Эндокринологии. 2013 Мар; 154 (3): 1225 – 1234.
Опубликовано в сети 2013 Ян 31. DOI: 10.1210 / en.2012-2042
Абстрактные
Подростковое созревание реакций на социальные стимулы имеет важное значение для типичного для взрослого человека социально-сексуального поведения. Происходящие в природе изменения в развитии реакции сирийского хомяка-самца на характерный социальный сигнал, вагинальные выделения (ВС) самки хомяка, обеспечивают хорошую модельную систему для исследования нейроэндокринных механизмов подросткового изменения социального вознаграждения. Сексуально наивные взрослые, но не несовершеннолетние, мужчины демонстрируют условное предпочтение места (CPP) по сравнению с VS, что указывает на то, что VS не является полезным до наступления половой зрелости. В этой серии экспериментов авторы изучили роль активации тестостерона и дофаминовых рецепторов в обеспечении роста у подростков положительной валентности VS. Эксперимент 1 показал, что замена тестостерона необходима взрослым хомякам, страдающим гонадэктомией, для формирования CPP для VS. Эксперимент 2 показал, что лечение тестостероном достаточно для ювенильных хомяков, чтобы сформировать CPP для VS, и что антагонист дофаминовых рецепторов галоперидол блокирует образование CPP для VS у этих животных. Эксперименты 3 и 4 продемонстрировали, что нарушение VS CPP низкими дозами галоперидола является результатом снижения привлекательных свойств VS и не связано с отвращающими свойствами галоперидола. Вместе эти исследования демонстрируют, что безусловные полезные свойства социального сигнала, необходимые для успешного взрослого социосексуального взаимодействия, возникают в результате пубертатного увеличения циркулирующего тестостерона у хомяков-самцов. Кроме того, это социальное вознаграждение может быть предотвращено антагонизмом к дофаминовому рецептору, что указывает на то, что гипоталамические и / или мезокортиколимбические дофаминергические цепи являются мишенями для гормональной активации социального вознаграждения.
Учитывая необходимость соответствующей интерпретации социальных стимулов в успешном социальном взаимодействии взрослых и репродуктивной пригодности, фундаментальной проблемой психобиологии развития является выявление нейроэндокринных механизмов, лежащих в основе подросткового созревания обработки социальной информации. Самцы сирийских хомяков представляют собой полезную модель для изучения изменений в восприятии развития и реакции на социальные сигналы, поскольку их сексуальное поведение зависит от нейронной обработки вагинальных выделений самок хомяка (ВС) (1, 2) и их эндокринные, нервные и поведенческие реакции на ВС созревают в течение второго месяца постнатальной жизни, что соответствует половой зрелости и юности у этого вида (3, 4). Несовершеннолетние хомяки-самцы не проявляют типичного для взрослых влечения к ВС (5). Более того, VS являются безусловной наградой только после полового созревания, потому что сексуально наивные взрослые, но не несовершеннолетние, хомяки-самцы будут формировать для них условное предпочтение места (CPP) (6, 7). Влечение к ВС, как и поведение мужского сексуального поведения, зависит от активационных эффектов тестостерона у взрослых (8, 9), а влечение к ВС может быть вызвано лечением тестостероном юношей (5). Однако неизвестно, является ли усиливающее значение VS аналогичным образом зависимым от тестостерона у взрослых или молодых хомяков.
Важным нервным ответом на хемосенсорные стимулы и совокупление у грызунов является выделение дофамина в медиальной преоптической области (MPOA) и прилежащем ядре (Acb) (10–20). В частности, дофамин участвует во многих аспектах сексуального вознаграждения. Например, системное введение галоперидола, преимущественно антагониста рецептора допамина D2 (Программа NIMH по скринингу психоактивных препаратов, http://pdsp.med.unc.edu), снижает безусловную мотивацию для первичных женских зрительных, слуховых и хемосенсорных сигналов у сексуально наивных самцов крыс и обусловленную мотивацию для обонятельных сигналов, ранее связанных с сексуальным поведением (21, 22). Кроме того, образование CPP для сексуального поведения у самок хомяков блокируется введением антагониста рецептора D2 (23). Тем не менее, другие исследования показали, что активация дофаминовых рецепторов не требуется для CPP для сексуального поощрения у самцов крыс и мышей (24–26). Остается определить, необходима ли активация дофаминовых рецепторов для CPP к VS у самцов хомяков. Тем не менее, мы знаем, что поведенческие различия между интактным гонадным ювенильным и взрослым хомяками отражаются в их дофаминергических реакциях на VS. Взрослые, но не ювенильные хомяки показывают увеличение высвобождения дофамина и метаболизма в ответ на VS в MPOA (18). Сходным образом, взрослые, но не ювенильные хомяки экспрессируют Fos в ответ на VS в Acb, вентральном сегменте и медиальной префронтальной коре (7). Таким образом, усиление дофаминергической функции в подростковом возрасте может быть необходимо для вознаграждения и привлечения ВС.
