El etanol condicionó la preferencia de lugar y las alteraciones en ΔFosB luego de que la administración de nicotina en adolescentes difiera en ratas que exhiben una reactividad de comportamiento alta o baja a un entorno nuevo (2014)

Behav Brain Res. Manuscrito del autor; Disponible en PMC 2015 Jun 5.

Publicado en forma final editada como:

Behav Brain Res. 2014 Abr 1; 262: 101 – 108.

Publicado en línea el 7 de enero de 2014. doi: 10.1016/j.bbr.2013.12.014

PMCID: PMC4457313

NIHMSID: NIHMS554276

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Resumen

Este estudio determinó los efectos de la administración de nicotina en adolescentes sobre la preferencia de alcohol en adultos en ratas con una reactividad conductual alta o baja a un entorno nuevo, y determinó si la otFosB alteraba la nicotina en el estriado ventral (vStr) y la corteza prefrontal (PFC) inmediatamente después de la administración de medicamentos o Después de ratas maduraron hasta la edad adulta.

Los animales fueron caracterizados como exhibiendo alta (HLA) o baja (LLA) actividad locomotora en el campo abierto novedoso en el día postnatal (PND) 31 y recibieron inyecciones de solución salina (0.9%) o nicotina (0.56 mg de base libre/kg) desde PND 35–42. La preferencia de lugar condicionada (CPP) inducida por etanol fue evaluada en PND 68 después de 8 días de condicionamiento en un paradigma sesgado; ΔFosB fue medido en PND 43 o PND 68. Después de la exposición a la nicotina en la adolescencia, los animales HLA demostraron una CPP cuando fueron condicionados con etanol; los animales LLA no fueron afectados . Además, la exposición a la nicotina en la adolescencia durante 8 días aumentó los niveles de ΔFosB en las regiones límbicas tanto en ratas HLA como LLA, pero este aumento persistió hasta la edad adulta solo en los animales LLA.

Los resultados indican que la exposición a la nicotina en adolescentes facilita el establecimiento de un CPP con etanol en ratas HLA, y que las elevaciones sostenidas en ΔFosB no son necesarias o suficientes para el establecimiento de un CPP con etanol en la edad adulta. Estos estudios subrayan la importancia de evaluar el fenotipo de comportamiento al determinar los efectos celulares y de comportamiento de la exposición a la nicotina en los adolescentes.

Keywords: Adicción, Adolescente, ΔFosB, Etanol, Nicotina, Recompensa

1. Introducción

Numerosos estudios han indicado que la búsqueda de novedades y la exploración intensa se asocian con una mayor sensibilidad a la recompensa de las drogas [ 1-8 ] . Se ha demostrado que los adolescentes muestran una mayor búsqueda de novedades y exploración que los adultos [ 9-11 ] , y varios informes demuestran que los adolescentes tienen más probabilidades que los adultos de desarrollar una adicción al iniciar el consumo de drogas [ 12-18 ] . Por lo tanto, los adolescentes pueden ser más susceptibles a los efectos reforzadores y gratificantes de las drogas de abuso, y aquellos con un perfil de búsqueda de sensaciones intensas pueden representar la población más vulnerable.

Las dos drogas más comúnmente utilizadas por los adolescentes son la nicotina y el alcohol [ 19 , 20 ], y la evidencia sugiere que el uso de nicotina afecta el consumo de alcohol. Los comportamientos de fumar y beber a menudo ocurren juntos, y la frecuencia de un comportamiento está asociada con la frecuencia del otro [ 21 ]. Grant [ 22 ] informó que casi el 29% de las personas que comienzan a fumar antes de los 14 años se vuelven dependientes del alcohol y el 8% progresan al abuso de alcohol durante su vida. Además, el 19% de quienes comienzan a fumar entre los 14 y los 16 años se vuelven dependientes del alcohol, y el 7% de estas personas progresan al abuso de alcohol. Curiosamente, las personas que no comienzan a fumar hasta los 17 años tienen la mitad de probabilidades de volverse dependientes del alcohol o progresar a la adicción. Por lo tanto, el inicio temprano del tabaquismo es un fuerte predictor del consumo de alcohol a lo largo de la vida, así como de la dependencia y el abuso de alcohol [ 22 ].

