Noored on kokaiinisõltuvuse suhtes haavatavamad: käitumuslikud ja elektrofüsioloogilised tõendid (2013)

 

  1. Michela Marinelli

+Näita sidusrühmi

+ Autor Märkused

  • JE McCutcheoni praegune aadress: Illinoisi ülikooli psühholoogia osakond, Chicago, Chicago, IL 60607.

  • Autorite panused: WCW, JEM ja MM kavandatud uuringud; WCW, KAF, NEP ja MM teostasid uuringuid; WCW, KAF, NEP, JEM ja MM analüüsisid andmeid; WCW, JEM ja MM kirjutasid paberi.

  1. Neuroteaduse ajakiri, 33(11): 4913-4922; doi: 10.1523/JNEUROSCI.1371-12.2013

Abstraktne

Inimestel on noorukieas kõrgenenud kalduvus arendada kokaiini sõltuvust. Ei ole teada, kas see on tingitud suuremast juurdepääsust kokaiinile ja selle kokkupuutele selles vanuses või kas nooruki aju on eriti haavatav kokaiini sõltuvust tekitavate omaduste suhtes. Siin allutati meessoost noorukitele (P42) ja täiskasvanud (XP88) rottidele laia valikut kokaiini eneseanalüüsi protseduure. Lisaks sellele kontrolliti ja manipuleerisime dopamiini neuronite aktiivsusega dopamiinergilise aktiivsuse arengu erinevustega seotud käitumuslike erinevuste kindlakstegemiseks. Suhteliselt täiskasvanutega võtsid noored rotid kokaiini kergemini, olid tundlikumad madalamate dooside suhtes, näitasid suuremat kokaiini tarbimise suurenemist ja olid vähem hinnatõusu suhtes (st olid pigem „elastsed”). Paralleelselt näitasid noorukid ka ventraalse tegmentaala dopamiini neuronite suurenenud aktiivsust, mis on teadaolevalt seotud suurenenud eneseanalüüsi käitumisega. Dopamiini D farmakoloogiline manipuleerimine2 retseptori funktsioon koos kinpirooliga (agonist) või etiklopriidiga (antagonist), et muuta dopamiini neuronite aktiivsust, kõrvaldada vanuse erinevused kokaiini enda manustamisel. Need andmed viitavad põhjuslikule seosele kokaiinisõltuvuse vastutuse käitumuslike ja elektrofüsioloogiliste tegurite vahel. Kokkuvõttes näitavad noorukid kõrgendatud sõltuvusvastutuse käitumuslikke ja elektrofüsioloogilisi tunnuseid.

Sissejuhatus

Nooruk on periood, mille jooksul inimestel tekib kokaiini sõltuvus.Kandel et al., 1992; Chambers et al., 2003; Johnston et al., 2011), mis ilmneb haiguse kiirema progresseerumise ja raskemate sümptomite \ tAnthony ja Petronis, 1995; Patton et al., 2004; Reboussin ja Anthony, 2006; Chen et al., 2009). On ebaselge, kas selline suurenenud tundlikkus tuleneb suuremast ravimi kokkupuutest ja katsetest või kas noorukid on tundlikumad kokaiini sõltuvust tekitavate omaduste suhtes. Selle kindlaksmääramine inimestel on keeruline, sest uimastitarbimise võimaluste erinevusi vanuses ei saa arvesse võtta. Samuti on võimatu uurida kokaiinitarbimist, kui puuduvad bioloogilised tegurid, näiteks sotsiaalmajanduslikud mõjud uimastitarbimisele.

Loommudelite abil saame uurida narkootikumide tarbimist võrdsete ravimite kättesaadavuse tingimustes. Kuigi ükski üksik käitumisülesanne ei saa modelleerida kõiki sõltuvuse elemente, võivad erinevad iseseisvate protseduuride protseduurid modelleerida narkootikumide võtmise konkreetseid aspekte (vaadake läbi Lynch ja Carroll, 2001). Praegune kirjandus näitab, et täiskasvanud rottidel on võrreldes täiskasvanud rottidega rohkem kuritarvitavaid ravimeid.Schramm-Sapyta jt, 2009), nagu alkohol (Doremus et al., 2005; Siegmund et al., 2005), nikotiin ja amfetamiin (Levin et al., 2007; Shahbazi et al., 2008). Kokaiiniuuringud on siiski ebajärjekindlad ja on kahjuks kasutanud ainult ühekordseid annuseid. Mõned uuringud näitavad, et noorukitel on suurem \ tAnker ja Carroll, 2010; Schramm-Sapyta jt, 2011), samas kui teised näitavad, et noorukid ja täiskasvanud ei erine (Leslie et al., 2004; Belluzzi jt, 2005; Frantz et al., 2007; Kantak et al., 2007; Kerstetter ja Kantak, 2007; Harvey et al., 2009; Li ja Frantz, 2009). Nende lahknevuste lahendamiseks kasutasime laias valikus kokaiini annuseid ja enesehalduse protseduure narkootikumide võtmise mitmete mõõtmete modelleerimiseks, nimelt tarbimine ja tundlikkus [eneseanalüüsi omandamine, kasutades lühikest (ShA) / pikka (LgA)) juurdepääsu menetlused], tarbimise suurenemine ja kokaiinitarbimine hinna funktsioonina (kokaiini tarbimine, kui suhe ravimi saamiseks on suurenenud). Neid protseduure kasutades leidsime, et täiskasvanud rottide puhul esines noorukitel kõrgendatud kokaiini eneseanalüüs.

Kõrgendatud kokaiini enda manustamine on seotud ventraalse tegmentaala (VTA) dopamiini neuronite suurenenud aktiivsusega täiskasvanud rottidel (Marinelli ja valge, 2000). Huvitav on ka see, et noorukieas on dopamiini neuronite aktiivsus suurenenud (McCutcheon ja Marinelli, 2009; McCutcheon et al., 2012). Püüdsime luua põhjusliku seose sõltuvuskohustuste käitumuslike ja füsioloogiliste meetmete vahel, manustades kokaiini eneseanalüüsil ravimeid, mis modifitseerivad dopamiini neuronite aktiivsust. Täpsemalt testisime hüpoteesi, et suurenenud dopamiini neuronite aktiivsuse vähenemine noorukitel vähendab nende suurenenud kokaiini tarbimist täiskasvanutel täheldatud tasemeni; vastupidi, suurenev dopamiini neuronite aktiivsus täiskasvanutel suurendab nende kokaiini tarbimist noorukieas täheldatud tasemetele.

Materjalid ja meetodid

Õppeained

Isased Sprague Dawley rotid saadi Portage'i kolooniast (Charles River). Neid hoiti kolme puuri kohta 12 h valguse / pimeduse tsüklis, konstantsel temperatuuril 22 ± 2 ° C ja niiskuses 66% ± 25, ad libitum juurdepääs toidule ja veele. Noored rottid võõrutati täpselt postnataalsel päeval 21 (P21). Kõik eksperimendid algasid vivariumis week1 nädalas enne eksperimentide alustamist. Selle aklimatiseerimisaja jooksul käideldi rotte vähemalt üks kord. Puberteedi algus määrati ligikaudu P35-st P44-ile, kasutades balano-preputiaalse eraldamise meetodit (Kolho et al., 1988); see toimus ligikaudu P41-i juures. Kõik eksperimendid kestsid 7-10 d, kui neid ei ole täpsustatud ja alustati, kui eelkubertatiivsed noorukid, postpubertaalsed noorukid (edaspidi „noorukid”) ja täiskasvanud rotid olid vastavalt P35, P42 ja P88. Kõik uuringud viidi läbi valguse / pimeduse tsükli pimedas faasis, kui rotid olid aktiivsed. Uuringud viidi läbi N2 aasta jooksul.

Kokaiini iseseisev manustamine

Kokaiini enda manustamise või eksperimenteerijate poolt määratud kokaiini infusioonide suhtes testitud rotid said parema välise jugulaarse veeni intravenoosset katetreerimist isofluraani gaasiga anesteesias (5% induktsioon, 2-3% hooldus). SILASTIC kateeter (10-12 μl surnud ruumala) kinnitati jugulaarsele veenile ja viidi subkutaanselt välja, et väljuda keskmisest lõhestunud piirkonnast. N1 nädala operatsioonijärgsel taastumisperioodil loputati kateeter iga päev steriilse soolalahusega (100 μl), et vältida ummistumist. Päeval enne eneseanalüüsi algust paigutati rotid iseeneslikku manustamiskambrisse (41 × 24 cm põrandapind, 21 cm kõrge; MED Associates) 1.5 h kambrite harjutamiseks. Seda tehti selleks, et vältida uurimiskäitumise sekkumist iseseisva käitumisega. Pilootkatses märkisime, et noorukid uurisid kambrit rohkem kui täiskasvanuid ja et see tegevus võistles eneseanalüüsi käitumisega. Seetõttu oli harjumusperiood selle vanusepiirangu kõrvaldamiseks.

Enesesüsteemis olevad kambrid olid varustatud kahe nina-klapiga avaga, mis olid üksteise vastas, mis asusid 2 cm kõrgusel põranda kohal igas kambris. Kambrid paigaldati heli summutava korpuse sisse. Aklimatiseerumisperioodil kaeti nina-auk augud. Enda manustamise ajal andis ühes augus (nn aktiivne auk) närbumine ühe ravimi infusiooni (st fikseeritud suhe 1 (FR1)); üks ninaõõnes võrdub ühe infusiooniga, kui ei ole sätestatud teisiti]; see põhjustas ka valgustuse 10 s aktiivse ava sees. Kõigis katsetes oli üleannustamise vältimiseks olemas 10 – 30 s aegumisperiood, välja arvatud katses, kus testiti tarbimist suureneva suhte (hinna) funktsioonina, millel puudus aegumine. Teises augus olev nina (“mitteaktiivne”) ei avaldanud mingeid tagajärgi. Infusiooni manustati süstla pumba abil 200 μl / kg (st 30 μl 150 g roti kohta) ja kiirusega ∼12 μl / s. Nina pungade arvu ja infusioonide arvu kogusid MED Associates Software Package Schedule Manager for Windows. Kateetrite avatust testiti üks kord roti kohta Brevital (5 mg / kg, iv) katse lõpus; rotid, kes ei reageerinud anesteetikule kohe, kõrvaldati uuringutest. Seega jäeti uuringutest välja 18i (X455%) rottide 4.

Katse 1: vanuse erinevused eneseanalüüsi omandamisel

ShA.

75-1200 d jaoks anti ööpäevas 1.5 h-le erinevaid rottide kohordi sooli või kokaiini (7 – 10 μg / kg infusiooni kohta) manustamiseks. Need kokaiini annused on väga väikesed (75 μg / kg infusiooni kohta), madal (150 μg / kg infusiooni kohta), mõõdukalt madal (300 μg / kg infusiooni kohta), mõõdukas (600 μg / kg infusiooni kohta) ja kõrge (1200 μg / kg infusiooni kohta). Prepubertaalsed noorukid testiti ainult mõõdukalt väikese annusega (300 μg / kg infusiooni kohta). Iseseisva käitumise omandamine kokaiiniga mõõduka annusega (600 μg / kg infusiooni kohta) testiti ka eraldi rühmas, et määrata kindlaks omandamiskriteerium.

