Comer 'comida chatarra' produce aumentos rápidos y duraderos en los receptores NAc CP-AMPA; Implicaciones para la motivación mejorada inducida por señales y la adicción a la comida (2016)

Introducción

Si bien las ganas de comer están reguladas por el hambre, la saciedad y la demanda de energía, también están fuertemente influenciadas por los estímulos en el ambiente que están asociados con los alimentos (señales de los alimentos). Por ejemplo, en personas no obesas, la exposición a las señales de alimentos aumenta el deseo de alimentos y la cantidad de alimentos consumidos (Fedoroff et al, 1997; Soussignan et al, 2012). Las personas obesas son más sensibles a estas propiedades motivacionales de las señales de los alimentos, informan de un deseo más fuerte por la comida y consumen porciones más grandes después de la exposición a la comida (Rogers y Hill, 1989; Yokum et al, 2011). Estas similitudes de comportamiento entre los antojos inducidos por alimentos y drogas han llevado al concepto de que la "adicción a los alimentos" inducida por el consumo de alimentos con alto contenido de azúcar y grasa puede contribuir a la epidemia de obesidad (Carr et al, 2011; Epstein y Shaham, 2010; Kenny, 2011; Rogers y Hill, 1989; Volkow et al, 2013).

La evidencia predominantemente de estudios en humanos sugiere que el ansia de alimentos provocada por señales en individuos obesos implica alteraciones en la función del núcleo accumbens (NAc), una región que durante mucho tiempo se sabe que medía la motivación para obtener recompensas de alimentos y medicamentos, pero eso está cada vez más implicado en la obesidad. . Por ejemplo, los estudios en RMF humanos muestran que las activaciones en la NAc desencadenadas por las señales de los alimentos son más fuertes en las personas obesas (Stice et al, 2012; Volkow et al, 2013; Pequeño, 2009). Además, la capacidad de respuesta mejorada en el NAc a las señales de los alimentos predice el aumento de peso futuro y la dificultad para perder peso en los seres humanos (Demos et al, 2012; Murdaugh et al, 2012). En ratas, la obesidad inducida por la dieta produce respuestas motivacionales mejoradas a las señales de los alimentos, particularmente en poblaciones susceptibles a la obesidad (Marrón et al, 2015; Robinson et al, 2015). En conjunto, estos datos sugieren que el consumo de alimentos grasos y azucarados produce neuroadaptaciones en la función de NAc que pueden mejorar los procesos motivacionales.

Tanto en ratas como en humanos, la susceptibilidad a la obesidad puede tener un papel importante en los efectos de los "alimentos chatarra" sabrosos y ricos en calorías sobre la función y el comportamiento neuronal (Albuquerque et al, 2015; Geiger et al, 2008; Robinson et al, 2015; Stice y Dagher, 2010). Aunque es difícil abordar el papel de la susceptibilidad en los humanos, los estudios en ratas han demostrado que las alteraciones inducidas por la dieta en los sistemas mesolímbicos y la motivación son más pronunciadas en los sujetos susceptibles a la obesidad vs -ratas resistentes (Geiger et al, 2008; Vollbrecht et al, 2016; Robinson et al, 2015; Valenza et al, 2015; Oginsky et al, 2016). Por lo tanto, los datos recientes sugieren que el consumo de 'alimentos chatarra' puede producir distintas alteraciones neuronales en la sensibilidad vs Poblaciones resistentes.

Los receptores de glutamato de tipo AMPA (AMPAR) son la principal fuente de excitación para el NAc, y la capacidad de las señales de los alimentos para desencadenar la búsqueda de alimentos depende en parte de la activación de los AMPAR en el núcleo del NAc (Di Ciano et al, 2001). Además, el consumo de alimentos azucarados y grasos y la obesidad pueden alterar la transmisión excitatoria en la NAc (Tukey et al, 2013; Marrón et al, 2015). Además, el trabajo reciente de nuestro laboratorio y otros ha demostrado que la motivación provocada por la señal de incitación aumenta en las poblaciones susceptibles a la obesidad (Robinson et al, 2015; Marrón et al, 2015). El objetivo del presente estudio fue determinar cómo el consumo de comida chatarra en ratas susceptibles y resistentes a la obesidad afecta la expresión y la transmisión de AMPAR en el núcleo de NAc, ya que los AMPAR mediaron la búsqueda de fármacos activados por señales, pero no se han examinado en dietas inducidas. Modelos de obesidad. Además, la actividad locomotora inducida por la cocaína se usó como una 'lectura' general de la función mesolímbica, ya que la mayor capacidad de respuesta de los circuitos mesolímbicos aumenta el impacto motivacional de las señales alimentarias (Wyvell y Berridge, 2000, 2001).

