CRF receptory v nucleus accumbens modulují preference partnerů v prairie voles (2007)

Horm Behav. Autorský rukopis; k dispozici v PMC Dec 10, 2007.

Publikováno v posledním editovaném formuláři:

PMCID: PMC2128037

NIHMSID: NIHMS22254

Konečná upravená verze tohoto článku vydavatele je k dispozici na adrese Horm Behav

Viz další články v PMC to citovat publikovaný článek.

Přejít na:

Abstraktní

Nedávné důkazy naznačují roli faktoru uvolňujícího kortikotropin (CRF) v regulaci párového párování v prérijních volách. Již dříve jsme prokázali, že monogamní a nemonogamní druhy hraboše mají výrazně odlišné distribuce receptoru CRF typu 1 (CRF).1) a CRF receptor typu 2 (CRF2) v mozku, a to CRF1 a CRF2 Hustoty receptorů v nucleus accumbens (NAcc) jsou v korelaci se sociální organizací. Monogamní prérie a hraboše mají výrazně nižší hladiny receptoru CRF typu 1 (CRF1) a výrazně vyšší hladiny typu 2 (CRF2) vázání na NAcc než na nemonogamní louky a volejové hraboše. Zde uvádíme, že mikroinjekce CRF přímo do NAcc urychlují tvorbu preferencí partnera u mužských prérijních hrabošů. Kontrolní injekce CSF do NAcc a CRF do kaudate-putamenu nepomohly preferenci partnera. Stejně tak injekce CRF do NAcc nemonogamních lučních hrabošů také nepomohly preferenci partnerů. U prérijních hrabošů byl tento účinek usnadňující CRF blokován společnou injekcí jednoho z CRF1 nebo CRF2 antagonisty receptoru na NAcc. Imunocytochemické barvení pro CRF a Urocortin-1 (Ucn-1), dva endogenní ligandy pro CRF1 nebo CRF2 Receptory v mozku odhalily, že v NAcc byly přítomny imunoreaktivní vlákna CRF, ale ne Ucn-1. To podporuje hypotézu, že lokální uvolňování CRF do NAcc by mohlo aktivovat CRF1 nebo CRF2 receptory v regionu. Celkově naše výsledky ukazují novou roli pro akutní systémy CRF v sociálním chování.

Klíčová slova: nucleus accumbens, připojení, CRF1, CRF2, faktor uvolňující kortikotropin, hormon uvolňující kortikotropin, hraboš, receptory neuropeptidů, párová vazba, sociální chování, monogamie, druhové rozdíly

Systém faktoru uvolňujícího kortikotropin (CRF) je zapojen do neurobiologie, která je základem stresu a úzkosti, ale mnohem méně je známo jeho role v sociálním chování. Mikrotinoví hlodavci vykazují rozmanité sociální organizace a nabízejí tak vynikající srovnávací přístup při studiu neurobiologie sociálního chování (Young a Wang, 2004). Prairie (Microtus ochrogaster) a hraběnky borovice (Microtus pinetorum) jsou monogamní; dospělí kamarádi tvoří dlouhodobé selektivní párové vazby v terénu a v laboratoři (Getz, Carter a Gavish, 1981; Salo, Shapiro a Dewsbury, 1993). Naproti tomu úzce související louka (Microtus pennsylvanicus) a montane voles (Microtus montanus) jsou promiskuitní a osamělé (Gruder-Adams a Getz, 1985; Shapiro a Dewsbury, 1990). Minulý výzkum ukázal, že distribuce neuropeptidových receptorů pro oxytocin a vasopressin v mozku se zdá být odpovědná za druhové rozdíly v sociální organizaci (Insel a Shapiro, 1992; Insel, Wang a Ferris, 1994; Lim, Wang, Olazabal, Ren, Terwilliger a Young, 2004b). Novější důkazy však naznačují, že se zdá, že další neuropeptidový systém, CRF, moduluje párové párování v prérijních volách (DeVries, Guptaa, Cardillo, Cho a Carter, 2002).

Existuje relativně málo studií zkoumajících roli stresových hormonů v sociálním chování. Jedna studie zjistila, že podávání exogenního kortikosteronu mužským prériím volejům usnadnilo vytvoření párové vazby s novou samicí (DeVries, DeVries, Taymans a Carter, 1996). Následující studie zjistila, že CRF podávaný intracerebroventrikulárně (icv) usnadnil preferenci partnera u mužských prérijních hrabošů, a to i při extrémně nízkých dávkách, u nichž se nezdálo, že by ovlivňovaly lokomotorickou aktivitu nebo chování podobné úzkosti (DeVries a kol., 2002). Dále byla preference partnerů blokována podáním icv alfa-helikálního CRF, který neselektivně blokuje receptory CRF v mozku (DeVries a kol., 2002). Tato data naznačují, že CRF může hrát roli při tvorbě párových vazeb prostřednictvím mechanismů nezávislých na úzkosti prostřednictvím zapojení centrálně působících mozkových receptorů. Nicméně CRF s infuzí icv by mohl potenciálně působit na libovolný počet oblastí mozku, aby se usnadnila preference partnera, a v současné době není známo, které oblasti mozku jsou konkrétně zapojeny.

Protože se systém CRF podílí na regulaci tvorby párových vazeb, předpovídali jsme, že nervové obvody pro tento systém se budou lišit mezi monogamními a nehonogamními druhy. Již dříve jsme prokázali, že ačkoli se distribuce mRNA a peptidu CRF jeví mezi konzervovanými druhy velmi konzervativní, distribuce typů receptorů CRF 1 a 2 (CRF)1 a CRF2) se dramaticky liší v celém mozku u čtyř druhů hrabošů projevujících různé sociální organizace (Lim, Nair a Young, 2005; Lim, Tsivkovskaia, Bai, Young a Ryabinin, 2006). Zdá se, že vazba receptoru koreluje s monogamní sociální strukturou v několika oblastech mozku; nicméně, pouze jádro accumbens (NAcc) důsledně segregovalo jak s monogamním druhem hraboša, tak s oběma druhem monogamního hraboša. Monogamní prérie a hraboše mají výrazně nižší hladiny receptoru CRF typu 1 (CRF 1) a výrazně vyšší hladiny typu 2 (CRF2) vázání, na NAcc než na nemonogamní louky a montane vole (Lim a kol., 2005).