LgA.

Ravimi võtmise uurimiseks, kui ravimite igapäevane kättesaadavus on pikenenud, lubati 6-i mõõduka annuse (600 μg / kg infusiooni kohta) kohta 10-iga ööpäevas eraldi rottide kohort.

Katse 2: vanuse erinevused kokaiini eneseanalüüsi eskalatsioonis

Eraldi rottide kohort koolitati esmalt 600 d-le (kaks korda päevas kaheksa 4-i seanssi) manustama mõõdukat kogust kokaiini (1.5 μg / kg infusiooni kohta). Eskalatsiooni määramiseks on vaja mõõdukalt suuri annuseid.Ahmed ja Koob, 1998; Mantsch et al., 2004). Kuna mõõdukas annus erines noorukite ja täiskasvanute vahel (Joon. 1) ja see võib mõjutada hilisemat eskalatsiooni, võrdsustasime esialgse koolituse etapis kokaiini tarbimise kogust. Selleks eemaldati rottid iseenesest manustatavast kambrist, kui nad said 15 – 20 infusiooni või maksimaalselt 3 h. Pärast treeningfaasi viidi rottidele eskalatsiooniuuring. Eskalatsiooni uuringus testiti rottidele 6 h päevas (LgA) või 1.5 h päevas (ShA) 12 d jaoks.

Katse 3: vanuse erinevused kokaiinitarbimises kui hinna funktsioon

Eraldi rottide kohalt lubati 1200-iga päevas manustada suurel määral kokaiini (1.5 μg / kg infusiooni kohta). Esimese 2 d ajal kasutasime FR1-i (üks ninaõõde on võrdne ühe infusiooniga). Fikseeritud suhe (st hind) tõusis seejärel igal teisel päeval (FR3, FR6, FR9, FR12 ja FR24), nii et rotid said iga hinna eest kaks istungit. Teisel istungil analüüsiti rottide iga hinna eest. Iseseisvate infusioonide arv (st tarbimine) paigaldati Hurshi ja Silberbergi kehtestatud eksponentsiaalsele nõudekõverale (2008; Hursh ja Roma, 2013): logi Q = logi Q0 + k(e−α (Q0×C) - 1). Seda kõverat kasutatakse selleks, et hinnata ravimi tarbimise „motivatsiooni” taset (Hursh, 1993) ja kokaiini tarbimise vastuseisu hindade tõusule (st „kokaiini nõudluse elastsus”) (Bickel et al., 2000). Seega peetakse kuritarvitamise vastutuse hindamiseks head meetodit (Hursh, 1993). Q tähistab tarbimist (eneseanalüüside arv) ja Q0 on tarbimise tase võimalikult madala hinnaga. C tähistab hinda (st suhet) ja k on määratud konstantseks, mis arvestab logaritmiliste ühikute tarbimise hinnangulist vahemikku (k = 0.91 nendes uuringutes). α nimetatakse “oluliseks väärtuseks” ja esindab kokaiininõudluse elastsust. Käitumist peetakse „elastseks”, kui tarbimine on hinna suhtes tundlik (st tarbimine on hoolimata hinnatõusust säilinud) ja see lülitub „elastseks“, kui tarbimine on hinna suhtes tundlik (st tarbimine langeb hinna tõusuga). Järsem langus on suurem elastsest käitumisest ja suurem α (Hursh ja Silberberg, 2008) võrreldes mitteelastse käitumisega. Seda võrrandit kasutades saame arvutada Pmax, mis on hind, millega käitumine ei muutu elastsest elastseks (Bickel et al., 2000).

Katse 4: vanuse erinevused kokaiini ja selle metaboliitide tasemel

Eraldi rottide kohale anti 600-i d ööpäevas 1.5-i jaoks iseenesest manustamiseks mõõdukas koguses kokaiini (2 μg / kg infusiooni kohta). Need algsed iseenesest manustamisperioodid (päevad 1 ja 2) kaasati, et minimeerida hilisemate mittesõltuvate kokaiini infusioonide poolt põhjustatud ägedaid toimeid.Twining jt, 2009). Seejärel said rottidele 21-i päevasel 1.5-i päeval 5-i infusiooni 1.5-iga. Infusiooni manustati ajastatud ajavahemike järel, iga 5 min esimese kolme infusiooni jaoks ja iga 7 min ülejäänud kohta. Selle disaini eesmärk oli jäljendada iseseisvat istungit, tagades samal ajal kokaiini võrdse kokkupuute rühmade vahel. Katsepäeval (päev 2) dekapiteeriti rotid 5 min pärast viimase kokaiini infusiooni saamist. Trunkveri koguti 10 ml katseklaasidesse, mis sisaldasid naatriumfluoriidi (8 mg) ja kaaliumoksalaati (20 mg); seejärel hoiti torusid temperatuuril -80 ° C. Pärast väikeaju ekstraheerimist ja eemaldamist külmutati ajud värske jääga ja säilitati temperatuuril -XNUMX ° C. Proovid saadeti Utah University of Human Toxicology, kus kokaiini ja metaboliite (bensoüülekgoniin, ecgonine etüülester, norokokaiin) mõõdeti vedelikkromatograafia-tandem-massispektromeetria abil.Lin jt, 2001, 2003).

In vivo VTA dopamiini neuronite rakuväline salvestamine

Eraldi rottide kohest anesteseeriti kloorhüdraadiga (400 mg / kg, ip). Täiendavate anesteetikumide või ravimite intravenoosseks manustamiseks kanüüliti külgne saba veen. Rotid pandi stereotaksilisse seadmesse (David Kopf Instruments). Kehatemperatuuri jälgiti rektaalse termomeetri abil (Medline Industries) ja hoiti 37 ± 0.5 ° C juures kuumutuspadjaga (Fintronics). Me jälgisime anesteesia sügavust, tagades reaktsiooni puudumise tagumise näputäisuga ja tagades 60 – 80 hingamisteede / hingamisteede sageduse noorukitele ja 52 – 72 hingetõmmetele / min täiskasvanutele. Mõnedes katsetes koguti une-ärkveloleku mõõdud kortikaalsete elektroentsefalogrammidega, et tagada anesteesia stabiilne seisund. Klaasist elektrood tõmmati 2-mm-välise läbimõõduga klaaspipetilt vertikaalse elektroodi tõmburiga (Narishige PE-2) ja murdis mikroskoobi all 1-2 μm otsa läbimõõduni. Elektrood oli täidetud kiirelt rohelise värviga 1% (Thermo Fisher Scientific) 2 m NaCl lahuses. Elektroodi impedants oli 1.5-2.1 MΩ, mõõdetuna 135 Hz juures (Winston Electronics BL1000-B). VTA kohal on puuritud puuraugu auk (vt koordinaatide allpool). Elektroodi alandati noorukite ja täiskasvanute jaoks 5 või 6 mm vortaalselt kortikaalsele pinnale ning seejärel hüppas aeglaselt dopamiini neuronite keha piirkonda hüdraulilise mikrolülitusega (David Kopf Instruments). Elektroodid langetati VTA piirkonnas, eelnevalt kindlaksmääratud "rööbaste" (0.2 mm kaugusel); täiskasvanutel oli 3.2 – 4.0 mm, mis oli esikülg lambda ees, 0.2 – 1.4 mm külgsuunas keskjoonest ja 7.5 – 8.5 mm ventraalne koore pinnast täiskasvanutele. Noorukite proovivõtukohaks oli 2.4 – 3.4 mm, mis oli ees lambda ees, 0.3 – 0.7 mm külgsuunas keskjoonest ja 7.5 – 8.5 mm kõhupiirkonnas. Neid koordinaate kohandati, et saada sarnaseid lõplikke salvestuskohti, vaatamata erinevustele vanusepiirkondades.

Dopamiini neuronite ekstratsellulaarse salvestamise ajal sisestati elektrisignaalid suure impedantsi võimendisse (Fintronics), ribalaius filtreeriti 400 ja 500 Hz või 50 ja 800 Hz, kuvatakse ostsilloskoopil (Tektronix R5110) ja jälgiti akna diskrimineerijaga ja helivõimendi (Grass AM8; Grass Instruments). Digitaalsed väljundid edastati läbi liidese (Digidata 1200 seeria; Molecular Devices) personaalarvutisse, kus töötab AxoScope tarkvara (Molecular Devices), mis määras võrgutegevuse ja salvestas kõik andmed edaspidiseks analüüsiks. Salvestatud andmeid analüüsiti spetsiaalselt kohandatud programmiga, mis määrab kindlaks põletamise omadused.

Dopamiini neuronid identifitseeriti anatoomilise asukoha järgi VTA-s ja vastavalt standardsetele füsioloogilistele kriteeriumidele (Bunney et al., 1973). Lühidalt on need kriteeriumid järgmised: iseloomulik kolmefaasiline (+ / - / +) lainekuju pikkusega 2.5–3.5 ms, mõõdetuna algusest lõpuni 400–500 Hz filtrite abil või> 1.1 ms negatiivse piigi algusest kuni küna kasutades 50–800 Hz filtreid. Laskemustrid näitavad ka iseenesest madalat laskemääratust 0.5–10 Hz (Grace ja Bunney, 1984; Marinelli jt, 2006) vahelduvate purunemistega, mis on kõrgsageduslike naastude (Grace ja Bunney, 1983). Need kriteeriumid on are90% täpsed dopamiini neuronite tuvastamisel (Maitsetu ja Grace, 2012). Vanusega seotud erinevuste uurimiseks dopamiini neuronite aktiivsuses kogusime roti kohta maksimaalselt kolm kuni neli rakku. Iga salvestus koosnes vähemalt 3 min stabiilsest aktiivsusest (variatsioon <5%). Analüüsisime laskekiirust (aja jooksul toimunud piike) ja laskemustrit. Viimase puhul arvutati purunemisaktiivsuse hulk purskena eralduvate piikide protsendina kogu piikide koguarvust. Arvutasime ka purske sündmuste sageduse ja purske omadused (piikide arv / purske ja purske kestus millisekundites).

Salvestamise lõpus anesteseeriti rotid täiendavalt kloorhüdraadiga. Elektroodipinna asukoht oli märgistatud läbides 28 μA katoodvoolu läbi elektroodi ∼30 min. See deponeeris diskreetse värvipinna. Ajusid eemaldati ja säilitati 10% Formaliinis, kuni koronaalsed sektsioonid (40 μm) lõigati külmutavale mikrotomile (Leica Microsystems). Sektsioonid paigaldati ja elektroodide paigutamist kontrolliti valgusmikroskoopia abil, kasutades in-house atlase noorukite ja täiskasvanud rottide puhul, kes olid samaväärsed käesolevas uuringus toodud kaaluga. Kuna roti kohta registreeriti kuni neli rakku, märgiti värviga ainult iga roti lõplik rakk; teiste rakkude asukohad ekstrapoleeriti nende salvestatud kauguse põhjal lõplikust rakust. Arvestades aju suuruse erinevust vanuses, kasutasime nende vahemaade ekstrapoleerimiseks noorukitel korrektsioonitegurit. See arvutati keskmise aju pikkuse, laiuse ja kõrguse võrdlemisel noorukite ja täiskasvanute ajus. Korrigeerimistegurid olid 1.14 anteroposterior, 1.06 mediolateraalseks ja 1.09 dorsoventral. Seejärel kontrollisime, et kõik rakud olid VTA dopamiinergilises piirkonnas, kaardistades need täiendavasse ettevõttesisesesse atlasi, mis näitab VTA dopamiinergilisi piirkondi (türosiinhüdroksülaasi immuunhistokeemiline värvimine).

