP hành động cụ thể trong VTA để tạo thuận lợi lâu dài cho hành vi tình dục, thiết kế thử nghiệm được nêu trong Hình 3A được lặp lại với truyền naloxone nội VTA chứ không phải tiêm toàn thân. Kết quả giống hệt với quản trị hệ thống được mô tả ở trên. Có một tác động chính đáng kể của ngày giao phối đối với tất cả các thông số về hành vi tình dục (Sung. 6A, độ trễ gắn kết: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, độ trễ giới thiệu: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, độ trễ xuất tinh: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) và điều trị naloxone nội VTA về độ trễ để gắn kết (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) và giới thiệu (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA naloxone không ngăn cản sự thuận lợi do trải nghiệm ban đầu của hành vi tình dục trong 5 d của giao phối, vì con đực được điều trị bằng naloxone đã chứng minh độ trễ giảm để gắn kết (Sung. 6A; p = 0.001), giới thiệu (Sung. 6B; p <0.001), và xuất tinh (Sung. 6C; p = 0.001) vào ngày 5 so với ngày 1. Những con đực được điều trị bằng Naloxone không khác với những con đực được điều trị bằng nước muối vào ngày thứ năm của giao phối trong bất kỳ độ trễ nào. Điều trị naloxone nội VTA, giống như quản trị toàn thân, gây ra sự gia tăng đáng kể (Sung. 6A; p <0.001) và độ trễ intromission (Sung. 6B; p <0.001) vào ngày giao phối đầu tiên so với những con đực được xử lý nước muối, điều này không được quan sát thấy trong các lần giao phối tiếp theo (trong đó những con đực được xử lý nước muối và naloxone không khác nhau). Một quan sát bất ngờ là trong thí nghiệm này, những con đực được xử lý bằng nước muối không cho thấy sự tạo thuận lợi về mặt thống kê có ý nghĩa thống kê về độ trễ gắn kết hoặc trong cơ (như được hiển thị trong tất cả các thí nghiệm được mô tả ở trên) và chỉ có thời gian xuất tinh được rút ngắn vào ngày thứ năm so với ngày đầu tiên (nước muối: p =

Hình 6. 

Các opioid nội sinh trong VTA đóng vai trò trung gian trong việc kích thích hành vi tình dục do trải nghiệm gây ra và duy trì hành vi đó lâu dài. Các thông số hành vi tình dục ở con đực được điều trị bằng dung dịch muối sinh lý (Sal, cột màu trắng, n = 8) hoặc NLX (cột màu đen, n = 6) bằng cách tiêm vào VTA. Dữ liệu được hiển thị là thời gian chờ giao phối ( A ), thời gian thâm nhập ( B ) và thời gian xuất tinh ( C ) vào ngày 1 và ngày 5 trong năm ngày giao phối liên tiếp. Ngoài ra, dữ liệu cũng được hiển thị cho ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng, 7 ngày sau ngày 5 trong trường hợp không tiêm dung dịch muối sinh lý hoặc naloxone. Dữ liệu biểu thị giá trị trung bình ± sai số chuẩn; + cho biết sự khác biệt đáng kể giữa ngày 1 và ngày 5 trong cùng một phương pháp điều trị; * cho biết sự khác biệt đáng kể giữa ngày thử nghiệm và ngày 5 trong cùng một phương pháp điều trị; # cho biết sự khác biệt đáng kể giữa nhóm naloxone và nhóm Sal trong cùng một ngày. Hình vẽ sơ đồ các mặt cắt ngang VTA (H, −4.60; I, −5.00; J, −5.25 từ bregma) chỉ ra vị trí tiêm nội VTA cho tất cả các động vật trong Thí nghiệm 5 (nước muối sinh lý; màu trắng; naloxone, màu đen; Missed, màu xám), sử dụng các bản vẽ mẫu từ Bản đồ não Swanson ( Swanson, 2004 ). Ống thông được đặt ở cả hai bên, nhưng vị trí tiêm được biểu diễn một bên để dễ trình bày. fr, Bó sợi phản xạ; ML, Bó sợi giữa; SN, chất đen.