Se utilizaron dos modelos de roedores complementarios para determinar el papel de la susceptibilidad en las alteraciones inducidas por la "comida chatarra" en AMPAR de NAc. En primer lugar, se identificaron ratas Sprague-Dawley excretas que recibieron 'comida chatarra' como 'Ganadores' y 'No Ganadores' (como en Robinson et al, 2015), después de lo cual se midieron las diferencias neuronales y de comportamiento. Aunque informativo, este modelo requiere la inducción del aumento de peso y la manipulación de la dieta para identificar poblaciones susceptibles. Por lo tanto, también examinamos los efectos de la comida chatarra en ratas criadas selectivamente por su propensión o resistencia a la obesidad inducida por la dieta (Levin et al, 1997; Vollbrecht et al, 2015, 2016).

Materiales y métodos

Materias

Las ratas se alojaron en parejas en un horario inverso claro-oscuro (12 / 12) con acceso gratuito a alimentos y agua en todo momento y se envejecieron 60-70 días al comienzo del experimento. Se compraron ratas Sprague-Dawley macho de Harlan. Se criaron en casa ratas con tendencia a la obesidad y resistentes. Estas líneas fueron establecidas originalmente por Levin et al (1997); Los criadores fueron comprados de Taconic. La inclusión de ratas criadas permite las comparaciones con la literatura más amplia existente, mientras que las ratas criadas selectivamente nos permiten diferenciar las alteraciones debidas a la obesidad vs Manipulación de la dieta. El peso se midió 1 – 2 veces por semana. Todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité de Uso y Cuidado de Animales de la UM.

Dieta De La Comida Basura Y La Identificación De La Obesidad-Ratas Exactas Susceptibles Y Resistentes

La 'comida chatarra' es una mezcla de: Patatas fritas Ruffles originales (40 g), Chips Ahoy galletas de chocolate originales (130 g), mantequilla de maní suave Jif (130 g), Nesquik en polvo sabor chocolate (130 g), en polvo Lab Diet 5001 (200 g;% de calorías: 19.6% de grasa, 14% de proteína, 58% de carbohidratos, 4.5 kcal / g) y agua (180 ml) combinadas en un procesador de alimentos. La composición de la dieta se basa en estudios previos que establecen subpoblaciones (Levin et al, 1997; Robinson et al, 2015). K-medios agrupamiento basado en el aumento de peso después de 1 mes de comida chatarra se utilizó para identificar los grupos susceptibles a la obesidad (Junk-Food-Gainer) y resistentes a la obesidad (Junk-Food-Non-Gainer). Este método estadístico proporciona una separación imparcial que se puede aplicar de manera uniforme en todos los estudios (MacQueen, 1967). Además, hemos determinado que este es un punto temporal óptimo para identificar de manera confiable las subpoblaciones (Robinson et al, 2015; Oginsky et al, 2016; Observaciones no publicadas).

La locomoción inducida por la cocaína

La actividad locomotora se midió en cámaras (41cm × 25.4cm × 20.3 cm) equipadas con haces de fotocélulas. Las ratas se colocaron en cámaras durante un período de habituación mínimo de 40 antes de recibir una inyección de solución salina (1 ml / kg, ip), seguido de 1 h más tarde por cocaína (15 mg / kg, ip). Esta dosis fue elegida en base a estudios de dosis-respuesta anteriores (Oginsky et al, 2016; Ferrario et al, 2005).

Superficie vs Expresión intracelular de proteínas

El tejido del NAc (núcleo / cáscara) y el estriado medial dorsal (DMS) se recogieron y procesaron utilizando BS establecido³ enfoques de reticulación (Boudreau et al, 2012) que permite la detección de la superficie celular. vs Expresión de proteínas intracelulares. Se incluyeron muestras de DMS para determinar si las diferencias eran selectivas para el NAc. Para cada rata, se aisló el tejido, se cortó (cortador McIllwain; rebanadas de 400 μm; St Louis, MO) y se incubó en aCSF que contenía 2 mM BS³ (30 min, 4 ° C). La reticulación se terminó con glicina (100 mM; 10 min), las rebanadas se homogeneizaron en tampón de lisis (400 μl; en mM: 25 HEPES; 500 NaCl, 2 EDX, 1 DTT, 1 phenylmethyl sulfonyl fluoride, XXUO / S /. el conjunto de cóctel inhibidor I (Calbiochem, San Diego, CA) y 20% Nonidet P-1 [v / v]; pH 100), y almacenado a −0.1 ° C. La concentración de proteína se determinó mediante un ensayo de BCA. Ver Boudreau et al (2012) para detalles metodológicos completos.