Dopamiini neuronite aktiivsust modifitseerivate ravimite mõju kokaiini eneseanalüüsile

Eraldi rottide kohale anti 600-i d ööpäevas 1.5-i jaoks iseenesest manustamiseks mõõdukas koguses kokaiini (6 μg / kg infusiooni kohta). Esimese 2 d ajal kasutasime FR1-i (üks nina-klapp võrdub ühe infusiooniga). Seejärel suurendati FR-i 3-i (kolm nina pokes võrdub ühe infusiooniga) järgmise 4 d jaoks. Kümme minutit enne viimase seansi algust said rotid ravimi, mis suurendas või vähendas aju dopamiini neuronite aktiivsust, toimides dopamiini D suhtes.2klassi autoretseptorid (edaspidi “D2 retseptorid ”). Täpsemalt, rottidele anti D2 retseptori agonisti kinpirool [20 μg / kg, sc, autoretseptori selektiivne annus, mis vähendab dopamiini neuronite aktiivsust (Marinelli jt, 2003)], D2 retseptori antagonisti etiklopriid [20 μg / kg, sc, mis suurendab dopamiini neuronite aktiivsust (Marinelli jt, 2003)] või soolalahus (subkutaanselt) kontrollina. Arvestades, et noorukitel ja täiskasvanutel on D sarnane tundlikkus2 retseptorid (McCutcheon et al., 2012), peaks nende farmakoloogiliste manipulatsioonide tulemuseks olema sarnane mõju dopamiini neuronite põletamise kiirusele vanuses.

Narkootikumide

Kokaiini HCl andis riiklik narkootikumide kuritarvitamise instituut heldelt või osteti Sigma-Aldrichilt ja lahustati 0.9% soolalahuses; lahuse pH hoiti 6.5-7.0-s koos 0.1N NaOH-ga. Brevital, kinpirooli vesinikkloriid ja etiklopriidvesinikkloriid osteti firmalt Henry Schein ja lahustati 0.9% soolalahuses. Isofluraan ja 0.9% soolalahus osteti firmalt Butler Schein. Kloorhüdraat osteti firmalt Sigma-Aldrich ja lahustati deioniseeritud vees.

Statistilised analüüsid

Nina pokse ja infusioone analüüsiti ANOVA-ga, kasutades vajaduse korral vanusevahelisi tegureid (noorukid vs täiskasvanud või prepubertaalsed noorukid, noorukid ja täiskasvanuid), annust (soolalahus vs kokaiin) ja ligipääsu seisundit (ShA vs LgA), ja ava sisemised tegurid (aktiivne vs mitteaktiivne), koolituspäevad (erinevad katse kestused), fikseeritud suhe (FR1, FR3, FR6, FR9, FR12 ja FR24) ja ajapunkt (eeltöötlus vs järeltöötlus). Kasutati Newman-Keulsi testi post hoc analüüse. Omandamise saavutanud rottide osakaalu hinnati Fisheri täpse testiga. Dopamiini neuroni aktiivsust analüüsiti Studenti omadega t test (noorukid vs täiskasvanud). Studenti analüüsiti ka kokaiini ja selle metaboliitide taset veres ja ajus t test (noorukid vs täiskasvanud), välja arvatud juhul, kui proovid olid alla avastamisläve; sel juhul kasutasime Mann – Whitney oma U test (noorukid võrreldes täiskasvanutega). Ülaltoodud andmeid analüüsiti Statistica (StatSoft) abil. Nõudluse elastsust analüüsiti Prism 6iga (GraphPad Software). Eksponentsiaalse nõudluskõvera väärtuste erinevused Q0 ja a analüüsiti, kasutades F test (Cassidy ja Dallery, 2012). Kõigi testide puhul oli olulisuse tase 0.05.

Tulemused

Kokaiini iseseisev manustamine

Eksperiment 1: vanuse erinevused isereguleerimise omandamisel

ShA.

Võrreldi soolalahuse ja viie kokaiini annuse manustamisega. Kõigi dooside puhul stabiliseerus kokaiini tarbimine tavaliselt pärast 2 d kokaiini manustamist (andmed ei ole esitatud); seetõttu on näidatud omandamisprofiilid Joonis 1A sisaldab ainult andmeid alates 3i päevast.

Joonis 1. 

Kokaiini omastamise käitumine kokaiini annuste vahel. ASoolalahuse või kokaiini tarbimine väga madalal (75 μg / kg infusiooni kohta), madal (150 μg / kg infusiooni kohta), mõõdukalt madal (300 μg / kg infusiooni kohta), mõõdukas (600 μg / kg infusiooni kohta), \ t või kõrge (1200 μg / kg infusiooni kohta) annuse kohta ShA (1.5 h) päevas. Iga punkt esindab iga rühma keskmist ± SEM iga 1.5 h iseseisva istungi puhul. Noored (n 6, 8, 8, 16, 20 ja 12) ja täiskasvanutele (n 6, 8, 9, 11, 18 ja 13) annustes 0, 75, 150, 300, 600 ja 1200 μg / kg infusiooni kohta; n = 14 prepubertaalsete noorukite puhul annuses 300 μg / kg infusiooni kohta. B, Kokaiini omastamine erinevatel kokaiini doosidel noorukitel võrreldes täiskasvanutega. Iga punkt tähistab keskmist ± SEM viimaste 3i iseenesest manustamise päevadel näidatud annustes A.

As Joonis 1A näitused, noorukid ja täiskasvanud ise manustatud sarnased soolalahused (vanuse mõju, \ t F(1,10) = 0.01, ns), kokaiin väga väikese annusega (75 μg / kg infusiooni kohta, vanusefekt, \ t F(1,14) = 0.03, ns) ja kokaiini suur annus (1200 μg / kg infusiooni kohta, vanusefekt, \ t F(1,23) = 0.22, ns). Noored annavad ise väiksema annuse korral rohkem kokaiini kui täiskasvanutel (150 μg / kg infusiooni kohta, vanusefekt, \ t F(1,15) = 11.27, p <0.01), mõõdukalt väike annus (300 μg / kg infusiooni kohta, vanusefekt, F(2,38) = 9.85, p <0.001) ja mõõdukas annus (600 μg / kg infusiooni kohta, vanusefekt, F(1,36) = 19.83, p <0.001). Eelpuberteediealisi rotte testiti ka mõõdukalt väikese annusega (300 μg / kg infusiooni kohta). Sissevõtt erines vanuse järgi (vanusefekt, F(2,38) = 2.85, p <0.001). Täpsemalt öeldes näitasid puberteedieelsed noorukid ja täiskasvanud kokaiini sarnast tarbimist (ns), samas kui noorukid tarbisid rohkem kui nii puberteedieelsed noorukid kui ka täiskasvanud (p <0.001). Joonis 1B näitab iga annuse keskmist omastamist viimase annuse 3 d jooksul. Otseseid rühmade võrdlusi ei tehtud, sest erinevaid doose testiti eraldi katsetes mitme kuu jooksul. Väikseimat annust (75 μg / kg) ei võetud arvesse, sest rühma keskmised väärtused olid ühe nooruki rottide ja ühe täiskasvanud rottide poolt väga suured, kuna see esineb sageli väga väikeste annuste korral. Joonis illustreerib klassikalist inverteeritud U-kujulist doosi-vastuse kõverat kokaiini enese manustamiseks (Lynch ja Carroll, 2001) mõlemas vanuserühmas.

Järgnevalt uurisime, kas noorukid omandavad iseseisvalt kiiremini kui täiskasvanud, uurides rottide osakaalu, kes saavutasid kokaiini enesetäiendamise, ja päevade arvu, mis kulus omandamiseks. Selle katse sooritamiseks koostasime poolt välja pakutud kriteeriumi Mitchell et al. (2005) kasutades aktiivse seadme vastuste bimodaalse jaotuse minimaalset kogust, mis on kumulatiivne kõigi iseseisvate sessioonide ajal. Küna esindab käitumismuutuse punkti, kus rottidel, kes reageerivad minimaalsest väärtusest vähem, ei ole veel teada nina pokingi ja tasu vahelist suhet, samas kui rottidel, kes reageerivad minimaalsest väärtusest rohkem, on omandatud iseseisev käitumine. Me kasutasime eraldi suurt rottide kohort (noorukid, n = 55; täiskasvanud, n = 58), kus noorukitel oli taas suurem tarbimine kui täiskasvanutel (Joon. 2A; vanusefekt, F(1,111) = 26.89, p <0.001). Täiskasvanud näitasid nina torkamise bimodaalset jaotust, kusjuures küna oli 15 nina pistmisel. Seevastu noorukitel ei ilmnenud bimodaalset jaotust, kuna neil puudus kõrge ravivastuse määr (Joon. 2C), mis viitab enesehalduse kiiremale omandamisele. Tegelikult näitasid noorukid 15i infusioonide omandamise kriteeriumi alusel kiiremat ja suuremat omandamismäära kui täiskasvanutel (Joon. 2B; Fisheri täpne, kahe sabaga, p = 0.001). Lisaks ei suutnud 29% viimasest päevast täiskasvanute omandamiskriteeriume täita, mitte ainult noorukitel 5%. Seepärast said noorukid kokaiini eneseanalüüsi ja seda kiiremini omandada kui täiskasvanud.

Joonis 2. 

Kokaiini enda manustamise mudel mõõduka annuse (600 μg / kg infusiooni kohta) ajal ShA (1.5 h) ajal. A, Kohandamine kohordis, mida kasutatakse omandamiskriteeriumide kindlaksmääramiseks. Iga punkt esindab iga rühma keskmist ± SEM iga 1.5 h iseseisva istungi puhul. Inset, reprezentatiivsed infusiooniandmed nooruki ja täiskasvanud roti kohta 1.5 h-i iseseisva seansi ajal. B, Kokaiini iseseisvuse omandamise määr. Liinid esindavad rottide protsenti, kes vastavad omandamiskriteeriumidele. C, Ninapuude levik aktiivses augus kokaiini iseseisvuse omandamise ajal. Kõigi rottide ninahoogude arv ja kõik istungid on lõigatud 5i intervallidega. Baarid on aktiivsete aukude ninapostide arv iga konkreetse prügikasti vahel. Noored, n = 55; täiskasvanud, n = 58.

LgA.