Na základě našich neuroanatomických studií prokazujících druhové rozdíly v CRF1 a CRF2 hustoty v NAcc, předpokládali jsme, že zejména akce CRF v rámci NAcc byla kritická pro monogamní sociální chování v prérijních volách. Nejprve jsme určili, zda CRF injikovaný přímo do NAcc může usnadnit vytváření preferencí partnera po zkrácené době soužití s ​​partnerem. Dále jsme provedli identický experiment u nmonogamních lučních hrabošů. Poté jsme manipulovali s CRF1 a CRF2 v NAcc pomocí farmakologických antagonistů ke stanovení jejich relativních příspěvků k tvorbě preferencí partnerů zprostředkovaných CRF. Nakonec ukazujeme důkazy pro imunoreaktivní barvení dvou endogenních ligandů pro CRF1 a CRF2 receptory v mozku, CRF- a Urocortin-1 (Ucn-1), v NAcc u prérijních hrabošů. Výsledky těchto studií poprvé prokazují, že CRF, který působí v NAcc, může podporovat sociální vazbu, a navíc, že ​​oba CRF1 a CRF2 receptory jsou zapojeny do tohoto procesu.

METODY

Předměty

Zvířata byla dospělá, sexuálně naivní, samčí a samičí prérie (70 – 100 dní věku) z laboratorní šlechtitelské kolonie na Floridské státní univerzitě, která byla původně odvozena z hrabošů v USA v Illinois. Dospělé sexuálně naivní louky byly z laboratorní chovatelské kolonie na Emory University. Po odstavení ve věku 21 byly subjekty umístěny v sourozeneckých párech nebo triích stejného pohlaví a voda a králičí krmivo Purina poskytovalo ad libitum. Všechny klece byly udržovány v cyklu 14: 10 světlo: tma s teplotou při 20 ° C. Do farmakologických experimentů CRF byla zahrnuta data z mužských prérijních hrabošů 87, spolu se stejným počtem stimulačních ženských proužků pro test párového vázání. Rovněž byla použita data z samic lučních samců 10, stejně jako stejný počet stimulačních samic lučních volů. Ve studiích imunocytochemie CRF bylo použito osm prérijních hrabošů (n = 4 pro každé pohlaví).

Usnadnění CRF preferencí partnera

Dospělé mužské prérie vole (n = 31) byly bilaterálně kanylovány do NAcc pomocí stereotaxických metod, jak bylo popsáno výše (Aragona, Liu, Curtis, Stephan a Wang, 2003a; Liu a Wang, 2003). Subjekty byly anestetizovány pentobarbitálem sodným (2.5 mg na 40 gm tělesné hmotnosti) a bilaterální vodící kanyly 26 (Plastics One, Roanoke, VA) zaměřené na NAcc byly implantovány stereotaxicky (přední 1.7 mm, bilaterální ± 1 mm, Ventrální -4.0) mm až bregma). Kontrolní injekce (n = 6) byly zaměřeny na kaudate-putamen (přední 1.7 mm, bilaterální ± 1 mm, ventrální -2.5 mm na bregma). Po zotavení po 3-5 dnech dostali subjekty mikroinjekce (200 nl na stranu) umělého CSF ​​nebo léčiva rozpuštěného v CSF. Injekce byly provedeny s měřicí jehlou 33, která prodloužila 1 mm pod vodicí kanylou do cílové oblasti. Jehla byla připojena k injekční stříkačce Hamilton (Hamilton, Reno, NV) hadičkou z polyethylenu-20u, jejímž prostřednictvím byl roztok pomalu infundován pumpou (standardní pohon MasterFlex L / S, model 7016-21) rychlostí 200 nl / min, na stranu. Lidský / potkaní CRF byl získán od Sigma (St. Louis, MO).

Zvířata byla rozdělena do jedné ze čtyř skupin: kontrola CSF (n = 7), 0.01 pg CRF na NAcc (n = 9), 0.1 pg CRF na NAcc (n = 15) a 0.1 pg CRF na caudate-putamen (n = 6). Kaudate-putamen (CP) je oblast mozku právě hřbetní k NAcc a také obsahuje CRF2 Receptory, které slouží jako anatomická kontrolní oblast pro účinky CRF. Každé zvíře obdrželo bilaterální injekce objemu 200 nl před zkrácenou 6 hodinovou soužití s ​​novou samicí. Koncentrace 0.01 pg CRF v 200 nL je 10 nM, zatímco koncentrace 0.1 pg CRF v 200 nL je 100 nM. Vypočítaná Ki pro CRF1 je 11 nM, zatímco vypočtená Ki pro CRF2 je 25 nM vzhledem k 125I-sauvagin (Primus, Yevich, Baltazar a Gallager, 1997). Soužití v 6 hodinách bez páření důsledně nevyvolává preferenci partnera, jak bylo prokázáno v předchozích studiích (Aragona a kol., 2003a; Aragona, Liu, Yu, Curtis, Detwiler, Insel a Wang, 2006). Bezprostředně po soužití byly subjekty testovány na preferenci partnera.

Testování preferenčních partnerů spočívalo v umístění samce do aparátu s komorou 3, ve kterém byla partnerka uvázána v jedné kleci, a nová samice („cizinec“) stejného věku a sociosexuální zkušenosti byla uvázána ve druhé kleci, jako tomu bylo dříve. popsané (Carter, DeVries a Getz, 1995). Každá stimulační žena byla použita ve dvou samostatných testech preferenčních partnerů, jednou jako partnerka a znovu jako cizí osoba jiného subjektu, a proto každá žena měla během společenského života 20 hodin ekvivalentní sociální a sexuální expozici. Subjekty se mohly volně pohybovat po aparatuře a čas strávený v kontaktu s partnerem a cizincem byl kvantifikován v průběhu 3 hodinového testu.

Lokomotorická aktivita byla měřena během testu preferencí partnera, aby se určilo, zda zvolené dávky léčby CRF ovlivnily obecnou lokomotorickou aktivitu nebo chování podobné úzkosti, jak bylo popsáno výše (Hotta, Shibasaki, Arai a Demura, 1999). Počet křížení klecí přes oba tunely partnerského preferenčního přístroje byl hodnocen pomocí infračervených detektorů. Přes tři klece partnerského preferenčního přístroje jsou čtyři infračervené paprsky, přičemž každý tunel spojuje dva klece se dvěma paprsky. Celkový počet přerušení fotopapíru byl sčítán pro každé zvíře během tříhodinové periody. Po testování chování byly subjekty usmrceny a místa injekce byla ověřena histologicky.

Dospělé samice loukových samců (n = 10) byly také testovány na CRF - usnadnění partnerských preferencí. Zvířata byla kanylována bilaterálně do NAcc, jak je popsáno výše, a náhodně přiřazena do jedné ze dvou skupin: kontrola CSF (n = 4) nebo CRF 0.1 pg (n = 6). Testy soužití a preference partnerů byly provedeny přesně tak, jak je popsáno výše pro prérie vole. Dospělý samec louky z naší kolonie obvykle netvoří partnerské preference, pokud je v koexistenci se samicí (Lim a kol., 2004b).