Se ha demostrado que la exposición a la nicotina durante la adolescencia aumenta los efectos gratificantes de varias drogas en animales de laboratorio adultos, incluyendo nicotina, cocaína y diazepam [ 23 – 26 ]. Además, Riley et al. [ 27 ] demostraron que la administración de nicotina a ratones durante la adolescencia, pero no en la edad adulta, aumenta la sensibilidad a la abstinencia de etanol cuando se mide en la edad adulta, y sugirieron que la adolescencia representa un período crítico de sensibilidad a la nicotina que produce cambios en el cerebro que persisten hasta la edad adulta. Esta idea está respaldada por varios estudios que demuestran que la exposición a la nicotina durante la adolescencia conduce a un estado ansiogénico en la edad adulta [ 28 – 30 ]. Es posible que las alteraciones duraderas tras la exposición a la nicotina en la adolescencia involucren al factor de transcripción ΔFosB, que ha demostrado producir una sensibilización persistente de la vía mesolímbica y aumentar la sensibilidad a las propiedades motivacionales de varias drogas de abuso, incluido el alcohol [ 31–34 ], y cuya sobreexpresión en el sistema límbico mejora las preferencias por las drogas [ 31 , 35 ]. Curiosamente, los animales adolescentes muestran mayores aumentos que los adultos en ΔFosB en el núcleo accumbens (NAcc) en respuesta a la administración de cocaína o anfetamina [ 36 ]; el efecto de la administración de nicotina durante la adolescencia sobre ΔFosB no se ha examinado. Debido a que los animales adolescentes muestran una mayor regulación positiva de ΔFosB en relación con los adultos en respuesta a las drogas de abuso, pueden ser más sensibles a los estímulos gratificantes tras una exposición repetida que los adultos expuestos de manera similar. Esta idea está respaldada por estudios que indican que las ratas adolescentes que establecen una preferencia de lugar condicionada (PPC) inducida por nicotina después de 4 inyecciones exhiben un aumento en la inmunorreactividad de FosB (la variante de empalme ΔFosB no se midió específicamente) en el área tegmental ventral (ATV), NAcc y corteza prefrontal (CPF) inmediatamente después de las pruebas de comportamiento [ 37 ].

A pesar de la evidencia de que la adolescencia es un período de mayor búsqueda de sensaciones y primer uso de drogas, que el uso de nicotina está vinculado con un mayor uso de etanol, y que una mayor sensibilidad a las drogas de abuso está asociada con la acumulación de ΔFosB [ 31 ], el impacto de la exposición a la nicotina en la adolescencia sobre los niveles de ΔFosB y sus consecuencias a largo plazo sobre la recompensa del etanol no están claros. Por lo tanto, este estudio: 1) determinó los efectos de la administración de nicotina en la adolescencia sobre la preferencia por el alcohol en la edad adulta en ratas caracterizadas durante la adolescencia por su reactividad conductual a un entorno novedoso, es decir, exhibiendo una actividad locomotora alta o baja; y 2) determinó si la nicotina alteró el ΔFosB en el estriado ventral (vStr) y la corteza prefrontal (PFC) de estos animales inmediatamente después de la administración en la adolescencia o después de que las ratas maduraron a la edad adulta.

2. Métodos

Materiales 2.1

El etanol se obtuvo de AAPER Alcohol and Chemical Company (Shelbyville, KY). Todos los demás reactivos se adquirieron de Sigma-Aldrich Life Sciences (St. Louis, MO) a menos que se indique lo contrario.

2.2 Temas

Las crías macho y hembra (n = 89) de ratas embarazadas cronometradas (n = 10) se utilizaron como sujetos; el día de nacimiento se definió como el día posnatal 0 (PND 0). Para asegurar un desarrollo similar en las camadas, todas las camadas se sacrificaron a crías 10 – 12 (machos 5 – 6 / hembras 5 – 6) en PND 1, y permanecieron alojadas con sus respectivas represas hasta PND 21, momento en el que los animales fueron destetados y alojados. en grupos del mismo sexo de 3 en jaulas de polipropileno estándar con ropa de cama de mazorcas de maíz. Todos los animales se alojaron en la Universidad del Sur de Florida en un vivero con temperatura y humedad en un ciclo de luz-oscuridad 12: 12-hr (7 am / 7 pm). Los experimentos se realizaron durante la fase de luz, y el cuidado y uso de los animales se realizó de acuerdo con las pautas establecidas por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales y la Guía de Institutos Nacionales de la Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio. De acuerdo con estas directrices, los experimentos utilizaron la menor cantidad de animales por grupo necesarios para obtener datos significativos.

