Biol Psychiatry. 2008 Dec 1; 64 (11): 941-50. Epub 2008 Juuli 26.
Teegarden SL, Nestler EJ, Bale TL.
allikas
Pennsylvania Ülikooli loomade bioloogia osakond, Philadelphia, PA 19104-6046, USA.
Abstraktne
Taust:
Tundlikkus tasu eest on seotud nii narkootikumide kuritarvitamisega seotud käitumise kui ka ülekuumenemise eelsoodumusega. Kuid tasu tundlikkust soodustavad aluseks olevad mehhanismid ei ole teada. Me hüpoteesime, et dopamiini signalisatsiooni düsregulatsioon võib olla kõrgendatud tasu tundlikkuse põhjuseks, mille puhul tasuv stiimul võib toimida süsteemi normaliseerimiseks.
MEETODID:
Me kasutasime suurenenud taseme tundlikkuse geneetilist hiiremudelit, Delta FosB-üleekspresseerivat hiirt, et uurida tasulise tee muutusi vastuseks maitsvale kõrge rasvasisaldusega dieedile. Nendes hiirtes hinnati tasu signalisatsiooni markereid nii põhiliselt kui ka pärast 6 nädala pikkust maitsvat dieeti. Hiiri uuriti käitumiskatses, mis järgnes suure rasvasisaldusega dieedi äravõtmisele, et hinnata selle mudeli haavatavust rahuldavate stiimulite eemaldamisel.
TULEMUSED:
Meie tulemused näitavad, et Delta FosB üleekspressioonist tuuma accumbensi ja striatali piirkondades on muutunud tasu teekonna aktivatsioon piki tuumast accumbens-hüpotalamuse-ventral tegmentaala ahelat.. Fosforüülitud tsüklilise adenosiinmonofosfaadi (cAMP) vastuselemendi tasemed (pCREB), aju poolt saadud neurotroofne faktor (BDNF), ja dopamiin ja tsükliline adenosiinmonofosfaat-reguleeritud fosfoproteiin, mille molekulmass oli 32 kDa (DARPP-32) tuumasubumeenides, vähenes Delta FosB hiirtel, mis viitab dopamiini vähendatud signalisatsioonile. Kuus nädalat kõrge rasvasisaldusega dieediga kokkupuutumine parandas neid erinevusi täielikult, paljastades maitsva dieedi tugeva rahuldust. Delta FosB hiirtel täheldati ka liikumisaktiivsuse ja ärevusega seotud vastuste olulist suurenemist 24 tundi pärast suure rasvasisaldusega eemaldamist.
KOKKUVÕTE:
Need tulemused kinnitavad Delta FosB ja dopamiini signalisatsiooni düsregulatsiooniga seotud tasu muutuste aluseks olevat tundlikkust, mis on normaliseeritav maitsva toitumisega ja võib olla teatud rasvumise vormides eelsooduv fenotüüp..
Sissejuhatus
Hoolimata meie kasvavatest teadmistest närvisüsteemidest, mis kontrollivad söögiisu ja küllastust, kasvavad Ameerika Ühendriikides ülekaalulisuse määrad. Praegustel ravimeetoditel on piiratud efektiivsus ja käitumuslikud modifikatsioonid kannatavad minimaalse pikaajalise vastavuse all (1). Kalorite tihedusega, maitsvate toiduainete tarbimine on seotud aju stressi- ja tasustamisteede muutustega, mis viitab sellele, et selliste toiduainete premeerivad omadused võivad ületada energia tasakaalu signaalid (2-4). Toiduained, mis sisaldavad kõrge rasvasisaldusega aineid, on looduslikud hüved, aktiveerides aju tasu maksmise keskused sarnaselt kuritarvitusega ravimitele ja sellisena on neid kasutatud iseteeninduse paradigmades (5-8). Seega on tõenäoline, et käitumine ja motivatsioon ülekuumenemiseks ja narkootikumide kuritarvitamiseks jagavad ühiseid alusmehhanisme, mis avavad mõlemale tingimusele uusi raviviise.
Maitsvate toitude ja auhindu ja stressi reguleerivate radade vahelise seose uurimisel, Oleme varem tuvastanud molekulaarseid ja biokeemilisi markereid, millel on vähenenud tasu ja suurenenud stress pärast maitsva kõrge rasvasisaldusega dieedi (HF) eemaldamist. Sarnaselt kuritarvituste ravimitega põhjustas meie uuringutes maitsva dieediga kokkupuutumine transkriptsioonifaktori ΔFosB taseme suurenemist tuuma accumbensis (NAc), kes on keskne aju tasu struktuur (9, 10).. Hiired, kes indutseerivad AFosB ekspresseerimist, suurendasid instrumentaalset reageerimist toidupreemiale (11), muutes need väärtuslikuks vahendiks tasu andmise süsteemi tasu tundlikkuse ja pikaajalise düsreguleerimise rolli uurimisel molekulaarsetes ja biokeemilistes reaktsioonides maitsva dieedi suhtes.
Käesolevas uuringus kasutasime osFosB-üleekspresseerivaid hiiri, et uurida pikaajalisi muutusi palkade markerites NAc-hüpotalamuse - ventraalse tegmentaala (VTA) neurokontuuris vastusena maitsvale HF-dieedile. Tuginedes varasematele uuringutele nendes tasuvustundlikes hiirtes, oletasime, et ΔFosB-indutseeritud muutused tasu tundlikkuses hõlmavad dopamiini signalisatsiooni düsreguleerimist, mis tuleneb NAc tagasiside VTA-le. Lisaks hüpoteesime, et kokkupuude energiaga tiheda HF-dieedi loomuliku tasuga normaliseeriks nende hiirte dopamiinergilise süsteemi, mille tulemuseks on liialdatud reaktsioon selle HF-dieedi eemaldamise stressile. Maitsva toitumise ainulaadne aspekt tasuvaks aineks võimaldab meil lisada hüpotalamuse sisendeid, et premeerida selliste fenotüüpide ahelaid, mis võivad ennustada ravile resistentsele rasvumisele kalduvale populatsioonile. Selle hüpoteesi uurimiseks uurisime pärast HF-i ekspositsiooni dopamiini neurotransmissiooni markereid, sealhulgas pCREB, BDNF ja DARPP-32 NAc ja türosiini hüdroksülaasis ning dopamiini transportijat VTA-s. Uuriti ka spetsiifilisi energia tasakaalu markereid, mis teadaolevalt mõjutavad dopamiini väljundit, sealhulgas leptiini ja oreksiini retseptoreid VTA-s ja oreksiini ekspressiooni külgsuunas hüpotalamuses.