CRF1- a CRF2- selektivní farmakologie a preference partnera

Volly prérie dospělé prérie byly kanylovány bilaterálně do NAcc, jak je popsáno výše, a rozděleny do jedné ze tří skupin: 0.1 pg CRF (n = 10), 0.1 pg CRF plus 10 pg CRF1 antagonista (CP-154,526) (n = 25) a 0.1 pg CRF plus 10 pg CRF2 antagonista (anti-sauvagin-30) (n = 15). Anti-sauvagin-30 byl získán od Sigma (St. Louis, MO) a CP-154,526 od Michael Owens, Ph.D. (Emory University, Atlanta, GA). Koncentrace 10 pg CRF1 antagonista (CP-154,526) v roztoku 200 nL je 100 nM, zatímco koncentrace 10 pg CRF2 antagonista (anti-sauvagin-30) v roztoku 200 nL je 10 nM. Každé zvíře dostalo bilaterální injekce objemu 200 nl přímo do NAcc před zkrácenou 6 hodinovou soužití s ​​novou samicí. Ihned po soužití byly subjekty testovány na preferenci partnera, jak je popsáno výše. Po testování chování byly subjekty usmrceny a místa injekce byla ověřena histologicky. Zvířata, jejichž místa kanylace byla umístěna mimo NAcc, byla vyloučena z analýzy dat a neodrážela se v celkovém počtu použitých zvířat.

Analýza dat

Data z partnerského preferenčního testu pro každý experiment byla analyzována pomocí 2 způsobem ANOVA, ve kterém stimuly (partner nebo cizinec) a léčba byly faktory. Navíc byly použity Studentovy t-testy pro srovnání času v kontaktu s partnerem a cizincem v každé léčené skupině. Pro každý experiment byly provedeny Bonferroni korekce na hladinu významnosti, aby se minimalizovalo riziko rizika chyby typu I v důsledku vícenásobného srovnání. Muži byli zařazeni do kategorie partnerských preferencí, pokud strávili s partnerem více než dvakrát tolik času než cizinec.

Data shromážděná pro lokomotorickou aktivitu byla sčítána jako počet zlomů infračerveného paprsku pro každé zvíře a průměrována v rámci každé léčené skupiny. Výsledky byly analyzovány pomocí jednosměrné ANOVA s léčbou jako nezávislým faktorem.

Imunohistochemie CRF a Urocortin-1

Mezi hodinami 10: 00 a 14: 00 isofluranem byly perfundovány dospělé prérijní hraboše a perfundovány fyziologickým roztokem a následně 2% paraformaldehydem v 10 mM (pH 7.4) fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (PBS). Rozštěpené mozky byly přes noc fixovány v roztoku 2% paraformaldehyd / PBS a kryoprotektovány v 30% sacharóza / PBS. Třicetimetrové volně plovoucí koronální řezy byly nařezány na kryostatu a zpracovány pro imunohistochemii podle standardních protokolů (Ryabinin, Criado, Henriksen, Bloom a Wilson, 1997; Weitemier, Tsivkovskaia a Ryabinin, 2005) s úpravami tkáně hraboše provedené v předchozích experimentech (Lim a kol., 2006). Stručně, endogenní aktivita peroxidázy byla ukončena inkubací s 15 minutou s 0.3% peroxidem vodíku. U protilátky specifické pro Urocortin-1 bylo blokování provedeno pěthodinovou inkubací s 2% hovězím sérovým albuminem, 0.1% heparinem, 0.01% Triton X-100 v PBS. U protilátky specifické pro CRF bylo blokování provedeno pěthodinovou inkubací s kozím sérem 4.5%, 0.3% Triton X-100 v PBS. Primární králičí protilátky rozpoznávající Urocortin-1 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) byly použity v ředění 1: 5,000. Primární protilátky rozpoznávající CRF (Peninsula Laboratories, San Carlos, CA) byly použity v ředění 1: 15,000. K detekci primárních protilátek byly použity biotynylované anti-králičí sekundární protilátky (Vector Laboratory Inc., Burlingame, CA). Detekce sekundárních protilátek byla provedena pomocí soupravy Vectastain ABC (Vector) a enzymatický vývoj byl proveden pomocí soupravy Metal Enhanced DAB (Pierce, Rockford, IL, USA). Specifičnost imunostainování byla hodnocena úplným nedostatkem imunoreaktivity v oblastech, o nichž není známo, že exprimují CRF nebo Urocortin-1. Kromě toho byly předtím provedeny kontrolní experimenty s předabsorpcí těchto protilátek (Bachtell, Weitemier, Galvan-Rosas, Tsivkovskaia, Risinger, Phillips, Grahame a Ryabinin, 2003).

Kvalitativní analýza obrazu byla provedena pomocí systému sestávajícího z mikroskopu Olympus BX40 a digitálního videokamery s vysokým rozlišením (Olympus Qcolor3) propojeného s osobním počítačem Macintosh se systémem OS-X. Obrázky z jedné sekce nejlépe odpovídající zvířatům pro každou oblast mozku byly digitálně shromážděny při stejné intenzitě osvětlení. Protože v buněčných tělech v NAcc nebylo pozorováno žádné imunopozitivní barvení, nebyl počet imunoreaktivních neuronů kvantitativně spočítán.

VÝSLEDKY

Farmakologická manipulace s CRF receptory v NAcc

Již dříve bylo prokázáno, že infuze CRF icv usnadňuje preferenci partnera v prériích vole (DeVries a kol., 2002). Na základě našich neuroanatomických údajů prokazujících druhové rozdíly v CRF1 a CRF2 v NAcc jsme předpokládali, že NAcc je místem působení pro usnadnění partnerských preferencí CRF. Dřívější studie ukázala, že podávání CRF závislé na dávce by mohlo usnadnit partnerské preference u mužských prérijních hrabošů po zkrácené soužití se samicí (DeVries a kol., 2002). Na základě této studie jsme navrhli dávky CRF pro místně specifické injekce do NAcc. Dávky, které jsme použili, 0.1 pg a 0.01 pg CRF rozpuštěné v 200 nL izotonickém roztoku (nebo 100 nM a 10 nM, v tomto pořadí), byly výrazně pod minimální účinnou dávkou icv 0.1 ng a 1 ng CRF rozpuštěnou v 1 μL (nebo 210 nM a 2.1 μM, v daném pořadí) (DeVries a kol., 2002). Přestože bylo prokázáno, že CRF se váže přednostně na CRF1, také se váže na CRF2 se značnou afinitou (Ki rovna 11 a 25, v tomto pořadí (Primus a kol., 1997).