Điều trị naxolone Intra-VTA đã ngăn chặn việc duy trì hành vi tình dục thuận lợi được quan sát thấy ở nam giới có kinh nghiệm tình dục, tương tự như tác dụng của naloxone toàn thân. Cụ thể, vào ngày thử nghiệm cuối cùng, nam giới được điều trị bằng naloxone có thời gian trễ dài hơn để gắn kết (Sung. 6A; p = 0.011), giới thiệu (Sung. 6B; p = 0.010) và xuất tinh (Sung. 6C; p = 0.015) so với phiên giao phối thứ năm của chúng và so với con đực được xử lý bằng nước muối vào ngày thử nghiệm cuối cùng (Sung. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Ngược lại, động vật được xử lý bằng nước muối không khác nhau về độ trễ để gắn kết và xâm nhập giữa ngày thử nghiệm cuối cùng và ngày 5 của giao phối. Những ảnh hưởng này cụ thể đối với việc cung cấp naloxone cho VTA, vì nam giới có các trang web đóng hộp gần đó nhưng không nhắm mục tiêu VTA (Sung. 6D; n = 3) hiển thị tạo thuận lợi lâu dài cho hành vi tình dục tương tự như các biện pháp kiểm soát mặn (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 và khác biệt đáng kể so với động vật naloxone nội VTA vào ngày thử nghiệm giao phối cuối cùng (ML, IL: p = 0.029; EL: p =

Hành động EOP là cần thiết để kích hoạt dây thần kinh có điều kiện do cue liên quan đến tình dục

Dựa trên những phát hiện cho đến nay, chúng tôi đã đưa ra giả thuyết rằng kích hoạt EOP trong VTA trong quá trình giao phối và giảm kích thước soma VTA dopamine sau đó là rất quan trọng để quy kết sự khuyến khích đối với các kích thích liên quan đến phần thưởng và do đó, duy trì việc tạo điều kiện cho hành vi tình dục. Để kiểm tra giả thuyết này, người ta đã kiểm tra tác động của việc ngăn chặn các thụ thể opioid trong quá trình giao phối đối với hoạt động thần kinh do tiếp xúc với các tín hiệu theo ngữ cảnh có điều kiện dự đoán về phần thưởng tình dục (tín hiệu theo ngữ cảnh liên quan đến tình dục). Động vật ngây thơ tình dục cũng được tiếp xúc với tín hiệu môi trường, nhưng chúng không liên quan đến kinh nghiệm giao phối trước đó, do đó là tín hiệu trung tính. Cuối cùng, mức pERK cơ bản đã được xác định trong các nhóm kiểm soát tình dục và ngây thơ tình dục vẫn ở trong chuồng tại nhà và không tiếp xúc với bất kỳ tín hiệu nào (-Không Cue). Xác nhận và mở rộng những phát hiện trước đó (Balfour và cộng sự, 2004), tiếp xúc với các tín hiệu theo ngữ cảnh liên quan đến phần thưởng giới tính trước đó đã làm tăng đáng kể biểu hiện PERK ở nam giới có kinh nghiệm tình dục trong NAc (Sung. 7) và mPFC (Sung. 8AC), nhưng không gây ra kích hoạt tế bào thần kinh trong BLA (Sung. 8D) hoặc CPu (dữ liệu không được hiển thị). Có những ảnh hưởng chính của việc tiếp xúc với cue trong lõi NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) và PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) và điều trị naloxone trong lõi NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) và PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Có sự tương tác đáng kể trong lõi NAc (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) và IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Đầu tiên, phơi nhiễm Cue liên quan đến giao phối làm tăng đáng kể pERK ở động vật có kinh nghiệm tình dục được xử lý bằng nước muối (Exp Sal ​​+ Cue) so với các đối chứng không tiếp xúc với bất kỳ tín hiệu nào và được lấy từ lồng nhà (Exp Sal-No Cue) trong lõi NAc (Sung. 7A; p <0.001) và tiểu vùng mPFC ACA (Sung. 8A; p = 0.001), PL (Sung. 8B; p = 0.003) và IL (Sung. 8C; p = 0.029). Ngược lại, ở những động vật ngây thơ được điều trị bằng nước muối, tiếp xúc với các tín hiệu theo ngữ cảnh, không liên quan đến phần thưởng tình dục, đã không tạo ra PERK ở bất kỳ vùng não nào (Naive Sal + Cue so với Sal-No Cue ngây thơ; Quả sung. XUẤT KHẨU, 8), chứng minh rằng việc gây ra PERK là đặc trưng cho việc tiếp xúc với các tín hiệu liên quan đến trải nghiệm tình dục. Hơn nữa, trải nghiệm tình dục một mình không làm thay đổi biểu hiện PERK cơ bản ở bất kỳ vùng não nào, vì không có sự khác biệt giữa các nhóm được lấy từ lồng tại nhà, cho dù là ngây thơ hoặc kinh nghiệm tình dục, và được điều trị bằng nước muối hoặc naloxone.

Hình 7. 