Materjalid ja meetodid
Loomad
Meesbitransgeensed hiired, kes indutseerivad AFosB-d indutseeritavalt dünorfiin-positiivsetes neuronites NAc-s ja seljastriatumis (Kelz et al., 1999), loodi segatud taustal (ICR: C57Bl6 / SJL) Texas Southwestern Medical Centeri ülikoolis ja säilitati ja testitud Pennsylvania ülikoolis. Kõiki hiiri hoiti doksütsükliinil (100 μg / ml joogivees) kuni saabumiseni Pennsylvania ülikooli. Üleekspressiooni esilekutsumiseks eemaldati doksütsükliin (n = 23) (12). Kontrollhiired (n = 26) said ravimit. Hiired omistati dieedirühmadele kaheksa nädalat pärast doksütsiini eemaldamist, mille ajal on näidatud, et ekspressioon saavutab maksimaalse taseme (13). Hiiri hoiti 12: 12 valguse-pimedas tsüklis (tuled 0700is) koos toiduga ja veega, mis oli saadaval ad libitum. Kõik uuringud viidi läbi vastavalt Pennsylvania Ülikooli institutsionaalse loomade hooldamise ja kasutamise komitee heakskiidetud katseprotokollidele ning kõik protseduurid viidi läbi vastavalt institutsionaalsetele suunistele.
Toitumine toiduga
Hiiri hoiti majapidamises (n = 16) või paigutati HF-le (n = 16-17) kuus nädalat. House chow (Purina Lab Diet, St. Louis, MO) sisaldas 4.00 kcal / g, mis sisaldas 28% valku, 12% rasva ja 60% süsivesikuid. HF dieet (Research Diets, New Brunswick, NJ) sisaldas 4.73 kcal / g, mis koosnes 20% valgust, 45% rasvast ja 35% süsivesikutest.
Biokeemia ja geeniekspressioon
Hiiri analüüsiti pärast kuue nädala pikkust dieeti. Ajusid eemaldati koljust ja kas külmutatud või külmutatud NAc-s (umbes 0.5-1.75 mm bregmast, 3.5-5.5 mm sügavusel) ja külmutati vedelas lämmastikus. Koet säilitati -80 ° C juures kuni analüüsimiseni.
Biokeemilised analüüsid
Western blot-meetodid on kirjeldatud lisamaterjalides. Kasutatud antikehad olid: Cdk5, CREB ja BDNF (1: 500, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ja fosfo-CREB (pCREB) (Ser 133) (1: 500, Cell Signaling Technology, Danvers, MA).
Retseptori autoradiograafia
Autoradiograafia üksikasjalikud meetodid on kirjeldatud lisamaterjalides. Kasutatud ligandid olid 2 nM H3 - SCH 23390 ja 5 nM H3 - spiperoon (PerkinElmer, Boston, MA).
In situ hübridisatsioon
Kudede töötlemine ja hübridiseerimine viidi läbi vastavalt eelnevalt kirjeldatule (14). DARPP-32i sondi andis sõbralikult P. Greengard (Rockefelleri Ülikool) ja orexini sond J. Elmquisti poolt (Texase Ülikool Southwestern Medical Center). DARPP-32i jaoks analüüsitud slaidid kanti filmile 3-päevadeks ja oreksiini suhtes analüüsitud slaidid kanti filmile 4-päevadeks. Filmi kujutiste kvantifitseerimine viidi läbi vastavalt eelnevalt kirjeldatule (10).
QRT-PCR
RNA eraldati VTA-st ja individuaalsete geenide ekspressiooni, kasutades TaqMani geeniekspressiooni analüüse (Applied Biosystems, Foster City, CA). Üksikasjalikud meetodid ja statistilised analüüsid võib leida täiendavatest materjalidest.
Käitumisanalüüsid
Tasu tundlikkuse mõju uurimiseks dieedi poolt põhjustatud käitumuslike muutuste suhtes eemaldati HF-i hiirte alamhulk nelja nädala pärast kokkupuute järel ja naaseti koju (n = 9 kontroll, n = 8 ΔFosB). Kakskümmend neli tundi pärast ravimi võtmist olid hiired avatud välitingimustele vastavalt meie varem avaldatud toitumisest loobumise paradigmale (10). Lühidalt öeldes paigutati hiir avatud välisseadme keskele ja seda jälgiti viis minutit. Mõõdeti liini ristmikud, fekaalid, keskel olevad ajad ja keskmised ristid.
Statistika
Kõiki andmeid, välja arvatud Western blotid, analüüsiti kahesuunalise ANOVA abil, millele järgnes Fisheri PLSD test koos doksütsükliinravi (ΔFosB ekspressioon) ja dieedi seisundiga kui sõltumatud muutujad. RT-PCR analüüside jaoks kasutati vähendatud P väärtust, et korrigeerida seotud geenide rühmade mitmekordset võrdlust (vt lisamaterjale). Western blote analüüsiti, kasutades üliõpilase t-testi, kus doksütsükliinravi oli sõltumatu muutuja, võrreldes optilisi tihedusi sama bloti sees. Kõik andmed esitatakse kui keskmine ± SEM.
Tulemused
Põhilised biokeemilised erinevused
Molekulaarsete radade selgitamiseks, mis on kõrgendatud preemiatundlikkuse aluseks ΔFosB üleekspresseerivatel hiirtel, uuriti NAc-s mitme võtmesignaali molekuli taset. ΔFosB hiirte NAc-s täheldati Cdk5 taseme suurenemise suundumust võrreldes doksütsükliinil hoitud pesakonna kontroll-loomadega (F = 5.1, P = 0.08; joonis 1A). ΔFosB hiired väljendasid märkimisväärselt vähendatud pCREB tasemeid (F = 7.4, P <0.05; joonis 1B) kui ka CREB üldtasemeid (F = 5.4, P = 0.05; joonis 1C). Olulist BDNF-i vähenemist täheldati ka ΔFosB hiirte NAc-s (F = 10.6, P <0.05; joonis 1D).