Caracterización 2.3 de la reactividad del comportamiento a un entorno nuevo

La actividad locomotora se utilizó para caracterizar la reactividad conductual de las ratas a un entorno novedoso. Para ello, en el día postnatal 31, los animales fueron retirados de su jaula y colocados en una arena circular (100 cm de diámetro) bajo iluminación moderada (20 lux) durante 5 min. La distancia total recorrida (TDM) se registró automáticamente con una cámara de vídeo y se analizó utilizando el software EthoVision (Noldus Information Technology, Leesburg, VA) como se describe [ 38 ]. Los animales se clasificaron como de alta (HLA) o baja (LLA) actividad locomotora en el campo abierto novedoso utilizando una estrategia de división por la mediana, con los primeros exhibiendo actividad en el 50% superior y los segundos en el 50% inferior en relación con sus hermanos de camada [ 4 ].

Inyecciones de nicotina 2.4

Los animales recibieron inyecciones (sc) de solución salina tamponada con fosfato (PBS, 0.9 %) o bitartrato de hidrógeno de nicotina en PBS (0.56 mg de nicotina base libre/kg) una vez al día durante 4 u 8 días a partir del día posnatal 35. Se ha demostrado que esta dosis de nicotina aumenta la respuesta a estímulos condicionados [ 39 , 40 ] y aumenta los puntos de ruptura para la respuesta reforzada [ 41 ], lo que indica que es gratificante y reforzante, y se utilizó en un estudio previo con adolescentes [ 38 ]. Para cada inyección, los animales fueron transportados en su jaula de origen a una sala de procedimientos con poca luz, colocados en una jaula nueva forrada con lecho fresco, inyectados y devueltos a su jaula de origen.

2.5 Preferencia de lugar condicionado (CPP)

Para las medidas de CPP, las ratas recibieron inyecciones de nicotina desde PND 35–42 y 18 días después de la última inyección de nicotina, en PND 60, los animales (n=40; ​​4–5 por grupo) tuvieron acceso libre a dos cámaras de plexiglás interconectadas (cada cámara: 21 cm de ancho × 18 cm de largo × 21 cm de alto) que contenían señales visuales (rayas verticales u horizontales blancas y negras) y táctiles distintas (suelo de goma o papel de lija) durante tres intervalos de 5 minutos. El tiempo medio que pasaron en cada lado del aparato se utilizó para determinar la preferencia de cámara basal para cada animal. Aunque cada animal exhibió una preferencia de lado en la línea de base, no hubo una tendencia dentro de la población a que una cámara en particular fuera preferida. Durante los siguientes 8 días, desde PND 61 hasta 68, se utilizó un paradigma de condicionamiento sesgado en el que los animales fueron entrenados para asociar la cámara no preferida con los efectos subjetivos del etanol. Para el condicionamiento, cada animal recibió una inyección de etanol (17%; 1.0 g/kg, ip) y posteriormente fue confinado a la cámara inicialmente no preferida durante 15 min. Se ha demostrado que esta dosis y concentración de etanol establece un CPP durante la adolescencia tardía [ 42 ] y eleva significativamente la dopamina en el NAcc de animales adolescentes y adultos jóvenes [ 43 , 44 ]. Los animales de control fueron confinados durante 15 min a la cámara inicialmente no preferida después de una inyección de solución salina (0.9%, ip). Tanto los animales condicionados con etanol como los de control recibieron inyecciones de solución salina antes de ser confinados a la cámara inicialmente preferida durante 15 min cada día. Por lo tanto, cada animal recibió 2 sesiones de entrenamiento por día, una para la cámara inicialmente no preferida y otra para la preferida. El orden de estas sesiones se alternó cada día y ocurrieron por la mañana y por la tarde, separadas por al menos 5 horas. En el día postnatal 69, aproximadamente entre 16 y 18 horas después de la última sesión de entrenamiento, se permitió a los animales el acceso libre a ambas cámaras durante 5 minutos y se midió el tiempo que permanecieron en cada una para evaluar el condicionamiento de preferencia de lugar (CPP). Se calculó una puntuación de preferencia restando el tiempo que los animales pasaron en la cámara inicialmente preferida del tiempo que pasaron en la cámara inicialmente no preferida.

