COMMENTS:
Biol Psychiatry. 2010 Jun 15; 67 (12): 1199-204. doi: 10.1016 / j.biopsych.2009.12.029.
Davis JF, Loos M, Di Sebastiano AR, Brown JL, Lehman MN, Coole LM.
Boarne
Department of Cell Biology, Universiteit fan Cincinnati, Cincinnati, Ohio, USA.
Abstract
EFTERGRÛN:
In ûnfermogen om behinderings te behinderjen as se maladaptyf wurde, is in komponint fan ferskate psychiatryske sykte, en de mediale prefrontale cortex (mPFC) waard identifisearre as potensjele mediator fan gedrach fan in gedrach. De hjoeddeiske stúdzje testet as de mPFC belutsen is by in ynhibering fan seksueel gedrach as byhearrende aventive resultaten.
METHODS:
Mei manlike ratten wurde effekten fan loksjes fan 'e infraalimbyske en prelimbyske gebieten fan' e mPFC oer ekspresje fan seksueel gedrach en de mooglikheid om ynsette te befoarderjen troch te testen mei in paradigm fan oerwinning-oanwêzige ôfwiking.
RESULTS:
Mediale prefrontale cortex-läsio's wreide gjin ekspresje fan seksuele gedrach. De mPFC-läsio's yn tsjinstelling ta bliuwe hielendal de akwisysje fan seksuele aversion kondysje en lêsionearre dieren fermindere mei-inoar, yn tsjinstelling ta de robúste gedrachsinhibysje nei de kopulaasje yn mPFC-yntakte manlju, Resultaat allinich 22% fan yntakt manlju dy't binnenhâlde. Ratsjes mei mPFC-läsionen koenen in betingst pleatsfoarm foarmje foar seksueel beleld en kondisearre plakferskuorring foar lithiumchloride, dy't suggerearje dat dizze läsioanen gjin ferienigjend learen of sensibiliteit feroarsaakje foar lithiumchloride.
FOLKUS:
De hjoeddeistige stúdzje jout oan dat bisten mei mPFC-lêzingen wierskynlik yn steat binne de assosjaasjes te foarmjen mei aversive útkomsten fan har gedrach, mar misse de mooglikheid om sykjen nei seksuele beleanning te ûnderdrukken yn 't gesicht fan aversive gefolgen. Dizze gegevens kinne bydrage oan in better begryp fan in mienskiplike patology dy't ûnderlizzend is foar ympulsbehearsking, om't twangmjittich seksueel gedrach in hege prevalens hat fan komorbiditeit mei psychiatryske steuringen en de sykte fan Parkinson.
YNLIEDING
De mediale prefrontale kortex (mPFC) is belutsen by in soad hegere opdrachtenfunksjes fan it sûchdieren systeem, lykas de regeling fan emosjonele oposjale, eangstme-like gedrach, lykas gedrachsfloaze fleksibiliteit en beslútfoarming (1-5). Beloofdbasige beslútfoarming wurdt tawiisd om te kontrolearjen troch in neuronale circuit dy't bestiet út 'e mPFC, amygdala en striatum (6) wêryn't de mPFC as in "top-down" kontrôler fan dit proses (7,8). In sintraal funksje fan lienens basearre beslútfoarming is de mooglikheid om relaasjes op 'e tiid ("response-outcome") te behanneljen (9). Op dizze manier ferminderje de gefolgen fan dizze aksjes as gefolgen dy't ferbân hâlde mei in gedrachsophannel. Dit docht in positive attitude-oanpassing, en dit antwurd is ôfhinklik fan intakt mPFC-funksje (8, 10). In ûnfermogen om gedrachsmaatregels te feroarjen, as se liede ta skealike konsekwinsje is in symptoom dy't mienskiplik is foar in ferskaat oan snoeitendens (11-15).