Tác động opioid nội sinh là cần thiết cho sự kích hoạt thần kinh ở NAc do các tín hiệu có điều kiện liên quan đến giới tính gây ra. Số lượng tế bào pERK-IR trên mm² trong nhân accumbens lõi ( A ) và vỏ ( B ) ở động vật chưa từng giao phối (màu trắng) và đã từng giao phối (Exp; màu đen) được tiền xử lý bằng NLX toàn thân hoặc dung dịch muối sinh lý (Sal) trong các phiên giao phối (con đực Exp) hoặc các phiên xử lý (con đực Naive). Các nhóm được tiếp xúc với các tín hiệu ngữ cảnh (Cue), là các tín hiệu liên quan đến giao phối ở con đực Exp và tín hiệu trung tính ở động vật Naive, hoặc được lấy từ lồng nuôi (No Cue; được biểu thị bằng việc thiếu nhãn Cue). Dữ liệu được trình bày dưới dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn; * cho biết sự khác biệt đáng kể so với nhóm đối chứng không tiếp xúc với tín hiệu được tiền xử lý bằng dung dịch muối sinh lý (Naive Sal-No Cue và Exp Sal-No Cue); # cho biết sự khác biệt đáng kể so với nhóm Exp tiếp xúc với tín hiệu được xử lý bằng Sal (Exp Sal+Cue). Hình ảnh đại diện của tế bào pERK-IR trên mỗi mm² trong nhân NAc của những con đực đã có kinh nghiệm giao phối với Sal ( C , D ) hoặc NLX ( E , F ) được chụp từ lồng nuôi (Không có tín hiệu, C, E) hoặc tiếp xúc với các tín hiệu ngữ cảnh liên quan đến giao phối (Có tín hiệu; D , F ). N = 4 cho mỗi nhóm ngoại trừ nhóm Naive NLX (Không có tín hiệu), n = 3. ac, Mép trước. Thanh tỷ lệ, 100 μm.

Hình 8. 

Ảnh hưởng của naloxone đến sự biểu hiện pERK do tín hiệu giao phối gây ra ở các vùng đích VTA khác. Số lượng tế bào pERK-IR trên mm² ở động vật chưa từng giao phối (màu trắng) và đã từng giao phối (Thí nghiệm; màu đen) được điều trị trước bằng NLX toàn thân hoặc dung dịch muối sinh lý (Sal) trong các phiên giao phối và được tiếp xúc với các tín hiệu ngữ cảnh (Cue) hoặc lồng nuôi (không có tín hiệu) trong ACA ( A ), PL ( B ), IL ( C ) và BLA ( D ). Dữ liệu được biểu thị là giá trị trung bình ± SEM; * cho biết sự khác biệt đáng kể so với nhóm đối chứng được điều trị trước bằng dung dịch muối sinh lý và không tiếp xúc với tín hiệu (Naive Sal-No Cue và Exp Sal-No Cue); # cho biết sự khác biệt đáng kể so với nhóm đối chứng chưa từng giao phối được điều trị bằng Sal và tiếp xúc với tín hiệu (Naive Sal+Cue).

Để củng cố giả thuyết của chúng tôi, việc điều trị bằng naloxone trong quá trình giao phối đã làm giảm đáng kể sự cảm ứng pERK bởi các tín hiệu có điều kiện liên quan đến tình dục. Biểu hiện pERK ở những con đực đã trải qua hoạt động tình dục và được điều trị bằng naloxone (Exp NLX+Cue) không khác biệt so với biểu hiện pERK cơ bản ở bất kỳ nhóm đối chứng nào chưa từng hoặc đã trải qua hoạt động tình dục được lấy từ lồng nuôi (Naive Sal-No Cue hoặc Naive NLX-No Cue). Hơn nữa, biểu hiện pERK ở những con đực đã trải qua hoạt động tình dục và được điều trị bằng naloxone (Exp NLX+Cue) thấp hơn đáng kể so với những con vật đã trải qua hoạt động tình dục và được điều trị bằng nước muối sinh lý (Exp Sal+Cue) ở vùng lõi NAc ( Hình 7 A ; p = 0.002) và các vùng phụ mPFC ( Hình 8 A , ACA: p < 0.001; B , PL: p = 0.002; C , IL: p = 0.015).

Trong vỏ NAc, phân tích ANOVA hai chiều không cho thấy tác động có ý nghĩa thống kê của các yếu tố tiếp xúc với tín hiệu và điều trị bằng naloxone. Tuy nhiên, so sánh từng cặp cho thấy việc tiếp xúc với tín hiệu đã gây ra pERK ở nhóm có kinh nghiệm tình dục được điều trị bằng dung dịch muối (Exp SAL+Cue) so với nhóm đối chứng chưa từng tiếp xúc với tín hiệu (Saline naive) ( Hình 7 B ; Naive SAL-No Cue: p = 0.0163).

