La expresión y distribución del receptor de dopamina cambian dinámicamente en el núcleo de rata accumbens después de la retirada de la autoadministración de cocaína. (2010)

Proteína de reticulación

Este método ha sido descrito en detalle anteriormente (Boudreau y Wolf, 2005; Ferrario et al., 2010). Las ratas se decapitaron, sus cerebros se retiraron rápidamente y la totalidad de las NAc (o subregiones de núcleo y concha) se diseccionaron en hielo de una sección coronal de 2mm obtenida usando una matriz cerebral. Todo el tejido NAc se cortó inmediatamente en cortes de 400μm usando un cortador de tejido McIllwain (Vibratome, St. Louis, MO), mientras que las subregiones más pequeñas del núcleo y la cáscara se cortaron a mano con un bisturí. Luego se añadió tejido a los tubos Eppendorf que contenían CSF artificial helado enfriado con bisN (sulfosuccinimidil) 2 mM (BS).³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). La reacción de reticulación se dejó proceder durante 30 min a 4 ° C con agitación suave, y luego se terminó mediante la adición de glicina 100mM (10 min a 4 ° C). El tejido se sedimentó por breve centrifugación, se resuspendió en tampón de lisis enfriado con hielo que contenía inhibidores de proteasa y fosfatasa, se seccionó durante 5 seg y se centrifugó nuevamente. Las partes alícuotas del sobrenadante se almacenaron a -80 ° C hasta que se analizaron mediante transferencia de Western.

Análisis de transferencia Western de DARs en tejido reticulado

Las muestras (proteína / lisado total 20-30μg) se sometieron a electroforesis en geles 4-15% Tris-HCl (Biorad, Hercules, CA). Las proteínas se transfirieron a membranas de fluoruro de polivinilideno para inmunotransferencia utilizando corriente constante (1.15mA) para 1.5 h. Se usó una bobina de enfriamiento para evitar el calentamiento excesivo. La transferencia completa de agregados de alto peso molecular se confirmó mediante tinción de geles después de la transferencia con azul de Coomassie. Además, verificamos que las proteínas DAR reticuladas no se detectaron en el gel de apilamiento (datos no mostrados). Después de la transferencia, las membranas se lavaron en ddH₂O, se secó al aire durante 1 hr a temperatura ambiente (RT), se rehidrató con 100% MeOH, se lavó en solución salina tamponada con 1x Tris (TBS) y se sumergió en 0.1M NaOH, pH 10 para 15 mín. A RT. Luego, se lavaron en TBS, se bloquearon con 3% de albúmina de suero bovino (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) en TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, durante 1 hora a temperatura ambiente, y se incubaron durante la noche en 4 ° C con anticuerpos que reconocen el D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) y D3 Dar Cat # AB1P). D1000 y D1786 DAR no se analizaron debido a la falta de anticuerpos que reconocen los receptores tanto reticulados como intracelulares. Cabe señalar que los lotes de anticuerpos DAR utilizados en estos experimentos se compraron en 4-5; los lotes actuales de estos anticuerpos (2005-06) muestran diferentes patrones de bandas que no se alteran en el tejido de ratones knock-out DAR (observaciones no publicadas). Después de la incubación del anticuerpo primario, las membranas se lavaron con solución de TBS-T, se incubaron durante 2009 min con IgG anti-conejo conjugado con HRP o IgG anti-ratón (10: 60; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), se lavaron con TBS T, enjuagado con ddH₂O, y sumergido en el sustrato detector de quimioluminiscencia (Amersham GE, Piscataway, NJ). Después de que se desarrollaron las transferencias, las imágenes se capturaron con el software Versa Doc Imaging (Bio-Rad). Las densidades difusas de la superficie y las bandas intracelulares se determinaron utilizando el software Quantity One (Bio-Rad). Los valores para los niveles de proteína de superficie, intracelular y total (superficie + intracelular) se normalizaron a la proteína total en el carril determinado utilizando Ponceau S (Sigma-Aldrich) y se analizaron con TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, Reino Unido). La relación superficie / intracelular no requirió normalización, porque ambos valores se determinan en el mismo carril. Para examinar la especificidad de los anticuerpos, se realizaron estudios de preabsorción para los anticuerpos DAR con el péptido utilizado para generar cada anticuerpo. El anticuerpo D1, D2 o D3 DAR se combinó con una concentración excesiva de péptido 10 en 500μl de TBS, se mezcló durante 4 horas a 4 ° C, se diluyó hasta un volumen final de 20ml, se agregó a la membrana y se incubó durante la noche 4 ° C.

