Опиоидная система в медиальной префронтальной коре опосредует выпивку (2013)

Addict Biol. 2013 Jan 24. doi: 10.1111 / adb.12033.

Blasio A, Steardo L, Сабино V, Cottone P.

Источник

Лаборатория Addictive Расстройства, кафедры фармакологии и психиатрии, Медицинский факультет Бостонского университета, Бостон, Массачусетс, США.

Абстрактные

Нарушение расстройства пищевого поведения является наркомания-образного расстройства, характеризующегося чрезмерным питание потребление в течение отдельных периодов времени.

Это исследование было направлено на понимание роли опиоидной системы в медиальной префронтальной коре (mPFC) в конъюнктурных и мотивационных аспектах выпивки. Для этой цели мы тренировали самцов крыс, чтобы получить либо сладкую, очень вкусную диету (Palatable rats), либо диету чау-чау (Chow rats) для 1 час / день.

Тогдаоценивали влияние антагониста опиоидных рецепторов, налтрексона, которые давались либо системно, либо специфично в ядре (NAcc) или mPFC с фиксированным коэффициентом 1 (FR1) и графиком усиления с прогрессивным коэффициентом для питание.

Наконец, мы оценили экспрессию генов proopiomelanocortin (POMC), про-динорфина (PDyn) и проэнкефалина (PEnk), кодирующих пептиды опиоидов в NAcc и mPFC в обеих группах.

Пасущиеся крысы быстро увеличивали потребление в четыре раза. Налтрексон при системном введении и в NAcc уменьшал FR1, отвечая на питание и мотивация к еде в прогрессивном соотношении как у чау-чау, так и у вкусных крыс; и наоборот, при введении в mPFC эффекты были высокоселективными для переедающих крыс. Кроме того, мы обнаружили двукратное увеличение POMC и снижение экспрессии гена PDyn на ≥50% в mPFC у крыс, приемлемых для вкуса, по сравнению с контрольными крысами; однако никаких изменений не наблюдалось в NAcc.

Наши данные свидетельствуют о том, что нейроадаптации опиоидной системы в mPFC происходят после прерывистого доступа к высокопривлекаемым питание, который может отвечать за развитие выпивки.

Введение

Расстройство пищевого поведения характеризуется чрезмерным и неконтролируемым употреблением в пищу очень вкусных продуктов в течение короткого периода времени (; ; ). Субъекты, испытывающие переедание, описывают это как потерю контроля во время чрезмерного употребления пищи, что приводит к некомфортной сытости и интенсивному чувству отвращения и смущения (). Расстройство пищевого поведения часто встречается при сопутствующих заболеваниях, таких как ожирение, диабет, сердечно-сосудистые заболевания, а также другие психические расстройства (; ).

Значительные усилия были предприняты в попытке выделить факторы, способствующие развитию переедания (; ). Широко принятая гипотеза об этиологии переедания основана на качественном чередовании вкусовых качеств. Действительно, ограничение на малопривлекательные, «безопасные» продукты питания, обычно обусловленное воспринимаемыми культурными нормами для худощавости или здоровья, может вызвать тягу к более аппетитным вкусным продуктам и способствует перееданию. Таким образом, систематическое изменение вкусовых качеств приводит к самовоспроизводящемуся порочному кругу потребления алкоголя / ограничений.; ), поднимая вопрос о том, можно ли считать расстройство пищевого поведения разной формой расстройства; ; ; ).

В настоящее время отсутствуют эффективные фармакотерапии при расстройстве пищевого поведения, хотя были предложены различные экспериментальные цели (; ). Начиная с 1970, опиоидная система считается одной из основных целей лечения расстройств пищевого поведения, так как ранние наблюдения показали, что антагонисты опиоидов, такие как налтрексон и налоксон, способны снизить потребление пищи (). Более поздние данные показали, что опиоидная система участвует в двунаправленной модуляции пищевого поведения, учитывая способность морфина повышать аппетит у крыс, лишенных пищи и не лишенных пищи (). После этих первоначальных наблюдений была выяснена выдающаяся роль опиоидной системы в обеспечении вкусовых качеств пищи, и многочисленные свидетельства указывают на то, что accumbens kernel (NAcc) представляет собой ключевую область, опосредующую эти эффекты (). Более поздние исследования показали, что опиоидная модуляция потребления гедонической пищи в NAcc является частью более сложной сети, которая включает в себя несколько структур мозга, включая префронто-кортикальные области ().

Несмотря на то, что обширное направление исследований подчеркивает первостепенную роль опиоидной системы в модуляции вкусовых качеств и гедонистического питания, конкретная область мозга, в которой опиоидная система опосредует переедающую пищу, до сих пор неизвестна.

Таким образом, целью этого исследования было определить, способен ли опиоидный антагонист налтрексон, вводимый системно, подавлять потребление и мотивацию для получения очень вкусной пищи в модели с едой на крысах. Для этой цели мы использовали недавно разработанную оперантную модель, в которой крысы самостоятельно вводят очень вкусную, сладкую диету в условиях ограниченного доступа (1 в день), имитируя совокупные и мотивационные особенности, наблюдаемые при расстройстве переедания (). Затем мы продолжили, чтобы определить, какая область мозга ответственна за системные эффекты налтрексона в подавлении потребления и мотивации для получения сладкой, очень вкусной диеты. Для этого мы микроинфузировали сайт, в частности, опиоидный антагонист в оболочку NAcc и mPFC. Наконец, мы оценили экспрессию генов preOpioMelanoCortin (POMC), Pro-Dynorphin (PDyn) и Pro-Enkephalin (PEnk), кодирующих опиоидные пептиды в NAcc и mPFC после истории переедания.

Материалы и методы

Тематика

Самцы крыс Wistar (n= 70), дни 41 – 47 по прибытии (Чарльз Ривер, Уилмингтон, Массачусетс) были размещены в стандартных пластиковых клетках с проволочной крышкой в ​​цикле обратного освещения 12: 12 h (светится в 10: 00 h), в влажность- (60%) и температурно-контролируемый (22 ° C) виварий. По прибытии крысы имели доступ к кукурузному корму (Harlan Teklad LM-485 Diet 7012 (65% (ккал)) углевод, 13% жир, 21% белок, 341 кал / 100 г); Harlan, Indianapolis, IN) и вода вволю всегда. Процедуры, соблюдаемые Национальными институтами здоровья Руководство по уходу и использованию лабораторных животных (Номер публикации NIH 85-23, пересмотренный 1996) и Принципы лабораторного ухода за животными (http://www.nap.edu/readingroom/bookslabrats), и были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Бостонского университета (IACUC). Экспериментальные процедуры не включали ограничение / лишение пищи или воды, если не указано иное.

