Экспрессия и распределение рецепторов допамина динамически меняются в прилежащем ядре крысы после выхода из самостоятельного введения кокаина. (2010)

Сшивание белков

Этот метод был подробно описан ранее (Будро и Вольф, 2005; Ferrari et al., 2010). Крыс обезглавливали, их мозг быстро удаляли, и все NAc (или ядра и оболочки) были расчленены на льду из корональной секции 2mm, полученной с использованием матрицы мозга. Целую ткань NAc сразу же нарезали на ломтики 400μm с использованием тканевого измельчителя McIllwain (Vibratome, St. Louis, MO), тогда как меньшие субрежимы ядра и оболочки были измельчены вручную с помощью скальпеля. Затем ткань добавляли к пробиркам Эппендорфа, содержащим ледяной искусственный CSF с шипами 2 mM bis (сульфосукцинимидил) (BS³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Реакции сшивания позволяли протекать в течение 30 мин при 4 ° С с осторожным перемешиванием и затем прекращали добавлением 100mM глицина (10 мин при 4 ° C). Ткань упаковывали путем кратковременного центрифугирования, повторно суспендировали в ледяном буфере для лизиса, содержащем ингибиторы протеазы и фосфатазы, сосились в течение 5 с и снова центрифугировали. Аликвоты супернатанта хранили при -80 ° C до анализа с помощью Вестерн-блоттинга.

Вестерн-блот-анализ DAR в сшитой ткани

Образцы (20-30μg общий белок / лизат) подвергали электрофорезу на гелях 4-15% Tris-HCl (Biorad, Hercules, CA). Белки переносили на мембраны из поливинилиденфторида для иммуноблоттинга с использованием постоянного тока (1.15mA) для 1.5 h. Для предотвращения чрезмерного нагрева использовалась охлаждающая катушка. Полная передача высокомолекулярных агрегатов была подтверждена окрашиванием гелей после переноса с синим кумасси. Кроме того, мы проверили, что сшитые белки DAR не были обнаружены в штабелирующем геле (данные не показаны). После переноса мембраны промывали в ddH₂O, сушат на воздухе в течение 1 hr при комнатной температуре (RT), повторно гидратируют с помощью 100% MeOH, промывают в забуференном буфером 1x Трис (TBS) и погружают в 0.1M NaOH, pH 10 для 15 мин при комнатной температуре. Затем их промывали в TBS, блокировали 3% сывороточного альбумина Bovine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) в TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, для 1 hr при RT и инкубировали в течение ночи при 4 ° C с антителами, распознающими D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) и D3 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1786P). D4 и D5 DAR не анализировались из-за отсутствия антител, распознающих как сшитые, так и внутриклеточные рецепторы. Следует отметить, что партии DAR-антител, используемые в этих экспериментах, были приобретены в 2005-06; текущие партии этих антител (2009-10) демонстрируют различные формы полос, которые не изменяются в тканях от мышей нокаута DAR (неопубликованные наблюдения). После инкубации с первичными антителами мембраны промывали раствором TBS-T, инкубировали в течение 60 с HRP-конъюгированным антителом против кроликов или антимышиным IgG (1: 10,000, Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), промывали TBS- T, промывали ddH₂O, и погружен в подложку для определения хемилюминесценции (Amersham GE, Piscataway, NJ). После того, как были разработаны кляксы, изображения были захвачены программным обеспечением Versa Doc Imaging (Bio-Rad). Диффузные плотности поверхностных и внутриклеточных полос определяли с использованием программного обеспечения «Количество один» (Bio-Rad). Значения поверхностного, внутриклеточного и общего (поверхностного + внутриклеточного) уровня белка были нормированы на общий белок в полосе, определяемой с использованием Ponceau S (Sigma-Aldrich), и проанализированы с помощью TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK). Поверхностное / внутриклеточное соотношение не требовало нормализации, поскольку оба значения определены на одной полосе. Чтобы исследовать специфичность антител, были проведены исследования преабсорбции для антител DAR с пептидом, используемым для генерации каждого антитела. D1, D2 или D3 DAR сочетали с избыточной концентрацией пептида 10 в 500 мкл TBS, перемешивали в течение 4 hrs при 4 ° C, разбавляли до конечного объема 20ml, добавляли к мембране и инкубировали в течение ночи при 4 ° C.