Análisis de transferencia Western de 2.6

Para los análisis de inmunoblot, las ratas fueron decapitadas rápidamente y el vStr y PFC se aislaron 24 h después de la 4.ª u 8.ª inyección de nicotina en PND 39 o 43, respectivamente, (n=32; 4 por grupo) o 26 días después de la 8.ª inyección en PND 69 (n=16; 4 por grupo), correspondiente al día en que se evaluó el CPP en un grupo separado de animales. El tejido se congeló rápidamente en hielo seco y se almacenó a −80 °C hasta su homogeneización como se describe [ 38 ]. Las proteínas se separaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (10 % de poliacrilamida) y se transfirieron electroforéticamente a membranas de fluoruro de polivinilideno. Las membranas se bloquearon durante 1 hora en solución salina tamponada con Tris que contenía 0.1 % de Tween 20 y 5 % de leche desnatada en polvo. Posteriormente, se añadió el anticuerpo primario [FosB (5G4) #2251, 1:4000; Cell Signaling, Danvers, MA], que produce un marcado robusto de ΔFosB [ 45 ], en solución de bloqueo y las membranas se incubaron durante la noche a 4 °C. Dieciséis horas después, las membranas se lavaron y se incubaron con el anticuerpo secundario [IgG de cabra anti-conejo-HRP, 1:2000, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA] en solución de bloqueo durante 1 hora a temperatura ambiente, y las señales se visualizaron mediante quimioluminiscencia mejorada. Después de la inmunodetección, los blots se decaparon, se bloquearon y se incubaron con un anticuerpo primario dirigido contra la β-tubulina [H-235, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 1:16 000] como control de carga. La banda de 35/37 kDa que representa a ΔFosB y la banda de 50 kDa correspondiente a β-tubulina se cuantificaron en cada Western blot utilizando un densitómetro y el software de digitalización de geles Un-Scan-It (Silk Scientific Inc., Orem, Utah). La densidad óptica de la primera se normalizó con respecto a la segunda para cada muestra, y los resultados se expresan como porcentaje de los controles salinos correspondientes en cada Western blot para eliminar la variabilidad entre ellos.

Análisis estadísticos 2.7

Se utilizó un análisis de varianza de 4 factores (ANOVA) para determinar los efectos sobre la CPP [(hombre o mujer) × (HLA o LLA) × (exposición a solución salina o nicotina) × (acondicionamiento con solución salina o etanol)] y la prueba de Tukey se utilizó post hoc para determinar diferencias significativas entre grupos. Se utilizó un ANOVA de 3 factores para determinar las diferencias en ΔFosB entre animales HLA y LLA machos y hembras [(macho o hembra) × (HLA o LLA) × (solución salina o nicotina)] con la prueba t de Student realizada post hoc para determinar la diferencias entre grupos. Se aceptó un nivel de p <0.05 como evidencia de un efecto significativo. Debido a que el tamaño de la muestra en estos estudios fue pequeño, lo que llevó a una reducción del poder estadístico, el tamaño del efecto (η2ρ) o D de Cohen) se determinó para todos los análisis y los efectos no significativos con un tamaño del efecto superior a 0.06 (η2ρ) o 0.4 (D) son reportados.

3. Resultados

Reactividad del comportamiento de 3.1 en un entorno nuevo

La actividad locomotora exhibida por ratas adolescentes en un campo abierto novedoso durante 5 min se muestra en la Figura 1. El TDM tuvo una distribución normal (Kolmogorov-Smirnov D = 0.083, p > 0.05), con animales que exhibieron un rango de movimiento entre 4339 y 7739 cm/5 min. La mediana del TDM fue de 5936 cm/5 min con un animal en la mediana (mostrado en el círculo gris), que fue excluido del estudio posterior. El TDM para los grupos HLA y LLA fue significativamente diferente [t(86) = 12.15, p<0.05; D de Cohen =2.56] con un TDM de 6621 TDM ± 71 cm/5 min para los animales HLA y 5499 ± 59 cm/5 min para los animales LLA. Los animales fueron asignados sistemáticamente a grupos experimentales según su reactividad conductual al nuevo entorno para asegurar que todos los grupos presentaran una actividad equivalente en el campo abierto novedoso y que contuvieran un número igual de animales HLA y LLA ( Tabla 1 ). Además, no se asignó más de un macho y una hembra de cada camada a cada grupo.

   

Clasificación de la reactividad del comportamiento de ratas adolescentes a un entorno nuevo. La actividad locomotora de los animales adolescentes (N = 89) se determinó midiendo la distancia total recorrida (TDM) en un nuevo campo abierto para 5 mín. Los animales fueron clasificados ...
Tabla 1  

Novedosas actividades de campo abierto exhibidas por ratas adolescentes.