Наркотики

Налтрексон, (5α) -17- (циклопропилметил) -4,5-эпокси-3,14-дигидроморфинан-6-гидрохлорид был приобретен у Abcam (Cambridge, MA). Налтрексон был только что растворен в изотоническом фильтрованном физиологическом растворе (0.9%) в день испытания. Налтрексон вводили подкожно (0, 0.03, 0.1 и 0.3 мг / кг, 1 мл / кг) 30 за несколько минут до сеанса и специфично для сайтов в оболочку NAcc и mPFC (0, 5 и 25 ug / side, двусторонние) непосредственно перед сессия. Дозы и время предварительной обработки были основаны на литературе (; ; ).

Оперантная пищевая процедура

Субъекты были обучены самостоятельному введению пищи и воды в отдельных рабочих камерах, подробно описанных в (; ). Для получения дополнительной информации см. Дополнительные материалы и методы.

Обучение

Оперантная модель переедания была выполнена, как описано ранее (). Крысы (n= 70) получали стандартную диету Харлана Теклада в своей домашней клетке. После периода акклиматизации пищу заменили диетой на основе AIN-76A, далее называемой «Чау А / Я» (диета 5TUM, составленная из экструдированных гранул 4 – 5 g, 65.5% (ккал) углеводов, 10.4% жира , 24.1% белка, 330 кал / 100 г; TestDiet, Richmond, IN). Крыс обучали приобретению оперантного самостоятельного введения для пищи (прецизионные пищевые гранулы 45-mg (Chow A / I)) и воды (100 мкл) при фиксированном соотношении 1 по графику подкрепления (). Диспенсер доставлял прецизионные гранулы 45-mg, идентичные домашней клетке ~ 5g экструдированной диеты, чтобы гарантировать, что Чау потребление пищи крысами определялось только гомеостатическими потребностями (; ). Ежедневные сеансы проводились до наступления темного цикла и имели продолжительность 1 ч.

Тестирование

После стабильных базовых показателей в сеансах самостоятельного администрирования 1 h была начата процедура тестирования. Крысам, подобранным по массе тела, суточному потреблению пищи, эффективности кормления, а также воде и пище, реагирующим при самостоятельном введении, назначали либо «Чау«Контрольная группа, которая в ящиках с оперантами получала те же гранулы 45-mg, предлагаемые на этапе обучения, илиаппетитный”, Которая вместо этого получала питательную пищу с высоким содержанием сахарозы (50% ккал) на основе AIN-76A со вкусом шоколада, сопоставимую по составу питательных микроэлементов и плотности энергии с диетой с едой (шоколадная формула 5TUL: 66.7% [ккал ] углеводы, 12.7% жира, 20.6% белка, метаболизируемая энергия 344 кал / 100g; сформулированы в виде прецизионных пищевых гранул 45 mg; TestDiet, Richmond, IN). Эта шоколадная диета настоятельно рекомендуется для всех крыс (, ). Сеансы проводились ежедневно.

График прогрессивного подкрепления для еды

После стабилизации потребления во время разгула, крысы (n= 53) были обучены в прогрессивном соотношении для пищевых усилителей (гранулы 45-mg с высокой точностью для Чау группа и гранула 45-mg со вкусом шоколада и высокой сахарозой для аппетитный группа). График прогрессивного подкрепления для пищи был выполнен, как описано ранее (; ; ). Для получения дополнительной информации см. Дополнительные материалы и методы, В конце каждого сеанса предметы возвращались в их домашнюю клетку, где всегда был доступен Чоу А / Я. вволю; сеансы проводились ежедневно.

Внутричерепные операции и процедура микроинфузии

Внутричерепные операции

После стабилизации потребления во время оперантных сеансов крысам имплантировали внутричерепные канюли. Стереотаксические операции выполнялись, как описано ранее (; ; ). Для получения дополнительной информации см. Дополнительные материалы и методы. Координаты канюли, использованные для оболочки NAcc и mPFC, были: A / P +1.06 мм, M / L ± 0.75 мм, D / V −6.0 мм и A / P +3.2 мм, M / L ± 0.65 мм, D / V −3.5. мм соответственно. Межуральная полоска была установлена ​​на плоском черепе (дорсальный / вентральный: bregma = лямбда); координаты основывались на атласе Паксиноса и Ватсона (). Манекен из нержавеющей стали (Plastics One, Inc., Роаноук, Вирджиния, США) сохранил проходимость. После операции крысам давали возможность восстановиться после хирургической процедуры за 1 за неделю до начала экспериментальной процедуры.

Процедура микроинфузии

Для микроинфузии налтрексона фиктивный стилет был удален из направляющей канюли и заменен на инжектор из нержавеющей стали с выступом 1.0 мм для оболочки NAcc и 1.5 мм для mPFC за кончиком направляющей канюли; инжектор был подключен через трубку PE 20 к микрошприцу Hamilton, приводимому в действие микроинфузионным насосом (Kd Scientifics / Biological Instruments, Holliston, MA, США). Микроинфузии доставляли объем 0.5 мкл в течение 2 мин; Форсунки были оставлены на месте на дополнительную минуту, чтобы минимизировать обратный поток. Обработки проводились в полных латинских квадратах, при этом 1 – 3 проходили без тестовых дней, в течение которых потребление пищи возвращалось к исходным уровням. Крысам давали 3 дней акклиматизации к ежедневным ложным инъекциям до начала лечения лекарствами. Размещение канюли (Рис 4) был проверен по завершении всех испытаний с помощью микроинфузии индийских чернил (мкл 0.5 в течение минут 2). Срезы 40 мкм собирали с использованием криостата, и размещения проверяли под микроскопом. Из крыс 68, использованных для исследований микроинфузии, 3 были исключены по процедурным причинам, которые включали потерю или окклюзию канюли или неспособность поддерживать стабильную работу. В 14 остальных крыс 65 положение канюли было вне целевого участка.

