אנדוגני- Induced neuroplasticity של נוירונים דופאמינרגיים באזור tegmental הגחון משפיע על גמול טבעי ו opiate (2014)

תגובות: אל האני מחקרי DeltaFosB אנו לעתים קרובות לצטט כל התמקד הגרעין (מרכז תגמולים), ומצא כי יחסי מין פחות או יותר מאותם מנגנונים מוחיים כמו מת 'וקוקאין. ממחקר הציון של אותו חוקר (טבעי ותרופות Rewards חוק על מנגנוני פלסטיות עצביים נפוצים עם ΔFOSB כמגשר מפתח (2013)):

לפיכך, תגמולים טבעיים ותרופתיים לא רק מתכנסים באותו מסלול עצבי, הם מתכנסים לאותם מתווכים מולקולריים, וככל הנראה באותם נוירונים ב- Nucleus Accumbens, כדי להשפיע על בולטות התמריצים ועל ה"רצון "של שני סוגי התגמולים.

ההשתלטות: מת, קוקאין ומין כולם עושים את אותם הדברים הבסיסיים לאותם תאי עצב במרכז הגמול (נוקלאוס אקומבנס), כל מה שהם עשויים לעשות אחרת במקום אחר במוח. זה פירק את נקודת הדיבור הרגילה כי טבעי rewards וסמים שונים מנגנונים ואפקטים.

מחקר חדש זה בחן מה סקס עושה ל- VTA. ה- VTA הוא המקום בו מתחילים תאי העצב המייצרים דופמין - והם מסתעפים לגרעין האגן, קליפת המוח הקדמית ואמיגדלה. ביסודו של דבר ה- VTA הוא המקור (מעיין טוב) לרוב הדופמין שלנו. ראה את שתי התמונות הבאות של מעגל התגמול: Pic1, Pic2

החוקרים גילו כי יחסי מין (שיאים) גורמים לגוף התא ב- VTA להתכווץ זמנית (אצל גברים). גופי תאים ודנדריטים שלהם מהווים את החומר האפור של המוח. זה בדיוק מה שהתמכרות להרואין עושה ל- VTA (לא שימוש חד-פעמי בהרואין, אלא בשימוש בהרואין כרונית). שים לב כי זה הצטמקות זהה של גופי התא VTA מתרחש במכורים להרואין אנושיים.

הצטברות התא המושרה על ידי המין נמשכת לפחות 7 ימים. השינויים שבוצעו על-ידי המין חזרו לקדמותם ב- 30 ימים, אך החוקרים העריכו רק את הימים 1, 7 ו- 30.

הצטמקות גופי התאים בהתמכרות להרואין מביאה לדופמין נמוך יותר בגרעין העצמי - או למה שאנחנו מכנים. דה - סנסיטיזציה. החוקרים העבירו לחולדות מורפיום כדי להעריך את תגובתם (לאחר יחסי מין), אך דבר לא קרה. בדרך כלל החולדות אוהבות את המורפיום הרבה, אבל כאן הם לא קיבלו רגישות זמנית. בקיצור, מעגל התגמול של חולדות לאחר השפיכה לא הגיב לרמה הנמוכה של הרואין. החוקרים שיערו כי יהיה צורך במינונים גבוהים יותר כדי לעורר תגובה חולדה "רגילה".

לסיכום - סקס (באופן זמני) עושה בדיוק את אותו הדבר ב- VTA כמו גם התמכרות להרואין: הצטמקות של גופי תאי עצב המייצרים. זה מוביל לדופמין נמוך יותר במרכז התגמול, ולפחות היענות לסמים - ולוקח לפחות 7 ימים עד שמוח החולדה יתאושש.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

כדים KK1, קופנס CM2, בלואט LN3, פולר י2, ואנס2, פרוחאמר2, לביאולט SR2, להמן4, Coolen LM5.

תַקצִיר

גמול טבעי וסמים של התעללות להתכנס על מסלול mesolimbic ולהפעיל מנגנון משותף של פלסטיות עצבית בגרעין accumbens. חשיפה כרונית אופיאטים גורם גמישות נוירונים דופאמינרגי של אזור tegmental הגחון (VTA), אשר מסדיר מורפין גמול סובלנות.

כאן, אנו בודקים את ההשערות כי שחרור ההזדווגות המושרה של אופיואידים אנדוגניים ב- VTA גורם לשינויים מורפולוגיים של תאים דופאמין VTA בחולדות הגברים, אשר בתורה להסדיר את הביטוי לטווח ארוך של חיזוק המושרה ניסיון של התנהגות מינית.

ראשית, ניסיון מיני ירד VTA דופאמין soma גודל 1 ו 7 ימים, אבל לא 30 ימים לאחר הפגישה האחרון ההזדווגות. אפקט זה היה חסום עם naloxone לפני כל מפגש ההזדווגות; ובכך, VTA גמישות התא דופמין היה תלוי בפעולה של אופיואידים אנדוגניים.

בתורו, גמישות VTA היה קשור עם שכר opia שונה, כמו גברים מנוסים מינית לא טופס העדפה מקום מותנה 0.5 מ"ג / ק"ג מורפין.

לאחר מכן, נקבע האם פעילות האופיואידים האנדוגניים מתווכת בין גמול זכרי וזכר אצל חולדות זכריות המטופלות בנלוקסון במהלך חווית ההזדווגות, בין אם באופן סיסטמי ובין אם תוך- VTA. נלוקסון לא מנע את הנסיון המושרה לראשונה של ההתנהגות המינית על פני פגישות ההזדווגות חוזרות, או מותנה העדפה מקום ההזדווגות. עם זאת, טיפול naloxone הפחית את הביטוי לטווח ארוך של ניסיון הנגרמת ניסיון של התנהגות מינית ופעילות עצבית באזורים mesolimbic הנגרמת על ידי הזדווגות הקשורים רמזים מותנה.

יחד, נתונים אלה מראים כי אופיואידים אנדוגניים במהלך ההזדווגות מעוררים פלסטיות עצבית ב נוירונים דופאמין VTA כי נראה קריטי לתגמל מורפיום זיכרון לטווח ארוך עבור התנהגות גמול טבעי.

 

מבוא

התנהגות גמול טבעי מתווכת על ידי מערכת mesocorticolimbic (מייזל ומולינס, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader ואח ', 2010a; Pitchers ואח ', 2010a; יאנג ואח ', 2011; בלום ואח ', 2012). סמים של התעללות לגרום שינויים עצביים במערכת זו, אשר בתורו לתרום לפיתוח וביטוי של שימוש בסמים (היימן ואח ', 2006; נסלר, 2012). קבענו בעבר כי ניסיון עם התנהגות תגמול טבעי, כלומר, ניסיון מיני בחולדות זכרים, גם גורם לפלסטיות עצבית בגרעין accumbens (NAc), כולל גדלים דנדריטים מוגברת (Pitchers ואח ', 2010a) ו deltaFosB (Pitchers ואח ', 2013). בתורו, הפלסטיות המושרה על-ידי המין היא קריטית להשפעות חוויית המין על ההזדווגות הבאה, המתבטאת בהנחיית ההתנהגות המינית וביצועיה (Pitchers ואח ', 2010b, 2012, 2013). יתר על כן, חוויית המין משנה את ההיענות לפסיכו-סולימולנטים, כולל רגישות של פעילות תנועה ותגמול משופר (Frohmader ואח ', 2010a; Pitchers ואח ', 2010a, 2013).

NAC הוא אחד היעד במורד הזרם של נוירונים דופאמינרגיים באזור tegmental הגחון (VTA). נוירונים דופאמין VTA מופעלים במהלך ההזדווגות ואת החשיפה הבאה לרמזים מותנה מנבא של פרס מיני (בלפור ואח ', 2004; Frohmader ואח ', 2010a), באמצעות פפטיד אופיואיד אנדוגני (EOP), מחייב בקולטנים μ-opioid (MORs; מתיוס וגרמנית, 1984; ג 'ונסון וצפון, 1992; Klitenick ואחרים, 1992; איקמוטו ואח ', 1997; בלפור ואח ', 2004). לפיכך, חשיפה לרמזים מותנים מנבאים של התנהגות מינית גורמת לשחרור של EOP ו- VTA דופמין תא הפעלה, אשר מאפשר מוטיבציה מינית (מיטשל וסטיוארט, 1990; ואן Furth et al., 1995; ואן פורת 'ואן רי, 1996) ו שחרור דופמין ב NAC (פיורינו ואח ', 1997).

חשיפה חוזרת לאופיאטים אקסוגניים גורמת לשינויים מורפולוגיים ב- VTA (Mazey-Robison ואח ', 2011; Mazey-Robison ו- Nestler, 2012), גודל סומה מופחת של נוירונים דופאמין VTA (Sklair-Tavron ואח ', 1996; ספיגה ואח ', 2003; צ'ו ואח ', 2007; רוסו ואח ', 2007; Mazey-Robison ואח ', 2011), רמות נמוכות של חלבונים neurofilament (ביתר-ג'ונסון ואח ', 1992), הגברת ההתרגשות של תאי דופמין, והפחתת התחבורה axoplasmic ו dopamine הפלט כדי NAC (ביתר-ג'ונסון ואח ', 1992; Mazey-Robison ואח ', 2011). אלה שינויים VTA דופאמין נוירון לגרום לסובלנות מורפיום גמול והם חולפים כפי שהם מתפזרים בחודש של התנזרות סמים (רוסו ואח ', 2007). לא ברור אם הפלסטיות של נוירונים דופאמין VTA הוא ייחודי לפעולות של אופיאטים או אם הם מיוצרים גם על ידי שחרור EOP במהלך התנהגויות מתגמל טבעי.

כאן, אנו בודקים את ההשערה כי חוויית הגמול הטבעי גורמת נוירופלסטיות דומה לזו הנגרמת על ידי אופיאטים, ולכן, כי opiates להתכנס על מנגנון פלסטיות כי הוא קריטי עבור התנהגות גמול טבעי זיכרון גמול. אנו בודקים האם ניסיון מיני בחולדות זכרים מקטין את גודל הסומא של נוירונים דופאמין של VTA באמצעות תהליך התלוי בפעולת EOP ב- VTA. יתר על כן, אנו בודקים האם שינויים ב- EOP-induced נוירונים דופאמין VTA קשורים עם חיזוק של התנהגות מתגמלת הטבעי ואת הייחוס של תמריץ החשיבות לרמזים הקשורים גמול טבעי, תוך גרימת סובלנות צולבת לתגמל מורפיום.

חומרים ושיטות

בעלי חיים

עכברים ספרג-דולי (200-225) התקבלו מצ'ארלס ריבר ושוכנו בזוגות בחדרים מוארים באור מלאכותי על מחזור אור / כהה של 12 שעה בכל הניסויים (הנוריות ב- 10: 00 AM, פרט לניסוי המורפיום של סובלנות , האורות ב 5: 00 PM). מזון ומים היו זמינים מודעה למעט במהלך בדיקות התנהגותיות. נשים Stimulus היו ovariectomized ו מושתלים תת עורית עם 5% 17-β- אסטרדיול בנזואט כמוסות סילסטיות (1.98 מ"מ קוטר פנימי, אורך 0.5 ס"מ, Dow-Corning). הזרקות של פרוגסטרון (תת עורית, 500 מיקרוגרם ב 0.1 מ"ל של שמן שומשום) ניתנו 3-6 h לפני הבדיקה כדי לגרום פתיחות מינית. כל ההליכים אושרו על ידי אוניברסיטת מערב אונטריו ו אוניברסיטת מישיגן טיפול בבעלי חיים ועדות, ו תאמו את המועצה הקנדית על טיפול בבעלי חיים ואת המכונים הלאומיים של בריאות הנחיות בהשתתפות בעלי חוליות במחקר.

משך הזמן של VTA שינוי דופאמין גודל soma

פגישות היכרויות יומיומיות.

כדי ללמוד את מהלך הזמן של שינויים בגודל דופאמין נוירון סומה ב VTA, בעלי חיים מנוסים מינית ותאי נהרגו ב 1, 7, או 31 ד (n = 5-8 לכל קבוצה) לאחר היום האחרון של הזדווגות (מנוסה) או טיפול (נאיבי). קבוצות מנוסות מבחינה מינית הותאמו להתנהגות מינית במהלך המפגש האחרון של ההזדווגות, כמו גם מספר השפיכות הכולל על חמש הפעלות (ממוצע של 5 עבור כל קבוצה), ולא נבדלו בכל פרמטר של התנהגות מינית.

מפגשים.

