Perinataalne Lääne toitumise tarbimine toob kaasa sügava plastilisuse ja GABAergilised fenotüüpide muutused hüpotalamuses ja sünnist kuni seksuaalse küpsuse saavutamiseni rottidel (2017)

. 2017; 8: 216.

Avaldatud Internetis 2017 Aug 29. doi:  10.3389 / fendo.2017.00216

PMCID: PMC5581815

Abstraktne

Perinataalne emade energiatarbimine tihe toit suurendab laste rasvumise riski. See on seotud maitsva toidu tarbimisega, mida tarbitakse selle hedoonilise omaduse jaoks. Alusmehhanism, mis seob perinataalse ema toitumise ja järglaste eelistused rasvale, on endiselt halvasti mõistetav. Selles uuringus püütakse uurida emasloomade kõrge rasvasisaldusega / suure suhkrusisaldusega toitumise mõju [Lääne toitumine (WD)] raseduse ja imetamise ajal tasulistel teedel, mis kontrollivad rottide järglaste toitumist sünnist kuni seksuaalse küpsuseni. Me teostasime WD ja Control järglaste pikisuunalist jälgimist kolmel kriitilisel ajaperioodil (lapsepõlv, noorukieas ja täiskasvanueas) ning keskendusime perinataalse ekspositsiooni mõjule maitsva dieedi suhtes (i) rasva eelistustele, (ii) geeniekspressiooni profiilile ja (iii) mesolimbiliste dopamiinergiliste võrkude neuroanatoomilised / arhitektuurilised muutused. Näitasime, et perinataalsele perioodile piirduv WD toitumine avaldab selget pikaajalist mõju homeostaatiliste ja hedooniliste aju ahelate korraldamisele, kuid mitte rasva eelistustele. Me näitasime rasva eelistuse perioodi spetsiifilist arengut, mis on korrelatsioonis spetsiifiliste aju molekulaarsete allkirjadega. WD-sse toidetud tammide järglaste puhul täheldasime lapsepõlves rasvade eelistuse olemasolu, mis on seotud dopamiini (DA) süsteemides osaleva võtm geeni kõrgema ekspressiooniga; noorukieas, mõlema rühma kõrge rasvasisaldusega eelistus WD-rühma 3-päevase testi ajal järk-järgult vähenenud ja seotud WD-rühma DA-süsteemides osaleva võtm geeni vähenenud ekspressiooniga, mis võiks viidata nende kaitsmiseks kompensatsioonimehhanismile. kõrge rasvasisaldusega kokkupuutest; ja lõpuks täiskasvanueas, eelistus rasvadele, mis olid kontrollrottidega identsed, kuid mis on seotud γ-aminovõihappevõrgu, serotoniini retseptorite ja hüpotalamuse polüsialhappe-NCAM-sõltuvate põhiliste geenide põhjaliku muutmisega. Kokkuvõttes näitavad need andmed, et ema WD-l, mis piirdub perinataalse perioodiga, ei ole püsiv mõju energia homöostaasile ja rasva eelistusele hilisemas elus, kuigi söömiskäitumisega seotud hüpotalamuse homeostaatilise ja tasulise tee tugev ümberkujundamine. Nende ahelate ümberkujundamise asjakohasuse mõistmiseks oleks vaja täiendavaid funktsionaalseid katseid.

Märksõnad: tasu, DOHaD, toidu eelistused, toitumine, γ-aminovõihape, TaqMani madala tihedusega massiivi

Sissejuhatus

Varases elukeskkonnas ja sündmustes on nüüdseks hästi teada, et need aitavad tervise ja haiguste eelsoodumuses hilisemas elus (-). Metaboolse trükkimise kontseptsioon on välja pakutud, et kirjeldada, kuidas muutused toitumis- ja hormonaalses keskkonnas perinataalse perioodi jooksul võivad soodustada järglasi rasvumisele ja sellega seotud patoloogiatele hiljem. Oluline küsimus meie juhuslikust eluviisist on ülerahvastus, mis on tingitud energiatihedate toiduainete tarbimisest. Tõepoolest, isikud, kes on sellist tüüpi toidu ema tarbimisega kokku puutunud, on suurem risk rasvumise ja metaboolse sündroomi tekkeks (, ). Paljudes uuringutes on näidatud, et raseduse ja imetamise kaudu on emade kõrge rasvasisaldusega dieedil pikaajaline mõju järglaste ainevahetusele (-). Lisaks metaboolse reguleerimisega seotud radadele on aju tasustamise süsteemidel oluline roll ka toitumisharjumustes (, ). Mesolimbiline dopamiini (DA) neurotransmissioon, mida uuritakse intensiivselt tasu ja sõltuvuse kontekstis, on mõlema inimese toitumise põhjustatud rasvumise tõttu muutunud (-) ja loomad (-). DA-projektsioonid arenevad suures osas postnataalselt () ja seetõttu võib nende arengut mõjutada varane toitumine. Viimastel aastatel on näriliste katsetamine tõestanud, et ema HFD tarbimine suurendab hedoonilist toitumist järglastel (, ). Kuigi see tähelepanek hõlmas mõningaid muudatusi DA-süsteemi funktsioonis (-) on olemas vähe andmeid, mis on seotud varajase elu tasustamisviiside ontogeensuse ja ümberkujundamisega.). Lisaks sellele ei ole dokumenteeritud, kuidas ja kuidas perinataalset toitumisstressi mõjutab tasustamissüsteemi mitte-DA signalisatsiooniosa, nagu GABA (y-aminobutüürhappe) süsteem. Tõepoolest, tundub, et GABA neuronitel on oluline roll tasu ja vastumeelsuse puhul. Ventral tegmental area (VTA) GABA neuronid saavad sarnast sisendit erinevatest aju piirkondadest () ja hiljutised optogeneetilised käitumisuuringud rõhutavad VTA GABA olulist rolli konditsioneeritud koha vastumeelsuses () ja tasulise käitumise (). Nucleus accumbens (NAc) koosneb peamiselt GABAergiliste keskmiste närviliste neuronite projektsioonist ja toimib limbilise ja motoorse liidese kaudu, mis integreerib limbilisest süsteemist tulenevad signaalid ja muudab need toiminguks kaudu väljund ventral pallidum (VP) ja teised mootorite efektorid (). Ja lõpuks, hüpotalamus, mis koosneb paljudest GABA-ühendustest LH-s () ja kaarjas tuum, integreerib nälja ja küllastuse signaalid ().

Selle uuringu eesmärk on tuvastada ema läänepoolse toitumise (WD) mõju roti järglastele sünnist kuni seksuaalse küpsuseni (i) rasva eelistusele (ii) DA süsteemi geeniekspressiooni profiilile, GABAergilise süsteemi ja hüpotalamuse plastilisusele. ja (iii) mesolimbiliste dopamiinergiliste võrkude neuroanatoomiliste / arhitektuuriliste muutuste kohta samal perioodil. Seetõttu hindasime pikisuunalisel uuringul (võõrutamisest, P25ist, seksuaalsest küpsusest, P45 ja täiskasvanueas, P95) ema WD mõju kehakaalu kasvule ja järglaste rasvkoe arengule pärast võõrutamist. Samaaegselt tegime me rasvade eelistuste testi, millele järgnes spetsiaalne transkriptoomiline analüüs ja sellele järgnenud põhikomponentide analüüs (PCA) toiduainete tarbimise, valikuvõimaluste ja motivatsiooni regulatsioonisüsteemide valikust. Meie tulemused rikastasid oluliselt hiljutisi tulemusi, mis keskendusid DA süsteemi toitumisprogrammidele.

Materjalid ja meetodid

Eetika avaldus

Kõik katsed viidi läbi vastavalt kohaliku loomade heaolu komitee, ELi (direktiiv 2010 / 63 / EL), Institut National de la Recherche Agronomique (Pariis, Prantsusmaa) ja Prantsuse veterinaarosakonna juhistele.A44276). Eksperimentaalne protokoll kiideti heaks institutsionaalse eetikakomitee poolt ja registreeriti viite APAFIS 8666 all. Kõik ettevaatusabinõud võeti, et minimeerida stressi ja igas katsete seerias kasutatavate loomade arvu.

Loomad ja toit

Loomi hoiti 12 h / 12 h valguse / pimeduse tsüklis 22 ± 2 ° C juures koos toidu ja veega ad libitum. Kolmkümmend kaks naissoost Sprague-Dawley rotti (kehakaal: 240-290 g) tiinuspäeval 1 (G1) osteti otse Janvierilt (Le Genest Saint Isle, Prantsusmaa). Neid hoiti individuaalselt ja neile manustati 5i jaoks 0i jaoks kontrollravimit (16% veiseliha rasva ja 21% sahharoosi) või 30i WD (16% veiseliha rasv ja XNUMX% sahharoos). (vt Table1: 1: dieedi koostis protsentides kcal alates ABdiet Woerden, Holland). Sünni ajal kohandati pesakonna suurus 1: 1-i suhtega kaheksa pesakonna kohta pesakonna kohta. Me hoidsime 12i 16i tammidest koos pesakonnaga, mis koosnes 4-i meestest ja 4-i naistest igas rühmas. Võõrutamise ajal (P21) hoiti CD- ja WD-tammistele sündinud järglased katse lõpuni standardsele lehmale (joonised (Joonised1A, B) .1A, B). Kehakaalu registreeriti sünnil ja seejärel iga päev 10is: 00 am kuni P21 (võõrutamine). Pärast võõrutamist ja katse lõpuni kaaluti rotid iga 3-päeva kohta. Esitame andmeid ainult meessoost järglaste kohta. Naistel kasutati rotte teises uuringus (joonis fig (Joonis11).

Tabel 1 

Dieetkoostis kcal protsendina raseduse ja laktatsiooni ajal manustatud emade toitumise komponendist ja järglaste toitumisest.
Joonis 1 

Eksperimentaalne disain. (A) Uuringukava skemaatiline diagramm. Kolmkümmend kaks naissoost SPD roti tiinuspäeval 1 (G1) toideti kas 16i kontroll-dieeti või läänelikku dieeti teistele raseduse ja imetamise ajal. Võõrutamisel, järglased ...