3.2 Ethanol CPP en la edad adulta después de la exposición a la nicotina durante la adolescencia

El primer conjunto de experimentos determinó si la exposición a la nicotina durante la adolescencia aumentaba la vulnerabilidad a los efectos gratificantes del alcohol en la edad adulta, y determinó si las respuestas dependían de la reactividad del comportamiento de las ratas a un entorno novedoso. Después de la clasificación de ratas como HLA o LLA, los animales recibieron inyecciones de solución salina o nicotina de PND 35-42, y se determinó la CPP a etanol cuando las ratas eran adultos jóvenes en PND 69. Los resultados se muestran en Figura 2 y XNUMX. ANOVA indicó una interacción significativa de 3 vías entre la nueva actividad de campo abierto (HLA o LLA), la exposición a la nicotina y el acondicionamiento de etanol [F (1,19) = 5.165, p <0.05], con una potencia observada de 0.578 y un efecto estimado Talla (η2ρ) de 0.214. No se observaron diferencias significativas entre hombres y mujeres como efecto principal o interacción y el tamaño del efecto (η2ρ) fue menor de 0.06 en todos los casos, lo que indica que esta variable tuvo poco impacto en los resultados observados. Los animales HLA expuestos a nicotina durante la adolescencia y acondicionados con etanol en la edad adulta mostraron una preferencia por el compartimento emparejado con etanol en comparación con los animales HLA que fueron expuestos a nicotina y acondicionados con solución salina o expuestos a solución salina y acondicionados con etanol [p <0.05]. Los animales LLA expuestos a nicotina parecían exhibir una aversión a la cámara emparejada de etanol en comparación con los animales expuestos a la solución salina correspondiente con un tamaño del efecto (D de Cohen) de 0.80, pero este efecto no alcanzó significación [t (7) = 1.346, p> 0.05] a una potencia observada de 0.425. Por lo tanto, los datos indicaron que los adolescentes HLA poseen una vulnerabilidad a la recompensa del etanol que puede ser preparada o iniciada por la exposición de los adolescentes a la nicotina, mientras que los animales HLA expuestos a LLA y solución salina exhiben respuestas al etanol típicas de ratas adultas [42, 46].

   

Efectos de la exposición a la nicotina en adolescentes sobre la preferencia de lugar condicionada inducida por etanol (CPP) en adultos. Las ratas se clasificaron como que exhibían HLA o LLA en PND 31 como se describe, y recibieron inyecciones de solución salina (0.9%) o nicotina (0.56 mg base libre / kg) ...

3.3 ΔFosB en la adolescencia durante la exposición repetida a la nicotina

Debido a que los aumentos en osFosB en las estructuras límbicas aumentan la preferencia de las drogas [15,16], los experimentos determinaron si la exposición a la nicotina en los adolescentes tenía un efecto diferencial sobre los niveles de este factor de transcripción en vStr y PFC de ratas HLA y LLA. Después de la clasificación de comportamiento, las ratas macho y hembra recibieron inyecciones de solución salina o nicotina para los días 4 o 8 a partir de PND 35. Las muestras de cerebro se aislaron 24 horas después de la inyección final en PND 39 o 43, respectivamente, y se sometieron a análisis de inmunotransferencia Western. Resultados de las mediciones de ΔFosB en la vStr (Figura 3 y XNUMX) indicó un efecto principal significativo tanto del número de días de inyecciones [F (1, 16) = 4.542, p <0.05; η2ρ=0.221] y exposición a drogas [F (1, 16) = 18.132, p <0.05; η2ρ=0.531] y una interacción entre la exposición al fármaco y el fenotipo que se acercó a la significación [F (1, 16) = 3.594, p = 0.076; η2ρ=0.183]. No se observaron diferencias significativas entre hombres y mujeres como efecto principal o interacción, y tamaño del efecto (η2ρ) fue menor de 0.025 en todos los casos, lo que indica que el sexo tuvo poco efecto sobre los resultados observados. Cuatro días de exposición a la nicotina aumentaron significativamente los niveles de ΔFosB (p <0.05) solo en el vstr de ratas HLA, y este aumento persistió luego de 8 días de exposición a la nicotina, un momento en el que la nicotina también aumentó significativamente (p <0.05) los niveles de ΔFosB en vStr de Ratas LLA. El análisis de ΔFosB en el PFC reveló una interacción significativa entre el número de días de inyecciones y la exposición al fármaco [F (1, 16) = 7.912, p = 0.05; η2ρ=0.331]. No se observaron diferencias significativas entre hombres y mujeres como efecto principal o interacción; sin embargo, la interacción del sexo con los días de inyección y la exposición al fármaco se aproximó significativamente (p = 0.055; η2ρ=0.211) con hombres que tienden a exhibir valores de ΔFosB más altos después de 4 días de nicotina que las mujeres. En general, los niveles de ΔFosB en PFC no se alteraron después de 4 días de exposición a la nicotina en animales HLA o LLA, pero 8 días de exposición a la nicotina condujeron a aumentos significativos similares (p <0.5) en ΔFosB en el tejido de ratas HLA y LLA. Por tanto, la nicotina tuvo un efecto de tiempo diferencial sobre los niveles de ΔFosB en vStr de ratas HLA y LLA, pero no sobre los niveles en PFC.

