Dopaminový receptor D1 moduluje hippokampální reprezentaci plasticity na prostorovou novost (2008)

Zvířata.

V tomto experimentu s neuronálním záznamem bylo použito 10 samců myší WT (26 – 33 g) a 7 samců D1R-KO myší (24 – 29 g). Myši byly rozmnožovány ve společné laboratoři (Národní ústav pro základní biologii, Národní ústavy přírodních věd).

Generování D1R-KO myší.

Myší dopamin D₁ Receptorový gen byl izolován z 129 / Sv myší genomické DNA knihovny (Stratagene) hybridizací s produktem 884 bp PCR, jehož páry primerů jsou 5'-TCC AAG GTG ACC AAC TTC TTT GT-3 'a 5'-CTA TAG CAT CCT AAG AGG GT CGA-3 ′. Zaměřovací vektor byl konstruován tak, aby odstranil celou kódující sekvenci s použitím následujících fragmentů DNA: gen 1.2 kb MC1 promotor-difterický toxin-A fragment (DT-A) pro negativní selekci, 2.8 kb BglI-dubenII fragment obsahující upstream oblast myšího genu D1R, promotor PGK 2.3 kb -Escherichia coli gen xanthin-guaninové fosforibosyltransferázy (gpt), gen 1.1 kb MC1 promotor-neomycin (neo), 6.5 kb dubenII-BamHI fragment obsahující netranslatovanou oblast 3´ a sousední oblast a plasmid pBluescript (Obr. 1A). Kultivované buňky ES E14TG2a IV (2.5 × 10⁷ buňky) byly transfekovány 50 μg linearizovaného zaměřovacího vektoru elektroporací 500 μF kapacitancí, 270 V / 1.8 mm (ECM600, BTX Electro Cell Manipulator), následovanou selekcí s ošetřením G418 (250 μg / ml) po transfekci. Celkově byly odebrány kolonie 120 rezistentní na léčivo a genomická DNA byla podrobena analýze Southern blot pro potvrzení homologní rekombinace. Myši D1R-KO byly vytvořeny za použití homologních rekombinantních buněk ES, jak bylo popsáno výše (Yamaguchi a kol., 1996; Koera a kol., 1997). Myši D1R-KO byly zpětně kříženy na kmen C57BL / 6J (B6 / J) pro generace 10 a udržovány v genetickém pozadí B6 / J. Ocasní DNA potomstva byla analyzována pomocí PCR za použití čtyř primerů: (primer a) D1TET-1, 5 'CAG AAG ACA GGT GGA AAG CA 3', (primer b) mD1Rexon2.seq, 5 'TCC GTA GTA GTA GTA GTA GTA GATA 3 ′, (primer c) neo10, 5 ′ ATC AGA GCA GCC GAT TGT CTG TTG 3 ′ a (primer d) D1R3′60R, 5 ′ GTT GGA GAA GTT CTG TAA CTG TCC 3´. Podmínky PCR byly následující: denaturace při 94 ° C po dobu 4 min, následované 30 cykly 1 min při 94 ° C, 1 min při 60 ° C, 1 min při 72 ° C, konečné prodloužení při 72 ° C pro 5 min, a skladování při 4 ° C. Alely divokého typu a mutantní alely odpovídaly produktům PCR 234 a 460 bp (Obr. 1B). Všechny experimenty byly provedeny v souladu s pokyny University of Toyama a Národního ústavu pro základní biologii.

 

Zobrazit větší verzi: 

• Na této stránce
• V novém okně
• Stáhnout jako prezentaci aplikace PowerPoint

Obrázek 1. 

