Neuroplasticity yang disebabkan oleh opioid endogen neuron dopaminergik di kawasan tegegal ventral mempengaruhi ganjaran semula jadi dan opiat (2014)

KOMENTAR: . Kajian DeltaFosB kita sering menyebut semua fokus nukleus accumbens (pusat ganjaran), dan mendapati bahawa seks menjangkiti mekanisme otak yang sama seperti met & kokain. Dari kajian mercu tanda oleh penyelidik yang sama (Undang-undang Ganjaran Semulajadi dan Ubat pada Mekanisme Plastik Neural Bersama dengan ΔFosB sebagai Pengantara Utama (2013)):

Oleh itu, ganjaran semula jadi dan ubat-ubatan tidak hanya berkumpul di jalur saraf yang sama, mereka juga bertemu dengan mediator molekul yang sama, dan kemungkinan pada neuron yang sama di Nukleus Accumbens, untuk mempengaruhi penekanan insentif dan "kehendak" kedua-dua jenis ganjaran

Pengambilan: meth, kokain, dan seks semuanya melakukan hal-hal asas yang sama kepada sel-sel saraf yang sama di pusat ganjaran (nukleus accumbens), apa sahaja yang mereka lakukan secara berbeza di tempat lain di dalam otak. Ini membongkar titik bicara biasa yang memberi ganjaran dan dadah semula jadi dalam mekanisme dan kesan.

Kajian baru ini mengkaji apa hubungan seks terhadap VTA. VTA adalah di mana sel-sel saraf penghasil dopamin bermula - dan mereka bercabang ke nukleus, korteks frontal, dan amigdala. Pada dasarnya VTA adalah sumber (sumber air) sebahagian besar dopamin kita. Lihat 2 gambar litar ganjaran ini: Pic1, Pic2

Penyelidik mendapati bahawa seks (klimaks) menyebabkan badan sel dalam VTA menyusut sementara (pada lelaki). Badan sel dan dendrit mereka terdiri daripada masalah kelabu otak. Inilah yang sebenarnya ketagihan heroin terhadap VTA (Bukan satu kali penggunaan heroin, tetapi penggunaan heroin kronik). Perhatikan bahawa pengecutan yang sama pada badan sel VTA ini berlaku pada penagih heroin manusia.

Penguncupan sel yang disebabkan oleh seks berlangsung selama sekurang-kurangnya hari 7. Perubahan yang disebabkan oleh seks telah kembali normal pada hari-hari 30, tetapi penyelidik hanya menilai hari 1, 7, dan 30.

Pengecutan badan sel dalam ketagihan heroin mengakibatkan dopamin yang lebih rendah pada inti - atau apa yang kita panggil desensitization. Para penyelidik memberikan morfin kepada tikus untuk menilai tindak balas mereka (selepas hubungan seks), tetapi tidak ada yang berlaku. Biasanya tikus sangat menyukai morfin, tetapi di sini mereka mengalami kepekaan sementara. Ringkasnya, litar ganjaran tikus pasca-ejakulasi tidak responsif terhadap tahap heroin yang rendah. Para penyelidik menduga bahawa dos yang lebih tinggi diperlukan untuk menimbulkan reaksi tikus "normal".

Kesimpulannya - Seks (sementara) melakukan perkara yang sama di VTA seperti ketagihan heroin: pengecutan dopamin yang menghasilkan badan sel saraf. Ini membawa kepada penurunan dopamin di pusat ganjaran, dan kurang responsif terhadap narkotik - dan memerlukan sekurang-kurangnya 7 hari untuk otak tikus pulih.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

Pitchers KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Abstrak

Ganjaran semulajadi dan ubat penyalahgunaan menumpukan pada laluan mesolimbi dan mengaktifkan mekanisme biasa neural plasticity dalam accumbens nukleus. Pendedahan kronik terhadap opiates mendorong kepekaan pada neuron dopaminergik kawasan tegar ventral (VTA), yang mengawal toleransi ganjaran morfin.

Di sini, kita menguji hipotesis bahawa pembedahan opioid endogenous yang diinduksi dalam VTA menyebabkan perubahan morfologi sel-sel dopamine VTA dalam tikus lelaki, yang seterusnya mengawal ekspresi jangka panjang penguatkuasaan akibat tingkah laku seksual.

Pertama, pengalaman seks menurun VTA dopamin soma 1 dan 7 hari, tetapi tidak 30 hari selepas sesi kawin terakhir. Kesan ini telah disekat dengan naloxone sebelum setiap sesi kawin; Oleh itu, keplastikan sel dopamin VTA adalah bergantung kepada tindakan opioid endogen.

Sebaliknya, keplastikan VTA dikaitkan dengan ganjaran opiat yang diubah, kerana lelaki berpengalaman seksual tidak membentuk pilihan tempat yang dikondisi untuk 0.5 mg / kg morfin.

Seterusnya, ia telah menentukan sama ada tindakan opioid endogen mengantarkan ganjaran dan memori seksual pada tikus lelaki yang dirawat dengan naloxone semasa pengalaman mengawan, sama ada secara sistematik atau intra-VTA. Naloxone tidak menghalang fasiliti awal yang disebabkan oleh tingkah laku seksual selama sesi kawin yang berulang, atau keutamaan tempat yang dikondisi untuk kawin. Walau bagaimanapun, rawatan naloxone melemahkan ungkapan jangka panjang fasilitasi yang disebabkan oleh pengalaman tingkah laku seksual dan pengaktifan saraf di kawasan mesolimbi yang disebabkan oleh isyarat yang berkaitan dengan mengawan.

Bersama-sama, data-data ini menunjukkan bahawa opioid endogen semasa kawin mengaitkan kepekaan neural dalam neuron dopamine VTA yang kelihatan kritis untuk ganjaran morfin dan memori jangka panjang untuk tingkah laku ganjaran semulajadi.

 

Pengenalan

Tingkah laku ganjaran semulajadi ditengahi oleh sistem mesokortikolimbik (Meisel dan Mullins, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a; Young et al., 2011; Blum et al., 2012). Dadah penyalahgunaan menyebabkan perubahan saraf dalam sistem ini, yang seterusnya menyumbang kepada pembangunan dan ekspresi penyalahgunaan bahan (Hyman et al., 2006; Nestler, 2012). Kami sebelum ini menentukan bahawa pengalaman dengan tingkah laku ganjaran semulajadi, iaitu, pengalaman seksual dalam tikus lelaki, juga menyebabkan kepekaan neural dalam nukleus accumbens (NAc), termasuk peningkatan dendritic spines (Pitchers et al., 2010a) dan deltaFosB (Pitchers et al., 2013). Sebaliknya, kepekaan yang disebabkan oleh seks adalah kritikal untuk kesan pengalaman seks pada perkahwinan berikutnya, yang ditunjukkan sebagai fasilitasi inisiasi dan prestasi tingkah laku seksual (Pitchers et al., 2010b, 2012, 2013). Selain itu, pengalaman seks mengubah tindak balas kepada psikostimulus, termasuk pemekaran aktiviti locomotor dan ganjaran yang dipertingkatkan (Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a, 2013).

NAc adalah satu sasaran hiliran neuron dopaminergik di kawasan tegar ventral (VTA). Neuron VTA dopamin diaktifkan semasa mengawan dan berikutan pendedahan kepada isyarat berhawa dingin ramalan seksual (Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010a), melalui opioid peptida endogen (EOP) -binding pada reseptor μ-opioid (MORs; Matthews dan Jerman, 1984; Johnson dan Utara, 1992; Klitenick et al., 1992; Ikemoto et al., 1997; Balfour et al., 2004). Oleh itu, pendedahan kepada isyarat-isyarat yang terkondisi terhadap kelakuan seksual menyebabkan pembebasan pengaktifan sel dopamin EOP dan VTA, yang memudahkan motivasi seksual (Mitchell dan Stewart, 1990; van Furth et al., 1995; van Furth dan van Ree, 1996) dan pembebasan dopamin di NAc (Fiorino et al., 1997).

Pendedahan yang berulang kepada opiat-opiat yang menyebabkan perubahan morfologi dalam VTA (Mazei-Robison et al., 2011; Mazei-Robison dan Nestler, 2012), mengurangkan saiz neuron dopamine VTA (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Chu et al., 2007; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011), menurunkan tahap protein neurofilament (Beitner-Johnson et al., 1992), meningkatkan keceriaan sel dopamin, dan mengurangkan pengangkutan axoplasmic dan dopamin ke NAc (Beitner-Johnson et al., 1992; Mazei-Robison et al., 2011). Perubahan neuron VTA ini menyebabkan toleransi ganjaran morfin dan sementara sementara mereka hilang dalam satu bulan ubat pantang (Russo et al., 2007). Pada masa ini tidak jelas sama ada kepekaan dalam neuron dopamine VTA adalah unik kepada tindakan-tindakan opiat atau jika ia juga dihasilkan oleh pembebasan EOP semasa tingkah laku ganjaran semulajadi.

Di sini, kita menguji hipotesis bahawa pengalaman pahala semulajadi menyebabkan neuroplasticity sama dengan yang disebabkan oleh opiates, dan dengan demikian, opiates menumpu pada mekanisme plastik yang kritikal untuk tingkah laku ganjaran semula jadi dan ganjaran memori. Kami menguji sama ada pengalaman seks dalam tikus lelaki mengurangkan saiz neuron VTA dopamin melalui proses yang bergantung kepada tindakan EOP dalam VTA. Tambahan pula, kita menyiasat sama ada perubahan EOP-induced in neuron VTA dopamin dikaitkan dengan pengukuhan tingkah laku ganjaran semulajadi dan atribusi insentif terhadap isyarat yang berkaitan dengan ganjaran semula jadi, dan menyebabkan toleransi silang kepada ganjaran morfin.

Bahan dan Kaedah

haiwan

Tikus Sprague-Dawley lelaki dewasa (200-225 g) diperolehi dari Charles River dan ditempatkan di dalam bilik di bilik buatan yang diculik pada kitaran cahaya / gelap 12 h semua eksperimen (lampu di 10: 00 AM kecuali untuk percubaan toleransi morfin , dimatikan di 5: PM 00). Makanan dan air disediakan iklan libitum kecuali semasa ujian tingkah laku. Wanita rangsangan adalah ovariectomized dan ditanam subcutaneously dengan kapsul 5% 17-β-estradiol benzoat SILASTIC (diameter dalaman 1.98 mm, panjang 0.5 cm, Dow-Corning). Suntikan progesteron (subcutaneous, 500 μg dalam 0.1 ml minyak bijan) telah diberikan 3-6 h sebelum ujian untuk mendorong penerimaan seksual. Semua prosedur telah diluluskan oleh University of Western Ontario dan Universiti Michigan Animal Care Committee, dan mematuhi Majlis Kanada mengenai Penjagaan Haiwan dan Institut Kesihatan Nasional garis panduan yang melibatkan haiwan vertebrata dalam penyelidikan.

Tempoh masa perubahan saiz dopamine soma

Sesi perkahwinan harian.

Untuk mengkaji perubahan masa dalam saiz neuron soma dopamine dalam VTA, haiwan yang berpengalaman seksual dan naif dibunuh di 1, 7, atau 31 d (n = 5-8 setiap kumpulan) selepas hari terakhir perkahwinan (berpengalaman) atau pengendalian (naif). Kumpulan yang berpengalaman seksual dipadankan untuk tingkah laku seksual semasa sesi kawin akhir, serta jumlah jumlah ejakulasi selama lima sesi (purata 5 untuk setiap kumpulan), dan tidak berbeza dalam apa-apa parameter kelakuan seksual.

Sesi kawin.