Участие дофаминергических агентов в половом вознаграждении регулируется тестостероном у грызунов. Кастрация вызывает снижение сексуального поведения после 2 до 8 wk, что совпадает с уменьшением базального уровня дофамина и обмена в Acb и MPOA (27). Отсутствие или наличие предопуляционного дофаминергического ответа MPOA на женский стимул является предиктором исчезновения или восстановления, соответственно, копулятивного поведения после гонадэктомии и последующей замены тестостерона (11, 28). Более того, половое поведение может быть частично восстановлено у длительно кастрированных самцов крыс путем системных и внутрипроцентных инъекций апоморфина, агониста допамина (29). Наконец, концентрации тестостерона и схемы допамина изменяются в период полового созревания (30, 31). Таким образом, в этой серии исследований была проверена гипотеза о том, что тестостерон активирует социальное вознаграждение за счет влияния на схему дофаминергического вознаграждения, используя в качестве модельной системы формирование CPP к VS у взрослых и молодых хомяков-самцов.
Материалы и методы
Животные
Сирийские хомяки (Mesocricetus auratus) были получены из Harlan Laboratories (Мэдисон, Висконсин) и помещены в виварию с контролируемой температурой и влажностью с циклом свет: темнота 14 часов свет: 10 часов темноты и неограниченным доступом к пище (Teklad Rodent diet 8640; Harlan Laboratories) и вода. По прибытии (см. Конкретные эксперименты по возрасту) молодых самцов содержали вместе с их однопометниками и биологическими матерями до момента отъема на P18. Отъемышей и взрослых самцов содержали по отдельности в прозрачных поликарбонатных клетках (30.5 × 10.2 × 20.3 см). Все мужчины были сексуально наивными во время исследования и использовались только в одном эксперименте. Шестьдесят взрослых самок хомяков возрастом примерно 12 мес. Содержались в аналогичных условиях в отдельных вивариях и использовались в качестве источника VS. Самкам хомячков подвергали овариэктомии за несколько недель до введения гормона для экспериментального контроля дня гормон-индуцированной течки, когда секреция VS является максимальной. Им вводили подкожно 10 мкг эстрадиолбензоата и 500 мкг прогестерона в кунжутном масле за 52 и 4 часа, соответственно, до сбора VS путем осторожной вагинальной пальпации. Все эксперименты проводились при красном свете <4 люкс через 1–5 часов в темноте. Лечение хомяков проводилось в соответствии с требованиями Национального института здоровья. Руководство по уходу и использованию лабораторных животныхи протоколы были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Мичиганского государственного университета.
Хирургия и имплантация гормонов
Хомякам в экспериментальных группах с гонадэктомией (GDX) сделали операцию с изофлурановым наркозом. Были сделаны двусторонние продольные разрезы мошонки, и яички были удалены с разрезом, дистальным по отношению к лигатуре (взрослые) или прижиганием (несовершеннолетние). Группам GDX + 0 и GDX + T также подкожно имплантировали бланки 2 или тестостерон-содержащие эластичные капсулы соответственно (один тестостерон 5 мм и один 13 мм [Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri], запечатанные на каждом конце с помощью 4 мм эластичный клей; внутренний диаметр 1.98 мм; внешний диаметр 3.18 мм). Эти капсулы производят физиологические уровни циркулирующего тестостерона у взрослых (one2 – 7 нг / мл, Таблица 1). Субъекты получали подкожную инъекцию анальгетика кетопрофена во время операции и снова через 24 через несколько часов.
Плазменный тестостерон меры
Через один час после завершения теста CPP или последнего обонятельного теста хомяков умерщвляли с помощью передозировки пентобарбитала натрия (150 мг / кг, внутрибрюшинно) и с помощью пункции сердца собирали конечную пробу крови для радиоиммуноанализа тестостерона циркулирующей плазмы. Дублирующиеся образцы тестостерона в плазме 50 – мкл анализировали в рамках одного анализа с использованием набора общего тестостерона Coat-A-Count (Diagnostic Products, Лос-Анджелес, Калифорния). Минимальная определяемая концентрация и коэффициент вариации внутри анализа составляли 0.08 нг / мл и 7.9% в экспериментах 1 и 2, а 0.12 нг / мл и 5.8% в экспериментах 3 и 4 соответственно. Пять (эксперимент 2) и 2 (эксперимент 3) хомяки удалили свои экспериментальные капсулы тестостерона и были исключены из поведенческого анализа или анализа тестостерона. Окончательные размеры групп приведены в Таблица 1.