Thảo luận

Nghiên cứu hiện tại chứng minh rằng tác động của EOP lên vùng VTA trong quá trình hành vi tình dục, một hành vi được khen thưởng tự nhiên, đã gây ra sự giảm mạnh nhưng tạm thời về kích thước thân tế bào dopamine ở vùng VTA. Sự giảm kích thước thân tế bào này không được quan sát thấy ở các tế bào thần kinh không phải dopamine ở vùng VTA, cũng như ở các tế bào thần kinh dopamine ở vùng chất đen gần đó, cho thấy sự thay đổi này chỉ đặc hiệu với các tế bào dopamine ở vùng VTA. Tính dẻo dai của dopamine ở vùng VTA này dường như tương tự như tính dẻo dai do tiếp xúc mãn tính với thuốc phiện gây ra ( Sklair-Tavron et al., 1996 ; Russo et al., 2007 ; Mazei-Robison et al., 2011 ) và gây ra sự dung nạp tương tự đối với phần thưởng thuốc phiện ngoại sinh (morphin). Chúng tôi đã chứng minh rằng tính dẻo dai của dopamine ở vùng VTA rất quan trọng đối với sự củng cố lâu dài (duy trì) nhưng không phải ngắn hạn (phát triển) của hành vi tình dục và hoạt động thần kinh do tín hiệu liên quan đến phần thưởng (pERK) gây ra ở các vùng đích của VTA: NAc và mPFC. Những phát hiện này cho thấy vai trò của tính dẻo dai của dopamine ở vùng VTA trong việc thể hiện lâu dài tính nổi bật của động lực từ các tín hiệu dự báo phần thưởng tự nhiên hoặc trí nhớ về phần thưởng.

Nó đã được ghi nhận rõ ràng rằng kinh nghiệm tình dục dẫn đến việc tạo điều kiện cho hành vi tình dục tiếp theo, bao gồm khởi phát nhanh hơn để bắt đầu giao phối và tăng hiệu suất (Balfour và cộng sự, 2004; Bình và cộng sự, 2010a,b, 2012). Sự thuận lợi hoặc củng cố hành vi tình dục này được duy trì ít nhất là 28 d sau khi giao phối (Bình và cộng sự, 2012). Ngoài ra, người ta đã chứng minh rằng hành vi tình dục và tín hiệu có điều kiện dự đoán về phần thưởng tình dục gây ra sự nội tâm hóa MOR trong VTA và gây ra kích hoạt tế bào thần kinh trên toàn hệ thống mesolimbic, bao gồm cả VTA (dopamine và nondopamine neuron), NAc, PFC và BLA (Balfour và cộng sự, 2004, 2006). Các tế bào thần kinh dopamine VTA được thiết lập tốt đóng một vai trò quan trọng trong việc học hỏi và quy kết sự khuyến khích của sự kích thích liên quan đến phần thưởng (Berridge và Robinson, 1998; Berridge và cộng sự, 2009; Flagel và cộng sự, 2011) và rất quan trọng cho dự đoán phần thưởng (Schultz, 2010). Những phát hiện hiện tại mở rộng kiến ​​thức hiện tại của chúng tôi bằng cách chứng minh rằng tính dẻo dai của VTA gây ra rất quan trọng đối với các chức năng này và phụ thuộc vào kích hoạt MOR bởi EOP trong VTA. Hiện tại vẫn chưa biết EOP nào là phối tử MOR hoạt động trong VTA trong hành vi tình dục của nam giới. Mặc dù cả endorphin và enkephalin đều có liên quan đến động lực thúc đẩy tăng cường thực phẩm (Hayward và cộng sự, 2002), điều này vẫn được thiết lập cho hành vi tình dục nam. Trước đây chúng tôi đã chỉ ra rằng các tế bào thần kinh-endorphin không được kích hoạt trong quá trình giao phối, cũng không có sự gia tăng trong POMC mRNA; do đó, cho thấy rằng β endorphin có thể không phải là EOP quan trọng hoạt động trong VTA trong quá trình giao phối (Davis và cộng sự, 2007). Độ dẻo dopamine VTA này rất cần thiết cho hoạt động thần kinh trong mPFC, NAc và VTA sau khi tiếp xúc với các tín hiệu môi trường dự đoán tình dục. Hơn nữa, độ dẻo dopamine của VTA rất quan trọng đối với biểu hiện dài hạn của việc bắt đầu tăng và thực hiện hành vi tình dục. MặtMehrara và Baum, 1990). Thay vào đó, dữ liệu cho thấy rằng chất dẻo thần kinh dopamine VTA làm trung gian lâu dài hơn (7 d sau trải nghiệm tình dục cuối cùng; Bình và cộng sự, 2012) biểu hiện của khao khát về phần thưởng tình dục và phản ứng có động lực cao đối với tín hiệu giao phối (Miller và Baum, 1987; Berridge và Robinson, 1998).