D1 DARs

Никаких существенных различий между кокаино-солевыми группами не обнаружено на WD45. Тем не менее, последствия самообслуживания кокаина были очевидны на WD1. Анализ всего NAc показал значительно более высокое соотношение D1 DAR / внутриклеточное соотношение в группе WD1-Coc по сравнению с группами, которые вводили физиологический раствор (Рис. 2a). Это было связано с умеренным увеличением поверхностных D1 DAR в сочетании со умеренным снижением внутриклеточных DARNUMX DAR (ни один из этих последних двух эффектов не был статистически значимым), при отсутствии какого-либо изменения общих уровней D1 DAR (поверхность + внутриклеточный) (Рис. 2a). В ядре NAc никакого существенного эффекта не обнаружено ни для какой D1 DAR-меры (Рис. 2b). Тем не менее, оболочка NAc отображала изменения, которые были похожи на те, которые наблюдались во всем NAc, но немного более надежные (Рис. 2c). Поверхностное / внутриклеточное соотношение D1 DAR было увеличено в группе WD1-Coc из-за значительного увеличения экспрессии D1 DAR поверхности. Внутриклеточные уровни не менялись, но наблюдалась тенденция к увеличению общего уровня D1 DAR. Таким образом, большая часть белка D1 DAR была поверхностно выражена в оболочке NAc крыс WD1-Coc по сравнению с крысами WD1-Sal. Распространение D1 DAR вернулось в состояние контроля после 45 дней выхода из самообслуживания кокаина.

Рис 2

Поверхностное выражение D1 DAR было увеличено в оболочке NAc после 1 дня выхода из самообслуживания кокаина

D2 DARs

Во всем NAc основным наблюдаемым эффектом была уменьшенная экспрессия D2 DAR у крыс, которую вводили самостоятельно кокаином по сравнению с контролем солевого раствора (Рис. 3a). Это было наиболее выражено на WD45, когда наблюдалось уменьшение в полосе поверхности, всех трех внутриклеточных полос (~ 55, 75 и 100kDa) и в целом по D2 DAR по сравнению с контролем солевого раствора. Соотношение поверхностного / внутриклеточного D2 DAR было незначительно, но значительно увеличилось в группе WD45-Coc из-за большего снижения внутриклеточного, чем поверхностные D2 DAR, что, возможно, указывает на то, что клетки компенсируют снижение экспрессии D2 DAR путем распределения большей части доступных D2 DAR на поверхность. Важно иметь в виду, что повышенное соотношение поверхности / внутриклеточное отношение не предполагает увеличения передачи D2 DAR в данном конкретном случае, поскольку абсолютный уровень D2 DARs, выраженный на поверхности, был уменьшен. В группе WD1-Coc единственным существенным эффектом было снижение внутриклеточных уровней мономера D2 DAR (~ 55kDa) по сравнению с группами WD45-Sal и WD1-Sal, хотя некоторые другие меры также снижались (Рис. 3a).

Рис 3

Уровни внутриклеточного и поверхностного D2 DAR в NAc были снижены после того, как 45 дней отмены из-за самоконтроля кокаина

Общее снижение экспрессии D2 DAR было также очевидным в субрегионах ядра и оболочки NAc (Рис. 3b и 3c, соответственно), хотя эффекты, как правило, были более выраженными в оболочке. Таким образом, поверхностные уровни D2 DAR уменьшались у крыс кокаина только на WD45 в ядре, но на WD1 и WD45 в оболочке. Всего D2 DAR значительно уменьшились только в оболочке. Снижение внутриклеточных D2 диапазонов DAR произошло в оба дня отмены как в сердечнике, так и в оболочке, хотя были различия в отношении выделения и региона, в которых внутриклеточная полоса показала статистически значимый эффект. Таким образом, уровни D2 DAR на поверхности и внутриклеточного белка снижались в NAc после самообслуживания кокаина. WD1 уже был заметен некоторое снижение.