CPP тесты
Настройка предпочтения места произошла, как описано ранее (6, 7) в аппарате со средним отделением 1 и внешними отделениями 2 (Med Associates, St. Albans, Vermont). Эти внешние отсеки были спроектированы так, чтобы учитывать ассоциации, характерные для отсеков, с четкими визуальными, тактильными и обонятельными сигналами. Животные были приспособлены к обработке и новым камерам 2 d до того, как был начат режим CPP. Режим CPP включал в себя предварительное тестирование, сеансы кондиционирования 10 и тестирование, причем все они проводились в одно и то же время суток (± 1 ч) для каждого хомяка. Чтобы уменьшить количество требуемых когорт и предотвратить воздействие контрольных животных на запах раздражителей, контрольных животных помещали в отдельную комнату, в которой началась темная фаза в 8: 00 am и тестирование в 9: 00 am. Экспериментальные животные содержались в комнатах, в которых темная фаза начиналась в 2: 00 pm и тестировалась в 3: 00 pm.
Предварительный тест (2 минуты в среднем отсеке с последующим 15-минутным доступом ко всем отсекам) использовали для определения начальных предпочтений каждого отсека хомяка без какого-либо стимула. Внешний отсек, в котором хомяк проводил больше времени, был определен как изначально предпочтительный отсек. Балл предпочтения, определяемый как [время в изначально нежелательном отсеке / (время в первоначально предпочтительном отсеке + время в изначально нежелательном отсеке)], и балл разницы, определяемый как [время в первоначально предпочтительном отсеке - время в первоначально предпочтительном отсеке нежелательный отсек] были рассчитаны для каждого животного (6). Чтобы каждый хомяк имел возможность сделать осознанное предпочтение, хомяки, которые не вошли в каждый отсек хотя бы раз 5, были исключены из дальнейшего обучения. Животных распределяли по экспериментальным и контрольным группам, чтобы приравнять группы к первоначальным предпочтениям камеры и оценкам предпочтений и представлению помета в разных группах.
После предварительного тестирования хомяки получили в общей сложности 10-минутные сеансы кондиционирования в боковых отделениях, сеанс 30 в день в течение последовательных дней, чередуя сеансы без стимула 1 и сеансы со стимулом 5. Во время сеансов кондиционирования без стимула хомяки как в экспериментальной, так и в контрольной группах помещали в первоначально предпочтительные отсеки, где они оставались одни. Во время сеансов кондиционирования в паре со стимулами хомяки в экспериментальной группе помещались в изначально не предпочтительные компартменты со стимулом. Хомяки в контрольных группах были также помещены в их изначально не предпочтительные компартменты, но им не давали стимул. Эта группа служила для количественной оценки любых изменений в предпочтениях или показателях различий между тестами, которые были связаны с привыканием во время подготовки. Аппарат CPP тщательно очищали 5% этанолом между каждым животным и 25% этанолом в конце каждого дня кондиционирования.
В экспериментах 1 и 2, VS были использованы в качестве стимула на сеансах кондиционирования. За час до использования приблизительно 500 мкл VS были собраны у женщин 30 и смешаны вместе, чтобы гарантировать, что каждый самец подвергался тому же стимулу. Приблизительно 15 мкл VS наносили на смоченную в воде хлопковую марлю, упакованную в пробирку Эппендорфа 2-мл, пробирку 1 для каждого мужчины. Непосредственно перед тестированием трубка была размещена вне зоны досягаемости самца в верхней части задней стенки в изначально неприспособленном отделении в сеансах кондиционирования в паре VS для группы VS. Пустые пробирки Эппендорфа использовали для контрольной группы во всех сеансах кондиционирования и для группы VS в сеансах кондиционирования без стимула. Чтобы гарантировать воздействие нелетучих компонентов VS, оставшиеся ∼200 мкл VS были смешаны с 1.5 мл минерального масла, и приблизительно 10 мкл этой смеси был нанесен металлическим шпателем непосредственно на нос хомяков в группе VS непосредственно перед хомяки были размещены в парном отделении VS. Чистое масло наносили на нос хомяков в контрольной группе для всех сеансов кондиционирования и тех, кто в группе VS для сеансов кондиционирования без стимула.
Через двадцать четыре часа после последнего сеанса кондиционирования хомяки были протестированы на предпочтение места в соответствии с той же процедурой, что и для предварительного теста. Как и в предварительном тестировании, стимул отсутствовал, и оценки предпочтений и различий рассчитывали для каждого животного.
Эксперимент 1: необходимы ли гормоны яичек для формирования CPP для VS у взрослых хомяков?