Generování myší D1R-KO a exprese proteinu D1R v mozcích myší WT a D1R-KO. ASchematické znázornění WT alely, cílícího vektoru a mutantní alely myšího genu D1R. Kódující a nepřekládané oblasti jsou zobrazeny jako uzavřené a otevřené rámečky. Primery pro genotypizaci PCR (primery a, b, c a d) jsou znázorněny jako malé šipky označené a, b, c a d. A BamHI stránka je v případě potřeby označena závorkami. Podjednotka difterického toxinu A (DT-A), E. coli xanthin-guanin-fosforibosyltransferáza (gpt) a neomycin rezistentní (neo) geny jsou zobrazeny jako otevřené rámečky. B, PCR genotypizace myší divokého typu (D1R + / +), heterozygotních (D1R +/−) a homozygotních (D1R - / -). Produkty PCR z alely WT a mutantu (KO) jsou 234 bp, respektive 460 bp. CWestern blot s použitím protilátky specifické pro D1R odhalil, že protein D1R zcela chyběl u myší D1R - / -.

Western blot analýza.

Mozek byl homogenizován v pufru obsahujícím 100 mm Tris-HCI, pH 6.7, 1% SDS, 143 mm 2-merkaptoethanol a 1% inhibitor inhibitoru proteázy pro savčí buňky (Nacalai Tesque). Celkové lyzáty (každý 200 μg proteinu) byly podrobeny elektroforéze na 10% SDS-polyakrylamidovém gelu a přeneseny na Immobilon-P membránu (Millipore). Membrána byla blokována v PBS obsahujícím 10% odstředěné mléko (BD Biosciences) při pokojové teplotě po dobu 30 min a následně inkubována s krysí monoklonální protilátkou proti D1R (Sigma, 1: 1000 ředění), následovaná inkubací s křenovou peroxidázou konjugovanou kozou protilátkou proti krysí IgG (ředění Sigma, 1: 1000) nebo králičími protilátkami proti aktinu (ředění Sigma, 1: 1000), následovaná inkubace s kozou protilátkou konjugovanou s křenovou peroxidázou proti králičím IgG (ředění Sigma, 1: 1000). Imunoreaktivní proteinové pásy byly detekovány podle protokolu detekční soupravy ECL (GE Healthcare).

Implantace elektrody.

Myši byly chovány jednotlivě světelným cyklem 12 h (světla byla rozsvícena v 8: 00 AM) a měly podle libosti přístup k potravě a vodě. Myši byly podány alespoň 1 týden po příjezdu, aby se aklimatizovaly do laboratorního prostředí před experimentálními postupy. V den chirurgického zákroku byly myši anestetizovány (pentobarbitál, 40 mg / kg, ip) a implantovány bilaterálně monopolárními stimulačními elektrodami (průměr 100 μm, nerezová ocel) pro intrakraniální samostimulaci ve svazku předního mozku na úrovni zadní strany hypothalamická oblast (Franklin a Paxinos, 1997) (přední, −2.3 mm; střední, ± 0.70 – 0.75 mm; a dorzoventrální, −5.3 – 5.4 mm). Pohyblivá záznamová sestava sestávající z tetrod 2 zkrouceného 17 μm nichrom drátu (California Fine Wire Company) nebo svazek vodičů 8 byl implantován do hřbetní části hipokampální oblasti CA1 (Franklin a Paxinos, 1997) (1.8 mm za bregmou, 1.8 mm za bregmou a 1.4 mm pod povrchem lebky) během stejné operace. Klenotnický šroub připevněný k lebce sloužil jako zemní elektroda u všech myší. Mikropohon byl připevněn k lebce pomocí klenotnických šroubů a zubního cementu. Špičky elektrod byly před operací pozlaceny, aby se snížila impedance na 100–300 kΩ při 1 kHz.

Experimentální aparát a trénink prostorových úloh.