   

Efectos de la exposición a la nicotina en adolescentes sobre los niveles de ΔFosB en el cuerpo estriado ventral y la corteza prefrontal. Las ratas se clasificaron como que exhibían HLA o LLA en PND 31 como se describe, recibieron inyecciones de solución salina (0.9%) o nicotina (0.56 mg libre) ...

3.4 ΔFosB en la adultez después de la exposición a la nicotina durante la adolescencia

Para determinar si las elevaciones inducidas por la nicotina en ΔFosB observadas en la adolescencia persistieron durante la adultez temprana, luego de la clasificación conductual de ratas, los animales recibieron inyecciones de solución salina o nicotina para los días 8 de PND 35 – 42 y 27 días después, en PND 69, Se aislaron vStr y PFC y se cuantificó ΔFosB. Resultados de las mediciones de ΔFosB en la vStr (Figura 4 y XNUMX) indicó un efecto principal significativo de ambos fenotipos [F (1, 16) = 14.349, p <0.05; η2ρ=0.642] y exposición a drogas [F (1, 16) = 7.368, p <0.05; η2ρ=0.479]. De manera similar, los resultados de las mediciones de ΔFosB en el PFC indicaron un efecto principal significativo del fenotipo [F (1, 16) = 9.17, p <0.05; η2ρ=0.534] y exposición a drogas [F (1, 16) = 10.129, p <0.05; η2ρ=0.559]. No se observaron diferencias significativas entre hombres y mujeres como efecto principal o interacción para las mediciones de ΔFosB en vStr o PFC. Sin embargo, el tamaño del efecto (η2ρ) para el efecto principal del sexo fue de 0.143 y 0.191 para vStr y PFC respectivamente, con hombres que tienden a exhibir valores de ΔFosB más altos que las mujeres. Los niveles de ΔFosB no se alteraron tanto en el vStr como en el PFC de los animales HLA que recibieron nicotina durante la adolescencia en relación con sus homólogos expuestos a la solución salina. En contraste, los niveles de ΔFosB tanto en vStr como en PFC de ratas LLA que recibieron nicotina durante la adolescencia fueron significativamente (p <0.05) mayores que los de animales LLA inyectados con solución salina [vStr t (3) = 2.47, p <0.05; PFC t (3) = 2.013, p <0.05] o animales HLA inyectados con nicotina [vStr t (6) = 3.925, p <0.05; PFC t (6) = 2.864, p <0.05]. Por tanto, aunque 8 días de exposición a la nicotina en adolescentes condujeron a aumentos inmediatos en los niveles de ΔFosB en vStr y PFC tanto de animales HLA como LLA, este efecto persistió hasta la edad adulta solo en animales LLA.

   

Efectos de la exposición a la nicotina en adolescentes sobre los niveles de ΔFosB en el cuerpo estriado ventral y la corteza prefrontal de los adultos. Las ratas se clasificaron como que exhibían HLA o LLA en PND 31, recibieron inyecciones de 8 de solución salina (0.9%) o nicotina (0.56 mg libre) ...

4. Discusión

El presente estudio demuestra que la exposición a la nicotina durante la adolescencia tiene efectos diferenciales sobre el condicionamiento de preferencia de lugar (CPP) al etanol y alteraciones en ΔFosB en regiones límbicas de ratas con diferentes reactividades conductuales a un entorno novedoso. La exposición a la nicotina durante la adolescencia facilitó el establecimiento de un CPP al etanol en la edad adulta únicamente en los animales que mostraron una alta actividad locomotora en el entorno novedoso durante la adolescencia. Además, si bien la exposición a la nicotina durante la adolescencia aumentó los niveles de ΔFosB en el vStr y la PFC después de 8 días de administración, este aumento persistió en la edad adulta únicamente en los animales que mostraron una baja actividad locomotora en un entorno novedoso.

Por lo tanto, los resultados indican que los efectos de la exposición a la nicotina de los adolescentes en la CPP con etanol en la edad adulta dependen del fenotipo de comportamiento de los animales, y sugieren que las elevaciones sostenidas de ΔFosB en las regiones límbicas no son necesarias o suficientes para facilitar una CPP con etanol en la edad adulta.