Этот эксперимент проверил, нужны ли циркулирующие гормоны яичка для отображения CPP в VS у взрослых хомяков. Экспериментальные исследования в этой лаборатории показали, что самцы хомяков формировали CPP к VS, когда кондиционирование начиналось через неделю после гонадэктомии (32), предполагая, что предполагаемые активационные эффекты гормонов яичка не вымываются остро, подобно постепенному снижению сексуального поведения, которое происходит через много недель после гонадэктомии у грызунов мужского пола (33). Таким образом, в этом эксперименте мы изучали хомяков, которые были GDX 10 WK до начала кондиционирования. Все взрослые прибыли в лабораторию в послеродовой день P56-63, но прибытия были в шахматном порядке, так что группы могли быть проверены одновременно. Контрольных животных без стимула оставляли гонадой нетронутыми и проверяли в P64-71. Хомяки в группе GDX + 0 были GDX в P57 – 64, оставались неуправляемыми для 10 wk, а затем были имплантированы с пустыми капсулами в P127 – 134, 1 wk перед предварительным тестированием в P134 – 141. Группой GDX + T была группа GDX, которой давали капсулы тестостерона в P57 – 64, 1 wk перед предварительным тестированием в P64 – 71, чтобы они служили в качестве положительного контроля для демонстрации значительного CPP. Эта схема требовала кондиционирования и тестирования животных в разном возрасте, но мы никогда не наблюдали возрастных различий в поведенческих или нервных реакциях на тестостерон в предыдущих экспериментах, которые контролировали эту переменную у молодых людей (34). Кроме того, обработанные GDX / тестостероном мужские хомяки возрастов, сходных с таковыми в группе GDX + 0, достоверно образуют CPP для VS (35). Поэтому мы подумали, что поддержание групп без стимула и групп GDX + T в течение недель 10 в лаборатории было ненужным и не могло оправдать затраты на это.
Эксперимент 2: необходима ли активация рецептора тестостерона и дофамина для CPP к VS у юных хомяков?
В этом эксперименте проверялось участие дофамина в CPP, стимулированном тестостероном, к VS у юных хомяков. Все животные прибыли в P12, прошли предварительные испытания в P20 и были опробованы в когортах 3. Гонадские интактные хомяки использовали в качестве контроля без стимулов, тогда как другие группы получали GDX и давали пустые капсулы или капсулы тестостерона в P13, 1 за неделю до тестирования. Группа GDX + 0 была включена для подтверждения того, что подростки с низким уровнем тестостерона (как у интактных животных с гонадой) не показывают CPP к VS. Группа GDX + T была включена, чтобы определить, может ли лечение тестостероном вызывать CPP до VS. Все остальные группы представляли собой GDX + T и получали внутрибрюшинные инъекции галоперидола (0.05, 0.15 и 0.45 мг / кг) или пропиленгликоля 30 за минуты до сеансов VS и кондиционирования без стимула соответственно. Галоперидол является мощным антагонистом D2, но также может связывать рецепторы D1, адренергические и сигма менее эффективно (Программа скрининга психоактивных веществ NIMH, http://pdsp.med.unc.edu/). Контрольные группы без стимула, GDX + 0 и GDX + T получали инъекции пропиленгликолевого носителя 30 мин за оба сеанса кондиционирования.
Эксперимент 3: только ли антагонизм к дофаминовым рецепторам меняет предпочтения ювенильных хомяков?
Этот эксперимент был разработан, чтобы определить, имели ли дозы галоперидола, использованные в эксперименте 2, какие-либо внутренние отвращающие качества у хомяков, которых лечили тестостероном, так что они вызывали бы отвращение к условному месту (CPA). Если они это сделают, профилактика СРР для ВС в эксперименте 2 может быть связана с предотвращением условий, обусловленных галоперидолом. Все животные прибыли в P11 или P12, были GDX + T в P13, предварительно протестированы в P20 и работали в когортах 2 в шахматном порядке на день 1. Была использована подобная парадигма кондиционирования, как описано, но галоперидол вводили в первоначально предпочтительной камере в попытке уменьшить начальные предпочтения, и VS не использовали. Локомоторное движение (число изменений в разрывах инфракрасного луча) и выход каловых масс во время сеансов кондиционирования были также количественно определены как индикаторы физиологических эффектов галоперидола.
Безусловный тест на привлечение
Эксперимент 4: Влияет ли антагонизм дофаминовых рецепторов на влечение к ВС у юных хомяков?
Этот эксперимент определил, снижает ли галоперидол привлекательные свойства VS. Животные, которые были исключены из эксперимента 3 после предварительного тестирования (и перед любым воздействием галоперидола) из-за недостаточной разведки, использовались здесь; таким образом, эти мужчины прибыли в P11-12, прошли GDX и тестостерон, обработанные P13, и протестировали в течение дней 5 на P28-32. VS были собраны у женщин-стимулов 1 за день до первого дня тестирования, как описано; VS из самок N14 смешивали вместе с мкл минерального масла 100 в 1 пробирок 5 Eppendorf. Пробирки хранили при 4 ° C до тех пор, пока пробирку 1 не размораживали за 30 за минуты до начала тестирования каждый день. Металлический шпатель использовали для смазывания приблизительно 15 мкл чистого минерального масла или смеси VS на предметное стекло, 1 на хомяка, непосредственно перед испытанием. Чистый и смазанный VS противоскользящий слой приклеивали приблизительно 5 см вверх по стене с противоположных сторон стеклянных аквариумов (51 × 26 × 31.5 см) в соответствии с процедурой, описанной в (36, 37). Расположение запаха было уравновешено между группами и внутри животного.