Lelaki naif seksual ditugaskan untuk kedua-dua keadaan percubaan: naif seksual atau berpengalaman seksual. Haiwan yang dialami secara seksual dibenarkan untuk berkahwin lima kali pada hari berturut-turut dengan wanita yang menerima dalam sangkar ujian segi empat tepat (60 × 45 × 50 cm) sehingga memaparkan ejakulasi atau sehingga 1 h (yang mana lebih dahulu). Sangkar dibersihkan sepenuhnya dengan penyelesaian etanol 70% dan katil segar ditambah antara sesi kawin. Tingkah laku seksual dilakukan pada fasa gelap (2-6 h selepas permulaan gelap). Hanya haiwan yang mengepul di sekurang-kurangnya empat daripada lima sesi kawin dianggap sebagai pengalaman seksual dan termasuk dalam eksperimen. Semua sesi perkahwinan diperhatikan dan tingkah laku seksual dicatatkan. Bilangan pendakian (M) intromisi (IM), putaran latensi (ML; masa dari pengenalan wanita ke gunung pertama), latensi intromisi (IL; masa dari pengenalan wanita ke intromisi pertama) dan latensi ejakulasi (EL; masa dari intromisi pertama hingga ejakulasi) direkodkan (Agmo, 1997). Haiwan najis diletakkan dalam saringan ujian bersih untuk 1 h serentak dengan pasangan lelaki yang berpengalaman seksual di bilik yang sama, sehingga mereka terdedah kepada bau wanita yang jauh, dan tahap gangguan yang serupa dan kebaruan alam semula jadi sebagai lelaki yang berpengalaman.

Pelabelan immunofluorensi.

Haiwan-haiwan itu amat dibiakkan dengan menggunakan natrium pentobarbital (270 mg / kg, ip) dan perfacardial dengan 50 ml daripada 0.9% saline, diikuti oleh 500 ml 4% paraformaldehyde dalam buffer 0.1 m sodium phosphate (PB). Otak telah dialih keluar dan postfixed untuk 1 h pada suhu bilik (RT) dalam fiksatif yang sama, dan kemudian direndam dalam 20% sucrose dan 0.01% natrium azide dalam 0.1 m PB untuk penyimpanan di 4 ° C. Bahagian korona dipotong pada 35 μm pada mikrotom beku (H400R, Microm) dan dikumpulkan dalam empat siri selari dalam penyelesaian cryoprotectant (30% sucrose, 30% ethylene glycol dalam 0.1 m PB) kemudian disimpan di 20 ° C. Semua inkubasi dilakukan di RT dengan pengadukan lembut dan pembilasan berlebihan dengan 0.1 m PBS, pH 7.35, antara inkubasi. Seksyen terdedah kepada 1% H2O2 untuk 10 min untuk memusnahkan peroksidase endogen, kemudian disekat untuk 1 h dalam penyelesaian inkubasi (PBS +: PBS yang mengandungi 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) dan 0.1% serum albumin sapi (Jackson Immuno Research Laboratories). Seterusnya, bahagian diinkub dalam sekelip mata di RT dalam tyrosine hydroxylase (TH) -antibody tetikus (1: 20 000; Millipore). Selepas pengeraman antibodi utama, bahagian-bahagian diinkub dalam antibodi kambing anti-tikus AlexaFluor 555 yang konjugat (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) untuk min 30. Akhirnya, bahagian-bahagiannya dibasuh dengan 0.1 m PB, dipasang pada slaid kaca Superfrost Plus, dikeringkan, dan dibungkus dengan gelvatol yang mengandungi agen anti-pudar 1,4-diazabicyclo (2,2) oktana (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Analisis data: saiz neuron soma.

Imej neuron TH-imunoreaktif (IR) dalam VTA diambil di 40 × perbesaran pada tiga rostral ke tahap ekor (Balfour et al., 2004). Tiada perbezaan yang dikesan antara sel-sel di peringkat yang berbeza. Suatu saiz neuron TH-IR dianalisis dengan menggunakan ImageJ (National Institutes of Health). Bidang rata, perimeter dan pekeliling diukur seperti yang diterangkan oleh Sklair-Tavron et al. (1996). Rata-rata sel 25 setiap haiwan (digabungkan semua peringkat 3 VTA) dianalisis dan hanya sel-sel dengan nukleus yang jelas kelihatan dimasukkan. Bagi setiap haiwan, kawasan min, perimeter dan pekeliling dikira. Untuk analisis statistik ANOVA dua hala digunakan [faktor: pengalaman seksual (seks berpengalaman atau seks naif) dan masa (1, 7, atau 31 d)] diikuti oleh post hoc perbandingan menggunakan kaedah Holm-Sidak dengan tahap penting 0.05.

Perubahan bukan dopamine VTA

Sesi perkahwinan dua kali seminggu.

Untuk menguji sama ada pengalaman seksual semasa sesi perkahwinan harian diperlukan untuk mengurangkan saiz neuron TH-IR soma, neuron dopamine VTA haiwan yang telah dikawinkan semasa lima sesi kawin dua minggu dianalisis. Sesi kawin adalah seperti yang diterangkan di atas, tetapi selama tempoh minggu 2.5. Otak dikumpulkan 7 d selepas mengawan atau pengendalian terakhir.

Pelabelan immunoperoxidase.

Di samping itu, ia telah diuji sama ada menggunakan teknik pewarnaan sensitif dengan imunoperoxidase dan pengesanan kromogen, juga membolehkan visualisasi perubahan saiz TH-IR soma. Perfusi dan pemprosesan tisu dilakukan seperti yang diterangkan di atas. Berikutan rawatan dengan 1% H2O2 dan PBS +, bahagian-bahagiannya diinkub dalam sekelip mata di RT dalam polikosteroid tyrosine hydroxylase (TH) -antibody (1: 20 000; Millipore). Selepas pengeraman antibodi utama, bahagian-bahagian diinkubasi dengan anti-arnab kambing biogin yang konjugasi IgG (1 h, 1: 500 dalam PBS +; Laboratorium vektor), avidin-biotin-horseradish peroxidase (1 h, ABC elit; 1: 1 000 dalam PBS , Laboratorium Vektor), dan 3,3'-diaminobenzidine tetrahidrochloride (10 min, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich) dipertingkatkan dengan nikel sulfat dalam (0.02% dalam 0.1 m PB) dengan hidrogen peroksida (0.015%). Seksyen telah dibasuh dengan teliti dalam 0.1 m PB untuk menamatkan tindak balas dan dipasang ke Superfrost berkod ditambah slaid kaca (Fisher) dengan gelatin 0.3% dalam ddH2O. Selepas penyahhidratan, semua slaid telah dilapisi dengan pendaki DPX (dibutil phthalate xylene; Sigma-Aldrich).

Analisis data: saiz neuron soma.

Sel TH-IR dianalisis untuk luas, perimeter, dan lingkaran seperti yang dijelaskan di atas. Di samping itu, sel TH-IR dalam substantia nigra (SN), pada bahagian yang sama digunakan untuk analisis sel VTA TH-IR, dianalisis. Akhirnya, setelah menganalisis sel VTA dan SN TH-IR, bahagian dikira dengan menggunakan violet cresyl dan sel bukan TH-IR dianalisis menggunakan kaedah yang sama seperti yang dijelaskan di atas. Perbezaan antara kumpulan naif dan berpengalaman dibandingkan dengan menggunakan Student's two-tailed t ujian dengan tahap signifikansi 0.05.

Kesan naloxone pada pengurangan dopamine pengurangan saiz seseorang

Untuk menentukan sama ada MOR memainkan peranan dalam pengalaman seks yang disebabkan perubahan saiz neuron soma dopamine, MOR disekat semasa tingkah laku seksual. Setengah daripada haiwan mendapat pengalaman seksual, manakala separuh lagi ditangani tetapi kekal naif seksual. Haiwan yang berpengalaman seksual dibenarkan untuk berkahwin pada hari-hari berturut-turut 5. Di dalam kumpulan yang berpengalaman seksual dan naif, haiwan telah dirawat dengan antigen naloxone nonselective NOROON (10 mg / kg, sc; Sigma-Aldrich, larut dalam garam 0.9%) atau min 30 min sebelum pengenalan wanita (berpengalaman) atau sebelum mengendalikan (naif); dengan itu mencipta empat kumpulan percubaan: saline naif seksual (Naive Sal), naloxone naif seksual (Naive NLX), saline yang berpengalaman seksual (Exp Sal), dan naloxone yang berpengalaman seksual (Exp NLX; n = 5-8 setiap kumpulan). Rawatan Naloxone tidak mempunyai kesan ketara secara statistik ke atas apa-apa parameter kelakuan seksual, pada mana-mana kumpulan 5 d, dan kumpulan naloxone-dan saline adalah sama dalam pengalaman seksual. Semua haiwan dibunuh melalui perencatan intracardial 7 selepas sesi kawin terakhir. Seksyen, imunohistokimia, dan analisis data (faktor ANOVA dua hala: faktor: pengalaman seks dan rawatan ubat) untuk saiz dopamine soma telah dijalankan seperti yang diterangkan di atas.

Keadaan tempat dibina oleh Morphine

Reka bentuk eksperimen.

Sebelum ini, Russo et al. (2007) menunjukkan morfin kronik mendorong toleransi kepada ganjaran morfin. Oleh kerana pengalaman seksual dan morfin kronik menyebabkan penurunan yang sama dalam saiz neuron dopamine dalam VTA, kaitan fungsional perubahan morfologi akibat seks telah diuji untuk ganjaran morfin. Haiwan yang berpengalaman seksual dan naif dibahagikan kepada enam kumpulan percubaan yang berbeza (n = 9-13 setiap kumpulan) berdasarkan tingkah laku seksual (naif seksual atau berpengalaman) dan dos morfin (0.5, 5.0, atau 10.0 mg / kg, ip) dan diuji untuk pilihan tempat yang dikondisikan oleh morfin.

Morphine-CPP.

Pengkondisian berlaku 1 d selepas sesi kawin terakhir dan kumpulan dipadankan untuk prestasi seksual semasa sesi kawin terakhir. Paradigma CPP yang digunakan terdiri daripada hari pretest, pengkondisian, dan ujian pasca, dan peralatan berasaskan Tenk et al. (2009). Secara ringkas, alat PKP (MED Associates) terdiri daripada tiga ruang yang berbeza. Di antara setiap sesi, peralatan dibersihkan dengan larutan etanol 70% untuk mengurangkan petunjuk penciuman yang berlarutan. Untuk menentukan pilihan individu, ujian dilakukan semasa haiwan diberi akses percuma ke seluruh alat selama 15 minit. Sebagai satu kumpulan, haiwan tidak menunjukkan keutamaan yang signifikan untuk ruang tertentu, tetapi setiap haiwan mempunyai sedikit pilihan awal. Tikus yang menunjukkan keutamaan yang besar untuk salah satu bilik (> 200 s perbezaan antara masa yang dihabiskan di setiap ruang; <5% haiwan) semasa pretest dikeluarkan dari kajian. Semasa pengkondisian, ubat dipasangkan ke ruang yang disukai pada mulanya atau yang tidak disukai menggunakan paradigma yang tidak berat sebelah (Tzschentke, 2007) dan haiwan terhad kepada dewan untuk min 30. Haiwan disuntik dengan saline (ip) pada waktu pagi (9: 00 AM hingga 12: 00 PM) dan terhad kepada ruang saline-paired (kawalan). Pada waktu petang (1: 00-4: 00 PM), haiwan disuntik dengan morfin (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg atau 10.0 mg / kg; morphine sulfate dilarutkan dalam garam 0.9%, Johnson Matthey) ke ruang yang dipasangkan morfin. Haiwan tertakluk kepada dua hari penyaman. Keesokan harinya (3 d selepas kawin terakhir hari) ujian pasca, secara prosedur serupa dengan pretest, dijalankan. Untuk analisis statistik, masa yang dibelanjakan dalam bilik morfin yang dipasangkan semasa ujian pasca dibandingkan dengan masa yang dihabiskan di dalam bilik saline-paired semasa ujian pasca untuk lelaki naif seksual atau berpengalaman dalam setiap dos menggunakan pasangan t ujian. p <0.05 dianggap signifikan secara statistik. Kumpulan kawalan tambahan haiwan naif dan berpengalaman menerima garam di ruang berpasangan dan tidak berpasangan untuk berfungsi sebagai kawalan negatif. Tidak ada perbezaan masa yang dihabiskan di antara bilik dikesan untuk kedua-dua kumpulan.