Et tagada kokaiini tarbimise erinevuste seos ebapiisava proovivõtuajaga, võrdlesime ka noorukite ja täiskasvanud rottide omandamise käitumist LgA ajal kokaiini eneseanalüüsiga. Nagu Joonis 3 näitavad, et noorukitel on LgA protseduuril (6 h istungid) suurem täiskasvanute kokaiini tarbimine (vanusefekt, \ t F(1,19) = 25.45, p <0.001; seansi efekt, F(9,171) = 9.89, p <0.001; vanus × seansi interaktsioon, F(9,171) = 3.41, p <0.001).

Joonis 3. 

Kokaiini eneseanalüüsi omandamine mõõduka annusega (600 μg / kg infusiooni kohta) LgA ajal (6 h). Iga punkt esindab iga rühma keskmist ± SEM infusiooni igas 6 h isetöötlusseansis. Noored, n = 9; täiskasvanud, n = 12.

Katse 2: vanuse erinevused kokaiini eneseanalüüsi suurenemisel

Rühmade tarbimise võrdsustamiseks piirdus treeningute ajal, mis eelnesid eskalatsiooni testile, 15 – 20 infusiooni seansi kohta (Joon. 4A; vanusefekt, F(1,18) = 2.56, ns; seansi efekt, F(7,126) = 3.53, p <0.01; vanus × seansi interaktsioon, F(7,126) = 0.39, ns). Nende treeningute ajal olid noorukid 15 – 20i infusioonide saavutamisel kiiremad kui täiskasvanud.Joon. 4A, sisetald; t(20) = −2.92, p <0.01). Seejärel jaotati rotid ShA ja LgA rühmadesse, kusjuures treeningu ajal manustati sarnast annust ( F(1,18) = 0.006, ns; vanuse × grupi koostoime, F(1,18) = 0.12, ns).

Joonis 4. 

Kokaiini manustamise suurenemine mõõduka annusega (600 μg / kg infusiooni kohta). A, Piiratud treeningud, kus kõik rühmad piirdusid 15 – 20 infusioonide manustamisega iseseisvalt, iga kord kaks korda päevas 4 d jaoks, kusjuures iga seanss kestis maksimaalselt 3 h. Inset, 15 – 20 infusiooni jõudmiseks kuluv aeg (must baar, noorukid, valge baar, täiskasvanud). B, Sisselülitamine 6 h LgA seansside ajal. C, Sissevõtt 1.5 h jooksul ShA grupis ja esimese 1.5 h puhul LgA grupis. Iga punkt esindab iga rühma keskmist ± SEM infusiooni igas eneseanalüüsil. Noored LgA, n = 5; noorukid ShA, n = 5; täiskasvanud LgA, n = 6; ja täiskasvanud ShA, n = 6. *p <0.05; **p <0.01; ***p <0.001 võrreldes 1. päevaga.

Kõigepealt analüüsiti LgA gruppides tarbimist 6 h jooksul. Nagu Joonis 4B näitab, et noorukid võtsid rohkem kokaiini kui täiskasvanud (vanuse mõju, \ t F(1,9) = 12.27, p <0.01); tarbimine muutus aja jooksul (seansi efekt, F(11,99) = 6.76, p <0.001) ning aja jooksul muutus ka suhe vanuserühmade vahel (vanus × seansi interaktsioon, F(11,99) = 8.31, p <0.001). Tegelikult täheldati noorukitel kokaiini tarbimise suurenemist (noorukite seansiefekt, F(11,44) = 3.4, p <0.002), kuid mitte täiskasvanutel (seansi mõju täiskasvanutele, F(11,55) = 1.2, ns). Konkreetselt hakkas noorukite kokaiini tarbimine 4i seansi järel suurenema (p <0.05 võrreldes 1. seansiga) ja jätkas seejärel suurenemist (kõik p väärtused <0.01). Vastupidi, kokaiini tarbimine täiskasvanutel ei suurenenud kunagi (kõigi seansside vs seanss ns).

Seejärel võrreldi eskalatsiooni ShA ja LgA tingimustes, analüüsides iga seansi esimesest 1.5 h-st saadud roti mõlemast rottide rühmast (Ahmed ja Koob, 1998); seda tehti nii vanuse kui ka ligipääsutingimustega, mis olid ainevahetustegurite ja seansi vaheline kui üksikfaktor. Nagu Joonis 4C näitab taas, et noorukid võtsid rohkem kokaiini kui täiskasvanud (vanuse mõju, \ t F(1,18) = 13.04, p <0.001); tarbimine muutus aja jooksul (seansi efekt, F(11,99) = 3.54, p <0.001) ning aja jooksul muutus ka suhe vanuserühmade ja juurdepääsu tingimuste vahel (vanus × seansi interaktsioon, F(11,198) = 4.55, p <0.001; juurdepääsutingimus × seansi interaktsioon, F(11,198) = 1.84, p <0.05). Iga rühma hilisem analüüs (eraldatud vanuse ja juurdepääsutingimuste järgi) näitas seansi peamist mõju ainult noorukite rottidele LgA tingimustes (nooruki LgA, F(11,44) = 3.38, p <0.01; täiskasvanud LgA, F(11,55) = 1.20, ns; nooruk Sha, F(11,44) = 1.78, ns; täiskasvanu Sha, F(11,55) = 1.65, ns). Post hoc testid näitasid, et LgA-ga noorukitel on 8-i istungist saadav sissevõtt suurenenud võrreldes seansiga 1 (p <0.05). Seega, isegi kui kaaluti ainult esimest 1.5 tundi testimist, täheldati kokaiini tarbimise suurenemist LgA-ga noorukitel, kuid mitte ShA-ga noorukitel ega täiskasvanutel kas ShA või LgA tingimustes.

Katse 3: vanuse erinevused kokaiinitarbimises kui hinna funktsioon

As Joonis 5A näitab, et noorukid nakkusid suurte annustega (1200 μg / kg infusiooni kohta) rohkem kui täiskasvanuid. Aktiivse augu puhul suurenes vastus FR nõude (st hinna) suurenemise korral (suheefekt, F(4,68) = 15.55, p <0.001) ja seda esines rohkem noorukite kui täiskasvanute puhul (Joon. 5; vanusefekt, F(1,17) = 11.38, p <0.01; vanus × suhe, F(4,68) = 2.85, p <0.05). Eelkõige reageerisid noorukid kõrgemate hindadega rohkem kui täiskasvanud (FR6, p <0.01; FR12, p <0.05; ja FR24, p <0.05), kuid mitte madalate hindadega (FR1 ja FR3, ns). Mitteaktiivse augu reageerimine ei muutunud, kui suhe kasvas (suhte efekt, F(4,68) = 1.77, ns) kummaski vanuserühmas (vanusefekt, F(1,17) = 3.04, ns; vanuse ja suhtarvu suhtarv, F(4,68) = 0.41, ns). Aktiivse ja mitteaktiivse augu diskrimineerimine ilmnes tugevalt, kui suhe suurenes, kusjuures noorukitel esines diskrimineerimine varasemas etapis kui täiskasvanutel (aukude mõju, F(1,17) = 63.09, p <0.001; suhe × aukude vastastikune mõju, F(4,68) = 21.10, p <0.001; suhe × auk × vanuse vastastikune mõju, F(4,68) = 3.71, p <0.01). Täpsemalt diskrimineeriti noorukeid FR6, FR12 ja FR24 osas (p <0.05), samas kui täiskasvanud diskrimineerisid ainult FR12 ja FR24 (p <0.05).

Joonis 5. 

Kokaiini iseseisev manustamine (1200 μg / kg infusiooni kohta) hinna järgi. A, Kui palju on kokaiini hinna tõus, siis nina hüübimine, suurendades FR-i ravimi saamiseks. B, Kokaiini tarbimine (eneseanalüüside arv) kui hinna funktsioon (st suhe), joonistatud logaritmilisel skaalal ja sobib vastavalt eksponentsiaalse nõudluse võrrandile. Q0, Tarbimise tase madalaima hinnaga; α, kokaiininõudluse elastsus; Pmaxhind, millega käitumine nihutab elastsust elastsele. R2- kõvera sobivuse korrelatsioonikoefitsiendi ruut (st määramiskoefitsient). Iga punkt vastab iga rühma keskmisele ± SEM-väärtusele teisel päeval iga suhte kohta. Noored, n = 7; täiskasvanud, n = 12. *p <0.05; **p <0.01 võrreldes täiskasvanutega.

Analüüsime viisi, kuidas tarbimine (st enesevoolikute arv) varieerub sõltuvalt hinnast (st suhtest), sobitades andmed eksponentsiaalse nõudluskõveraga, mille on loonud Hursh ja Silberberg (2008). Nii noorukite kui ka täiskasvanute andmed sobivad hästi kõveraga (R2 = 0.94 noorukitel; R2 = 0.96 täiskasvanutele) ja nende kõverate väärtused on näidatud Joonis 5B. Q0 (maksimaalne tarbimine madalaima hinnaga) oli vanuses sarnane (F(1,5) = 0.001, ns). Tarbimine vähenes hinna sõltuvalt ja vähenemine oli noorukitel väiksem kui täiskasvanutel. See tähendab, et noorukitel oli väiksem α kui täiskasvanutel (F(1,5) = 10.45, p <0.05), mis näitab, et nõudlus oli noorukitel elastsem kui täiskasvanutel.

Katse 4: vanuse erinevused kokaiini ja selle metaboliitide tasemel ajus

Noorukitel oli veres madalam kokaiini tase (923.24 ± 67.32 vs 1119.73 ± 66.94 ng / ml, \ t t(9) = −2.05, p = 0.070), kuid mitte ajus (5135.20 ± 281.25 vs 6947.00 ± 971.28 ng / g, t(9) = −1.64, ns). Samuti oli tendents, et noorukitel on madalam kokaiini metaboliidi bensoüülekgoniini tase veres (754.72 ± 81.09 vs 1086.70 ± 133.07 ng / ml, t(9) = −2.02, p = 0.074) ja ajus (123.30 ± 13.80 vs 184.38 ± 25.15 ng / g, t(9) = −2.00, p = 0.076). Kokaiini metaboliidi ecgonine-metüülestri sisalduses veres ei täheldatud olulisi vanuse erinevusi (105.84 ± 5.08 vs 87.27 ± 9.48 ng / ml, t(9) = 1.62, ns) või aju (138.54 ± 9.62 vs 146.44 ± 5.36 ng / g, U(11) = 14.00, Z = −0.09, ns). Samuti puudusid erinevused metaboliidis norokaiinis veres (8.28 ± 0.96 vs 11.77 ± 1.72, t(9) = −1.67, ns). Norokokaiini tasemed ajus olid enamikus proovides tuvastamatud (andmeid ei ole näidatud).