В дни 1 и 5 животным вводили внутрибрюшинный пропиленгликоль-носитель 30 за минуты до испытания. В дни от 2 до 4 животным вводили 0.05, 0.15 или 0.45 мг / кг галоперидола в уравновешенном порядке. Животные оставались в своей комнате для колоний непосредственно перед тестированием. Чтобы начать тестирование, хомяки были размещены в середине аквариума, и их поведение было озвучено в реальном времени и записано видео в течение минут 5. По завершении теста хомяков возвращали в комнату для колоний, удаляли предметные стекла и очищали аквариумы с помощью 75% этанола. Период времени, который хомяк проводил, исследуя каждый слайд, с длиной носа менее 0.5 см от слайда, определялся количественно по видеозаписям, снятым бомбардиром, который не видел местоположение трубки VS. Для каждого животного рассчитывали показатель привлекательности (время с VS слайдом - время с масляным слайдом).
статистический анализ
Чтобы подтвердить, что все контрольные и экспериментальные группы имели одинаковые начальные оценки предпочтений и различий, был использован односторонний ANOVA. Чтобы оценить, стимулировали ли стимулы СРР или СРА в экспериментах с 1 на 3, были проанализированы изменения в оценках предпочтений и различий, как сообщалось ранее (7). Изменения в показателях предпочтений и различий определяли путем вычитания предварительных показателей из показателей для каждого хомяка. У контрольных животных определяли средние показатели изменения баллов предпочтений и баллов различий, чтобы обеспечить стандарт безусловного изменения. Меры контрольных изменений в баллах предпочтений и различий затем вычитали из баллов каждого экспериментального животного, чтобы исправить любое безусловное изменение. Поэтому меры контроля на рисунках не показаны. Скорректированные изменения в показателях предпочтений и различий были затем использованы в 1 выборке. t тесты в каждой группе, сравнивая значение с нулем, чтобы оценить существенные отличия от случайных предпочтений. Эти статистические процедуры аналогичны тем, которые использовались в предыдущих исследованиях, в которых использовались парные t тесты для определения изменений в предпочтениях и различиях в группе (6, 38–43). Кроме того, исправление безусловных изменений, наблюдаемых у контрольных животных, снижает вероятность ложноположительных результатов, поскольку любые первоначальные предпочтения для внешнего компартмента могут иногда уменьшаться после многократного эквивалентного воздействия на эти камеры (6, 7). Значительные изменения в оценках предпочтений и различий потребовались для того, чтобы сделать вывод, что CPP был установлен. Для оценки влияния галоперидола на физиологические показатели в эксперименте 3, парные образцы t тесты использовались для сравнения движения и выхода каловых масс в камерах, связанных с галоперидолом и носителем, в каждой группе, получавшей галоперидол.
Чтобы оценить, влиял ли антагонист дофаминового рецептора галоперидол на безусловное влечение к ВС в эксперименте 4, для проверки влияния дозы галоперидола на показатель привлекательности использовался повторный анализ ANOVA, с t последующие тесты и исправления Бонферрони. Кроме того, 1-образец t Были использованы тесты, чтобы определить, значительно ли отличались предпочтения и различия каждой группы дозирования от вероятности, половины или нуля, соответственно. Показатели для инъекций носителя в первый и последний день тестирования не различались и были усреднены вместе для каждого животного. ANOVA с повторными измерениями использовали для определения эффектов лекарственного средства на количество пересечений линий, чтобы указать влияние лекарственного средства на двигательную активность. Во всех анализах P Значение <05 считалось значимым, и все статистические анализы были выполнены с помощью программного обеспечения SPSS (PASW Statistics 20; SPSS, компания IBM, Чикаго, Иллинойс).
Итоги
Эксперимент 1: необходимы ли гормоны яичек для формирования CPP для VS у взрослых хомяков?
Долгосрочные взрослые хомяки GDX не смогли сформировать CPP для VS (Рисунок 1). Никаких изменений в предпочтениях или различиях в группе GDX + 0 не наблюдалось в результате кондиционирования с VS, как в примере 1 t тесты показали, что ни исправленное изменение предпочтения (t(9) = −1.98, NS) или разница (t(9) = 1.19, NS) баллы значительно отличались от нуля. Напротив, группа GDX + T показала CPP для VS, как 1-способ t тесты показали, что исправлено изменение предпочтения (t(9) = 4.06, P <.01) и разность (t(9) = -4.23, P <01) результаты значительно отличались от нуля. Группы не различались по начальному баллу предпочтений (F(2,29) = 2.17, NS) или разница (F(2,29) = 1.95, NS). Следовательно, недавнее воздействие гормонов яичка необходимо для ВС-индуцированной СРР.
Эксперимент 2: необходима ли активация рецептора тестостерона и дофамина для CPP к VS у юных хомяков?