Käitumine (kahekordse valiku test)

Uuriti kolme kriitilist arenguperioodi (P21 kuni P25: nooruk, P41 kuni P45: nooruk ja P91 kuni P95: noor täiskasvanu). 24i isased poegad (n = 12 rühma kohta) valiti juhuslikult ja pandi üksikusse puuri, et teha kahe pudeliga tasuta test (joonised fig (Joonised1A, B) 1A, B) (-). Seda testi kasutati selleks, et uurida konkreetselt rasva maitse atraktiivsust, lahutades selle magusast maitsest ja võimalikult palju kalorite tarbimise metaboolsest toimest. Tõepoolest, 1% maisiõli lahuse tarbimine on seotud ainult 0.09 kcal / ml manustamisega. Pärast ühe päeva harjutamist kahe pudeli juuresolekul viidi test läbi 2i päeva P25is ja 4-päevadel P41-is ja P91is (joonis fig. (Joonis1A) .1A). Täpsemalt võõrutamise ajal (P21) majutati 24i poisid 2i päevadeks individuaalselt (joonis (Joonis1A): 1A): päev 1, harjumise faas, päev 2, rottidele anti kahe pudeli vaba valik 1% maisiõli emulsiooni vahel 0.3% ksantaankummis (Sigma Aldrich, St. Quentin Fallavier, Prantsusmaa) ja ksantaankummi lahuses ( 0.3%). P41i ja P91i puhul kasutati 24i poisid ja pakuti kolmekordset vaba valikut kolmel järjestikusel päeval. Ksantaankummi lahuse ja maitselahuse (maisiõli 1%) tarbimine registreeriti iga päev 11is: 00 am 3 päeva (P45 ja P95). Kahe pudeli asukohta pöörati iga päev ümber, et vältida positsioonieelse eelistuse kalduvust. Rasva eelistusskoor arvutati rasvasisalduse mahu suhtena 24 h-s tarbitud kogumahuni. Kõiki rotte hoiti kogu käitumiskatse ajal standardse söödaalase dieedi all.

Kudede kogumine ja vereproovide võtmine

Päev pärast kahe pudeli vaba valiku testi viimast päeva, pooled rottidest (n = 6 rühma kohta) eutaneeriti CO kiiresti ajavahemikus 09:00 kuni 12:002 sissehingamine. Veri koguti tuubidesse EDTA-ga (Laboratoires Léo SA, St Quentin en Yvelines, Prantsusmaa) ja tsentrifuugiti kiirusel 2,500 g 15 min 4 ° C juures. Plasma külmutati temperatuuril -20 ° C. Orgaanid ja individuaalne retroperitoneaalne rasva depoo lõigati ja kaaluti. Aju eemaldati kiiresti ja paigutati aju maatriksisse (WPI, Sarasota, FL, USA rott 300 – 600 g). Kõigepealt lõigati hüpotaalamused [vastavalt Paxinosi atlanta koordinaatidele: −1.0 kuni −4.5 mm Bregmast ()] siis saadi iga roti puhul kaks koronaalset lõiget 2 mm paksusega NAc tasemel ja teine ​​VTA tasemel. Parempoolse ja vasakpoolse NAc ning parema ja vasakpoolse VTA proovid (neli proovi looma kohta) saadi kiiresti kahe erineva biopsiaga (Stiefel Laboratories, Nanterre, Prantsusmaa) abil (NAc ja 4 mm 3 mm läbimõõt) ventraalse keskmise aju jaoks). Proovid külmutati vedelas lämmastikus ja säilitati -80 ° C juures geeniekspressiooni määramiseks TaqMani madala tihedusega massiivi (TLDA) abil.

Teised rotid (n = 6 rühma kohta) tuimastati sügavalt pentobarbitaaliga (150 mg / kg ip) ja perfusiooniti transkardiaalse füsioloogilise soolalahuse perfusiooniga, millele järgnes jääkülm 4% paraformaldehüüd fosfaatpuhvris (PB), pH 7.4. Ajusid eemaldati kiiresti, kasteti samasse fiksaatorisse 1 tunniks temperatuuril 4 ° C ja hoiti lõpuks 25–24 tundi 48% PB sahharoosis. Seejärel külmutati ajusid isopentaanis temperatuuril –60 ° C ja hoiti lõpuks kuni kasutamiseni temperatuuril –80 ° C. NAc, hüpotalamus ja VTA lõigati krüostaadiga (Microm, Microtech, Francheville, Prantsusmaa) 20 um seerianumbriks. Igale ajupiirkonnale tehti kaks või kolm kümnest klaasist slaidist koosnevat seeriat, mis sisaldasid 10–4 lõiku. Iga klaasi jaoks on jadalõigud 6 µm kaugusel (joonis fig (Joonis66).

Joonis 6 

TH / NeuN-positiivsete neuronite kvantifitseerimine ventral tegmental-piirkonnas (VTA) ja TH-tihedusega kiududes tuuma accumbensis (NAc) alates võõrutamisest täiskasvanuks saamiseni Lääne toitumisest (WD) või kontroll-dieedist (CD) toidetud tammidelt. (A) Skeem Paxinosilt ja Watsonilt ...

Biokeemilised plasmaanalüüsid

PTANUMX, P25 ja P45 rottidel kogutud EDTA plasmat kasutati plasma glükoosi, NEFA (esterdamata rasvhapete), insuliini ja leptiini mõõtmiseks. Glükoosi ja NEFA-d mõõdeti kolorimeetriliste ensümaatiliste reaktsioonide abil spetsiifiliste komplektidega (glükoosi ja NEFA PAP 95 komplektid, BioMérieux, Marcy-l'Etoile, Prantsusmaa). Hormone analüüsiti spetsiifiliste ELISA komplektidega, järgides tootja juhiseid insuliini ja leptiini kohta (roti / hiire insuliini ELISA komplekt, roti leptiini ELISA komplekt, Linco Research, St. Charles, MO, USA).

Immunohistokeemia

Seeria VTA- ja NAc-sektsioone sisaldavad klaasklaasid blokeeriti esmalt 3-4 h jaoks ja inkubeeriti seejärel üleöö 4 ° C juures järgmiste antikehade seguga: hiire anti-NeuN (1: 500; IgM; Millipore bioscience Research Reagents, Merk, USA) ja küüliku anti-TH (1: 1,000; Millipore bioscience Research Reagents, Merk, USA). Pärast inkubeerimist primaarsete antikehadega ja järgnevat pesemist PB-ga inkubeeriti sektsioone sekundaarsete antikehade segus: Alexa 488 konjugeeritud eesli anti-hiire IgM ja Alexa 568-konjugeeritud eesli anti-küüliku IgG (1: 500; Invitrogen, ThermoFisher Scientific, Waltham , MA, USA) 2 h jaoks. Sektsioonid paigaldati superfrostile ja kulla slaididele (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA), õhu käes kuivatatud ja kaeti ProLong ™ Gold antifade reagendiga (Invitrogen, ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA).

TH Neuronite arv VTA-s

Iga roti jaoks loendati TH-positiivsed rakud, nagu eelnevalt kirjeldatud () kolmes erinevas VTA rostrokaudalises tasemes: kolmanda närvi väljumise tasemel (kaugus Bregma suhtes: −5.3 mm), 200 µm rostraal ja 200 µm selle taseme caudal (joonised (Joonised6A) .6A). Vasakule ja paremale küljele saadi digiteeritud pilt, mis sisaldab kogu VTA-d lisaterminaaltraktist keskmiselt mesencephaloni külgseina suhtes, kasutades NanoZoomer-XR digitaalse slaidiskanneri × 40 suurendust C12000 (Hamamatsu, Jaapan). Igale sektsioonile tõmmati VTA ümbermõõdu ümber joon. Piirid valiti, uurides rakkude kuju ja viidates Paxinos ja Watsoni atlasele. Dopamiinergiline neuron määratleti selgelt nähtava tuumaga NeuN (+) / TH (+) immunoreaktiivse raku kehana. Kasutades NIH Image J tarkvara (raku loendaja plugin), loendati NeuN (+) / TH (+) rakud kahe erineva isiku poolt, kes ei teadnud loomade rühmi. Jaotatud rakkude loendusvead korrigeeriti Abercrombie valemiga (), kus N = n[t/(t + d)] (N = lahtrite koguarv; n = loendatud rakkude arv; t = sektsiooni paksus; ja d = raku läbimõõt) ja see parandustegur oli 0.65. Andmed väljendatakse keskmiselt [NeuN (+) / TH (+) vasakul ja paremal VTA-s] ± SEM.

TH kiudude tihedus NAc-s

TH-valgu sisaldus NAc dopamiinergilistes närvilõpmetes määrati TH immunomärgistatud lõigete anatoomilise densitomeetrilise analüüsi abil. TH-kiudude tihedus kvantifitseeriti kolmel suvalisel tasemel mööda NAc rostrokaudset telge (Bregma 2.20, 1.70 ja 1.20 mm) (joonis fig. (Joonis6B) .6B). Lühidalt, digiteeritud pilt, mis sisaldab kogu striatum ja NAc, mis saadi nanoZoomer-XR digitaalse slaidiskanneriga × 40 suurendusega C12000 (Hamamatsu, Jaapan). Antud NAc puhul tõmmati kogu tuuma ümber joon, et määrata optilise tiheduse (OD) mõõtmise ala (joonis fig (Joonis6B) .6B). Saadud väärtus normaliseeriti OD-väärtusega, mis oli mõõdetud sama sektsiooni ümmarguse tsooniga, mis oli tõmmatud sama sektsiooni corpus callosum'ile (piirkond, mis ei ole värvitud TH-i immunokeemiale), kasutades NIH Image J tarkvara. Andmed on väljendatud OD suhtena (OD väärtus NAc / OD väärtuses kolme sektsiooni corpus callosumis) ± SEM.