Zařízení pro výcvik prostorových úkolů bylo kruhové otevřené pole (průměr 80 cm, vysoká výška 25 cm); to bylo zvýšené 80 cm nad podlahou na vozíku s kolečky, které umožňovaly rotaci a pohybování otevřeného pole ručně (Obr. 2A). Otevřené pole bylo uvnitř natřeno černě a ohraničeno černou oponou (průměr 180 cm a výška 200 cm). Strop skříně obsahoval čtyři malé reproduktory namontované blízko obvodu, rozmístěné 90 ° od sebe, 4 žárovky jednotlivě namontované poblíž vnitřního okraje každého reproduktoru a videokameru uprostřed. Obvykle žárovka svítila v poloze tří hodin a reproduktor nepřetržitě vydával bílý šum v poloze devíti hodin. Rozsvícená žárovka a emitující reproduktor sloužily jako distální podněty. Na hlavu myši byla namontována malá 6 V žárovka. Videokamera (CinePlex, Plexon) převedla skutečný obrazový obrazový signál na binární signál a sledovala horizontální pohyb malé žárovky. Laboratorní počítač (Dell, Precision 380) obdržel x a y souřadnice polohy hlavy myši při 33 rámcích / s. Myši byli vyškoleni v náhodném hledání potravy v otevřeném poli (Obr. 2B). Pro hledání potravy program vymezil kruhové oblasti (místa odměn) tak, že jejich centra byla vybrána náhodně v rámci čtverce ohraničeného kolem otevřeného pole a spustila dodávku odměn stimulace mozku (BSR), když myš vstoupila na místo odměny. Po intervalu 5u bylo místo odměny přesunuto na jiné místo a reaktivováno

 

Zobrazit větší verzi: 

• Na této stránce
• V novém okně
• Stáhnout jako prezentaci aplikace PowerPoint

Obrázek 2. 

Experimentální nastavení, prostorové úkoly a experimentální manipulace. A, Experimentální nastavení. Otevřené pole obsahující myš bylo sledováno z horního středu kamerou CCD, která signalizovala polohu myši. Jako distální podněty byly na čtyři okrajové polohy stropu namontovány žárovky a reproduktory pro emise bílého šumu. Počítač vykreslil stopu myši a kontroloval dodávku odměn ze stimulátoru. B„Náhodné hledání potravy: počítačový program náhodně vymezil místo kruhové odměny (malý tlustý červený kruh). Myš byla odměněna, když vstoupila na místo odměny, které pak bylo neaktivní (malý tenký červený kruh). START, Umístění myši na začátku relace. Červené tečky, místa doručení odměny. C„Manipulace ve známém otevřeném poli. Ve standardní relaci (základní linie 1) byla žárovka zapnuta v poloze 3 hodin a reproduktor nepřetržitě vydával bílý šum v poloze 9 hodin. V relaci distální rotace byla poloha distálních podnětů otočena o 180 ° s komorovou konstantou. V relaci proximální rotace byla komora otevřeného pole otočena o 180 °, zatímco distální podněty zůstaly nezměněny. D, Manipulace v novém otevřeném poli. Kruhové otevřené pole nahradila čtvercová komora. Všechny manipulační testy byly podobné těm, které byly použity ve známém otevřeném poli. Časová stupnice ukazuje dobu trvání nahrávání relací a intervalů mezi relacemi.

Izolace a záznam jednotky.

Sestava záznamové elektrody byla v HF posunuta na ∼20 μm / d. Neurální aktivity byly zaznamenány za použití konvenčního postupu záznamu, když myši prováděly pást. Buňky komplexního hrotu byly stanoveny na základě kritérií popsaných v předchozích studiích (Ranck, 1973; Foster a Wilson, 2006). Sběr dat začal, když poměr signálu k šumu na jedné z elektrod překročil UM4 krát. Zesílení signálu, filtrování a digitalizace vlnových průběhů špičky pomocí základní platformy pro analýzu komponent byly provedeny pomocí systému Plexon. Zaznamenané signály byly amplifikovány 10,000 krát, filtrovány mezi 0.6 a 3 kHz, digitalizovány vzorkovací rychlostí 40 kHz a uloženy na pevný disk počítače pro off-line třídění špiček. Digitalizované neuronové aktivity byly izolovány do jednotlivých jednotek svými komponenty tvaru vlny pomocí off-line třídicího programu (OfflineSorter, Plexon). Byly nakresleny překrývající se vlnové formy izolovaných jednotek, aby se ověřila neměnnost během nahrávání. Každý klastr byl poté zkontrolován ručně, aby se zajistilo, že hranice klastru byly dobře odděleny a že tvary křivek byly konzistentní s akčními potenciály. Pro každý izolovaný klastr byl sestaven histogram interspike intervalu a pro vyloučení podezřelých více jednotek byla použita absolutní refrakterní perioda alespoň 1.0 ms. Příklad záznamu tetrody je uveden v Obrázek 3.