Joonis 1
AFosB üleekspresseerivad hiired näitasid NAc-s vähenenud dopamiini signaaliülekande biokeemilisi markereid
Toidu tarbimine ja kehakaalu kõrge rasvasisaldusega dieedile
Järgmisena uurisime looduslikult tasuva HF-dieedi mõju signaalimolekulide muutustele ΔFosB üleekspresseerivatel hiirtel. Nii FosB hiirte kui ka kontrolltoidu vahel ei olnud erinevusi toidu tarbimisel kas majast või HF-ist. Siiski esines HF-ga kokkupuutel kehakaalule normaliseeritud kaloraaži üldine vähenemine, mis oli spetsiifiline ΔFosB hiirtele (F = 11.2, P <0.01; joonis 2A). Dieediga kokkupuutumise kuue nädala lõpus kaalusid HF-i saanud hiired oluliselt rohkem kui chow-dieedil (F = 17.2, P <0.001) ja ΔFosB hiired kaalusid üldiselt vähem kui kontrollrühmad (F = 5.6, P <0.05; joonis. 2B). See efekt oli spetsiifiline rühmadevahelistele erinevustele chow-dieedil (P <0.05).
Joonis 2
ΔFosB üleekspresseerivad hiired ei näidanud erinevusi toidu tarbimises kas sööda või suure rasvasisaldusega (HF) dieedis
Biokeemilised erinevused kõrge rasvasisaldusega dieedil
Et määrata kindlaks, kuidas HF-i toitumine võib muuta NAc signaaliülekande põhilisi erinevusi, uuriti samu signaali valke, mida uuriti algtasemel loomadel, kes olid saanud kuus nädalat HF-i. Cdk5-i tasemel ei olnud olulisi erinevusi (joonis 3A). PCREB ja kogu CREB tasemed ei erinenud kuue nädala pärast HF-st (joonis 3B, C). BDNF-i tasemed tõusid AFosB hiirtel oluliselt pärast kuue nädala HF ekspositsiooni (F = 6.5, P = 0.05; joonis 3D).
Joonis 3
Suure rasvasisaldusega (HF) toitumine parandas ΔFosB üleekspresseerivate hiirte NAc-s täheldatud signaaliülekande erinevusi
Dopamiini retseptori autoradiograafia
Kasutasime retseptori autoradiograafiat, et hinnata, kas NAc dopamiini signaalimise ΔFosB-indutseeritud muutused on seotud muutustega dopamiiniretseptori ekspressioonis (joonis 4A). Rasvane dieet näis suurendavat D1 dopamiiniretseptori seondumise tihedust veidi (P = 0.14) ja see erinevus oli suurem AFOSB hiirtel (joonis 4B). Samuti ilmnes D1 seondumisala suurenemise suundumus pärast HF-i (P = 0.06) ja post hoc testimine näitas, et see oli oluline AFosB hiirtel (P <0.05; joonis 4C). Erinevalt D1 retseptoritest ei muutunud D2 retseptori seondumistihedus (kontroll-chow = 97.6 ± 6.9, kontroll-HF = 101.1 ± 8.2, ΔFosB chow = 91.6 ± 1.0, ΔFosB HF = 94.8 ± 9.5) ega seondumisala (kontroll-chow = 47.3) NAc-s täheldati ± 3.4, kontroll-HF = 53.8 ± 6.0, ΔFosB chow = 51.9 ± 3.7, AFosB HF = 49.0 ± 3.3).
Joonis 4
Kõrge rasvasisaldusega dieet (HF) põhjustas DFNUMXi dopamiini retseptori seondumise ja DARPP-1 ekspressiooni muutused ΔFosB üleekspresseerivate hiirte tuumas accumbensis (NAc)
DARPP-32 väljendus NAc-s
DARPP-32 ekspressioonitasemete määramiseks NAc-s kasutati in situ hübridisatsiooni (joonis 4D). Rasvane dieet suurendas märkimisväärselt DARPP-32 ekspressiooni selles ajupiirkonnas (F = 5.1, P <0.05) ning dieedi ja ΔFosB ekspressiooni (F = 8.9, P <0.05) vahel oli märkimisväärne koostoime, kusjuures ΔFosB hiirtel oli suurem dieedist tingitud muutus (joonis 4E). DARPP-32 ekspressiooni põhiline erinevus kontroll- ja ΔFosB hiirte vahel ilmnes post hoc testimisega (P <0.01), samuti DARPP-32 ekspressiooni märkimisväärne suurenemine ΔFosB hiirtel HF-is (P <0.01).
Geeni ekspressioon VTA-s
QRT-PCR-i kasutati geeniekspressiooni muutuste hindamiseks VTA-s, suunates mitu peamist geeni, mis olid varem seotud preemia reguleerimisega. Kõik proovid normaliseeriti β-aktiini suhtes. Veendumaks, et β-aktiini ekspressiooni raviga ei muudetud, viidi läbi eraldi test, et võrrelda β-aktiini teise sisekontrolliga, GAPDH-ga. P-aktiini ekspressioonis olulisi erinevusi ei olnud (ΔCT väärtused, β-aktiin - GAPDH: kontroll-chow = 2.29 ± 0.21, kontroll-HF = 2.01 ± 0.04, ΔFosB chow = 2.32 ± 0.49, ΔFosB HF = 2.37 ± 0.10).
Türosiinhüdroksülaasi ekspresseerimisel täheldati ΔFosB ekspressiooni ja dieediravi vahelise koostoime suundumust (F = 3.6, P <0.06; joonis 5A). Näib, et kuue nädala pikkune kokkupuude HF-iga vähendas türosiini hüdroksülaasi ekspressiooni kontrollhiirtel ja suurendas ekspressiooni AFosB hiirtel. Dopamiini transporteri ekspressioonil täheldati olulist koostoimet ΔFosB ekspressiooni ja dieediga kokkupuutumise vahel (F = 6.7, P <0.03; joonis 5B). Sarnaselt türosiinhüdroksülaasiga vähendas HF-ga kokkupuude kontrollhiirtel dopamiini transporteri ekspressiooni ja oluliselt suurendas ekspressiooni ΔFosB hiirtel (P <0.05). Dopamiini transporteri ekspressiooni põhierinevus kontroll- ja ΔFosB hiirte vahel ei saavutanud olulisust (P = 0.16), kuid pärast 6 nädala pikkust HF-i väljendasid ΔFosB hiired kontrollrühmaga võrreldes oluliselt kõrgemat dopamiini transportijat (P <0.05).