Geeni ekspressioon TLDA ja TaqMani poolt

RNA isoleeriti küllastunud NAc, VTA-ga rikastatud proovidest ja hüpotalamusest, kasutades NucleoSpin RNA / valgu komplekti (Macherey-Nagel, Hoerdt, Prantsusmaa). Üldine RNA viidi läbi DNaasi lõhustamisse vastavalt tootja juhistele, kogus hinnati UV neeldumise järgi 260 / 280 nm ja kvaliteet hinnati kasutades Agilent 2100 Bioanalyzer süsteemi, seejärel arvutati RNA terviklikkuse number (RIN). Proovid, mille RIN oli alla 8, visati ära. Üks mikrogramm kogu RNA-d transkribeeriti cDNA-ks, kasutades suure võimsusega RT komplekti (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) 10 µl kogumahus.

Nagu eelnevalt kirjeldatud () on TLDA 384-süvendiga mikro-vedelikukaart, millele saab teha 384i samaaegset reaalaja PCR-i (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Me kasutasime spetsiaalselt projekteeritud TLDA-d, mis on tehtud erinevate geeniperede katmiseks, mis on olulised plastilisuse ja toidu tarbimise reguleerimise seisukohast. Iga kohandatud kaart oli konfigureeritud kui 2 × 4-proovi laadimisliinid, mis sisaldavad 2 × 48 reaktsioonikambreid (viide: 96a). 92-geeni komplekt (tabel S1 täiendavas materjalis) ja nelja majapidamisgeeni (18S, Gapdh, Polr2a ja Ppia) uuriti. Reaalaja PCR viidi läbi, kasutades Life Technologies TaqMan reaktiive ja töötades ABI Prism 7900HT järjestuse tuvastamise süsteemis (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Toor-fluorestsentsi andmed koguti PCR-i abil, kasutades SDS 2.3 tarkvara (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), mis genereeris täiendavalt künnistsükleid Ct, lähtudes nii algtaseme kui ka künnise automaatsest määramisest. Pärast filtreerimist, kasutades ThermoFisheri pilvrakendust (ThermoFisher, USA), et eristada kõrvalekalduvaid PCR-sõite, olid proovid proovid. n = 6 (n = 5 WD rühmas P25 juures). Seejärel analüüsiti andmeid suhtelise kvantifitseerimise jaoks ThermoFisher Cloud Appiga (ThermoFisher, USA). Geeniekspressiooni (RQ) suhteline kvantifitseerimine põhines võrdleval Ct-meetodil, kasutades võrrandit RQ = 2−ΔΔCt, kus ΔCt ühe geeni sihtmärgi jaoks oli tema enda Ct variatsioon, mis lahutati kalibraatori proovist ja normaliseeriti endogeense kontrolliga. Täpsemalt määrasime kõige stabiilsema majapidamisgeeni, kasutades geNorm algoritmi (ThermoFisher Cloud App RQ, ThermoFisher, USA). Nelja majapidamisgeeni hulgast defineeriti Gapdh kui NAc ja hüpotalamuse endogeenne kontroll ja Ppia VTA jaoks ning see kehtib kõigi kolme analüüsitud ajavahemiku proovide kohta. Geenide ekspressiooni graafiline esitus oli käsitsi loodud selleks, et määrata ühele värvile geeniekspressiooni 10% suurenemine CD-rühma suhtes. Märkimisväärset variatsiooni, kasutades mitteparameetrilist Wilcoxoni allkirjastatud auastet, täheldati tärniga.

Statistiline analüüs

Tulemused on väljendatud tabelites ja arvudes keskmisena ± SEM. Mann-Whitney mitteparameetrilist testi kasutati kehakaalu analüüsimiseks erinevatel ajahetkedel, rasva eelistused ja OD suhe, mis saadi immunohistokeemiast.

3-päevaste rasvade eelistuste olulisuse hindamiseks teostasime iga päeva kohta veergu statistilise analüüsi. Iga rühma puhul testiti rasva lahuse ja kontrolllahuse tarbimist, kasutades mitteparameetrilist Wilcoxoni allkirjastatud testi. Me võrdlesime eelistuse keskmist väärtust hüpoteetilise väärtusega 50% (punane punane joon). Märkimisväärseid erinevusi täheldati punase tärniga. Me kasutasime sama testi qPCR RQ väärtuse analüüsi jaoks; võrdlesime keskmist RQ väärtust 1i hüpoteetilise väärtusega. Märkimisväärseid erinevusi täheldati tärniga (joonis 1) (Joonis44).

Joonis 4 

Suhteline geeniekspressioon tuuma accumbensis (NAc), ventral tegmental area (VTA) ja hüpotalamiin perinataalsest-läänest toitumisest toidetud rottidel ja perinataalset kontrolli omavatel toitudel rottidel kolmel perioodil. Geenide ekspressiooni samaaegne kvantifitseerimine ...

Plasmaproovi analüüsi jaoks teostasime mitteparameetrilise Mann ja Whitney testi. TH-positiivsete rakkude arvu analüüsiti kahesuunalise ANOVA ja p väärtus arvutati. Rakendatud testide mitmekesisuse tõttu on Bonferroni post hoc korrigeerimist järgiti ainult seda testi. Statistiline analüüs viidi läbi kasutades Prism 6.0 tarkvara (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA).

Esmalt teostati järelevalveta PCA 130 parameetritega (TLDA, käitumine ja plasma andmed) iga ajahetkel iga aju biopsiaga (VTA, NAc ja hüpotalamuse) jaoks, et visualiseerida andmekogumi üldstruktuuri (st kolm globaalset PCA-d). ajapunkti kohta). PCA-d võib defineerida kui andmete ortogonaalset projektsiooni alumise mõõtmega lineaarsesse ruumi, nii et projitseeritud andmete variatsioon on alamruumis maksimaalne. Me filtreerime esmalt välja geenid, mida ei ekspresseerita või mis on veidi väljendunud (joonis (Joonis5) .5). CD-sse sattunud tammistelt ja WD-sse sattunud tammistelt pärinevate järglaste väärtused ilmusid erinevates PCA proovitükkides erinevates värvides, et visualiseerida, kas need kaks eksperimentaalset rühma on hoolimata PCA komponentidega hästi eraldatud. See analüüs eraldab geenide rühmad, mis on erinevalt ekspresseeritud kahe järglase rühma vahel. Seejärel tehti kontsentreeritud PCA-sid erinevatel mRNA markerite klastril: plastilisus (raku adhesioon, tsütoskelett, neurotroofne faktor, sünaptogenees ja transkriptsiooni regulatsioon), DA-rada, GABAergiline rada, epigeneetilised modulaatorid (histooni deatsetülaas ja histooni atsetüül transferaas). Need keskendunud PCA-d võimaldavad visualiseerida samaaegselt emasloomade ja teatud markerite ja spetsiifiliste perekondlike geenide vahelisi seoseid. PCA ja fokuseeritud PCA analüüsimiseks kasutati kvalitatiivset skaalat: +++: väga hea eraldamine; ++: hea eraldamine ühe rotiga PCA eraldamise valel poolel; +: üsna hea eraldamine kahe rottiga (üks iga rühma) valel poolel, -: puudub selge eraldatus.

Joonis 5 

Põhikomponentide analüüs (PCA). PCA skoori skemaatiline skeem (A, B). (A) P95-i rottide isaste tuuma accumbens (NAc) proovide globaalne PCA. Mustad kolmnurgad vastavad kontroll dieedist (CD) toidetud tammide järglastele ja punased kolmnurgad vastavad järglastele ...

Tulemused

Kehakaal ja kasv

Raseduse ajal raseduse ajal (alates G1-st G21-ile) ei mõjutanud emade WD-d poegade kehakaalu sünnil (joonis fig. (Joonis2) 2) (CD: 6.55 ± 0.07 g vs WD: 6.54 ± 0.05 g p = 0.9232) (joonised (Joonised2A, B) .2A, B). Kehamassikasv alates sünnist kuni võõrutamiseni oli WD-dammidest sündinud järglaste puhul 21% suurem kui CD-dammide järglastel, kelle kehamass oli oluliselt suurem võõrutamisel WD-dammidest (36.19 ± 0.90 g vs 47.32 ± 1.48 g p <0.001) (joonis (Joonis2C) .2C). Alates võõrutamisest kuni katse lõpuni (P95) söödeti rottidele standardset sööda dieeti ja kehamass jäi järglastele kõrgemaks WD tammistelt kui CD-dammide järglastelt. Üksikasjalikult: noorukieas (P39) (joonised (Joonised2A, D), 2A, D), CD: 176.8 ± 3.3 g vs WD: 192.2 ± 3.3 g p = 0.0016 ja P93 juures (noor täiskasvanu) (joonised (Joonis 2A, E) 2A, E) CD: 478 ± 9.9 g vs WD: 508.6 ± 10.3 g p = 0.0452.

Joonis 2 

Järglaste kehakaalu areng sünnist täiskasvanueani. (A) Kehamassi päev 0 päeval 100. Imetamisperiood punasel ja järeljaotamisperioodil (c) lapsepõlv, d) noorukieas ja e) hallid noored täiskasvanud. Kasvukõveral on kontroll-dieedi isased järglased ...

Hormonid ja metaboolsed markerid erinevatel ajaperioodidel

Plasma leptiini, insuliini, glükoosi ja NEFA kontsentratsioone mõõdeti P25, P45 ja P95. WD järglaste plasma glükoosisisaldus, NEFA ja leptiin ei olnud igas vanuses statistiliselt erinev CD järglastest (tabel (Table2,2, n = 6 rühma kohta). Me täheldasime rasvkoe sadestumise (retroperitoneaalse rasva massi suhe) olulist suurenemist ainult W25-ga söödetud tammide järglastel PXNUMX juures (p = 0.0327, Manni ja Whitney test).

Tabel 2 

Retroperitoneaalse rasva massi suhe ja plasma annus: glükoos; insuliin, NEFA ja leptiin.