In vivo VTA neuronite rakuväline salvestamine

Suhteliselt täiskasvanutega esines noorukitel kõrgemaid VTA dopamiini neuronite põlemiskiirusi ∼1 Hz (∼24%) (Joon. 6A; t(41) = 2.33; p <0.05). Lõhkemise hulk oli vanuse lõikes sarnane. Seda mõõdeti purskena eralduvate piikide protsendina (Joon. 6A; t(41) = 0.30; ns) ja lõhkemiste esinemissagedus (0.46 ± 0.08 vs 0.51 ± 0.09 Hz, t(41) = −0.40; ns). Kuid noorukitel esinesid suuremad lõhkemised kui täiskasvanutel, rohkem lööke lõhkemise kohta (Joon. 6A; t(41) = 2.28; p <0.05) ja pikema sarivõtte kestuse suundumus (256.76 ± 35.12 vs 157.60 ± 33.40 ms, t(47) = 2.01, p = 0.051). Nagu Joonis 6B näitab, et VTA pindala, mis oli valimisse võetud, oli võrreldav vanuse \ t F(1,41) = 2.71, ns; vanuse × struktuuri koostoime, F(2,82) = 0.28, ns). Koordinaadid (millimeetrites) noorukite ja täiskasvanute vahel olid järgmised: anteroposterior, 3.57 ± 0.04 vs 3.66 ± 0.05; mediolateraalne, 0.84 ± 0.05 vs 0.97 ± 0.07; dorsoventral, 7.79 ± 0.05 vs 7.84 ± 0.04. Tulemused olid sarnased, kui analüüsiti ainult viimati registreeritud rohelist värvi märgistatud rakku (andmeid ei ole näidatud).

Joonis 6. 

ADopamiini neuronite aktiivsus. Vasakpoolne, põlemiskiirus; keskmised lõhkemised (protsentides); paremale, naelu lõhkemise kohta. Iga vertikaalne riba kujutab iga rühma keskmist ± SEM. Noored, n 24 rottide 11 rakud; täiskasvanud, n 19 rottide 11 rakud. *p <0.05 võrreldes täiskasvanutega. B, VTA-s sisalduvate dopamiini neuronite asukoht. Asukohad (millimeetrites) on lambda (AP) anteroposterior, keskjooneline keskjoon (ML) ja dorsoventral cortexi pinnalt (DV). Iga ring / ruut kujutab ühe dopamiini neuroni asukohta. C, Esindavad histoloogilised pildid rakkudest, mida kujutavad ruudud B. Elektroodide paigutamine on tähistatud musta noolega. Must joon on võrdlusmärgis ja on osa mikroskoobi okulaarsest tükist.

Dopamiini neuronite aktiivsust modifitseerivate ravimite mõju kokaiini eneseanalüüsile

Testisime dopamiini neuronite aktiivsuse ja iseseisva manustamise suhet dopamiini neuronite aktiivsuse farmakoloogiliselt modifitseerides ja uurides selle mõju kokaiini enda manustamisele mõõduka annuse (600 μg / kg infusiooni kohta) suhtes. Quinpirole, a D2 retseptori agonisti, kasutati neuronite aktiivsuse vähendamiseks ja etiklopriid, a D2 neuronite aktiivsuse suurendamiseks (Marinelli jt, 2003). Rotid treeniti esmalt FR1-iga 2 d jaoks (andmeid ei ole näidatud); siis koolitati neid FR3is 4i lisapäevadeks. Seejärel jagati rotid kolme sarnase kokaiini tarbimisega rühma (ravimi toime, \ t F(2,61) = 2.08, ns), mis pidid saama soolalahust, kinpirooli (0.2 μg / kg, sc) või etiklopriidi (0.2 μg / kg, sc). Nagu näidatud Joonis 7, eeltöötluse ajal säilitati noorukite ja täiskasvanute erinevused kokaiini tarbimises kõigis rühmades (vanuse mõju, F(1,61) = 31.08, p <0.001; ravimi toime, F(2,61) = 2.08, ns; vanus × ravimite koostoime, F(2,61) = 1.68, ns). Seejärel võrdlesime käitumist enne (eeltöötlemine, 3i keskmine enne ravi) ja pärast ravi (järeltöötlus). Seda tehti kasutades ajahetke (pre-post) kui subjektifaktorit ja -ealist (noorukid vs täiskasvanud) ja ravimit (soolalahus, kinpirool, etiklopriid) subjektide vahel. Käitumine muutus vastavalt manustatud ravimile (ravimi × ajahetke koostoime: F(2,61) = 14,43, p <0.001) ja katsealuste vanus (vanus × aja-punkti interaktsioon, F(1,61) = 11.96, p <0.001; vanus × ravim × aja-punkti interaktsioon, F(2,61) = 6.84, p <0.01). Konkreetselt ei mõjutanud soolalahuse ravi kummalegi vanuserühmale nii, et noorukitel oli kokaiini tarbimine suurem kui täiskasvanutel (ravijärgselt, noorukitel ja p <0.05; eeltöötlus vs järeltöötlus, ns). Kininool vähendas noorukite kokaiini tarbimist, muutes noorukid täiskasvanute laadseteks (järeltöötluseks, noorukid vs täiskasvanud, ns; noorukite eeltöötlus vs noorukite järeltöötlus, p <0.05). Etiklopriid suurendas kokaiini tarbimist täiskasvanutel, muutes nad “nooruki sarnasteks” (ravi järgselt: noorukid vs täiskasvanud, ns; täiskasvanute eeltöötlus vs täiskasvanute järeltöötlus, p <0.001). Selle tagamiseks, et kininooli mõju ei oleks noorukite kõrge algtaseme (kininolioolieelne) käitumine, kordasime oma analüüsi pärast kolme nooruki roti väljaarvamist, kelle algannus oli selles rühmas kõrge. Tulemused olid sarnased isegi nende rottide eemaldamisel (andmeid ei näidata).

Joonis 7. 

Kokaiini manustamine mõõduka annusega (600 μg / kg infusiooni kohta) enne (Pre) ja pärast (pärast) manustamist ravimitele, mis muudavad dopamiini neuronite aktiivsust. Iga vertikaalne riba kujutab iga rühma keskmist ± SEM infusiooni / 1.5 h. Eelväärtused on 3 d jooksul enne ravimi manustamist keskmised. Postiväärtused on kohe pärast ravimi manustamist. Noored, n = 11, 12 ja 11 soolalahuse, kinpirooli ja etiklopriidi jaoks; täiskasvanud, n = 11 igas rühmas. *p <0.05; ***p <0.001 võrreldes täiskasvanutega. #p <0.05; # # #p <0.001 võrreldes Pre.

Arutelu

Meie tulemused näitavad, et täiskasvanutega võrreldes näitavad noorukid suuremat kokaiini tarbimist, saavad kiiremini kokaiini enda manustamist, näitavad kokaiini tarbimise suurenemist, töötavad narkootikumide kallal ja on tundlikumad hinnatõusu suhtes (st ei ole elastsed) . Peale selle seostati kõrgema kokaiini iseenesest manustamisega VTA dopamiini neuronite kõrgendatud aktiivsust ja seda saab muuta kinopirooliga, mis on nende neuronite aktiivsust pärssiv ravim.

Võrreldes täiskasvanutega näitasid noorukid suuremat kokaiini tarbimist väikese kuni mõõduka annuse korral (150 – 600 μg / kg infusiooni kohta). Suuremat kokaiini tarbimist täheldati, kui rottidele anti kokaiini kas ShA või LgA, mis viitab sellele, et erinevus noorukite ja täiskasvanute vahel ei olnud ebapiisav proovivõtmise aeg. Meie tulemused on kooskõlas kahe uuringuga, mis näitavad, et noorukid annavad mõõdukalt väikese annuse korral ise rohkem kokaiini kui täiskasvanutel [400 μg / kg infusiooni kohta (Anker ja Carroll, 2010)] või mõõdukalt kõrge annus [800 μg / kg infusiooni kohta (Schramm-Sapyta jt, 2011)]. Laiendasime seda tööd suurema hulga annustega, mis võimaldab meil kindlaks teha, et noorukid on kokaiini suhtes tundlikumad kui täiskasvanud. Kokaiini tarbimise omandamist sarnaste vähese mõõdukate annustega saab kasutada kokaiini rahuldava toime suhtes tundlikkuse erinevuse testimiseks (Piazza et al., 1989).

Käitumuslikud erinevused olid spetsiifilised kokaiinile, sest soolalahuse reageerimisel ei olnud vanuse erinevusi. Samamoodi ei täheldatud erinevusi väga väikese koguse kokaiini puhul (75 μg / kg infusiooni kohta), mis võib olla väiksem kui rottidel iseenesest manustamiseks. Suure annuse korral (1200 μg / kg infusiooni kohta) ei erinenud noorukid ja täiskasvanud kokaiini tarbimisest. Seda eeldati, sest selliste suurte annuste puhul ei täheldatud erinevusi ravimite tundlikkuses (Piazza et al., 2000). See leid on kooskõlas ka uuringutega, mis ei näidanud suuremat tarbimist noorukitel võrreldes kõrgete kokaiini annustega (Kantak et al., 2007; Kerstetter ja Kantak, 2007).

Inimestel soovitatakse puberteedi tekkimisel langeda kokku aine kuritarvitamise algus (Patton et al., 2004). Siinkohal leiti, et kokaiini iseseisva manustamise suurenemine toimus ainult noorukitel, kus puberteed oli toimunud, mitte varem. See toob esile postpubertaalse noorukiea kui haavatava “akna” kokaiinisõltuvuse jaoks. See võib aidata selgitada, miks mõnedes nooremate noorukite rottides läbiviidud uuringutes ei leitud noorukite ja täiskasvanute vahelisi erinevusi (Leslie et al., 2004; Belluzzi jt, 2005; Frantz et al., 2007; Kantak et al., 2007; Kerstetter ja Kantak, 2007; Harvey et al., 2009; Li ja Frantz, 2009). Eksperimentaalsete manipulatsioonide erinevused võivad mõjutada ka teisi lahknevusi. Näiteks kaks uuringut, mis ei leidnud erinevusi noorukite ja täiskasvanute kokaiini tarbimisel (Leslie et al., 2004; Belluzzi jt, 2005) teostati mitte-aktiivse, mitte aktiivse, valguse / pimeduse tsükli faasi ajal. Lisaks paigutati ülalmainitud uuringutes rottidele üksinda selle asemel, et grupp paikneks. Me otsustasime rühmitada noorukite rottide rühma, sest noorukil on iseloomulik tugev ühiskondlik koostoime ja mängukäitumine (Sõrm ja pidur, 1983; Vanderschuren et al., 1997; Douglas et al., 2004). Teine oluline tegur võib olla võõrutamise vanus, mis mõjutab katsetulemusi (Wiley ja Evans, 2009). Kaubanduslike müüjate kaudu ostetud rotid võõrutatakse igal ajal P17ist P24i (Harlan) või P19i P23i (Charles River). Me nõudsime, et võõrutussündmused toimuksid täpselt P21'il, et vältida võõrutamise varieeruvuse soovimatut mõju.