Analýza celkového souboru dat pomocí 2cestné ANOVA odhalila významný hlavní účinek stimulačního zvířete (F (1,66) = 6.77, p <0.05), ale nebyly zjištěny žádné další hlavní účinky nebo interakce. K určení, které skupiny přednostně strávily čas v kontaktu s partnery před cizími lidmi, byly provedeny Studentovy t-testy s Bonferroniho korekcemi p-hodnoty. Kontrolní prérijní hraboši s oboustrannými injekcemi umělého CSF ​​do septálního pólu NAcc nebo 0.1 pg CRF do kaudate-putamen netrávili významně více času v kontaktu s partnerem než cizí stimulační zvíře (p> 0.3, Studentův t-test , Úroveň Bonferroni nastavena na p <0.01) (Obrázek 1A). Prérijní hraboši injikovaní nižší dávkou CRF, 0.01 pg, směřovali k trávení více času v kontaktu s partnerem než s cizincem (p> 0.08, Studentův t-test, úroveň Bonferroni nastavena na p <0.01). Naproti tomu prérijní hraboši, kteří dostávali bilaterální injekce 10krát vyšší dávky CRF, 0.1 pg do septálního pólu NAcc, strávili v kontaktu s partnerem podstatně více času než cizinec (p <0.01, Studentův t-test, nastavená úroveň Bonferroni při p <0.01) (Obrázek 1A). Kromě toho, zatímco pouze 6 kontrolních zvířat 13 vykazovala preferenci partnera, definovanou jako utrácení dvakrát tolik času v kontaktu s partnerem ve srovnání s cizincem, 12 zvířat 15 přijímajících 0.1 pg CRF vykazovala preferenci partnera (Obrázek 1B). Zvířata 3, která nevykazovala partnerské preference, měla silné cizí preference, což pravděpodobně přispělo k chybějícímu hlavnímu účinku léčby nebo interakčnímu účinku v ANOVA 2. Zatímco infuze CRF do NAcc významně zvýšily dobu kontaktu s partnerem ve srovnání s cizincem, nevedlo to k celkovému prodloužení doby kontaktu s partnerem.

Obrázek 1 

Bilaterální mikroinjekce CRF do NAcc usnadňují preferenci partnera u mužských prérijních hrabošů. (A) Kontrolní zvířata, která obdržela umělý CSF do NAcc nebo 0.1 pg CRF do caudate-putamen (CP), významně nezvýhodňovala partnera před ...

Kvůli dramatickým rozdílům v druhu v CRF1 a CRF2 hustoty v NAcc, předpokládali jsme, že působení CRF v NAcc by pouze usnadnilo vytváření partnerských preferencí u prérijních hrabošů, a ne u nemogamních lučních hrabošů. Ve skutečnosti luční hraboši injikovaní s CSF nebo s vysokou dávkou 0.1 pg CRF netrávili významně více času v kontaktu s partnerem než s cizincem (p> 0.5, Studentův t-test) (Obrázek 2).

Obrázek 2 

Bilaterální mikroinjekce CRF do NAcc selhávají při preferování partnera u nehomogenních samců loukových samců. Dospělé louky, které byly injikovány umělým CSF nebo 0.1 pg CRF do NAcc, nestrávily více času v kontaktu s partnerem než ...

Na základě druhových rozdílů v CRF1 a CRF2 distribuce v NAcc, předpokládali jsme, že oba CRF1 a CRF2 by modulovalo chování preferencí partnera, možná opačným směrem. Analýza celkového souboru dat pomocí 2cestné ANOVA odhalila významný hlavní účinek stimulačního zvířete (F (1,94) = 7.52, p <0.05), ale nebyly zjištěny žádné další hlavní účinky nebo interakce. Prérijní hraboši injikovaní koktejlem 0.1 pg CRF plus 10 pg selektivního CRF2 antagonista anti-sauvagin-30, netrávil významně více času s partnerem nebo cizím člověkem (p> 0.3, Studentův t-test, hladina Bonferroni nastavena na p <0.016) (Obrázek 3A). Je zajímavé, že prérijní hraboše vstříknuté koktejlem 0.1 pg CRF plus 10 pg selektivní CRF1 antagonista CP-154,526-1, také ukázal blokádu partnerských preferencí (p> 0.5, Studentův t-test, hladina Bonferroni nastavena na p <0.016) (Obrázek 3A). Kontrolní prérijní hraboši injikovaní 0.1 pg CRF do NAcc byly testovány současně a bylo zjištěno, že replikují původní výsledky usnadnění partnerské preference (p <0.01, Studentův t-test, úroveň Bonferroni nastavena na p <0.016) (Obrázek 3A). Kromě toho, zatímco 8 z prérijních hrabošů ošetřených 10 CRF vykazovalo partnerské preference, pouze 11 ze zvířat 25 přijímajících CRF1 antagonista a 6 ze zvířat 15 přijímajících CRF2 antagonista, zobrazoval preferenci partnera (Obrázek 3B). Naše výsledky naznačují, že aktivace obou CRF1 a CRF2 Receptory v NAcc jsou nezbytné pro usnadnění vyvolání CRF u partnerských preferencí v prérijních volách.

Obrázek 3 

Oba CRF1 a CRF2 receptory v NAcc jsou nezbytné pro formování preferencí partnera s CRF u prérijních hrabošů. (A) Zvířata injikovaná 0.1 pg CRF do NAcc strávila více času v kontaktu s partnerem než s cizincem (p <0.01, Studentova ...

Lokomotorická aktivita se významně nelišila mezi léčenými skupinami (F (1,80) = 1.37, p> 0.05, jednosměrná ANOVA), i když u zvířat, která dostávala CRF do NAcc, měla pohybová aktivita tendenci být nižší. Výsledky jsou uvedeny v Tabulka 1. Reprezentativní histologická část ukazující místo kanylace pro NAcc je ukázána v Obrázek 4.

Obrázek 4 

Histologické ověření umístění kanyly. a) Autoradiogram receptoru na levé polovině zobrazuje umístění CRF2 v prérii vole NAcc. (b) Reprezentativní mikrofotografie Nissl-barvené části mozku znázorňující umístění kanyly končící uvnitř ...
Tabulka 1 

Lokomotorická aktivita představovaná celkovým počtem zlomů infračerveného paprsku nebo přechodů v kleci, zprůměrovaných v každé léčené skupině. Mezi léčebnými skupinami nejsou žádné významné rozdíly (F = 1.37, p> 0.05, jednosměrná ANOVA).