Kesan naloxon sistemik ke atas fasilitasi perilaku seksual yang disebabkan oleh pengalaman

Reka bentuk eksperimen.

Pengalaman seksual mengakibatkan fasilitasi tingkah laku seksual yang dikekalkan selama sekurang-kurangnya 1 bulan (Pitchers et al., 2012). Untuk menganalisis kesan menyekat MOR terhadap fasiliti pemikiran yang disebabkan oleh pengalaman seksual, haiwan berpengalaman seksual yang diterima sama ada naloxone atau saline sebelum lima sesi kawin berturut-turut (n = Masing-masing 12) seperti yang diterangkan di atas. Satu minggu selepas sesi kawin terakhir, ujian kawin terakhir telah dijalankan di mana semua haiwan dibenarkan untuk pasangan sehingga satu ejakulasi atau sehingga 1 h. Tiada rawatan naloxone atau saline ditadbir sebelum mengawan pada hari ujian akhir. Parameter mengawan dibandingkan dengan menentukan sama ada naloxone terjejas sama ada pengalaman seks yang disebabkan oleh perkahwinan mengawan (hari 1 vs hari 5) atau penyelenggaraan fasilitasi ini (ujian 5 hari) menggunakan ANOVA dua faktor [rawatan: saline versus naloxone ) dan hari (hari 1, hari 5, atau ujian)] dan kaedah Holm-Sidak untuk post hoc perbandingan. Untuk semua ujian statistik, p <0.05 dianggap signifikan secara statistik.

Eksperimen kawalan tambahan

Naloxone sistemik pada hari ujian.

Untuk menunjukkan bahawa tingkah laku seksual yang telah diubah pada hari ujian akhir kawin tidak disebabkan oleh ketiadaan naloxone, kami mengendalikan sama ada naloxone atau saline pada hari ujian akhir kawin kepada haiwan yang telah mendapat pasangan yang dipasangkan dengan naloxone semasa mereka mengalami pengalaman seksual. Khususnya, semua haiwan menerima suntikan naloxone (10 mg / kg, sc) 30 min sebelum mengawan ke satu ejakulasi selama 5 berturut-turut hari. Pada hari ujian 7 d kemudian, kira-kira separuh haiwan menerima suntikan naloxone (10 mg / kg, n = 7) atau saline (n = 6) 30 min sebelum pengenalan wanita yang diterima. Tingkah laku seksual diperhatikan dan direkodkan. Parameter mengawan dibandingkan dengan menentukan sama ada naloxone terjejas sama ada pengalaman seks yang disebabkan oleh perkahwinan mengawan (hari 1 vs hari 5) atau penyelenggaraan fasilitasi ini (ujian 5 hari) menggunakan ANOVA dua faktor [rawatan: saline versus naloxone ) dan hari (hari 1, hari 5, atau ujian)] dan kaedah Holm-Sidak untuk post hoc perbandingan. Untuk semua ujian statistik, p <5% dianggap signifikan secara statistik.

Kesan naloxone pada ekspresi jangka pendek terhadap tingkah laku seksual yang memudahkan.

Kesan rawatan naloxone (10 mg / kg, sc) semasa pengambilan sampel diuji pada tingkah laku seksual berikutnya pada hari ujian akhir kawin, yang dijalankan hanya 1 selepas perkahwinan terakhir (saline, n = 5; naloxone, n = 4).

Prapreatment sistemik naloxone.

Untuk menentukan sama ada ia mengulangi rawatan naloxone sahaja menyebabkan kemerosotan perilaku seksual 7 d selepas rawatan terakhir, haiwan naif seksual mendapat lima naloxone harian (10 mg / kg, sc) atau suntikan saline pada hari berturut-turut sebelum ujian kawin 7 selepas naloxone akhir atau suntikan saline. Pada hari ujian akhir ini, haiwan tidak menerima apa-apa suntikan. Tingkah laku seksual diperhatikan dan direkodkan seperti yang diterangkan di atas. Parameter mengawan dibandingkan dengan kumpulan yang menggunakan pasangan yang tidak berpasangan t ujian. Untuk semua ujian statistik, p <5% dianggap signifikan secara statistik.

Naloxone sistemik dan ganjaran seks.

Satu kemungkinan kesan pelemahan naloxone pada paparan pemeliharaan tingkah laku seksual yang difasilitasi adalah bahawa naloxone menyekat kesan baik dari tingkah laku seksual. Untuk menguji kemungkinan ini, paradigma CPP dilakukan untuk tingkah laku seksual segera setelah suntikan naloxone atau garam pada lelaki tanpa pengalaman seksual sebelumnya. Prosedur CPP serupa dengan yang dijelaskan di atas untuk morfin-CPP, termasuk pretest, hari penyaman, dan ujian pasca.

Tingkah laku seks telah dipasangkan dengan ruang awal yang tidak diselaraskan. Dengan cara yang seimbang, setiap haiwan menerima suntikan naloxone (n = 12) atau saline (n = 11) 30 min sebelum menerima akses kepada wanita yang diterima. Tempoh purata sesi kawin adalah ~13 min. Satu minit selepas ejakulasi, haiwan tersebut diletakkan di dalam ruang berpasangan untuk min 30. Pada hari penyejukan yang lain, haiwan menerima suntikan sama ada naloxone atau saline (mana yang mereka terima sebelum mengawan), dan dimasukkan ke dalam ruang yang tidak berpasangan untuk min 30. Seterusnya, ujian pasca dijalankan, sama dengan pretest. Untuk menentukan keutamaan ruang, masa yang dibelanjakan dalam ruang berpasangan semasa ujian pretest dan pasca telah dibandingkan. Untuk analisis statistik, dipasangkan t Ujian telah digunakan untuk membandingkan skor keutamaan dan perbezaan, dan masa dalam ruang berpasangan semasa ujian pretest dan pasca untuk menentukan sama ada CPP yang signifikan telah terbentuk untuk tingkah laku seksual. p <0.05 dianggap signifikan.

Kesan naloxone intra-VTA terhadap fasilitasi perilaku seksual yang disebabkan oleh pengalaman

Reka bentuk eksperimen.

Untuk menentukan sama ada tindakan EOP secara khusus dalam VTA, bertanggungjawab terhadap kesan perubahan yang disebabkan oleh pengalaman seksual terhadap tingkah laku seksual, haiwan menjalani penyerapan setempat naloxone atau saline ke dalam VTA sebelum lima sesi kawin harian. Paradigma tingkah laku adalah serupa dengan eksperimen naloxone sistemik. Haiwan yang berpengalaman seksual dibenarkan untuk berkawan selama 5 hari berturut-turut sehingga satu ejakulasi atau sehingga 1 h. Lima belas minit sebelum memperkenalkan wanita yang diterima, tikus-tikus lelaki mendapat inframerah dua hala sama ada naloxone (10 μg / μl setiap hemisfera; jumlah 0.5 μl; dilarutkan dalam 0.9% saline) atau garam (0.5 μl per hemisfera). Microinjections dua hala diberikan pada kadar aliran 0.5 μl / min selama selang min 1 diikuti dengan min 1 tambahan dengan kanun suntikan yang ditinggalkan di tempat untuk penyebaran. Cannula suntikan kemudian digantikan dengan kanvas dummy dan topi debu. Satu minggu selepas hari akhir kawin (hari ujian), semua haiwan berkerut sekali lagi untuk ejakulasi tanpa penyerapan naloxone atau saline. Rajah 3A menggariskan reka bentuk eksperimen. Analisis data dilakukan seperti yang dinyatakan dalam eksperimen naloxone sistemik.

Pembedahan pengsan.

Tikus jantan telah dibius dengan suntikan intraperitoneal (0.1 ml / kg) ketamin (0.87 mg / ml) dan xylazine (0.13 mg / ml), dan dimasukkan ke dalam alat stereotaxic (Kopf Instruments). 21-gauge panduan dua hala (Plastics One) diturunkan melalui lubang gerudi kecil di tengkorak ke otak menuju VTA di -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML dari bregma dan -7.8 mm DV dari bahagian atas tengkorak mengikut Paxinos dan Watson (2013). Cannulas diamankan dengan akrilik gigi yang mematuhi tiga skru yang ditetapkan ke dalam tengkorak. Haiwan diberikan tempoh pemulihan 2 minggu, dan ditangani setiap hari untuk habituation untuk pengendalian dan prosedur suntikan yang digunakan semasa ujian tingkah laku.

Pengesahan penempatan Cannula.

Penempatan cannulas diperiksa menggunakan TH-immunostaining untuk mengesahkan VTA telah disasarkan dengan tepat. Hanya haiwan dengan peletakan yang betul dimasukkan dalam analisis (saiz kumpulan akhir: saline yang berpengalaman n = 8; naloxone yang berpengalaman n = 6). Tiga haiwan tambahan yang menerima suntikan naloxone intra-VTA yang diarahkan di luar VTA dikumpulkan bersama dalam kumpulan suntikan "terlepas". Kumpulan yang tidak dijawab dianalisis secara berasingan untuk berfungsi sebagai kawalan anatomi dan Mann-Whitney U Ujian ini digunakan untuk membandingkan tingkah laku pada hari ujian akhir dengan lelaki yang mengalami naloxone dan saline-treated.

Perkataan pERK yang diindeks oleh isyarat konteks yang berkaitan

Reka bentuk eksperimen.

Pendedahan kepada sangkar di mana lelaki memperoleh pengalaman mengawan telah ditunjukkan untuk menyebabkan pengaktifan MOR dalam VTA dan aktiviti saraf di VTA dan NAc (Balfour et al., 2004). Oleh itu, persekitaran mengawan itu berfungsi sebagai ramalan berhubung dengan ganjaran seksual. Kajian semasa menguji sama ada pengaktifan MOR semasa pengalaman seksual diperlukan untuk pengaktifan saraf yang disebabkan oleh isyarat yang terkondisi. Naloxone atau saline ditadbir secara sistematik (ip) 30 min sebelum penempatan di arena kawin dan pengenalan wanita yang diterima untuk mengawan (berpengalaman), atau sebelum manipulasi kawalan yang terdiri dari penempatan dalam kandang pengendalian tanpa pembentangan wanita (neutral persekitaran). Oleh itu, empat kumpulan percubaan telah dicipta: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal, dan Exp NLX. Satu minggu selepas sesi kawin akhir, separuh haiwan dalam setiap kumpulan terdedah kepada kandang mengawan (Exp lelaki: isyarat yang berkaitan dengan seks) atau mengendalikan sangkar (lelaki naif: isyarat tidak beralasan / neutral), sedangkan separuh lagi tidak terdedah kepada apa-apa isyarat dan sebaliknya tinggal di kandang rumah (untuk menentukan ungkapan pERK baseline). Paradigma percubaan ini menghasilkan kumpulan 8: Naif Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4 setiap kecuali Naive NLX-No Cue, n = 3). Haiwan-haiwan telah diperap 10-15 min selepas pendedahan petunjuk. Kawalan haiwan telah dikeluarkan dari sangkar rumahnya dan dimasak bersamaan.