Kokaiini tarbimine suurenes postpubertaalsetes noorukites, kuid mitte täiskasvanutel. Eskalatsioon kujutab endast sõltuvuses esinevat nähtust, kui uimastitarbimise üleminekud püsivalt liigsele kasutamisele (Ahmed, 2011). Selline käitumine on uimastisõltuvuse marker vastavalt vaimse häire diagnostilisele ja statistilisele käsiraamatule, IV väljaanne (American Psychiatric Association 2000). Seega on suurem sõltuvus vastutusest suurem näitaja noorukitel kui täiskasvanutel. Vastavalt sellele näitas hiljutine uuring, et noorukid, kuid mitte täiskasvanud, suurendasid kokaiini või metamfetamiini tarbimist (Anker jt, 2012; Zlebnik jt, 2012). On mitmeid põhjuseid, miks me täiskasvanutel eskalatsiooni ei täheldanud. Kõige tõenäolisem tegur on see, et pikad (N10 d) koolitused on vajalikud laienemise edasiseks arendamiseks (Ahmed et al., 2000; Knackstedt ja Kalivas, 2007; Ahmed, 2011). Arvestades noorukiea piiratud kestust, piirdusime lühikoolitusega (4 d), mis võis takistada täiskasvanute eskalatsiooni. Peale selle on eskalatsioon tüve- ja alamjoonest sõltuv (Freeman et al., 2009; Picetti et al., 2010); see on jõuline Long-Evansis (Quadros ja Miczek, 2009), Wistar (Ahmed ja Koob, 1998) ja Harlalt ostetud Sprague Dawley rotid (Ferrario et al., 2005; Mantsch et al., 2008), kuid tundub vähem jõuline Sprague Dawley rottidel, mis on ostetud Charles Riverilt (\ tKnackstedt ja Kalivas, 2007; Kelamangalath ja Wagner, 2010), mida me selles uuringus kasutasime.

Teine sõltuvuse tunnus on, et narkomaanid kulutavad narkootikumide saamiseks palju aega ja vaeva (American Psychiatric Association 2000) ja et nende tarbimine ei ole hinnatõusu suhtes \ tBickel et al., 2011). Me modelleerisime seda, mõõtes töötavate rottide kogust, et saada kokaiini järk-järgulise suurenemise tõttu (Griffiths et al., 1978; Risner ja Silcox, 1981). Samuti hindasime viisi, kuidas tarbimine sõltub hinna funktsioonist, sobitades meie andmed eksponentsiaalse nõudluskõveraga (Bickel et al., 2000; Hursh ja Silberberg, 2008). Meie uuringud näitavad, et postpubertaalsed noorukid töötasid kokaiini saamiseks rohkem kui täiskasvanud. Lisaks oli nende kokaiinitarbimine hinnatõusu suhtes vähem tundlik (st nende käitumine oli paindumatu). Need tulemused viitavad üheskoos sellele, et noorukitel on sõltuvuse käitumuslikud tunnused.

Millised on mehhanismid, mis toetavad noorukite sõltuvuse suurenemist? Noorte aju läbivad ulatuslikud organisatsioonilised ja funktsionaalsed muutused, sealhulgas muutused mesolimbilise dopamiini süsteemis (Andersen et al., 1997; Spear, 2000; Wahlstrom et al., 2010). Oleme varem näidanud, et VTA dopamiini neuronite aktiivsus on noorukieas (McCutcheon ja Marinelli, 2009; McCutcheon et al., 2012). Siinkohal replikeerisime need tulemused rottide erineva alamjooksu abil (Crl: Sprague Dawley Charles Riverilt praeguses uuringus vs Hsd: Sprague Dawley Harlanist eelmises uuringus); leiti, et dopamiini neuronite aktiivsus noorukitel on ∼24% kõrgem kui aktiivsus täiskasvanutel. Teises sõltuvuse haavatavuse mudelis - kõrge vastajaga ja madala ravivastusega rottidel - ilmnes, et sarnane dopamiini neuronite aktiivsuse suurenemine on seotud suurenenud eneseanalüüsi käitumisega (Marinelli ja valge, 2000; McCutcheon et al., 2009). Selline dopamiinisüsteemi suurenenud aktiivsus võib soodustada noorukite narkootikumide kuritarvitamist (Doremus-Fitzwater jt, 2010). Püüdsime leida põhjusliku seose ravimi tarbimise ja dopamiini neuronite aktiivsuse vahel, manipuleerides dopamiini neuronite aktiivsusega kas D-ga2 aktiivsust või antagonisti, et suurendada aktiivsust. Nende ravimite manustamisel pöördusime kokaiini tarbimise vanuse erinevustesse, mis viitab sellele, et käitumuslikud erinevused sõltusid dopamiini neuronite aktiivsusest. See viitab põhjuslikule seosele meie neurofüsioloogiliste ja käitumuslike leidude vahel ja avastab võimaliku terapeutiliste sihtmärkide mehhanismi. Farmakoloogiliste toimeainete süstemaatilisel manustamisel võib olla lõkse; aga valisime autoretseptori selektiivse annuse, mis toimib tsentraalselt dopamiini neuronite kehades (Pucak ja Grace, 1991). Valitud annus on võrreldav annustega, mida me ja teised kasutavad dopamiini neuronite põletamise, dopamiini vabanemise ja käitumise muutmiseks.Robertson et al., 1993; Marinelli jt, 2003; Zeeb et al., 2009). On ebatõenäoline, et kinpirooli annus kasutas oluliselt aktiveeritud postsünaptilist D2klassi retseptorid, kuna nende retseptorite aktiveerimine suurendab, mitte väheneb, ravimi tarbimist (Howell et al., 1997).

Mõned uuringud näitavad, et pärast intraperitoneaalset või intravenoosset manustamist on kokaiini tase ajus noorukite ja täiskasvanute puhul sarnane.Caster et al., 2005; Frantz et al., 2007; Schramm-Sapyta jt, 2011). Meie tulemused näitavad, et kokaiini ja kokaiini metaboliitide tase on noorukitel veidi väiksem kui täiskasvanutel. Siiski on ebatõenäoline, et erinevused kokaiini tasemes või ainevahetuses annavad noorukitele suurema kokaiini tarbimise. Suhteliselt täiskasvanutega näitasid noorukid suurema koguse kokaiini tarbimist, kui ravimi ostmise hind tõusis, kuid neil oli sarnane tarbimine madala hinnaga (FR1). Kokaiini tarbimise ainevahetusega seotud kompenseerivat suurenemist oleks täheldatud nii madala kui kõrge hinnaga.

Kognitiivsete ja käitumuslike meetmete küpsemisega seotud muutused võivad osaleda ka vanusepõhistes erinevustes kokaiini enesesüsteemis. Noori peetakse „riskide võtjateks” ning nad näitavad suuremat eelistust ja uudsete keskkondade uurimist kui täiskasvanud (Douglas et al., 2003; Stansfield ja Kirstein, 2006). On oletatud, et noorukite riskide võtmine tuleneb uudsuse ja tunnetuse otsimise (mis suureneb noorukieas) ja isereguleerimise vahel (mis küpseb täiskasvanueas) (Steinberg, 2004). Samamoodi veenvad tõendid näitavad, et inhibeeriva kontrolli täpsustamine loomade küpsuse tõttu võib selgitada vähendatud riskikäitumist (Ridderinkhof ja van der Molen, 1997; Geier et al., 2010) ja suurema käitumise inhibeerimise (\ tSturman et al., 2010; Andrzejewski et al., 2011) täiskasvanueas kui noorukieas. Kuigi me neid omadusi ei testinud, võivad need tegurid aidata kaasa noorukite kõrgendatud sõltuvuse riskile.

Meie tulemused näitavad koos, et postpubertaalsed noorukid on kokaiini sõltuvust tekitavate omaduste suhtes täiskasvanutest tundlikumad. Lisaks seostatakse seda kõrgendatud sõltuvuskohustust noorukieas seoses VTA dopamiini neuronite kõrgendatud aktiivsusega ja seda saab tühistada ravimi abil, mis pärsib nende neuronite aktiivsust. Seetõttu annavad meie leiud ülevaate noorukite sõltuvuskohustuste neuroloogilistest mehhanismidest, tuues esile dopamiini neuronid sõltuvuse riski võtmeelemendina. Meie tulemused näitavad ka, et suurenenud tundlikkus kokaiinisõltuvuse suhtes on noorukite neurobioloogia tulemus ja seda saab tõendada väliste sotsiaalsete ja majanduslike mõjude puudumisel. Seetõttu tuleks noorteeas bioloogiliste riskitegurite sihtmärgiks olevate terapeutiliste strateegiate puhul esmatähtsaks pidada, sest noorukieas on selline tugev vastuvõtlikkus sõltuvust tekitavale käitumisele.

Allmärkused

  • Saadud märtsis 8, 2012.
  • Läbivaatamine sai detsember 28, 2012.
  • Aktsepteeritud jaanuar 26, 2013.

  • Seda tööd toetasid riiklikud tervishoiuinstituudid R01DA020654. Täname Mitch Bealesi ja Lorissa Lamoureux'd tehnilise abi eest, dr Serge Ahmedi kasuliku panuse eest eskalatsiooniprotseduuridesse ja dr Robert Messingile selle käsikirja kohta kasulikke kommentaare. Täname Dr. Dave Moody'd ja Utah'i Ülikooli inimtoksikoloogia keskuse personali, et analüüsida aju kokaiini taset N01DA-9-7767i riikliku narkootikumide kuritarvitamise lepingu toetusel. Täname dr Pete Roma käitumisressursside instituutide eest (www.ibrinc.org) nõuannete saamiseks andmete analüüsimisel, kasutades eksponentset nõudluse mudelit.

  • Autorid ei deklareeri konkureerivaid finantshuve.

  • Kirjavahetus peaks olema adresseeritud Michela Marinellile, rakulise ja molekulaarse farmakoloogia osakonnale, Rosalind Franklini meditsiini- ja teadusülikoolile, Chicago meditsiinikoolile, 3333 Green Bay Roadile, Põhja-Chicago, IL 60064ile. [meiliga kaitstud]

viited

  1. ↵
    1. Ahmed S

    (2011) narkomaania loomamudelites, neuromeetodid, uimastitarbimise eskalatsioon, ed Olmstead M (Humana, New York).

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Üleminek mõõduka kuni ülemäärase ravimi tarbimisest: muutus hedoonilises kontrollpunktis. teadus 282: 298 - 300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Heroiini võtmise motivatsiooni püsiv suurenemine rottidel, kellel on esinenud ravimi eskalatsiooni. Neuropsychopharmacology 22: 413 - 421.

  4. ↵
    1. Ameerika Psühhiaatrite Assotsiatsiooni

    (2000) Vaimse häire diagnostiline ja statistiline käsiraamat (American Psychiatric Association, Washington, DC) Tekstiversiooni väljaanne, Ed 4.

  5. ↵
    1. Andersen SL,
    2. Rutstein M,
    3. Benzo JM,
    4. Hostetter JC,
    5. Teicher MH

    (1997) Soolised erinevused dopamiiniretseptori üleproduktsioonis ja eliminatsioonis. Neuroreport 8: 1495 - 1498.

  6. ↵
    1. Andrzejewski ME,
    2. Schochet TL,
    3. Feit EC,
    4. Harris R,
    5. McKee BL,
    6. Kelley AE

    (2011) Täiskasvanud ja noorukite rottide käitumise võrdlus operandi õppimise, väljasuremise ja käitumise inhibeerimise paradigmades. Behav Neurosci 125: 93 - 105.