Nasjonale geslachtige gedrach fan Rodent is in natuerlik belucht-basearre gedrach wêrby't respondint-ferfolchbefolzen kontrolearre wurde om it doel fan 'e ferwaging te realisearjen (16). Mar manlike konsekwinsjes behâlde lykwols net mei it kapteljen as seksueel gedrach ferparte wurdt mei it ferfetsjende stimulus lithiumchloride (LiCl; 17, 18). mPFC-aktiviteit is korrelearre mei manlike seksuele gedrach yn nagets (19-25) en minsken (26). De krekte rol fan 'e mPFC yn de seksuele gedrach bleau lykwols ûnklearich. It doel fan 'e hjoeddeiske stúdzje wie om de effekten fan mPFC-liedingen te karakterisearjen op' e ekspresje fan seksueel gedrach, en oer it oernimmen fan gedrachsinnigens foar seksueel gedrach yn ratten mei in model fan oerwinning-oanwêzige ôfwiking. Lysjes binne ynklusyf de ynfalsimbysk (IL) en prelimbyske (PL) kearnen fan 'e mPFC, sa't dizze subregio's sjen litten hawwe om projekt te hôf te hawwen yn' e regeling fan seksueel gedrach (20). Resultaten fan dizze stúdzje litte sjen dat intakt mPFC-funksje net nedich is foar gewoane ekspresje fan seksuele gedrach. Ynstee dêrfan stypje de resultaten de hypoteze dat mPFC regulearret de útfiering fan gedrach fan in gedrach fan seksueel gedrach as ienris it gedrach is ferbûn mei fergese resultaten.
MATERIALEN EN METOADES
bisten
Adult male (250-260 gram) Sprague Dawley raten krigen fan Harlan-labels (Indianapolis) waarden yndividueel yn in keunstmjittich ljochtkeamer pleatst op in omkearde ljocht / tsjustere fyts (12: 12 h, ljocht op 10 AM) by in temperatuer fan 72 ° F. Iten en wetter waarden op alle tiden beskikber. Ovariektomisearre, estrogen (sc silastysk kapsule mei 5% 17-beta-estradiolbenzoat) en progesteron (sc injection 500 μg yn 0.1 ml sesame oalje) primearre frou Sprague Dawley ratten (210-225 gram) wurde brûkt yn alle passende testen, begûn fjouwer oeren nei it begjin fan 'e tsjustere perioade en gedrach waard hâlden yn in rjochthoekige plexiglas testkage (60 × 45 × 50 cm) ûnder dim rote illuminaasje. Alle prosedueres waarden goedkard troch it Animal Care and Use Committee fan 'e Universiteit fan Cincinnati, University of Western Ontario Animal Care Committee, en oanwêzich oan NIH- en CCAC-rjochtlinen dy't ynfloeddieren yn ûndersiik binne.
Lesion Surgery
Dieren waarden anesthetisearre mei in 1-ml / kg dose (87 mg / kg Ketamine en 13 mg / kg Xylazine). Dieren waarden yn in stereotaksysk apparaat setten (Head Instruments, Tujunga, CA USA), in ynsidaasje waard makke om de skuon te eksposearjen, en lieren waarden boud oer de ynjeksjeplakken mei in dremmelboarne (Dremmel, USA). Ibotenike sūne (0.25 μl, 2% yn PBS) waard bilateraal trochinoar brûkt mei twa ynjeksjes op ferskate dorsoventralen koördinaasjes, elk oer in 1.5 minutenperioade mei in 5 μl Hamilton syringe oan 'e neifolgjende koördinaasjes relatearre oan Bregma (mei skull horizontaal flakke): Foar PL en IL lions: AP = 2.9, ML = 0.6, DV = -5.0 en -2.5. Sham-lysings waarden dien mei deselde metoaden, mar mei gebrûk fan vehicle (PBS) ynjeksjes. Alle bisten waarden tastien foar 7-10 dagen werom te wreidzjen foar gedrachstest.
Ûntwerp
Ekspresje fan seksueel gedrach
PL en IL läsingen waarden dien yn bisten dy't seksuële naïve foardat operaasje wiene. Nei rekreaasjen wienen de bisten ien kear yn 'e wike tastien oant it werjaan fan ien ejaculation, foar in totaal fan fjouwer folgjende wiken folgjende operaasje. Ofdielingen yn seksuele parameter (dat binne latenzen foar berch, yntromyzje, ejaculation, en talen fan terreinen en yntromysjes) binnen elk eksperimint wurde analysearre mei in unike wei ANOVA mei lysjonoperaasje as faktor. Post hoc fergelykingen waarden fia Fishers PLSD tests, allegearre mei 5% betsjuttingsnivo.