Imunohistokimia.

Seksyen dan imunohistokimia telah dijalankan seperti yang dinyatakan di atas. Di sini, kami menggunakan antibodi poliklonal arnab terhadap p42 dan p44 MAP Kinases ERK1 dan ERK2 (pERK; 1: 4 000; Teknologi Isyarat Sel). Antibodi utama telah dicirikan secara meluas dalam literatur (Roux dan Blenis, 2004; Murphy dan Blenis, 2006; Frohmader et al., 2010b). Lebih-lebih lagi, peninggalan antibodi utama menghalang semua imunoreaktiviti dan analisis blot Barat tikus otak tikus mendedahkan dua kumpulan pada berat molekul yang sesuai.

Analisis data.

Sel-sel pERK-imunoreaktif (-IR) dikira dalam beberapa kawasan otak menggunakan tiub lukisan lucida kamera yang dilekatkan pada Leica Mikroskop DMRD: NAc [teras (C) dan shell (S); 400 × 600 μm; korteks prefrontal medial; mPFC; kawasan cingulate anterior (ACA); korteks prelimbic (PL); korteks infralimbi (IL); 600 × 800 μm setiap satu], caudate-putamen (CP; 800 × 800 μm), dan amygdala basolateral (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010b; Pitchers et al., 2010b). Dua bahagian yang dikira di rantau otak dan bilangan sel dalam bidang analisis standard kemudian dikira sebagai bilangan sel per mm2. Kedua-dua tuduhan adalah purata bagi setiap haiwan untuk pengiraan cara kumpulan. Purata kumpulan dalam kumpulan yang berpengalaman seksual atau naif dibandingkan dengan faktor ANOVA [rawatan: rawatan dadah (NLX atau Sal) dan petunjuk (isyarat atau tiada isyarat)] yang diikuti oleh post hoc perbandingan menggunakan ujian jumlah Holm-Sidak atau Mann-Whitney di mana sesuai dengan tahap penting p <0.05. Dalam cangkang NAc haiwan yang berpengalaman secara seksual, terdapat kecenderungan kuat terhadap kepentingan faktor dan dengan itu, perbandingan berpasangan dilakukan untuk membandingkan kumpulan garam (Sal-No Cue) dan saline cue (Sal + Cue) sahaja.

Imej.

Imej digital ditangkap menggunakan kamera CCD (Macrofire, Optronics) yang melekat pada a Leica mikroskop (DM5000B) dengan tetapan kamera tetap. Imej telah diimport ke dalam perisian Adobe Photoshop 9.0. Imej tidak diubah dengan cara apapun kecuali untuk menyesuaikan kecerahan dan kontras.

Hasil

Perubahan pengalaman seks yang disebabkan oleh dopamine VTA

Pengalaman seksual mengakibatkan pengurangan saiz dopamine soma VTA (Rajah 1A-C). Pengalaman seksual dikurangkan luas dan perimeter dari soma sel-sel TH-IR VTA (kawasan: F(1,31) = 23.068, p <0.001; perimeter, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Terdapat juga kesan utama masa (kawasan: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; perimeter, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) dan interaksi signifikan antara pengalaman dan masa (kawasan: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; perimeter, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Perbandingan pasangan menunjukkan bahawa kawasan dan perimeter sel TH-IR telah berkurangan dengan ketara 1 dan 7 selepas hari terakhir tingkah laku seksual dalam haiwan yang berpengalaman seksual berbanding dengan kawalan seks naif [Rajah 1B, kawasan: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, perimeter: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 d)]. Kesan tingkah laku seksual hilang ketika diikuti dengan tempoh pantang ganjaran kerana ukuran soma TH-IR neuron kembali ke garis dasar 31 hari selepas sesi kawin terakhir (Rajah 1B, kawasan: p = 0.798; C, perimeter: p = 0.785). Perubahan pengalaman akibat seks tidak dikesan dalam lingkaran pada mana-mana titik masa (Rajah 1D). Pengurangan saiz dopamine soma VTA tidak bergantung kepada sesi perkahwinan harian, kerana pengalaman mengawan semasa lima sesi kawin dua minggu juga menghasilkan penurunan saiz dopamin soma (Rajah 2A,B, E-H, kawasan: p = 0.004; perimeter: p <0.001). Sebaliknya, pengalaman seks tidak mempengaruhi ukuran soma TH-IR di substantia nigra (Rajah 2C, I-J, kawasan: p = 0.13; perimeter: p = 0.16) dan tidak mengubah saiz dalam neuron VTA bukan TH-IR terdekat (Rajah 2D, E-H, kawasan: p = 0.46; perimeter: p = 0.45).

Rajah 1. 

Perubahan yang disebabkan oleh opioid endogen yang disebabkan perubahan saiz neuron dopamin VTA. A, Imej perwakilan neuron VTA dopamine dari haiwan seks naif dan berpengalaman yang menunjukkan penurunan saiz 7 selepas sesi kawin terakhir. Bar skala, 5 μm. Data kuantitatif menunjukkan bahawa pengalaman seksual (Exp, bar hitam) menyebabkan pengurangan yang ketara di kawasan (B; dalam μm2) dan perimeter (C; dalam μm) sel dopamin VTA, 1 d (Naif, Exp; n = 6) dan 7 d (Naif, n = 5; Exp, n = 6), tetapi tidak 31 d (Naif, n = 6; Exp, n = 8) selepas mengawan akhir, berbanding dengan kawalan naif seks (naif, batang putih). Kawasan dikurangkan kepada 84% pada lelaki berpengalaman berbanding dengan kawalan naif di 1 atau 7 d. Perimeter dikurangkan kepada 91.6 dan 90% dalam kumpulan yang berpengalaman berbanding dengan kawalan di 1 dan 7 d resp. Tiada kesan ke atas pekeliling (D). Keplastikan sel dopamin ini di kawasan (E) dan perimeter (F) telah dihalang oleh naloxone (NLX, n = 8), tetapi tidak saline (Sal, n = 7) rawatan semasa kawin, 7 d selepas sesi kawin terakhir berbanding dengan kawalan seks naif (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Data mewakili min ± SEM; * menunjukkan perbezaan yang signifikan berbanding dengan kawalan naif seks pada hari yang sama (B, C) atau dibandingkan dengan kawalan naif seksual yang dirawat dengan salin dan lelaki berpengalaman yang telah diobati naloxone (secara seksual)E, F).

Rajah 2. 

Pengalaman seksual tidak mengurangkan saiz dalam neuron substantia nigra dopamine atau neuron VTA nondopamine. VTA TH-IR neuron soma area (A; dalam μm2) dan perimeter (B; dalam μm) dalam haiwan naif seks (putih) dan berpengalaman (hitam) yang mendapat pengalaman dengan mengawan dua kali seminggu berbanding hari berturut-turut. Substantia nigra TH-IR soma area (C) dan kawasan soma VTA bukan TH-IR (D) dalam naif seks (putih) dan berpengalaman (hitam). Data mewakili min ± SEM; * menunjukkan perbezaan yang signifikan berbanding dengan kawalan naif seksual. Imej wakil yang menunjukkan neuron TH-IR (coklat) dalam VTA dengan naif seksual (E), dan berpengalaman (F) lelaki. G, H, Imej pembesaran yang lebih tinggi daripada neuron yang ditunjukkan oleh anak panah di E and F masing-masing. Neuron berwarna nissl ditunjukkan dalam warna biru dalam imej ini. Imej wakil yang menunjukkan neuron TH-IR dalam SN seksual naif (I) dan berpengalaman (J) lelaki. Bar skala: E-J, 20 μm.

Pengalaman seks yang disebabkan pengurangan saiz soma neuron VTA dopamin bergantung kepada pengaktifan opioid reseptor

Pengurangan neuron VTA dopamine soma saiz yang disebabkan oleh pengalaman seksual telah disekat oleh neroxone antagonis Monselina nonselective, yang ditadbir sebelum setiap sesi kawin. Rawatan Naloxone sebelum sesi kawin mempunyai kesan yang signifikan ke atas kawasan (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) dan bergerak ke arah kesan yang ketara pada perimeter (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Satu interaksi penting antara pengalaman dan rawatan naloxone didapati untuk kawasan (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) dan perimeter (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Perbandingan pasangan menunjukkan bahawa pengalaman seksual dalam haiwan terawat salin berkurangan dengan ketara kawasan dan perimeter neuron VTA dopamine 7 d selepas sesi kawin terakhir berbanding dengan lelaki naif seksual yang dirawat salineRajah 1E, kawasan: p = 0.018; F, perimeter: p = 0.007). Sebaliknya, haiwan yang tidak terawat dengan naloxone yang berpengalaman tidak berbeza daripada lelaki naif yang dilayan naloxone (Rajah 1E, kawasan: p = 0.483; F, perimeter: p = 0.330). Di samping itu, saiz soma haiwan masin yang berpengalaman berkurangan berbanding dengan haiwan naloxone yang berpengalaman (Rajah 1E, kawasan: p = 0.002; F, perimeter: p = 0.002). Kesan naloxone ini adalah khusus untuk pengalaman seksual, kerana rawatan naloxone sahaja tidak menjejaskan saiz TH-IR sel saiz dalam lelaki yang diperlakukan naloxone naif secara seksual berbanding dengan kawalan yang dirawat saline (Rajah 1E,F). Lebih-lebih lagi, kesan naloxone terhadap pengalaman yang disebabkan oleh pengurangan saiz soma bukan akibat kesan naloxone pada tingkah laku seksual, kerana tingkah laku perkawinan tidak jauh berbeda antara naloxone dan lelaki yang dirawat dengan asin, kecuali untuk waktu yang lebih lama untuk memulai kawin setelah ejakulasi (selang jeda ejakulasi) pada lelaki yang dirawat naloxone semasa sesi kawin pertama dan kelima (p = 0.03 dan p = 0.004, masing-masing). Kedua-dua lelaki yang dirawat dengan saline- dan naloxone yang disalin kepada ejakulasi semasa setiap lima sesi kawin.

Pengalaman toleransi ganjaran morfin disebabkan oleh pengalaman seksual

Kesan pengalaman seksual pada VTA dopamin soma oleh tindakan EOP dalam VTA adalah sama dengan yang dilaporkan untuk candu eksogen (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007). Oleh itu, ia telah diuji sama ada plasiran sel dopamin yang disebabkan oleh ganjaran semula jadi menjejaskan ganjaran untuk morfin opiate. Sesungguhnya, pengalaman seks menyebabkan toleransi ganjaran morfin, sama dengan kesan-kesan opiat kronik (Russo et al., 2007). Lelaki yang berpengalaman seksual gagal mengembangkan CPP untuk dos morfin 0.5 mg / kg; sedangkan lelaki naif secara seksual membentuk CPP untuk dos ini, seperti yang ditunjukkan dengan menghabiskan lebih banyak masa dalam ruang yang dipasangkan morfin berbanding dengan ruang salin yang berpasangan semasa ujian pasca (Rajah 3; p = 0.039). Kedua-dua kumpulan naif yang berpengalaman dan berpengalaman membelanjakan masa yang jauh lebih besar dalam ruang yang dipasangkan morfin berbanding dengan ruang salin yang berpasangan dengan dos morfin yang lebih tinggi: 5.0 mg / kg (Rajah 3; Naïve: p = 0.029; Exp: p = 0.012) dan 10.0 mg / kg (Rajah 3; Naïve: p <0.001; Tamat: p = 0.002).

Rajah 3. 