Рисунок 4 

Рисование срезов головного мозга крыс. Точки представляют места инъекции в (A) Оболочка NAcc и (B) mPFC включен в анализ данных.

Количественная ПЦР в реальном времени

Одна когорта Чау и аппетитный крыс (n= 15) использовали для количественного определения мРНК пептидов POMC, PDyn и PEnk. Животных умерщвляли 24 ч после последнего ежедневного переедания. Удары медиальной префронтальной коры включают в себя как предлимбическую, так и инфралимбическую области. Пуансоны ядра accumbens включают в себя как оболочки, так и области ядра. Процедуры были выполнены, как описано ранее (). Подробнее см. Дополнительные материалы и методы.

Статистический анализ

Влияние налтрексона на потребление пищи, потребление воды и точку останова было проанализировано с использованием двухстороннего смешанного анализа ANOVA, с историей диеты в качестве фактора между субъектами и лечением в качестве фактора внутри субъекта, с последующим повторным измерением односторонних ANOVA. Влияние истории диеты на уровни мРНК анализировали с использованием непарного t-тестов. Переменные, которые не прошли тест на нормальность, были проанализированы как ранжированные (). Использовались статистические пакеты Instat 3.0 (GraphPad, Сан-Диего, Калифорния) и Systat 11.0 (SPSS, Чикаго, Иллинойс).

Итоги

Влияние системного введения опиоидного антагониста налтрексона на оперантное переедание

Системное введение налтрексона в зависимости от дозы снижало FR1, отвечая на пищу в обоих Чау и аппетитный групп (Рисунок 1A; Лечение: F(3,54) = 25.00, p<0.001; История диеты X Лечение: F(3,54) = 0.64, нс) Односторонние ANOVA подтвердили эффект медикаментозного лечения как в Чау (Лечение: F(3,27) = 7.62, p<0.0008) и аппетитный крысы (Лечение: F(3,27) = 16.78 p<0.0001). Апостериорный анализ показал, что, хотя доза 0.03 мг / кг была неэффективной, как дозы 0.1, так и 0.3 мг / кг значительно снижали самостоятельное введение пищи в двух группах по сравнению с состоянием носителя. Кроме того, обработка повлияла на потребление воды (Таблица 1; Лечение: F(3,54) = 8.46, p<0.0001; История диеты X Лечение: F(3,54) = 0.76, нс). Односторонние ANOVA подтвердили эффект медикаментозного лечения как в Чау (Лечение: F(3,27) = 4.97, p<0.007) и аппетитный (Лечение: F(3,27) = 3.76, p<0.022) крысы. Постфактум анализ показал значительное снижение потребления воды после введения доз 0.1 и 0.3 мг / кг в Чау крысы и доза 0.3 мг / кг в аппетитный крысы, если сравнивать с состоянием автомобиля.

Рисунок 1 

Влияние системного лечения налтрексоном (0, 0.03, 0.1, 0.3 мг / кг, подкожно) на (A) пищевое самоуправление (n= 20) и (B) Точка останова на графике усиления с прогрессивным соотношением (n= 19) у самцов крыс линии Вистар. Панели представляют M± SEM. ...
Таблица 1 

Влияние введения налтрексона на потребление воды

Влияние системного введения опиоидного антагониста налтрексона на прогрессивное соотношение приёма пищи для приема пищи

Налтрексон, вводимый системно, в зависимости от дозы снижал точку останова у обоих Чау и аппетитный крыс (Рисунок 1B; Лечение: F(3,51) = 41.31, p<0.0001; История диеты X Лечение: F(3,51) = 1.96, нс). После значительного основного эффекта лечения (Чау группа; Лечение: F(3,27) = 5.99, p<0.003; аппетитный группа; Лечение: F(3,24) = 6.87, p<0.002), апостериорный анализ показал, что доза 0.3 мг / кг значительно снизила точку разрыва в обеих группах.

Влияние микроинфузии налтрексона в оболочку NAcc на оперантное переедание

Микроинфузия налтрексона в NAcc в зависимости от дозы снижает ответ на пищу в обеих Чау и аппетитный группа (Рисунок 2A; Лечение: F(2,32) = 10.76, p<0.0001; История диеты X Лечение: F(2,32) = 4.36, p<0.02). Однофакторный дисперсионный анализ ANOVA выявил эффект лекарственного лечения в обоих Чау (Лечение: F(2,18) = 5.72, p<0.01) и аппетитный крысы (Лечение: F(2,18) = 5.344, p<0.02) соответственно. Кроме того, ретроспективный анализ выявил значительное снижение самостоятельного приема пищи после лечения самой высокой дозой (25 мкг) в обоих случаях. Чау и аппетитный групп. Медикаментозное лечение не влияло на потребление воды (Таблица 1; Лечение: F(2,32) = 2.48, нс; История диеты X Лечение: F(2,32) = 0.65, нс).

Рисунок 2 

Влияние микроинфузии с налтрексоном (0, 5, 25 мкг / сторона) в оболочке NAcc на (A) пищевое самоуправление (n= 18) и (B) Точка останова на графике усиления с прогрессивным соотношением (n= 17) у самцов крыс линии Вистар. Панель представляет M± SEM. Символы ...

Влияние микроинфузии налтрексона в оболочку NAcc на прогрессивное соотношение приёма пищи

Когда налтрексон был сайт-специфически микроинфузирован в NAcc, значительное общее снижение контрольной точки Чау и аппетитный группа наблюдалась (Рисунок 2B; Лечение: F(2,30) = 16.72, p<0.0001; История диеты X Лечение: F(2,30) = 5.22, p<0.01). Этот результат был подтвержден однофакторным дисперсионным анализом, выполненным индивидуально для каждой из двух групп (Чау группа; Лечение: F(2,16) = 6.11, p<0.01; аппетитный группа; Лечение: F(2,14) = 10.62, p<0.001). Апостериорный анализ выявил значительное снижение точки разрыва в обеих группах при микроинфузии доз 5 и 25 мкг. Снижение точки останова было сопоставимо по величине между Чау и аппетитный крысы (50.8% и 53.2%, по сравнению с условиями транспортного средства, соответственно).