Opwaarmte Plus Maze Eksperiminten
Dieren mei lienings of skambehearen waarden besprutsen op 'e ferhege plus maze (EPM). Dizze test fûn fiif wiken folgjende operaasje en ien wike nei de lêste mating sesje. De EPM waard út 'e dúdlike Plexiglas makke en bestie út fjouwer wapens fan lykweardige lingte út fan in sintrum arena dy't de foarm fan in plus teken foarme. Twa wapens fan 'e labyrint wiene iepen foar de eksterne omjouwing en de oare twa wapens fan' e labyrint waarden beklage troch dûnsde ferwulking (40cm heech) dy't de lingte fan 'e earm útwreide. Rânen tusken it middenfjild en de earms waarden definieare troch wite streken op 'e wapens dy't 12cm lizze fan' e midden fan it labyrint. EPM-testen waarden ûnder dimljochting, 1-4 oere nei ôfrin fan 'e tsjustere perioade. De ferskillen tusken skuon en lysjonearre bisten waarden bepaald troch studinten t-tests mei 5% betsjuttingsnivo.
Conditioned Sex Aversion
Maleiske ratten waarden ûndersteld oan trije gearfetsjende sesjes om seksueel ûnderfining te foarkommen foardat lestigens of sham-chirurgie waard. Dieren dy't in ejakulaasje yn 'e minste twa fan trije foar-chirurgie-matingtests wiene, waarden opnommen yn dizze stúdzje en ferdield oer fjouwer eksperimintele groepen: Sham-LiCl, Lesion-LiCl, Sham-Saline en Lesion-Saline. Lês- of skuorbechoeren waarden 3 dagen dien nei de lêste trening sesje. Dieren waarden tastien foar ien wike nei de surgery te herstellen foardat kondysjonele sesjes begon. Under de kondysjonele sesjes krigen de helte fan 'e skuon en lesjearre mantsjes LiCl fuortendaliks op' e planten (Sham-LiCl en Lesion-LiCl), wylst de oare helte fan 'e skuon en lesjearre mantsjes as kontrôles tsjinne en saline fuortendaliks nei oanfieding krigen (Sham-Saline en Lesion-Saline). Op kondysjedei 1 waarden bisten tagelyk op ien ejaculation oanmeitsje en waarden binnen ien minút folgjende ejaculation ynfierd mei in 20ml / kg dosje fan 0.15M LiCl of saline en dêrnei werom yn har thúskeapers. Moarnsiten op 'e kondisjonearingsdei 2 waarden alle manen wage en saline kondysearre dieren waarden in 20ml / kg dosje fan 0.15M LiCl, wylst LiCl kondysearre bisten waarden ynjeksje mei in lykwichtige dûzis fan saline. Dit paradigm waard opnij tweintich opnijde dagen yn totaal tsien komplete kondysjonele sesjes. Parameters fan seksuele gedrach waarden opnommen yn elke test. De ferskillen yn persintaazjes fan bisten dy't lansearre en yntromings sjen litte, of ejaculaasjes waarden analysearre foar elke probearje mei de Chi-Square-analyse mei in 5% betsjuttingsnivo. Omdat gjin ferskillen tusken Sham-Saline en Lesion-Saline groepen yn elke parameter ûntdutsen waarden, waarden dizze twa groepen kombinearre foar statistyske analyze (n = 9) en waarden fergelike mei de Lesion-LiCl of de Sham-LiCl-groep.