Kesan pengalaman seksual terhadap ganjaran morfin. Masa yang dibelanjakan dalam dewan ujian salin (Sal) atau morfin (Mor; 0.5, 5 atau 10 mg / kg berat badan) semasa ujian pasca-naif (Naif, n = 10-13) atau berpengalaman (Exp, n = 9-13) lelaki. Data yang ditunjukkan sebagai min ± SEM; * menunjukkan perbezaan yang signifikan berbanding dengan ruang Sal-berpasangan dalam haiwan yang sama. NS, Tidak ketara.

Fasiliti pengambilan pengalaman seks terhadap tingkah laku kawin bergantung pada pengaktifan opioid reseptor

Penemuan sejauh ini menunjukkan bahawa EOP yang bertindak dalam VTA semasa sesi perkahwinan pendek harian 5 menyebabkan kepekaan neuron dopamin VTA yang sama dengan kesan morfin kronik atau pentadbiran diri heroinRusso et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Kami menegaskan bahawa pengurangan saiz dopamine VTA adalah kritikal untuk pembelajaran ganjaran dan khusus untuk fasiliti seksual yang disebabkan oleh kelakuan seks dari segi motivasi dan prestasi. Hipotesis ini diuji dengan menghalangi MOR menggunakan naloxone semasa mengawan dan memeriksa kesan-kesan fasilitasi tingkah laku seksual yang disebabkan oleh pengalaman seksual selama lima sesi kawin harian. Data dibentangkan dalam Rajah 4 untuk sesi kawin pertama dan kelima sahaja, kerana ini adalah data yang paling menggambarkan fasiliti pemangkin yang disebabkan oleh pengalaman tingkah laku. Selain itu, kesan jangka panjang rawatan naloxone semasa sesi kawin diuji pada penyelenggaraan fasilitasi pemangkin yang disebabkan oleh pengalaman, semasa ujian kawin terakhir 1 minggu kemudian. Rajah 4A menunjukkan reka bentuk eksperimen. Terdapat kesan utama sesi kawin pada semua parameter kelakuan seks (keterlambatan gunung: F(2,55) = 11.286, p <0.001; latensi pencerobohan: F(2,55) = 8.767, p <0.001; latensi ejakulasi: F(2,55) = 10.368, p <0.001) dan rawatan naloxone pada latency untuk meningkat (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) dan intromisi (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Perbandingan pasangan menunjukkan bahawa rawatan naloxone menjejaskan tingkah laku seksual semasa sesi kawin pertama kerana haiwan naloxone mempunyai latency yang lebih panjang untuk pertama kali dipasang (p = 0.002) dan intromisi (p = 0.002) berbanding dengan kawalan salin pada hari pertama kawin. Kesan naloxon pada tingkah laku seksual awal telah dikurangkan oleh pengalaman seksual dan tidak diperhatikan semasa mana-mana sesi perkahwinan berikutnya (Jadual 1). Lebih-lebih lagi, pentadbiran naloxone sebelum setiap lima sesi kawin tidak menghalang fasiliti perasmian seksual dengan pengalaman seksual. Selaras dengan kesan pengukuhan pengalaman seksual, lelaki yang dirawat salin menunjukkan penurunan latency untuk dilancarkan (Rajah 4B; p = 0.032) intromission (Rajah 4C; p = 0.033) dan ejakulasi (Rajah 4D; p <0.001) semasa sesi kawin kelima dibandingkan dengan sesi kawin pertama, yang menunjukkan fasilitasi tingkah laku seksual. Begitu juga, lelaki yang dirawat dengan naloxone menunjukkan latensi yang lebih pendek untuk dipasang (Rajah 4B; p <0.001), kemasukan (Rajah 4C; p <0.001), dan ejakulasi (Rajah 4D; p = 0.017) pada kelima berbanding hari pertama. Selain itu, lelaki yang dirawat naloxone tidak berbeza daripada kawalan salin dalam mana-mana latency semasa sesi kawin kelima.

Rajah 4. 

Opioid endogen memainkan peranan kritikal dalam fasiliti pemikiran seksual yang disebabkan oleh pengalaman. A, Reka bentuk eksperimen. B-D, Parameter tingkah laku seksual untuk lelaki yang dirawat dengan saline (Sal, bar putih, n = 11) atau naloxone (NLX; bar hitam, n = 12) dengan pentadbiran sistemik. Data yang ditunjukkan adalah kependaman untuk melekap (B; detik), intromission (C; detik), dan ejakulasi (D; detik) pada hari 1 dan 5 selama lima hari berturut-turut. Di samping itu, data ditunjukkan untuk ujian kawin akhir, 7 selepas sesi kawin kelima. Data dibentangkan sebagai min ± SEM; + menunjukkan perbezaan yang ketara antara hari 1 dan 5 dalam rawatan; * menunjukkan perbezaan yang ketara antara hari ujian dan hari 5 dalam rawatan; # menunjukkan perbezaan yang signifikan antara kumpulan naloxone dan saline dalam sehari.

Jadual 1. 

Pentadbiran Naloxone sebelum mengawan meningkat penderaan untuk melancarkan dan intromisi hanya pada hari pertama perkahwinan

Sebaliknya, rawatan naloxone semasa sesi pengalaman seks telah mengganggu penyelenggaraan fasilitasi seksual yang disebabkan oleh pengalaman pada hari ujian kawin akhir. Hari ujian dilakukan 7 d selepas sesi kawin terakhir tanpa adanya suntikan naloxone. Lelaki kawalan saline yang dirawat menunjukkan fasilitasi seksual yang diakibatkan oleh kelakuan seksual. Khususnya, latensi untuk melancarkan, intromisi, dan ejakulasi tidak berbeza antara sesi kelima kelima dan hari ujian terakhir (Rajah 4B-D). Manakala lelaki yang merawat naloxone menunjukkan kenaikan ketara pada latensi untuk dilekapkan (Rajah 4B; p = 0.033), intromission (Rajah 4C; p = 0.036) dan ejakulasi (Rajah 4D; p = 0.049) pada hari ujian berbanding sesi kawin kelima. Juga, pada hari ujian haiwan naloxone didapati lebih perlahan daripada lelaki yang dirawat salin seperti yang ditunjukkan oleh latency yang lebih lama untuk dilancarkan (Rajah 4B; p = 0.017) dan intromisi (Rajah 4C; p = 0.043). Oleh itu, rawatan naloxone menyekat penyelenggaraan, tetapi bukan permulaan, perkembangan fasilitasi yang disebabkan oleh pengalaman tingkah laku seksual. Penemuan ini menunjukkan peranan kritikal terhadap kepekaan neuron VTA dopamin yang diinduksi oleh EOP terhadap ekspresi jangka panjang penguatkuasaan tingkah-limpah ganjaran semula jadi.

Beberapa eksperimen kawalan tambahan telah dijalankan untuk menentukan kesan sampingan reseptor opioid terhadap kehilangan penguatkuasaan jangka panjang tingkah laku seksual berlaku secara bebas daripada kekurangan pentadbiran naloxone pada hari ujian akhir kawin (Rajah 5A,B), adalah khusus untuk kehilangan jangka panjang, tetapi bukan penyelenggaraan jangka pendek pemudahan mengawan (Rajah 5E,F), tidak disebabkan oleh pendedahan harian kepada naloxone sahaja (Rajah 5C,D), dan tidak disebabkan oleh kehilangan ganjaran seksual pada lelaki yang dirawat naloxone (Rajah 5G,H). Pertama, untuk menunjukkan bahawa tingkah laku seksual yang berubah-ubah pada ujian kawin akhir tidak disebabkan oleh ketiadaan naloxone, sama ada naloxone atau saline ditadbir pada hari ujian akhir kawin kepada haiwan yang telah mendapat pasangan yang dipasangkan dengan naloxone semasa mereka mengalami pengalaman seksual (Rajah 5A). Terdapat kesan utama yang signifikan pada hari perkawinan pada latensi untuk melancarkan (Rajah 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) dan intromisi (Jadual 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Tiada kesan utama hari kawin pada kependaman kepada ejakulasi (Jadual 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Sama seperti yang diterangkan di atas, rawatan naloxone semasa kawin tidak mempengaruhi fasilitasi tingkah laku seksual semasa lima sesi pengalaman seksual awal. Kedua-dua kumpulan (kumpulan saline- dan naloxone yang dirawat seperti yang ditentukan oleh rawatan yang diterima semasa ujian kawin akhir; kedua-duanya menerima naloxone semasa mengawan) menunjukkan tingkah laku seksual yang memudahkan pada hari 5 berbanding dengan hari 1 dan memperlihatkan latensi yang lebih pendek untuk pemasangan pertama (Rajah 5B; garam: p = 0.033; naloxone: p = 0.014) dan intromisi (Jadual 2; garam: p = 0.034; naloxone: p = 0.026). Haiwan yang menerima baik naloxone atau saline pada hari ujian akhir kawin mempunyai latency yang lebih lama untuk dilancarkan (Rajah 5B; garam: p = 0.018; naloxone: p = 0.029) dan intromisi (Jadual 2; garam: p = 0.019; naloxone: p = 0.020) berbanding hari kelima pengalaman mengawan. Oleh itu, pentadbiran naloxone atau saline pada hari ujian segera sebelum mengawan tidak mempengaruhi kesan rawatan naloxone semasa sesi pengalaman seksual dan pelemahan fasilitasi jangka panjang kelakuan seksual adalah sama dengan yang ditunjukkan pada haiwan yang tidak menerima apa-apa suntikan pada hari ujian akhir kawin (Rajah 4).

Rajah 5. 

Opioid endogen adalah penting dalam ekspresi jangka panjang terhadap fasilitasi perilaku seksual yang disebabkan oleh pengalaman. A, Reka bentuk eksperimen untuk eksperimen dengan kesan rawatan NLX pada hari ujian. B, Latihan latency pada hari 1 dan 5 lima hari berturut-turut dan ujian akhir kawin hari ujian (Ujian) berikut suntikan saline (kelabu) atau naloxone (hitam). Data mewakili min ± SEM. * menunjukkan perbezaan yang ketara antara hari 1 dan hari 5 dalam rawatan. # menunjukkan perbezaan yang ketara antara hari Ujian dan Hari 5 dalam rawatan. C, Reka bentuk eksperimen untuk eksperimen untuk menguji kesan pra-rawatan naloxone sahaja tanpa pengalaman seksual terhadap tingkah laku mengawan. D, Gunung latency pada hari ujian akhir kawin, 7 hari selepas hari 5 sama ada salin atau suntikan naloxone jika tidak ada kawin. Data mewakili min ± SEM. E, Reka bentuk percubaan untuk eksperimen untuk menguji sama ada rawatan naloxone mempengaruhi paparan jangka pendek terhadap tingkah laku seksual yang difasilitasi dalam haiwan berpengalaman seksual. F, Latihan latency pada hari 1 dan hari 5 lima hari berturut-turut pada hari ujian dan kawin terakhir, 1 hari ke hari 5 dengan kehadiran suntikan saline (kelabu) atau naloxone (hitam). Data mewakili min ± SEM. * menunjukkan perbezaan yang ketara antara hari 1 dan hari 5 dalam rawatan. G, Reka bentuk eksperimen untuk eksperimen untuk menguji sama ada rawatan naloxone menghalang kesan ganjaran dari tingkah laku seksual. H, Masa dibelanjakan untuk mengawan ruang berpasangan (dalam saat) semasa ujian pretest (putih) dan pasca ujian (hitam) untuk haiwan yang menerima sama ada naloxone atau saline sebelum mengawan. Data mewakili min ± SEM; * menunjukkan perbezaan yang signifikan berbanding dengan pretest.

Jadual 2. 