CRF- a Ucn-1 imunoreaktivita v NAcc

Abychom ukázali fotomikrografy, jejichž endogenní ligandy CRF receptoru jsou přítomny v NAcc, provedli jsme imunoreaktivitu CRF- a Urocortin-1 (Ucn-1) u dospělých prérijních hrabošů. Reprezentativní řezy mozku zpracované pro imunocytochemii CRF jsou uvedeny v Obrázek 5. CRF-imunoreaktivní vlákna byla pozorována v NAcc u obou pohlaví bez zjevných rozdílů v distribuci nebo hustotě vláken (Obrázek 5b). Vlákna Ucn-1 nebyla detekována v NAcc u mužských ani ženských prérijních volů (Obrázek 5c). Je tedy možné, že CRF je jedním z endogenních ligandů, které by mohly fyziologicky vázat CRF1 a CRF2 receptory ve vole NAcc pro usnadnění preference partnera. Je pozoruhodné, že se ukázalo, že CRF se váže na oba CRF1 a CRF2, s přibližně dvojnásobnou až desetinásobnou afinitou vyšší afinitou k CRF1 (Primus a kol., 1997). Nemůžeme však vyloučit možnost, že další endogenní ligandy, jako je Urocortin-2 nebo Urocortin-3, mohou také přispívat k nervové kontrole tvorby párových vazeb.

Obrázek 5 

Imunoreaktivita CRF a Ucn-1 u prérijních hrabošů. a) Schéma atlasu krysy ukazující oblast zvětšení NANc 10x (viz obdélník) (Paxinos a Watson, 1998). (b) Sekce Prérie vole ukazující CRF-imunoreaktivní vlákna v NAcc (viz šipky). (c) Prairie ...

DISKUSE

V předchozích studiích jsme identifikovali druhové rozdíly v akcentálním CRF1- a CRF2 výraz, který koreloval se sociální organizací napříč čtyřmi druhy hrabošů. Monogamní prérie a hraboše měly vyšší hladiny CRF2 v NAcc a nižších hladinách CRF1 v NAcc, ve srovnání s nemonogamními druhy louky a sopky (Lim a kol., 2005). Na základě těchto údajů jsme předpokládali, že akce CRF v rámci NAcc byla kritická pro monogamní sociální chování u prérijních hrabošů. V této studii poprvé ukazujeme, že mikroinjekce CRF přímo do NAcc ve skutečnosti usnadňují preferenci partnera v mužských prériích vole. Dvousměrná ANOVA analýza detekovala hlavní účinek stimulačního zvířete, tj. Celkově více času bylo stráveno v kontaktu s partnerem než cizinec, ale nebyl detekován žádný hlavní účinek léčby nebo interakce. Silná cizí preference u zvířat 3 ze skupiny 0.1 pg CRF NAcc nafoukla rozptyl, což brání detekci interakčního účinku. Samostatné srovnání času stráveného s cizími verši partnerů však odhalilo významné preference partnera ve skupině 0.1 pg CRF NAcc. Tento účinek byl replikován ve studii antagonisty, což svědčí o robustnosti účinku. Tento posun partnerských preferencí nebyl spojen se statisticky významným prodloužením času stráveného s partnerem nebo se zkrácením času stráveného u cizince, ale spíše byl výsledkem celkové zvýšené preference partnera vůči cizinci. Naproti tomu CRF nemá žádný vliv na preference partnerů u neamonogamních lučních hrabošů. Dále ukazujeme, že tento facilitační účinek je modulován působením CRF na oba CRF1 a CRF2 receptory. Nakonec ukážeme důkazy z mikrofotografie, že CRF-imunoreaktivní vlákna jsou přítomna v proužkové vole NAcc, což naznačuje, že CRF může být jedním z endogenních ligandů působících na CRF1 a CRF2 receptory v NAcc během vytváření preferencí partnera. Dohromady tato data prokazují novou roli systémů CRF působících v rámci NAcc v sociálním chování.

Naše data, která ukazují, že CRF v NAcc usnadňuje preferenci partnerů, podporují naši počáteční hypotézu, že akcentální systémy CRF se podílejí na tvorbě párových vazeb v prérijních volách. Ještě jsme předpokládali, že CRF2 receptory, zejména, byly kritické vzhledem k hojnosti CRF2 receptory u dvou monogamních druhů hraboša, ale ne dvou druhů nemonogamních hrabošů (Lim a kol., 2005). Výsledky experimentu s lučními voly podporují tuto hypotézu, protože infuze CRF nemá žádný vliv na preferenci partnera u druhu, který účinně postrádá CRF.2 receptory v NAcc. Kromě toho jsme zjistili, že společné podávání CRF2-selektivní antagonista blokuje preferenci partnera v prériích hrabošů. Tato data odhalují potenciálně kritickou roli CRF2 receptory při tvorbě párové vazby.

Zjistili jsme však také, že společné podávání CRF1-selektivní antagonista blokoval preference partnera v prérijních hrabošech. Tento výsledek byl překvapivější vzhledem k tomu, že CRF1 Receptory jsou exprimovány v NAcc jak u nemonogamních, tak u monogamních druhů. Dohromady tato data zdůrazňují důležitost oba Receptory subtypů pro expresi preferencí partnera a poukazují na možnost, že specificita receptoru je složitý problém, který může těžit z dalšího zkoumání. Je možné, že může dojít k dynamické souhře mezi dvěma receptorovými podtypy v NAcc během párování, a mohlo by být zajímavé dále prozkoumat buněčné fenotypy CRF.1- a CRF2-exprimující neurony nebo zjistit, zda CRF1 a CRF2 receptory se mohou dokonce kolokalizovat na stejné neurony. Je také možné, že mohou být zapojena i jiná činidla, jako je protein vázající se na CRF, který může působit jako rezervoár pro endogenní CRF (Jahn, Eckart, Brauns, Tezval a Spiess, 2002).

Účinné dávky CRF pro místně specifické injekce do NAcc, které usnadnily preferenci partnera, neměly žádný významný účinek léčby léčivem na lokomotorickou aktivitu, která je obvykle interpretována jako chování podobné úzkosti. DeVries and Carter (2002) našli účinné dávky CRF icv pro preferenci partnera u 0.1 a 1.0 ng (210 nM a 2.1 μM), a nezjistili rozdíly v lokomotorické aktivitě mezi léčenými skupinami (DeVries a kol., 2002). Jejich dávky byly 1000 až 10,000 krát větší a nejméně dvakrát až dvacetkrát vyšší v koncentraci než dávky, které jsme použili místně do NAcc (10 nM a 100 nM). V naší studii, i když jsme nezjistili významné rozdíly v lokomotorické aktivitě napříč léčenými skupinami, byl však mírný trend směrem k menšímu počtu křížení v klecích u zvířat dostávajících pouze CRF do NAcc. I když je možné, že CRF může mít nepatrné účinky na chování podobné úzkosti, a tudíž i lokomoce, která by mohla ovlivnit formování preferencí partnera, věříme, že věrohodnějším vysvětlením je, že snížené křížení klecí ve skupině samotné CRF je vedlejším produktem zvýšeného preference partnera, tj. čas strávený pouze v partnerské kleci. To podporuje hypotézu, že CRF může mít novou, samostatnou roli při regulaci sociálního chování, možná nezávisle na vlivu osy HPA na úzkost.