Joonis 5
Kõrge rasvasisaldusega (HF) ekspositsioon ja ΔFosB ekspressioon viisid muutustele VTA paljude võtmemolekulide ekspressioonis
Ilmnes trend, mis viitas suurenenud ΔFosB ekspressiooni mõjule TrkB taseme vähendamiseks VTA-s (F = 5.7, P <0.04; joonis 5C). Kuigi peamist mõju κ-opioidiretseptori ekspressioonile ei olnud, oli ΔFosB hiirtel ekspressiooni vähenemise suundumus (P = 0.08; joonis 5D). Leptiini retseptori ekspressioon määrati ka VTA-s. Leiti dieediga kokkupuute märkimisväärne mõju (F = 6.1, P <0.03), kusjuures HF vähendas leptiini retseptori taset märkimisväärselt VTA-s nii ΔFosB kui kontrollhiirtel (joonis 5E). Uuriti ka oreksiini retseptori 1 ekspressiooni VTA-s. Dieedil oli märkimisväärne mõju oreksiini retseptori ekspressioonile (F = 9.0, P <0.02), kusjuures HF-ga kokku puutunud hiired ekspresseerisid VTA-s kõrgemaid tasemeid (joonis 5F). Samuti oli suundumus, et ΔFosB hiired ekspresseerivad selles ajupiirkonnas oreksiini retseptori 1 üldist kõrgemat taset (P <0.05).
Orexiini ekspressioon külghüpotalamuses
Me mõõtsime oreksiini tasemeid külgmises hüpotalamuses, VTA oreksinergilise innervatsiooni päritolu, in situ hübridisatsiooni abil (joonis 6A). Orosiini ekspressioonil oli märkimisväärne koostoime ΔFosB ekspressiooni ja dieediga kokkupuutumise vahel (F = 9.1, P <0.01), kusjuures HF suurendas oluliselt oreksiini taset kontrollhiirtel (P <0.05) ja ekspressiooni vähenemist ΔFosB hiirtel (joonis 6B). Ehkki algseisundis ei esinenud olulisi erinevusi oreksiini ekspressioonis, avaldasid 6 nädala pärast HF-i AFOSB hiired oreksiini oluliselt madalamat taset võrreldes kontrollidega (P <0.05).
Joonis 6
Suure rasvasisaldusega (HF) dieedil oli erinev mõju oreksiini ekspressioonile kontrollis (Ctrl) ja ΔFosB üleekspresseerivates hiirtes
Bekäitumuslikud analüüsid
Toitumisharjumustest tingitud erutuse ja emotsionaalsuse muutuste hindamiseks eksponeeriti hiiri 24-tunnise avanemisega katse järel pärast HF-dieedi tühistamist (10). Erutamise mõõdupunktina skooritud joonte kogu ristumist mõjutasid oluliselt ΔFosB ekspressioon (F = 6.6, P <0.05) ja toitumine (F = 4.6, P <0.05; joonis 7A). ΔFosB hiired olid uudses keskkonnas aktiivsemad kui spiraalid ja post hoc testid näitasid, et HF-ist eemaldatud hiired olid oluliselt aktiivsemad kui chow'ga kokku puutunud (P <0.05). Fekaaliboolid loeti ärevusetaolise käitumise mõõdupuuks (10). AfosB ekspressioonil oli peamine mõju (F = 10.2, P <0.01), kusjuures ΔFosB üleekspresseerivad hiired tekitasid uudses keskkonnas rohkem fekaaliboleid, eriti kodukana ja HF võõrutusrühmades (joonis 7B). HF-dieedil hoitud ΔFosB hiirtel tekkis vähem fekaaliboli kui neil, keda hoiti chow'l, ja neist, kes eemaldati 24 tundi enne testi. Tundus, et dieet ei mõjutanud kontrollhiiri. Avatud välja keskel veedetud ajale ei olnud olulist mõju ei ΔFosB ekspressioonil ega dieedil (kontroll-chow = 14.5 ± 3.1 sek, kontroll-HF = 18.0 ± 3.2 sek, kontroll-W / D = 15.4 ± 1.9 sek, ΔFosB chow = 16.9 ± 2.4 sek, A FosB HF = 13.1 ± 3.9 s, A FosB W / D = 19.8 ± 2.6 s).
Joonis 7
ΔFosB-d üleekspresseerivad hiired olid tundlikumad suure rasvasisaldusega dieedi (HF) kõrvaldamise mõju suhtes
Arutelu
Ülekaalulisuse ravis on kriitiline vajadus tuvastada tegurid, mis mõjutavad ülekoormust ja kaalutõusu. Aju tasu teed mängivad olulist rolli maitsvatele toitudele ja dieedi muutustele (6, 10, 15, 16) motiveerimisel ja neile reageerimisel. Kuna oreksigeensed ja anoreksigeensed signaalid võivad otseselt mõjutada hüpotalamuse-VTA-NAc ahela tasu signaaliülekannet, võivad geenid, mis reageerivad energiat rikastele maitsvatele dieedidele tasu saamise keskustes, pakkuda uudseid terapeutilisi sihtmärke rasvumise ravis (17, 18). Seetõttu uurisime hüpotalamuse-VTA-NAc ahelas toimuva tasu ja energia tasakaalu biokeemilisi ja molekulaarseid markereid vastuseks HF dieetile ΔFosB-üleekspresseerivatel hiirtel kui parendatud tundlikkuse mudelit tasu muutustele (13, 19, 20) ja käitumise tundlikkus pärast dieeti ärajätmist. Me hüpoteesime, et dopamiini signaaliülekande basaalreguleerimine ΔFosB hiirtel normaliseeruks HF-dieedi rahuldava mõjuga, mis hõlmab energia tasakaalu signaalide ja dopamiinisüsteemi lõikumist.
Et uurida dopamiini signalisatsiooni düsamiinireguleerimisele viitavaid markereid NAc-s, uurisime D1 retseptori tasemeid ja allavoolu efektoreid. Kuigi D1-retseptori seondumises ei täheldatud olulisi erinevusi, \ t HF-i ekspositsioon oli suundumus suurendada FosB hiirte seondumisala. See on huvitav, kuna AFosB indutseerimine ravimite ja looduslike hüvedega näib domineerivat D1i retseptoreid esmalt ekspresseerivate keskmiste spiny-neuronite dünorfiin-positiivses alatüübis. (9, 21). Allavoolu dopamiini signaali sihtmärgi pCREB tasemed vähendati oluliselt AFosB hiirtel, toetades D1 retseptori aktiveerimise vähenemist selles aju piirkonnas (22, 23). Huvitaval kombel avastasime ka FFosB hiirtel CREB-tasemete olulise vähenemise, mis viitab dopamiini signaali transduktsiooni täiendavale vähenenud võimsusele, mis võib olla sekundaarne tagasiside tõttu, mis tuleneb pCREB (24) pikenenud vähenemisest. BDNF-i ekspressiooni reguleerib pCREB, see on suurenenud D1-i aktivatsiooniga ja on oluline tasu-seotud neuroplastilisuse vahendaja NAc-s (25, 26). Seega tuvastasime FDNB hiirte NAc-s BDNF-valgu olulise vähenemise.