Wetter - Agrarwetter
Seksueel navige bisten ûnderhannele lesion surgery lykas hjirboppe beskreaun en moasten foar in wike te recoverearjen foardat gedrachstest wurde. Alle gedrachskontrôles begûnen 4 oere nei begjin fan 'e tsjustere perioade. It kondisearre plakfoarbyldapparat waard dielen yn trije kamera's mei in neutraal sintrumkeamer. Ien kant fan 'e keamer hie wyt wanden en in griene flier, wylst de oare kant swart wie mei rustfreonlike stielen as flier, de middenkammer wie griis mei Plexiglas flier (Med Associates, St. Albans, VT). Earst waard in foarprotest dien om in natuerlike foarkar foar elke yndividu fêst te stellen foardat de kondysje begûn, alle bisten waarden yn 'e sintraal kemer pleatst mei frije tagong ta alle kampers foar fyftjin minuten en de folsleine tiid dy't yn elke kamera opnommen waard opnommen. Op de oare deis, de bedoeling fan 'e dei 1, wienen mantsjes oan ien ejaculation yn har thúsblokje dêr't se fuortendaliks yn' e yntinke net-foarkommende kamera pleatst hawwe foar tritich minuten sûnder tagong ta de oare keamers of waarden yn har yntellektale keamer foar pleatst. tritich minuten sûnder foarige seksueel gedrach. Op 'e twadde kondysjegong krige manen de tsjinstelling oer it tsjinoerstelde. Dit kondisjonêre paradigm waard nochris werhelle. Op de oare dei waard in post-test dien dat prosedurlik identyk wie mei de pre-test. Twa aparte wearden waarden brûkt om te bepalen as mPFC lysjonearre dieren in kondisearre plak foarkomt foar seks. De earste skoare wie de ferskillende skoare, fêststeld as it ferskil tusken de tiid dy't yn 'e ynstânsje foarkommen waard, en de tiid dy't yn' e yntieke net-foarkommende kamera brocht waard. De foarkarsekst wurde definiearre as de tiid dy't yn 't yn' t earstoan net foarkommen kamer ferdield waard troch de tiid dy't yn 't yn' t yn 't earstoan net foarkommen kammer plus de tiid dy't yn' t yn 'e ynstânsje foarkommen kammer ferdield waard. De foarkommende en ferskillende punten waarden fergelike foar elke dier tusken pre-test en posttest mei paad studinten t-tests mei 5% betsjuttingsnivo. Foarige ûndersiken hawwe bewize dat de gearkomste resultaten yn robúste kondysjonele plak foarkomt mei dit paradigm, en dat kontrôtbehandings net in feroaring yn foarkar (27-29).
Wetter - Agrarwetter
Seksueel navige bisten ûnderhelle lestigens of sham-chirurgie lykas hjirboppe beskreaun en moasten foar in wike te recoverearjen foardat gedrachstest wurde. Alle gedrachskontrôles begûnen 4 oere nei begjin fan 'e ljochte perioade. It gebrûk fan it hjirboppe beskreaune CPP-apparaat, LiCl of saline-ynjeeksjes waarden ferparte mei de yn it begjin of de foarkommende of net-foarkommende kammering yn 'e mande mei twa kondisjonearjende trijetallen yn in kontrôle balansine manier. De foar- en posttests waarden útfierd en gegevens analysearre, lykas hjirboppe beskreaun wurde mei pearde studint-t-tests mei 5% betsjuttingsnivo.
Lêsbea ferifikaasje
Foar lysjonferifikaasje waarden dieren transkripendere mei 4% paraformaldehyde en harsens waarden sekere (coronal). Seksjes wiene en immunoprozeard foar neuronale marker NeuN mei in primêre antiserum yn ynkubaasjeblêd te erkennen dat NeuN (monoklonale anti-NeuN antiserum; 1: 10,000; Chemicon) en standert immunoperoxidase metoaden (19). De lokaasje en de grutte fan 'e ibotenyske läsionen waard bepaald troch it analysearjen fan it gebiet yn neistlizzende mPFC-paragrafen dy't fan' e NeuN-neuroanfining binne. Lêsjes fan 'e mPFC hawwe typysk in ôfstân fan AP + 4.85 oant + 1.70 relatyf oan bregma (Figure 1A-C). Lesions waarden folslein beskôge as 100% fan 'e IL en 80% fan' e PL ferwoastige waard, en allinich bisten mei folsleine lûsen waarden opnommen yn statistyske analyzes (seksuele gedachten eksperimint, lesion n = 11, sham n = 12, EPM eksperiment, = 5, skam n = 4, kondisearre skonferwidering eksperimint, sham-saline n = 4, sham-LiCl n = 9, lysjon-saline n = 5, lysion-LiCl n = 12, kondisearre plakfoarm eksperiment, lsession n = 5 ; kondisearre plak Aversion eksperiment, skam n = 12, lsession n = 9).
RESULTS
Sexualvervoering
PL / IL-läsingen hawwe gjin ynfloed hokker seksueel parameter ûndersocht is yn manlju dy't seksueu naïve foardat de operaasje seagen (Figure 1D-F). Yn oerienstimming binne gjin effekten fan PL / IL-lesio's op it seksylik gedrach yn 'e seksueel ûnderfûnde mantsjes yn' e kondysje fan 'e kondysje fan' e seksabewekking eksperiment, yn 't earste proeven, dus foarôfgeand oan ferpaakt fan LiCl mei seksueel gedrach (Table 1). Dêrom hawwe PL / IL-läsingen gjin gefolch fan seksuele gedrach ûnôfhinklik fan seksueel ûnderfining.