Các động vật có kinh nghiệm tình dục thể hiện khả năng chịu đựng chéo với phần thưởng morphin, tương tự như tác động của bánh xe chạy ở chuột, một hành vi bổ ích tự nhiên khác, một hiệu ứng bị chặn bằng điều trị naloxone (Lett và cộng sự, 2001, 2002) và được xác định là phụ thuộc vào độ dẻo của tế bào dopamine VTA (những phát hiện hiện tại). Tương tự như phần thưởng tự nhiên, việc tiếp xúc nhiều lần với morphin hoặc heroin của opiates dẫn đến giảm kích thước soma VTA dopamine thoáng qua (Sklair-Tavron và cộng sự, 1996; Spiga và cộng sự, 2003; Russo và cộng sự, 2007; Mazei-Robison và cộng sự, 2011). Hơn nữa, phơi nhiễm thuốc phiện với thời gian rút ngắn gây ra sự dung nạp phần thưởng, do liên quan đến liều thuốc cao hơn được yêu cầu để hình thành các hiệp hội khen thưởng (Shippenberg và cộng sự, 1987; Russo và cộng sự, 2007) và khiến động vật tự quản lý leo thang lượng thuốc (Ahmed và cộng sự, 2000; Walker và cộng sự, 2003). Do đó, EOP và thuốc phiện tác động lên các chất nền thần kinh thông thường để tạo ra sự dung nạp trong quá trình rút tiền sớm, điều này có thể phản ánh cơ chế cân bằng nội môi bù để chống lại sự kích thích khi tiếp xúc nhiều lần (Koob và Le Moal, 2005). Ngược lại, trong thời gian cai nghiện thuốc phiện dài hạn, sự dung nạp được đảo ngược thành độ nhạy cảm với các đặc tính bổ ích của thuốc (Harris và Aston-Jones, 2003; Aston-Jones và Harris, 2004; Harris và Gewirtz, 2004). Thật thú vị, trải nghiệm tình dục theo sau thời kỳ kiêng quan hệ tình dục của 7 Thẻ 28 d đã được tìm thấy gây ra sự nhạy cảm chéo đối với phần thưởng kích thích tâm thần (Bình và cộng sự, 2010a), phụ thuộc vào biểu hiện deltaFosB giao phối và kích hoạt thụ thể dopamine thụ thể 1 trong NAc (Bình và cộng sự, 2013). Do đó, kinh nghiệm khen thưởng tình dục gây ra sự dung nạp phần thưởng thuốc phiện đồng thời và sự nhạy cảm với phần thưởng về mặt tâm lý, mặc dù thời gian kiêng quan hệ tình dục lâu hơn đối với sự dung nạp phần thưởng morphin vẫn còn phải được kiểm tra. Chúng tôi cho rằng những tác động ngược lại đối với phần thưởng thuốc có thể được điều hòa bởi các dạng dẻo thần kinh khác nhau trong các khu vực khác nhau của hệ thống mesolimbic: hành động VTA EOP và độ dẻo dopamine làm trung gian cho khả năng chống chịu thuốc phiện (nghiên cứu hiện tại), trong khi biểu hiện NAF deltaFosB kiểm soát sự nhạy cảm (Bình và cộng sự, 2013). Cả hai sự kiện này có thể góp phần vào sự leo thang của ma túy (Ahmed và Koob, 1998, 1999; Ahmed và cộng sự, 2000, 2002, 2003; Walker và cộng sự, 2003).