לזכרים תמימים מבחינה מינית הוקצו שני תנאים ניסיוניים: תמים מבחינה מינית או מנוסים מינית. בעלי חיים מנוסים מבחינה מינית הורשו להזדווג חמש פעמים בימים רצופים עם נקבות פתוחות בכלובי בדיקה מלבניים (60 × 45 × 50 ס"מ) עד להצגת שפיכה או עד 1 h (המוקדם מביניהם). כלובים ניקו היטב עם פתרון אתנול 70% ו מצעים טריים נוספה בין הפגישות ההזדווגות. התנהגות מינית בוצעה במהלך השלב האפל (2-6 h לאחר תחילת כהה). רק בעלי חיים ששפיכו במהלך לפחות ארבעה מפגישות ההזדווגות, נחשבו מנוסים מינית ונכללו בניסויים. כל הפעלות ההזדווגות נצפו והתנהגות מינית נרשמה. מספר כניסות (M) (IM), זמן חביון (ML, זמן מהכנסת הנקבה להרכבה הראשונה), זמן חביון intromission (זמן מהכניסה של הנקבה לאינטרומיסיה הראשונה) וחביון השפיכה (EL; זמן מן intromission הראשון לשפיכה) נרשמו (Agmo, 1997). חיות נאיביות הוכנסו לכלוב בדיקה נקי עבור 1 שעה במקביל לזכרים מנוסים מינית המזדווגים באותו חדר, כך שהם נחשפו לריחות נקביים רחוקים, ורמות דומות של הפרעות וחידושים סביבתיים כזכרים מנוסים.

תיוג Immunofluorescence.

בעלי חיים היו הרדים עמוקים באמצעות pentobarbital נתרן (270 מ"ג / ק"ג, IP) ו perfused intracardially עם 50 מ"ל של מלוחים 0.9%, ואחריו 500 מ"ל של פרפורמלדהיד 4% ב 0.1 מ 'חיץ פוספט זרחן (PB). המוח הוסרו והודבקו עבור 1 שעה בטמפרטורת החדר (RT) באותו מקבע, ולאחר מכן שקוע 20% סוכרוז ו 0.01% אזיד הנתרן ב 0.1 מ PB לאחסון ב 4 ° C. קטעים העטרה נחתכו ב מיקרומטר 35 על מיקרוטום מקפיא (H400R, Microm) ו נאספו בארבעה סדרות מקבילות פתרון cryoprotectant (30% סוכרוז, 30% אתילן גליקול ב 0.1 מ PB) מאוחסנים אז 20 ° C. כל incubations בוצעו ב RT עם תסיסה עדינה ושטיפות שופע עם 0.1 מ PBS, pH 7.35, בין incubations. סעיפים נחשפו ל- 1% H2O2 עבור 10 דקות כדי להרוס peroxidases 1, אז חסום עבור 0.4 שעה ב הדגירה פתרון (PBS +: PBS המכיל 100% טריטון X-0.1, סיגמא אולדריץ ') ו 1% אלבומין בסרום שור (מעבדות מחקר ג' קסון Immuno). לאחר מכן, מדורים הודגרו לילה ב RT ב טירוזין הידרוקסילאז (TH) -אנטיבודי (20: 000 XNUMX; מיליפור). לאחר הדגירה נוגדן ראשוני, סעיפים הודגרו AlexaFluor 555- נוגדנים נוגד עכבר נוגד (1: 100, Invitrogen, יוג'ין, או) עבור 30 דקות. לבסוף, חלקים נשטפו עם 0.1 מ PB, רכוב על שקופיות זכוכית Superfrost פלוס, מיובש, ו coverslipped עם gelvatol המכיל סוכן נגד דוהה 1,4-diazabicyclo (2,2) אוקטן (DABCO, 50 מ"ג / מ"ל, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

ניתוח נתונים: גודל נוירון סומה.

תמונות של נוירונים TH-immunoreactive (IR) ב VTA נלקחו ב 40 × הגדלה בשלושה מקורי לרמות הזנב (בלפור ואח ', 2004). לא נמצאו הבדלים בין תאים ברמות השונות. גודל סומה של נוירונים TH-IR נותח באמצעות ImageJ (מכוני הבריאות הלאומיים). שטח ממוצע, היקף ומעגל נמדדו כמתואר על ידי Sklair-Tavron et al. (1996). ממוצע של תאים 25 לכל חיה (בשילוב כל רמות VN 3) נותח ורק תאים עם גרעין גלוי בבירור נכללו. לכל חיה, חושבו השטח הממוצע, ההיקף והמעגל. לצורך ניתוח סטטיסטי נעשה שימוש ב- ANOVA דו-כיווני [גורמים: חוויה מינית (מין או ניסיון נאיבי) וזמן (1, 7 או 31 d)] ואחריו פוסט הוק השוואות בשיטת Holm-Sidak עם רמת מובהקות של 0.05.

VTA ללא שינויים בדופאמין

מפגש דו-שבועי.

כדי לבדוק האם נדרשת חוויה מינית במהלך פגישות ההזדווגות היומיומיות לירידות בגודל נוירון של ה- TH-IR, נוצרו נוירונים של דופאמין מסוג VTA של בעלי חיים שהזדווגו במהלך חמש פגישות התאמות דו-שבועיות. מפגשי ההזדווגות היו כמתואר לעיל, אך במשך תקופה של 2.5 שבועות. המוח נאספו 7 D לאחר ההזדווגות או הטיפול האחרון.

תיוג Immunoperoxidase.

בנוסף, זה נבדק אם באמצעות טכניקות מכתים רגיש עם immunoperoxidase ו זיהוי כרומוגנים, תאפשר גם להדמיה של שינויים בגודל TH-IR סומה. זלוף ועיבוד רקמות היה התנהגות כמתואר לעיל. לאחר הטיפול ב- 1% H2O2 ו PBS +, מדורים הודגרו לילה ב RT ב polyclonal טירוזין hydroxylase (TH) -אנטיבודי (1: 20 000; מיליפור). לאחר הדגירה נוגדן העיקרי, מדורים הודגרו עם ביוטין-מצומדות נגד ארנב IgG (1 ח, 1: 500 ב PBS +, וקטור מעבדות), avidin-biotin חזרת peroxidase (1 h, ABC עילית, 1: 1 000 ב PBS , ו 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (10 דקות, 0.02%, DAB, Sigma-Aldrich) משופרת עם סולפט ניקל ב (0.02% ב 0.1 מ PB) עם מי חמצן (0.015%). סעיפים נשטפו ביסודיות ב 0.1 מ PB כדי לסיים את התגובה רכוב על גבי Superfrost מקודד בתוספת שקופיות זכוכית (פישר) עם 0.3% ג'לטין ב dDH2O. לאחר התייבשות, כל השקופיות היו coverslipped עם DPX mountant (dibutyl פתלטים קסילן, Sigma-Aldrich).

ניתוח נתונים: גודל נוירון סומה.

תאי TH-IR נותחו לפי שטח, היקף ומעגליות כמתואר לעיל. בנוסף, נותחו תאי TH-IR בתאי substantia nigra (SN), באותם קטעים המשמשים לניתוח תאי TH-IR של VTA. לבסוף, לאחר ניתוח של תאי VTA ו- SN TH-IR, קטעים הוחלפו באמצעות סגול קרסיל ותאים שאינם TH-IR נותחו בשיטות שנקבעו לעיל. ההבדלים בין קבוצות נאיביות למנוסים הושוו באמצעות סטודנטים דו-זנביים t בדיקות עם רמת מובהקות של 0.05.

ההשפעות של נלוקסון על ניסיון המושרה דופאמין סומה גודל הפחתה

כדי לקבוע האם MORs מילא תפקיד בתרחישי מין המנסים לחוות שינויים בדמות נוירון דופאמין, MOR נחסמו במהלך ההתנהגות המינית. כמחצית מהחיות זכו לחוויה מינית, ואילו החצי השני טופלו אך נותרו נאיביות מינית. בעלי חיים מנוסים מבחינה מינית הורשו להזדווג על 5 ימים רצופים. בקרב הקבוצות המנוסות בתמימות ובתמימות, טופלו בבעלי חיים עם נלוקסון נוגד חמצון לא מולקטי (10 mg / kg, sc; Sigma-Aldrich, מומס במי מלח 0.9%) או מלוחים 30 דקות לפני תחילת הנשי (מנוסה) או לפני הטיפול (תמים); וכך נוצר ארבע קבוצות ניסיוניות: תמיסת מינית נאיבית (נאיבי סאל), נלוקסון נאיבי מינית (נאיבי NLX), מלוחים מנוסים מבחינה מינית (Exp Sal), ונלוקסון מנוסה מינית (Exp NLX; n = 5-8 לכל קבוצה). טיפול נלוקסון לא השפיע באופן מובהק סטטיסטית על כל פרמטר של התנהגות מינית, בכל אחת מקבוצות ה- 5, וקבוצות הטיפול ב- naloxone ו- saline היו זהות בחוויה המינית. כל בעלי החיים נהרגו באמצעות זלוף intracardial 7 ד לאחר הפגישה האחרונה ההזדווגות. חתכים, אימונוהיסטוכימיה וניתוח נתונים (דו-כיווני ANOVA: גורמים: חווית מין וטיפול תרופתי) עבור גודל סומא של דופמין נערכו כמתואר לעיל.

מורפיום מותנה במקום העדפה

עיצוב נסיוני.

בעבר, Russo et al. (2007) הראה מורפיום כרונית גורם סובלנות לתגמל מורפין. מאז חוויה מינית מורפיום כרונית לגרום לירידה דומה בגודל soma של נוירונים דופאמין ב VTA, הרלוונטיות הפונקציונלית של השינויים המושרה מינית המושרה נבדקו לתגמל מורפין. חיות מיניות ותמימות חולקו לשש קבוצות ניסוי שונות (n = 9, 13, או 0.5 מ"ג / ק"ג, IP) ונבדקו עבור העדפת מקום מותנה במורפיום (CPP).

מורפין-CPP.

ההתאמה התרחשה 1 d לאחר המפגש האחרון ההזדווגות וקבוצות תואמו לביצועים מיניים במהלך הפגישה האחרונה ההזדווגות. הפרדיגמה המשומשת של CPP כללה תקופת בדיקה מוקדמת, מיזוג ימים, לאחר בדיקה, ומכשירים התבססו על טנק ואחרים. (2009). בקצרה, מנגנון ה- CPP (MED Associates) כלל שלושה תאים נפרדים. בין כל מפגש, המנגנון נוקה ביסודיות עם פתרון אתנול 70% כדי למזער רמזים ריחניים מתמשכים. כדי לקבוע העדפות אישיות, נערכה בדיקה מוקדמת במהלכה קיבלו בעלי חיים גישה חופשית לכל המנגנון למשך 15 דקות. כקבוצה, בעלי חיים לא הראו העדפה משמעותית לתא ספציפי, אך לכל חיה בודדת הייתה העדפה ראשונית קלה. חולדות שהראו העדפה מהותית לאחד התאים (הפרש> 200 שניות בין זמן השהייה בכל אחד מהתאים; <5% מהבעלי חיים) במהלך המבחן המוקדם לא נכללו במחקר. במהלך ההתניה, הוצמדה תרופה לחדר מועדף או לא מועדף באמצעות פרדיגמה בלתי משוחדת (צשנטקה, 2007) ובעלי חיים היו מרותקים לתאי 30 דקות. בעלי חיים הוזרקו עם תמיסת מלח (IP) בבוקר (9: 00 AM ל- 12: 00 PM) ונכלאו בתא המלוחים המשולב (שליטה). אחר הצהריים (1: 00: 4: 00 PM), בעלי חיים הוזרקו מורפיום (IP, 0.5 מ"ג / ק"ג, 5.0 מ"ג / ק"ג או 10.0 מ"ג / ק"ג, מורפיום גופרתי מומס 0.9 מלוחים%, ג 'ונסון Matthey) לתא המורפיום. החיות היו כפופות לשני ימי התניה. למחרת (3 ד לאחר יום האחרון של ההזדווגות) נערך מבחן שלאחר, זהה מבחינה פרוצדורלית למבחן. לצורך ניתוח סטטיסטי, הזמן שהושקע בתא המורפיום במהלך הבדיקה שלאחר ההשוואה הושווה עם הזמן שבילה בתא המלוחים במהלך הבדיקה שלאחר הניתוח לזכרים תמימים מינית או מנוסים בכל מנון, תוך שימוש בזוג t מבחן. p <0.05 נחשב למובהק סטטיסטית. קבוצות בקרה נוספות של בעלי חיים נאיביים ומנוסים קיבלו תמיסת מלח בתאים זוגיים ולא מזוודים כדי לשמש כבקרות שליליות. לא נמצאו הבדלים בזמן הבילוי בין החדרים בשתי הקבוצות.

השפעות של נלוקסון מערכתית על ניסיון הנגרם על ידי ההתנהגות המינית

עיצוב נסיוני.