Elevated Plus Maze
Yn oerienstimming mei foarôfgeande rapporten (27-29), manlike rotten mei mPFC-lions-mantsjes ferskine mear ynfoeaten yn 'e iepen wapens fan' e EPM yn ferliking mei kontrôles (Figure 1G), suggerearret dat mPFC-funksje kritisch is foar situaasjes dy't de risiko-evaluaasje nedich binne.
Conditioned sex aversion
Effekten fan LiCl-kondysje op seksuele gedrach
LiCl-kondysje feroaret yn in signifikante reduksje fan 'e persintaazjes fan skuonmannen dy't munten, yntromysjes, of ejakulation sjen litte yn ferliking mei skamsaline-kontrôles (Figure 2A-B). Mar mPFC-läsio's folslein blokkearre de ynhibaasje dy't troch LiCl kondisearjen feroarsake waard. Chi-square analizaasje hat grutte signifietingen tusken groepen ûntdutsen yn 'e persintaazjes fan dieren dy't lânskippen sjen litte (Figure 2A), yntromysjes (net werjûn; gegevens identike oan Figure 2A), of ejaculations (Figure 2B). Foaral de persintaazjes fan mantsjes dy't mantels, yntromysjes, of ejakulaasje sjen litte, waarden leger legere yn 'e Sham-LiCl-groep yn ferliking mei Saline-behannele kontrastdieren (Sham en Lesion), wêrtroch't in ûntbrekkende effekt fan LiCl-kondysjes op' e gearhing yn Sham-bisten oanbelanget. Yn tsjinstelling lykwols waard gjin effekt fan LiCl kondisynding yn 'e Lesion-LiCl-manlings beoardield (Figures 2A-B). Sa is mPFC funksje kritysk foar it oernimmen fan kondisearre ynhibysje fan seksueel gedrach. It is lykwols mooglik dat PL / IL-lesioaden it assosjatyske learen ferwiderje mei in seksueel belesting, sadat yn in aparte stúdzjeseffekten fan PL / IL-lêzingen oangeande it oernimmen fan in kondisearre plakfoarm foar seksueel belest beprate waard.
Beskikbere plakferbannen en ferwidering
Ratten mei mPFC-lêzings wiene gewoanlik asassearjend learen fan kontekstlike cues ferparte mei seksuele belesting, lykas oanjûn troch in ferhege ferskillende punten en foarkars fan 'e posttest (Figure 3A-B). Boppedat hat de lions gjin assosjatyffolle learen fan kontekstlike cues mei LiCl-induzearre malaise ynfloed, oanjûn troch signifikante ferminderingen yn ferskillende en foarkommende punten by de posttest (Figure 3C-D).
DISKUSJE
Yn dit stúdzje fertelle wy dat lesioanen fan 'e IL- en PL-regio's fan' e mPFC gjin ynfloed hawwe op de ekspresje fan seksueel gedrach, noch de akwisysje fan in kondisearre plak foarkar oan seksuele belesting. Ynstee dêrfan foarkomt de lions foar it oernimmen fan kondisearre seksjild. Dizze resultaten jouwe funksjoneel bewiis foar de hypoteze dat de fermogen om adaptive gedrachsferoarings te regeljen wurde regele troch de subregio's IL en PL fan 'e mPFC.
Foarige gegevens fan ús laboratoarium oanjûn dat mPFC-neuroanen aktyf binne ûnder seksuele gedrach yn manlike ratten (20). De mPFC-lesteare ratten yn dizze stúdzje binne lykwols net ûnderskiede fan skamkontraten yn ien fan 'e analysearre parameters fan seksuele gedrach. Yn oerienstimming mei foarôfgeande rapporten (30, 32) mPFC-lysjes hawwe anxiolytyske effekten produsearre as beoardielde troch prestaasjes op 'e ferhege plus plus labyrint, wêrby't oanwêzich is dat ús mislearre protokol effektyf wie. Dêrom sjogge de aktuele resultaten aktivearring fan 'e IL- en PL-subdivisionsen binnen de mPFC yn it seksylik gedrach is net nedich foar normale ekspresje fan seksueel gedrach. Yn tsjinstelling ta in eardere stúdzje troch Agmo en meiwurker demonstrearre dat lesioanen fan it anterior cingulate gebiet (ACA) fergrutte bergen en yntromisearre fertsjintwurdigers fergrutte en de persintaazje fan manlju dy't koalysearre (25). Dêrom is it mooglik dat de ACA in rol spilet yn 'e prestaasje fan seksueel gedrach, wylst IL- en PL-regio's inisjalisaasje fan gedrach ferwiderje as ienige ferwiderjende resultaten.