BS³ las muestras reticuladas se calentaron en tampón de tratamiento de muestra Laemmli con 5% β-mercaptoetanol (70 ° C, 10 min), se cargaron (20 μg de proteína) y se sometieron a electroforesis en geles de gradiente de 4-15% Bis-Tris en condiciones reductoras. Las proteínas se transfirieron a membranas de PVDF (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ). Las membranas se enjuagaron, se bloquearon (1 h, RT, 5% (p / v) con leche en polvo sin grasa en TBS-Tween 20 (TBS-T; 0.05% Tween 20, v / v)) y se incubaron durante la noche (4 ° C). ) con anticuerpos primarios (1: 1000 en TBS) contra GluA1 (Thermo Scientific; PA1-37776) o GluA2 (NeuroMab, UCDavis / NIH: 75-002). Las membranas se lavaron en TBS-T, se incubaron con HRP conjugado secundario (Invitrogen, Carlsbad, CA; 1 h, RT), se lavaron y se sumergieron en un sustrato detector de quimioluminiscencia (GE Healthcare, Piscataway, NJ). Las imágenes se adquirieron en la película y se usó Ponceau S (Sigma-Aldrich) para determinar la proteína total. Las bandas de interés se cuantificaron utilizando la Imagen J (NIH).

Electrofisiología

El bs³ el procedimiento de reticulación descrito anteriormente proporciona información sobre la expresión de superficie (sináptica y sináptica adicional) de subunidades de AMPAR individuales, mientras que los datos electrofisiológicos proporcionan información sobre AMPAR sinápticos funcionales (tetrámeros). Se realizaron grabaciones de parches de células enteras de neuronas espinosas medias (MSN) en el núcleo de NAc después de la exposición a comida chatarra en ratas criadas y criadas selectivamente. Antes de la preparación del corte, las ratas se anestesiaron con hidrato de cloral (400 mg / kg, ip), los cerebros se retiraron rápidamente y se colocaron en hielo oxigenado (95% O).₂–5% CO₂) aCSF que contiene (en mM): 125 NaCl, 25 NaHCO₃, 12.5 glucosa, 1.25 NaH₂PO₄, 3.5 KCl, 1 L-ácido ascórbico, 0.5 CaCl₂, 3 MgCl₂, y 305 mOsm, pH 7.4. Se hicieron cortes coronales (300 μm) que contenían el NAc utilizando un microtomo vibratorio (Leica Biosystems, Buffalo Grove, IL, EE. UU.) Y se dejaron reposar en aCSF oxigenado (40 min). Para la grabación aCSF (2 ml / min), CaCl₂ Se aumentó a 2.5 mM y MgCl.₂ Se redujo a 1 mM. Las pipetas de parche se extrajeron de los capilares de vidrio de borosilicato 1.5 mm (WPI, Sarasota, FL; 3 – 7-140 resistencia) y se llenaron con una solución que contiene (en mM): 10 CsCl, 2 HEPES, XNUMX MgCl₂, 5 Na⁺-ATP, 0.6 Na⁺-GTP, 2 QX314, pH 7.3 y 285 mOsm. Los registros se realizaron en presencia de picrotoxina (50 µM). Las EPSC evocadas (eEPSC) se provocaron mediante estimulación local (pulsos cuadrados de 0.05-0.30 mA, 0.3 ms, administrados cada 20 s) utilizando un electrodo bipolar colocado ~ 300 μm lateral a las neuronas registradas. Se utilizó la cantidad mínima de corriente necesaria para provocar una respuesta sináptica con <15% de variabilidad en amplitud. Si se requirieron> 0.30 mA, se descartó la neurona. Las eEPSCs mediadas por AMPAR se registraron a -70 mV antes y después de la aplicación del antagonista selectivo de CP-AMPAR naspm (200 μM; como en Conrad et al, 2008; Ferrario et al, 2011).

Estadística

Dos colas t-Pruebas, ANOVAs de medidas repetidas unidireccionales o bidireccionales, de Sidak post-hoc se utilizaron pruebas de comparación múltiple y comparaciones planificadas entre grupos susceptibles a la obesidad y resistentes (Prism 6, GraphPad, San Diego, CA).

Resultados

Experiment 1

A las ratas Sprague Dawley se les dio comida chatarra utilizando un enfoque que conduce a la obesidad en algunas ratas (Junk-Food Gainers) pero no en otras (Junk-Food Non-Gainers); Robinson et al, 2015; Oginsky et al, 2016). Luego medimos la respuesta a una sola inyección de cocaína (una lectura general de la función mesolímbica), superficie vs la expresión intracelular de las subunidades de AMPAR y la transmisión mediada por AMPAR en el núcleo de NAc mediante el uso de parches de células completas en estas dos poblaciones.