D1 DARs

No se encontraron diferencias significativas entre los grupos de cocaína y solución salina en WD45. Sin embargo, los efectos de la autoadministración de cocaína fueron evidentes en WD1. El análisis de la totalidad de NAc indicó una relación superficie / intracelular D1 DAR significativamente mayor en el grupo WD1-Coc en comparación con los grupos que se autoadministraron solución salina (Fig. 2a). Esto fue atribuible a un aumento moderado en la D1 DAR de superficie combinada con una disminución moderada en la D1 DAR intracelular (ninguno de estos dos últimos efectos fue estadísticamente significativo), en ausencia de cualquier cambio en los niveles de D1 DAR total (superficie + intracelular) (Fig. 2a). Dentro del núcleo de NAc, no se encontró ningún efecto significativo para ninguna medida DAR D1 (Fig. 2b). Sin embargo, el shell NAc mostraba cambios que eran similares a los observados en toda la NAc pero un poco más robustos (Fig. 2c). La relación D1 DAR de superficie / intracelular aumentó en el grupo WD1-Coc debido a un aumento significativo en la expresión DAR de D1 de superficie. Los niveles intracelulares se mantuvieron sin cambios, pero hubo una tendencia hacia el aumento de los niveles totales de D1 DAR. En resumen, una mayor parte de la proteína D1 DAR se expresó en la superficie en la capa NAc de ratas WD1-Coc en comparación con ratas WD1-Sal. La distribución de D1 DAR volvió al estado de control después de 45 días de retiro de la autoadministración de cocaína.

D1 DAR expresión de la superficie se incrementó en la capa NAc después de 1 día de retiro de autoadministración de cocaína

D2 DARs

En toda la NAc, el efecto principal observado fue la disminución de la expresión de D2 DAR en ratas que la cocaína autoadministrada en comparación con los controles de solución salina (Fig. 3a). Esto fue más pronunciado en WD45, cuando se observaron disminuciones en la banda de superficie, las tres bandas intracelulares (~ 55, 75 y 100kDa), y en los niveles totales de D2 DAR en comparación con los controles salinos. La relación D2 DAR de superficie / intracelular aumentó levemente pero significativamente en el grupo WD45-Coc, debido a una mayor disminución en DAR de D2 intracelular que en la superficie, lo que quizás indique que las células están compensando la disminución de la expresión de D2 DAR distribuyendo una porción mayor de las disponibles. D2 DAR a la superficie. Es importante tener en cuenta que la elevada relación superficie / intracelular no sugiere un aumento de la transmisión D2 DAR en este caso particular, porque el nivel absoluto de D2 DAR expresado en la superficie se redujo. En el grupo WD1-Coc, el único efecto significativo fue una disminución en los niveles intracelulares del monómero D2 DAR (~ 55kDa), en comparación con los grupos WD45-Sal y WD1-Sal, aunque varias otras medidas también tendieron a disminuir (Fig. 3a).