Влияние микроинфузии налтрексона в mPFC на оперантное переедание

Сайт-специфически микроинфузированный налтрексоном в mPFC по-разному влиял на пищу, реагирующую на Чау и аппетитный крысы, как выявлено значительным взаимодействием (Рисунок 3A; Лечение: F(2,30) = 4.77, p<0.02; История диеты X Лечение: F(2,30) = 5.08, p<0.01). Действительно, хотя налтрексон не влиял на реакцию на еду у Чау крысы (Лечение: F(2,12) = 0.68, нс), это зависимое от дозы уменьшение запоя, как еда в аппетитный крысы (Лечение: F(2,18) = 9.25, p<0.002), причем апостериорный анализ показал значительное снижение после дозы 25 мкг по сравнению с состоянием носителя. Таким образом, налтрексон, введенный микроорганизмами в mPFC, избирательно влиял на переедание в аппетитный крысы, не влияющие на кормление контрольных крыс. Кроме того, налтрексон не влиял на потребление воды (Таблица 1; Лечение: F(2,30) = 1.89, нс; История диеты X Лечение: F(2,30) = 0.69, нс).

Рисунок 3 

Влияние микроинфузии с налтрексоном (0, 5, 25 мкг / сторона) в mPFC на (A) питание самоуправления (n= 17) и (B) точка останова на графике усиления с прогрессивным соотношением (n= 17) у самцов крыс линии Вистар. Панель представляет M± SEM. Символы обозначают: ...

Влияние микроинфузии налтрексона в mPFC на график постепенного подкрепления для пищи

Двухсторонний ANOVA выполняется на точке останова Чау и аппетитный у крыс после микроинфузии налтрексона в mPFC выявлен основной эффект медикаментозного лечения (Рисунок 3B; Лечение: F(2,30) = 9.057, p<0.001; Анамнез диеты X Лечение: F (2,30) = 1.84, нс). Однако, хотя односторонний анализ ANOVA выявил эффект медикаментозного лечения в Чау группа (Лечение: F(2,18) = 4.43, p<0.027), после апостериорного анализа ни доза 5 мкг, ни доза 25 мкг существенно не отличались от состояния носителя. Вероятно, значительный эффект лечения, указанный с помощью ANOVA, был обусловлен тенденцией к увеличению точки разрыва после дозы 5 мкг по сравнению с состоянием носителя. С другой стороны, в аппетитный В группе значительный основной эффект медикаментозного лечения можно было наблюдать (Лечение: F(2,12) = 5.31, p<0.02), и самая высокая доза, введенная микроинфекцией в mPFC, значительно снизила точку разрыва по сравнению с состоянием носителя.

Количественная ПЦР в реальном времени

Количественная ПЦР в реальном времени показала, что через 24 через час после последнего сеанса самостоятельного приема пищи значимых различий в экспрессии POMC, PDyn и PEnk между Чау и аппетитный крысы наблюдались в NAcc (Рисунки 5A, 5B и 5C). Однако уровни мРНК POMC были значительно выше в PFC аппетитный крысы, по сравнению с Чау крысы (увеличение 117.9%; Рисунок 5D). Кроме того, уровни экспрессии PDyn в PFC аппетитный крысы были значительно ниже по сравнению с Чау крысы (сокращение 49.3%; Рисунок 5E). Никакой разницы между двумя группами не наблюдалось в уровнях мРНК PEnk в PFC (Рисунок 5F).

Рисунок 5 

Экспрессия мРНК POMC, PDyn и PEnk в NAcc (A, B и C) и в mPFC (D, E и F) самцов крыс Вистар. Области мозга были собраны 24 ч после последнего ежедневного переедания. Данные представляют M± SEM выражается в процентах от Чау группа; ...

Обсуждение

В этом исследовании мы показываем, что опиоидный антагонист налтрексон, вводимый системно, неспецифично уменьшал потребление и мотивацию для получения пищи, а также уменьшал потребление воды у обеих крыс, самостоятельно принимающих обычную пищу, и у крыс, которые питались очень вкусная диета. Важно отметить, что хотя влияние на потребление пищи и вкусовых добавок сохранялось, когда налтрексон микроинфузировался в оболочку NAcc, опиоидный антагонист избирательно уменьшал потребление и мотивацию для получения очень вкусной пищи, но не регулярного приема пищи, когда микроинфузия вводилась в mPFC. Кроме того, подтверждая селективность поведенческих эффектов, наблюдаемых после микроинфузии налтрексона в mPFC, экспрессия мРНК POMC и PDyn была нерегулируемой в mPFC, но не в NAcc, у крыс, поедающих выпивку, по сравнению с контрольными крысами. Не наблюдалось никакого эффекта в экспрессии генов PEnk ни в одной области.

Системно вводимый налтрексон, следовательно, дозозависимо уменьшал потребление пищи как аппетитный и Чау крысы. Системное медикаментозное лечение также снизило мотивацию к работе, чтобы получить как чау-чау, так и вкусную диету в режиме прогрессивного соотношения подкрепления, подтвержденную поведенческую парадигму, используемую для оценки мотивационной силы для приобретения усилителей (; ). После подкожного введения налтрексона с наивысшей дозой величина максимальных эффектов при снижении ответа FR1 и точка разрыва схемы прогрессивного соотношения подкрепления была одинаковой в двух группах (FR1: 58.2% и 54.0%; прогрессивное соотношение: 40.5 % и 43.3% по сравнению с условиями автомобиля в Чау и аппетитный крысы соответственно). Следовательно, влияние системного налтрексона на потребление пищи, вероятно, включало подавление гомеостатического и гедонического поведения при кормлении (). Интересно отметить, что эффекты подкожного введения налтрексона не были селективными для пищи, поскольку медикаментозное лечение также уменьшало потребление воды как у контрольных, так и у переедающих крыс. В целом, эти первоначальные наблюдения предполагали общее подавляющее влияние на пищеварительное поведение после системного введения с опиоидным антагонистом ().