Data yang ditunjukkan adalah latensi untuk intromisi dan ejakulasi (saat) daripada eksperimen kawalan yang dijalankan untuk menentukan kesan kesan sekatan MOR ke atas kehilangan penguatkuasaan jangka panjang tingkah laku seksual berlaku tanpa kekurangan administrasi naloxone pada hari ujian kawin terakhir

Untuk menentukan sama ada ia adalah rawatan naloxone apabila dipasangkan dengan pengalaman seksual dan tidak diulang ke naloxone per se yang menyebabkan kemerosotan perilaku seksual 7 d selepas rawatan terakhir, haiwan naif seksual menerima sama ada lima suntikan harian suntikan naloxone atau saline sebelum ujian kawin terakhir 7 d kemudian (Rajah 5C). Tiada perbezaan yang ketara dikesan untuk apa-apa parameter pantulan antara saline dan naloxone pretreated groups (Rajah 5D; pendiam; latensi intromisi: saline 139.7 ± 40.3 vs naloxone 121.83 ± 42.55; latensi ejakulasi: saline 887.9 ± 70.0 vs naloxone 1050.8 ± 327.31). Hasil ini menunjukkan bahawa naloxone sahaja tidak mencukupi untuk mengubah tingkah laku seksual berikutnya, sama seperti kurang kesan naloxone sahaja pada keplastikan neuron dopamine VTA.

Kami menghipnotiskan bahawa rawatan naloxone semasa pengambilan pengalaman seks mengganggu ekspresi jangka panjang pengalaman seks-memujuk fasilitasi tingkah laku seksual. Untuk menguji ini lebih lanjut, kesan rawatan naloxone semasa mengawan diuji pada tingkah laku seksual berikutnya semasa ujian kawin akhir, yang dijalankan hanya 1 selepas perkahwinan terakhir (reka bentuk eksperimen; Rajah 5E). Terdapat kesan utama yang signifikan pada hari kawin pada gunung (Rajah 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) dan latensi intromisi (Jadual 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Tidak ada kesan utama yang signifikan pada latency ejakulasi (Jadual 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Sama seperti yang diterangkan di atas, semua lelaki (walaupun rawatan saline atau naloxone) memperlihatkan fasilitasi tingkah laku seksual semasa lima sesi pengalaman seksual yang ditunjukkan oleh latency yang lebih pendek untuk dilekapkan (Rajah 5F; garam: p = 0.002; naloxone: p = 0.018) dan intromisi (Jadual 2; garam: p = 0.006; naloxone: p = 0.009) pada hari 5 berbanding hari 1. Begitu juga, tingkah laku seksual telah ditunjukkan pada hari ujian berbanding dengan hari 1 yang ditunjukkan oleh latency yang lebih pendek untuk dipasang (Rajah 5F; garam: p = 0.001; naloxone: p = 0.020) dan intromisi (Jadual 2; garam: p = 0.004; naloxone: p = 0.009). Lebih penting lagi, rawatan naloxone semasa mengawan tidak menjejaskan fasiliti seksual yang disebabkan oleh pengalaman seksual semasa menguji 1 selepas pengalaman seks, tanpa rawatan naloxone pada hari ujian kawin akhir ini.

Akhirnya, kami menguji kemungkinan kesan melemahkan naloxone pada ekspresi jangka panjang tingkah laku seksual yang difasilitasi adalah disebabkan oleh kesan penyekat naloxone terhadap sifat-sifat tingkah laku seksual yang bermanfaat. Walau bagaimanapun, naloxone diberikan segera sebelum mengawan tidak mengubah pembentukan CPP untuk kawin (Rajah 5G), menunjukkan bahawa rawatan naloxone tidak mengubah ganjaran seksual. Kedua-dua kumpulan yang dirawat dengan saline- dan naloxone membentuk CPP yang signifikan untuk tingkah laku seksual seperti yang ditunjukkan dengan ketara peningkatan masa yang dibelanjakan dalam ruang berpasangan seks (Rajah 5H; garam: p = 0.038; naloxone: p = 0.002) semasa ujian pasca berbanding dengan pretest. Oleh itu, naloxone tidak memberi kesan buruk terhadap penyelenggaraan tingkah laku seksual yang memudahkan dengan menyekat ganjaran yang berkaitan dengan tingkah laku seksual.

Fasilitasi tingkah laku seksual bergantung pada tindakan EOP dalam VTA

Untuk mengesahkan bahawa EOP bertindak secara khusus dalam VTA untuk mendorong fasilitasi jangka panjang kelakuan seksual, reka bentuk eksperimen yang digariskan dalam Rajah 3A diulangi dengan infusions intra-VTA naloxone dan bukan suntikan sistemik. Keputusan adalah sama dengan pentadbiran sistemik yang diterangkan di atas. Terdapat kesan utama yang signifikan pada hari kawin pada semua parameter kelakuan seks (Rajah 6A, pendailan gunung: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, latensi intromisi: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, latensi ejakulasi: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) dan rawatan naloxone intra-VTA pada latensi untuk dilekapkan (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) dan intromisi (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA naloxone tidak menghalang fasiliti yang disebabkan oleh perilaku seksual awal semasa pengambilan 5 d, kerana lelaki yang merawat naloxone menunjukkan latensi menurun untuk melekakan (Rajah 6A; p = 0.001), intromission (Rajah 6B; p <0.001), dan ejakulasi (Rajah 6C; p = 0.001) pada hari 5 berbanding hari 1. Lelaki yang dirawat Naloxone tidak berbeza daripada lelaki yang dirawat dengan asin pada hari kelima kawin dalam mana-mana latency. Rawatan naloxone intra-VTA, seperti pentadbiran sistemik, menyebabkan peningkatan ketara (Rajah 6A; p <0.001) dan latensi intromisi (Rajah 6B; p <0.001) pada hari kawin pertama berbanding dengan lelaki yang diberi garam, yang tidak diperhatikan semasa sesi kawin berikutnya (di mana lelaki yang diberi naloxone dan saline tidak berbeza). Satu pemerhatian yang tidak dijangka adalah bahawa dalam eksperimen ini, lelaki yang dirawat dengan garam tidak menunjukkan fasilitasi latensi mount atau intromission yang signifikan secara statistik (seperti yang ditunjukkan dalam semua eksperimen yang dijelaskan di atas), dan hanya latency ejakulasi yang dipendekkan pada hari kelima dibandingkan dengan hari pertama (masin: p = 0.001).

Rajah 6. 

Opioid endogen dalam VTA memeterai pengalaman yang disebabkan oleh kelakuan seksual dan penyelenggaraan jangka panjangnya. Parameter tingkah laku seksual untuk lelaki yang dirawat dengan saline (Sal, bar putih, n = 8) atau NLX (bar hitam, n = 6) dengan pentadbiran intra-VTA. Data yang ditunjukkan adalah kependaman untuk melekap (A), intromission (B), dan ejakulasi (C) pada hari 1 dan 5 lima hari berturut-turut kawin. Di samping itu, data ditunjukkan untuk hari ujian akhir kawin, 7 d selepas hari 5 jika tiada suntikan saline atau naloxone. Data mewakili min ± SEM; + menunjukkan perbezaan yang ketara antara hari 1 dan 5 dalam rawatan; * menunjukkan perbezaan yang ketara antara hari ujian dan hari 5 dalam rawatan; # menunjukkan perbezaan yang signifikan antara kumpulan naloxone dan Sal dalam hari. Lukisan skematik bahagian VTA coronal (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 dari bregma) menunjukkan tapak suntikan intra-VTA untuk semua haiwan dalam Eksperimen 5 (saline; naloxone, hitam; menggunakan templat templat dari Swanson Brain Maps (Swanson, 2004). Cannulas adalah dua hala, tetapi laman suntikan diwakili secara sepihak untuk memudahkan persembahan. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Lemniscus Medial; SN, substantia nigra.

Rawatan naxolone intra-VTA menyekat penyelenggaraan tingkah laku seksual yang diperhatikan dalam lelaki berpengalaman seksual, sama dengan kesan naloxon sistemik. Khususnya, pada hari ujian akhir lelaki naloxone yang dirawat mempunyai latency lebih lama untuk dilekapkan (Rajah 6A; p = 0.011), intromission (Rajah 6B; p = 0.010), dan ejakulasi (Rajah 6C; p = 0.015) berbanding dengan sesi kawin kelima mereka dan dibandingkan dengan lelaki yang dirawat dengan asin pada hari ujian terakhir (Rajah 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Sebaliknya, haiwan terawat salin tidak berbeza dalam latensi untuk melancarkan dan intromisi antara hari ujian akhir dan hari 5 kawin. Kesan-kesan ini adalah khusus untuk penghantaran naloxone ke VTA, sebagai lelaki dengan laman-laman cannulation berhampiran tetapi tidak mensasarkan VTA (Rajah 6D; n = 3) memaparkan fasiliti jangka panjang kelakuan seksual seperti kawalan saline (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 dan jauh berbeza berbanding dengan haiwan naloxone intra-VTA pada hari ujian akhir kawin (ML, IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).

Tindakan EOP diperlukan untuk aktivasi saraf yang disebabkan oleh seks yang berkaitan dengan seks

Berdasarkan penemuan ini setakat ini, kami mengandaikan bahawa pengaktifan EOP dalam VTA semasa pengalaman mengawan dan pengurangan saiz dopamine soma yang berikutnya adalah penting untuk penguatkuasaan penambahan insentif untuk mengaitkan rangsangan yang berkaitan dengan ganjaran dan akibatnya, penyelenggaraan memudahkan tingkah laku seksual. Untuk menguji hipotesis ini, kesan menghalang reseptor opioid semasa pengalaman mengawan pada aktiviti saraf yang disebabkan oleh pendedahan berikutnya kepada petunjuk kontekuaan yang terkandung ramalan ganjaran seksual (isyarat kontek hubungan seks) telah diperiksa. Haiwan naif seksual juga terdedah kepada tanda-tanda alam sekitar, tetapi ini tidak dikaitkan dengan pengalaman mengawan sebelumnya, oleh itu isyarat neutral. Akhirnya, tahap pERK asas telah ditentukan dalam kumpulan kawalan seksual yang berpengalaman dan naive yang kekal di kandang rumah dan tidak terdedah kepada sebarang isyarat (-No Cue). Mengesahkan dan memperluaskan penemuan sebelumnya (Balfour et al., 2004), pendedahan kepada isyarat kontekstual yang dikaitkan dengan ganjaran seks sebelumnya telah meningkatkan ekspresi pERK dalam lelaki berpengalaman seksual dalam NAc (Rajah 7) dan mPFC (Rajah 8A-C), tetapi tidak menyebabkan pengaktifan neuron dalam BLA (Rajah 8D) atau CPu (data tidak dipaparkan). Terdapat kesan utama pendedahan kiu dalam teras NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), BPR (F(1,12) = 5.541, p = 0.038), dan PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041), dan rawatan naloxone dalam teras NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), BPR (F(1,12) = 15.242, p = 0.002), dan PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Terdapat interaksi penting dalam teras NAc (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), BPR (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014), dan IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Pendedahan Cue yang pertama dikaitkan dengan pendedahan CER telah meningkatkan pERK dalam haiwan berpengalaman yang telah dirawat dengan asin (Exp Sal ​​+ Cue) berbanding dengan kawalan yang tidak terdedah kepada sebarang isyarat dan diambil dari kandang rumah (Exp Sal-No Cue)Rajah 7A; p <0.001), dan mPFC subkawasan ACA (Rajah 8A; p = 0.001), PL (Rajah 8B; p = 0.003), dan IL (Rajah 8C; p = 0.029). Sebaliknya, dalam haiwan naif seks yang dirawat dengan asin, pendedahan kepada isyarat kontekstual, yang tidak dikaitkan dengan ganjaran seksual, tidak menyebabkan pERK di mana-mana kawasan otak (Naive Sal + Cue berbanding dengan Sal-No Cue naif; Buah ara. 7, 8), menunjukkan bahawa induksi pERK adalah khusus untuk pendedahan isyarat-isyarat hubungan pengalaman seksual. Selain itu, pengalaman seksual sahaja tidak mengubah ekspresi pERK asas di mana-mana kawasan otak, kerana tidak terdapat perbezaan di antara kumpulan yang diambil dari kandang rumah, sama ada naif seksual atau pengalaman, dan dirawat dengan saline atau naloxone.