 

Zobrazit větší verzi: 

• Na této stránce
• V novém okně
• Stáhnout jako prezentaci aplikace PowerPoint

Obrázek 3. 

Příklad záznamu s více jednotkami s tetrodou izolovanou off-line třídičem. A, Překrývající se průběhy neuronů 4 (a, b, c, d) zaznamenané každou elektrodou (E1-E4) z tetrody odpovídající klastrové analýze v B. B, Clusterová analýza. x- a y-ax představuje vrcholné hodnoty signálů v elektrodě 2 a 1 čtyř tetrodových elektrod. Každá tečka představuje jeden neuronální bodec, který překročil definovaný práh. Byly identifikovány čtyři obklopené klastry (a, b, c, d). Bílé shluky rozptýlené ve středu a v levém a pravém rohu představují základní šum a stimulační signály. Kalibrace: 0.8 ms, 0.5 mV.

Manipulace v kruhovém otevřeném poli (známé prostředí).

Aktivita v místě buňky byla monitorována v kruhové válcové komoře v průběhu několika 10 minutových relací, během kterých myši náhodně hledaly BSR. Neurony byly zaznamenány v sekvenčních sezeních, aby se stanovila stabilita místních polí mezi relacemi a množství extramaze (distální) a intramaze (proximální) kontroly. Obrázek 2C ukazuje diagram testování sekvenčních relací. Ve standardní relaci (prerotace, základní linie 1) byla sledována neuronální aktivita, zatímco myši se pásly v otevřeném kruhovém poli s reproduktorem nepřetržitě vydávajícím bílý šum v poloze 9 hodin a žárovka byla zapnuta na 3 ° pozice hodin. Neurony pak byly zaznamenány v relacích distálního cue rotace a proximálního cue. V relaci rotace distálního cue byla poloha distálních cue otočena o 180 °, zatímco komora byla udržována konstantní. Při rotaci proximálního tága byla komora otočena o 180 °, zatímco distální tága zůstala nezměněna. Po každé manipulaci s distálními nebo proximálními relacemi byla zaznamenána další relace s tím, že distální a proximální podněty byly vráceny do standardních podmínek. Vzhledem k tomu, že bylo několik relací zaznamenáno postupně, nebyla myš obvykle mezi relacemi odpojena od záznamového kabelu. Neprováděli jsme žádnou manipulaci, abychom narušili prostorovou orientaci zvířete. Před a po každé relaci nahrávání spočívala myš na krabici umístěné na podstavci mimo záznamovou komoru po dobu 5 minut.

Manipulace ve čtvercovém otevřeném poli (nové prostředí).

Umístí se buňky do nového otevřeného pole, kterému byla myš poprvé vystavena. Novým otevřeným polem byla čtvercová komora (velikost 55 × 55 cm, výška 25 cm), která nahradila známé otevřené pole. Alternativně byly použity dvě identické čtvercové komory. Sekvence manipulací v novém prostředí byly podobné postupům používaným ve známém prostředí (Obr. 2D). Před každou relací ve známém nebo novém prostředí byla podlaha vyčištěna roztokem 0.5% Hibitan (Sumitomo Company).

Vymezení pole.