Kõik keskmised närvilised neuronid ekspresseerivad DARPP-32i (27). Selle arvukad järgnevad efektorid muudavad selle oluliseks osapooleks tasustamisviisides (28) ning on seotud narkomaania ja teiste dopamiinisüsteemi häiretega, sealhulgas afektiivsete häirete ja skisofreeniaga. (27, 29). Me tuvastasime DARPP-32 ekspressiooni põhjalikku vähenemist ΔFosB hiirte NAc-s. DARPP-32 ekspressiooni reguleerib BDNF ja seetõttu võib vähenenud ekspressioon olla otseselt seotud AFosB hiirtel tuvastatud BDNF tasemete vähenemisega (27, 29, 30). Isegi mõõdukad muutused DARPP-32i fosforüülimise olekus võivad põhjustada olulisi muutusi intratsellulaarses signalisatsioonis NAc-s (27). Varasemad uuringud ei ole näidanud DARPP-32 valgu muutust ΔFosB hiirtel pärast 12-wk eemaldamist doksütsükliinist, kui tehti suurem laia striatutiline hindamine (31), viitab sellele, et ΔFosB mõju DARPP-32ile võib olla aja- ja piirkonnapõhine.
Me oletasime, et dopamiini signaalimise indeksite dramaatiline vähenemine AFosB hiirte NAc-s sisaldas tõenäoliselt muutusi VTA dopamiini projektsioon-neuronites, kuigi ΔFosB ei ole neuronites üleekspresseeritud. Seetõttu uurisime dopamiiniga seotud geenide ekspressiooni VTA-s, kaasa arvatud türosiinhüdroksülaas ja dopamiini transporter. Türosiini hüdroksülaasi ja dopamiini transporteri tasemed korreleeruvad positiivselt dopamiini väljundiga. AFosB hiirtel oli tendents näidata vähenenud türosiinhüdroksülaasi ja dopamiini transporteri olulist vähenemist kooskõlas dopamiini signaaliülekande reguleerimisega NAc-s. Kuna need dopamiiniga seotud geenide alused redutseerimised ΔFosB hiirte VTA-s peegeldavad eeldatavalt NAc muudetud tagasisidet pikaajalise ΔFosB üleekspressiooni ajal, uurisime BDNF-retseptori TrkB ekspressiooni kui võimalikku NAc tagasiside mehhanismi VTA-le (32). Sarnaselt türosiinhüdroksülaasi ja dopamiini transporteriga näitas TrkB ekspressioon ka FosB hiirtel põhimõtteliselt vähenevat suundumust, mis ei saavutanud tähtsust, kui korrigeeriti mitme võrdluse korral. BDNF-TrkB kompleksi saab retrogradiliselt transportida ja toimida VTA-s, et mõjutada kohalikku geeniekspressiooni ja soodustada rakkude kasvu ja säilitamist (33). Veelgi enam, presünaptilise TrkB aktivatsioon BDNF-s NAc-s võib otseselt stimuleerida dopamiini neurotransmissiooni (32), toetades nende hiirte dopamiini signaaliülekande vähenemist.
Κ-opioidiretseptorite dünafiini aktivatsioon reguleerib dopamiini signaaliülekannet ja on teine mehhanism, mille abil NAC annab VTA-le tagasisidet (34). Leidsime, et κ-opioidiretseptori ekspressioon VTA-s näitas suundumust vähendada AFosB hiirtel. Kuna on näidatud, et ΔFosB üleekspressioon vähendab dünorfiini ekspressiooni NAc-s (20), on ΔFosB hiirtel VTA κ- netomassid tõenäoliselt oluliselt vähenenud.opioidide aktiveerimine. Kuigi dünorfiini signaalimine avaldab tavaliselt dopamiini neuronitele inhibeerivat toimet (35), on rottidel, kellel on kuritarvitatavate ravimite parem manustamine ise, NAc-s dünorfiini taseme langus, osutades põhimõtteliselt vähenenud dünorfiini signaalimise rollile tasu tundlikkuse suurendamisel (36) , 37). Dünorfiini - κ-opioidide süsteemi reguleerimist on seostatud uimastite kuritarvitamise omandamise ja püsimisega, toetades opioidide signaalimise kriitilist tasakaalu dopamiini radade normaliseerimisel (38).
Energiatiheda HF toitumise tasuval võime alusel oletasime, et dopamiini ja opioidide tasustamise signaali reguleerimine ΔFosB hiirtel eelistab neid hiiri suurendama tasuvust sellisele dieedile, normaliseerides seega hüpotalamuse aktiveerimise kaudu tasu süsteemi -VTA-NAc ahel. Kuuenädalase dieedi kokkupuute ajal ei täheldatud erinevusi AFosB ja kontrollhiirte toidutarbimises, mis viitab sellele, et AFosB hiirtel saadud tasu signalisatsiooni biokeemilistes ja molekulaarsetes markerites leitud muutused ei tulene tarbitud kalorite erinevustest. Ootuspäraselt nõrgendati pCREB, CREB, BDNF, DARPP-32 ja κ-opioidiretseptori taseme basaalseid erinevusi AFosB ja kontrollhiirte vahel, mis on tõenäoliselt tingitud suurenenud dopamiini väljundist AFosB hiirtel HF-il (29, 39-41) .
Nii türosiinhüdroksülaasi kui ka dopamiini transporteri uurimine VTA-s näitas osFosB ja kontrollhiirte üllatavalt vastandlikke vastuseid pärast HF-i.. Kontrollhiired näitasid türosiini hüdroksülaasi ja dopamiini transporteri ekspressiooni vähenemist, samal ajal kui AFosB hiirtel ilmnes mõlema dopamiiniga seotud geeni suurenenud ekspressioon. Huvitav on see, et türosiini hüdroksülaasi ekspressioon muutub VTA-s kroonilise kokaiini või metamfetamiini manustamisega (42-44), mis viitab sellele, et AFosB hiired võivad leida HF-i loomuliku tasu, mis on olulisem kui kontrollhiirtel.