Rajah 7. 

Tindakan opioid endogen diperlukan untuk pengaktifan saraf di NAc yang disebabkan oleh isyarat yang berkaitan dengan seks. Bilangan sel pERK-IR per mm2 dalam nukleus akrab teras (A) dan shell (B) dalam haiwan naif (putih) dan berpengalaman (Exp) hitam yang dipersiapkan dengan sistematis NLX atau saline (Sal) semasa sesi kawin (Exp male) atau sesi pengendalian (Male naif). Kumpulan telah terdedah kepada isyarat kontekstual (Cue), yang merupakan isyarat yang dikaitkan dengan lelaki Eks dan isyarat neutral dalam haiwan Naive, atau diambil dari kandang rumah (No Cue, yang ditunjukkan oleh kekurangan label Cue). Data dibentangkan sebagai min ± SEM; * menunjukkan perbezaan yang ketara berbanding dengan kawalan yang tidak terkandung di dalam salin (Nave Sal-No Cue dan Exp Sal-No Cue); # menunjukkan perbezaan yang signifikan berbanding dengan kumpulan Exp Cue-exp yang dirawat Sal (Exp Sal ​​+ Cue). Imej wakil sel pERK-IR per mm2 dalam teras NAC lelaki berpengalaman seksual dengan Sal (C, D) atau NLX (E, F) yang sama ada diambil dari kandang rumah (Tiada Cue, C, E), atau terdedah kepada isyarat konteks yang berkaitan dengan kawin (Cue; D, F). N = 4 setiap kumpulan kecuali Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, komisiti Anterior. Bar skala, 100 μm.

Rajah 8. 

Kesan naloxone pada ekspresi pERK disebabkan oleh isyarat di kawasan sasaran VTA yang lain. Bilangan sel pERK-IR per mm2 dalam hewan naif seks (putih) dan berpengalaman (Exp hitam) yang dipersiapkan dengan sistematis NLX atau saline (Sal) semasa sesi kawin dan terdedah kepada isyarat kontekstual (Cue) atau kandang rumah (tiada isyarat) dalam BPR (A), PL (B), IL (C), dan BLA (D). Data mewakili min ± SEM; * menunjukkan perbezaan yang ketara berbanding dengan kawalan yang tidak terkandung di dalam salin (Nave Sal-No Cue dan Exp Sal-No Cue); # menunjukkan perbezaan yang signifikan berbanding dengan kawalan naif seksual yang terkena Sal yang dirawat (Naive Sal + Cue).

Sebagai sokongan kepada hipotesis kami, rawatan naloxone semasa pengalaman seks menunjukkan induksi pERK yang sangat lemah oleh isyarat yang berkaitan dengan seks. Ekspresi pERK dalam lelaki berpengalaman yang ditemui naloxone yang dijangkiti naloxone (Exp NLX + Cue) tidak berbeza dari ekspresi pERK asas dalam mana-mana kumpulan kawalan seks naif atau berpengalaman yang diambil dari kandang rumah (Nave Sal-No Cue atau Naive NLX- No Cue). Selain itu, ekspresi PERK dalam lelaki berpengalaman yang dijangkiti naloxone yang dijangkiti naloxone (Exp NLX + Cue) adalah jauh lebih rendah berbanding dengan haiwan berpengalaman teruk saline-treated (Exp Sal ​​+ Cue) di NAc core (Rajah 7A; p = 0.002) dan subkawasan mPFC (Rajah 8A, BPR: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p = 0.015).

Dalam cengkerang NAc, analisis ANOVA dua hala tidak menghasilkan kesan ketara secara statistik faktor pendedahan dan rawatan naloxone. Walau bagaimanapun perbandingan sepasang menunjukkan bahawa pendedahan kiu telah mendorong pERK dalam kumpulan yang berpengalaman seksual yang diasini dengan saline (Exp SAL + Cue) berbanding kumpulan kawalan naif Saline yang tidak terdedahRajah 7B; SAL no no Naive: p = 0.0163).

Perbincangan

Kajian semasa menunjukkan bahawa EOP yang bertindak dalam VTA semasa tingkah laku seksual, tingkah laku ganjaran semulajadi, menyebabkan pengurangan yang teguh tetapi sementara dalam saiz sel dopamin VTA. Pengurangan saiz soma tidak diperhatikan dalam neuron bukan dopamine VTA, atau dalam neuron dopamine di substantia nigra berdekatan, menunjukkan perubahan ini adalah khusus untuk sel-sel dopamin VTA. Plastik dopamin ini kelihatan serupa dengan yang disebabkan oleh pendedahan opioid kronik (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011) dan menyebabkan toleransi yang sama kepada ganjaran opioat (morfin) yang sama. Kami menunjukkan bahawa plastisitas dopamin VTA adalah kritikal untuk jangka panjang (penyelenggaraan) tetapi tidak jangka pendek (pembangunan), pengukuhan tingkah laku seksual dan ganjaran yang berkaitan dengan aktiviti saraf yang diinduksi (pERK) di kawasan sasaran VTA: NAc dan mPFC. Penemuan ini menunjukkan peranan untuk kepekaan dopamin VTA dalam ekspresi jangka panjang insentif ganjaran ganjaran ramalan ganjaran semula jadi atau ganjaran ganjaran.

Telah didokumentasikan dengan baik bahawa pengalaman seksual menghasilkan fasilitasi tingkah laku seksual berikutnya, termasuk permulaan yang lebih pantas untuk memulakan perkahwinan dan meningkatkan prestasi (Balfour et al., 2004; Pitchers et al., 2010a,b, 2012). Fasilitasi atau pengukuhan tingkah laku seksual dikekalkan sekurang-kurangnya 28 d setelah kawin (Pitchers et al., 2012). Di samping itu, telah menunjukkan bahawa tingkah laku seksual dan ramalan yang diperihalkan ramalan seks menyebabkan penyebaran MOR dalam VTA dan mendorong pengaktifan neuron sepanjang sistem mesolimbi, termasuk dalam VTA (neuron dopamin dan nondopamine), NAc, PFC, dan BLA (Balfour et al., 2004, 2006). Ia didirikan neuron VTA dopamine memainkan peranan kritikal dalam pembelajaran dan penyebaran insitif dari rangsangan yang berkaitan dengan ganjaran (Berridge dan Robinson, 1998; Berridge et al., 2009; Flagel et al., 2011) dan amat penting untuk ramalan ganjaran (Schultz, 2010). Penemuan semasa memperluaskan pengetahuan semasa kita dengan menunjukkan bahawa neuroplasticity VTA disebabkan oleh ganjaran adalah penting untuk fungsi ini, dan bergantung kepada pengaktifan MOR oleh EOP dalam VTA. Pada masa ini tidak diketahui EOP adalah ligan MOR yang bertindak dalam VTA semasa tingkah laku seksual lelaki. Walaupun kedua-dua endorfin dan enkephalin β telah terlibat dalam motivasi insentif untuk pengukuhan makanan (Hayward et al., 2002), ini tetap ditubuhkan untuk kelakuan seksual lelaki. Kami telah menunjukkan bahawa neuron β-endorphin tidak diaktifkan semasa mengawan, dan tidak terdapat peningkatan dalam mRNA POMC; dengan itu, menunjukkan bahawa endorfin β bukanlah EOP kritikal yang bertindak dalam VTA semasa mengawan (Davis et al., 2007). Keplastikan dopamin VTA ini adalah penting untuk aktiviti saraf di mPFC, NAc, dan VTA berikutan pendedahan kepada ganjaran seksual-meramalkan isyarat persekitaran. Selain itu, kepekaan dopamin VTA adalah kritikal untuk ekspresi jangka panjang peningkatan inisiasi dan prestasi tingkah laku seksual. Sebaliknya, neuroplastik VTA yang disebabkan oleh pengalaman seksual tidak diperlukan untuk tindak balas hedonik sebagai ganjaran seks (ditentukan oleh PKP) dan pemanjangan motivasi jangka pendek dan prestasi (semasa pengalaman seks atau 1 d kemudian) tetap utuh meskipun sekatan MOR semasa kawin (Mehrara dan Baum, 1990). Sebaliknya, data menunjukkan bahawa neuroplasticity VTA dopamin mengurus jangka panjang (7 d selepas pengalaman seks lepas; Pitchers et al., 2012) ungkapan "menginginkan" ganjaran seks dan respons motivasi tinggi untuk mengawan isyarat (Miller dan Baum, 1987; Berridge dan Robinson, 1998).

Haiwan yang dialami secara seksual menunjukkan toleransi silang kepada ganjaran morfin, sama dengan kesan roda yang berjalan pada tikus, satu lagi tingkah laku yang bermanfaat, kesan yang disekat dengan rawatan naloxone (Lett et al., 2001, 2002) dan bertekad untuk bergantung kepada keplastikan sel dopamin VTA (penemuan semasa). Sama seperti ganjaran semula jadi, pendedahan berulang kepada morfin opiates atau heroin mengakibatkan pengurangan sementara saiz VTA dopamine soma (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Tambahan pula, pendedahan opiate dengan tempoh pengeluaran singkat menyebabkan toleransi ganjaran, seperti yang dikaitkan dengan dos yang lebih tinggi daripada dadah yang diperlukan untuk membentuk persatuan ganjaran (Shippenberg et al., 1987; Russo et al., 2007), dan menyebabkan haiwan mentadbir sendiri meningkatkan pengambilan dadah (Ahmed et al., 2000; Walker et al., 2003). Oleh itu, EOP dan opiates bertindak pada substrat saraf umum untuk mendorong toleransi ganjaran semasa pengeluaran awal, yang mungkin mencerminkan mekanisme homeostatic yang kompensasi untuk mengatasi rangsangan dengan pendedahan berulang (Koob dan Le Moal, 2005). Sebaliknya, semasa pantang larangan opiat jangka panjang, toleransi dibalikkan kepada kepekaan terhadap sifat-sifat ganjaran kepada dadah (Harris dan Aston-Jones, 2003; Aston-Jones dan Harris, 2004; Harris dan Gewirtz, 2004). Menariknya, pengalaman seksual diikuti dengan tempoh pantang seks 7-28 d telah didapati menyebabkan sensitiviti silang untuk ganjaran psikostimulan (Pitchers et al., 2010a), yang bergantung kepada pengaktifan ekspresi deltaFosB dan reseptor dopamin yang diinduksi 1 di NAc (Pitchers et al., 2013). Oleh itu, pengalaman penghargaan seksual menyebabkan toleransi ganjaran serentak serentak dan kepekaan ganjaran psikostimulan, walaupun tempoh pantang seks yang lebih lama terhadap toleransi ganjaran morfin masih diuji. Kami berpendapat bahawa kesan-kesan yang bertentangan dengan ganjaran dadah ini boleh ditengah-tengah oleh bentuk plastik neural yang berlainan dalam pelbagai bidang sistem mesolimbi: Tindakan VTA EOP dan plastisitas dopamine menengahi toleransi ganjaran rayuan (kajian semasa), sedangkan ekspresi NAc deltaFosB mengawal pemekaan psikostimulus (Pitchers et al., 2013). Kedua-dua peristiwa ini boleh menyumbang kepada peningkatan pengambilan ubat (Ahmed dan Koob, 1998, 1999; Ahmed et al., 2000, 2002, 2003; Walker et al., 2003).