  7. ↵
    1. Anker JJ,
    2. Carroll ME

    (2010) Uimastitest, vihjetest ja stressist tingitud kokaiini otsimise taastamine noorukitel ja täiskasvanud rottidel. Psühhofarmakoloogia (Berl) 208: 211 - 222.

  8. ↵
    1. Anker JJ,
    2. Baron TR,
    3. Zlebnik NE,
    4. Carroll ME

    (2012) Metamfetamiini enese manustamise suurenemine noorukitel ja täiskasvanud rottidel. Narkootikumide alkohol sõltub 124: 149 - 153.

  9. ↵
    1. Anthony JC
    2. Petronis KR

    (1995) Varajane ravimi kasutamine ja hilisemate ravimiprobleemide oht. Narkootikumide alkohol sõltub 40: 9 - 15.

  10. ↵
    1. Belluzzi JD,
    2. Wang R,
    3. Leslie FM

    (2005) Atsetaldehüüd parandab nikotiini omastamist noorukitel. Neuropsychopharmacology 30: 705 - 712.

  11. ↵
    1. Bickel WK,
    2. Marsch LA
    3. Carroll ME

    (2000) Dekonstrueerimine suhtelise tugevdava efektiivsuse ja farmakoloogilise tugevdamise mõõtmise abil käitumusliku majandusega: teoreetiline ettepanek. Psühhofarmakoloogia (Berl) 153: 44 - 56.

  12. ↵
    1. Bickel WK,
    2. Jarmolowicz DP,
    3. Mueller ET,
    4. Gatchalian KM

    (2011) Ennustajate patoloogiate käitumuslik majandus ja neuroökonoomika: mõju sõltuvuse etioloogiale ja ravile. Curr Psychiatry Rep 13: 406 - 415.

  13. ↵
    1. Bunney BS,
    2. Walters JR,
    3. Roth RH,
    4. Aghajanian GK

    (1973) Dopamiinergilised neuronid: antipsühhootiliste ravimite ja amfetamiini toime ühekordse raku aktiivsusele. J. Pharmacol Exp Ther 185: 560 - 571.

  14. ↵
    1. Cassidy RN,
    2. Dallery J

    (2012) Majandustüübi ja nikotiini mõju toidule olulisele väärtusele rottidel. J Exp Anal Behav 97: 183 - 202.

  15. ↵
    1. Ratas-JM,
    2. Walker QD,
    3. Kuhn CM

    (2005) Noorte rottide korduvdoosi kokaiini paranenud käitumuslik vastus. Psühhofarmakoloogia (Berl) 183: 218 - 225.

  16. ↵
    1. Chambers RA,
    2. Taylor JR,
    3. Potenza MN

    (2003) Noorte motivatsiooni arenev neurokircuit: sõltuvuse haavatavuse kriitiline periood. Olen J psühhiaatria 160: 1041 - 1052.

  17. ↵
    1. Chen CY,
    2. Storr CL,
    3. Anthony JC

    (2009) Varajane ravimi kasutamine ja narkomaania probleemide oht. Addict Behav 34: 319 - 322.

  18. ↵
    1. Doremus TL,
    2. Brunell SC,
    3. Rajendran P,
    4. Spear LP

    (2005) Tegurid, mis mõjutavad kõrgenenud etanooli tarbimist noorukitel võrreldes täiskasvanud rottidega. Alkohol Clin Exp Res 29: 1796 - 1808.

  19. ↵
    1. Doremus-Fitzwater TL,
    2. Varlinskaya EI,
    3. Spear LP

    (2010) Motivatsioonisüsteemid noorukieas: võimalikud tagajärjed vanuseliste erinevuste korral uimastite kuritarvitamisel ja muudel riskikäitumistel. Aju Cogn 72: 114 - 123.

  20. ↵
    1. Douglas LA
    2. Varlinskaya EI,
    3. Spear LP

    (2003) Uue objekti objektide konditsioneerimine noorukitel ja täiskasvanud isastel ja emastel rottidel: sotsiaalse isolatsiooni mõju. Physiol Behav 80: 317 - 325.

  21. ↵
    1. Douglas LA
    2. Varlinskaya EI,
    3. Spear LP

    (2004) Noorte ja täiskasvanud meessoost ja naissoost rottide sotsiaalse koostoime tunnustamine: isikute ja partnerite sotsiaalse ja isoleeritud eluaseme mõju. Dev Psychobiol 45: 153 - 162.

  22. ↵
    1. Ferrario CR,
    2. Gorny G,
    3. Crombag HS,
    4. Li Y,
    5. Kolb B,
    6. Robinson TE

    (2005) Neuraalne ja käitumuslik plastiilsus, mis on seotud üleminekuga kontrollitud võimendunud kokaiinitarbimisest. Biol Psychiatry 58: 751 - 759.

  23. ↵
    1. Frantz KJ,
    2. O'Dell LE,
    3. Parsons LH

    (2007) Käitumuslikud ja neurokeemilised reaktsioonid kokaiinile periadoolsetes ja täiskasvanud rottides. Neuropsychopharmacology 32: 625 - 637.

  24. ↵
    1. Freeman KB,
    2. Kearnsi DN,
    3. Kohut SJ,
    4. Riley AL

    (2009) Tüve erinevused ravimi tarbimise mustrites pikaajaline juurdepääs kokaiini omale manustamisele. Behav Neurosci 123: 156 - 164.

  25. ↵
    1. Geier CF,
    2. Terwilliger R
    3. Teslovich T,
    4. Velanova K,
    5. Luna B

    (2010) Ebatäpsused tasu töötlemisel ja selle mõju inhibeerivale kontrollile noorukieas. Cereb Cortex 20: 1613 - 1629.

  26. ↵
    1. Grace AA,
    2. Bunney BS

    (1983) Nigraalsete dopamiinergiliste neuronite intratsellulaarne ja ekstratsellulaarne elektrofüsioloogia. 1. Identifitseerimine ja iseloomustamine. Neuroscience 10: 301 - 315.

  27. ↵
    1. Grace AA,
    2. Bunney BS

    (1984) Põlemismustri kontroll nigraalsetes dopamiini neuronites: ühekordne piik. J Neurosci 4: 2866 - 2876.

  28. ↵
    1. Griffiths RR,
    2. Brady JV,
    3. Snell JD

    (1978) Progressiivne suhe ravimi infusioonidega: kokaiini, dietüülpropioni, klorentermiini ja fenfluramiini võrdlus. Psühhofarmakoloogia (Berl) 56: 5 - 13.

  29. ↵
    1. Harvey RC,
    2. Dembro KA,
    3. Rajagopalan K,
    4. Mutebi MM,
    5. Kantak KM

    (2009) Iseseisvalt manustatud kokaiini mõju noorukitele ja täiskasvanud isastele rottidele orbitofrontaalse kortexiga seotud neurokognitiivse funktsioneerimise suhtes. Psühhofarmakoloogia (Berl) 206: 61 - 71.

  30. ↵
    1. Howell LL,
    2. Czoty PW,
    3. Byrd LD

    (1997) Farmakoloogilised koostoimed serotoniini ja dopamiini vahel käitumises orav ahv. Psühhofarmakoloogia (Berl) 131: 40 - 48.

  31. ↵
    1. Hursh SR

    (1993) Ravimi eneseanalüüsi käitumuslik majandus: sissejuhatus. Narkootikumide alkohol sõltub 33: 165 - 172.

  32. ↵
    1. Hursh SR,
    2. Roma PG

    (2013) Käitumusmajandus ja keiserlik avalik poliitika. J Exp Anal Behav 99: 98 - 124.

  33. ↵
    1. Hursh SR,
    2. Silberberg A

    (2008) Majanduslik nõudlus ja oluline väärtus. Psychol Rev 115: 186 - 198.

  34. ↵
    1. Johnston LD,
    2. O'Malley peaminister
    3. Bachman JG,
    4. Schulenberg JE

    (2011) Noorte narkootikumide kasutamise tulevaste riiklike tulemuste jälgimine: ülevaade peamistest tähelepanekutest, 2010 (Sotsiaaluuringute Instituut, Michigani Ülikool, Ann Arbor, MI).

  35. ↵
    1. Kandel DB,
    2. Yamaguchi K,
    3. Chen K

    (1992) Ravimi kaasamise etapid noorukieas kuni täiskasvanueani: täiendavad tõendid lüüsi teooria kohta. J Stud Alcohol 53: 447 - 457.

  36. ↵
    1. Kantak KM,
    2. Goodrich CM,
    3. Uribe V

    (2007) Sugu, öise tsükli ja ravimi tekkimise vanuse mõju kokaiini eneses manustamisele rottidel (Rattus norvegicus) Exp Clin Psychopharmacol 15: 37 - 47.

  37. ↵
    1. Kelamangalath L,
    2. Wagner JJ

    (2010) D-seriinravi vähendab kokaiiniga alustatud taastamist rottidel pärast laiemat juurdepääsu kokaiini omale manustamisele. Neuroscience 169: 1127 - 1135.

  38. ↵
    1. Kerstetter KA,
    2. Kantak KM

    (2007) Enda manustatava kokaiini diferentsiaalne mõju noorukitel ja täiskasvanud rottidel stimuleeriva tasu õppimisel. Psühhofarmakoloogia (Berl) 194: 403 - 411.

  39. ↵
    1. Knackstedt LA
    2. Kalivas PW

    (2007) Laienenud juurdepääs kokaiini eneseanalüüsile suurendab ravimi esmakordset taastamist, kuid mitte käitumuslikku sensibiliseerimist. J. Pharmacol Exp Ther 322: 1103 - 1109.

  40. ↵
    1. Kolho KL,
    2. Nikula H,
    3. Huhtaniemi I

    (1988) Gonadotropiini vabastava hormooni antagonistiga ravitud isaste rottide seksuaalne küpsemine. J Endocrinol 116: 241 - 246.

  41. ↵
    1. Leslie FM,
    2. Loughlin SE,
    3. Wang R,
    4. Perez L,
    5. Lotfipour S,
    6. Belluzzia JD

    (2004) Noorukite eesnäärme stimulantide reageerimisvõime: loomauuringutest saadud teadmised. Ann NY Acad Sci 1021: 148 - 159.

  42. ↵
    1. Levin ED,
    2. Lawrence SS,
    3. Petro A,
    4. Horton K,
    5. Rezvani AH,
    6. Seidler FJ,
    7. Slotkin TA

    (2007) Noorte ja täiskasvanu-algusega nikotiini iseseisev manustamine isastel rottidel: toime kestus ja diferentsiaalne nikotiiniretseptor korreleeruvad. Neurotoxicol Teratol 29: 458 - 465.

  43. ↵
    1. Li C,
    2. Frantz KJ

    (2009) Kokaiini nõrgestatud inkubeerimine, et leida isasrottidele, kes on koolitatud periadolesentsuse ajal iseenesest manustama kokaiini. Psühhofarmakoloogia (Berl) 204: 725 - 733.