Selleks et uurida, kuidas VTA-le potentsiaalne hüpotalamuse sisend võib edasi anda signaale, mis peegeldavad energia tasakaalu, uuriti ka leptiini retseptori ja oreksiini retseptori-1 ekspressiooni. Tsirkuleerivad leptiini tasemed suurenevad HF-ga ja leptiin võib omakorda toimida VTA-s, et muuta dopamiini signaaliülekannet (18, 45). VTA leptiini retseptori ekspressiooni vähendati HF-ga sarnaselt nii AFosB kui ka kontrollhiirtel, järgides samasugust kehakaalu suurenemist ja dieedi tarbimist HF-i ajal. Kõrge rasvasisaldusega suurendati ka oreksiini retseptor-1 ekspressiooni nii FosB kui ka kontrollhiirte VTA-s. Orexiin aktiveerib VTA-s dopamiini neuroneid, soodustab VTA plastilisust ja suurendab dopamiini taset NAc-s (46-48). On tõestatud, et kõrge rasvasisaldusega dieet suurendab oreksiini ekspressiooni hiirtel vastavalt meie tähelepanekutele (49, 50). Seega võib oreksiini retseptori suurenenud ekspressioon, samuti muutused leptiini signaaliülekandes VTA-s soodustada nii AFosB kui ka kontrollhiirte toitumishüvitist, toetades energia tasakaalu signaale edastavate radade ja otseselt tasu saajate vahelist dissotsiatsiooni.
Tasu tagasivõtmise stressit provotseerivate mõjude uurimiseks uuriti hiiri pärast välifiltri eemaldamist avatud välikatses 24. ΔFosB hiired olid tundlikumad eelistatud dieedi äravõtmise ägedate mõjude suhtes, näidates kõrgendatud erutusaktiivsust ja väljaheite boli tootmist uues avatud areenil võrreldes kõigi teiste kontroll- ja dieedirühmadega. AFosB hiired näitasid ka selles testis huvitavat käitumismustrit, mis viitas tasuvusele ja stressitundlikkusele, kusjuures HF-i toitumine vähendas esialgu roojaga võrreldes väljaheite boli tootmist ja tagasivõtmine suurendas taas seda ärevusega seotud vastust. See avatud väli aktiivsuse suurenemine ei korreleerunud oreksiini ekspressiooni muutustega, mis viitab seosele stressist tingitud erutusega, mis ei ole pelgalt orexiini poolt vahendatud signaalimise muutuste mõju. Üldiselt toetavad need andmed meie hüpoteesi, et ΔFosB hiired oleksid tundlikumad eelistatud dieedi äravõtmise ägeda toime suhtes nende kõrgendatud taseme tundlikkuse tõttu.
Kuidas põhjustab ΔFosB pikaajaline üleekspressioon NAc-s selliseid muutusi käitumises ja tasustussignaalides? Oleme välja pakkunud VTA juhusliku avastamise mudeli, kus NAc ja hüpotalamuse muudetud tagasiside edastab signaale tasu oleku kohta, et määrata kindlaks dopamiinisüsteemi regulatsioon, mis võib toetada seost tasustamise raja düsregulatsiooni ja eelsoodumusega ülekaalulisusele (joonis 8). HF-i kokkupuute ajal lähenevad VTA-le mitu sisendit, mis peegeldavad nii energia tasakaalu kui ka tasuvust. Leptiini ja oreksiini signaaliülekande suurenemine, samuti muutunud tagasiside NAc poolt külgsuunalisele hüpotalamusele võib mõjutada seda, kuidas need oreksigeensed signaalid reageerivad AFosB hiirtel HF-le (17, 18, 45, 47, 51-53). Kõrge rasvasisaldusega dieedi indutseeritud BDNF-i tõus võib anda VTA-le tagasisidet, mis edendab veelgi dopamiiniga seotud geeniekspressiooni muutusi.
Joonis 8
Kõrge rasvasisaldusega (HF) toitumine normaliseerib reguleerimata tasu signalisatsiooni ΔFosB hiirtel
Need tulemused kirjeldavad tasu tundlikkuse molekulaarseid markereid ja näitavad, et dopamiinisüsteemi pikaajaline düsregulatsioon võib indiviidi mõjutada sõltuvust ja rasvumist. Lisaks annavad need andmed olulise sammu potentsiaalsete uute terapeutiliste sihtmärkide kindlaksmääramisel rasvumise ja muude häirete ravis ja ennetamises, mis võivad keskenduda tasustamissüsteemile. Tulevikus on oluline uurida, kuidas see süsteem reageerib HF-dieedi eemaldamisele, samuti uurida suguerinevusi tundlikkuse suhtes tasu ja suure rasvasisaldusega toidu suhtes.
Lisamaterjal
Supp. Meetodid
Klõpsake siia, et vaadata. (61K, doc)
Tunnustused
Autorid soovivad tänada Cathy Steffenit loomakasvatuse ja üleviimise eest. Seda tööd toetas Pennsylvania Ülikooli Diabeedikeskuse (DK019525) toetus ning riikliku vaimse tervise instituudi (R01 MH51399 ja P50 MH66172) ja riikliku narkootikumide kuritarvitamise instituudi (R01 DA07359) toetused.
Allmärkused
Finantsinformatsioon: Kõik autorid kinnitavad, et neil ei ole biomeditsiinilisi finantshuve ega võimalikke huvide konflikte.