Perinataalse WD mõju rasvade eelistustele võõrutamisest täiskasvanueani

Et uurida WD mõju rasva eelistustele, kasutasime kasvu ajal kolme erineva ajahetkel kahe pudeli valiku paradigma. Seda testi kasutati selleks, et uurida konkreetselt rasva maitse eelistamist, vältides nii palju kui võimalik selle allaneelamise metaboolset toimet. Näitasime, et erinevused “ekstra” kalorite tarbimisel pudelist (P25, P45 ja P95) ei ole statistiliselt olulised rühmade vahel (joonised S1A – C täiendavas materjalis). Veelgi enam, 1% maisiõli lahuse tarbimise erinevus toob kaasa kalorite suurenemise 1% -ga WD rottidel P25is (WD: 4.9% vs CD: 3.9% neeldunud kaloritest) ja 0.5% CD rottidele P45-is (WD: 2% vs CD: 2.5% neelatud kaloritest (joonised S1D – F täiendavas materjalis). P25i puhul ei ole CD-dammide poegadel eelistatud rasva (44.87 ± 9.8%, p = 0.339); vastupidisel WD rottidel on rasva eelistus (75.12 ± 8.04%, p = 0.039 pärast Wilcoxoni allkirjastatud testi, punane tärn). Pealegi on nende kahe rühma vahel statistiline erinevus p = 0.0347 (Manni ja Whitney test, must räsimärk) (joonis fig (Joonis33A).

Joonis 3 

Rasva eelistuse arengu areng võõrutamisest täiskasvanueas. (A) P25, P45 ja P95 esimesed rasvaprefektid. Igas ajapunktis kasutati erinevaid loomi (n = 6 / rühm / ajapunkt). (B) Kolm järjestikust rasvapäeva ...

P45i ja P95i puhul eelistavad kaks rühma rasva eelist, st oluliselt erinevad 50% teoreetilisest väärtusest (P45, CD: 80.68 ± 2.2%). p = 0.0005 ja WD: 78.07 ± 3.25% p = 0.0005; P95 juures, CD: 74.84 ± 8.4% p = 0.0425 ja WD: 69.42 ± 8.9% p = 0.109 pärast Wilcoxoni signeeritud järgu testi, punane tärn) (joonis fig (Joonis3A) .3A). Mõlema rühma väärtused ei olnud ühe päevase maitseesitluse järel P45is eristatavad p = 0.7857 ja P95 juures p = 0.9171 Mann – Whitney test) (joonis (Joonis33A).

Et teada saada, kuidas rotid nende rasva tarbimist aja jooksul reguleerivad, kordasime P45i ja P95i rasvade esitamist kolmel järjestikusel päeval (joonised (Joonis 3B, C) .3B, C). Huvitav on see, et P45i puhul kaotasid vaid WD-dambide isased rasvlahuse eelistuse (joonis fig. \ T (Joonis3B) 3B) (kolmas päev: 53.12 ± 8.36% p = 0.851 pärast Wilcoxoni allkirjastatud testi). Kuid P95 (täiskasvanud vanus) puhul eelistasid kõik loomad 3-päevase katse ajal rasva ilma evolutsioonita (joonis fig (Joonis33C).

Kokkuvõttes täheldasime selles mudelis varases staadiumis (lapsepõlves) eelistust rasvale rottidel, keda toideti WD-tammid, kusjuures noorukieas oli aja jooksul progresseeruv huvi. Me ei täheldanud täiskasvanueas kahe rottide rühma vahel mingit erinevust.

Aju plastilisuse ja GABA ahelate remodelleerumine hüpotalamuse ja preemiade teedel

Et kindlaks teha, kas emaslooma raseduse ja imetamise ajal raseduse ja imetamise ajal on mõju hüpotaalamusele ja järglaste tasustamisele, mõõdeti mitmete peamiste aju plastilisuse, aju modelleerimise ja toidutarbimise ja epigeneetiliste neuronite ahelate markerite suhtelist avaldumist. reguleerijad. Me kasutasime TLDA-d, et analüüsida nende arvukust erinevates aju piirkondades (st hüpotalamuse, VTA ja NAc) (tabel S1 täiendava materjalina) kolmel ajavahemikul. Sõelumine viidi läbi pärast P25i, P45i ja P95i kahekordse valiku katseid (joonis fig. (Joonis1) 1) kuuelt meessoost isalt, kes on sündinud WD-sse söödetest tammistest ja kuuest mehest, kes on sündinud CD-s \ t

Hüpotalamuse P25-i puhul näitasid viis geeni kolmeteistkümnest erinevast kategooriast oluliselt madalama mRNA ekspressioonitaseme, peamiselt plastilisuse markerites ja GABA markerites, mis olid vahemikus -20% (Gfap) ja -40% (Gabra5), WD-s kasutatavatelt tammidelt. CD-ga varustatud tammid. Tasuliste biopsiate (VTA ja NAc) puhul ilmnes kahel geenil statistiliselt kõrgemad mRNA ekspressioonitasemed (D2R ja Gabra1), st DA signaali ja GABA retseptorid ning üks geen madalama ekspressiooniga (Hcrtr2) (st oreksiini 2 retseptor) NAc-s , samas kui neljal geenil oli oluliselt suurem mRNA ekspressioonitase (Map2, Gabara1, Hcrtr1 ja Hcrtr2) (st plastiilsuse markerid, GABA retseptorid ja serotoniinergilised retseptorid) VTA-s (joonis fig. (Joonis44).

Hüpotalamuse P45-i puhul näitasid viis geeni kolmeteistkümnest erinevast kategooriast madalama mRNA ekspressioonitaseme vahemikus -20% (Fos) ja -50% (FosB) WD-sse toidetud tammide poegadel võrreldes CD-ga varustatud tammide rottidega. P45is tasustamisradade biopsiatel ilmnes neljal geenil kõrgem mRNA ekspressioonitase (Gfap, Dat, Cck2r ja Kat5) ja kaks geeni madalam ekspressioon (Fos ja FosB) NAc-s, samas kui kolm geeni näitasid madalamat mRNA ekspressioonitaset (Arc, FosB ja Th) ja üks geen kõrgemal tasemel (Gabrg2) VTA-s.

P95is hüpotalamuses näitasid 20i geenid kolmeteistkümnest erinevast kategooriast kõrgemat mRNA ekspressiooni taset vahemikus + 20 ja + 40% (Syt4 kuni Gjd2) ja 3 geenidel oli madalam mRNA ekspressioon (FosB, D1r ja Gabarb1) WD poegadel toidetud tammid võrreldes CD-ga varustatud tammi rottidega. P95is tasustamisradade biopsiatel oli 12 geenidel kõrgem mRNA ekspressioonitase vahemikus + 20 ja + 40% (Syn1 kuni Hcrt1) ja 1 geeni madalam ekspressioon (Th) NAc-s, 6 geenidel oli suurem mRNA ekspressioonitase (Ncam1 Gja1, Gjd2, Gabra5, Htr1a ja Htr1b) ja 6 geenidel oli madalam mRNA ekspressioonitase (Cntf, Igf1, Fos, Socs3, Gabrb2 ja Hdac3) VTA-s.

Seejärel teostasime kolm järelevalveta PCA-d, mis vastas kolmele aju biopsiale, kasutades kõiki kvantifitseeritud parameetreid (st plasma annust, käitumuslikke andmeid ja mRNA ekspressiooni variatsioone). Kahe rühma selge eraldamine saadi ainult P95is NAc ja VTA jaoks (tabel (Table33).

Tabel 3 

Peamine komponentide analüüsi (PCA) süntees: PCA rühma eraldamise kvalitatiivne analüüs ülemaailmse PCA ja fokuseeritud PCA jaoks.

Vastavalt PCA korrelatsioonipiirile ja TLDA andmetele (mis esindavad enamikku selles PCA-s sisalduvatest muutujatest) määratlesime geeniperekonnad, mis võiksid olla segregatsiooni eest vastutavad ja teostanud fokuseeritud PCA (joonised (Joonised5A, B, 5A, B). Keskendunud PCA näitas, et P25 DA markerites NAc-s ja hüpotalamuse plastilisuse markerid võivad eraldada kaks järglaste rühma (tabel (Table33 kokkuvõtteks). P45is sellist diskrimineerimist ei saadud. Samas näitas P95i analüüs sama, et GABA süsteemi erinevad markerid NAc-s ja hüpotalamuses ning plastiilsuse markerid (hüpotalamuses, NAc-s ja VTA-s) ja epigeneetilised regulaatorid (ainult NAc-s) aitavad eraldada kaks loomarühma ( Joonis (Joonis5; 5; Tabel Table33).

See analüüs näitab perinataalse toitumise pikaajalist mõju nii GABAergilistele markeritele kui ka plastilisusele ja epigeneetilistele markeritele nii homöostaatilises kui ka sööda käitumisega seotud tasu teekonnas.

TH-rakkude kinnitatud transkriptsiooni analüüsi immunohistokeemia

Kuna me täheldasime THc-s ja VTA-s TH-mRNA mõningaid varieerumisi erinevatel arenguperioodidel, soovisime need tulemused korrigeerida TH-i immunovärvimisega. TH / NeuN-positiivsete rakkude arvu analüüsiti VTA-s, kus paiknevad dopamiinergiliste rakkude kehad ja TH-i immunomärgistuse OD määrati NAc-s paiknevates närvilõpmetes. TH (+) rakud olid WD VTA-s vähem rikkad kui ainult P45i CD-rottidel (joonised (Joonised6A, C, E; 6A, C, E; Joonis S2A täiendavas materjalis). Kolme perioodi jooksul ei esinenud olulist koostoimet sektsiooni taseme ja TH / NeuN kvantifitseerimise vahel (P25 p = 0.9991, P45 p = 0.9026 ja P95 p = 0.9170). Ainult P45 juures saadi statistiline erinevus kahe järglase vahel (p = 0.0002) (joonis (Joonis6E) .6E). Lisaks ei täheldatud, et kahe immunoglobuliini immuunvärvimise OD-i erinevus P25-i ja P45-i vahel oli kahes rühmas erinev (OD suhe väärtused P25is: 1.314 ± 0.022 CD-s vs 1.351 ± 0.026 WD-s, p = 0.2681; OD suhte väärtused P45 juures: 1.589 ± 0.033 CD-l ja 1.651 ± 0.027 WD-l, p = 0.1542). Siiski leiti TH-närvilõpmete OD oluline vähenemine WD rühma NAc-s P95 juures (OD suhte väärtused p95 juures: CD-s 1.752 ± 0.041 ja WD-s 1.550 ± 0.046, p = 0.0037) (joonised (Joonised6B, D, F; 6B, D, F; Joonis S2B täiendavas materjalis).