Los niveles de D2 DAR intracelular y de superficie en la NAc disminuyeron después de 45 días de retiro de la autoadministración de cocaína

Una disminución general en la expresión D2 DAR también fue evidente en las subregiones de núcleo y shell de la NAc (Fig. 3b y 3c, respectivamente), aunque los efectos tendieron a ser más pronunciados en la concha. Por lo tanto, los niveles de D2 DAR en la superficie disminuyeron en ratas de cocaína solo en WD45 en el núcleo, pero en WD1 y WD45 en la cáscara. El D2 DAR total disminuyó significativamente solo en shell. Las disminuciones en las bandas intracelulares de D2 DAR ocurrieron en ambos días de extracción tanto en el núcleo como en la cubierta, aunque hubo diferencias específicas de extracción y región en cuanto a qué banda intracelular mostró un efecto estadísticamente significativo. En resumen, la D2 DAR en la superficie y los niveles de proteína intracelular disminuyeron en el NAc después de la autoadministración de cocaína. Algunas disminuciones ya fueron evidentes por WD1.

D1 La expresión superficial de DAR aumenta transitoriamente en la capa de NAc después de descontinuar la autoadministración de cocaína

Después de la autoadministración de cocaína, D1 DAR expresión de la superficie se incrementó en la cáscara NAc en WD1 pero se normalizó por WD45, mientras que no se observaron cambios en el núcleo, lo que indica un aumento transitorio confinado a la cáscara. Se han obtenido resultados similares en estudios previos utilizando autorradiografía de receptores. Ben-Shahar et al. (2007) encontraron una mayor densidad de D1 DAR en la concha de NAc de ratas 20 min (pero no 14 o 60 días) después de descontinuar la autoadministración de cocaína de acceso extendido (6 hr / día), mientras que no se observaron cambios en el núcleo o después de la cocaína self de acceso corto -Administración (2 hr / día). Nader et al. (2002) se observó un pequeño aumento en la densidad DAR de D1 en la concha pero no en el núcleo de monos rhesus muertos después de la última sesión de autoadministración de cocaína 100. Los monos evaluados 30 días después de descontinuar el mismo régimen mostraron una mayor densidad de D1 DAR en NAc rostral y tanto en el núcleo como en la cáscara en niveles más caudales, pero la densidad DAR de D1 se había normalizado en los días 90 (Beveridge et al., 2009). Todos estos resultados, como el nuestro, indican un aumento transitorio en los niveles de D1 DAR, particularmente en la cáscara, después de descontinuar la autoadministración de cocaína. Sin embargo, un estudio anterior realizado por este grupo indicó una disminución en la densidad DAR de D1 en la NAc (la más robusta en la cáscara) de monos rhesus que recibieron cocaína autoadministrada durante un período de tiempo mucho más largo (meses 18; Moore et al., 1998a). También se encontró una disminución de la unión D1 DAR en la NAc 18 hr después de descontinuar un régimen de acceso extendido en ratas, aunque la ingesta total de cocaína en este estudio fue mayor que en los estudios de ratas discutidos anteriormente (De Montis et al., 1998). Estos resultados indican que las adaptaciones D1 DAR dependen de muchos aspectos de la exposición a la cocaína. Otra consideración es que la autorradiografía del receptor mide los receptores celulares totales, mientras que nuestros experimentos de entrecruzamiento de proteínas pueden distinguir entre los receptores superficiales y los intracelulares. Curiosamente, un estudio de inmunotransferencia encontró una tendencia hacia el aumento de los niveles de D1 DAR en la NAc de los usuarios humanos de cocaína (Worsley et al., 2000).

¿Es importante el aumento transitorio en la expresión de la superficie DAR de D1 que observamos en la capa de NAc para la incubación del deseo de cocaína inducido por la señal? Esto es difícil de evaluar, porque ningún estudio ha probado el efecto de la inyección intra-NAc de agonistas o antagonistas de D1 DAR en la búsqueda de cocaína inducida por señales después de la retirada de la jaula de origen (o el restablecimiento de la búsqueda de cocaína inducida por señales después del entrenamiento de extinción). Sin embargo, los receptores D1 en el NAc medial (envoltura y núcleo medial) están implicados en el restablecimiento de cocaína cebado con cocaína después de la extinción, aparentemente a través de un mecanismo que requiere la activación cooperativa de D1 y D2 DARs (Anderson et al., 2003; 2008; Bachtell et al., 2005; Schmidt y Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Junto con nuestros resultados, esto podría sugerir que las neuronas en la capa NAc son más sensibles a la búsqueda de cocaína mediada por D1 DAR en el retiro temprano debido a la regulación transitoria de D1R. Sin embargo, se debe tener cuidado al extrapolar de la reincorporación a los estudios de incubación, ya que el entrenamiento de extinción y el retiro de la jaula en el hogar están asociados con diferentes neuroadaptaciones en la NAc (Sutton et al., 2003; Ghasemzadeh et al., 2009; Lobo y Ferrario, 2010). Es importante tener en cuenta que los DAR de D1 en la amígdala basolateral y la corteza prefrontal también son importantes para el restablecimiento de la búsqueda de cocaína inducida por indicios (por ejemplo, Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt et al., 2006; Berglind y otros, 2006).