viited
1. Wadden TA, Berkowitz RI, Womble LG, Sarwer DB, Phelan S, Cato RK, Hesson LA, Osei SY, Kaplan R, Stunkard AJ. Elustiili muutmise ja farmakoteraapia juhuslikus uuringus ülekaalulisusele. N Engl. J. Med. 2005; 353 (20): 2111 – 20. [PubMed]
2. Blendy JA, Strasser A, Walters CL, Perkins KA, Patterson F, Berkowitz R, Lerman C. Vähenenud nikotiinitasu rasvumises: inimese ja hiire ristandumine. Psühhofarmakoloogia (Berl) 2005
3. Franken IH, Muris P. Individuaalsed erinevused tasu tundlikkuses on seotud tervisehäirete ja suhtelise kehakaaluga tervetel naistel. Söögiisu. 2005; 45 (2): 198 – 201. [PubMed]
4. Kelley AE, Berridge KC. Looduslike hüvede neuroteadus: asjakohasus sõltuvust tekitavate ravimite suhtes. J Neurosci. 2002; 22 (9): 3306 – 11. [PubMed]
5. Cagniard B, Balsam PD, Brunner D, Zhuang X. Krooniliselt kõrgenenud dopamiiniga hiirtel on toiduhüvitise jaoks parem motivatsioon, kuid mitte õppimine. Neuropsühharmakoloogia. 2006; 31 (7): 1362 – 70. [PubMed]
6. Liang NC, Hajnal A, Norgren R. Sham, kes toidab maisiõli, suurendab rottidel dopamiini. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2006; 291 (5): R1236 – 9. [PubMed]
7. Mendoza J, Angeles-Castellanos M, Escobar C. Maitsva eine sissetõmbamine kutsub esile toidu prognoosivat aktiivsust ja c-Fos-i ekspressiooni aju tasuvates piirkondades. Neuroteadus. 2005; 133 (1): 293 – 303. [PubMed]
8. Schroeder BE, Binzak JM, Kelley AE. Eelnev eelkontaktiline kortikaalne aktiveerimine pärast nikotiini- või šokolaadiga seotud kontekstuaalsete märkide eksponeerimist. Neuroteadus. 2001; 105 (3): 535 – 45. [PubMed]
9. Nestler EJ, Barrot M, Self DW. DeltaFosB: püsiv molekulaarne lüliti sõltuvuse jaoks. Proc Natl Acad Sci US A. 2001, 98 (20): 11042 – 6. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]
10. Teegarden SL, Bale TL. Toitumise eelistuste vähenemine toob kaasa suurema emotsionaalsuse ja dieedi taastekke riski. Biol Psychiatry. 2007; 61 (9): 1021 – 9. [PubMed]
11. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Nestler EJ, Taylor JR. dFosB Nucleus Accumbensis reguleerib toiduga tugevdatud instrumentaalset käitumist ja motivatsiooni. Neuroteaduse ajakiri. 2006; 26 (36): 9196 – 9204. [PubMed]
12. Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgeensed loomad, kellel on indutseeritav, suunatud geeniekspressioon ajus. Mol Pharmacol. 1998; 54 (3): 495 – 503. [PubMed]
13. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Duman RS Nestler EJ. Transkriptsioonifaktori deltaFosB ekspressioon ajus kontrollib kokaiini tundlikkust. Loodus. 1999; 401 (6750): 272 – 6. [PubMed]
14. Bale TL, Dorsa DM. Östrogeeni sugupoolsed erinevused ja mõju oksütotsiiniretseptori ribonukleiinhappe ekspressioonile ventromediaalses hüpotalamuses. Endokrinoloogia. 1995; 136 (1): 27 – 32. [PubMed]
15. Avena NM, Long KA, Hoebel BG. Suhkrust sõltuvad rotid reageerivad suhkru suhtes pärast rasestumisest suuremat reageerimist: tõendid suhkru puuduse kohta. Physiol Behav. 2005; 84 (3): 359 – 62. [PubMed]
16. Kas MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Nucleus accumbens mu-opioidid reguleerivad suure rasvasisaldusega dieedi tarbimist hajutatud aju võrgu aktiveerimise kaudu. J Neurosci. 2003; 23 (7): 2882 – 8. [PubMed]
17. Zheng H, Patterson LM, Berthoud HR. Kõrge rasvasisaldusega söögiisu tekitamiseks, mis on põhjustatud tuuma accumbens'i opioidide stimuleerimisest, on vajalik okseksiini signaaliülekanne vatsakeskmes. J Neurosci. 2007; 27 (41): 11075 – 82. [PubMed]
18. Hommel JD, Trinko R, Sears RM, Georgescu D, Liu ZW, Gao XB, Thurmon JJ, Marinelli M, DiLeone RJ. Leptiini retseptori signaaliülekanne keskmise aju dopamiini neuronites reguleerib söötmist. Neuron. 2006; 51 (6): 801 – 10. [PubMed]
19. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. DeltaFosB striatoorse rakutüübi spetsiifiline üleekspressioon suurendab kokaiini stimuleerimist. J Neurosci. 2003; 23 (6): 2488 – 93. [PubMed]
20. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. DeltaFosB oluline roll morfiini toimel tuumasõlmedes. Nat Neurosci. 2006; 9 (2): 205 – 11. [PubMed]
21. Lee KW, Kim Y, Kim AM, Helmin K, Nairn AC, Greengard P. Kokaiini poolt põhjustatud dendriitide lülisamba moodustumine D1i ja D2i dopamiini retseptorit sisaldavates keskmistes närvirakkudes tuumaklundides. Proc Natl Acad Sci US A. 2006, 103 (9): 3399 – 404. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]
22. Blendy JA, Maldonado R. Narkomaania geneetiline analüüs: cAMP vastuselemendi siduva valgu roll. J Mol Med. 1998; 76 (2): 104 – 10. [PubMed]
23. Nestler EJ. Narkomaania molekulaarsed mehhanismid. Neurofarmakoloogia. 2004; 47 1: 24 – 32. [PubMed]
24. Tanis KQ, Duman RS, Newton SS. CREB sidumine ja aktiivsus ajus: piirkondlik spetsiifilisus ja indutseerimine elektrokonvulsse krambiga. Biol Psychiatry. 2007
25. Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DE, Truong HT, Russo SJ, Laplant Q, Sasaki TS, Whistler KN, Neve RL, Self DW, Nestler EJ. Kromatiini remodelleerumine on peamine mehhanism, mis põhineb kokaiini põhjustatud plastilisusel striatumis. Neuron. 2005; 48 (2): 303 – 14. [PubMed]
26. Graham DL, Edwards S, Bachtell RK, Dileone RJ, Rios M, Self DW. Dünaamiline BDNF-i aktiivsus kokaiinitarbimises olevates tuumades suurendab eneseravimist ja retsidiivi. Nat Neurosci. 2007; 10 (8): 1029 – 37. [PubMed]
27. Svenningsson P, Nairn AC, Greengard P. DARPP-32 vahendab mitme narkootikumide kuritarvitamist. Aaps J. 2005; 7 (2): E353 – 60. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]