Тестостерона было достаточно, чтобы стимулировать CPP для VS у юных хомяков (Рисунок 2). Группа GDX + T VS, получившая инъекцию транспортного средства, показала CPP для VS в качестве 1-way. t тесты обнаружили, что исправлено изменение предпочтения (t(5) = 3.11, P <.05) и разность (t(5) = -2.77, P <.05) баллы достоверно отличались от нуля. Группа GDX + 0 VS не показала значимого скорректированного изменения в баллах предпочтений или различий в результате кондиционирования (t(6) = 0.09 [NS] и t(6) = -1.74 [NS], соответственно), воспроизводящие эффекты, наблюдаемые у интактных гонад, с аналогичными концентрациями циркулирующего гормона (7). Кроме того, антагонизм к дофаминовому рецептору блокировал CPP для VS у T-обработанных ювенильных хомяков (Рисунок 2). CPP блокировался галоперидолом при всех дозах 3: группы 0.05-, 0.15- и 0.45-мг / кг GDX + T VS не показали исправленных изменений в оценках предпочтений (t(7) = 0.35 [NS], t(6) = 0.52 [NS] и t(7) = -0.10 [NS], соответственно) или разница баллов (t(7) = −0.44 [NS], t(6) = −0.18 [NS] и t(7) = 0.31 [NS], соответственно), которые значительно отличались от нуля в результате кондиционирования. Группы не различались по своему первоначальному баллу предпочтений (F(5,47) = 0.27, NS) или разница (F(5,47) = 0.26, NS).
Эксперимент 3: только ли антагонизм к дофаминовым рецепторам меняет предпочтения ювенильных хомяков?
Более низкие дозы галоперидола 2 не были отвратительными (Рисунок 3). Ни группа 0.05, ни группа 0.15 мг / кг не показывали СРА для галоперидола, как способ 1. t тесты показали, что ни исправленное изменение предпочтения (t(7) = −0.23 [NS] и t(8) = 0.55 [NS], соответственно), ни разница (t(7) = −0.02 [NS] и t(9) = -0.54 [NS], соответственно) баллы значительно отличались от нуля. CPA к самой высокой дозе галоперидола не было обнаружено. В одну сторону t тесты показали, что скорректированное изменение оценки предпочтений значительно отличалось от нуля (t(7) = 2.55, P <05), но исправленное изменение баллов разницы не было (t(7) = −1.88, NS). Группы не различались по своему первоначальному баллу предпочтений (F(3,32) = 0.01, NS) или разница (F(3,32) = 0.14, NS). Галоперидол мало влиял на двигательную активность и количество каловых масс (Рисунок 4). Парные образцы t тесты показали, что галоперидол не влиял на движение в дозах 0.00, 0.05, 0.15 или 0.45-мг / кг (t(8) = −0.26 [NS], t(8) = 0.28, [NS], t(8) = 0.26 [NS] и t(8) = 1.21 [NS] соответственно). Выход фекальных болей увеличивался при дозе 0.45-мг / кг (t(8) = -2.67, P <05), но не при дозах 0.00, 0.05 или 0.15 мг / кг (t(8) = −1.10 [NS], t(8) = −0.59 [NS] и t(8) = −1.74 [NS] соответственно).
Эксперимент 4: Влияет ли антагонизм дофаминовых рецепторов на влечение к ВС у юных хомяков?
Антагонизм к дофаминовому рецептору влиял на притяжение к ВС дозозависимым образом (Рисунок 5). При анализе повторных измерений значительный эффект от дозы наблюдался в балле привлекательности с поправкой Гринхауса-Гейссера, F(1.42,11.38) = 9.802, P <.01, так что в дальнейшем t тесты, оценки транспортных средств значительно отличались от оценок дозы 0.05-, 0.15- и 0.45-мг / кг (t(8) = −4.74, −3.46 и −3.80, все P <01 соответственно). Однако t-тесты с 1 выборкой, сравнивающие баллы разницы со случайным предпочтением между слайдами (ноль), показывают, что влечение к VS все еще сохранялось в группе 0.15 мг / кг, как и в группе носителя: 0.00- и 0.15- Оценка притяжения дозы в мг / кг значительно отличалась от случайной (t(8) = 4.22, P <.01 и t(8) = 2.81, P <05, соответственно), тогда как оценка дозы 0.05 и 0.45 мг / кг не отличалась от случайной (t(8) = 1.72 и -0.11, оба NS соответственно). Не было обнаружено влияния дозы на количество пересечений линий при повторных измерениях ANOVA (F(3,24) = 0.11, NS), данные не показаны. Таким образом, галоперидол значительно снижал влечение к ВС при некоторых дозах.
Физиологические показатели
Физиологические меры показаны в Таблица 1 и подтвердите эффективность капсул тестостерона в увеличении циркулирующего тестостерона в обоих возрастах. Группы одного возраста не различались по массе тела.