Các cơ chế phân tử mà EOP ảnh hưởng đến các tế bào thần kinh dopamine VTA trong hành vi khen thưởng tự nhiên vẫn chưa được biết rõ. Con đường IRS2-Akt-mTORC2 là chất trung gian chính gây giảm kích thước thân tế bào ở VTA do sử dụng morphine lặp đi lặp lại ( Jaworski et al., 2005 ; Russo et al., 2007 ; Mazei-Robison et al., 2011 ). Những thay đổi về kích thước tế bào thần kinh dopamine ở VTA do sử dụng morphine lặp đi lặp lại có thể được ngăn ngừa bằng cách truyền BDNF (yếu tố dinh dưỡng thần kinh có nguồn gốc từ não) vào trong VTA ( Sklair-Tavron và Nestler, 1995 ). BDNF kích hoạt con đường này thông qua tín hiệu TrkB ( Russo et al., 2007 ), một kinase thụ thể có ái lực cao với BDNF và là một phần của con đường IRS2-Akt ( Seroogy và Gall, 1993 ; Numan và Seroogy, 1999 ), và được biểu hiện trên các tế bào thần kinh dopamine và GABA trong VTA. Việc điều chỉnh giảm các thành phần khác nhau của con đường IRS2-Akt bằng công nghệ chuyển gen vector virus bắt chước tác động của việc tiếp xúc mãn tính với thuốc phiện. Hơn nữa, tác động của việc tiếp xúc với thuốc phiện có thể được khắc phục bằng cách khôi phục con đường tín hiệu này ( Russo et al., 2007 ) và sự biểu hiện quá mức của một thành phần của mTORC2 ngăn ngừa sự giảm dopamine soma VTA do morphine gây ra ( Mazei-Robison et al., 2011 ). Do đó, các nghiên cứu trước đây điều tra tác động của thuốc phiện mãn tính lên kích thước thể soma dopamine VTA cho thấy rằng sự điều hòa giảm của con đường IRS2-Akt-mTOR do morphine gây ra là đủ và cần thiết cho hiệu ứng này ( Mazei-Robison và Nestler, 2012 ). Vì vậy, có thể suy đoán rằng tác động của trải nghiệm tình dục lên tính dẻo dai thần kinh dopamine VTA cũng được trung gian bởi BDNF và con đường IRS2-Akt-mTORC2.

Kết luận, nghiên cứu hiện tại đã chứng minh rằng sự dẻo dai của VTA là do kinh nghiệm với hành vi khen thưởng tự nhiên, đặc biệt là hành vi tình dục nam lặp đi lặp lại. Cụ thể, EOP hành động trong VTA để giảm kích thước soma dopamine, được giả thuyết là có liên quan đến tăng hưng phấn thần kinh và sản lượng dopamine ít hơn dẫn đến hệ thống hypodopaminergic và thay đổi hoạt động của hệ thống mesolimbic để đáp ứng với tín hiệu tình dục. Hơn nữa, tính dẻo dai của VTA rất quan trọng đối với động lực khuyến khích và trí nhớ khen thưởng, nhưng không phải là tác động khoái lạc của hành vi tình dục. Cuối cùng, sự dẻo dai của VTA gây ra bởi hành vi khen thưởng tự nhiên sau một thời gian ngắn cai nghiện ảnh hưởng đến phần thưởng thuốc phiện và do đó có thể ảnh hưởng đến sự tổn thương đối với sự phát triển của nghiện ma túy.

Chú thích

  • Nhận được tháng 1 12, 2014.
  • Sửa đổi nhận được tháng 17, 2014.
  • Chấp nhận tháng 5 20, 2014.

  • Nghiên cứu này được hỗ trợ bởi các khoản tài trợ của Viện nghiên cứu sức khỏe Canada cho LMC và Hội đồng nghiên cứu khoa học tự nhiên và kỹ thuật cho KKP

  • Các tác giả tuyên bố không có lợi ích tài chính cạnh tranh.

  • Các thư tương ứng nên được gửi tới Tiến sĩ Lique M. Coolen, Trung tâm Y tế Đại học Mississippi, Khoa Sinh lý học và Sinh lý học, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [email được bảo vệ]

dự án

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Hành vi tình dục của chuột đực. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Chuyển từ lượng thuốc vừa phải sang quá mức: thay đổi điểm đặt hedonic. Khoa học 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Sự gia tăng lâu dài ở điểm đặt cho việc tự quản cocaine sau khi leo thang ở chuột. Psychopharmacology 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Sự gia tăng dai dẳng trong động lực dùng heroin ở chuột có tiền sử leo thang ma túy. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Bằng chứng thần kinh học về phân bổ khoái lạc liên quan đến việc sử dụng cocaine leo thang. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lâm D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Nâng cao khả năng tự quản của cocaine không phụ thuộc vào mức độ thay đổi của nhân do cocaine làm tăng nồng độ dopamine. J Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Chất nền cho việc tìm kiếm thuốc tăng lên trong quá trình rút tiền kéo dài. Khoa học thần kinh 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Làm mát LM

    (2004) Hành vi tình dục và tín hiệu môi trường liên quan đến tình dục kích hoạt hệ thống mesolimbic ở chuột đực. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Nâu JL,
    3. Yu L,
    4. Làm mát LM