В этом исследовании мы хотели определить, опосредуют ли опиоидные рецепторы в оболочке NAcc константные и мотивационные аспекты переедания. Действительно, опиоидная система в этой области было предложено участвовать в модуляции полезных свойств пищи (). Здесь мы показываем, что налтрексон, микроинфузированный в оболочку NAcc, уменьшал не только переедание очень вкусной диеты, но и потребление обычной пищи. Аналогичный результат был получен, когда мы проверили влияние микроинфузии налтрексона в оболочку NAcc на контрольную точку графика прогрессивного соотношения подкрепления для пищи. Действительно, медикаментозное лечение без разбора снижало мотивацию получать пищу как у переедающих, так и у контрольных крыс. Эти данные свидетельствуют о том, что опиоидные рецепторы в оболочке NAcc проявляют общую модуляцию пищевого поведения и усиливают эффективность пищи, независимо от типа или стимула диеты. В подтверждение этой гипотезы Келли и его коллеги показали, что блокада μ-опиоидных рецепторов в NAcc снижает потребление как стандартной рациона, так и раствора сахарозы (). Вопреки тому, что мы наблюдали после системного введения налтрексона, микроинфузия препарата NAcc в оболочку не влияла на потребление воды, что позволяет предположить, что опиоидные рецепторы в этой области мозга специфически участвуют в модуляции пищевого поведения, а не в более общем смысле в пищеварительном поведении, или что более высокие дозы необходимы для подавления потребления воды.

Мы также исследовали, была ли важна опиоидная система в составе mPFC для опосредованного переедания очень вкусного питания. В нашем исследовании микроинфузия mPFC опиоидного антагониста избирательно и дозозависимо снижала как потребление, так и мотивацию для получения высококорпусной диеты у переедающих крыс, не влияя на прием обычной пищи у контрольных крыс. Медикаментозное лечение не влияло на потребление воды ни в одной из групп, что позволяет предположить, что эти эффекты являются избирательными для пищевого поведения. Фронто-кортикальные области головного мозга вовлечены в модуляцию пищевого поведения (). Недавний отчет также показал, что μ-опиоидные рецепторы в mPFC играют важную роль в стимулировании переедания ().

Важно обсудить альтернативную интерпретацию того, что эффекты налтрексона могут быть вызваны его быстрой диффузией по всему мозгу и периферии, в отличие от других четвертичных производных опиатных антагонистов (; ), которые имеют низкую скорость диффузии (). Вопреки этой интерпретации есть доказательства того, что в этом исследовании налтрексон микроинфузирован в две разные области мозга (NAcc и PFC) в Чау крысы оказывали дифференциальные эффекты. Более того, анализ динамики ответа на пищевые продукты показал, что налтрексон, введенный в mPFC, снижал реакцию пищи на аппетитный крысы только через 6 минут после микроинфузии (M± SEM: 84.3 ± 7.5 против 75.3 ± 6.6, veh против 25 мкг / сторона, соответственно, p<0.05). Из-за короткого периода времени альтернативная интерпретация, согласно которой наблюдаемый эффект может быть результатом либо всей ЦНС, либо периферической блокады опиоидных рецепторов, весьма маловероятна. Кроме того, в подтверждение достоверности данных, полученных в этом исследовании, в литературе широко сообщается об эффектах микроинфузии налтрексона в определенных областях мозга (). Тем не менее, гипотеза о том, что действие налтрексона также может зависеть от небольшой диффузии в областях мозга, смежных с оболочкой Nacc или PFC, не может быть исключена.

Альтернативная интерпретация отсутствия влияния на прием пищи после микроинфузии налтрексона в префронтальную кору головного мозга. Чау у крыс то, что наблюдаемый эффект может быть результатом сопутствующей блокады мю и каппа опиоидных рецепторов. Хотя было продемонстрировано, что две системы оказывают противоположное модулирующее действие в нескольких процессах, включая вознаграждение, было показано, что они модулируют гомеостатическое питание (например, потребление пищи в Чау животных этого исследования) аналогичным образом. Было показано, что активация как рецептора мю, так и каппа-опиоида увеличивает потребление пищи, тогда как было показано, что их блокада оказывает аноректическое действие (; ) Таким образом, наши результаты указывают на различную роль в модуляции пищевого поведения, оказываемого опиоидной системой в NAcc и mPFC; в то время как опиоидные рецепторы NAcc, по-видимому, участвуют в общей модуляции питания, независимо от типа потребляемой пищи (), опиоидная система mPFC, по-видимому, формируется только после истории ограниченного доступа к сладкой, вкусной диете, когда крысы теряют подавляющий контроль над едой. Эта гипотеза согласуется с более высокой когнитивной функцией и комплексным контролем оценки вознаграждения, осуществляемой mPFC.

Гипотеза о более обобщенной, не специфичной для пищевых продуктов роли опиоидных рецепторов NAcc в опосредовании пищевого поведения и селективного рекрутирования mPFC была подтверждена анализом экспрессии генов POMC, PDyn и PEnk. Никаких существенных различий в экспрессии трех генов не наблюдалось в NAcc при сравнении переедающих и контрольных крыс. Наоборот, у mPFC у крыс, поедающих пьянство, было выявлено более чем двукратное увеличение уровней мРНК POMC, что сопровождалось снижением уровня мРНК PDyn на ~ 50% по сравнению с контрольными крысами.

Было показано, что гены POMC и PDyn экспрессируются в обеих этих областях мозга (; ; ). (Тем не менее, данные свидетельствуют о том, что опиоидные пептиды, высвобождаемые в mPFC, также могут происходить из клеточных тел, выступающих из разных областей мозга (то есть вентральной сегментарной области)), что повышает вероятность того, что эффекты, наблюдаемые в этом исследовании после микроинфузии налтрексона в mPFC, могут быть не связаны с изменением экспрессии POMC и Pdyn в той же области мозга. POMC является предшественником эндорфинов, которые преимущественно связывают μ (но также и δ) опиоидные рецепторы (), тогда как PDyn является предшественником динорфинов, которые преимущественно связывают κ-опиоидные рецепторы (). Обширные данные свидетельствуют о противоположной роли μ- и κ-опиоидных рецепторов в модуляции различных процессов в головном мозге, включая анальгезию, толерантность, процессы памяти и вознаграждение (; ). В частности и в соответствии с этой гипотезой, было доказано, что μ-опиоидные рецепторы опосредуют полезные свойства пищи и некоторых лекарств от злоупотребления (); с другой стороны, было продемонстрировано, что κ-опиоидные рецепторы опосредуют их аверсивный и дисфорический эффекты и были предложены как часть «анти-поощрительной» системы (). Что еще более важно, в контексте этого исследования было продемонстрировано, что фармакологическая активация µ- или κ-опиоидных рецепторов в префронтальной коре оказывает противоположные полезные эффекты: микроинфузии селективного агониста µ-опиоидных рецепторов вызывают предпочтение места, тогда как микроинфузии агониста κ-опиоидного рецептора вызывает отвращение к месту ().