Обсуждение
Эти исследования показывают, что восприятие видоспецифического хемосенсорного стимула как полезного зависит от тестостерона и включает активацию дофаминовых рецепторов. В частности, мы обнаружили, что долгосрочные взрослые самцы хомяков GDX не образуют CPP для VS, в то время как лечение тестостероном несовершеннолетних достаточно, чтобы дать им возможность сформировать CPP для VS. Кроме того, главным образом антагонист рецептора D2 галоперидол предотвращал экспрессию CPP в VS у ювенильных хомяков, получавших тестостерон. Исходя из этих выводов, мы заключаем, что подростковое созревание обработки социальной информации является результатом пубертатного повышения уровня циркулирующего тестостерона, который благодаря еще не идентифицированному влиянию на дофаминергические цепи приводит к восприятию женских хемосенсорных стимулов и сред, связанных с этими стимулами, как вознаграждение.
Тестостерон и социальная награда
Учитывая необходимость тестостерона в вознаграждении VS во взрослом возрасте и способность тестостерона стимулировать вознаграждение VS у молодых животных, мы полагаем, что 1) взрослые, как положительные ответы на VS, происходят нормально из-за пубертатного увеличения циркулирующего тестостерона и 2 ) никакие другие гормонозависимые или -независимые процессы развития у подростков не нужны для вознаграждения ВС. В самом деле, организационные эффекты тестостерона в период полового созревания не требуются для вознаграждения ВС, поскольку животные, лишенные гонадных гормонов в период полового созревания и получавшие тестостерон в зрелом возрасте, демонстрируют устойчивый СРР к ВС (35). Активирующие эффекты тестостерона при ВС-СРП отражают эффекты, наблюдаемые в исследованиях влечения к ВС как у подростков, так и у взрослых, и поведенческих реакций сексуального характера, которые обычно возрастают в подростковом возрасте (5, 9, 44). Хотя механизм, с помощью которого тестостерон способствует ответным реакциям на VS, не был определен конкретно, мы предполагаем, что он повышает дофаминергический тонус посредством активации рецептора D2.
Допамин и социальная награда
Наше исследование демонстрирует роль активации рецептора D2 в полезной интерпретации VS, так как главным образом антагонист рецептора D2 галоперидол блокирует CPP к VS. Эта блокада обусловлена снижением привлекательных и полезных свойств VS, что продемонстрировано в тесте безусловного притяжения. Хотя эти эффекты теоретически могут быть связаны с галоперидол-индуцированным снижением обонятельных способностей (45), Ранее было показано, что активация рецептора D2 снижает обонятельную чувствительность и дискриминацию (46–48). Кроме того, в экспериментальных исследованиях хомяки, подвергшиеся воздействию даже самой высокой дозы галоперидола, все еще были в состоянии обнаружить пищевые обонятельные сигналы (49). Кроме того, блокада CPP не была связана с отвращающими свойствами галоперидола, которые заставляли животное избегать компартмента, связанного с галоперидолом CPP, потому что эксперимент 3 продемонстрировал, что более низкие дозы 2 галоперидола, 0.05 и 0.15 мг / кг не были отрицательными. Кроме того, галоперидол не влиял на движение и влиял на выход каловых масс только в самой высокой дозе. Поскольку выход каловых масс был классически использован в качестве индикатора тревоги и отвращения (50), эти результаты параллельны образованию CPA для самой высокой дозы галоперидола, хотя одно предостережение заключается в том, что активация рецептора D2 ингибирует моторику кишечника в кишечной нервной системе (51). Взятые вместе, маловероятно, что галоперидол вмешивался в сенсорное обнаружение VS или что он сам по себе отвратителен при более низких дозах, используемых в этом исследовании; поэтому мы приходим к выводу, что активация рецептора D2 необходима для того, чтобы ВС воспринимались как полезные.
Дофамин ранее принимал участие во многих аспектах сексуального поведения, включая предвкушающее или аппетитное поведение (52) совокупляющее или противоречивое поведение (53) и усиливающие реакции на сексуальное взаимодействие (23). Кроме того, дофаминергическое действие на рецепторы D2, вероятно, важно для ассоциирования социосексуальных стимулов с окружающими или другими сигналами. Системные низкие дозы неспецифического антагониста дофамина блокируют условное предпочтение спаривания у самок крыс (54), и агонист D2 во время совместного проживания с однополым партнером с ароматом вызывает предпочтение однополого партнера к самцам с аналогичным ароматом у крыс-самцов (55). Работа с моногамными степными полевками далее подтверждает важность рецептора D2 в ассоциировании сексуального вознаграждения со стимулами или индивидуумами, поскольку системные инъекции D2, но не D1, агониста рецептора и антагониста, облегчают и нарушают предпочтения партнера у мужских полевок соответственно (56). В настоящем исследовании подтверждается роль активации рецептора D2 в усилении реакций на безусловные социальные сигналы у сексуально наивных животных и параллельно с эффектами галоперидола в снижении мотивации к первичным визуальным, слуховым и хемосенсорным сигналам женского пола у крыс с сексуальной наивностью (57).