Vydělením celkového počtu špiček kumulativní dobou zdržení v každém pixelu pro celou relaci se získala mapa rychlosti vypalování. Distribuční mapa rychlosti vypalování pixelů byla reprezentována barevnou stupnicí s velikostí pixelu 2.4 × 2.4 cm. Pixely, které myš nenavštívila v otevřeném poli, jsou zobrazeny šedě a ty, u kterých myš navštívila, ale buňka nikdy nevystřelila, jsou bílé pixely. Rychlost vypalování větší než nula byla hodnocena na vzestupné stupnici, přičemž barevné stupnice byly azurová, modrá, zelená, žlutá a červená. Pixely s rychlostí vypalování větší než dvojnásobek průměru jsou zobrazeny jako červené pixely. Místa polí byla vymezena jako shluky pixelů, přičemž rychlost střelby přesahovala dvojnásobek průměrné rychlosti střelby v relacích. Pole místa by mohlo pokračovat přes jakoukoli hranu sdílenou dvěma pixely splňujícími kritérium, ale ne přes rohy. Pokud jeden nebo více sousedních pixelů splnilo kritérium, pole bylo rozšířeno o pixely. Každý přidaný pixel byl poté testován na přítomnost sousedního pixelu, který splnil kritérium. Když žádné sousední pixely nesplňovaly kritérium, byla identifikována hranice pole. Minimální velikost pole buňky související s místem byla nastavena na 9 pixelů. Nespojité skvrny sousedních pixelů obsahujících výrazně zvýšenou rychlost vypalování byly definovány jako „podpole“, pokud splňují výše uvedené kritérium místních polí.

Standardní analýza relace.

Pro každý neuron vztahující se k místu byl pro stanovení (1) velikosti pole místa použit graf spalování rychlosti během standardní relace; (2) průměrná celková rychlost střelby; (3) střední rychlost vypalování infield; (4) průměrná rychlost střelby mimo pole; (5) maximální rychlost vypalování infield; (6) řídkost; (7) prostorové ladění; (8) prostorová koherence; a (9) obsah prostorových informací (bity / špice). Tyto analýzy byly provedeny pomocí dříve popsaných metod (Wiener a kol., 1989; Skaggs a kol., 1993; Jung a kol., 1994; Hetherington a Shapiro, 1997; Shapiro a kol., 1997). Hodnoty těchto parametrů byly porovnány mezi dvěma skupinami myší pomocí Student's t test. Stručně řečeno, velikost pole místa byla odhadnuta jako procento pole místa nad navštívenou arénou. Průměrná celková rychlost střelby byla vypočtena jako celkový počet špiček vystřelených v rámci relace dělený časem relace. Střední infield a střední rychlost vypalování mimo pole byly stanoveny jako průměrná rychlost vypalování buňky uvnitř a mimo pole místa. Maximální míra vypálení infield byla nejvyšší rychlost vypalování všech pixelů s místem pole. Prostorové vyladění buňky bylo určeno jako poměr průměrné rychlosti střelby z pole místa k průměrné rychlosti střelby z pole (Wiener a kol., 1989). Prostorová koherence byla vypočtena provedením z-transformace do korelace mezi rychlostí v pixelu a střední rychlostí v sousedních pixelech. Prostorové informace (Inf) signalizované každou jednotkou (Skaggs a kol., 1993) byla vypočtena podle následující rovnice: kde R je průměrná rychlost střelby v relaci, r_i je míra v pixelech i, a P_i je pravděpodobnost, že myš byla detekována v pixelech i.

Distální rotace, proximální rotace a analýzy přemapování.

Pro kvantifikaci rotace polí místa mezi různými relacemi s manipulací s prostředím (rotace distálních nebo proximálních podnětů) bylo pro každou buňku místa změřeno skóre korelace rotace. Zásobníky byly vyhlazeny přepočtem rychlosti střelby každého zásobníku jako průměr jeho a sousedních zásobníků. Pro každou buňku byla (1) měřena korelace Pearsonova produktu a momentu mezi polem rychlosti střelby v původní relaci a ve druhé relaci s manipulací s prostředím a poté (2) byla měřena míra úhlové rotace map rychlosti střelby kvantifikován mezi dvojicí relací. Tato druhá hodnota byla určena otáčením mapy rychlosti střelby druhé relace v krocích po 5 ° k určení polohy, ve které byla mapa otáčení střelby maximálně korelována s mapou rychlosti střelby původní relace. Úhel rotace, který produkoval nejvyšší korelaci, byl vzat jako množství, které pole místa rotovalo mezi dvěma relacemi, a buňka byla zarovnána jako sledování narážek, pokud se její pole pole posunula> 50% úhlu otočeného pro danou rotaci narážky relace ve srovnání s předchozí základní relací. Rovněž byla vypočítána opatření pro odchylku odpalovacích polí (přemapování) ve dvou komorách. Buňka byla považována za přemapovanou, pokud splňovala jednu z následujících podmínek: (1) buňka přestala střílet poté, co byla vystavena nové komoře, (2) buňka se stala aktivnější v nové komoře než ve známé komoře, nebo (3) pole se přesunulo na místo, které se nepřekrývá v poloze a směru s předchozím umístěním ve známé komoře.