Ukazujeme také fotomikrografický důkaz imunoreaktivity CRF v NAcc ve stejné oblasti jako CRF2 receptory v monogamních prérijních hrabošech. To naznačuje, že CRF by mohl být jedním z endogenních ligandů, které působí na CRF1 a CRF2 receptory v NAcc. Přestože bylo prokázáno, že CRF se váže přednostně na CRF1, také se váže na CRF2 se značnou afinitou (Primus a kol., 1997). Ucn-1-imunoreaktivní vlákna nebyla pozorována v NAcc, ale byla pozorována v jiných oblastech mozku, jako je Edinger-Westphalovo jádro (Lim a kol., 2006). Nebyli jsme schopni zmapovat vlákna Urocortin-2 nebo Urocortin-3 v mozku hraboše kvůli nedostatku specifické imunostainování; bylo by však zajímavé zjistit, zda se tyto potenciální ligandy, které také vážou na CRF2 Receptory s vysokou afinitou jsou také přítomny v NAcc spolu s CRF2 receptory.

Ventrální prední mozek, a zejména NAcc, byl opakovaně identifikován jako kritická oblast mozku pro tvorbu párových vazeb v prérijních volách. Vzhledem k úloze NAcc v mezolimbické dopaminové odměnové dráze se předpokládalo, že přirozené mechanismy odměňování a zesílení podporují tvorbu párových vazeb, takže partner je selektivně spojen s odměnou (Aragona a kol., 2003a; Lim, Murphy a Young, 2004a). Již dříve jsme pomocí farmakologických a genetických manipulací prokázali, že ventrální předkrvinové receptory vazopresinu V1a jsou nezbytné pro tvorbu vazby samčích párů, i když jsou nadměrně exprimovány u nemonogamních druhů hraboša (Lim a kol., 2004b; Lim and Young, 2004). Receptory oxytocinu v NAcc jsou nezbytné pro preferenci partnera u ženských prérijních volů (Young, Lim, Gingrich a Insel, 2001). Ukázalo se také, že akumbální dopaminové receptory D1 a D2 modulují tvorbu a udržování partnerských preferencí u mužů i žen a ve skutečnosti dopamin interaguje s oxytocinem během tohoto behaviorálního procesu (Aragona a kol., 2003a; Aragona a kol., 2006; Aragona, Liu, Yu, Damron, Perlman a Wang, 2003b; Liu a Wang, 2003). Aktivace receptoru CRF tedy pravděpodobně přispívá k většímu obvodu, který konverguje v NAcc, aby vytvořil toto komplexní sociální chování. V souladu s touto hypotézou existuje důkaz, že receptory CRF v NAcc mohou modulovat uvolňování dopaminu do striatum (Lu, Liu, Huang a Zhang, 2003) a nedávné předběžné důkazy naznačující, že aktivace NAcc CRF receptoru může stimulovat lisování pruhů pro přirozené posílení (Berridge, Pecine a Schulkin, 2004). Další studie ukázala, že CRF2 receptory ve ventrální tegmentální oblasti, které vysílají dopaminergní projekce na NAcc, mohou vyvolat dlouhodobé potenciace, fyziologický korelát behaviorálního učení a asociace odměn (Ungless, Singh, Crowder, Yaka, Ron a Bonci, 2003). Protože se předpokládá, že preference partnerů je formou přirozeného učení odměn, mohou receptory CRF v NAcc hrát podobnou roli v základním synaptickém potenciaci během tvorby párových vazeb v prérijních hrabošech.

Tvorba párových vazeb v přírodě je složitý kognitivní proces, který vyžaduje integraci mnoha vnějších podnětů a vnitřních stavů. Tvorba párových vazeb je výsledkem syntézy několika behaviorálních procesů, včetně sociálního rozpoznávání, přístupu a sociální motivace, a zahrnuje učení a paměť. Oxytocin a vasopressin jsou integrálně zapojeny do nervového zpracování sociálních podnětů a tvorby sociálních vzpomínek (Bielsky, Hu, Szegda, Westphal a Young, 2004; Ferguson, Young, Hearn, Matzuk, Insel a Winslow, 2000). Dopamin může být zapojen do zvýšeného motivačního stavu, který řídí sociální interakci s něčím partnerem, a posílení potřebné k vytvoření preferencí partnera. CRF může poskytnout mechanismus, kterým vnitřní stresový stav moduluje preference partnera. Signalizace CRF by také mohla umožnit dlouhodobé změny nervové plasticity během vytváření párové vazby. Každý neurotransmiterový systém hraje odlišnou, ale zásadní roli v komplexním chování párových vazeb a blokáda jakéhokoli jednoho systému by narušila tvorbu párové vazby.

Role CRF v regulaci sociálního chování byla minimálně studována, navzdory četnosti studií týkajících se CRF ke stresovému a úzkostnému chování. Existují silné důkazy, že CRF2 funkce aktivace receptoru ke snížení úzkostného a depresivního chování u myší (Bale, Contarino, Smith, Chan, Gold, Sawchenko, Koob, Vale a Lee, 2000; Bale a Vale, 2003). Sociální chování, stres a úzkost jsou silně provázány, zejména u chování zahrnujícího sociální podporu nebo zvládání sociální izolace. Prairiové hraboše, které vytvořily párové vazby, vykazují během společenské separace od partnera zvýšené hladiny plazmatického kortikostonu a opětovné setkání s partnerem tyto hladiny vrací zpět na základní úroveň (Carter, DeVries, Taymans, Roberts, Williams a Getz, 1997). Mužské prérie vole podstupující nucené plavání, psychologický stresor, ukazují zkrácenou tvorbu svazků párů po zkrácené soužití s ​​partnerem (DeVries a kol., 1996). Konečně, párově vázaní muži, kteří jsou odděleni od svých partnerů, vykazují v testu nuceného plavání pasivnější strategie zvládání než jejich protějšky oddělené sourozenci, a takové změny chování jsou doprovázeny zvýšením mRNA CRF v NAcc (Bosch, Nair, Neumann a Young, 2005).