Поскольку мы обнаружили, что несколько чувствительных к дофамину областей мозга, включая миндалины, MPOA и Acb, участвуют в поведенческих реакциях на VS (7, 18), системное вмешательство использовалось для противодействия дофаминовым рецепторам в нескольких предполагаемых местах действия. Хотя сайт (ы) действия дофамина не может быть определен из этого исследования, есть несколько вероятных кандидатов. Агонисты и антагонисты дофамина в MPOA облегчают и снижают показатели сексуального поведения, соответственно, у самцов и самок крыс (58–61). Кроме того, MPOA вовлечено в упреждающее сексуальное поведение и женские предпочтения (62, 63). Мезолимбическая система, по-видимому, не участвует в поведении копулятивного поведения, за исключением общих двигательных способностей (63, 64). Однако дофаминергическое действие в Acb может быть связано с упреждающим сексуальным поведением, таким как повышенная двигательная активность и эрекция в ответ на сигналы женского пола, независимо от моторных эффектов (62, 65). Кроме того, Acb играет важную роль в парных связях и ассоциации мат-кью, о чем свидетельствует работа у полевок (66, 67). Таким образом, действие дофамина в MPOA, Acb или обеих областях может быть важным для CPP до VS.
Тестостероновая модуляция дофаминергических систем
Предыдущие исследования демонстрируют связанные с половым созреванием изменения в содержании дофамина, переносчиках, рецепторах и синаптических реакциях в Acb (68–73). Независимо от того, зависят ли эти изменения от пубертатного повышения уровня тестостерона, за исключением случаев, когда подростковый паттерн первоначального перепроизводства и последующей обрезки рецепторов D1 и D2 в Acb крысы происходит независимо от наличия или отсутствия гонадных гормонов (74). Хотя изменения в развитии дофамина MPOA были хорошо изучены у самок грызунов (75), меньше известно о подростковых изменениях дофаминергического тонуса у мужчин MPOA. Тем не менее, гормоночувствительность взрослого MPOA хорошо известна. Несколько исследований показали, что длительная (2-8 wk) гонадэктомия приводит к увеличению нескольких показателей дофаминергического тонуса в MPOA, включая содержание ткани и амфетамин-индуцированное высвобождение дофамина, но снижение внеклеточного дофамина у крыс в покое (27, 76–79). Важно, что дофаминергические реакции MPOA на женские стимулы у взрослых самцов крыс аналогично модулируются тестостероном (11, 28). Хотя эффекты кастрации в вентральном стриатуме менее последовательны, чем при MPOA, 28 d гонадэктомия обычно снижает концентрации дофамина и DOPAC в ткани Acb (27, 80, 81). Таким образом, вполне вероятно, что нормативное увеличение циркулирующего тестостерона в подростковом возрасте способствует высвобождению дофаминергической реакции в ответ на VS, MPOA, Acb или оба, способствуя тем самым вознаграждению VS. Тем не менее, многие из этих исследований были проведены на взрослых животных, и для подтверждения этой гипотезы в развитии мозга требуется больше работы, поскольку воздействие экспозиции тестостерона у молодых животных может отличаться от такового у взрослых (34).
Взятые вместе, эти исследования демонстрируют важность тестостерона и дофамина в вознаграждении ответов на безусловный социальный стимул. Обе системы тестостерона и дофамина созревают в подростковом возрасте, когда, как правило, приобретается полезное качество VS. Следует отметить, что допаминергическая цепь может быть функциональной у молодых животных, чтобы опосредовать CPP к VS, но что зависимая от тестостерона активация некоторых других нейронных схем также необходима для вознаграждения VS. Однако наиболее экономное объяснение, учитывая подтверждающие данные, заключается в том, что лечение тестостероном у ювенильных животных имитирует нормативное повышение уровня пубертатного тестостерона, что, в свою очередь, влияет на дофаминергическую систему, что позволяет получить вознаграждение ВС.
Благодарности
Авторы выражают благодарность Джейн Вениер, Эндрю Кнейнсбергу, Элейн Синклер, Сьюзи Зонненшайн, Джошуа Паасеве, Дженнифер Лэмпен и Шеннон О'Коннелл за их многочасовую помощь с CPP. Кроме того, авторы благодарны Кайле Де Лорм и Мэгги Мор за полезные отзывы об экспериментальном дизайне и написании статей.
Эта работа была поддержана грантами Национального института здравоохранения R01-MH068764 (для CS), T32-MH070343 (для MB) и T32-NS44928 (для MB).
Раскрытие информации: авторам нечего раскрывать.
Сноски
Сокращения:
- Acb
- прилежащего ядра
- CPA
- избегание условного места
- CPP
- предпочтительное место
- GDX
- подвергнутых гонадэктомии
- MPOA
- медиальная преоптическая область
- VS
- вагинальные выделения.
Рекомендации