A nivel celular, tanto los DAR presinápticos como los postsinápticos pueden modular la excitabilidad de las neuronas espinosas medias, el tipo de célula predominante y la neurona de salida de la NAc (Nicola et al., 2000; O'Donnell, 2003). Se sabe que la administración repetida de cocaína no contingente aumenta algunos efectos de la activación de D1 DAR en la NAc. Por lo tanto, entre un día y un mes después de interrumpir el tratamiento con cocaína, se observó una mayor capacidad de los agonistas de D1 DAR para inhibir la actividad de las neuronas espinosas medianas (impulsadas por el glutamato iontoforético) en toda la NAc (Henry y White, 1991; 1995). Sin embargo, es poco probable que el aumento en la expresión de la superficie DAR de D1 aquí descrito explique estos resultados anteriores, ya que está restringido a la cubierta y solo se ha demostrado en WD1. Un día después de un desafío de cocaína, se administró 10-14 días después de suspender las inyecciones repetidas de cocaína, Beurrier y Maleka (2002) se observó un aumento de la inhibición mediada por DA de las respuestas sinápticas excitatorias en las neuronas espinosas del medio NAc que aparentemente estaba mediada por DAR presinápticos tipo DX en las terminales nerviosas de glutamato. Sin embargo, los posibles efectos de la inyección de prueba (por ejemplo, ver Boudreau y otros, 2007 y Kourrich et al., 2007), combinados con las diferencias de especies y la falta de grabaciones en el núcleo, hacen que sea difícil comparar sus hallazgos con los nuestros. También debe señalarse que los agonistas y antagonistas de DAR utilizados por Henry y White (1991; 1995). y Beurrier y Malenka (2002) No distinguió entre D1 y D5 DAR.

D2 Los niveles de DAR disminuyen en la NAc después de descontinuar la autoadministración de cocaína

El principal efecto observado en nuestro estudio fue una disminución de la proteína D2 DAR en el núcleo y la cáscara de NAc después de descontinuar la autoadministración de cocaína, en relación con los controles de solución salina. Esto fue más pronunciado en la cáscara, donde las bandas intracelular, superficial y total disminuyeron tanto en WD1 como en WD45. En el núcleo, la expresión de la superficie de D2 DAR solo disminuyó en WD45 y los niveles totales de D2 DAR no disminuyeron significativamente. Varios otros estudios también han encontrado una disminución en la expresión de D2 DAR después de suspender la autoadministración de cocaína. En monos rhesus con amplia experiencia de autoadministración de cocaína, la densidad DAR de D2, medida con autorradiografía del receptor, disminuyó en muchas regiones estriatales, incluido el núcleo y la cáscara de NAc cuando se obtuvo tejido inmediatamente después de la última sesión (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002). Al usar PET, este efecto en los ganglios basales se detectó dentro de la semana 1 de iniciar la autoadministración de cocaína (Nader et al., 2006). La tasa a la que los niveles de D2 DAR se recuperan durante la abstinencia puede depender de la ingesta total de cocaína. En un estudio de autorradiografía, los niveles de D2 DAR en la NAc se recuperaron hasta los valores de control después de los días de retiro de las sesiones de 30 de 90 o 100 de la autoadministración de cocaína (Beveridge et al., 2009). Sin embargo, en un estudio PET de monos con exposición más prolongada (año 1) y, por lo tanto, mayor consumo total de cocaína, 3 de los monos 5 mostró una recuperación de los niveles de D2 DAR después de los días 90, mientras que los monos 2 no mostraron recuperación incluso después de los 12 meses (Nader et al., 2006). En general, estos resultados se corresponden bien con nuestros hallazgos de disminución de los niveles de D2 DAR durante el retiro.