Tato data naznačují, že sociální a stresové chování má vzájemný vztah, a navíc stejné molekuly, které se podílejí na stresu a úzkosti, také hrají důležitou roli v sociálním chování. Ve skutečnosti existují důkazy, že „sociální“ neuropeptidy vasopresin a oxytocin mohou modulovat stres a úzkostné chování (Bielsky a kol., 2004; Landgraf, Gerstberger, Montkowski, Probst, Wotjak, Holsboer a Engelmann, 1995; Liebsch, Wotjak, Landgraf a Engelmann, 1996; Mantella, Vollmer, Li a Amico, 2003; Ring, Malberg, Potestio, Ping, Boikess, Luo, Schechter, Rizzo, Rahman a Rosenzweig-Lipson, 2006; Windle, Shanks, Lightman a Ingram, 1997). Tedy stejné molekuly, které modulují stav vnitřního stresu, mohou přispívat k regulaci sociálního chování, jako je tvorba párových vazeb, a že molekuly a obvody vyvinuté za účelem jednoho chování mohou ve skutečnosti dynamicky řídit druhé.

Poděkování

Na Emory University bychom chtěli poděkovat Dr. Michael J. Owens za milostivé poskytnutí nám sloučeniny CP-154,526. Také bychom chtěli poděkovat Lorra Miller a Meera Modi za jejich pomoc při experimentu s louka vole. Nakonec bychom chtěli poděkovat Drsovi. A. Courtney DeVries na Ohio State University a C. Sue Carter na University of Illinois v Chicagu za jejich průkopnickou práci na CRF v prairie voles a korespondenci Dr. DeVries o farmakologických experimentech.

Grantová podpora: Tento výzkum byl podporován NIH granty MH65050 pro MML, AA13738 pro AER, MH58616 pro ZXW, MH64692 pro LJY a NSF STC IBN-9876754 a Yerkes Center Grant RR00165.

Poznámky pod čarou

Zřeknutí se odpovědnosti vydavatele: Jedná se o soubor PDF s neupraveným rukopisem, který byl přijat k publikaci. Jako službu pro naše zákazníky poskytujeme tuto ranní verzi rukopisu. Rukopis podstoupí kopírování, sázení a přezkoumání výsledného důkazu před jeho zveřejněním ve své konečné podobě. Vezměte prosím na vědomí, že během výrobního procesu mohou být objeveny chyby, které by mohly ovlivnit obsah, a veškeré právní odmítnutí týkající se časopisu.