Testování zrakové ostrosti.

Upravený test vizuální útesu (Fox, 1965; Crawley, 2000) byla použita k testování zrakové ostrosti našich myší. Dřevěná bedna (46 cm × 46 cm) s horizontální rovinou spojenou s vertikální kapkou (48 cm), která je zase spojena s dolní horizontální rovinou v nejvyšším bodě vertikální kapky. Povrch vodorovných rovin a svislého spádu pokrýval černobílý papír se šachovnicovým vzorem. Útes pokrýval list průhledného plexiskla. Hrana hliníku (šířka 2.54 cm a tloušťka 3.8 cm) byla umístěna na okraji útesu. Obě strany přístroje byly vysoce osvětlené. Vousy byly odstraněny před vizuálním útesovým testem, aby se odstranily taktilní informace. Byly použity dvě skupiny s každým z dospělých samců 10 z myší D1R-KO a WT. Myš byla umístěna na středový hřeben na začátku každé z následných pokusů 10 (po pokusech 5 byl přístroj otočen o 180 ° a bylo provedeno dalších 5). Když se myš rozhodla sestoupit dolů na horizontální kostkovanou plochu, byla považována za „pozitivní“ reakci, zatímco myš, která sestoupila dolů na stranu útesu, byla považována za „negativní“ reakci. Čas potřebný k tomu, aby myš vystoupila ze středového hřebene, byl zaznamenán jako latence odpovědi.

Histologie.

Poté, co bylo odhadnuto, že záznamové elektrody jsou pokročilé pod vrstvou pyramidálních buněk hipokampálního CA1, byla poloha záznamových elektrod histologicky ověřena. Myši byly podrobeny hluboké anestézii pentobarbitalem sodným (40 mg / kg ip). Elektrolytická léze (30 μA záporný proud pro 15 s) byla aplikována prostřednictvím záznamových elektrod. Myš byla perfundována 0.9% solným roztokem a následně 10% pufrovaným fyziologickým roztokem. Mozek byl odstraněn a fixován v 30% formálním solném roztoku po dobu jednoho týdne. Mozky byly rozděleny koronálně (50 μm) na mrazícím mikrotomu a obarveny krezylovou fialovou.

Ověření umístění elektrod. Umístění nahrávacích elektrodových špiček (černé kroužky) pro myši WT (A) a D1R-KO myši (B) použité pro experiment záznamu jednotky. Desky byly upraveny, aby se podobaly těm z Franklin a Paxinos (1997). Čísla vedle každé sekce odpovídají milimetrům od bregma.

Porovnání vlastností střelby z hippocampálních buněk u buněk WT a D1R-KO ve známém prostředí

Počty buněk hippocampálních buněk u myší WT a D1R-KO testovány na jejich odpovědi na změny distálních a proximálních podnětů ve známých i nových prostředích