Los estudios PET de adictos a la cocaína humanos también han encontrado niveles reducidos de D2 DAR en muchas regiones del estriado, incluyendo el estriado ventral, que fueron evidentes en el retiro temprano y después de los meses de desintoxicación de 3-4 (Volkow et al., 1990, 1993, 1997). Sin embargo, la importancia para el comportamiento no está clara, ya que la disponibilidad de D2 DAR no se correlacionó con los efectos subjetivos positivos de la cocaína o la decisión de tomar más cocaína después de una dosis de cebado (Martinez et al., 2004). Es importante tener en cuenta que si bien el deseo de cocaína inducido por la señal muestra un aumento dependiente del tiempo durante el retiro ("incubación"), esto no ocurre con la búsqueda de cocaína preparada con cocaína (Lu et al., 2004a). Por lo tanto, los resultados de Martínez et al. (2004) Deje abierta la posibilidad de que la disponibilidad de D2 DAR pueda correlacionarse con la búsqueda de cocaína inducida por señales, el enfoque del modelo de incubación estudiado en este documento. La baja disponibilidad de D2 DAR en los usuarios humanos de cocaína se correlaciona con una disminución del metabolismo cortical frontal (Volkow et al., 1993). Junto con otros cambios, esto puede contribuir a la pérdida de control que se produce cuando los adictos están expuestos a las drogas o señales de drogas, y a una mayor prominencia de las drogas en comparación con las recompensas no relacionadas con las drogas (Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). Cabe señalar que la disminución de los niveles de D2 DAR en un estudio con TEP puede indicar un aumento de la liberación de DA en lugar de una disminución de los niveles de D2 DAR, pero los resultados recientes argumentan en contra de esta explicación en el caso de los pacientes dependientes de la cocaína (Martinez et al., 2009). Además, un estudio postmortem de consumidores humanos de cocaína encontró una tendencia hacia la disminución de los niveles de D2 DAR en la NAc utilizando inmunotransferencia (Worsley et al., 2000).

Los estudios en adictos a la cocaína humanos no pueden determinar si la disponibilidad disminuida de D2 DAR es un rasgo predisponente o un resultado de la exposición a la cocaína, pero otros resultados indican que ambos son ciertos. Por un lado, los experimentos en humanos que no abusan de las drogas han encontrado una correlación inversa entre la disponibilidad de D2 DAR y los informes de "simulación de drogas" cuando se administra metilfenidato (Volkow et al., 1999; 2002). Estos hallazgos sugieren que la baja disponibilidad de D2 DAR puede aumentar la vulnerabilidad a la adicción. Una conclusión similar es apoyada por estudios en monos rhesus. En monos alojados socialmente, el logro de la dominación social aumenta la disponibilidad de D2 DAR en el cuerpo estriado y esto se asocia con una menor sensibilidad a los efectos de refuerzo de la cocaína en comparación con los monos subordinados (Morgan et al., 2002). El estatus social también se correlaciona con la disponibilidad de D2 DAR estriatal en voluntarios humanos sin drogas (Martinez et al., 2010). Por otro lado, tanto los estudios de autorradiografía de PET como de receptores muestran que la autoadministración de cocaína a largo plazo disminuye la disponibilidad del receptor D2 DAR estriatal en monos alojados individualmente, como se explicó anteriormente (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002; Nader et al., 2006). La autoadministración crónica de cocaína también parece disminuir la disponibilidad de D2 DAR en monos dominantes socialmente alojados (Czoty et al., 2004). Por lo tanto, después de la autoadministración a largo plazo de la cocaína, ya no hubo diferencias significativas en la disponibilidad del receptor D2 o los efectos de refuerzo de la cocaína entre monos dominantes y subordinados (Czoty et al., 2004). Sin embargo, los niveles elevados de D2 DAR reaparecieron en los monos dominantes durante la abstinencia y esto se correlacionó con una latencia más prolongada en reacción a la novedad, un rasgo que predice la disminución de la sensibilidad a los efectos reforzantes de la cocaína (Czoty et al., 2010).