Важным моментом обсуждения является то, зависят ли изменения экспрессии мРНК, наблюдаемые в этом исследовании, от различий в суммарном потреблении калорий или массе тела между Чау и аппетитный крысы. Хотя потребление пищи и масса тела не были зарегистрированы в когорте животных, используемых для количественной ПЦР в реальном времени, ранее мы продемонстрировали, что используемая здесь процедура, подобная перееданию, не влияет на совокупное потребление пищи и массу тела. Действительно, крысы, питающиеся перееданием, демонстрируют чрезмерное потребление во время доступа 1h к очень вкусной диете, но компенсируют в течение оставшихся часов 23 дня, не соблюдая обычную пищу (). Таким образом, этот аберрантный характер потребления не приводит к различному кумулятивному потреблению калорий или массе тела между переедающими и контрольными крысами ().

Хотя были предложены сходства между моделью переедания / ограничения при расстройстве переедания и схемой злоупотребления наркотиками в условиях интоксикации / отмены (), может ли модель животного, использованная в этом исследовании, также быть полезной для изучения негативной симптоматики, связанной с отказом от очень вкусной пищи, неизвестно. Повышенная экспрессия POMC (система «за вознаграждение») и пониженная экспрессия Pdyn (система «за вознаграждение»), наблюдаемая здесь после отказа от 24h из приемлемой диеты, позволяют предположить, что животные, вероятно, не испытывают отрицательного эмоционального состояния. Однако для решения этого важного аспекта циклического рациона потребуются дополнительные исследования, оценивающие эмоциональность и потенциальное участие систем стресса (например, рилизинг-фактора кортикотропина). Следовательно, дифференциальные изменения в экспрессии генов POMC и Pdyn, наблюдаемые в mPFC, действительно могут быть интерпретированы как общее усиление полезных свойств вкусной пищи, что может быть следствием или стимулировать переедание у этих субъектов.

В целом, результаты этого исследования подтверждают гипотезу о том, что опиоидная система в префронто-кортикальных областях мозга участвует в контроле пищевого поведения и расширяет его до специфического контекста неадекватного чрезмерного потребления высоконадежной пищи, наблюдаемой у едоков разгула. (). Фронто-кортикальные области головного мозга играют важную роль в оценке вознаграждения и принятии решений (); Обширная литература демонстрирует, что у субъектов, страдающих зависимостью и перееданием, наблюдаются дисфункции в mPFC, которые связаны с измененной оценкой вознаграждения (). Поэтому наши поведенческие, фармакологические и молекулярные наблюдения подтверждают гипотезу о том, что опиоидная система является ключевым медиатором гедонического питания () и предполагают, что нейроадаптация опиоидной системы в mPFC может быть ответственна за гипер-оценку продуктов с высоким содержанием вкуса, что приводит к потере контроля над едой.

 

Дополнительный материал

Благодарности

Мы благодарим Стивена Сент-Сира, Адити Р. Нараян, Вамси Нееруконду, Ноа Келли, Джин Вон Пак, Ануп Равиллу и Сишира Йети за техническую помощь, а также Тамару Зерич за помощь в редактировании. Эта публикация стала возможной благодаря грантам под номерами DA023680, DA030425, MH091945, MH093650A1 и AA016731 ​​Национального института по борьбе со злоупотреблением наркотиками (NIDA), Национального института психического здоровья (NIMH) и Национального института злоупотребления алкоголем и алкоголизмом (NIAAA). профессора Питера Пола по развитию карьеры (PC) и Программы исследовательских возможностей для студентов Бостонского университета (UROP). Его содержание является исключительной ответственностью авторов и не обязательно отражает официальную точку зрения Национальных институтов здравоохранения.

Сноски

Авторский вклад

AB, PC и VS отвечали за концепцию и дизайн исследования. AB, PC и VS провели поведенческие и молекулярные эксперименты. AB и PC провели анализ данных. ПК, VS и LS помогли с интерпретацией результатов. AB и PC составили рукопись. ПК, VS и LS предоставили критический пересмотр рукописи для важного интеллектуального контента. Все авторы критически рассмотрели содержание и одобрили окончательную версию для публикации.

 