Arutelu

Selles uuringus hüpoteesime, et ema perinataalne üleregistreerimine mõjutab energia homeostaasi, toidu valiku ja järglaste toitumisharjumuste väljatöötamise programmi. Uurisime põhjalikult emas-WD-ga sissevõtmise mõju sünnist kuni võõrutamiseni GABA, serotoniini ja DA-ga teatud aju piirkondade (VTA, NAc ja hüpotalamuse) järglastel, alates lapsepõlvest kuni täiskasvanueani. Meie tulemused näitavad, et rasva ja magusate toitude kasutamine, mis on rangelt piiratud perinataalse perioodiga, mõjutab varajase rasva eelistust (lapsepõlve) järglaste puhul, mis on seotud geeniekspressiooni profiili ja mesolimbilise neuroanatoomiliste / arhitektuuriliste muutustega. dopamiinergilised võrgud. Kui järglasi peeti söögitoidu all, täheldasime noorukite WD-s toidetud rottidel progressiivset atraktiivsuse vähenemist rasva suhtes, mis korreleerus DA-süsteemi geenide vähenenud ekspressiooniga ja TH-positiivsete neuronite vähese vähenemisega VTA-s. . Hiljem ei olnud rasvade eelistamine gruppide lõikes erinev, kuigi WD-ga söödetud tammide rottidel täheldati GABAergiliste võrkude ja hüpotalamuse energia homeostaasi võrgustiku olulist plastilisust (joonis (Joonis77).

Joonis 7 

Graafiline abstrakt. NAc, nucleus accumbens; VTA, ventral tegmental area.

Selles uuringus täheldatud esimese perinataal-WD tarbimise mõju on järglaste suurenenud kehakaalu võõrutamisel, kuid sünnihetkel ei ole erinevusi. Tõepoolest, WD-grupi loomad saavad imemisperioodi lõpus 21-i massi rohkem kui CD-ga. Varasemad uuringud on andnud vastuolulisi tulemusi seoses sünnikaalu muutumisega WD-ga toidetud tammide järglaste puhul: suurem kehakaal (, ), väiksem kehakaal (, , ) või mingit erinevust (, ). Meie andmed on kooskõlas hiljutise meta-regressioonianalüüsiga () läbi viidud 171i eksperimentaalsetes väljaannetes, mille põhjal järeldati, et emasloomade HFD kokkupuude ei mõjutanud järglaste sünnikaalu, kuid põhjustas imetamisperioodi lõpus suurema kehakaalu. WD järglaste kõrgem kehakaalu peegeldab tõenäoliselt piima koostise ja / või piimatootmise muutus, mida on näidatud varasemates väljaannetes (, ). Vastavalt nende suuremale kehakaalule oli WD järglaste retroperitoneaalse rasva suhe imetamisperioodi lõpus märgatavalt kõrgem kui CD järglastel (P25, tabel Table2), 2), mis on kooskõlas ka eelmiste uuringutega (, ). Siiski ei püsinud P45i ja P95i puhul suurem rasvumine ja teised metaboolsed parameetrid, nagu insuliin, NEFA ja glükoosiplasm, ei erinenud rühmades. Meie tulemused näitasid, et kui ema rasvumine raseduse ja imetamise ajal ei ole selge, ei ole toitumine iseenesest piisav, et kutsuda esile püsivaid metaboolseid toimeid järglastel (, , ).

On teatatud, et perinataalne HFD tarbimine korreleerub positiivselt maitsva toiduga järglaste eelistustega (). Meie uuringus tegime pikisuunalise uuringu, mille eesmärk oli testida rasva eelistusi järglastele, kes võõrutatakse tavalisel lehmal.

Perinataalse WD mõju lapsepõlvele (pärast võõrutamist)

Närilised pojad söövad tahket toitu 19 – 20 päeva pärast sündi () kui nende aju tasu teed ei ole veel küpsed (). Seetõttu oli väga huvitav uurida nende väga varajast eelistamist rasvale ja korreleerida seda varajast eelistust aju transkriptsioonianalüüsiga. Vahetult pärast võõrutamist täheldasime, et WD järglastel eelistati rasva, mida CD rottidel ei tõendatud. See on kooskõlas teiste aruannetega, mis näitavad seost perinataalse alatoitumise ja maitsva toidu eelistuse ja vähese eelistatud rasva eelistuse vahel kontrollrottidele ().

Ülemaailmne PCA ei võimaldanud poegade rühma diskrimineerimist emade toitumise osas selles vanuses. Kui aga teostati sihtmärk-PCA, mis piirdus DA-markeritega, saime rühmade hea eraldatuse. Tõepoolest, DDNUMX-i retseptori mRNA-de ekspressioon on märgatavalt suurenenud WD poegade NAc-s. See postünaptiline D2i üleekspressioon NAc-s võib osaliselt olla seotud rasva suurema motivatsiooniga (). Vähesed muud transkriptid modifitseeritakse WD poegadel võrreldes CD poegadega, nagu näiteks alfa-1 GABAA subühiku suurenemine NAc ja VTA-s ning alfa-5 GABAA subühiku vähenemine hüpotalamuses, mis viitab GABAA retseptorite ümberkorraldamisele nendes tuumades.

Perinataalse WD mõju noorukieas

P45i korral täheldasime esmakordsel esituspäeval mõlemale rühmale sarnast kõrge rasvasisaldusega eelistust, kuid huvitavalt kaotasid WD rotid järjest korduvalt rasva huvi rasva vastu. Nooruk on elutähtsa kognitiivse töötlemise jaoks vajaliku neurovastase käitumise ümberkorraldamise kriitiline periood () ja mitmesugused uuringud näitasid, et rasvasisalduse kahjulik kognitiivne mõju on \ t-). See tulemus on ilmselgelt vastuolus Muhlhausleri grupi eelmise tööga (, ) kus juveniilirottidel (6 nädalatel) oli selge eelis rämpstoitu. Kuid nende väljaannetes oli eksperimentaalne paradigma erinev, sest rottidel oli vaba juurdepääs nii standardse kui ka rämpstoidu jaoks võõrutamisest kuni ohverdamiseni (6 nädalat).

Samaaegselt mõõdeti Dat-mRNA suurenemist NAc-s ja Th mRNA vähenemist VTA-s, mida kinnitas immunohistokeemia, mis näitas WD rottide VTA-s vähenenud TH (+) rakkude arvu. Pärast DA süsteemi suurenenud transkriptoomilist aktiivsust võõrutamise ajal võib P45i vähendatud aktiivsus selgitada meie WD rottidel täheldatud maitsva toidu madala huvi. Samuti tuleb märkida, et Fos ja FosB mRNA ekspressiooni süstemaatiline vähenemine erinevates tuumades, mida me analüüsime, võib olla ema WD ekspositsiooni järgse vähenenud aju aktiivsuse märgiks.

Noorte WD rotid näitasid rasva suhtes kiiremat huvi, mis on vastuolus nende varasema käitumisega. „Normaalse” dieedi kasutamine lapsepõlves tundub, et “kaitseb” neid ülemäärase rasva eelistuse suunas noorukieas. Vastupidi, kui rottidel on pärast võõrutamist vaba juurdepääs rämpstoidule, nagu on toodud viites nr. (, ) näitavad noorukieas rasvade eelistamist. See tulemus viitab sellele, et 3i nädala söögiravim pärast võõrutamist oleks võinud ümberplaneerida vooluahelad ja muuta noorukite järglased akuutse rasvaprobleemi suhtes vähem tundlikuks.