Al igual que en humanos y monos, los estudios en ratas indican que la baja disponibilidad de D2 DAR es un factor de riesgo para la vulnerabilidad de la cocaína. Por lo tanto, los estudios de PET en ratas con alta impulsividad (un rasgo asociado con un aumento de la autoadministración de cocaína) muestran una disponibilidad reducida de D2 / D3 DAR en el estriado ventral (Dalley et al., 2007). Los niveles de D2 DAR en la NAc también se reducen en ratas que muestran una alta respuesta locomotora a la novedad, otro rasgo asociado con la vulnerabilidad a la adicción (Hooks et al., 1994). Nuestros resultados en ratas indican que la disminución de los niveles de D2 DAR en la NAc también puede ser una consecuencia de la exposición repetida a la cocaína, en consonancia con los estudios en monos y humanos (arriba). Sin embargo, dos estudios de autorradiografía de receptores en ratas encontraron resultados que difieren de los nuestros. Ben-Shahar et al. (2007) no observó niveles disminuidos de D2 DAR en el NAc después de la retirada (20 min, 14 días de 60 días) de un régimen de autoadministración de cocaína de acceso extendido similar al nuestro (6 hr / día), aunque se observaron disminuciones en la concha de NAc después de un régimen de acceso limitado (2 hr / día) y 14 días de retiro (Ben-Shahar y otros, 2007). Stéfanski et al. (2007) No se encontraron cambios en los niveles de D2 DAR en 24 h central o de cubierta después de descontinuar la autoadministración de cocaína de acceso limitado (2 hr / día), aunque los niveles de D2 DAR disminuyeron en los controles de cocaína en yugo. Como se señaló anteriormente, la autorradiografía del receptor mide los receptores celulares totales, mientras que los estudios de PET y proteínas de reticulación miden los receptores de la superficie celular.

En general, los estudios sobre la relación entre los niveles de D2 DAR y la autoadministración de cocaína respaldan un modelo en el que el D2 DAR normalmente limita la autoadministración de cocaína. Por lo tanto, sugerimos que la disminución de los niveles de D2 DAR observada en nuestros experimentos puede contribuir a la búsqueda de cocaína inducida por el cue después de la retirada de la cocaína. En particular, el hecho de que la expresión de la superficie DAR de D2 en el núcleo de NAc disminuyera en WD45 pero no en WD1, combinado con un papel clave para el núcleo de NAc en la búsqueda de cocaína inducida por el indicio, sugiere que la DAR de D2 dependiente del tiempo en el núcleo de NAc contribuir a la intensificación dependiente del tiempo de la búsqueda de cocaína inducida por señales. Esto predeciría que la infusión intra-NAc de un agonista D2 durante la retirada reduciría la búsqueda de cocaína inducida por señales. Desafortunadamente, ningún estudio ha examinado los efectos de los fármacos DAR-D2 intra-NAc en el modelo de incubación. Por otro lado, los estudios de reincorporación a base de cocaína indican que el D1 y el D2 DAR en la concha y en el núcleo medial trabajan cooperativamente para promover la búsqueda de cocaína (Anderson et al., 2003; Bachtell et al., 2005; Schmidt y Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Sobre la base de estos hallazgos, se podría predecir que la disminución en la expresión de D2 DAR en nuestros experimentos reducirá la búsqueda de cocaína, es decir, producirá un efecto opuesto a la intensificación dependiente de la extracción que realmente se observa. La discrepancia puede reflejar los problemas introducidos por la generalización de la reincorporación a base de cocaína después del entrenamiento de extinción a la búsqueda de cocaína inducida por señales después de la retirada.