Поверхностное выражение D1 DAR временно увеличивается в оболочке NAc после прекращения самообслуживания кокаина

После самоактивации кокаина поверхностная экспрессия D1 DAR была увеличена в оболочке NAc на WD1, но нормализована WD45, тогда как в ядре не наблюдалось изменений, что указывает на переходное увеличение, ограниченное оболочкой. Аналогичные результаты были получены в предыдущих исследованиях с использованием авторадиографии. Бен-Шахар и др. (2007) обнаружили увеличенную плотность D1 DAR в оболочке NAc крыс 20 мин (но не 14 или 60 дней) после прекращения самостоятельного введения кокаина с расширенным доступом (6 hr / day), тогда как никаких изменений не наблюдалось в ядре или после короткого доступа к кокаину -управление (2 hr / day). Nader et al. (2002) наблюдалось небольшое увеличение плотности D1 DAR в оболочке, но не ядро ​​обезьян-резусов, убитых после последней сессии самообслуживания кокаина 100. Обезьяны оценивали 30 дней после прекращения того же режима, показали увеличенную плотность D1 DAR в rostral NAc и в обоих ядрах и оболочках на более каудальных уровнях, но плотность D1 DAR нормализовалась через 90 дней (Beveridge et al., 2009). Все эти результаты, как и наши, указывают на временное увеличение уровней D1 DAR, особенно в оболочке, после прекращения самообслуживания кокаина. Однако более раннее исследование этой группы показало снижение плотности D1 DAR в NAc (наиболее устойчивой в оболочке) обезьян-резусов, у которых был кокаин с самообслуживанием в течение гораздо более длительного периода времени (18 месяцев; Moore et al., 1998a). Снижение связывания D1 DAR в NAc также было обнаружено 18 hr после прекращения режима расширенного доступа у крыс, хотя общее потребление кокаина в этом исследовании было выше, чем в исследованиях крыс, о которых говорилось выше (De Montis и др., 1998). Эти результаты показывают, что адаптация D1 DAR зависит от многих аспектов воздействия кокаина. Другое соображение заключается в том, что рецепторная авторадиография измеряет общие клеточные рецепторы, тогда как наши эксперименты по сшиванию белка могут различать поверхностные и внутриклеточные рецепторы. Интересно, что исследование иммуноблоттинга выявило тенденцию к увеличению уровней D1 DAR в NAc у людей, употребляющих кокаин (например,Worsley et al., 2000).

Является ли переходное увеличение поверхностного выражения D1 DAR, которое мы наблюдали в оболочке NAc, важное значение для инкубации косинусоидальной тяги? Это трудно оценить, потому что ни одно исследование не тестировало влияние внутриутробной инъекции агонистов D1 DAR или антагонистов на кий-индуцированный кокаин, ищущий после изъятия из дома (или вызванное кией восстановление кокаина, ищущего после тренировки по исчезновению). Однако рецепторы D1 в медиальной NAc (оболочке и медиальной сердцевине) участвуют в восстановлении кокаина при восстановлении кокаина после исчезновения, по-видимому, через механизм, требующий совместной активации D1 и D2 DAR (Андерсон и др., 2003; 2008; Bachtell и др., 2005; Шмидт и Пирс, 2006; Schmidt et al., 2006). Вместе с нашими результатами это может свидетельствовать о том, что нейроны в оболочке NAc более чувствительны к D1 DAR-опосредованному кокаину, ищущему в раннем изъятии из-за переходной регуляции D1R. Однако следует проявлять осторожность при экстраполяции от восстановления к исследованиям инкубации, поскольку обучение экстинкции и снятие домашних клеток связано с различными нейроадаптациями в NAc (Sutton и др., 2003; Ghasemzadeh et al., 2009; Вольф и Феррарио, 2010). Важно отметить, что D1 DARs в базалатеральной миндалине и префронтальной коре также важны для регенерации кокаина (например, Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt и др., 2006; Berglind et al., 2006).

На клеточном уровне как пресинаптические, так и постсинаптические DAR могут модулировать возбудимость средних колючих нейронов, преобладающий тип клеток и выходной нейрон NAc (Nicola et al., 2000; О'Доннелл, 2003). Известно, что повторное неконтингентное введение кокаина повышает некоторые эффекты активации D1 DAR в NAc. Таким образом, один день до одного месяца после прекращения лечения кокаином, усиленная способность агонистов D1 DAR ингибировать активность средних колючих нейронов (обусловленных ионтофоретическим глутаматом) наблюдалась по всему NAc (Генри и Уайт, 1991; 1995). Однако приведенное здесь увеличение поверхностного выражения D1 DAR вряд ли объяснит эти предыдущие результаты, поскольку оно ограничено оболочкой и было продемонстрировано только на WD1. Через один день после вызова кокаина в течение 10-14 дней после прекращения повторных инъекций кокаина, Beurrier и Maleka (2002) наблюдали усиление DA-опосредованного торможения возбуждающих синаптических ответов в средних колючих нейронах NAc, которое, по-видимому, опосредовано пресинаптической D1-подобной DAR на терминалах глутаматного нерва. Однако возможные последствия инъекции вызова (например, см. Boudreau et al., 2007 и Kourrich и др., 2007), в сочетании с различиями в видах и отсутствием записей в ядре, затрудняют сравнение их результатов с нашими. Следует также отметить, что агонисты и антагонисты DAR, используемые Генри и Уайт (1991; 1995) и Beurrier и Malenka (2002) не различал D1 и D5 DAR.