Perinataalse WD mõju täiskasvanutele

Täiskasvanud rottidel ei esinenud enam rasvade eelistuse erinevust isegi pärast ülalkirjeldatud korduvat rasvasisaldust (, ). Samaaegselt täheldasime NA-s Th-mRNA ja valgu vähenemist ning tendentsi Dat-mRNA vähenenud ekspressioonile VTA-s. Naef ja töökaaslane () on juba teatanud DA-süsteemi madalast aktiivsusest täiskasvanud rottidel, keda toideti perinataalsel perioodil koos HFD-ga, mille blutseeritud DA-vastus amfetamiinile mõõdeti mikrodialüüsi abil ja rasva tasu suurendamise motivatsioon (vt tabelit, milles on kokku võetud viimased qPCR-andmed selle mudeli kohta, Tabel S2 täiendavas materjalis). TH kvantifitseerimise üks piirang (mRNA ja immunohistokeemia) NAc-s tuleneb asjaolust, et NAc rakud võivad ekspresseerida ka Th mRNA-d ja valku ning seejärel võiksid DA-kiudude kvantifitseerimist (, ). Kuid TH-i immunovärvimise kasutamine NAc-s näitas peamiselt tihe aksoniterminaale, mis tulid keskjoonest DA-neuronitest (VTA ja SNc). Tavaliselt võib striatumis ja NAc-s ekspresseerivaid neuroneid eristada ainult väga kahjustatud loomadel () ja seetõttu võib see olla meie immunosektsioonides vaevalt tuvastatav. Selles uuringus täheldati ka me opioidiretseptori tugevat suurenemist NAc-s, kui teised grupid, kellel oli erinevad mudelid, näitasid rottide ventraalses striatumis vähenenud ekspressiooni HFD-ga (imetamise ja raseduse ajal)., ) või muutusteta (). Need modifikatsioonid, mida mõõdeti ainult mRNA tasemel, võivad peegeldada DA-ahelate väikest hüpoaktiivsust, mis on seotud kõrgema opioiditundlikkusega () mis tõenäoliselt ei ole piisavad, et mõjutada meie läbiviidud käitumiskatset. Neid eeldusi tuleb kinnitada funktsionaalsete lähenemisviisidega. Hiljutises raamatus, sarnase mudeliga, ei suutnud Romani-Perez et al. Täheldada HFD järglaste operant-konditsioneerimiskastide motivatsiooni olulist suurenemist, kuid täheldasid lühemat latentsust, et jõuda rajakasti katseraja testimise paradigmas (). Vaatamata pikaajalistele rasvade eelistustele meie katsetingimustes, leidsime, et perinataalsel emal WD-s on pikaajaline toime teistele ajuahelatele, mida vahendab peamiselt GABA remodelleerimine NAc-s ja hüpotalamuses. NAc-d peetakse äratundliku käitumise „sensoorseks kontrolliks” (). Hiljutised uuringud on näidanud, et GABA vabastavate LH neuronite inhibeerimine pärssis toidu tarbimist.). O'Connor et al. näitas, et NAc D1R neuronid (GABAergilised projitseerivad neuronid) inhibeerivad selektiivselt LH VGAT neuroneid toidutarbimise peatamiseks (). Need katsed tutvustavad GABA ahelat (NAc / hüpotalamuse), mis võib olla vastutav käitumusliku vastuse kontrollimise eest. See ventraalne striatum-hüpotalamuse süsteem täiendab teist ahelat, mis hõlmab glutamaadile vabastavat GABA-vabastavat VGAT-i närvirakkude struktuuri, mis vabastab Vgluti LH neuroneid ja LH vglut2i otsest pärssimist põhjustab söötmine (). Teine oluline osa NAc kesta hõlmavale söögiisu reguleerivale ahelale on GABA vabastav inhibeeriv projektsioon VP-le (). Need andmed rõhutavad GABA signaaliülekande olulist rolli hüpotalamuse ja NAc vastastikuses koostoimes toitumise soodustamiseks. Meie uuringus ei suutnud me eristada GABA remodelleerumisega seotud neuronite populatsiooni ja seda, kuidas need modifikatsioonid võrke muudaksid. GABA ahelate keskne roll väärib siiski rohkem huvi. Eriti oleks väga huvitav teostada nende GABA ahelate täiendavaid funktsionaalseid katseid, kasutades elektrofüsioloogilisi lähenemisi (). Me täheldasime ka mRNA transkripti globaalset ülesreguleerimist 5HT1a ja 5HT1b retseptoritele kolmes uuritud tuumas. Enamik väljaulatuvatest serotoniini kiududest pärineb seljajooksust (DRN) ja keskmisest raphe tuumast (MRN). Viimased andmed in vivo salvestused ja pildiuuringud näitasid 5HT positiivset rolli tasus (). DRN-i 5HT kiud on seotud impulsiivsuse kontrollimisega (). 5HT1a suurenemine VTA-s ja NAc-s võib olla kompenseeriv mehhanism, mis võib kontrollida impulsiivsust. Hüpotalamuses viitavad farmakoloogilised uuringud, et 5HT1a retseptori alatüübid võivad pärssida serotoniini stimuleerimisest põhjustatud toitumisharjumusi (, ). Hüpotalamuse suurenenud 5HT1a ja b retseptorid võivad võimendada serotoniini söötmise supresseerivat toimet ja seega võiksid nad olla kompenseerivaks mehhanismiks. Neid eeldusi tuleb kontrollida nõuetekohaste funktsionaalsete katsetega.

Need võrkude muutused on seotud plastilisuse markerite modifikatsioonidega nagu Ncam mRNA. Täiskasvanud rottide hüpotalamuses täheldati Ncam1i ja St8sia4i transkriptide suurenemist, mis viitavad ja suurendasid polüsahhape (PSA) signalisatsiooni. PSA on rakupinna glükaan, mis moduleerib rakkude ja rakkude vahelisi interaktsioone. Rakkude adhesiooniproteiinide polüsialeerimine on seotud mitmesuguste sünaptiliste plastilisusest sõltuvate protsessidega kesknärvisüsteemis ja on teatatud, et see on vajalik toitumisahelate adaptiivseks sünaptiliseks plastilisuseks akuutse positiivse energia tasakaalu ajal (, ). Lisaks võivad selles hüpotalamuse plastilisuses osaleda ka teised raku interaktsiooni ja sünaptogeneesi reguleerijad.

Kokkuvõtteks (joonis. \ T (Joonis7), 7), emade WD-s on pikaajaline mõju järglaste söömiskäitumist reguleerivate homeostaatiliste ja hedooniliste ahelate korraldamisele. Kolme kriitilise ajaperioodi analüüsiga võime näidata rasva eelistuste selget arengut, mis oli seotud spetsiifiliste aju molekulaarsete allkirjadega. Lapsepõlves võib rasva eelistamine olla korrelatsioonis DA-süsteemi kõrgema aktiivsusega. Noorukust, mida iseloomustab rasva eelistuste inversioon, seostati DA süsteemimarkerite madalama ekspressiooniga, mis viitab kompenseerivale mehhanismile. Väga huvitav märkida on see, et tasakaalustatud toitumine pärast võõrutamist võiks selle mudeli puhul kaitsta noorukeid kahjulike toitumisharjumuste eest, vähendades nende soovi rasva järele. Kuigi täiskasvanueas on kahel rühmal samasugune eelistus rasvade suhtes, näitasid WD-söötmega tammid rottidel GABA-ahelate põhjalikku ümberkujundamist. Millised on selle püsiva plastilisuse tagajärjed? Kas ülemäärase rasvumisega dieedi tarbimine noorukieas aktiveerib selle nüristatud tasusüsteemi? Sellised küsimused võivad olla olulised Lääne-Euroopa riikides sündinud ja sündinud laste toitumisalase järelkontrolli puhul.

Eetika avaldus

Kõik katsed viidi läbi vastavalt kohaliku loomade heaolu komitee, ELi (direktiiv 2010 / 63 / EL), Institut National de la Recherche Agronomique (Pariis, Prantsusmaa) ja Prantsuse veterinaarosakonna juhistele.A44276). Eksperimentaalne protokoll kiideti heaks institutsionaalse eetikakomitee poolt ja registreeriti viite APAFIS 8666 all. Kõik ettevaatusabinõud võeti, et minimeerida stressi ja igas katsete seerias kasutatavate loomade arvu.

Autori panused

JP ja PB tegid katse ning osalesid aruteludes ja kirjutamises. TM tegi PCA ja osales aruteludes ja kirjutamises. SN aitas kaasa katse kujundamisele ja osales arutelus. PP aitas kaasa katse kujundamisele, osales aruteludes ja kirjutas käsikirja. VP kavandas ja viis läbi katsed, analüüsis andmeid ja kirjutas käsikirja.

Huvide konflikti avaldus

Autorid kinnitavad, et uuring viidi läbi ilma kaubandus- või finantssuhete puudumisel, mida võiks tõlgendada võimaliku huvide konfliktina.

Tunnustused

Autorid sooviksid tunnistada Guillaume Poupeau'd ja Blandine Castellanot loomade eest hoolitsemise eest kogu uuringu ajal, Anthony Pagniez abi eest mRNA ekstraheerimisel ja TLDA, Isabelle Grit tema abi saamiseks plasma proovide analüüsis ning Alexandre Benani ja Marie-Chantal Canivenc nende kasulik arutelu ja TLDA disain.

Allmärkused

 

Rahastamine. Seda uuringut toetasid piirkonna des pays de la Loire toetus PARIMAD (VP), LCL sihtasutuse toetus (VP ​​ja PP), SanteDige sihtasutus (VP) ja INRA Metaprogram DIDIT (SN, VP, PP).

 

 

Lisamaterjal

Selle artikli lisamaterjali võib leida veebisaidilt http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fendo.2017.00216/full#supplementary-material.

Joonis S1

Koguõli sisaldav maisiõli sisaldav pudel. (A) Kalorite tarbimine maisiõli pudelist 24 h-le P25-is Lääne-toitumise (WD) poegade ja kontroll-dieedi (CD) toidetud tammide poegadel. (B) Kalorite tarbimine maisiõli pudelist 24 h-le P45is (pudelikatse kolmas päev). (C) Kalorite tarbimine maisiõli pudelist 24 h-le P95is (pudelikatse kolmas päev). Paneelidele (A – C), andmed on väljendatud kui keskmine ± SEM, statistilised erinevused puuduvad (p > 0.05) täheldati Manni ja Whitney mitteparameetriliste testide järel igas vanuses. (D) Maisiõli pudelist saadud kalorite protsentuaalne sisaldus on võrreldav kogu kalorite tarbimisega (maisiõli pudel + standardne söögikogus) 24 h-le P25is WD poegadel ja CD poegadel. (E) Protsent kalorite tarbimisest maisiõli pudelist võrdub kogu kalorite tarbimisega (maisiõli pudel + standardne söögikogus) 24 h-le P45is (pudelikatsete kolmas päev) WD poegadel ja CD poegadel. (F) Maisiõli pudelist saadud kalorite protsent võrdub kogu kalorite tarbimisega (maisiõli pudel + standardne sööda dieet) 24 h-le P95is (pudeli kolmanda päeva test) WD poegadel ja CD poegadel. Paneelidele (D, E)andmed on väljendatud protsendina kalorite kogutarbimisest, statistilised erinevused puuduvad (p > 0.05) täheldati igas vanuses Yi parandusega chi-ruutu järgides.

Joonis S2

Esialgsed fotomikrograafid TH-i immuunvärvimisest tuuma accumbensis (NAc) ja ventral tegmental area (VTA) kolmes erinevas ajapunktis. (A) Fotograafia TH / NeuN immuunvärvimisest VTA, -5.30 mm tasemel Bregmast. Punane märgistus on NeuN jaoks ja roheline TH jaoks. Valge nool näitab kolmanda närvi väljumist. (B) Fotomikroskoopia TH immuunvärvimisest NAc tasemel, + 1.70 mm Bregmast. Roheline märgistus on TH jaoks. Valge nool näitab eesmist commissure'i.

Tabel S1

TaqMani madala tihedusega massiivi geenide nimekiri koos vastavate elutehnoloogiatega on inventeeritud koodid.