Mekanisme molekul yang mana EOP mempengaruhi neuron VTA dopamine semasa tingkah laku ganjaran semula jadi masih tidak diketahui. Laluan IRS2-Akt-mTORC2 adalah pengantara utama penurunan saiz soma dalam VTA yang disebabkan oleh morfin berulang (Jaworski et al., 2005; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Pentadbiran morfin berulang yang disebabkan perubahan saiz neuron dopamine dalam VTA dapat dicegah oleh infusions intra-VTA faktor neurotrofik yang berasal dari otak (BDNF; Sklair-Tavron dan Nestler, 1995). BDNF mengaktifkan laluan ini melalui isyarat TrkB (Russo et al., 2007), kinase reseptor dengan afiniti tinggi untuk BDNF dan sebahagian daripada laluan IRS2-Akt (Seroogy and Gall, 1993; Numan dan Seroogy, 1999), dan dinyatakan pada neuron dopamin dan GABA dalam VTA. Pengurangan turunnya pelbagai komponen laluan IRS2-Akt menggunakan teknologi pemindahan vektor virus meniru kesan pendedahan opioate kronik. Tambahan pula, kesan pendedahan opiate boleh diselamatkan dengan memulihkan laluan isyarat ini (Russo et al., 2007) dan overexpression dari komponen mTORC2 menghalang pengurangan dopamin dikurangkan oleh morphine soma (Mazei-Robison et al., 2011). Oleh itu, kerja terdahulu yang menyiasat kesan-kesan opiat kronik pada saiz dopamine soma VTA menunjukkan bahawa laluan menurun morfin yang disebabkan oleh laluan IRS2-Akt-mTOR adalah memadai dan perlu untuk kesan ini (Mazei-Robison dan Nestler, 2012). Justeru, ia menggoda untuk membuat spekulasi bahawa kesan pengalaman seksual terhadap neuroplasticity VTA dopamine juga dimediasi oleh BDNF dan laluan IRS2-Akt-mTORC2.

Sebagai kesimpulan, kajian semasa menunjukkan bahawa neuroplasticity VTA disebabkan oleh pengalaman dengan tingkah laku ganjaran semulajadi, khususnya oleh kelakuan seksual lelaki berulang. Khususnya, tindakan EOP dalam VTA untuk mengurangkan saiz soma dopamin, yang dihipotesiskan dikaitkan dengan peningkatan keterangkalan saraf dan kurang output dopamin yang menghasilkan sistem hipodopaminergik, dan mengubah sistem mesolimbic berfungsi sebagai tindak balas kepada isyarat yang meramalkan ganjaran seksual. Tambahan pula, neuroplasticity VTA adalah penting untuk motivasi insentif dan memori ganjaran, tetapi bukan untuk kesan hedonik tingkah laku seksual. Akhirnya, neuroplasticity VTA yang disebabkan oleh tingkah laku ganjaran semulajadi diikuti dengan jangka pendek ganjaran ganjaran mempengaruhi ganjaran opiat dan oleh karenanya boleh menjejaskan kelemahan untuk pembangunan ketagihan dadah.

Nota kaki

  • Menerima Januari 12, 2014.
  • Semakan yang diterima Mei 17, 2014.
  • Diterima Mei 20, 2014.

  • Penyelidikan ini disokong oleh geran dari Institut Penyelidikan Kesihatan Kanada kepada LMC dan Sains Semula Jadi dan Majlis Penyelidikan Kejuruteraan kepada KKP

  • Penulis mengisytiharkan tiada kepentingan kewangan yang bersaing.

  • Surat-menyurat perlu ditujukan kepada Dr Lique M. Coolen, Pusat Perubatan Universiti Mississippi, Jabatan Fisiologi dan Biofisika, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [e-mel dilindungi]

Rujukan

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Perilaku seks tikus lelaki. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Peralihan dari pengambilan dadah yang sederhana hingga berlebihan: perubahan titik set hedonik. Sains/Ilmu 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Peningkatan jangka panjang dalam titik ditetapkan untuk pentadbiran diri kokain selepas peningkatan dalam tikus. Psychopharmacology 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Peningkatan motivasi untuk mengambil heroin dalam tikus dengan sejarah peningkatan dadah. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Keterangan neurobiologi untuk allostasis hedonik yang dikaitkan dengan peningkatan penggunaan kokain. Nat neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Peningkatan pengambilan diri kokain tidak bergantung pada nukleus berasaskan kokain yang diubah suai dengan paras dopamin. J Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Otak substrat untuk meningkatkan pengambilan dadah semasa pengeluaran berpanjangan. Neuropharmacology 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Tingkah laku seksual dan isyarat alam sekitar yang berkaitan dengan seks mengaktifkan sistem mesolimbik dalam tikus lelaki. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Sumbangan yang berpotensi untuk penyerapan dari korteks prefrontal tengah ke pengaktifan saraf berikutan tingkah laku seksual di tikus lelaki. Neurosains 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Protein neurofilament dan sistem dopamine mesolimbi: peraturan biasa oleh morfin kronik dan kokain kronik di kawasan tegar teralis tikus. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Apakah peranan dopamin dalam ganjaran: impak hedonik, pembelajaran ganjaran, atau ganjaran insentif? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Mempertimbangkan komponen ganjaran: "suka", "menginginkan", dan belajar. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Emas M

    (2012) Seks, dadah, dan rock 'n' roll: hypothesizing mesolimbic biasa aktivasi sebagai fungsi ganjaran gen polimorfisme. J Psychoactive Drugs 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Rangsangan elektrik peripheral membalikkan pengurangan saiz sel dan peningkatan tahap BDNF di kawasan tegegal ventral dalam tikus yang dikesan morfin kronik. Otak Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) Pengaktifan neuron POMC semasa keghairahan am tetapi tidak tingkah laku seksual dalam tikus lelaki. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Perubahan dinamik dalam nukleus mengakibatkan efflux dopamin semasa kesan Coolidge pada tikus lelaki. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Peranan terpilih untuk dopamin dalam pembelajaran rangsangan-ganjaran. Alam 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Pitchers KK,
    3. Balfour ME,
    4. Coolen LM

    (2010a) Kesan pencampuran: mengkaji kesan ubat-ubatan terhadap kelakuan seks pada model manusia dan haiwan. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Bijak RA,
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Methamphetamine bertindak pada subpopulasi neuron mengawal kelakuan seksual dalam tikus lelaki. Neurosains 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Kejayaan meningkat semasa pengeluaran dari morfin akut: model penarikan dan kecemasan opiate. Psychopharmacology 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Motivasi dan pembelajaran yang berubah setelah penarikan diri penipuan: bukti untuk disortulasi berpanjangan pemprosesan ganjaran. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. MJ Rendah

    (2002) Defisit ganjaran terpilih dalam tikus yang tidak mempunyai beta-endorphin dan enkephalin. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Kecanduan semulajadi: model tingkah laku dan litar berdasarkan ketagihan gula dalam tikus. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Mekanisme neural ketagihan: peranan pembelajaran dan memori yang berkaitan dengan ganjaran. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) Sekatan penerima reseptor GABA (A) di kawasan tegangan anterior anterior meningkatkan tahap dopamin ekstraselular dalam nukleus akut tikus. J Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Pengendalian aromatisasi dendrit oleh sasaran phosphoinositide-3'-kinase-Akt-mamalia laluan rapamycin. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW,
    2. RA Utara

    (1992) Opioid merangsang neuron dopamin oleh hiperpolarisasi interneuron tempatan. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Peraturan pelepasan dopamin somatodendrit pada kawasan tegar ventral oleh opioid dan GABA: kajian mikrodialisis vivo. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Kepekaan neurokirkuit ganjaran dan "sisi gelap" ketagihan dadah. Nat neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Satu medium pemasangan yang diperbaiki untuk mikroskopi immunofluoresensi. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Naloxone menyempurnakan keutamaan tempat yang dikondisi disebabkan oleh roda yang berjalan di tikus. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Pengalaman terdahulu dengan roda berjalan menghasilkan toleransi silang terhadap kesan morfin yang memberi ganjaran. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT,
    2. Jerman DC

    (1984) Bukti electrophysiological untuk pengujaan tikus ventral tegmental kawasan dopamin neuron oleh morfin. Neurosains 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Cheer JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) Peranan untuk mTOR isyarat dan aktiviti neuron dalam penyesuaian yang disebabkan oleh morfin di kawasan tegar ventral neuron dopamin. Sel-sel otak 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Plastik molekul dan selular yang berpunca daripada kawasan tegar ventral dan locus coeruleus neuron katekolamin. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Naloxone mengganggu ekspresi tetapi bukan pengambilalihan oleh tikus jantan terhadap tindak balas keutuhan tempat yang dikondisikan untuk wanita yang hebat. Psychopharmacology 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Pengalaman seksual dalam tikus betina: mekanisme sel dan akibat fungsional. Otak Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloxone menghalang pilihan tempat kawin dan kekonduksian untuk seorang wanita estrous dalam tikus lelaki tidak lama selepas pengambilan. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Fasilitasi tingkah laku seksual pada tikus lelaki yang dikaitkan dengan suntikan intra-VTA dari opiates. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) Kepadatan isyarat MAPK: tempat yang tepat pada masa yang sesuai. Trend Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Transkripsi mekanisme penagihan dadah. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Otak tikus dalam koordinat stereotaxic (Akademik, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplasticity dalam sistem mesolimbik yang disebabkan oleh ganjaran semula jadi dan pantang larangan berikutnya. Biol Psikiatri 67: 872-879.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB dalam nukleus accumbens adalah penting untuk mengukuhkan kesan ganjaran seksual. Gen Brain Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Pengalaman ganjaran semulajadi mengubah pengedaran AMPA dan NMDA serta berfungsi dalam nukleus accumbens. PLoS Satu 7: e34700.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Ganjaran semulajadi dan dadah bertindak pada mekanisme kepekaan neural biasa dengan DeltaFosB sebagai pengantara utama. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK dan kinase protein diaktifkan p38 MAPK: keluarga kinase protein dengan pelbagai fungsi biologi. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. Self DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) Laluan IRS2-Akt dalam neuron dopamine tengah mengawal respons tingkah laku dan selular terhadap opiat. Nat neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Pelbagai fungsi neuron dopamin. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogy KB,
    2. Gall CM

    (1993) Ekspresi neurotropi oleh neuron dopaminergik tengah. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Ciri-ciri motivasi opioid: bukti bahawa pengaktifan reseptor delta mengantara proses tetulang. Otak Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Berlawanan dengan kesan morfin dan neurotropi, NT-3, NT-4, dan BDNF, pada neuron locus coeruleus in vitro. Otak Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Morfin kronik mendorong perubahan yang kelihatan dalam morfologi neuron dopamin mesolimbi. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Keabnormalan pengeluaran akibat morfin dalam VTA: mikroskop pengimbasan laser confocal. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Peta otak: struktur otak tikus (Akademik, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Pitchers KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Ganjaran seksual pada tikus lelaki: kesan pengalaman seksual ke atas pilihan tempat yang dikondisi yang berkaitan dengan ejakulasi dan intromisi. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Mengukur ganjaran dengan paradigma pilihan tempat yang dikondisi (CPP): kemas kini dekad yang lalu. Addict Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Motivasi seksual: penglibatan opioid endogen di kawasan tegar ventralal. Otak Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Peraturan tingkah laku seksual lelaki: penglibatan opioid otak dan dopamin. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Pendedahan opioid kronik menghasilkan peningkatan heroin diri dalam tikus. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. KA muda,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Neurobiologi pasangan ikatan: pandangan dari tikus monogami sosial. Neuroendocrinol depan 32: 53-69.

    •