Účinky změn v prostorových vztazích mezi distálními a proximálními narážkami na hippocampální lokální aktivitu u WT myší ve známých (1 – 5) a nových prostředích (6 – 10). A„Ve známém prostředí měla místní buňka pole pro vypalování místa kolem polohy 9 hodin (1) ve standardní relaci a její místo se posunulo do polohy 3 hodin (2) v relaci distální rotace , se vrátil do stejné polohy (3) jako ve standardní relaci v relaci základní linie 2, žádný posun (4) v relaci proximální rotace a žádná změna (5) ve zpětné relaci, ve které byla záznamová komora vrácena do normální poloha. V novém prostředí sledovalo lokalizační pálení této buňky také distální narážky (6–7), ale nikoli proximální narážky (8–9). B„Místo buňky mělo pole místa, které nesledovalo rotaci distálních podnětů (1 – 2), ale sledovalo proximální podněty (3 – 4) ve známém prostředí. Místo pole této buňky bylo přemapováno v novém prostředí, když se jeho místo pole objevilo opačné, než ve známém prostředí, ale stále sledovalo rotaci proximálních podnětů (8 – 9). C„Buňka místa měla místo pole, které sledovalo změnu jak vzdálených podnětů (1 – 2), tak proximálních podnětů (3 – 4) ve známém prostředí. Je zajímavé, že v novém prostředí sledovalo místo této buňky pouze distální narážky (5 – 6), nikoli proximální narážky. Obrázky žárovek a reproduktorů vedle vypalovacích map ukazují jejich uspořádání za manipulačních podmínek distálních a proximálních podnětů. Rotační šipky označují rotaci záznamové komory v relaci rotace proximálního tága. Tabulky barevné stupnice napravo od vypalovacích map ukazují kalibraci rychlosti vypalování. Čísla tučně a v závorkách napravo od map rychlost střelby označují infield a outfield rychlost střelby. Zelené otevřené čtverečky uzavírají mapy rychlosti střelby, aby zdůraznily relace, při nichž došlo k rotaci místního pole buňky.

Účinky změn v prostorových vztazích mezi distálními a proximálními narážkami na hippocampální místo související aktivity u myší D1R-KO ve známých (1 – 5) a nových prostředích (6 – 10). A„Typická buňka místa měla pole místa, které nesledovalo rotaci distálních podnětů (1 – 2), ale sledovalo rotaci proximálních podnětů (3 – 4) ve známém prostředí. V novém prostředí nebylo místo pole této buňky změněno ani vzdálenými, ani proximálními narážkami. B, Další příklad umístění buňky, jejíž aktivita související s místem nesledovala rotaci distálních podnětů (1 – 2), ale sledovala rotaci proximálních podnětů (3 – 4) ve známém prostředí, a tato buňka podobně reagovala v novém prostředí (6 – 10). Všimněte si, že žádné změny v buňkách u myší D1R-KO nesledovaly změnu distálních podnětů. Ostatní popisy jsou stejné jako pro Obrázek 2.

Rozptyl hodnot prostorové korelace versus úhly rotace, které produkovaly maximální korelační hodnoty mezi páry relací pro hippocampální buňky umístěné u myší WT a D1R-KO. Na úsečce jsou znázorněny úhly natočení a na souřadnici jsou znázorněny hodnoty prostorové korelace mezi páry relací; modré diamanty jsou pro WT myši a červené otevřené čtverečky pro D1R-KO myši. INZERÁTVe známém prostředí se vyskytovaly dvě subpopulace místních buněk u WT myší, ve kterých byla místa místa ovlivňována distálními podněty (distribuovanými kolem 180 °, standardní relace vs. relace distální rotace) (A) a proximální podněty (distribuované kolem 180 °, základní relace 2 vs relace proximální rotace) (C), s vlivem distálních podnětů převládajících nad proximální podněty. U myší D1R-KO žádné buňky místa nepřesunuly svá pole polí rotací distálních podnětů (všude kolem 0 °) (A) a většina buněk posunula svá pole podle rotace proximálních podnětů (C). E-H„V novém prostředí převažuje účinek distálních podnětů (E) přes proximální podněty (G) byl stále pozorován a byl výraznější u myší WT. U myší D1R-KO reagovalo na rotaci distálních podnětů pouze několik buněk (E) a proximální podněty (G), a mnoho buněk nesledovalo distální nebo proximální změny tága v novém prostředí.

Výsledky testu vizuální cliff u myší WT a D1R-KO