Tabel S2

Kokkuvõte avaldatud andmetest dopamiini raja transkriptsioonide ekspressiooni kohta. Punased tähemärgid vastavad lapsepõlvele, sinised noorukitele ja mustad täiskasvanutele. =: vastab sarnasele transkriptsiooni ekspressioonile rühmade vahel, +: vastab kõrgema kalorisisaldusega dieedil olevate poegade kõrgemale transkriptsiooni ekspressioonile [rämpstoitu, lääne toitumine (WD) või suure rasvasisaldusega dieet (HFD)], mis on toidetud tammid, ja:: vastab madalama transkriptsiooni ekspressioonile kõrge kalorisisaldusega dieedi (rämpstoitu, WD või HFD) poegadel.

viited

1. Barker DJ. Vanaduse haiguste loote päritolu. Eur J Clin Nutr (1992) 46 (Suppl 3): S3 – 9. [PubMed]
2. Desai M, Gayle D, Han G, Ross MG. Programmeeritud hüperfagia vähenenud anoreksigeensete mehhanismide tõttu emakasisene kasvupiirangutel. Kordus Sci Thousand Oaks Calif (2007) 14: 329 – 37.10.1177 / 1933719107303983 [PubMed] [Cross Ref]
3. Goran MI, Dumke K, Bouret SG, Kayser B, Walker RW, Blumberg B. Kõrge fruktoosiga kokkupuute obesogeenne toime varase arengu ajal. Nat Rev Endocrinol (2013) 9: 494 – 500.10.1038 / nrendo.2013.108 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
4. Levin BE. Metaboolne trükkimine: perinataalse keskkonna kriitiline mõju energia homeostaasi reguleerimisele. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci (2006) 361: 1107 – 21.10.1098 / rstb.2006.1851 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
5. Olson CM, Strawderman MS, Dennison BA. Emade kaalutõus raseduse ja lapse kehakaalu ajal 3i vanuses. Lapse lapse tervis J (2009) 13: 839.10.1007 / s10995-008-0413-6 [PubMed] [Cross Ref]
6. Chen H, Simar D, Morris MJ. Hüpotalamuse neuroendokriinne ahel on programmeeritud emade rasvumisega: koostoime sünnitusjärgse toitumisega. PLoS One (2009) 4: e6259.10.1371 / journal.pone.0006259 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
7. Muhlhausler BS, Adam CL, Findlay PA, Duffield JA, McMillen IC. Suurenenud emade toitumine muudab söögiisu reguleeriva võrgu arengut ajus. FASEB J (2006) 20: 1257 – 9.10.1096 / fj.05-5241fje [PubMed] [Cross Ref]
8. Samuelsson AM, Matthews PA, Argenton M, Christie MR, McConnell JM, Jansen EHJM jt. Naistel hiirte toitumisest põhjustatud rasvumine põhjustab järglaste hüperfagiat, rasvumist, hüpertensiooni ja insuliiniresistentsust. Hüpertensioon (2008) 51: 383 – 92.10.1161 / HYPERTENSIONAHA.107.101477 [PubMed] [Cross Ref]
9. Kenny PJ. Üldised raku- ja molekulaarsed mehhanismid rasvumise ja narkomaania korral. Nat Rev Neurosci (2011) 12: 638 – 51.10.1038 / nrn3105 [PubMed] [Cross Ref]
10. Denis RGP, Joly-Amado A, Webber E, Langlet F, Schaeffer M, Padilla SL jt. Maitseomadused võivad juhtida toitmist sõltumatult AgRP neuronitest. Cell Metab (2015) 22: 646 – 57.10.1016 / j.cmet.2015.07.011 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
11. Stice E, Spoor S, Bohon C, väike DM. Rasvumise ja närbunud striataalse vastuse suhet toidule reguleerib TaqIA A1 alleel. Teadus (2008) 322: 449 – 52.10.1126 / science.1161550 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
12. Frank GK, Reynolds JR, Shott ME, Jappe L, Yang TT, Tregellas JR jt. Anorexia nervosa ja rasvumine on seotud vastasmõju aju tasuga. Neuropsühharmakoloogia (2012) 37: 2031 – 46.10.1038 / npp.2012.51 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
13. Roheline E, Jacobson A, Haase L, Murphy C. Vähenenud tuuma accumbens ja caudate tuuma aktiveerimine meeldivaks maitseks on seotud vananenud inimeste rasvumisega. Brain Res (2011) 1386: 109 – 17.10.1016 / j.brainres.2011.02.071 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
14. Davis JF, Tracy AL, Schurdak JD, Tschop MH, Lipton JW, Clegg DJ jt. Toidu rasvade kõrgenenud tasemega kokkupuude vähendab psühhostimuleerivat tasu ja mesolimbilist dopamiini käivet rottidel. Behav Neurosci (2008) 122: 1257 – 63.10.1037 / a0013111 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
15. Geiger BM, Haburcak M, Avena NM, Moyer MC, Hoebel BG, Pothos EN. Mesolimbilise dopamiini neurotransmissiooni puudused roti toitumise rasvumisel. Neuroteadus (2009) 159: 1193 – 9.10.1016 / j.neuroscience.2009.02.007 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
16. Rivera HM, Kievit P, Kirigiti MA, Bauman LA, Baquero K, Blundell P et al. Emade kõrge rasvasisaldusega toitumine ja rasvumine mõjutavad maitsvat toidutarbimist ja dopamiini signalisatsiooni mitteinimlikes primaatide järglastes. Rasvumine (2015) 23: 2157 – 64.10.1002 / oby.21306 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
17. Gugusheff JR, Ong ZY, Muhlhausler BS. Toiduprefektsiooni varane algus: suunatud kriitilistele arengupunktidele. FASEB J (2015) 29: 365 – 73.10.1096 / fj.14-255976 [PubMed] [Cross Ref]
18. Bayol SA, Farrington SJ, Stickland NC. Raseduse ja imetamise ema „rämpstoidu” toitumine soodustab rämpstoidu maitset ja rottide järglaste suuremat rasvumust. Br J Nutr (2007) 98: 843 – 51.10.1017 / S0007114507812037 [PubMed] [Cross Ref]
19. Vucetic Z, Kimmel J, Totoki K, Hollenbeck E, Reyes TM. Emade kõrge rasvasisaldusega dieet muudab dopamiini ja opioididega seotud geenide metüülimist ja geeniekspressiooni. Endokrinoloogia (2010) 151: 4756 – 64.10.1210 / en.2010-0505 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
20. Naef L, Moquin L, Dal Bo G, Giros B, Gratton A, Walker CD. Kõrge rasvasisaldusega ema muudab dopamiini presünaptilist reguleerimist tuumas accumbensis ja suurendab rasvade hüvede motivatsiooni järglastel. Neuroteadus (2011) 176: 225 – 36.10.1016 / j.neuroscience.2010.12.037 [PubMed] [Cross Ref]
21. Ong ZY, Muhlhausler BS. Rottide tammide ema „rämpstoit” toitmine muudab toidu valikuid ja järglaste mesolimbilise tasu raja arengut. FASEB J (2011) 25: 2167 – 79.10.1096 / fj.10-178392 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
22. Romaní-Pérez M, Lépinay AL, Alonso L, Rincel M, Xia L, Fanet H, et al. Suure rasvasisaldusega dieedi ja perinataalse ekspositsiooni mõju toitumisalastele väljakutsetele, toidu motivatsioonile ja mesolimbilisele dopamiini funktsioonile. Int J Obes (Lond) (2017) 41 (4): 502 – 9.10.1038 / ijo.2016.236 [PubMed] [Cross Ref]
23. Beier KT, Steinberg EE, DeLoach KE, Xie S, Miyamichi K, Schwarz L, et al. VTA dopamiini neuronite ahela arhitektuur, mis ilmnes süstemaatilise sisend-väljundi kaardistamisega. Cell (2015) 162: 622 – 34.10.1016 / j.cell.2015.07.015 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
24. Tan KR, Yvon C, Turiault M, Mirzabekov JJ, Doehner J, Labouèbe G, et al. GABA neuronid VTA-ga seotud konditsioneeritud koha vastumeelsusest. Neuron (2012) 73: 1173 – 83.10.1016 / j.neuron.2012.02.015 [PubMed] [Cross Ref]
25. van Zessen R, Phillips JL, Budygin EA, Stuber GD. VTA GABA neuronite aktiveerimine katkestab tasu tarbimise. Neuron (2012) 73: 1184 – 94.10.1016 / j.neuron.2012.02.016 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
26. Hu H. Reward ja vastumeelsus. Annu Rev Neurosci (2016) 39: 297 – 324.10.1146 / annurev-neuro-070815-014106 [PubMed] [Cross Ref]
27. Stanley BG, Urstadt KR, Charles JR, Kee T. Glutamaat ja GABA lateraalsetes hüpotalamuse mehhanismides, mis kontrollivad toidu tarbimist. Physiol Behav (2011) 104: 40 – 6.10.1016 / j.physbeh.2011.04.046 [PubMed] [Cross Ref]
28. Ancel D, Bernard A, Subramaniam S, Hirasawa A, Tsujimoto G, Hashimoto T et al. Suukaudne lipiidiandur GPR120 ei ole hiirte toitainete lipiidide orosensoorseks avastamiseks hädavajalik. J Lipid Res (2015) 56: 369 – 78.10.1194 / jlr.M055202 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
29. Ackroff K, Lucas F, Sclafani A. Maitse eelistused rasva allikana. Physiol Behav (2005) 85: 448 – 60.10.1016 / j.physbeh.2005.05.006 [PubMed] [Cross Ref]
30. Camandola S, Mattson MP. Toll-like retseptor 4 vahendab rasva, suhkru ja umami maitse eelistusi ning toidu tarbimist ja kehakaalu reguleerimist. Rasvumine (2017) 25: 1237 – 45.10.1002 / oby.21871 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