חוויה מינית גורמת להקל על ההתנהגות המינית שמקיימת במשך חודש 1 לפחות (Pitchers ואח ', 2012). כדי לנתח את ההשפעה של חסימת MOR על הנסיון הנגרם על ידי התנהגות מינית, בעלי חיים מנוסים מינית קיבלו או naloxone או מלוחים לפני חמש פגישות רצופות ההזדווגות (n = 12 כל אחד) כמתואר למעלה. שבוע לאחר הפגישה האחרונה של ההזדווגות, נערך מבחן הזדווגות סופי שבמהלכו כל בעלי החיים הורשו להזדווג עד שפיכה אחת או עד 1 h. לא נלוקסון או טיפול מלוחים ניתנה לפני ההזדווגות ביום הבדיקה הסופית. הפרמטרים של ההזדווגות הושוו כדי לקבוע האם נלוקסון השפיע על הנטייה של המין, הנגרמת על ידי חוויית מין (יום 1 לעומת יום 5) או תחזוקה של הנחייה זו (יום 5 לעומת בדיקה) תוך שימוש ב- ANOVA דו-כיווני [גורמים: טיפול (מלוחים לעומת נלוקסון ) ויום (יום 1, יום 5, או בדיקה)] ו Holm-Sidak שיטה פוסט הוק השוואות. עבור כל המבחנים הסטטיסטיים, p <0.05 נחשב למובהק סטטיסטית.

ניסויי בקרה נוספים

מערכת נלוקסון מערכתית ביום הבדיקה.

כדי להראות כי התנהגות מינית שונה ביום המבחן האחרון ההזדווגות לא בשל היעדר naloxone, אנו מנוהל או naloxone או מלוחים ביום מבחן ההזדווגות הסופי לבעלי חיים שקיבלו הזדווגות זיווג עם נלוקסון בזמן שהם זכו לחוויה מינית. באופן ספציפי, כל בעלי החיים קיבלו זריקה נלוקסון (10 מ"ג / ק"ג, sc) 30 דקות לפני ההזדווגות לשפיכה אחת במהלך 5 ימים רצופים. ביום הבדיקה 7 ד מאוחר יותר, כמחצית החיות קיבלו זריקה של naloxone (10 מ"ג / ק"ג, n = 7) או מלוחים (n = 6) 30 דקות לפני המבוא של נקבה פתוחים. התנהגות מינית נצפתה ונרשמה. הפרמטרים של ההזדווגות הושוו כדי לקבוע האם נלוקסון השפיע על הנטייה של המין, הנגרמת על ידי חוויית מין (יום 1 לעומת יום 5) או תחזוקה של הנחייה זו (יום 5 לעומת בדיקה) תוך שימוש ב- ANOVA דו-כיווני [גורמים: טיפול (מלוחים לעומת נלוקסון ) ויום (יום 1, יום 5, או בדיקה)] ו Holm-Sidak שיטה פוסט הוק השוואות. עבור כל המבחנים הסטטיסטיים, p <5% נחשב למובהק סטטיסטית.

השפעות של נלוקסון על ביטוי לטווח קצר של התנהגות מינית מקלה.

השפעות הטיפול ב- naloxone (10 mg / kg, sc) במהלך ההתאמה נבדקו על התנהגות מינית מאוחרת במהלך יום מבחן ההזדווגות האחרון, שנערך רק לאחר 1 לאחר ההזדווגות האחרונה (מלוחים, n = 5; נלוקסון, n = 4).

טיפול נלוקסון סיסטמי.

כדי לקבוע האם הטיפול חוזר על נלוקסון לבדו גורם לירידת ההתנהגות המינית 7 לאחר הטיפול האחרון, בעלי חיים תמימים מבחינה מינית קיבלו חמישה נלוקסון יומי (10 mg / kg, sc) או זריקות מלוחים בימים רצופים לפני בדיקת הזדווגות 7 d לאחר נלוקסון סופי או זריקה מלוחים. ביום המבחן האחרון, בעלי חיים לא קיבלו שום זריקה. התנהגות מינית נצפתה ונרשמה כמתואר לעיל. פרמטרים של הזדווגות הושוו בין קבוצות באמצעות unaired t בדיקות. עבור כל המבחנים הסטטיסטיים, p <5% נחשב למובהק סטטיסטית.

נלוקסון מערכתית ותגמול מיני.

אחת האפשרויות להשפעות המקטינות של נלוקסון על הצגת תחזוקת ההתנהגות המינית הקלה היא שנלוקסון חוסם את ההשפעות המתגמלות של התנהגות מינית. כדי לבחון אפשרות זו, פרדיגמת ה- CPP נערכה להתנהגות מינית מייד לאחר הזרקת נלוקסון או מלחה אצל גברים ללא ניסיון מיני קודם. הליך ה- CPP היה דומה לתאר לעיל עבור מורפין-CPP, כולל בדיקה מוקדמת, ימי מיזוג ואחרי הבדיקה.

ההתנהגות המינית היתה מזווגת עם החדר הראשון שלא נחקר. באופן מאוזן, כל בעל חיים קיבל זריקה של נלוקסון (n = 12) או מלוחים (n = 11) 30 דקות לפני קבלת גישה לאישה מקבלת. משך הזמן הממוצע של מפגש ההזדווגות היה ~ 13 דקות. דקה אחת לאחר שפיכה, החיה הוצב בתא זוג עבור 30 דקות. ביום מיזוג אחר, בעלי חיים קיבלו זריקה של נלוקסון או מלוחים (לפי מה שהם קיבלו לפני ההזדווגות), והוכנסו לחדר לא מזוגג עבור 30 דקות. לאחר מכן, נערכה בדיקה, זהה למבחן. כדי לקבוע העדפה קאמרית, הזמן שהושקע בתא זוג יחד במהלך הבדיקה לפני ואחרי הושווה. עבור ניתוח סטטיסטי, לזווג t המבחנים שימשו להשוואה בין ציוני העדפה והבדלים, וזמן בתא זוגי במהלך הבדיקה לפני ואחרי הבדיקה כדי לקבוע אם CPP משמעותי נוצר עבור התנהגות מינית. p <0.05 נחשב משמעותי.

השפעות של נלוקסון תוך VTA על הנסיון הנגרם על ידי ההתנהגות המינית

עיצוב נסיוני.

כדי לקבוע האם הפעולה של EOP ב - VTA הייתה אחראית להשפעות השינויים המיניים המבוצעים על ידי חוויות מיניות, בעלי חיים עברו עירוי מקומי של נלוקסון או מלוחים לתוך ה - VTA לפני חמישה מפגשים יום יומיים. הפרדיגמה ההתנהגותית היתה דומה לניסוי הלוקאלי המערכתי. בעלי חיים מנוסים מבחינה מינית הורשו להזדווג במהלך 5 ימים רצופים עד שפיכה אחת או עד 1 ח. חמש עשרה דקות לפני שהציגו את הנקבה הנקבית, חולדות הזכרים קיבלו עירוי דו-צדדי של נלוקסון (10 מיקרוגרם / μl לחצי הכדור, נפח 0.5 μl, מומס ב- 0.9% מלוחים) או מלוחים (0.5 μl לחצי הכדור). Microinjections בילטרית ניתנו בקצב זרימה של μL 0.5 / min מעל מרווח 1 דקות ואחריו דקות 1 נוספת עם צינורית הזרקה נותר במקום עבור דיפוזיה. צינורית הזרקת הוחלף אז עם צינורית דמה וכובע אבק. שבוע לאחר היום האחרון של ההזדווגות (יום הבדיקה), כל החיות הזדווגו שוב לשפיכה ללא עירוי של נלוקסון או מלוחים. איור 3A מתאר את העיצוב הניסיוני. ניתוח הנתונים בוצע כמתואר ניסוי נילוקסון מערכתית.

ניתוח Cannulation.

חולדות זכר היו מורדמים עם זריקה intraperitoneal (0.1 מ"ל / ק"ג) של קטמין (0.87 מ"ג / מ"ל) ו xylazine (0.13 מ"ג / מ"ל), והניח לתוך מנגנון stereotaxic (Kopf מכשירים). XLUMX-מד קנוולס חד-כיווני (פלסטיק אחד) הורדו דרך חורי מקדחה קטנים בגולגולת לתוך המוח לעבר ה- VTA ב- 21 mm AP, ± 4.8 mm ML מ- Bregma ו- 0.75 mm DV מהחלק העליון של הגולגולת, Paxinos ו- Watson (2013). קנולים היו מאובטח עם אקריליק שיניים דבקות בשלושה ברגים להגדיר לתוך הגולגולת. לבעלי חיים ניתנו תקופת התאוששות של 2 בשבוע, וטופלו מדי יום בהרגלי טיפול ובטיפול בהזרקה שנעשה בהם שימוש במהלך בדיקות התנהגותיות.

אימות מיקום של קנולה.

המיקום של cannulas נבדק באמצעות TH- immunostaining כדי לאשר את VTA היה ממוקד במדויק. רק בעלי חיים עם מיקומים מתאימים נכללו בניתוחים (גודל קבוצתי סופי: מלוחים מנוסים n = 8; נלוקסון מנוסה n = 6). שלושה בעלי חיים נוספים שקיבלו זריקות נלוקסון תוך VTA המכוונות מחוץ ל- VTA היו מקובצים יחד בקבוצת הזרקת "החמצת". הקבוצה החמיצה נותחה בנפרד כדי לשמש כבקרה אנטומית ומאן-ויטני U הבדיקה שימשה להשוואת התנהגות ביום הבדיקה הסופית עם נלוקסון ו מלוחים מטופלים מנוסים.

Mating הקשורים המקושרים רמז-ביטוי המושרה pERK

עיצוב נסיוני.

חשיפה לכלוב שבו זכרים רכשה ניסיון הזדווגות הוכח לגרום הפעלה MOR ב VTA ופעילות עצבית VTA ו NAC (בלפור ואח ', 2004). לפיכך, סביבת ההזדווגות משמשת כסימן מותנה לניבוי שכר מיני. המחקר הנוכחי בדק האם הפעלת MOR במהלך החוויה המינית נדרשת להפעלה עקבית של פעימות עצביות כתוצאה מ - cue-induced. נלוקסון או מלוחים ניתנו באופן שיטתי (IP) 30 דקות לפני מיקום בזירה ההזדווגות ואת ההקדמה של נקבה פתוח עבור הזדווגות (מנוסה), או לפני מניפולציה שליטה שכללה מיקום בכלוב טיפול ללא הצגת נקבה (ניטרלי סביבה נאיבית). כך, ארבע קבוצות ניסיוניות נוצרו: Naive Sal, NaLX Naive, Exp Sal, ו NLX Exp. שבוע לאחר הפגישה האחרונה של ההזדווגות, מחצית מהחיות בכל קבוצה נחשפו לכלוב ההזדווגות (גברים זכרים: רמזים מותנים הקשורים למין) או טיפול בכלוב (גברים תמימים: רמזים לא נימוסים / נייטרליים), בעוד שהחצי השני לא נחשף כל רמזים במקום נשאר בכלובים בבית (כדי לקבוע ביטוי pERK הבסיס). זה פרדיגמה ניסיוני מיוצר 8 קבוצות: נאיבי Sal- לא קיו, נאיבי סאל + קיו, נאיבי NLX- לא קיו, נאיבי NLX + קיו, Exp Sal- לא קיו, Exp סאל + קיו, Exp NLX- לא קיו, Exp NLX + רמז (n = 4 כל אחד למעט Nive NLX- לא רמז, n = 3). בעלי חיים היו perfused 10-15 דקות לאחר חשיפה קיו. חיות בקרה הוסרו מכלובים בבית שלהם perfused בו זמנית.

אימונוהיסטוכימיה.

חתכים ואימונוהיסטוכימיה נערכו כמתואר לעיל. כאן, השתמשנו נוגדנים polyclonal ארנבת נגד p42 ו p44 מפת קינאקים ERK1 ו ERK2 (pERK, 1: 4 000, Cell איתות טכנולוגיה). הנוגדן העיקרי אובחן באופן נרחב בספרות (Roux ו Blenis, 2004; מרפי ובלניס, 2006; Frohmader et al., 2010b). יתר על כן, השמטה של ​​הנוגדן העיקרי מנע כל immunoreactivity וניתוח כתם המערבי של רקמת המוח חולדה חשף שתי להקות במשקולות מולקולריות המתאים.

ניתוח נתונים.

תאים pIRK-immunoreactive (-IR) נספרו במספר אזורים במוח באמצעות צינור ציור lucida המצלמה המצורפת לייקה מיקרוסקופ DMRD: NAC [ליבה (C) ופגז (S); 400 × 600 μm; קליפת המוח הפריפרונטלית המדיאלית; mPFC; אזור cingulate הקדמי (ACA); קליפת prelimbic (PL); קורטקס אינרלימבי (IL); 600 × 800 מיקרומטר כל], caudate-putamen (CP, 800 × 800 מיקרומטר), ו amygdala basolateral (BLA, 900 × 1200 מיקרומטר; בלפור ואח ', 2004; Frohmader et al., 2010b; Pitchers ואח ', 2010b). שני סעיפים נספרו לכל אזור המוח ומספר התאים באזורים הסטנדרטיים של ניתוחים חושבו אז כמספרים של תאים לכל מ"מ2. שני הסעיפים היו ממוצעים לכל בעל-חיים לצורך חישוב אמצעים קבוצתיים. ממוצעים קבוצתיים בקרב קבוצות מנוסות או נאיביות מינית הושוו באמצעות אנבה דו-כיוונית [גורמים: טיפול תרופתי (NLX או Sal) ורמז (רמז או רמז)] ואחריו פוסט הוק השוואות באמצעות בדיקות Holm-Sidak או Mann-Whitney סכום, לפי הצורך, ברמת מובהקות של p <0.05. במעטפת ה- NAc של בעלי חיים מנוסים מינית, הייתה מגמה חזקה כלפי משמעות הגורמים, ולכן נערכו השוואות זוגיות להשוואת קבוצות מלוחים (Sal-No Cue) וקבוצות מלוחים (Sal + Cue) בלבד.