  44. ↵
    1. Lin SN,
    2. Moody DE,
    3. Bigelow GE,
    4. Foltz RL

    (2001) Valideeritud vedelikkromatograafia-atmosfäärirõhu keemiline ionisatsioon-tandem massispektromeetria meetod kokaiini ja bensoüülekgoniini kvantitatiivseks määramiseks inimese plasmas. J Anal Toxicol 25: 497 - 503.

  45. ↵
    1. Lin SN,
    2. Walsh SL,
    3. Moody DE,
    4. Foltz RL

    (2003) Kokaiini N-oksiidi ja teiste kokaiini metaboliitide avastamine ja ajakava inimese plasmas kromatograafia / tandem-massispektromeetria abil. Anal Chem 75: 4335 - 4340.

  46. ↵
    1. Lynch WJ,
    2. Carroll ME

    (2001) Ravimi tarbimise reguleerimine. Exp Clin Psychopharmacol 9: 131 - 143.

  47. ↵
    1. Mantsch JR,
    2. Yuferov V,
    3. Mathieu-Kia AM,
    4. Ho A,
    5. Kreek MJ

    (2004) Kõrge ja madala kokaiini annuse laiendatud kättesaadavuse mõju iseenesele manustamisele, kokaiiniga indutseeritud taastumisele ja aju mRNA tasemele rottidel. Psühhofarmakoloogia (Berl) 175: 26 - 36.

  48. ↵
    1. Mantsch JR,
    2. Baker DA,
    3. Francis DM,
    4. Katz ES,
    5. Hoks MA,
    6. Serge JP

    (2008) Stressor- ja kortikotropiini vabastava faktoriga indutseeritud taastamine ja aktiivsed stressiga seotud käitumuslikud reaktsioonid suurenevad pärast pikaajalist kokaiini omastamist rottidel. Psühhofarmakoloogia (Berl) 195: 591 - 603.

  49. ↵
    1. Marinelli M,
    2. Valge FJ

    (2000) Suurenenud haavatavus kokaiini eneseanalüüsiga on seotud keskmise aju dopamiini neuronite suurenenud impulsi aktiivsusega. J Neurosci 20: 8876 - 8885.

  50. ↵
    1. Marinelli M,
    2. Cooper DC,
    3. Baker LK,
    4. Valge FJ

    (2003) Keskmise aju dopamiini neuronite impulss-aktiivsus moduleerib ravimit otsivat käitumist. Psühhofarmakoloogia (Berl) 168: 84 - 98.

  51. ↵
    1. Marinelli M,
    2. Rudick CN,
    3. Hu XT,
    4. Valge FJ

    (2006) Dopamiini neuronite erutuvus: moduleerimine ja füsioloogilised tagajärjed. CNS Neurol Disord narkootikumide eesmärgid 5: 79 - 97.

  52. ↵
    1. McCutcheon JE,
    2. Marinelli M

    (2009) Vanuse küsimused. Eur J Neurosci 29: 997 - 1014.

  53. ↵
    1. McCutcheon JE,
    2. Valge FJ,
    3. Marinelli M

    (2009) Individuaalsed erinevused dopamiinirakkude neuroadaptatsioonis pärast kokaiini manustamist. Biol Psychiatry 66: 801 - 803.

  54. ↵
    1. McCutcheon JE,
    2. Conrad KL,
    3. Carr SB,
    4. Ford KA,
    5. McGehee DS,
    6. Marinelli M

    (2012) Dopamiini neuronid ventral tegmentaalpiirkonnas põevad kiiremini noorukitel kui täiskasvanutel. J Neurofüsiol 108: 1620 - 1630.

  55. ↵
    1. Mitchell JM,
    2. Cunningham CL,
    3. Mark GP

    (2005) Lokomotoorne aktiivsus ennustab iseenesliku manustamise omandamist, kuid mitte kokaiini tarbimist. Behav Neurosci 119: 464 - 472.

  56. ↵
    1. Patton GC,
    2. McMorris BJ,
    3. Toumbourou JW,
    4. Hemphill SA,
    5. Donath S,
    6. Catalano RF

    (2004) Puberteet ja aine kasutamise ja kuritarvitamise algus. Pediaatria 114: e300 – e306.

  57. ↵
    1. Piazza PV,
    2. Deminière JM,
    3. Le Moal M,
    4. Simon H

    (1989) Tegurid, mis ennustavad individuaalset haavatavust amfetamiini eneseanalüüsiga. teadus 245: 1511 - 1513.

  58. ↵
    1. Piazza PV,
    2. Deroche-Gamonent V,
    3. Rouge-Pont F,
    4. Le Moal M

    (2000) Vertikaalsed nihked iseenesest annuse-vastuse funktsioonides ennustavad narkootikumide suhtes haavatavat fenotüüpi, mis on eelsoodumus sõltuvusele. J Neurosci 20: 4226 - 4232.

  59. ↵
    1. Picetti R,
    2. Ho A,
    3. Butelman ER,
    4. Kreek MJ

    (2010) Annuse eelistus ja annuse suurendamine laiendatud ligipääsuga kokaiini eneses manustamisel Fischeri ja Lewise rottidel. Psühhofarmakoloogia (Berl) 211: 313 - 323.

  60. ↵
    1. Pucak ML,
    2. Grace AA

    (1991) Dopamiini osaline vähenemine põhjustab dopamiinijääkide jääkide tundlikkuse apomorfiini suhtes. Synapse 9: 144 - 155.

  61. ↵
    1. Quadros IM,
    2. Miczek KA

    (2009) Kaks intensiivse kokaiinirakenduse viisi: suurenenud püsivus pärast sotsiaalset löögi stressi ja suurenenud tarbimise kiirus tänu laiendatud ligipääsutingimustele rottidel. Psühhofarmakoloogia (Berl) 206: 109 - 120.

  62. ↵
    1. Reboussin BA,
    2. Anthony JC

    (2006) Kas on olemas epidemioloogilised tõendid selle kohta, et kokaiinisõltuvuse sündroom tekib varsti pärast kokaiinitarbimise algust? Neuropsychopharmacology 31: 2055 - 2064.

  63. ↵
    1. Ridderinkhof KR,
    2. van der Molen MW

    (1997) Vaimsed ressursid, töötlemise kiirus ja pärssiv kontroll: arenguperspektiiv. Biol Psychol 45: 241 - 261.

  64. ↵
    1. Risner ME,
    2. Silcox DL

    (1981) Psühhostimulantide manustamine beagle koerte poolt progressiivse suhtega paradigmas. Psühhofarmakoloogia (Berl) 75: 25 - 30.

  65. ↵
    1. Robertson GS
    2. Tham CS,
    3. Wilson C,
    4. Jakubovic A,
    5. Fibiger HC

    (1993) Kvinpirooli ja oletatavate presünaptiliste dopamiinergiliste agonistide B-HT 920 ja SND 919 toime in vivo võrdlused striaadi dopamiini ja atsetüülkoliini vabanemisel. J. Pharmacol Exp Ther 264: 1344 - 1351.

  66. ↵
    1. Schramm-Sapyta NL,
    2. Walker QD,
    3. Ratas-JM,
    4. Levin ED,
    5. Kuhn CM

    (2009) Kas noorukid on narkomaania suhtes haavatavamad kui täiskasvanud? Tõendid loomade mudelitest. Psühhofarmakoloogia (Berl) 206: 1 - 21.

  67. ↵
    1. Schramm-Sapyta NL,
    2. Cauley MC,
    3. Stangl DK,
    4. Glowacz S,
    5. Stepp KA
    6. Levin ED,
    7. Kuhn CM

    (2011) Individuaalsete ja arenguhäirete erinevused vabatahtlikus kokaiini tarbimises rottidel. Psühhofarmakoloogia (Berl) 215: 493 - 504.

  68. ↵
    1. Shahbazi M,
    2. Moffett AM,
    3. Williams BF,
    4. Frantz KJ

    (2008) Vanus ja sugupõhine amfetamiini manustamine rottidel. Psühhofarmakoloogia (Berl) 196: 71 - 81.

  69. ↵
    1. Siegmund S,
    2. Vengeliene V
    3. Singer MV,
    4. Spanagel R

    (2005) Vanuse mõju joomise algusele pikaajalise etanooli iseseisvale manustamisse koos puuduse ja stressiga. Alkohol Clin Exp Res 29: 1139 - 1145.

  70. ↵
    1. Spear LP

    (2000) Noorte aju ja vanusega seotud käitumuslikud ilmingud. Neurosci Biobehav Rev 24: 417 - 463.

  71. ↵
    1. Spear LP
    2. Piduri SC

    (1983) Periadoolsus: vanusest sõltuv käitumine ja psühhofarmakoloogiline reaktsioon rottidel. Dev Psychobiol 16: 83 - 109.

  72. ↵
    1. Stansfield KH,
    2. Kirstein CL

    (2006) Uudsuse uudsuse mõju noorukitele ja täiskasvanud rottidele. Dev Psychobiol 48: 10 - 15.

  73. ↵
    1. Steinberg L

    (2004) Riskide võtmine noorukieas: millised muudatused ja miks? Ann NY Acad Sci 1021: 51 - 58.

  74. ↵
    1. Sturman DA,
    2. Mandell DR,
    3. Moghaddam B

    (2010) Noorukitel esineb instrumentaalses õppimises ja väljasuremises täiskasvanute käitumuslikke erinevusi. Behav Neurosci 124: 16 - 25.

  75. ↵
    1. Twining RC,
    2. Bolan M,
    3. Grigson PS

    (2009) Kokaiini kokkutõmbumine on kerge ja kaitseb ravimite motivatsiooni eest rottidel. Behav Neurosci 123: 913 - 925.

  76. ↵
    1. Mahtuv MA,
    2. Grace AA

    (2012) Kas olete või ei ole? Dopamiini neuronite füsioloogilise identifitseerimisega seotud väljakutsed. Trendid Neurosci 35: 422 - 430.

  77. ↵
    1. Vanderschuren LJ,
    2. Niesink RJ,
    3. Van Ree JM

    (1997) Rottide sotsiaalse mängimise käitumise neurobioloogia. Neurosci Biobehav Rev 21: 309 - 326.

  78. ↵
    1. Wahlstrom D,
    2. Collins P,
    3. Valge T,
    4. Luciana M

    (2010) Arstlikud muutused dopamiini neurotransmissioonis noorukieas: käitumuslikud tagajärjed ja hindamisküsimused. Aju Cogn 72: 146 - 159.

  79. ↵
    1. Wiley JL,
    2. Evans RL

    (2009) Kas kasvatada või mitte kasvatada? Ravimi toime empiiriline hindamine noorukitel. Int. J. Dev Neurosci 27: 9 - 20.

  80. ↵
    1. Zeeb FD
    2. Robbins TW,
    3. Winstanley CA

    (2009) Hasartmängude käitumise serotonergiline ja dopamiinergiline modulatsioon, mida hinnati kasutades uut roti hasartmängutööd. Neuropsychopharmacology 34: 2329 - 2343.

  81. ↵
    1. Zlebnik NE,
    2. Anker JJ,
    3. Carroll ME

    (2012) Harjutus, et vähendada kokaiini enda manustamise suurenemist noorukitel ja täiskasvanud rottidel. Psühhofarmakoloogia (Berl) 224: 387 - 400.