31. Coupé B, Amarger V, Grit I, Benani A, Parnet P. Toitainete programmeerimine mõjutab hüpotalamuse organisatsiooni ja varajast reageerimist leptiinile. Endokrinoloogia (2010) 151: 702 – 13.10.1210 / en.2009-0893 [PubMed] [Cross Ref]
32. Paillé V, Brachet P, Damier P. Nigraalse kahjustuse roll düskineesiate teketes Parkinsoni tõve roti mudelis. Neuroreport (2004) 15: 561 – 4.10.1097 / 00001756-200403010-00035 [PubMed] [Cross Ref]
33. Benani A, Hryhorczuk C, Gouazé A, Fioramonti X, Brenachot X, Guissard C, et al. Toidu tarbimise kohandamine toitumisrasvaga hõlmab PSA-sõltuvat kaarekujulise melanokortiini süsteemi ümberkujundamist hiirtel. J Neurosci (2012) 32: 11970 – 9.10.1523 / JNEUROSCI.0624-12.2012 [PubMed] [Cross Ref]
34. Kirk SL, Samuelsson AM, Argenton M, Dhonye H, Kalamatianos T, Poston L, et al. Rottide toitumisest põhjustatud emade rasvumine mõjutab püsivalt keskseid protsesse, mis reguleerivad järglaste toidutarbimist. PLoS One (2009) 4: e5870.10.1371 / journal.pone.0005870 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
35. Ong ZY, Muhlhausler BS. Madala rasvasisaldusega dieedi tarbimine võõrutamisest täiskasvanueani pöörab ümber toitumisharjumuste kavandamise meessoost, kuid mitte naissoost, “rämpstoidu” rottide tammide järglased. Acta Physiol Oxf Engl (2014) 210: 127 – 41.10.1111 / apha.12132 [PubMed] [Cross Ref]
36. Ribaroff GA, Wastnedge E, Drake AJ, Sharpe RM, Chambers TJG. Emade kõrge rasvasisaldusega dieedi ekspositsiooni loomade mudelid ja mõju järglaste ainevahetusele: meta-regressioonianalüüs. Obes Rev (2017) 18 (6): 673 – 86.10.1111 / obr.12524 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
37. Bautista CJ, Montaño S, Ramirez V, Morales A, Nathanielsz PW, Bobadilla NA jt. Suure rasvasisaldusega dieedi tarbivad rasvunud rottide piimasegu muutused. Br J Nutr (2015) 115: 538 – 46.10.1017 / S0007114515004547 [PubMed] [Cross Ref]
38. Rolls BA, Gurr MI, Van Duijvenvoorde PM, Rolls BJ, Rowe EA. Imetamine tailiha ja rasvunud rottide puhul: kohviku toitumise ja rasvumise suhe piimakompositsioonile. Physiol Behav (1986) 38: 185 – 90.10.1016 / 0031-9384 (86) 90153-8 [PubMed] [Cross Ref]
39. Valge CL, Purpera MN, Morrison CD. Ema rasvumine on vajalik suure rasvasisaldusega dieedi kavandamiseks järglastele. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol (2009) 296: R1464.10.1152 / ajpregu.91015.2008 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
40. Päike B, Purcell RH, Terrillion CE, Yan J, Moran TH, Tamashiro KLK. Ema rasva toitumine raseduse või imetamise ajal mõjutab järsult leptiini tundlikkust ja rasvumist. Diabeet (2012) 61: 2833 – 41.10.2337 / db11-0957 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
41. Berthoud HR. Metaboolsed ja hedoonilised ajamid söögiisu närvikontrollis: kes on boss? Curr Opinion Neurobiol (2011) 21: 888 – 96.10.1016 / j.conb.2011.09.004 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
42. Henning SJ, Chang SS, Gisel EG. Imetamise ja võõrutamise rottide söötmise kontroll. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol (1979) 237: R187 – 91. [PubMed]
43. Leibowitz SF, Lucas DJ, Leibowitz KL, Jhanwar YS. Naistel ja isastel rottidel esinevate makrotoitainete tarbimise arengumudelid võõrutamisest kuni küpsuseni. Physiol Behav (1991) 50: 1167 – 74.10.1016 / 0031-9384 (91) 90578-C [PubMed] [Cross Ref]
44. Trifilieff P, Feng B, Urizar E, Winiger V, Ward RD, Taylor KM jt. Dopamiini D2 retseptori ekspressiooni suurenemine täiskasvanud tuumaklundides suurendab motivatsiooni. Mol psühhiaatria (2013) 18: 1025 – 33.10.1038 / mp.2013.57 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
45. Spear LP. Noorte aju ja vanusega seotud käitumuslikud ilmingud. Neurosci Biobehav Rev (2000) 24: 417-63.10.1016 / S0149-7634 (00) 00014-2 [PubMed] [Cross Ref]
46. Vendruscolo LF, Gueye AB, Darnaudéry M, Ahmed SH, Cador M. Suhkru tarbimine noorukieas muudab valikuliselt motivatsiooni ja tasu funktsiooni täiskasvanud rottidel. PLoS One (2010) 5: e9296.10.1371 / journal.pone.0009296 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
47. Boitard C, Parkes SL, Cavaroc A, Tantot F, Castanon N, Layé S, et al. Noorte rasvasisaldusega dieedi üleviimine täiskasvanu kontrolli dieetile taastab neurokognitiivsed muutused. Eesmine Behav Neurosci (2016) 10: 225.10.3389 / fnbeh.2016.00225 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
48. Naneix F, Darlot F, Coutureau E, Cador M. Pikaajaline puudujääk hedoonilistes ja tuumades akumuleerib magusate hüvedega reaktiivsust suhkru tarbimise tõttu noorukieas. Eur J Neurosci (2016) 43: 671 – 80.10.1111 / ejn.13149 [PubMed] [Cross Ref]
49. Baker H, Kobayashi K, Okano H, Saino-Saito S. Türosiinhüdroksülaasi mRNA kortikaalne ja striatraalne ekspressioon vastsündinute ja täiskasvanud hiirtel. Cell Mol Neurobiol (2003) 23: 507 – 18.10.1023 / A: 1025015928129 [PubMed] [Cross Ref]
50. Jaber M, Dumartin B, Sagné C, Haycock JW, Roubert C, Giros B, et al. Türosiinhüdroksülaasi diferentsiaalne reguleerimine hiirte basaalganglionides, kus puudub dopamiini transporter. Eur J Neurosci (1999) 11: 3499 – 511.10.1046 / j.1460-9568.1999.00764.x [PubMed] [Cross Ref]
51. Klietz M, Keber U, Carlsson T, Chiu WH, Höglinger GU, Weihe E et al. l-DOPA-indutseeritud düskineesia on seotud striaaltürosiini hüdroksülaasi mRNA-d ekspresseerivate neuronite puuduliku numbrilise allreguleerimisega. Neuroteadus (2016) 331: 120 – 33.10.1016 / j.neuroscience.2016.06.017 [PubMed] [Cross Ref]
52. Kelley AE, Baldo BA, Pratt WE, Will MJ. Kortikostriaalne hüpotalamuse skeem ja toidu motivatsioon: energia, tegevuse ja tasu integreerimine. Physiol Behav (2005) 86: 773 – 95.10.1016 / j.physbeh.2005.08.066 [PubMed] [Cross Ref]
53. Jennings JH, Ung RL, Resendez SL, Stamatakis AM, Taylor JG, Huang J, et al. Hüpotalamuse võrgu dünaamika visualiseerimine söögiisu ja tarbimise käitumise jaoks. Cell (2015) 160: 516 – 27.10.1016 / j.cell.2014.12.026 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
54. O'Connor EC, Kremer Y, Lefort S, Harada M, Pascoli V, Rohner C, et al. Accumbal D1R neuronid, mis ulatuvad hüpotalamuse külgsuunas, võimaldavad söötmist. Neuron (2015) 88: 553 – 64.10.1016 / j.neuron.2015.09.038 [PubMed] [Cross Ref]
55. Jennings JH, Rizzi G, Stamatakis AM, Ung RL, Stuber GD. Külgmise hüpotalamuse inhibeeriva ahela arhitektuur korraldab söötmist. Teadus (2013) 341: 1517 – 21.10.1126 / science.1241812 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
56. Stratford TR, Wirtshafter D. Lateraalne hüpotalamuse osalus söötmises, mis tekkis ventraalsest pallidumist. Eur J Neurosci (2013) 37: 648 – 53.10.1111 / ejn.12077 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]
57. Paille V, Fino E, Du K, Morera-Herreras T, Perez S, Kotaleski JH jt. GABAergilised ahelad kontrollivad piigi ajast sõltuvat plastilisust. J Neurosci (2013) 33: 9353 – 63.10.1523 / JNEUROSCI.5796-12.2013 [PubMed] [Cross Ref]
58. Fonseca MS, Murakami M, Mainen ZF. Dorsaalse raphe serotonergiliste neuronite aktiveerimine soodustab ootamist, kuid ei tugevda. Curr Biol (2015) 25: 306 – 15.10.1016 / j.cub.2014.12.002 [PubMed] [Cross Ref]
59. Doya K. Metalliõpe ja neuromodulatsioon. Neurivõrk (2002) 15: 495 – 506.10.1016 / S0893-6080 (02) 00044-8 [PubMed] [Cross Ref]
60. Leibowitz SF, Alexander JT. Hüpotalamuse serotoniin kontrollib söömist, söögi suurust ja kehakaalu. Biol-psühhiaatria (1998) 44: 851 – 64.10.1016 / S0006-3223 (98) 00186-3 [PubMed] [Cross Ref]
61. Voigt JP, Fink H. Serotoniin, mis kontrollib söötmist ja küllastust. Behav Brain Res (2015) 277: 14 – 31.10.1016 / j.bbr.2014.08.065 [PubMed] [Cross Ref]
62. Brenachot X, Rigault C, Nédélec E, Laderrière A, Khanam T, Gouazé A, et al. Histooni atsetüültransferaas MOF aktiveerib hüpotalamuse polüsialyleerimise, et vältida hiirte dieedi poolt põhjustatud rasvumise teket. Mol Metab (2014) 3: 619 – 29.10.1016 / j.molmet.2014.05.006 [PMC tasuta artikkel] [PubMed] [Cross Ref]