Mayor locomoción inducida por la cocaína en Junk-Food-Gainers

Como se esperaba, cuando se les dio comida chatarra, algunas ratas ganaron una cantidad sustancial de peso (Junk-Food-Gainers, N= 6) mientras que otros no (Junk-Food-Non-Gainers, N= 4; Figura 1a; RM ANOVA bidireccional: efecto principal del grupo: F_(1,9)= 11.85, p= 0.007; grupo × interacción de tiempo: F_(18,162)= 6.85, p<0.001). Estas ratas tuvieron acceso a comida chatarra durante un total de 5 meses para permitir la máxima separación entre los grupos. Luego fueron devueltos a la comida estándar de laboratorio (Lab Diet 5001: 4 kcal / g; 4.5% de grasa, 23% de proteína, 48.7% de carbohidratos; porcentaje de contenido calórico) durante un período de privación de comida chatarra de 2 semanas para evaluar las diferencias que persisten después eliminación de comida chatarra. A continuación, se administró a las ratas una única inyección de cocaína y se controló la actividad locomotora; el propósito de esto era obtener una lectura general de la función mesolímbica. La respuesta a la cocaína fue mayor en los ganadores de comida chatarra vs Comida Basura No Ganadora (Figura 1b; RM de dos vías ANOVA: grupo × interacción de tiempo: F_(21,168)= 2.31, p= 0.0018; Prueba de Sidak, *p<0.05). Además, mientras que los ganadores de comida chatarra mostraron una respuesta locomotora significativamente más fuerte a la cocaína que a la solución salina (ANOVA de RM bidireccional, interacción tiempo × inyección: F_(6,30)= 2.39, p<0.05), los que no ganan comida chatarra no lo hicieron. La locomoción durante la habituación y después de la solución salina no difirió entre los grupos (Figura 1b inserciones), coherentes con los informes anteriores (Oginsky et al, 2016; Robinson et al, 2015).

GluA1, pero no GluA2, la expresión de la superficie NAc es mayor en Junk-Food-Gainers

A continuación, examinamos la expresión de proteínas superficiales e intracelulares de las subunidades AMPAR en Junk-Food-Gainers y Junk-Food-Non-Gainers. La mayoría de los AMPAR en el NAc son GluA1 / GluA2 que contienen, con algunos AMPAR de GluA2 / 3, y un pequeño número de GPARA2 carentes, CP-AMPAR (~ 10%; Reimers et al, 2011; Scheyer et al, 2014). Así que nos enfocamos en los niveles de expresión de GluA1 y GluA2, ya que esto proporciona una buena indicación de los cambios en estas diferentes poblaciones de AMPAR. La abundancia de proteínas GluA1 y GluA2 de superficie e intracelular se midió 1 una semana después de probar la actividad locomotora inducida por la cocaína (Figura 1c – e). Estudios anteriores han establecido que una sola inyección de cocaína no altera los AMPAR en este momento (Boudreau y Wolf, 2005; Ferrario et al, 2010; Kourrich et al, 2007), lo que nos permite interpretar las diferencias de AMPAR en relación con la dieta (ver también más abajo). La expresión en superficie de NAc de GluA1 fue mayor en los alimentos no deseados. vs Comida Basura No Ganadora (Figura 1d; t₈= 2.7, p= 0.03). En contraste, la expresión NAc GluA2 no difirió entre los grupos (Figura 1e). Además, la expresión de GluA1 y GluA2 en el DMS de estas mismas ratas fue similar entre los grupos (datos no mostrados), lo que sugiere que los cambios en la expresión de AMPAR se producen de forma selectiva en la NAc. Un aumento en la expresión de la superficie de NAc GluA1 en ausencia de cambios en la superficie GluA2 sugiere la presencia de receptores CP-AMPAR (receptores que contienen GluA1 / 1 o GluA1 / 3). Sin embargo, esto debe ser confirmado utilizando métodos electrofisiológicos. Por lo tanto, realizamos grabaciones de parches de células enteras después de la exposición a la comida chatarra para determinar si hay un aumento en la contribución de CP-AMPAR a la transmisión sináptica en la NAc de Junk-Food-Gainers.