El hallazgo de que la exposición a la nicotina en la adolescencia facilita un CPP al etanol en la edad adulta en animales HLA concuerda con los hallazgos de que los individuos con mayor reactividad conductual a estímulos novedosos exhiben una mayor sensibilidad a los efectos gratificantes de los compuestos de abuso que los individuos con menor reactividad [ 1 – 8 ]. Sin embargo, cabe señalar que un CPP puede producirse por el refuerzo de conductas específicas durante el condicionamiento o ser resultado de los efectos condicionados de la droga [ 47 ], y por lo tanto, se debe tener precaución al interpretar los resultados del CPP como indicativos de una mayor recompensa de la droga. De hecho, Smith et al. [ 48 ] no observaron un aumento en la ingesta de etanol en ratas Sprague-Dawley adultas después de la exposición a la nicotina en la adolescencia, lo que sugiere que las propiedades gratificantes del etanol no se modificaron por la experiencia previa con la nicotina. Sin embargo, estos autores utilizaron un paradigma de exposición continua durante 21 días y no distinguieron a los animales en función de la actividad locomotora en un entorno novedoso. Los resultados del presente estudio sugieren que las consecuencias de las inyecciones diarias de nicotina pueden diferir de las producidas por la exposición continua a la nicotina y demuestran la importancia de distinguir entre ratas HLA y LLA, una distinción que puede ser particularmente importante al estudiar adolescentes. Aunque muchos investigadores han informado que la población adolescente puede ser más sensible a los efectos gratificantes y reforzadores de las drogas [ 49–51 ] , esta observación probablemente refleja la tendencia evolutiva de los adolescentes a poseer características de animales HLA [ 10 ]. De hecho, estudios en la población humana han demostrado que la búsqueda de sensaciones alcanza su punto máximo durante la adolescencia y disminuye posteriormente, siendo aquellos que mantienen una búsqueda de sensaciones similar a la de los adolescentes los más propensos a aumentar el consumo de alcohol [ 52 ].

Los resultados que indican un efecto diferencial de la exposición a la nicotina en la adolescencia sobre ΔFosB en el cerebro de ratas HLA y LLA subrayan las diferencias inherentes entre estos grupos de animales. Los resultados muestran un claro aumento en los niveles de ΔFosB en el vStr y PFC de ambos grupos de ratas después de 8 días de exposición a la nicotina en la adolescencia, pero este efecto persistió hasta la edad adulta solo en el cerebro de ratas LLA. Soderstrom et al. [ 53 ] demostraron que 10 días de exposición a la nicotina (0.4 mg/kg, ip) desde PND 34–43 aumentaron la inmunorreactividad de FosB en el NAcc a los 37 días después de la última inyección de nicotina, pero estos autores no midieron específicamente ΔFosB ni caracterizaron el fenotipo conductual de los animales. Los resultados que indican que las elevaciones prolongadas en ΔFosB después de la exposición a la nicotina en la adolescencia ocurren solo en adolescentes LLA sugieren que los adolescentes LLA son más "similares a los adultos" que sus contrapartes HLA. De hecho, se ha demostrado repetidamente una elevación prolongada de ΔFosB después de la administración de fármacos en animales adultos [ 31 , 33 , 34 ].

Se esperaba que los animales HLA expuestos a la nicotina durante la adolescencia demostraran tanto un CPP inducido por etanol en la edad adulta como una elevación sostenida de ΔFosB que presumiblemente sensibilizara las vías de recompensa. Sin embargo, los resultados indican que las elevaciones persistentes de ΔFosB tras la exposición a la nicotina en la adolescencia no son ni necesarias ni suficientes para el establecimiento de un CPP por etanol en la edad adulta. Dado que el paradigma de CPP sesgado utilizado en este estudio es sensible a los efectos ansiolíticos del etanol [ 54 , 55 ], el CPP inducido por etanol observado tras la exposición a la nicotina en la adolescencia puede estar mediado por cambios en la sensibilidad a los efectos ansiolíticos del etanol, en lugar de ser el resultado de una vía de recompensa sensibilizada. Los animales adultos expuestos a la nicotina durante la adolescencia muestran una mayor sensibilidad al estrés y la ansiedad en la edad adulta, como lo demuestra la elevación de la corticosterona [ 28 ], la disminución de la exploración del campo abierto novedoso y la disminución del tiempo en los brazos abiertos del laberinto elevado en cruz [ 29 , 30 ]. Por lo tanto, parece probable que los animales adultos expuestos a la nicotina durante la adolescencia puedan exhibir un CPP de etanol en un paradigma sesgado como consecuencia de las propiedades ansiolíticas del etanol. Curiosamente, los animales que exhiben una expresión elevada de ΔFosB pueden ser menos sensibles al estrés y la ansiedad como lo indica el mayor tiempo que pasan en los brazos abiertos del laberinto elevado en cruz [ 56 ], el mayor tiempo de natación en la prueba de natación forzada de Porsolt [ 56 ], la mayor resiliencia después del estrés por derrota social [ 57 ] y una respuesta de corticosterona disminuida al estrés por restricción [ 58 ]. Por lo tanto, los animales LLA expuestos a la nicotina, que exhiben una expresión sostenida de ΔFosB en la edad adulta, pueden no encontrar gratificantes los efectos ansiolíticos del etanol y, como consecuencia, no exhibir un CPP en el paradigma sesgado. De hecho, los animales LLA a los que se les inyectó etanol mostraron una gran reducción (D = 0.80) en el tiempo que pasaron en el lado asociado al etanol, en comparación con los animales LLA a los que se les inyectó solución salina, lo que sugiere una aversión condicionada al lugar inducida por el etanol. Se necesitan más estudios para confirmar las diferencias entre los animales HLA y LLA en cuanto al comportamiento ansioso y la sensibilidad al estrés tras la exposición a la nicotina durante la adolescencia.