תמונות.

תמונות דיגיטליות נתפסו באמצעות מצלמה CCD (Macrofire, Optronics) המצורפת לייקה מיקרוסקופ (DM5000B) עם הגדרות מצלמה קבועה. תמונות יובאו לתוך התוכנה Adobe Photoshop 9.0. תמונות לא השתנו בשום אופן מלבד התאמה של בהירות וניגודיות.

תוצאות

חוויית מין- induced שינויים VTA דופמין תאים

החוויה המינית הביאה לירידה בגודל ה- VTA של דופאמין סופה (האיור 1A-C). חוויה מינית הפחית באופן משמעותי את השטח ואת היקף של סומה של תאים TH-IR VTA (אזור: F(1,31) = 23.068, p <0.001; היקפי, F(1,31) = 18.225, p <0.001). הייתה גם השפעה משמעותית עיקרית של זמן (אזור: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; היקף, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) ו אינטראקציה משמעותית בין ניסיון וזמן (אזור: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; היקף, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). השוואות Pairwise גילה כי השטח ואת היקף של תאים TH-IR הופחתו באופן משמעותי 1 ו 7 ד לאחר היום האחרון של התנהגות מינית אצל בעלי חיים מנוסים מינית לעומת בקרות נאיביות מינית [האיור 1B, post p = 0.002 (1 ד), p <0.001 (7 ד); C, היקף: p = 0.009 (1 ד), p <0.001 (7 ד)]. ההשפעה של התנהגות מינית התפוגגה כשאחריה באה תקופת ההתנזרות מתגמול כאשר גודל הסומה של נוירונים TH-IR חזר לקו הבסיס 31 d לאחר פגישת ההזדווגות האחרונה (האיור 1B, post p = 0.798; C, היקף: p = 0.785). שינויים שחוו חוויית מין לא זוהו במעגל בכל נקודת זמן (האיור 1D). VTA דופאמין סומה גודל הפחתת לא היה תלוי בישיבות ההזדווגות היומי, כמו ניסיון הזדווגות במהלך חמש פגישות דו שבועיות גם הפיק מופחת VTA דופאמין סומה גודל (האיור 2A,B, E-H, post p = 0.004; היקף: p <0.001). לעומת זאת, חווית מין לא השפיעה על גודל הסומה של ה- TH-IR בסובסטניה ניגרה (האיור 2C, I-J, post p = 0.13; היקף: p = 0.16) ולא השתנה גודל סומה ב VTA הלא TH-IR נוירונים (האיור 2D, E-H, post p = 0.46; היקף: p = 0.45).

האיור 1. 

צפייה בגרסה גדולה יותר: 

האיור 1. 

אנדוגני- opioid- המושרה שינויים בגודל soma של נוירונים דופמין VTA. A, נציג תמונות של נוירונים דופאמין VTA מ חיות נאיביות מינית ומנוסה מראה את הירידה בגודל soma 7 ד לאחר הפגישה ההזדווגות האחרון. סולם בר, 5 מיקרומטר. נתונים כמותיים מראים כי חוויה מינית (Exp, ברים שחורים) גרמה לירידה משמעותית באזור (B; in מיקרומטר2) ואת המערכת (C; in מיקרומטר) של תאים דופמין VTA, 1 ד (נאיבי, Exp; n = 6) ו- 7 d (נאיבי, n = 5; Exp, n = 6), אך לא 31 d (נאיבי, n = 6; Exp, n = 8) לאחר ההזדווגות האחרונה, לעומת בקרות נאיביות מינית (פסים לבנים, נאיביים). השטח צומצם ל- 84% אצל גברים מנוסים בהשוואה לבקרות נאיביות ב- 1 או 7 d. המערכת צומצמה ל- 91.6 ו- 90% בקבוצות מנוסות בהשוואה לשליטה ב- 1 ו- 7 d resp. לא הייתה השפעה על המעגליות (D). זה פלסטיות התא דופמין באזור (E) ואת המערכת (F) נמנע על ידי naloxone (NLX, n = 8), אבל לא מלוחים (סאל, n = 7) במהלך הזדווגות, 7 d לאחר מפגש ההזדווגות האחרון לעומת בקרות נאיביות מינית (סאל, n = 5; NLX, n = 6). הנתונים מייצגים ממוצע ± SEM; * מציין הבדל משמעותי לעומת בקרות נאיביות מיניות באותו יום (B, C), או בהשוואה לטיפול בקללות מיניות ותאי נלוקסון,E, F).

האיור 2. 

צפייה בגרסה גדולה יותר: 

האיור 2. 

חוויה מינית לא להקטין את גודל soma ב נוירונים נוגרה דופאמין או נוירונים VON nondopamine. VTA TH-IR נוירון סומה אזור (A; in מיקרומטר2) ואת המערכת (B; in μm) אצל בעלי חיים תמימים מינית (לבנים) ומנוסים (שחורים) שצברו ניסיון על ידי הזדווגות פעמיים בשבוע ולא במהלך ימים רצופים. Subcastia nigra TH-IR soma שטח (C) ו VTA שאינם TH-IR soma אזור (D) בחיות נאיביות מיניות (לבנות) ומנוסות (שחורות). הנתונים מייצגים ממוצע ± SEM; * מציין הבדל משמעותי לעומת בקרות נאיביות מינית. תמונות נציג מראה TH-IR (נוירונים חומים) ב VTA של נאיבי מינית (E), ומנוסים (F) גברים. G, H, תמונה של הגדלה גבוהה יותר של הנוירון המצוין על ידי החץ פנימה E ו F בהתאמה. Nissl מוכתמים נוירונים מוצגים בכחול בתמונות אלה. תמונות נציג המייצג TH-IR נוירונים ב SN של נאיבי מינית (I) ומנוסים (J) גברים. סרגלי קנה מידה: E-J, 20 מיקרומטר.

חוויית המין הנגרמת על ידי נוירונים דופאמין של VTA תלויה בגידול של קולטן אופיואיד

ההפחתה של גודל ה- VTA של דופאמין נוירון שנגרם על-ידי חוויה מינית נחסמה על-ידי נלוקסון האנטי-סלקטיבי של MOR, שנוהל לפני כל מפגש של הזדווגות. טיפול נלוקסון לפני המפגשים ההזדווגות היתה השפעה משמעותית על השטח (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) ו trended לעבר השפעה משמעותית על המערכת (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). אינטראקציה משמעותית בין הניסיון לבין טיפול נלוקסון נמצאה עבור שטח (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) ואת המערכת (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). השוואות Pairwise הראה כי ניסיון מיני בבעלי חיים שטופלו מלוחים הפחית באופן משמעותי את האזור ואת המערכת של נוירונים דופאמין VTA 7 ד לאחר הפגישה האחרון ההזדווגות לעומת מלוחים שטופלו מינית גברים תמימים (האיור 1E, post p = 0.018; F, היקף: p = 0.007). לעומת זאת, בעלי חיים מנוסים בעלי אופי מינימלי של נלוקסון לא נבדלו מזכרים נאיוקסונים (נלוקסון)האיור 1E, post p = 0.483; F, היקף: p = 0.330). בנוסף, גודל soma של בעלי חיים מלוחים מנוסה ירד באופן משמעותי לעומת בעלי חיים מנוסים naloxone (האיור 1E, post p = 0.002; F, היקף: p = 0.002). השפעה זו של נלוקסון הייתה ספציפית לחוויה מינית, שכן הטיפול בנלוקסון לבדו לא השפיע על גודל ה- TH-IR של תאי ה- TH בגברים נטולי-נאיביות מתואמים מינית בהשוואה לשליטה של ​​מלוחים (האיור 1E,F). יתר על כן, השפעה זו של נלוקסון על הפחתת החוויה הנגרמת על ידי חוויית סומה לא נבעה מהשלכות של נלוקסון על התנהגות מינית, שכן התנהגות ההזדווגות לא נבדלה באופן מובהק בין גברים שנלקחו על ידי נלוקסון ומלוחים, למעט זמן ארוך יותר ליזום הזדווגות לאחר שפיכה (שלאחר שפיכה אינטרוול) בזכרים מטופלים naloxone במהלך הפגישה הזיווג הראשון והחמישי (p = 0.03 ו- p = 0.004, בהתאמה). הן גברים מלוחים והן נלוקונים שטופלו לשפיכה במהלך כל אחת מחמש הפגישות של ההזדווגות.

חוויה מינית-המושרה מורפיום גמול סובלנות

השפעות החוויה המינית על גודל ה- VTA של דופמין סומין על ידי פעולה של EOP ב- VTA דומים לאלה המדווחות עבור opiates אקסוגניים (Sklair-Tavron ואח ', 1996; רוסו ואח ', 2007). לכן, זה נבדק האם טבעי גמול- Induced VTA דופמין פלסטיות התא משפיע גמול על מורפיום אופיום. ואכן, חוויה מינית גרמה לסבולת מורפיום, בדומה להשפעות של אופיאטים כרוניים (רוסו ואח ', 2007). גברים מנוסים מבחינה מינית נכשלו לפתח CPP עבור 0.5 מ"ג / ק"ג מורפין במינון; ואילו גברים תמימים מבחינה מינית יצרו CPP עבור מינון זה, כפי שצוין על ידי ההוצאות כמות גדולה יותר של זמן בתא מורפיום לזווג לעומת תא מלוחים מזווג במהלך הבדיקה שלאחר (האיור 3; p = 0.039). שתי הקבוצות תמימות מינית ומנוסה בילה כמות גדולה יותר של זמן בתא מורפיום לזווג לעומת תא מזווג עם מינון גבוה של מנות מורפיום: 5.0 מ"ג / ק"ג (האיור 3; תמים: p = 0.029; Exp: p = 0.012) ו- 10.0 מ"ג / ק"ג (האיור 3; תמים: p <0.001; תאריך תפוגה: p = 0.002).

האיור 3. 

צפייה בגרסה גדולה יותר: 

האיור 3. 

ההשפעות של ניסיון מיני על גמול מורפיום. החוקרים מוסיפים כי פעמים שבילו בסליין (Sal) או במורפיום (מור, 0.5, 5 או 10 מ"ג / ק"ג משקל גוף) בתאי הבדיקה לאחר נטייה מינית (נאיבי, n = 10-13) או מנוסים (Exp, n = 9-13) זכרים. נתונים המוצגים כ ממוצע ± SEM; * מציין הבדל משמעותי לעומת תא לזווג בתוך אותם בעלי חיים. NS, לא משמעותי.

חוויית המין הנגרמת על ידי התנהגות של ההזדווגות תלויה בהפעלת קולטן אופיואיד

הממצאים עד כה מראים כי פעילות EOP ב VTA במהלך 5 היומי הפעלות ההזדווגות קצר לגרום גמישות של נוירונים דופמין VTA הדומה להשפעות של מורפיום כרונית או הרואין עצמי הממשל (רוסו ואח ', 2007; Mazey-Robison ואח ', 2011). שיערנו כי הפחתת גודל סופה של דופאמין של VTA היא קריטית ללמידה מתגמלת, ובמיוחד להנחיית יחסי מין של התנהגות מינית במונחים של מוטיבציה וביצועים. השערה זו נבחנה על ידי חסימת MOR באמצעות naloxone במהלך ההזדווגות ובחינת ההשפעות על הקלות של התנהגות מינית הנגרמת על ידי ניסיון מיני במהלך חמש פגישות ההזדווגות היומי. הנתונים מוצגים ב איור 4 לפגישות ההזדווגות הראשונה והחמישית בלבד, שכן אלו הן הנתונים הממחישים בצורה הטובה ביותר חוויית הנסיון המושרה של התנהגות ההזדווגות. יתר על כן, ההשפעות ארוכות הטווח של טיפול naloxone במהלך הפגישות ההזדווגות נבדקות על תחזוקה של הנסיון הנגרמת על ידי התנהגות ההזדווגות, במהלך מבחן ההזדווגות הסופי 1 שבוע מאוחר יותר. איור 4A מראה את העיצוב הניסויי. הייתה השפעה משמעותית משמעותית של מפגש ההזדווגות על כל הפרמטרים של התנהגות מינית (חביון הר: F(2,55) = 11.286, p <0.001; חביון אינטרמיסציה: F(2,55) = 8.767, p <0.001; חביון שפיכה: F(2,55) = 10.368, p <0.001) וטיפול בנלוקסון בהשהיות לעלות (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) ו intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). השוואות Pairwise הראה כי טיפול naloxone השפיעו על התנהגות מינית במהלך הפגישה הראשונה ההזדווגות כי בעלי חיים naloxone היה זמן המתנה ארוכה משמעותית כדי הר הראשון (p = 0.002) ו intromission (p = 0.002) בהשוואה למניעת מלוחים ביום הראשון של ההזדווגות. השפעת נלוקסון זו על ההתנהגות המינית הראשונית נבלמה על ידי חוויה מינית ולא נצפתה במהלך כל פגישות ההזדווגות הבאות (לוח 1). יתר על כן, ניהול נלוקסון לפני כל אחת מחמש פגישות ההזדווגות לא מנע סיוע ראשוני של התנהגות מינית עם ניסיון מיני. בקנה אחד עם השפעות חיזוק של חוויה מינית, גברים מלוחים שטופלו מלוחים הציג latencies נמוך לעלות (האיור 4B; p = 0.032) intromission (האיור 4C; p = 0.033) ו שפיכה (האיור 4D; p <0.001) במהלך מפגש ההזדווגות החמישי בהשוואה לפגישת ההזדווגות הראשונה, שהצביעה על הקלה בהתנהגות מינית. באופן דומה, גברים שטופלו בנלוקסון הציגו זמן אחזור קצר יותר לעלות (האיור 4B; p <0.001), אינטרמיסציה (האיור 4C; p <0.001) ושפיכה (האיור 4D; p = 0.017) בחמישית לעומת היום הראשון. יתר על כן, הזכרים שטופלו בנלוקסון לא נבדלו מבקרות מלוחים בכל אחד מהשינויים במהלך המפגש החמישי של ההזדווגות.