28. Palmer AA, Verbitsky M, Suresh R, Kamens HM, Reed CL, Li N, Burkhart-Kasch S, McKinnon CS, Belknap JK, Gilliam TC, Phillips TJ. Geeniekspressiooni erinevused hiirtel, kes olid metamfetamiini tundlikkuse suhtes erinevalt valitud. Mamm genoom. 2005; 16 (5): 291 – 305. [PubMed]
29. Bogush A, Pedrini S, Pelta-Heller J, Chan T, Yang Q, Mao Z, Sluzas E, Gieringer T, Ehrlich ME. AKT ja CDK5 / p35 vahendavad DARPP-32i aju tuletatud neurotroofset faktorite indutseerimist keskmise suurusega närvirakkudes in vitro. J Biol Chem. 2007; 282 (10): 7352 – 9. [PubMed]
30. Benavides DR, Bibb JA. Cdk5i roll uimastite kuritarvitamisel ja plastilisusel. Ann NY Acad Sci. 2004: 1025: 335 – 44. [PubMed]
31. Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, Nestler EJ, Greengard P. Kroonilise kokkupuute mõju kokaiinile reguleerib neuronaalne valk Cdk5. Loodus. 2001; 410 (6826): 376 – 80. [PubMed]
32. Blochl A, Sirrenberg C. Neurotropiinid stimuleerivad dopamiini vabanemist roti mesenkefaalsetest neuronitest Trk ja p75Lntr retseptorite kaudu. J Biol Chem. 1996; 271 (35): 21100 – 7. [PubMed]
33. Berton O, McClung CA, Dileone RJ, Krishnan V, Renthal W, Russo SJ, Graham D, Tsankova NM, Bolanose CA, Rios M, Monteggia LM, Self DW, Nestler EJ. BDNF-i oluline roll mesolimbilise dopamiini rajal sotsiaalses võitluses. Teadus. 2006; 311 (5762): 864 – 8. [PubMed]
34. Nestler EJ, Carlezon WA., Jr Mesolimbiline dopamiini tasu ahel depressioonis. Biol Psychiatry. 2006; 59 (12): 1151 – 9. [PubMed]
35. Ford CP, Beckstead MJ, Williams JT. Somatodendriitsete dopamiini inhibeerivate postünaptiliste voolude kappa opioidide inhibeerimine. J Neurophysiol. 2007; 97 (1): 883 – 91. [PubMed]
36. Nylander I, Vlaskovska M, Terenius L. Aju dünorfiini ja enkefaliini süsteemid Fischeri ja Lewise rottidel: morfiini taluvuse ja äravõtmise mõju. Brain Res. 1995; 683 (1): 25 – 35. [PubMed]
37. Nylander I, Hyytia P, Forsander O, Terenius L. Erinevused alkoholi eelistavate (AA) ja alkoholi vältivate (ANA) rottide vahel prodünorfiini ja proenkefaliini süsteemides. Alkohol Clin Exp Res. 1994; 18 (5): 1272 – 9. [PubMed]
38. Kreek MJ. Kokaiin, dopamiin ja endogeenne opioidide süsteem. J Addict Dis. 1996; 15 (4): 73 – 96. [PubMed]
39. Carlezon WA, Jr, Duman RS, Nestler EJ. CREBi paljud näod. Trendid Neurosci. 2005; 28 (8): 436 – 45. [PubMed]
40. Dudman JT, Eaton ME, Rajadhyaksha A, Macias W, Taher M, Barczak A, Kameyama K, Huganir R, Konradi C. Dopamiini D1 retseptorid vahendavad CREB fosforüülimist NMDA retseptori fosforüülimise teel Ser897-NR1is. J Neurochem. 2003; 87 (4): 922 – 34. [PubMed]
41. Self DW. Uimastite võtmise ja - käitumise reguleerimine neuroadaptatsioonide abil mesolimbilise dopamiini süsteemis. Neurofarmakoloogia. 2004; 47 1: 242 – 55. [PubMed]
42. Beitner-Johnson D, Nestler EJ. Morfiin ja kokaiin avaldavad türosiini hüdroksülaasile ühiseid kroonilisi toimeid dopamiinergilistes ajuhüvitiste piirkondades. J Neurochem. 1991; 57 (1): 344 – 7. [PubMed]
43. Lu L, Grimm JW, Shaham Y, Hope BT. Molekulaarsed neuroadaptatsioonid akumeenides ja ventral tegmentalis piirkonnas esimese 90i päeva jooksul, mil rottidel oli kokaiini enesest manustamisest sunnitud hoiduma. J Neurochem. 2003; 85 (6): 1604 – 13. [PubMed]
44. Shepard JD, Chuang DT, Shaham Y, Morales M. Metamfetamiini enda manustamise mõju türosiini hüdroksülaasi ja dopamiini transporteri tasemele roti mesolimbilistes ja nigrostriaalse dopamiini radades. Psühhofarmakoloogia (Berl) 2006, 185 (4): 505 – 13. [PubMed]
45. Fulton S, Pissios P, Manchon RP, Stiles L, Frank L, Pothos EN, Maratos-Flier E, Flier JS. Mesoaccumbens dopamiini raja leptiini reguleerimine. Neuron. 2006; 51 (6): 811 – 22. [PubMed]
46. Narita M, Nagumo Y, Miyatake M, Ikegami D, Kurahashi K, Suzuki T. Valgu kinaasi C rakendamine oreksiini poolt põhjustatud ekstratsellulaarse dopamiini taseme tõusus ja selle rahuldav mõju. Eur J Neurosci. 2007; 25 (5): 1537 – 45. [PubMed]
47. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Otsene orexinergiliste süsteemide kaasamine mesolimbilise dopamiini raja aktiveerimisse ja sellega seotud morfiini poolt põhjustatud käitumisse. J Neurosci. 2006; 26 (2): 398 – 405. [PubMed]
48. Borgland SL, Taha SA, Sarti F, Fields HL, Bonci A. Orexiin A VTA-s on kriitiline sünaptilise plastilisuse ja kokaiini käitumusliku sensibiliseerimise esilekutsumiseks. Neuron. 2006; 49 (4): 589 – 601. [PubMed]
49. Park ES, Yi SJ, Kim JS, Lee HS, Lee IS, Seong JK, Jin HK, Yoon YS. Oreksiin-A ja neuropeptiidi Y ekspressiooni muutused tühja kõhuga ja suure rasvasisaldusega dieediga toidetud rottide hüpotalamuses. J Vet Sci. 2004; 5 (4): 295 – 302. [PubMed]
50. Wortley KE, Chang GQ, Davydova Z, Leibowitz SF. Peptiidid, mis reguleerivad toidutarbimist: hüpertriglütserideemia seisundite korral suureneb oreksiini geeni ekspressioon. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003; 284 (6): R1454 – 65. [PubMed]
51. Zheng H, Corkern M, Stoyanova I, Patterson LM, Tian R, Berthoud HR. Peptiidid, mis reguleerivad toidu tarbimist: söögiisu indutseeriv akumeeni manipuleerimine aktiveerib hüpotalamuse oreksiini neuronid ja pärsib POMC neuroneid. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003; 284 (6): R1436 – 44. [PubMed]
52. Baldo BA, Gual-Bonilla L, Sijapati K, Daniel RA, Landry CF, Kelley AE. Oreksiini / hüpokretiini sisaldavate hüpotalamuse neuronite subpopulatsiooni aktiveerimine GABAA retseptori poolt vahendatud tuuma accumbens'i kesta inhibeerimise teel, kuid mitte uuele keskkonnale. Eur J Neurosci. 2004; 19 (2): 376 – 86. [PubMed]
53. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Sooliste hüpotalamuse oreksiini neuronite roll tasu otsimisel. Loodus. 2005; 437 (7058): 556 – 9. [PubMed]
;