Hoewol mPFC-lysings binne rapportearre om ferskate foarmen fan ûnthâld-konsolidaasje (33, 34), kinne de effekten fan mPFC-liedingen op gedrachsferhâlding berekkene wurde net oanwiisd oan learde defizitees. Yn in apart set fan eksperiminten waarden mPFC-lesteare mannen hifke foar de fermogen om in kondisearre plak foarkar te meitsjen foar seksualgedrach. Belangrjochte assosjatyffolle learjen bleau yntakt yn mPFC-liongearre bisten, omdat dizze manen in betingst pleatse foarkar foarmje kinne foar in seksueel belofte parlemint. Dizze fûning is yn oerienkomst mei eardere stúdzjes dy't ûndersocht binne oer de rol fan 'e PL of folslein mPFC foar de oankeap fan psychostimulant-induzearre CPP (35, 36), Fierder, assosjatyf learen foar de ferwiderjende stimulus LiCl waard net beynfloede troch mPFC-läsioanen, konsekwint mei foarige rapporten dat PFC-lysings de akwisysje fan kondisearre smaakferwidering net foarkommen (34). Mei gemien dat dizze gegevens suggerearje dat de earder observearre aktivearring fan de subdivisionen fan PL / IL binnen de mPFC (20) binne net nedich foar it oernimmen fan belibbele relatearre assosjatyf-learen, lykwols binne nedich foar it goeie gebrûk fan dizze ynformaasje sa't it giet om de útfiering fan gedrachskontrôle. Dizze begryp is yn oerienstimming mei de hjoeddeistige bespreking dat intakte IL-funksje needsaaklik is om te ûndersiikjen en te dwaan op ynhibearjende en eksitatoryske ynputen dy't ynformaasje oerwege oer de leven-oanstriid-konflikten (37). Fierders binne bisten mei PL (35) of IL (8, 37, 38) lêzingen display normale útstekking learen, nettsjinsteande in ûnfermogen om dizze ynformaasje te brûken om doelstellings besluten te meitsjen.
By einsluten is it hjoeddeistige stúdzje oanwiisd dat bisten mei mPFC-liedings wierskynlik meidogge oan 'e ferienings mei ferwiderjende resultaten fan har gedrach, mar fermogen de mooglikheid om sykjen fan seksueel belesting yn te tsjinjen yn' t gesicht fan ferrifeljende gefolgen. Yn 'e manlike seksuele oprop is in komplekse ûnderfining, wêrby't de ferwurking fan kognitive-emosjonele ynformaasje tsjut op' e heden fan 'e hedonike eigenskippen fan in bepaalde stimulâns genôch binne as seksuele stimulearring (39). De hjoeddeiske gegevens suggerearje dat mPFC-dysfunksje bydrage kin oan seksuele risiko's of te nimmen fan twangens fan seksuele gedrach.
Boppedat hat mPFC dysfunksjonele ferbân mei ferskate psychiatryske struorren (13, 40) dy't sizze dat dysfunksjonearring fan 'e mPFC in ûnderlizzende patology wêze kin dy't dielt mei de oare ûnrjochtmiddels en dat twangende seksuele gedrach kin ferbûn wêze mei oare struorren. Yndie, yn 'e minske, hyperseksualiteit of twangende seksueel gedrach is rapportearre om in hege prevalence fan komorbiditeit te hawwen mei psychiatryske betingsten (ynklusief substansmissing, dreechens en stimmelingskrêften) (41), en likernôch 10% -prevalence yn Parkinson's Disease tegearre mei compulsive keapjen, spieljen en iten (42-44).
Fuotnoten
Disclaimer fan útjouwer: Dit is in PDF bestân fan in net fertsjinjen manuskript dat foar publikaasje akseptearre is. As tsjinst foar ús klanten biede wy dizze fryske ferzje fan it manuskript. It manuskript sil kopieare, sjittende, en oersicht fan 'e resultant dúdlikens wurde foardat it publisearre is yn syn definitive citable form. Tink derom dat yn 'e produksjeproses miskien fûnen ûntdutsen wurde dy't de ynhâld beynfloedzje kinne, en alle juridyske disclaimers dy't tapasse foar it tydskrift binne beskerme.
;