האיור 4. 

צפייה בגרסה גדולה יותר: 

האיור 4. 

אנדואידים אנדוגניים ממלאים תפקיד קריטי בהנחיית החוויה של ההתנהגות המינית. A, עיצוב נסיוני. B-D, פרמטרים התנהגות מינית עבור גברים מטופלים עם מלוחים (סאל, ברים לבנים, n = 11) או naloxone (NLX, ברים שחורים, n = 12) עם ניהול מערכתית. הנתונים המוצגים הם זמן האחזור להר (B; שניות), intromission (C; שניות), ו שפיכה (D; שניות) בימים 1 ו 5 של חמישה ימים רצופים של הזדווגות. בנוסף, הנתונים מוצגים עבור המבחן ההזדווגות הסופי, 7 ד לאחר הפגישה החמישי מפגש. הנתונים מוצגים כ ממוצע ± SEM; + מציין הבדל משמעותי בין הימים 1 לבין 5 בתוך הטיפול; * מציין הבדל משמעותי בין יום הבדיקה ליום 5 בתוך הטיפול; # מציין הבדל משמעותי בין קבוצות naloxone ו מלוחים בתוך יום.

הצג טבלה זו: 

הטבלה 1. 

נלוקסון הממשל לפני ההזדווגות גדל latencies לעלות ו intromission רק ביום הראשון של ההזדווגות

לעומת זאת, טיפול נלוקסון במהלך הפגישה מינית ניסיון לשבש את תחזוקה של הנסיון הנגרמת ניסיון של התנהגות מינית ביום מבחן ההזדווגות הסופי. יום הבדיקה נערך 7 ד לאחר הפגישה הזדווגות הסופי בהעדר הזרקת נלוקסון. מלוחים שטופלו על ידי מלוחים הראו את ההתנסות הצפויה בחוויה של ההתנהגות המינית. באופן ספציפי, latencies כדי הר, intromission, ו שפיכה לא היה שונה בין הפגישה החמישי מפגש יום הבדיקה הסופי (האיור 4B-D). והואיל, הזכרים שטופלו בנלוקסון הראו עלייה משמעותית בחביון הליטוש כדי לעלות (האיור 4B; p = 0.033), intromission (האיור 4C; p = 0.036) ו שפיכה (האיור 4D; p = 0.049) ביום הבדיקה בהשוואה לפגישת ההזדווגות החמישית. כמו כן, ביום הבדיקה נלוקסון חיות נמצאו להיות איטי יותר מאשר גברים מלוחים שטופלו כפי שמוצג על ידי latencies ארוך לעלות (האיור 4B; p = 0.017) ו intromission (האיור 4C; p = 0.043). לפיכך, טיפול naloxone חסם את התחזוקה, אבל לא הראשונית, התפתחות של הנסיון הנגרמת על ידי ניסיון של התנהגות מינית. ממצאים אלה מצביעים על תפקיד קריטי עבור EOP- המושרה VTA דופמין נוירון פלסטיות על ביטוי לטווח ארוך של חיזוק התנהגות גמול טבעי.

כמה ניסויים נוספים שנערכו כדי לקבוע כי ההשפעות של חסימת קולטן אופיואיד על אובדן של חיזוק לטווח ארוך של התנהגות מינית התרחשה עצמאית מחוסר נלוקסון הממשל ביום מבחן ההזדווגות הסופי (האיור 5A,B), היו ספציפיים לאובדן לטווח ארוך, אך לא לטווח קצר תחזוקה של הזדווגות הקלה (האיור 5E,F), לא נגרמו על ידי חשיפה יומית לנלוקסון לבד (האיור 5C,D), ולא נגרמו על ידי אובדן של שכר מיני אצל גברים שטופלו בנלוקסון (האיור 5G,H). ראשית, כדי להראות כי התנהגות מינית שונה על מבחן ההזדווגות הסופי לא היה בשל היעדר נלוקסון, או naloxone או מלוחים ניתנה ביום מבחן ההזדווגות הסופי לבעלי חיים שקיבלו הזדווגות זיווג עם נלוקסון בזמן שהם זכו ניסיון מיני (האיור 5A). היתה השפעה משמעותית משמעותית של יום ההזדווגות על latencies לעלות (האיור 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) ו intromission (לוח 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). לא היתה השפעה עיקרית של יום ההזדווגות על חביון לשפיכה (לוח 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) בדומה למתואר לעיל, טיפול naloxone במהלך ההזדווגות לא השפיע על הקלות של ההתנהגות המינית במהלך חמש פגישות מיניות הראשונית. שתי הקבוצות (קבוצות מלוחים ונלוקסון שטופלו על ידי טיפול שהתקבלו במהלך מבחן ההזדווגות הסופי, הן שקיבלו נלוקסון במהלך ההזדווגות) הראו התנהגות מינית נוחה ביום 5 בהשוואה ליום 1 והראו זמן אחזור קצר יותר להרכבה ראשונה (האיור 5B; מלח: p = 0.033; naloxone: p = 0.014) ו intromission (לוח 2; מלח: p = 0.034; naloxone: p = 0.026). בעלי חיים שקיבלו נלוקסון או מלוחים ביום מבחן ההזדווגות הסופי היו זמן רב יותר לטעינות (האיור 5B; מלח: p = 0.018; naloxone: p = 0.029) ו intromission (לוח 2; מלח: p = 0.019; naloxone: p = 0.020) לעומת היום החמישי של ניסיון ההזדווגות. לכן, ניהול של נלוקסון או מלוחים ביום הבדיקה מיד לפני ההזדווגות לא השפיעו על ההשפעה של טיפול נלוקסון במהלך הפעלות מיניות, הנחתה של הקלה ארוכת טווח של התנהגות מינית היה זהה לזה שמוצג בבעלי חיים שלא קיבלו זריקה כלשהי ביום מבחן ההזדווגות הסופי (האיור 4).

האיור 5. 

צפייה בגרסה גדולה יותר: 

האיור 5. 

אנדואידים אנדוגניים חשובים בביטוי לטווח ארוך של הנסיון הנגרם על ידי ניסיון של התנהגות מינית. A, עיצוב ניסיוני לניסוי ההשפעה של טיפול NLX ביום הבדיקה. B, חביון הר בימים 1 ו 5 של חמישה ימים רצופים של ההזדווגות ואת יום הניסוי הסופי הזדווגות (מבחן) הבא מלוחים (אפור) או נלוקסון (שחור) הזרקה. הנתונים מייצגים ממוצע ± SEM. * מציין הבדל משמעותי בין יום 1 לבין יום 5 בתוך הטיפול. # מציין הבדל משמעותי בין יום הבדיקה לבין יום 5 במהלך הטיפול. C, עיצוב ניסיוני לניסוי כדי לבדוק את ההשפעה של נלוקסון מראש טיפול לבד ללא ניסיון מיני על התנהגות ההזדווגות. D, חביון הר ביום מבחן ההזדווגות הסופי, 7 ימים לאחר 5 ימים של מלוחים או זריקה naloxone בהעדר ההזדווגות. הנתונים מייצגים ממוצע ± SEM. E, עיצוב ניסיוני לניסוי כדי לבדוק האם טיפול נלוקסון השפיע על התצוגה הקצרה של התנהגות מינית מקלה אצל בעלי חיים מנוסים. F, חביון הר ביום 1 ויום 5 של חמישה ימים רצופים של ההזדווגות ואת יום הניסוי האחרון ההזדווגות, 1 יום אחר יום 5 בנוכחות מלוחים (אפור) או נלוקסון (שחור) הזרקה. הנתונים מייצגים ממוצע ± SEM. * מציין הבדל משמעותי בין יום 1 לבין יום 5 בתוך הטיפול. G, עיצוב ניסיוני לניסוי כדי לבדוק האם טיפול נלוקסון חסם את ההשפעות המתגמלות של ההתנהגות המינית. H, הזמן המושקע בתא זוג לזווג (בשניות) במהלך הבדיקה (לבן) ולאחר הבדיקה (שחור) עבור בעלי חיים שקיבלו נלוקסון או מלוחים לפני ההזדווגות. הנתונים מייצגים ממוצע ± SEM; * מציין הבדל משמעותי בהשוואה למבחן.

הצג טבלה זו: 

הטבלה 2. 

הנתונים המוצגים הם latencies כדי intromission ו שפיכה (שניות) מניסויי בקרה שנערכו כדי לקבוע כי ההשפעות של המצור מור על אובדן לטווח ארוך חיזוק של התנהגות מינית התרחש עצמאית מחוסר של הממשל naloxone ביום מבחן ההזדווגות הסופי

כדי לקבוע אם זה היה טיפול naloxone כאשר זיווג עם ניסיון מיני ולא חזר על naloxone כשלעצמה שגרמה לירידת התנהגות מינית 7 ד לאחר הטיפול האחרון, בעלי חיים תמימים מינית קיבלו או חמש זריקות יומיות של נלוקסון או זריקות מלוחים לפני מבחן ההזדווגות הסופי 7 d מאוחר יותר (האיור 5C). לא נמצאו הבדלים משמעותיים עבור כל פרמטר ההזדווגות בין קבוצות מלוחים ונאלוקסון prereatedated (האיור 5D; חביון הר; החביון intromission: מלוחים 139.7 ± 40.3 לעומת naloxone 121.83 ± 42.55; שפיכה שפיכה: מלוחים 887.9 ± 70.0 לעומת naloxone 1050.8 ± 327.31). תוצאות אלו מצביעות על כך שנלוקסון לבדו אינו מספיק כדי לשנות התנהגות מינית בהמשך, בדומה לחוסר ההשלכות של נלוקסון בלבד על גמישות נוירון דופאמין VTA.

אנו משערים כי טיפול נלוקסון במהלך רכישת החוויה המינית משבש את הביטוי לטווח ארוך של ניסיון חוויית המין הנגרמת על ידי התנהגות מינית. כדי לבדוק זאת עוד יותר, ההשפעות של טיפול בנלוקסון במהלך ההזדווגות נבדקו על התנהגות מינית שלאחר מכן במהלך מבחן ההזדווגות הסופי, שנערך רק 1 ד לאחר ההזדווגות האחרונה (עיצוב ניסיוני; האיור 5E). היתה השפעה מרכזית משמעותית של יום ההזדווגות על הר (האיור 5F; F(2,20) = 19.780, p השהיות <0.001) ואינטרומיזציה (לוח 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). לא הייתה השפעה משמעותית משמעותית של היום על חביון שפיכה (לוח 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). בדומה לתארו לעיל, כל הזכרים (למרות טיפולים מלוחים או naloxone) הראו הקלה של ההתנהגות המינית במהלך חמש הפעלות מיניות ניסיון מסומן על ידי זמן קצר יותר latencies לעלות (האיור 5F; מלח: p = 0.002; naloxone: p = 0.018) ו intromission (לוח 2; מלח: p = 0.006; naloxone: p = 0.009) ביום 5 בהשוואה ליום 1. באופן דומה, התנהגות מינית מקלה הודגם ביום הבדיקה לעומת יום 1 המצוינות על ידי זמן קצר קצר latencies לעלות (האיור 5F; מלח: p = 0.001; naloxone: p = 0.020) ו intromission (לוח 2; מלח: p = 0.004; naloxone: p = 0.009). חשוב יותר, טיפול נלוקסון במהלך ההזדווגות לא השפיע באופן משמעותי על חוויית המין המושרה בהתנהגות מינית כאשר נבדק 1 d לאחר ניסיון מיני, ללא קשר לטיפול נלוקסון ביום מבחן ההזדווגות הסופי.