Уровни D2 DAR уменьшаются в NAc после прекращения самообслуживания кокаина

Основным эффектом, наблюдавшимся в нашем исследовании, было снижение белка D2 DAR как в ядре NAC, так и в оболочке после прекращения самостоятельного введения кокаина по сравнению с контролем солевого раствора. Это было более выражено в оболочке, где внутриклеточная, поверхностная и общая полосы были уменьшены как на WD1, так и на WD45. В основном, поверхностное выражение D2 DAR было уменьшено только на WD45, а общий уровень D2 DAR не уменьшался значительно. Несколько других исследований аналогично обнаружили снижение D2 DAR экспрессии после прекращения самообслуживания кокаина. У макак-резусов с обширным опытом самоконтроля кокаина плотность D2 DAR, измеренная с помощью авторадиографии рецептора, была снижена во многих полосатых областях, включая сердцевину NAc и оболочку, когда ткань была получена сразу после последней сессии (Moore et al., 1998b; Nader и др., 2002). Используя ПЭТ, этот эффект в базальных ганглиях был обнаружен в течение недели 1 по инициации самообслуживания кокаина (Nader и др., 2006). Скорость, с которой уровни D2 DAR восстанавливаются во время снятия, может зависеть от общего потребления кокаина. В авторадиографическом исследовании уровни D2 DAR в NAc восстанавливались для контроля значений после 30 или 90 дней выхода из сеансов 100 по самоконтролю кокаина (Beveridge et al., 2009). Однако в исследовании PET у обезьян с более длительным воздействием (1 год) и, следовательно, на более высоком общем потреблении кокаина, 3 обезьян 5 продемонстрировали восстановление уровней D2 DAR после 90 дней, в то время как обезьяны 2 не показали восстановления даже после 12 месяцев (Nader и др., 2006). В целом, эти результаты хорошо согласуются с нашими результатами снижения уровней D2 DAR во время вывода.

Исследования ПЭТ людей, употребляющих наркотики кокаина, также выявили снижение уровней D2 DAR во многих полосатых регионах, включая вентральный стриатум, которые были очевидны при раннем изъятии, а также после 3-4 месяцев детоксикации (Volkow и др., 1990, 1993, 1997). Тем не менее, значение для поведения остается неясным, поскольку доступность D2 DAR не коррелирует с положительными субъективными эффектами кокаина или решением принять больше кокаина после начальной дозы (Martinez и др., 2004). Важно отметить, что в то время как вызванная кией кокаиновая тяга показывает зависящее от времени увеличение во время отмены («инкубация»), это не происходит для кокаина,Lu и др., 2004a). Поэтому результаты Martinez et al. (2004) оставьте открытым возможность того, что доступность D2 DAR может коррелировать с поиском кокаина, вызванным кией, в центре внимания модели инкубации, изученной здесь. Низкая доступность D2 DAR у людей, употребляющих кокаин, коррелирует с уменьшением лобового кортикального обмена (Volkow и др., 1993). Наряду с другими изменениями, это может способствовать потере контроля, который возникает, когда наркоманы подвергаются воздействию наркотиков или парных пар, и к большей значимости лекарств по сравнению с нелекарственными наградами (Volkow и др., 2007; Volkow и др., 2009). Следует отметить, что снижение уровня D2 DAR в исследовании ПЭТ может свидетельствовать о повышенном высвобождении DA, а не о снижении уровней D2 DAR, но недавние результаты противоречат этому объяснению в случае пациентов, зависимых от кокаина (Martinez и др., 2009). Кроме того, посмертное исследование потребителей кокаина человека выявило тенденцию к снижению уровней D2 DAR в NAc с использованием иммуноблоттинга (Worsley et al., 2000).