Рекомендации

  • Акритас М.Г. Метод рангового преобразования в некоторых двухфакторных схемах. Журнал Американской статистической ассоциации. 1990; 85 (409): 73-78.
  • Авена Н.М., Рада П, Хебель Б.Г. Доказательства сахарной зависимости: поведенческие и нейрохимические эффекты прерывистого, чрезмерного потребления сахара. Neurosci Biobehav Rev. 2008; 32 (1): 20 – 39. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Балс-Кубик Р., Аблейтнер А., Герц А., Шиппенберг Т.С. Нейроанатомические сайты, опосредующие мотивационные эффекты опиоидов в соответствии с парадигмой условного предпочтения места у крыс. J Pharmacol Exp Ther. 1993; 264 (1): 489-495. [PubMed]
  • Блазио А., Нараян А.Р., Камински Б.Дж., Стеардо Л., Сабино В., Коттон П. Модифицированная задача задержки настройки для оценки импульсивного выбора между изокалорическими усилителями у недееспособных крыс-самцов: эффекты 5-HT (2) A / C и 5 -HT (1) Агонисты рецептора. Психофармакология (Берл) 2012; 219 (2): 377 – 386. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Боднар Р.Дж., Гласс М.Д., Рагнат А, Купер М.Л. В общем, антагонисты мю и каппа-опиоидов в прилежащем ядре изменяют потребление пищи в условиях депривации, глюкопривиального и приятного вкуса. Brain Res. 1995; 700 (1-2): 205-212. [PubMed]
  • Боднар Р.Дж., Ламонте Н., Израиль Й., Кандов Ю., Аккерман Т.Ф., Хаимова Е. Взаимные опиоидно-опиоидные взаимодействия между вентральной тегментальной областью и областями прилежащего ядра при опосредованном муагонистом питании у крыс. Пептиды. 2005; 26 (4): 621-629. [PubMed]
  • Boeka AG, Lokken KL. Участие префронтальных систем в переедании. Съешьте вес 2011; 16 (2): e121-e126. [PubMed]
  • Карлезон В.А., мл., Девайн Д.П., Мудрый Р.А. Привычные действия номифензина в прилежащем ядре. Психофармакология (Берл) 1995; 122 (2): 194 – 197. [PubMed]
  • Кларк Л, Бечара А, Дамасио Н, Айткен М.Р., Саакян Б.Дж., Роббинс Т.В. Дифференциальное влияние поражений префронтальной коры островка и вентромедии на принятие рискованных решений. Мозг. 2008; 131 (Pt 5): 1311 – 1322. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Купер С.Дж., Джексон А., Киркхэм Т.К. Эндорфины и прием пищи: агонисты каппа-опиоидных рецепторов и гиперфагия. Pharmacol Biochem Behav. 1985; 23 (5): 889-901. [PubMed]
  • Корвин Р.Л. Крылатые крысы: модель перемежающегося чрезмерного поведения? Аппетит. 2006; 46 (1): 11-15. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Корвин Р.Л., Григсон П.С. Обзор симпозиума - Пищевая зависимость: факт или вымысел? J Nutr. 2009. 139 (3): 617–619. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Коттон П, Сабино В., Надь Т.Р., Косчина Д.В., Зоррилла Е.П. Микроструктура питания у диеты, вызванной ожирением, в сравнении с резистентными крысами: центральные эффекты урокортина 2. J Physiol. 2007; 583 (Pt 2): 487 – 504. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Коттон П, Сабино V, Роберто М, Баджо М, Покрос Л, Фрихауф Ж.Б., Фекете Э.М., Стеардо Л, Райс К.С., Григориадис Д.Е., Конти Б, Коуб Г.Ф., Зоррилла ЭП. Система набора CRF опосредует темную сторону компульсивного приема пищи. Proc Natl Acad Sci US A. 2009; 106 (47): 20016 – 20020. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Коттон П, Сабино V, Стеардо Л, Zorrilla EP. Прерывистый доступ к предпочтительной пище снижает усиливающую эффективность пищи у крыс. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2008a; 295 (4): R1066-R1076. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Коттон П, Сабино V, Стеардо Л, Zorrilla EP. Опиоидно-зависимая упреждающая отрицательная контрастность и переедание у крыс с ограниченным доступом к крайне предпочтительной пище. Neuropsychopharmacology. 2008b; 33 (3): 524-535. [PubMed]
  • Коттон П, Ван Х, Парк Дж. В., Валенца М., Блазио А., Квак Дж., Айер М. Р., Стеардо Л., Райс К. С., Хаяси Т., Сабино В. Антагонизм рецепторов сигма-1 блокирует компульсивное питание. Neuropsychopharmacology. 2012 [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • День R, Лазурь C, Basak A, Boudreault A, Limperis P, Dong W, Lindberg I. Обработка продинорфина пропротеин-конвертазой 2. Расщепление на единичных основных остатках и усиленная обработка в присутствии карбоксипептидазной активности. J Biol Chem. 1998; 273 (2): 829-836. [PubMed]
  • Эпштейн Д.Х., Шахам Й. Чизкейк-крысы и вопрос о пищевой зависимости. Nat Neurosci. 2010; 13 (5): 529-531. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Френк Н, Роджерс Г.Х. Подавляющее действие налоксона на потребление пищи и воды у крыс. Behav Neural Biol. 1979; 26 (1): 23-40. [PubMed]
  • Гарзон М, Пиккель В.М. Ультраструктурная локализация иммунореактивности Leu5-энкефалина в мезокортикальных нейронах и их входных терминалах в вентральной сегментарной области крысы. Synapse. 2004; 52 (1): 38-52. [PubMed]
  • Госнелл Б.А., Левин А.С., Морли Дж. Стимуляция приема пищи селективными агонистами мю, каппа и дельта опиоидных рецепторов. Life Sci. 1986; 38 (12): 1081-1088. [PubMed]
  • Каган М.М., Мосс Д.Е. Сохранение привычек переедания после исторического ограничения с периодическими приступами повторного кормления на вкусную пищу у крыс: последствия для нервной булимии. Int J Eat Disord. 1997; 22 (4): 411-420. [PubMed]
  • Хольцман С.Г. Поведенческие эффекты раздельного и комбинированного введения налоксона и d-амфетамина. J Pharmacol Exp Ther. 1974; 189 (1): 51-60. [PubMed]
  • Iemolo A, Valenza M, Tozier L, Knapp CM, Kornetsky C, Steardo L, Sabino V, Cottone P. Отказ от хронического, прерывистого доступа к очень вкусной пище вызывает депрессивное поведение у крыс с компульсивным питанием. Behav Pharmacol. 2012; 23 (5-6): 593-602. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Хаварас К.Н., Папа Х.Г., Лалонд Дж.К., Робертс Дж.Л., Ниллни Й.И., Лэрд Н.М., Булик С.М., Кроу С.Дж., Макэлрой С.Л., Уолш Б.Т., Цуанг М.Т., Розенталь Н.Р., Хадсон Дж.И. Сочетание расстройства пищевого поведения с психическими и медицинскими расстройствами. J Clin Психиатрия. 2008; 69 (2): 266-273. [PubMed]