    (2006) Đóng góp tiềm năng của các chất thải từ vỏ não trước trán trung gian đến kích hoạt thần kinh sau hành vi tình dục ở chuột đực. Khoa học thần kinh 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Hướng dẫn X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Protein thần kinh và hệ thống dopamine mesolimbic: quy định phổ biến bởi morphin mãn tính và cocaine mãn tính ở vùng não bụng của chuột. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Vai trò của dopamine trong phần thưởng: tác động khoái lạc, học tập thưởng hay khuyến khích sự mặn mà là gì? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Phân tích các thành phần của phần thưởng: Đây là người thích, Người muốn, và học hỏi. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. W T T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Vàng M

    (2012) Giới tính, ma túy và rock 'n' roll: đưa ra giả thuyết kích hoạt mesolimbic phổ biến như là một chức năng của đa hình gen. Thuốc thần kinh J 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu nông
    2. Zuo YF,
    3. Mạnh L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Kích thích điện ngoại biên đã đảo ngược việc giảm kích thước tế bào và tăng mức BDNF ở vùng não bụng ở chuột được điều trị morphin mãn tính. Brain Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Nâu JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Làm mát LM

    (2007) Kích hoạt các tế bào thần kinh POMC trong quá trình kích thích chung nhưng không có hành vi tình dục ở chuột đực. Hành vi thần kinh 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Tòa án A,
    3. Phillips AG

    (1997) Những thay đổi năng động trong nhân accumbens dopamine efflux trong hiệu ứng Coolidge ở chuột đực. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn tôi,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Vai trò chọn lọc của dopamine trong việc học tập thưởng thưởng kích thích. Thiên nhiên 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Bình đựng KK,
    3. Balfour ME,
    4. Làm mát LM

    (2010a) Niềm vui pha trộn: xem xét tác động của thuốc đối với hành vi tình dục ở người và mô hình động vật. Hành vi horm 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. RA khôn ngoan,
    4. Lehman MN,
    5. Làm mát LM

    (2010b) Methamphetamine tác động lên các quần thể tế bào thần kinh điều chỉnh hành vi tình dục ở chuột đực. Khoa học thần kinh 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Giật mình khi rút khỏi morphin cấp tính: một mô hình cai nghiện thuốc phiện và lo lắng. Psychopharmacology 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Thay đổi động lực và học tập sau khi rút thuốc phiện: bằng chứng cho việc điều chỉnh phần thưởng kéo dài. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. MJ thấp

    (2002) Thiếu hụt phần thưởng có chọn lọc ở những con chuột thiếu beta-endorphin và enkephalin. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Nghiện tự nhiên: mô hình hành vi và mạch dựa trên nghiện đường ở chuột. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Thánh ca SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Cơ chế gây nghiện thần kinh: vai trò của học tập và trí nhớ liên quan đến phần thưởng. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. RR RR,
    3. McBride WJ

    (1997) Ức chế thụ thể GABA (A) ở vùng phía trước của não thất làm tăng nồng độ dopamine ngoại bào trong nhân tế bào của chuột. J Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Kiểm soát sự hình thành đuôi gai bằng mục tiêu phosphoinositide-3′-kinase-Akt-động vật có vú của con đường rapamycin. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW,
    2. Bắc RA

    (1992) Opioids kích thích các tế bào thần kinh dopamine bằng cách siêu phân cực của các inteuron cục bộ. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Điều chỉnh giải phóng dopamine somatodendritic ở vùng não thất bằng opioids và GABA: một nghiên cứu về vi phân in vivo. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Lê Mo M

    (2005) Độ dẻo của tuần hoàn thần kinh và mặt tối của người nghiện ma túy. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Một phương tiện gắn cải tiến cho kính hiển vi miễn dịch huỳnh quang. Am J Clinic Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Cho phép BT,
    2. Cấp VL,
    3. Koh MT

    (2001) Naloxone làm giảm sự ưa thích nơi điều hòa gây ra bởi bánh xe chạy trên chuột. Hành vi vật lý 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Cho phép BT,
    2. Cấp VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Kinh nghiệm trước khi chạy bánh xe tạo ra khả năng chịu đựng chéo đối với hiệu quả bổ ích của morphin. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT,
    2. Đức DC

    (1984) Bằng chứng điện sinh lý để kích thích các tế bào thần kinh dopamine ở vùng bụng của chuột bằng morphin. Khoa học thần kinh 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Cướp bóc AJ,
    6. Vinish M,
    7. KRG
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Không có RL,
    15. PF tệ nhất,
    16. Snyder SH,
    17. Nhanh lên
    18. Cổ vũ JF,
    19. Hán MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (Piano Thần kinh tế bào 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Độ dẻo của phân tử và tế bào do thuốc phiện của vùng não thất và các tế bào thần kinh catecholamine locus coeruleus. Mùa xuân lạnh Harb phối cảnh Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara Bj,
    2. Baum MJ