Исследования у людей, употребляющих наркотики кокаина, не могут определить, является ли снижение доступности D2 DAR предрасполагающей чертой или результатом воздействия кокаина, но другие результаты показывают, что оба они являются истинными. С одной стороны, эксперименты с людьми, не употребляющими наркотики, обнаружили обратную корреляцию между наличием D2 DAR и сообщениями о «склонности к лекарственным средствам» при применении метилфенидата (Volkow и др., 1999; 2002). Эти данные свидетельствуют о том, что низкая доступность D2 DAR может повысить уязвимость к наркомании. Аналогичный вывод подтверждается исследованиями у макак-резусов. У социально помещенных обезьян достижение социального доминирования увеличивает доступность D2 DAR в полосатом теле, и это связано с меньшей чувствительностью к усиливающим эффектам кокаина по сравнению с подчиненными обезьянами (Морган и др., 2002). Социальный статус также коррелирует со стригальной доступностью D2 DAR у добровольцев, свободных от наркотиков (Martinez и др., 2010). С другой стороны, как исследования PER, так и рецепторного авторадиографии показывают, что долгосрочное кокаиновое самоуправление снижает доступность полосатого D2 DAR-рецептора у отдельно помещенных обезьян, как обсуждалось выше (Moore et al., 1998b; Nader и др., 2002; Nader и др., 2006). Хроническое самоконтролирование кокаина также, по-видимому, снижает доступность D2 DAR у доминирующих социально помещенных обезьян (Czoty и др., 2004). Таким образом, после длительного применения кокаина больше не наблюдалось существенных различий в доступности рецепторов D2 или усиливающих эффекты кокаина между доминирующими и подчиненными обезьянами (Czoty и др., 2004). Однако повышенные уровни D2 DAR вновь проявились у доминантных обезьян во время воздержания, и это коррелировало с более длительным латентным периодом реакции на новизну, что свидетельствует о снижении чувствительности к усиливающим эффектам кокаина (Czoty и др., 2010).

Как и у людей и обезьян, исследования на крысах показывают, что низкая доступность D2 DAR является фактором риска для уязвимости кокаина. Таким образом, исследования ПЭТ у крыс с высокой импульсивностью (характер, связанный с повышенным самообслуживанием кокаина) показывают снижение доступности D2 / D3 DAR в брюшном полосатом теле (Dalley и др., 2007). Уровни D2 DAR в NAc также уменьшаются у крыс, которые демонстрируют высокий опорный локомоторный ответ на новизну, еще один признак, связанный с уязвимостью зависимости (Hooks et al., 1994). Наши результаты на крысах показывают, что снижение уровней D2 DAR в NAc также может быть следствием повторного воздействия кокаина, что согласуется с исследованиями у обезьян и людей (см. Выше). Однако два исследования рецепторного авторадиографии у крыс выявили результаты, которые отличаются от наших. Бен-Шахар и др. (2007) не наблюдал снижение уровней D2 DAR в NAc после отмены (20 мин, 14 дней 60 дней) из режима самообслуживания с расширенным доступом кокаина, аналогичного нашему собственному (6 hr / day), хотя снижение наблюдалось в оболочке NAc после режима ограниченного доступа (2 hr / day) и 14 дней отмены (Бен-Шахар и др., 2007). Стефански и соавт. (2007) не обнаружил изменений в уровнях D2 DAR в ядре или оболочке 24 h после прекращения самостоятельного администрирования кокаина с ограниченным доступом (2 hr / day), хотя уровни D2 DAR уменьшались в контрольных коллайновых копьях. Как отмечено выше, рецепторная авторадиография измеряет общие клеточные рецепторы, в то время как исследования с ПЭТ и сшиванием белков измеряют рецепторы клеточной поверхности.