  • Келли А.Е., Благословение EP, Свонсон CJ. Изучение влияния опиатных антагонистов, введенных в прилежащее ядро, на кормление и употребление сахарозы у крыс. J Pharmacol Exp Ther. 1996; 278 (3): 1499-1507. [PubMed]
  • Кооб Г.Ф., Ле Моал М. Наркомания, нарушение регуляции вознаграждения и аллостаз. Neuropsychopharmacology. 2001; 24 (2): 97-129. [PubMed]
  • Laessle RG, Tuschl RJ, Kotthaus BC, Pirke KM. Поведенческие и биологические корреляты диетического ограничения в обычной жизни. Аппетит. 1989; 12 (2): 83-94. [PubMed]
  • Le Merrer J, Becker JA, Befort K, Kieffer BL. Обработка вознаграждения опиоидной системой в мозге. Physiol Rev. 2009; 89 (4): 1379 – 1412. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Leriche M, Cote-Velez A, Mendez M. Присутствие мРНК pro-opiomelanocortin в медиальной префронтальной коре головного мозга, прилежащем ядре и вентральной области сегмента: исследования методом RT-PCR и гибридизации in situ. Neuropeptides. 2007; 41 (6): 421-431. [PubMed]
  • Макдональд А.Ф., Биллингтон С.Дж., Левин А.С. Влияние опиоидного антагониста налтрексона на кормление, индуцированное DAMGO, в вентральной области тегмента и в области оболочки прилежащего ядра у крысы. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003; 285 (5): R999-R1004. [PubMed]
  • Мансур A, Fox CA, Akil H, Watson SJ. Экспрессия мРНК опиоидных рецепторов в ЦНС крысы: анатомические и функциональные последствия. Тенденции Neurosci. 1995; 18 (1): 22-29. [PubMed]
  • Мена Д.Д., Садегян К., Балдо Б.А. Индукция гиперфагии и потребления углеводов путем стимуляции мю-опиоидных рецепторов в ограниченных областях лобной коры. J Neurosci. 2011; 31 (9): 3249-3260. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Моран Т.Х., Вестертерп-Плантенга М. Потенциальная роль и дефицит лобных областей коры головного мозга, участвующих в исполнительном контроле за приемом пищи. Int J Obes (Lond) 2012; 36 (5): 625 – 626. [PubMed]
  • Натан PJ, Bullmore ET. От вкуса гедоники до мотивационного драйва: центральные мю-опиоидные рецепторы и переедание. Int J Neuropsychopharmacol. 2009; 12 (7): 995-1008. [PubMed]
  • Пан ZZ. Му-противоположные действия каппа-опиоидного рецептора. Trends Pharmacol Sci. 1998; 19 (3): 94-98. [PubMed]
  • Паксинос Г., Уотсон С. Мозг крысы в ​​стереотаксических координатах. Второе изд. Орландо: Академическая пресса; 1986.
  • Поливий Дж., Герман С.П. Диета и переедание. Причинный анализ. Am Psychol. 1985; 40 (2): 193-201. [PubMed]
  • Сабино V, Коттоне Р, Блазио А, Айер М.Р., Стеардо Л, Райс КЦ, Конти Б, Кооб Г.Ф., Зоррилла ЕР. Активация сигма-рецепторов вызывает пьянство у сардинских крыс, предпочитающих алкоголь. Neuropsychopharmacology. 2011; 36 (6): 1207-1218. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Сабино V, Коттон П, Стеардо Л, Шмидхаммер Н, Зоррилла ЕР. 14-метоксиметопон, высокоэффективный му-опиоидный агонист, оказывает двухфазное влияние на потребление этанола у сардинских крыс, предпочитающих алкоголь. Психофармакология (Берл) 2007; 192 (4): 537 – 546. [PubMed]
  • Сабино V, Коттоне П, Чжао Y, Айер М.Р., Стеардо Л, Младший, Стеардо Л, Райс КЦ, Конти В, Кооб Г.Ф., Зоррилла ЕР. Антагонист сигма-рецепторов BD-1063 снижает потребление этанола и его усиление на животных моделях чрезмерного употребления алкоголя. Neuropsychopharmacology. 2009; 34 (6): 1482-1493. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Sanger DJ, Маккарти PS. Различное влияние морфина на потребление пищи и воды у крыс, лишенных пищи и свободно питающихся. Психофармакология (Берл) 1980; 72 (1): 103 – 106. [PubMed]
  • Шредер Р.Л., Вейнгер М.Б., Вакасян Л., Кооб Г.Ф. Метилналоксоний диффундирует из мозга крысы медленнее, чем налоксон, после прямой интрацеребральной инъекции. Neurosci Lett. 1991; 121 (1-2): 173-177. [PubMed]
  • Штейн Р.И., Кенарди Дж., Уайзман CV, Дунчис Дж. З., Арнов Б.А., Уилфли Д.Е. Что движет перееданием при компульсивном переедании ?: проспективное исследование предшественников и последствий. Int J Eat Disord. 2007. 40 (3): 195–203. [PubMed]
  • Таки М.М., Базов И., Ватанабэ Х., Нюберг Ф., Яковлева Т., Бакалкин Г. Промотор SNP, связанный с алкогольной зависимостью, образует неканонический сайт связывания AP-1, который может влиять на экспрессию генов в мозге человека. Brain Res. 2011; 1385: 18-25. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Блокада прилежащих ядерных опиатных рецепторов ослабляет внутривенное введение героина у крысы. Психофармакология (Берл) 1985; 86 (1 – 2): 37 – 42. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Pettit HO, Bloom FE, Koob GF. Влияние интрацеребровентрикулярного введения метилналоксония хлорида на самостоятельное введение героина у крыс. Pharmacol Biochem Behav. 1985; 23 (3): 495-498. [PubMed]
  • Уилфли Д., Берковиц Р., Гебель-Фаббри А., Херст К., Иверс-Лэндис С., Липман Т. Х., Маркус М., Н. Г. Д., Фам Т., Салецкий Р., Шаньюэль Д., Ван Бурен Д. Бинг, еда, настроение и качество жизни у молодежи с диабетом типа 2: исходные данные сегодняшнего исследования. Уход за диабетом. 2011; 34 (4): 858-860. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Williams KL, Broadbridge CL. Способность налтрексона снижать самостоятельное введение этанола у крыс выше при подкожной и внутрибрюшинной инъекциях. Алкоголь. 2009; 43 (2): 119-126. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
  • Вулли Д.Д., Ли Б.С., Ким Б., Филдс Х.Л. Противоположные эффекты внутриядерных accumbens mu и каппа опиоидных агонистов на сенсорную специфическую сытость. Neuroscience. 2007; 146 (4): 1445-1452. [PubMed]
  • Чжан М, Келли А.Е. Усиленное потребление высокожирной пищи после стригальной муопиоидной стимуляции: микроинъекционное картирование и экспрессия фоса. Neuroscience. 2000; 99 (2): 267-277. [PubMed]
  • Ziolkowska B, Stefanski R, Mierzejewski P, Zapart G, Kostowski W, Przewlocki R. Случайность не способствует влиянию самостоятельного введения кокаина на экспрессию генов продинорфина и проенкефалина в переднем мозге крысы. Brain Res. 2006; 1069 (1): 1-9. [PubMed]