Reference

  1. Aragona BJ, Liu Y, Curtis JT, Stephan FK, Wang Z. Kritická role pro jádro accumbens dopaminu ve vytváření partnerských preferencí u mužských prérijních hrabošů. J Neurosci. 2003a; 23 (8): 3483 – 90. [PubMed]
  2. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Curtis JT, Detwiler JM, Insel TR, Wang Z. Nucleus accumbens dopamin odlišně zprostředkovává tvorbu a udržování monogamních párových vazeb. Nat Neurosci. 2006; 9 (1): 133 – 9. [PubMed]
  3. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Damron A, Perlman G, Wang ZX. Opačná modulace sociální vazby aktivací dopaminového receptoru typu D1 a D2 ve skořápce nucleus accumbens. Horm Behav. 2003b; 44: 37.
  4. Bachtell RK, Weitemier AZ, Galvan-Rosas A, Tsivkovskaia NO, Risinger FO, Phillips TJ, Grahame NJ, Ryabinin AE. Cesta urokortinu Edinger-Westphal-laterální septum a její vztah ke konzumaci alkoholu. J Neurosci. 2003; 23 (6): 2477 – 87. [PubMed]
  5. Bale TL, Contarino A, Smith GW, Chan R, Gold LH, Sawchenko PE, Koob GF, Vale WW, Lee KF. Myši s nedostatkem receptoru 2 uvolňujícího kortikotropin vykazují chování podobné úzkosti a jsou přecitlivělé na stres. Nat Genet. 2000; 24 (4): 410 – 4. [PubMed]
  6. Bale TL, Vale WW. Zvýšené chování podobné depresím u myší s deficitem receptoru faktoru uvolňujícího kortikotropin-2: sexuálně dichotomické reakce. J Neurosci. 2003; 23 (12): 5295 – 301. [PubMed]
  7. Berridge KK, Pecine S, Schulkin J. Předpojatý účinek CRF ve skořápce accumbens na podmíněný přístup k odměně za sacharózu. Společnost pro neurochově abstraktní prohlížeč / plánovač itinerářů. 2004: 437.12.
  8. Bielsky IF, Hu SB, Szegda KL, Westphal H, Young LJ. Hluboké zhoršení sociálního rozpoznávání a snížení chování podobného úzkosti u myší s knockoutem receptoru vasopresinového receptoru V1a. Neuropsychofarmakologie. 2004; 29 (3): 483 – 93. [PubMed]
  9. Bosch OJ, Nair HP, Neumann ID, Young LJ. Depresivní chování po izolaci od ženského partnera je spojeno se změnou mozkové CRF mRNA a aktivity HPA osy v mužské prérii. Society for Neuroscience Abstract Viewer / Itinerary Planner; 2005. (Program č. 420.4)
  10. Carter CS, DeVries AC, Getz LL. Fyziologické substráty savčí monogamie: prérie model vole. Neurosci Biobehav Rev. 1995; 19 (2): 303 – 14. [PubMed]
  11. Carter CS, DeVries AC, Taymans SE, Roberts RL, Williams JR, Getz LL. Peptidy, steroidy a párové vazby. Ann NY Acad Sci. 1997; 807: 260 – 72. [PubMed]
  12. DeVries AC, DeVries MB, Taymans SE, Carter CS. Účinky stresu na sociální preference jsou u prérijních hrabošů sexuálně dimorfní. Proc Natl Acad Sci USA A. 1996; 93 (21): 11980 – 4. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  13. DeVries AC, Guptaa T, Cardillo S, Cho M, Carter CS. Faktor uvolňující kortikotropin vyvolává sociální preference u mužských prérijních hrabošů. Psychoneuroendokrinologie. 2002; 27 (6): 705 – 14. [PubMed]
  14. Ferguson JN, Young LJ, Hearn EF, Matzuk MM, Insel TR, Winslow JT. Sociální amnézie u myší postrádajících gen oxytocinu. Nat Genet. 2000; 25 (3): 284 – 8. [PubMed]
  15. Getz LL, Carter CS, Gavish L. Systém páření vole prérie Microtus ochragaster: Terénní a laboratorní důkazy pro párování. Behaviorální ekologie a socioiobiologie. 1981; 8: 189 – 194.
  16. Gruder-Adams S, Getz LL. Srovnání páření a otcovského chování u Microtus ochragaster a M. pennsylvanicus. Žurnál mamologie. 1985; 66 (1): 165 – 167.
  17. Hotta M, Shibasaki T, Arai K, Demura H. Receptor faktoru uvolňujícího kortikotropin typu 1 zprostředkovává emoční stresem indukovanou inhibici příjmu potravy a změny chování u potkanů. Brain Res. 1999; 823 (1 – 2): 221 – 5. [PubMed]
  18. Insel TR, Shapiro LE. Distribuce oxytocinového receptoru odráží sociální organizaci v monogamních a polygamních hrabošech. Proc Natl Acad Sci USA A. 1992; 89 (13): 5981 – 5. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  19. Insel TR, Wang ZX, Ferris CF. Vzory distribuce mozkového vasopresinového receptoru spojené se sociální organizací u hlodavců. J Neurosci. 1994; 14 (9): 5381 – 92. [PubMed]
  20. Jahn O, Eckart K, Brauns O, Tezval H, Spiess J. Vazebný protein faktoru uvolňujícího kortikotropin: místo vázající ligand a strukturu podjednotek. Proc Natl Acad Sci USA A. 2002; 99 (19): 12055 – 60. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  21. Landgraf R, Gerstberger R, Montkowski A, Probst JC, Wotjak CT, Holsboer F, Engelmann M. V1 antisense oligodeoxynukleotid receptoru vazopresinu do septum snižuje vazopresinové vazby, schopnosti sociální diskriminace a chování související s úzkostí u potkanů. J Neurosci. 1995; 15 (6): 4250 – 8. [PubMed]
  22. Liebsch G, Wotjak CT, Landgraf R, Engelmann M. Septal vasopressin moduluje úzkostné chování u potkanů. Neurosci Lett. 1996; 217 (2 – 3): 101 – 4. [PubMed]
  23. Lim MM, Murphy AZ, Young LJ. Ventrální striatopallidní oxytocin a vasopresinové receptory V1a v monogamní prérijní vole (Microtus ochrogaster) J Comp Neurol. 2004a; 468 (4): 555 – 70. [PubMed]
  24. Lim MM, Nair HP, Young LJ. Druhové a pohlavní rozdíly v mozkové distribuci subtypů receptoru faktoru uvolňujícího kortikotropin 1 a 2 u monogamních a promiskuitních druhů hrabošů. J Comp Neurol. 2005; 487 (1): 75 – 92. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  25. Lim MM, Tsivkovskaia NO, Bai Y, Young LJ, Ryabinin AE. Distribuce faktoru uvolňujícího kortikotropin a urokortinu 1 v mozku Vole. Brain Behav Evol. 2006; 68 (4): 229 – 240. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  26. Lim MM, Wang Z, Olazabal DE, Ren X, Terwilliger EF, Young LJ. Zvýšená preference partnera u promiskuitního druhu manipulací s expresí jediného genu. Příroda. 2004b; 429 (6993): 754 – 7. [PubMed]
  27. Lim MM, Young LJ. Nervové obvody závislé na vazopresinu, které jsou základem tvorby párových vazeb v monogamní vole. Neurovědy. 2004; 125 (1): 35 – 45. [PubMed]
  28. Liu Y, Wang ZX. Nucleus accumbens oxytocin a dopamin interagují pro regulaci tvorby párových vazeb u ženských prérijních hrabošů. Neurovědy. 2003; 121 (3): 537 – 44. [PubMed]
  29. Lu L, Liu Z, Huang M, Zhang Z. Reakce na kokain závislé na dopaminu závisí na subtypech receptoru faktoru uvolňujícího kortikotropin. J Neurochem. 2003; 84 (6): 1378 – 86. [PubMed]
  30. Mantella RC, Vollmer RR, Li X, Amico JA. Samice myší s nedostatkem oxytocinu vykazují zvýšené chování související s úzkostí. Endokrinologie. 2003; 144 (6): 2291 – 6. [PubMed]
  31. Paxinos G, Watson C. Mozek potkana ve stereotaxických souřadnicích. 4. Academic Press; 1998.
  32. Primus RJ, Yevich E, Baltazar C, Gallager DW. Autoradiografická lokalizace vazebných míst CRF1 a CRF2 v mozku dospělého potkana. Neuropsychofarmakologie. 1997; 17 (5): 308 – 16. [PubMed]
  33. Kroužek RH, Malberg JE, Potestio L, Ping J, Boikess S, Luo B, Schechter LE, Rizzo S, Rahman Z, Rosenzweig-Lipson S. Anxiolytická aktivita oxytocinu u samců myší: behaviorální a autonomní důkazy, terapeutické implikace. Psychofarmakologie (Berl) 2006: 1 – 8. [PubMed]
  34. Ryabinin AE, Criado JR, Henriksen SJ, Bloom FE, Wilson MC. Diferenciální citlivost exprese c-Fos v hippocampu a dalších oblastech mozku na střední a nízké dávky alkoholu. Mol Psychiatry. 1997; 2 (1): 32 – 43. [PubMed]
  35. Salo AL, Shapiro LE, Dewsbury DA. Asociativní chování u různých druhů hrabošů (Microtus) Psychol Rep. 1993; 72 (1): 316 – 8. [PubMed]
  36. Shapiro LE, Dewsbury DA. Rozdíly v afilačním chování, párových vazbách a vaginální cytologii u dvou druhů hrabošů (Microtus ochrogaster a M. montanus) J Comp Psychol. 1990; 104 (3): 268 – 74. [PubMed]
  37. Ungless MA, Singh V, Crowder TL, Yaka R, Ron D, Bonci A. Kortikotropin uvolňující faktor vyžaduje protein vázající CRF k potenciaci NMDA receptorů prostřednictvím CRF receptoru 2 v dopaminových neuronech. Neuron. 2003; 39 (3): 401 – 7. [PubMed]
  38. Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE. Distribuce urokortinu 1 v mozku myši je závislá na kmeni. Neurovědy. 2005; 132 (3): 729 – 40. [PubMed]
  39. Windle RJ, Shanks N, Lightman SL, Ingram CD. Centrální aplikace oxytocinu snižuje uvolňování kortikosteronu vyvolané stresem a úzkostné chování u potkanů. Endokrinologie. 1997; 138 (7): 2829 – 34. [PubMed]
  40. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Buněčné mechanismy sociální vazby. Horm Behav. 2001; 40 (2): 133 – 8. [PubMed]
  41. Young LJ, Wang Z. Neurobiologie párových vazeb. Nat Neurosci. 2004; 7 (10): 1048 – 54. [PubMed]