לבסוף, בדקנו את האפשרות שההשפעות המקטינות של נלוקסון על הביטוי לטווח הארוך של התנהגות מינית מקלה נובעות מהשפעה חסימתית של נלוקסון על התכונות המתגמלות של התנהגות מינית. עם זאת, נלוקסון שהוענק מייד לפני ההזדווגות לא שינה את היווצרות ה- CPP להזדווגות (האיור 5G), דבר המצביע על כך שטיפול בנלוקסון לא שינה את הגמול המיני. שתי קבוצות מלוחים ונלוקסון שטופלו היוו CPP משמעותי להתנהגות מינית, כפי שצוין על ידי זמן מוגבר משמעותית בילה בחדר לזווג מיני (האיור 5H; מלח: p = 0.038; naloxone: p = 0.002) במהלך הבדיקה שלאחר הבדיקה בהשוואה למבחן הקודם. לכן, naloxone אינו מפעיל את השפעתו המזיקה על תחזוקה של התנהגות מינית מקלה על ידי חסימת הפרס הקשור להתנהגות מינית.

הנחייה של התנהגות מינית תלויה בפעולת EOP ב- VTA

כדי לאשר כי EOP לפעול במיוחד VTA כדי לעודד הנחייה לטווח ארוך של התנהגות מינית, עיצוב ניסיוני המפורטים ב איור 3A היה חזר עם intra-VTA חליטות naloxone ולא זריקות מערכתיות. התוצאות היו זהות למינהל המערכתי שתואר לעיל. היתה השפעה משמעותית משמעותית של יום ההזדווגות על כל הפרמטרים של התנהגות מינית (האיור 6A, חביון הר: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, חביון intromission: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, חביון שפיכה: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) ו intra-VTA naloxone טיפול על latencies לעלות (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) ו intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA naloxone לא מנע את החוויה הראשונית הנגרמת על ידי ההתנהגות המינית במהלך 5 ד של ההזדווגות, כמו הזכרים מטופלים naloxone הפגינו ירידה latencies לעלות (האיור 6A; p = 0.001), intromission (האיור 6B; p <0.001) ושפיכה (האיור 6C; p = 0.001) ביום 5 בהשוואה ליום 1. הזכרים שטופלו בנלוקסון לא נבדלו מזכרים שטופלו במלוחים ביום החמישי של ההזדווגות בכל אחד מהזמן. Intra-VTA naloxone טיפול, כמו הממשל המערכתי, גרם עלייה משמעותית הר (האיור 6A; p השהיות <0.001) ואינטרומיזציה (האיור 6B; p ביום ההזדווגות הראשון בהשוואה לזכרים שטופלו בתמיסת מלח, שלא נצפתה במהלך פגישות ההזדווגות הבאות (שבמהלכם הזכרים שטופלו בנלוקסון ובמלוח לא היו שונים). אחת התצפיות הבלתי צפויות הייתה שבניסוי זה, גברים שטופלו בתמיסת מלח לא הראו הקלה משמעותית סטטיסטית בהשהיות ההרגה או החדרה (כפי שהוצג בכל הניסויים שתוארו לעיל), ורק חביון שפיכה נקצר ביום החמישי בהשוואה ליום הראשון. (מִלְחִית: p = 0.001).

האיור 6. 

צפייה בגרסה גדולה יותר: 

האיור 6. 

אנדואידואידים אנדוגניים ב VTA מתווך ניסיון הנגרמת של ההתנהגות המינית ותחזוקה לטווח ארוך שלה. הפרעות התנהגות מיניות אצל גברים המטופלים במלח (סאל, ברים לבנים, n = 8) או NLX (ברים שחורים, n = 6) עם הממשל תוך VTA. הנתונים המוצגים הם זמן האחזור להר (A), intromission (B), ו שפיכה (C) על ימים 1 ו 5 של חמישה ימים רצופים של הזדווגות. בנוסף, הנתונים מוצגים ליום מבחן ההזדווגות הסופי, 7 D ביום הבא 5 בהעדר זריקה מלוחים או נלוקסון. הנתונים מייצגים ממוצע ± SEM; + מציין הבדל משמעותי בין הימים 1 לבין 5 בתוך הטיפול; * מציין הבדל משמעותי בין יום הבדיקה ליום 5 בתוך הטיפול; # מציין הבדל משמעותי בין קבוצות naloxone ו- Sal בתוך יום. שרטוטים סכמטיים של קטעי VTA העטרה (H, 4.60, I -5.00, J, -5.25 מ Bregma) המציין intra- VTA אתרי הזרקה לכל בעלי החיים בניסוי 5 (מלוחים, לבן, נלוקסון, שחור, החמיץ, אפור) באמצעות שרטוטים תבנית מ Swanson המוח מפות (סוונסון, 2004). Cannulas היו דו צדדיים, אבל אתרי הזרקה מיוצגים באופן חד צדדי עבור קלות של המצגת. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lmniscus; SN, מהותית nigra.

טיפול תוך- VTA נקסולון חסם את שמירת ההתנהגות המינית המקלה שנצפתה בזכרים מנוסים מבחינה מינית, בדומה להשפעות של נלוקסון מערכתית. באופן ספציפי, ביום הבדיקה הסופי naloxone שטופלו זכרים היו latencies ארוך לעלות (האיור 6A; p = 0.011), intromission (האיור 6B; p = 0.010), ושפיכה (האיור 6C; p = 0.015) בהשוואה לפגישת ההזדווגות החמישית שלהם בהשוואה לזכרים שטופלו במלוחים ביום הבדיקה האחרון (האיור 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). לעומת זאת, בעלי חיים שטופלו במים מלוחים לא היו שונים בזמן חביון כדי לעלות ולפרוש בין יום המבחן האחרון לבין יום 5 של ההזדווגות. השפעות אלו היו ספציפיות למסירה של נלוקסון ל- VTA, כאשר גברים עם אתרים cannulation בקרבת מקום אך לא מיקוד VTA (האיור 6D; n = 3, EL = 53 ± 6.245 ושונה משמעותית בהשוואה לבעלי חיים תוך נלוקסון תוך-ורידי ביום מבחן ההזדווגות הסופי (ML, Il you p = 0.029; EL you p = 0.0395).

EOP פעולה נדרשת עבור סקס הקשורים מושרה cue- המושרה ההפעלה העצביים

בהתבסס על הממצאים עד כה, שיערנו כי הפעלת EOP ב VTA במהלך ניסיון ההזדווגות ולאחר מכן VTA דופאמין סומה גודל הפחתה הם קריטיים עבור ייחוס חשיבות תמריץ להזדווגות גמול הקשורות גירויים וכתוצאה מכך, שמירה על הקלה של התנהגות מינית. כדי לבחון את ההשערה הזאת, נבדקו ההשפעות של חסימת קולטנים אופיואידים במהלך חווית ההזדווגות על פעילות עצבית הנגרמת כתוצאה מחשיפה מאוחרת לרמזים תלויי הקשר, המנבאים תמורה מינית (רמזים קונקרטיים הקשורים למין). בעלי חיים תמימים מבחינה מינית נחשפו גם לרמזים סביבתיים, אך אלה לא היו קשורים לניסיון ההזדווגות הקודם, ולכן היו רמזים נייטרליים. לבסוף, רמות PERK הבסיסיות נקבעו בקבוצות ביקורת מנוסות ותמימות שנותרו בכלובי הבית ולא נחשפו לרמזים כלשהם (לא קיו). אישור והרחבה של ממצאים קודמים (בלפור ואח ', 2004), חשיפה לרמזים הקשריים הקשורים לתגמול המיני הקודם הגדילה באופן מובהק ביטוי pERK בזכרים מנוסים מבחינה מינית ב- NAc (האיור 7) ו- mPFC (האיור 8A-C), אך לא גרמה הפעלה נוירונים של BLA (האיור 8D) או CPu (נתונים לא מוצגים). היו ההשפעות העיקריות של חשיפה cue ב NAC הליבה (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038), ו- PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041), וכן טיפול naloxone ב הליבה NAC (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002), ו- PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). היתה אינטראקציה משמעותית הליבה NAC (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014), ו- IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). ראשית, החשיפה קשורה ההזדווגות קיו גדל באופן משמעותי pERK בעלי חיים מנוסים מינית בעלי חיים מנוסים (Exp Sal ​​+ קיו) לעומת בקרות שלא נחשפו רמזים כלשהם נלקח מן הכלוב הביתה (Exp Sal-No Cue) ב NAC הליבה (האיור 7A; p <0.001), ואזורי משנה mPFC ACA (האיור 8A; p = 0.001), PL (האיור 8B; p = 0.003), ו- IL (האיור 8C; p = 0.029). לעומת זאת, אצל בעלי חיים תמימים מבחינה מינית, החשיפה לרמזים הקונטקסטואליים, שלא היו קשורים לתגמול מיני, לא גרמה לפרק בכל אזורי המוח (נאיב סאל + קיו לעומת נאי סאל-לא; תאנים. 7, 8), הוכחה כי אינדוקציה של pERK הוא ספציפי לחשיפה של רמזים הקשורים לחוויה מינית. יתר על כן, החוויה המינית לבדה לא שינתה את ביטוי ה- PERK הבסיסי בכל אזורי המוח, שכן לא היו הבדלים בין קבוצות שנלקחו מכלובי הבית, בין אם נאיביים מינית או ניסיון, וטופלו במי מלח או בנלוקסון.

האיור 7. 

צפייה בגרסה גדולה יותר: 

האיור 7. 

נדרשת פעילות אופיואידית אנדוגנית עבור הפעלה עצבית ב- NAC המושרה על ידי רמזים מותנים הקשורים למין. מספרים של תאים pERK-IR לכל מ"מ2 בגרעין הליבה הגרעיני (A) ופגז (B) בחיות מיניות (לבן) ותמימות (בעלות, שחורות), שהיו מטופלות עם NLX סיסטמי או מלוחים (Sal) במהלך פגישות ההזדווגות (גברים זכרים) או פגישות טיפול (גברים תמימים). קבוצות נחשפו לרמזים קונטקסטואליים (Cue), שהיו רמזים הקשורים להזדווגות אצל זכאים EX ו רמזים נייטרליים בחיות נאיביות, או נלקחו מתוך כלובי הבית (לא רמז: מסומן על ידי חוסר תווית קיו). הנתונים מוצגים כ ממוצע ± SEM; * מציין הבדל משמעותי לעומת מלוחים- pretreated שום פקודה חשוף cue (נאיבי Sal- לא קיו ו- Exp Sal- לא רמז); # מציין הבדל משמעותי בהשוואה לקל שטופלו על ידי קאל, שנחשפו לקבוצות (Exp Sal ​​+ Cue). תמונות נציג של תאים pERK-IR לכל מ"מ2 ב Core NAC של גברים מנוסים מינית עם סאל (C, D) או NLX (E, F) אשר נלקחו מהכלוב הביתה (לא Cue, C, E), או חשופים רמזים הקשר הקשורים ההזדווגות (קיו; D, F). N = 4 = כל קבוצה למעט Naive NLX (ללא רמז) n = 3. ac, הקומפוזיציה הקדמית. סולם בר, 100 מיקרומטר.

האיור 8. 

צפייה בגרסה גדולה יותר: 

האיור 8. 

ההשפעות של naloxone על ביטוי רמז-המושרה pERK המושרה באזורים אחרים היעד VTA. מספרים של תאים pERK-IR לכל מ"מ2 אצל בעלי חיים מיניים (לבן) ותיקים ומנוסים (בעלי-חשיפה שחורים), שהוכנסו קודם לכן ל- NLX סיסטמי או מלוחים (סאל) במהלך פגישות ההזדווגות ונחשפו לרמזים הקונטקסטואליים (קיו) או לכלוב הבית (ללא רמזים)A), PL (B), IL (C), ו- BLA (D). הנתונים מייצגים ממוצע ± SEM; * מציין הבדל משמעותי לעומת מלוחים- pretreated שום פקודה חשוף cue (נאיבי Sal- לא קיו ו- Exp Sal- לא רמז); # מציין הבדל משמעותי בהשוואה לקל המטופל על ידי סאל, שנחשף בקרות נאיביות מבחינה מינית (נאיב סאל קיו).

כדי לתמוך בהשערה שלנו, טיפול נלוקסון במהלך החוויה המינית הפחית באופן משמעותי את אינדוקציה pERK על ידי רמזים מותנה הקשורים למין. ביטוי PERK ב אלה naloxone שטופלו רמזים מנוסים חשופים מנוסים (Exp NLX + Cue) לא נבדלו ביטוי pERK הבסיס בכל אחת קבוצות נאיבי מינית או מנוסה לקחו נלקחו מכלובים הביתה (נאיבי Sal- לא קיו או נאיבי NLX- ללא רמז). יתר על כן, ביטוי pERK ב נלוקסון שטופלו רמז לחשים מנוסים (Exp NLX + Cue) היה נמוך משמעותית לעומת מלוחים שטופלו קיו חשופים בעלי חיים מנוסים (Exp Sal ​​+ קיו) ב NAC הליבה (האיור 7A; p = 0.002) ו- mPFC subregions (האיור 8A, ACA: p <0.001; B, p = 0.002; C, IL p = 0.015).