    (1990) Naloxone phá vỡ biểu hiện nhưng không thu được bởi chuột đực của phản ứng ưu tiên địa điểm có điều kiện cho một con cái động dục. Psychopharmacology 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Kinh nghiệm tình dục ở động vật gặm nhấm nữ: cơ chế tế bào và hậu quả chức năng. Brain Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloxone ức chế sự ưu tiên giao phối và nơi điều hòa cho một con cái động dục ở chuột đực ngay sau khi thiến. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. JB JB,
    2. Stewart J

    (1990) Tạo thuận lợi cho các hành vi tình dục ở chuột đực liên quan đến việc tiêm thuốc phiện trong VTA của thuốc phiện. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) Độ đặc hiệu tín hiệu MAPK: đúng nơi, đúng thời điểm. Xu hướng sinh hóa 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Cơ chế phiên mã của nghiện ma túy. Tâm lý lâm sàng Neophosacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Bộ não chuột ở tọa độ lập thể (Học thuật, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Bình đựng KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Làm mát LM

    (2010a) Neuroplasticity trong hệ thống mesolimbic gây ra bởi phần thưởng tự nhiên và kiêng thưởng sau đó. Tâm thần sinh học 67: 872-879.

  • ↵
    1. Bình đựng KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Làm mát LM

    (2010b) DeltaFosB trong accumbens hạt nhân là rất quan trọng để tăng cường hiệu quả của phần thưởng tình dục. Gen hành vi não 9: 831-840.

  • ↵
    1. Bình đựng KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Vương X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Làm mát LM

    (2012) Trải nghiệm phần thưởng tự nhiên làm thay đổi sự phân phối và chức năng của thụ thể AMPA và NMDA trong các hạt nhân. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. Bình đựng KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Làm mát LM

    (2013) Phần thưởng tự nhiên và thuốc hoạt động trên các cơ chế dẻo thần kinh phổ biến với DeltaFosB như một trung gian hòa giải chính. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. PP Roux,
    2. Blenis J

    (2004) kinase protein hoạt hóa ERK và p38 MAPK: một họ protein kinase với chức năng sinh học đa dạng. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Cho thuê W
    6. Kumar A,
    7. Win Winley CA,
    8. NE cho thuê
    9. Wiley MD,
    10. Tự DW,
    11. Russell DS,
    12. Không có RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) Con đường IRS2-Akt trong các tế bào thần kinh dopamine midbrain điều chỉnh các phản ứng hành vi và tế bào đối với thuốc phiện. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Nhiều chức năng của tế bào thần kinh dopamine. Đại diện sinh học F1000 2: 2.

  • ↵
    1. KB Seroogy,
    2. Gall CM

    (1993) Biểu hiện của các tế bào thần kinh bởi các tế bào thần kinh dopaminergic midbrain. Neurol Exp 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Ba A

    (1987) Tính chất động lực của opioid: bằng chứng cho thấy sự kích hoạt các thụ thể delta làm trung gian cho các quá trình củng cố. Brain Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Tác dụng đối nghịch của morphin và các tế bào thần kinh, NT-3, NT-4 và BDNF, trên các tế bào thần kinh coeruleus trong ống nghiệm. Brain Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Ngõ SB,
    4. Harris CTNH,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) morphin mãn tính gây ra những thay đổi có thể nhìn thấy trong hình thái của các tế bào thần kinh dopamine mesolimbic. Proc Natl Acad Sci Hoa Kỳ 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Bác sĩ đa khoa
    3. MC Puddu,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Bất thường do rút morphin trong VTA: kính hiển vi quét laser đồng tiêu. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Bản đồ não: cấu trúc của não chuột (Học thuật, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Trương Q,
    4. Bình đựng KK,
    5. Làm mát LM

    (2009) Phần thưởng tình dục ở chuột đực: ảnh hưởng của trải nghiệm tình dục đến sở thích ở nơi có điều kiện liên quan đến xuất tinh và xâm nhập. Hành vi horm 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Đo lường phần thưởng với mô hình ưu tiên địa điểm có điều kiện (CPP): cập nhật của thập kỷ trước. Nghiện Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Động lực tình dục: sự tham gia của opioid nội sinh ở vùng não thất. Brain Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Điều chỉnh hành vi tình dục nam tính: có sự tham gia của opioids não và dopamine. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Phơi nhiễm opioid mãn tính tạo ra sự tự quản heroin ở chuột. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. KA trẻ,
    2. Yêu tinh KL,
    3. Lưu Y,
    4. Vương Z

    (2011) Sinh học thần kinh của liên kết cặp: hiểu biết sâu sắc về một loài gặm nhấm xã hội đơn thuần. Mặt trận Neuroendocrinol 32: 53-69.

    •