В целом, исследования взаимосвязи между уровнями D2 DAR и самообеспечением кокаина поддерживают модель, в которой D2 DAR обычно ограничивают самообслуживание кокаина. Поэтому мы предполагаем, что снижение уровней D2 DAR, наблюдаемое в наших экспериментах, может способствовать поиску кокаина, вызванному кией, после вывода кокаина. В частности, тот факт, что поверхностное выражение D2 DAR в ядре NAc было уменьшено на WD45, но не WD1, в сочетании с ключевой ролью ядра NAc при поиске кокаина, вызванного кией, указывает на то, что зависящее от времени D2 DAR downregulation в ядре NAc может вносят вклад в зависящую от времени интенсификацию кий-индуцированного кокаина. Это предсказывало бы, что внутривенное вливание агониста D2 во время изъятия приведет к уменьшению искажения кокаина, вызванного кией. К сожалению, ни одно исследование не изучало эффекты препаратов внутри-NAc D2 DAR в модели инкубации. С другой стороны, исследования по восстановлению кокаина-прайминга свидетельствуют о том, что D1 и D2 DAR в оболочке и медианном сердечнике работают совместно для содействия поиску кокаина (Андерсон и др., 2003; Bachtell и др., 2005; Шмидт и Пирс, 2006; Schmidt et al., 2006). Исходя из этих находок, снижение D2 DAR-экспрессии, наблюдаемое в наших экспериментах, может быть предсказано для снижения кокаина, т. Е. Эффекта, противоположного зависящей от вывода интенсификации, которая фактически наблюдается. Несоответствие может отражать проблемы, возникающие в результате обобщения с восстановлением кокаина после тренировки по исчезновению с целью выявления кокаина, вызванного кином после его отмены.

Временное увеличение поверхностной экспрессии D3 DAR происходит в ядре NAc после прекращения самообслуживания кокаина

Изучение D3 DAR-предпочтительных лекарств в парадигмах самообслуживания и восстановления кокаина предполагает, что антагонисты D3 DAR могут быть полезны при лечении наркомании кокаина и, в частности, в снижении реактивности к кокаино-ассоциированным сигналам (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll и др., 2005; Xi и Gardner, 2007). Эти результаты предполагают, что активация D3 DAR эндогенным DA может быть задействована в опосредовании индуцированного кией кокаинового поиска. Наши результаты показывают, что поверхностное выражение D3 DAR в ядре NAc остается неизменным на WD1 из автономного администрирования кокаина с расширенным доступом, но увеличивается на WD45 в связи с инкубацией кокаиновой тяги. Поверхностное выражение D3 DAR значительно не увеличилось в оболочке, хотя было небольшое, но значительное увеличение поверхностного / внутриклеточного отношения. Учитывая роль передачи D3 DAR в ответ на сигналы, связанные с кокаином, и важность ядра для поиска кокаина, вызванного кией, возникает соблазн предположить, что повышенная поверхностная экспрессия D3 DAR в ядре NAc способствовала инкубации кокаина, индуцированного кией которая наблюдается на WD45. Тем не менее, нейронный сайт, на котором действуют антагонисты D3 DAR, уменьшает кокаин-поиск, не был установлен. В частности, ни одно исследование не изучало влияние интра-NAc-инъекции D3 DAR, предпочитающего лекарственные средства, на кий-индуцированный поиск кокаина. В другой модели, Шмидт и соавт. (2006) обнаружили, что инъекция агониста D3 PDN 128,907 в сердечник или оболочку не привела к восстановлению кокаина, ищущего после тренировки по вымиранию.

Наши результаты в целом согласуются с исследованиями авторадиографии, которые измеряли общий уровень D3 DAR в NAc после воздействия кокаина. Стейли и Маш (1996) сообщили, что связывание D3 DAR было выше в NAc жертв передозировки кокаина по сравнению с контрольными по возрасту. После контакта с кокаином в парадигме предпочтения условного места и трех дней отмены мышей проявлялось увеличение связывания D3 DAR в ядре и оболочке NAc (Le Foll и др., 2002). Neisewander et al. (2004) измеренное связывание D3 DAR у крыс с обширным опытом самообслуживания кокаина, которые были проверены на восстановление кокаина с последующим повторным восстановлением после различных периодов отмены, а затем убили 24 h позже. Связывание D3 DAR в NAc не изменилось на WD1, но увеличилось после более длительного времени (WD31-32), что согласуется с нашим наблюдением за зависящим от времени увеличением. Кроме того, лечение наркотиками во время изъятия, которое уменьшало поиск кокаина, также ослабляло увеличение связывания D3 DAR, что свидетельствует о функциональной связи D3 DAR с поиском кокаина. Следует отметить, что D3 DAR увеличивается в Neisewander et al. (2004) были значительными в ядре, тогда как в оболочке наблюдались только тенденции, но субрегионы анализировались в ростральной части NAc, где сердцевина и оболочка менее отчетливы. Наш анализ проводился на ядре и оболочке из ростральной и каудальной частей NAc.

Эта работа была поддержана DA009621, DA00453 и премией NARSAD Distinguished Investigator Award от MEW, DA020654 до MM и предварительной исследовательской премии National Research Service DA021488 до KLC