Aunque no se observaron diferencias estadísticamente significativas entre animales machos y hembras, sí se observaron algunos efectos relacionados con el sexo, de moderados a grandes. Las mediciones de ΔFosB en la corteza prefrontal fueron aproximadamente un 25 % menores en los adolescentes varones que en sus contrapartes femeninas después de 4 inyecciones de solución salina, y aproximadamente un 19 % mayores en los adolescentes varones que en las adolescentes después de 4 inyecciones de nicotina, lo que sugiere que los varones adolescentes podrían presentar un aumento en ΔFosB tras menos exposiciones a la nicotina que las mujeres adolescentes. Además, las mediciones de ΔFosB fueron entre un 15 % y un 17 % mayores en el estriado ventral y la corteza prefrontal de los varones adultos que en las hembras adultas, independientemente de si estos animales fueron expuestos a solución salina o nicotina durante la adolescencia. Este último hallazgo es consistente con un informe que demuestra que los machos adultos presentan niveles ligeramente más altos de ΔFosB en las regiones central y periférica del núcleo accumbens que sus contrapartes femeninas, y que esta diferencia está presente en animales a los que se les inyectó solución salina o cocaína (15 mg/kg) durante 2 semanas, lo que indica que esta diferencia es independiente de la exposición a la droga [ 45 ]. Hasta donde sabemos, ningún estudio en animales adolescentes o adultos ha examinado las diferencias sexuales en la expresión de ΔFosB después de la exposición a la nicotina; estos hallazgos justifican una mayor investigación.

En resumen, los animales adolescentes que demuestran diferencias en la reactividad conductual a un entorno nuevo también presentan diferencias en: 1) las consecuencias a largo plazo de la exposición a la nicotina sobre la sensibilidad a los efectos del etanol en la edad adulta; 2) la inducción de ΔFosB durante la exposición repetida a la nicotina; y 3) la persistencia de ΔFosB después de la exposición repetida a la nicotina. Estos hallazgos proporcionan una base para investigar las diferencias en las vulnerabilidades inherentes de los animales adolescentes, características que pueden evaluarse utilizando medidas de comportamiento relativamente simples.

Destacados

  • La exposición a la nicotina en los adolescentes da como resultado un CPP con alcohol en adultos que buscan sensación alta
  • La exposición a la nicotina en adolescentes aumenta la expresión de ΔFosB
  • ExpressionLa expresión de FosB después de la nicotina adolescente persiste hasta la edad adulta en los buscadores de baja sensación

AGRADECIMIENTOS

La investigación fue apoyada por el Estado de Florida y NIAAA de los Institutos Nacionales de la Salud con el número de premio F32AA016449. El contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representa necesariamente las opiniones oficiales del Estado de Florida o los Institutos Nacionales de Salud.

Notas a pie de página

Aviso legal del editor: Este es un archivo PDF de un manuscrito sin editar que ha sido aceptado para su publicación. Como servicio a nuestros lectores, proporcionamos esta versión preliminar del manuscrito. El manuscrito se someterá a corrección de estilo, maquetación y revisión de pruebas antes de su publicación en su versión final citable. Tenga en cuenta que durante el proceso de producción pueden detectarse errores que podrían afectar al contenido, y se aplican todas las exenciones de responsabilidad legales de la revista.

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