Un aumento dependiente del tiempo en D3 DAR expresión de la superficie se produce en el núcleo NAc después de discontinuar la autoadministración de cocaína

Los estudios de D3 DAR que prefieren las drogas en los paradigmas de autoadministración y restablecimiento de la cocaína sugieren que los antagonistas D3 DAR pueden ser útiles para tratar la adicción a la cocaína y, en particular, para reducir la reactividad a las señales asociadas a la cocaína (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll et al., 2005; Xi y Gardner, 2007). Estos resultados implican que la activación de D3 DAR por DA endógeno puede estar involucrada en la mediación de la búsqueda de cocaína inducida por señales. Nuestros resultados muestran que la expresión de la superficie DAR de D3 en el núcleo NAc no se modifica en WD1 en comparación con la autoadministración de cocaína de acceso extendido, pero aumentó en WD45 en asociación con la incubación del deseo de cocaína. La expresión de la superficie D3 DAR no aumentó significativamente en la cubierta, aunque hubo un aumento pequeño pero significativo en la relación superficie / intracelular. Dado el papel de la transmisión D3 DAR en respuesta a las señales asociadas con la cocaína y la importancia del núcleo para la búsqueda de cocaína inducida por señales, es tentador especular que el aumento de la expresión de la superficie DAR D3 en el núcleo NAc contribuyó a la incubación de la cocaína inducida por señales Anhelo que se observa en WD45. Sin embargo, no se ha establecido el sitio neuronal en el que los antagonistas D3 DAR actúan para reducir la búsqueda de cocaína. Específicamente, ningún estudio ha examinado el efecto de la inyección intra-NAc de drogas D3 DAR preferentes en la búsqueda de cocaína inducida por señales. En un modelo diferente, Schmidt et al. (2006) encontró que la inyección del agonista que prefiere D3 PD 128,907 en el núcleo o la cáscara no produjo un restablecimiento de la búsqueda de cocaína después del entrenamiento de extinción.

Nuestros resultados son generalmente consistentes con los estudios de autorradiografía de receptores que midieron los niveles totales de D3 DAR en el NAc después de la exposición a la cocaína. Staley y Mash (1996) informaron que la unión D3 DAR fue mayor en el NAc de las víctimas de sobredosis de cocaína en comparación con los controles emparejados por edad. Después de la exposición a la cocaína en un paradigma de preferencia de lugar condicionado y tres días de abstinencia, los ratones mostraron un aumento del enlace D3 DAR en el núcleo y la cáscara de NAc (Le Foll et al., 2002). Neisewander et al. (2004) se midió el enlace D3 DAR en ratas con amplia experiencia en autoadministración de cocaína que se probaron para restablecer su preparación después de varios períodos de retiro y luego se eliminó 24 h más tarde. D3 El enlace DAR en el NAc no se modificó en WD1 pero aumentó después de un tiempo más largo (WD31-32), consistente con nuestra observación de un aumento dependiente del tiempo. Además, un tratamiento farmacológico durante la abstinencia que redujo la búsqueda de cocaína también atenuó el aumento de la unión D3 DAR, lo que sugiere que la regulación positiva de D3 DAR está funcionalmente relacionada con la búsqueda de cocaína. Cabe señalar que D3 DAR aumenta en Neisewander et al. (2004) fueron significativas en el núcleo, mientras que solo se observaron tendencias en shell, pero las subregiones se analizaron en una parte rostral de la NAc donde el núcleo y la concha son menos distintos. Nuestro análisis se realizó en el núcleo y la cáscara de las porciones rostral y caudal de la NAc.

Este trabajo fue apoyado por DA009621, DA00453 y un Premio de Investigador Distinguido de NARSAD a MEW, DA020654 a MM, y el Premio de Servicio de Investigación Nacional predoctoral DA021488 a KLC