ב פגז NAC, ניתוח דו-כיווני ANOVA לא הניב השפעות משמעותיות סטטיסטית של חשיפת הגורמים ואת הטיפול naloxone. עם זאת, השוואה בין זוגות הראו שחשיפה לקיו אכן גרמה לקבוצת PERK בקבוצת הטיפול המינית (EX SAL + Cue), בהשוואה לקבוצת הביקורת הנאיבית (Saline)האיור 7B; Naive SAL - לא רמז: p = 0.0163).

דיון

המחקר הנוכחי מדגים כי EOP משחק VTA במהלך ההתנהגות המינית, התנהגות תגמול טבעי, גרמה ירידה חדה אך חולפת בגודל soma של תאים דופאמין VTA. הירידה בגודל soma לא נצפתה נוירונים VTA שאינם דופאמין, ולא נוירונים דופאמין ב ניגריה ניגריה הסמוך, מה שמרמז שינוי זה היה ספציפי לתאי דופמין VTA. זה VTA דופמין פלסטיות נראה דומה לזה המושרה על ידי חשיפה אופיום כרונית (Sklair-Tavron ואח ', 1996; רוסו ואח ', 2007; Mazey-Robison ואח ', 2011) וגרם סובלנות דומה exogenous אופיום (מורפיום) לתגמל. הוכחנו כי הפלסטיות של דופאמין VTA היא קריטית לטווח ארוך (תחזוקה), אך לא לטווח קצר (התפתחות), חיזוק של התנהגות מינית ופעילות גומלין הקשורה לפעולה עצבית הנגרמת (pERK) באזורי יעד של VTA: NAc ו- mPFC. ממצאים אלה מעידים על תפקיד של פלסטיות של דופאמין VTA בביטוי ארוך הטווח של התמריצים הבולטים של רמזים מנבאים טבעיים או זיכרונות זיכרון.

זה כבר מתועד היטב כי חוויה מינית תוצאות להקל על ההתנהגות המינית שלאחר מכן, כולל התחלה מהירה יותר כדי להתחיל הזדווגות וביצועים מוגברת (בלפור ואח ', 2004; Pitchers ואח ', 2010a,b, 2012). זו הקלה או חיזוק של התנהגות מינית נשמר לפחות 28 ד לאחר ההזדווגות (Pitchers ואח ', 2012). בנוסף, הוכח כי התנהגות מינית ורמזים מותנים מנבאים את גמול המין גורמים להפנמת MOR ב- VTA וגורמים לפעולה נוירונים בכל המערכת mesolimbic, כולל VTA (נוירונים דופאמין ונונדופאמין), NAc, PFC ו- BLA (בלפור ואח ', 2004, 2006). היא מבוססת היטב נוירונים דופאמין VTA לשחק תפקיד קריטי הלמידה ואת הייחוס של התמריצים הבולטים של גמול הקשורים לגירויים (ברידג 'ו רובינסון, 1998; ברידג 'ואחרים, 2009; דגל ואח ', 2011) והם קריטיים לחיזוי תגמול (שולץ, 2010). הממצאים הנוכחיים מתרחבים על הידע הנוכחי שלנו על ידי הוכחת כי גמילה- Induced נוירופלסטיות הוא קריטי עבור פונקציות אלה, והוא תלוי MOR ההפעלה על ידי EOP ב VTA. כרגע לא ידוע איזה EOP הוא הליגנד MOR שפועל VTA במהלך ההתנהגות המינית הגברית. למרות שני אנדורפין β ו enkephalin היו מעורבים מוטיבציה תמריץ עבור חיזוקים מזון (הייווארד ואח ', 2002), זה נשאר להיקבע על התנהגות מינית גברית. יש לנו בעבר הראו כי β-endorphin נוירונים אינם מופעלים במהלך ההזדווגות, ולא יש עלייה ב mRNA POMC; ובכך, טוען כי אנדורפין β לא יכול להיות EOP קריטי משחק VTA במהלך ההזדווגות (דייוויס ואח ', 2007). הפלסטיות של דופאמין VTA הייתה חיונית לפעילויות עצביות ב- mPFC, NAc ו- VTA בעקבות החשיפה לתגמול המיני - חיזוי רמזים סביבתיים. יתר על כן, גמישות דופמין VTA היה קריטי עבור ביטוי לטווח ארוך של חניכה מוגברת וביצועים של התנהגות מינית. לעומת זאת, VTO נוירופלסטיות הנגרמת על ידי חוויה מינית לא נדרשה לתגובה הדונית כגמול מיני (שנקבע על ידי CPP) והן על ידי סיוע קצר טווח למוטיבציה מינית וביצועים (במהלך חוויית המין או 1 d מאוחר יותר) נותרה שלמה למרות המצור של MOR במהלך ההזדווגות (מהרארה ובאום, 1990). במקום זאת, הנתונים מצביעים על כך ש- VTA נוירופלסטיות של דופאמין מתווכת לטווח הארוך (7 d לאחר ניסיון המין האחרון; Pitchers ואח ', 2012) ביטוי של "המבקשים" של תגמול מין ותגובות מוטיבציה מוגברת לרמזים להזדווגות (מילר ובאום, 1987; ברידג 'ו רובינסון, 1998).

בעלי חיים מנוסים מבחינה מינית הוכיחו סובלנות צולבת לתגמל מורפיום, בדומה להשפעות של גלגל פועל בעכברים, התנהגות טבעית מתגמלת נוספת, השפעה החסומה בטיפול בנלוקסון (Lett et al, 2001, 2002) וקבע להיות תלויים פלסטיות התא VTA דופמין (הממצאים הנוכחיים). בדומה לתגמולים טבעיים, החשיפה החוזרת למורפיום אופיאטים או להרואין גורמת להפחתה זמנית של גודל ה- VTA של דופאמין סופה (Sklair-Tavron ואח ', 1996; ספיגה ואח ', 2003; רוסו ואח ', 2007; Mazey-Robison ואח ', 2011). יתר על כן, חשיפה אופיאית עם תקופות הנסיגה קצר גורמת סובלנות שכר, כפי מעורבים על ידי מינונים גבוהים יותר של התרופה נדרשת להקים עמותות שכר (שיפנברג ואח ', 1987; רוסו ואח ', 2007), וגורמת לבעלי חיים לנהל את צריכת הסמים (אחמד ואח ', 2000; ווקר ואח ', 2003). לפיכך, EOP ו opiates לפעול על מצעים עצביים נפוצים כדי לגרום סובלנות שכר במהלך נסיגה מוקדמת, אשר עשוי לשקף מנגנון homostatic מפצה כדי לנטרל גירוי על ידי חשיפה חוזרת (Koob ו Le Moal, 2005). לעומת זאת, במהלך התנזרות סמים ארוכת טווח, סובלנות מתהפכת לרגישות לתכונות המתגמלות לתרופה (האריס ו אסטון ג 'ונס, 2003; אסטון ג 'ונס האריס, 2004; האריס וגווירץ, 2004). מעניין, ניסיון מינית ואחריו תקופת התנזרות מינית של 7-28 ד נמצא לגרום לחצות רגישות לפסיכולוגימולנט (Pitchers ואח ', 2010a), אשר תלויה הזדווגות המושרה ביטוי deltaFosB ו קולטן דופמין 1 ההפעלה ב NAC (Pitchers ואח ', 2013). לפיכך, חוויית הגמול המינית גורמת לסובלנות גמול אופייני בו זמנית ולפסיכו-סטימולציה, למרות שתקופה ארוכה יותר של הימנעות מינית על סובלנות הגמול של המורפיום נותרה להיבחן. אנו מניחים כי השפעות הפוכות הללו על גמול התרופות עשויות להיות מתווכות על ידי צורות שונות של גמישות עצבית באזורים השונים של המערכת mesolimbic: VTA פעולה EOP ו פלסטיות דופאמין מתווך את סובלנות גמול אופיום (מחקר הנוכחי), בעוד הביטוי NAC deltaFosB שולטת רגישות psychostimulant (Pitchers ואח ', 2013). שני אירועים אלה יכולים לתרום הסלמה של סמים לקחת (אחמד וקוב, 1998, 1999; אחמד ואח ', 2000, 2002, 2003; ווקר ואח ', 2003).

המנגנונים המולקולריים שבאמצעותם EOP להשפיע על נוירונים דופאמין VTA במהלך התנהגות גמול טבעי להישאר לא ידוע. מסלול ה- IRS2-Akt-mTORC2 הוא מתווך מרכזי של גודל סומה קטן ב- VTA הנגרם על ידי מורפיום חוזר (Jaworski ואח ', 2005; רוסו ואח ', 2007; Mazey-Robison ואח ', 2011). חזרה על מורפיום המושרה שינויים שינויים בגודל של נוירונים דופאמין ב VTA ניתן למנוע על ידי intra-VTA חליטות של נוירוטרופי המוח הנגזר גורם (BDNF; Sklair-Tavron ו- Nestler, 1995). BDNF מפעיל את המסלול באמצעות איתות TrkB (רוסו ואח ', 2007), kinase קולטן עם זיקה גבוהה עבור BDNF וחלק המסלול IRS2-Akt (סרוגי וגאל, 1993; נומן וסרוגי, 1999), והביע על דופמין ו נוירונים GABA ב VTA. Downregulation של רכיבים שונים של נתיב IRS2-Akt באמצעות טכנולוגיית העברת גנים נגיפיים וקטורית מחקה את ההשפעות של חשיפה כרונית אופיום. יתר על כן, את ההשפעות של החשיפה אופיום ניתן להציל על ידי שחזור זה המסלול איתות (רוסו ואח ', 2007) ו overexpression של רכיב של mTORC2 מונע מורפיום המושרה VTA דופמין סומה הפחתה (Mazey-Robison ואח ', 2011). לכן, עבודה קודמת חוקרת את ההשפעות של opiates כרונית על גודל VA דופמין סומה מראה כי downphulation המושרה מורפיום של נתיב IRS2-A-mTOR הוא מספיק והכרחי עבור אפקט זה (Mazey-Robison ו- Nestler, 2012). לכן, זה מפתה לשער כי ההשפעות של חוויה מינית על VPA דופאמין neuroplasticity מתווכות באופן דומה על ידי BDNF ו IRS2-Akt-mTORC2 מסלול.

לסיכום, המחקר הנוכחי הוכיח כי נוירופלסטיות VTA נגרמת על ידי ניסיון עם התנהגות מתגמלת טבעי, בפרט על ידי התנהגות מינית גברית חוזרת ונשנית. באופן ספציפי, EOP לפעול ב- VTA כדי להקטין את גודל soma דופאמין, אשר משוערת להיות משויך רגישות עצבית מוגברת ופחות פלט דופמין וכתוצאה מכך מערכת hypodopaminergic, משנה את תפקוד מערכת mesolimbic בתגובה רמזים כי הם מנבאים של פרס מיני. יתר על כן, VGA נוירופלסטיות הוא קריטי עבור המוטיבציה תמריץ וזיכרון פרס, אבל לא עבור ההשפעה ההדונית של התנהגות מינית. לבסוף, Vuro נוירופלסטיות הנגרמת על ידי התנהגות תגמול טבעי ואחריו תקופה קצרה של התנזרות גמול להשפיע על שכר אופים ועלול ולכן להשפיע על הפגיעות להתפתחות של התמכרות לסמים.

הערות שוליים

  • התקבל בינואר 12, 2014.
  • התיקון קיבל מאי 17, 2014.
  • התקבל בחודש מאי 20, 2014.

  • מחקר זה נתמך על ידי מענקים מהמכון הקנדי לבריאות מחקר ל LMC ו מדעי הטבע והנדסה המועצה למחקר KKP

  • המחברים אינם מכריזים על אינטרסים פיננסיים מתחרים.

  • התכתבות צריכה להיות מופנית אל ד"ר ליק מ 'Coolen, אוניברסיטת מיסיסיפי המרכז הרפואי, המחלקה לפיזיולוגיה וביופיסיקה, 2500 צפון מדינת רחוב, ג' קסון, MS 39216 - 4505. [מוגן בדוא"ל]

הפניות

  1. ↵
    1. אגמו א

    (1997) התנהגות מינית עכברוש זכר. המוח res Res המוח המוח 1: 203-209.

  2. ↵
    1. אחמד,
    2. Koob GF

    (1998) מעבר בין צריכת סמים מתונה לסמים מופרזים: שינוי בנקודת קבע הדונית. מדע 282: 298-300.

  3. ↵
    1. אחמד,
    2. Koob GF

    (1999) לאורך זמן להגדיל את נקודת להגדיר עבור קוקאין עצמי הממשל לאחר הסלמה בחולדות. הפסיכו 146: 303-312.

  4. ↵
    1. אחמד,
    2. ווקר JR,
    3. Koob GF

    (2000) עלייה מתמשכת המוטיבציה לקחת הרואין חולדות עם היסטוריה של הסלמה בסמים. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. אחמד,
    2. קני PJ,
    3. Koob GF,
    4. מרקו א

    (2002) ראיות נוירוביולוגיות עבור אלוסטסיס הדוני הקשורים בשימוש הסוכר קוקאין. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. אחמד,
    2. לין D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) הסלמה של קוקאין עצמי הממשל אינו תלוי השתנה קוקאין, המושרה גרעין accumbens דופמין רמות. ניורוצ'ם 86: 102-113.

  7. ↵
    1. אסטון ג 'ונס G,
    2. האריס GC

    (2004) מצעים המוח להגדלת סמים במהלך נסיגה ממושך. נוירופרמקולוגיה 47: 167-179.

  8. ↵
    1. בלפור,
    2. יו L,
    3. Coolen LM

    (2004) התנהגות מינית ורמזים סביבתיים הקשורים למין מפעילים את המערכת המזולימית בחולדות גברים. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. בלפור,
    2. Brown JL,
    3. יו L,
    4. Coolen LM

    (2006) תרומות פוטנציאליות של efferents מ קליפת המוח הקדם חזיתית המדיאלי לפעולה עצבית בעקבות התנהגות מינית בעכברוש זכר. Neuroscience 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. ביתנר ג'ונסון ד '
    2. גיטרט X,
    3. נסלר EJ

    (1992) חלבונים Neurofilament ואת מערכת דופמין mesolimbic: רגולציה משותפת על ידי מורפין כרונית קוקאין כרונית באזור חולדה tegmental הגחון. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. רובינסון TE

    (1998) מהו תפקידו של הדופמין בתגמול: השפעה הדונית, למידה מתגמלת, או תמריץ? Rev המוח מיל המוח מיל 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. רובינסון TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) לנתח מרכיבים של פרס: "חיבה", "רוצה", ולמידה. קור פארמקול 9: 65-73.

  13. ↵
    1. בלום ק,
    2. ורנר ט,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. ג'ורדנו J,
    7. אוסקר-ברמן ז,
    8. זהב M

    (2012) סקס, סמים, רוק אנד רול: השערה ההפעלה mesolimbic משותף כפונקציה של גמול פולימורפיזם גנטי. תרופות פסיכואקטיביות 44: 38-55.

  14. ↵
    1. צ'ו NN,
    2. Zuo YF,
    3. מנג L,
    4. לי DY,
    5. האן JS,
    6. Cui CL

    (2007) גירוי חשמלי היקפי הפחית את גודל התא הפחתה והגדילה את רמת BDNF באזור tegmental הגחון בחולדות כרוניות מורפיום שטופלו. מיל המוח 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. דייוויס BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) הפעלת נוירונים POMC במהלך עוררות כללית אבל לא התנהגות מינית אצל חולדות זכר. התנהגות Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. פיליפס AG

    (1997) שינויים דינמיים גרעין accumbens דופמין זרימה במהלך אפקט Coolidge בחולדות זכרים. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flag,
    2. קלארק ג'יי ג'יי,
    3. רובינסון TE,
    4. מאיו L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn אני,
    7. אקרס CA,
    8. קלינטון,
    9. פיליפס PE,
    10. Akil H

    (2011) תפקיד סלקטיבי עבור דופמין בלמידה גמול לתגמל. טבע 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. קנקנים KK,
    3. בלפור,
    4. Coolen LM

    (2010a) ערבוב מתערבב: סקירת ההשפעות של תרופות על התנהגות מינית בבני אדם ומודלים של בעלי חיים. הורם 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Wise RA,
    4. להמן MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) מתאמפטמין פועל על subpopulations של נוירונים המסדירים התנהגות מינית אצל חולדות זכר. Neuroscience 166: 771-784.

  20. ↵
    1. האריס AC,
    2. גווירץ '

    (2004) בהלה גבוהה במהלך הנסיגה של מורפיום חריף: מודל של נסיגה אופיום וחרדה. הפסיכו 171: 140-147.

  21. ↵
    1. האריס GC,
    2. אסטון ג 'ונס G

    (2003) מוטיבציה מוסברת ולמידה בעקבות נסיגה אופיאטית: ראיות עבור dysregulation ממושך של עיבוד שכר. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. הייווארד MD,
    2. פינטאר JE,
    3. נמוכה MJ

    (2002) סלקטיבי גמול הגירעון בעכברים חסרים בטא אנדורפין ו enkephalin. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. ראדה פ

    (2009) התמכרות טבעית: מודל התנהגותי ומעגל המבוסס על התמכרות לסוכר בחולדות. J מכור מד 3: 33-41.

  24. ↵
    1. היימן SE,
    2. Malenka RC,
    3. נסלר EJ

    (2006) מנגנונים עצביים של התמכרות: תפקידו של למידה בנושא גמול וזיכרון. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. מקברייד

    (1997) GABA (A) חסימת קולטן באזור הטגנטלית הקדמי הגחון מגביר את רמות תאיים של דופמין בגרעין accumbens של חולדות. ניורוצ'ם 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. שנג M

    (2005) שליטה על arborization הדנדריטים על ידי phosphoinositide-3'-kinase-Akt- יונק היעד של מסלול rapamycin. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson Johnson,
    2. צפון RA

    (1992) אופיואידים מעוררים נוירונים דופאמין ידי היפרפולריזציה של interneurons המקומית. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) תקנה של שחרור דופאמין somatodendritic באזור tegmental הגחון על ידי אופיואידים ו GABA: מחקר vivo microdialysis. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) פלסטיות של neurocircuitry שכר ואת "הצד האפל" של התמכרות לסמים. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) בינוני הרכבה משופרת עבור מיקרוסקופ immunofluorescence. האם J נתיב קליני 69: 647-648.

  31. ↵
    1. לט BT,
    2. גרנט VL,
    3. קו מו

    (2001) Naloxone מקטין את העדפת המקום המותנה המושרה על ידי גלגל פועל בחולדות. פיסיול בהב 72: 355-358.

  32. ↵
    1. לט BT,
    2. גרנט VL,
    3. Koh MT,
    4. פלין ז

    (2002) ניסיון קודם עם גלגל פועל מייצרת סובלנות צולבת לאפקט מתגמל של מורפיום. פרמקול ביוכם 72: 101-105.

  33. ↵
    1. מתיוס RT,
    2. גרמנית גרמנית

    (1984) ראיות אלקטרוניות עבור עירור של אזור הגידולים tegmental הגחון דופמין נוירונים על ידי מורפין. Neuroscience 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazey-Robison MS,
    2. KW JW,
    3. פרידמן AK,
    4. Lansink CS,
    5. רוביסון AJ,
    6. ויניש M,
    7. קרישנן V,
    8. קים S,
    9. סיוטה MA,
    10. גלי א,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. חורבת MC,
    14. נווה ר.ל.,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. לחיים,
    19. האן MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) תפקיד איתות mTOR ופעילות העצבית ב מורפיום המושרה הסתגלויות באזור tgmental הגומלין דופמין נוירונים. עיצבון 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazey-Robison MS,
    2. נסלר EJ

    (2012) אופטיים המושרה פלסטיות מולקולרית וסלולארית של אזור tegmental הגחון ואת נוירונים cercholamus לוקוס coeruleus לוקוס. האביב הקרה הארב פרספקט Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. באום אם-ג'יי

    (1990) Naloxone משבש את הביטוי, אך לא את הרכישה על ידי חולדות זכר של תגובה מועדפת מקום עבור נקבה הנשי. הפסיכו 101: 118-125.

  37. ↵
    1. מייזל RL,
    2. מולינס AJ

    (2006) ניסיון מיני במכרסמים הנשיים: מנגנונים סלולריים ותוצאות תפקודיות. מיל המוח 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. מילר RL,
    2. באום אם-ג'יי

    (1987) Naloxone מעכבת הזדווגות והעדפות מקום מותנה עבור נקבה אסטרוסקסואלית אצל חולדות זכריות מיד לאחר הסירוס. פרמקול ביוכם 26: 781-789.

  39. ↵
    1. מיטשל JB,
    2. סטיוארט י

    (1990) הקלה על התנהגויות מיניות בעכברוש הזכר הקשור להזרקות תוך-ורידיות של אופיאטים. פרמקול ביוכם 35: 643-650.

  40. ↵
    1. מרפי LO,
    2. בלניס י

    (2006) MAPK האותיות הספציפיות: המקום הנכון בזמן הנכון. מגמות Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. נסלר EJ

    (2012) מנגנונים תעתיק של התמכרות לסמים. מרפאה פסיכופרמקול Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. ווטסון ג

    (2013) המוח חולדה בקואורדינטות stereotaxic (אקדמי, בוסטון), אד 7.

  • ↵
    1. קנקנים KK,
    2. בלפור,
    3. להמן MN,
    4. Richtand NM,
    5. יו L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplasticity במערכת mesolimbic המושרה על ידי גמול טבעי והתגמול לאחר מכן להתמכר. ביול פסיכיאטריה 67: 872-879.

  • ↵
    1. קנקנים KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. להמן MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB בגרעין accumbens הוא קריטי עבור חיזוק ההשפעות של פרס מיני. גנים המוח התנהגויות 9: 831-840.

  • ↵
    1. קנקנים KK,
    2. שמיד,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. וואנג X,
    5. Laviolette SR,
    6. להמן MN,
    7. Coolen LM

    (2012) ניסיון גמול טבעי משנה AMPA ו NMDA הפצה קולטן לתפקד בגרעין accumbens. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. קנקנים KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. להמן MN,
    6. Coolen LM

    (2013) התגמולים הטבעיים והתרופות פועלים על מנגנוני פלסטיות עצביים נפוצים עם DeltaFosB כמגשר מפתח. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. בלניס י

    (2004) ERK ו p38 MAPK מופעל חלבון קינאזות: משפחה של קינאזות חלבון עם פונקציות ביולוגיות מגוונות. מיקרוביול מול Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. קומאר א,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. עצמי DW,
    11. ראסל DS,
    12. נווה ר.ל.,
    13. Eisch AJ,
    14. נסלר EJ

    (2007) נתיב IRS2-Akt של נוירונים דופאמין של המוח מסדיר תגובות התנהגותיות וסלולריות לאופיאטים. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. שולץ W

    (2010) פונקציות מרובות של נוירונים דופמין. F1000 Biol נציג 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogy KB,
    2. גאל סי

    (1993) ביטוי של נוירוטרופים על ידי נוירונים דופאמינרגיים midbrain. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. שיפנברג TS,
    2. בלס-קוביק,
    3. הר א

    (1987) תכונות מוטיבציה של אופיואידים: עדות לכך הפעלה של קולטני דלתא מתווכת תהליכי חיזוק. מיל המוח 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. נסלר EJ

    (1995) השפעות מנוגדות של מורפין ו neurotrophins, NT-3, NT-4, ו BDNF, על נוירונים לוקוס לוקוס במבחנה. מיל המוח 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. שי WX,
    3. נתיב SB,
    4. האריס HW,
    5. Bunney BS,
    6. נסלר EJ

    (1996) מורפיום כרונית גורם לשינויים גלויים במורפולוגיה של נוירונים דופאמין mesolimbic. פרוט נטל 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. ספיגה S,
    2. סרה GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. דיאנה מ

    (2003) מורפיום הנסיגה המושרה חריגות VTA: מיקרוסקופיה לייזר confocal סריקה. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. סוונסון

    (2004) מפות המוח: מבנה המוח חולדה (אקדמי, סן דייגו), אד 3.

  • ↵
    1. טנק סי.אם,
    2. וילסון H,
    3. ג'אנג Q,
    4. קנקנים KK,
    5. Coolen LM

    (2009) תגמול מיני בחולדות גברים: השפעות של חוויה מינית על העדפות מקום מותנות הקשורות לשפיכה ואינטרומיציות. הורם 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tsschentke TM

    (2007) מדידת תגמול עם פרדיגמת העדפת המקום המותנה (CPP): עדכון של העשור האחרון. מכור ביול 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. ואן רי

    (1996) מוטיבציה מינית: מעורבות של אופיואידים אנדוגניים באזור tegmental הגחון. מיל המוח 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. ואן רי

    (1995) רגולציה של התנהגות מינית גברית: מעורבות של אופיואידים במוח ודופאמין. Rev המוח מיל המוח מיל 21: 162-184.

  • ↵
    1. ווקר JR,
    2. חן SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi לסה"נ,
    5. Koob GF

    (2003) חשיפת אופיואידים כרונית מייצרת את ההרואין בניהול עצמי בחולדות. פרמקול ביוכם 75: 349-354.

  • ↵
    1. יאנג KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. ליו Y,
    4. וואנג Z

    (2011) נוירוביולוגיה של מליטה זוג: תובנות מכרסמים מונוגמיים חברתית. נוירואנדוקרינול קדמי 32: 53-69.

    •