La transmisión mediada por CP-AMPAR se incrementa en Junk-Food-Gainers

Para los experimentos electrofisiológicos, a una cohorte separada de ratas se les dio comida chatarra durante los meses 3 y se realizaron grabaciones después de las semanas de privación de la comida chatarra después de 3 semanas. Este procedimiento se eligió para minimizar el hacinamiento en las jaulas debido al aumento de peso y para examinar los efectos relativamente duraderos de la comida chatarra. En esta cohorte, todas las ratas de comida chatarra eran "ganadoras", ganando incluso más peso que las chatarra de comida chatarra dentro de la cohorte 1 (ganancia de 3 mes: cohorte 1, 106.2 ± 9.7 g; cohorte 2, ~ 132 ± 5.4 g) . Por lo tanto, se hicieron comparaciones entre el Chow (N= Células 5, ratas 3) y grupos Junk-Food-Gainer (N= Células 10, ratas 7). Para evaluar la contribución de CP-AMPAR a la transmisión sináptica mediada por AMPAR total, utilizamos el naspm antagonista de CP-AMPAR selectivo (200 μM). Naspm produjo una pequeña reducción en la amplitud de eEPSC en los controles alimentados por Chow (Figura 2a; ANOVA bidireccional: efecto principal de naspm, F_(1,13)= 19.14, p= 0.0008), consistente con informes anteriores de que los CP-AMPAR contribuyen con 5 – 10% del eEPSC mediado por AMPAR basal (por ejemplo, Scheyer et al, 2014). Sin embargo, en el grupo de comida chatarra, naspm produjo una reducción significativamente mayor (Figura 2b; t₁₃= 1.8; p= 0.046). Estos datos muestran que los CP-AMPAR se incrementan en los Junk-Food-Gainers en comparación con las ratas alimentadas con Chow. Además, como la cohorte utilizada para la electrofisiología no recibió cocaína, estos datos sugieren fuertemente que los cambios bioquímicos en el experimento anterior reflejaron los efectos de la comida chatarra, no la exposición única a la cocaína.

Experiment 2

Los datos anteriores de ratas criadas coinciden con la idea de que la comida chatarra aumenta de manera preferencial los CP-AMPAR en ratas susceptibles a la obesidad. Sin embargo, esta diferencia podría deberse al desarrollo de la obesidad o a diferencias preexistentes en ratas susceptibles. Para abordar estas posibilidades, realizamos estudios bioquímicos y electrofisiológicos similares en ratas criadas selectivamente con tendencia a la obesidad y resistentes con y sin exposición a comida chatarra. Porque sabemos a priori En qué ratas son susceptibles a la obesidad, podemos usar este modelo para diferenciar diferencias preexistentes vs Cambios inducidos por la comida chatarra.

Los niveles basales de GluA1 son similares, pero la comida basura aumenta la expresión de GluA1 en ratas propensas a la obesidad

Primero, examinamos la expresión de NAc AMPAR en ratas con tendencia a la obesidad y resistentes a chow o comida chatarra. El tejido NAc se recolectó y se reticuló después del mes 1 de comida chatarra seguido del mes 1 de privación de comida chatarra. Aquí se usó una exposición más corta a la comida chatarra para aumentar la viabilidad de los experimentos, ya que las ratas propensas a la obesidad criadas selectivamente tienden a ganar peso más rápidamente que la población de razas. La expresión de GluA1 fue similar en ratas propensas a la obesidad y resistentes a chow (Figura 3 y XNUMXbarras sólidas; N= 6 / grupo), lo que sugiere que los niveles de referencia de AMPAR que contienen GluA1 son similares en ratas susceptibles. Esto es consistente con los resultados electrofisiológicos previos que muestran que la transmisión mediada por AMPAR basal es similar en estas ratas (Oginsky et al, 2016). En los grupos alimentados con comida chatarra, la expresión de GluA1 de superficie a intracelular (S / I) aumentó en ratas propensas a la obesidad, pero no resistentes a la obesidad, en comparación con los controles alimentados con chow (Figura 3a: ANOVA unidireccional, F_{(3, 19)}= 2.957, p= 0.058; OP-Chow vs OP-JF, p<0.05; OP-JF N= 5, OR-JF N= 6). Este aumento en S / I se debió a ligeros aumentos en la expresión de superficie de GluA1 (Figura 3b) y ligeras reducciones en GluA1 intracelular (Figura 3c). Nuevamente, no se encontraron diferencias en la expresión de GluA2 (datos no mostrados). Los resultados aquí son consistentes con los resultados bioquímicos anteriores en ratas criadas y muestran que las diferencias en la expresión de AMPAR en ratas propensas a la obesidad son el resultado de la comida chatarra y no se deben a diferencias basales entre los grupos propensos a la obesidad y los grupos resistentes.

La comida chatarra aumenta la transmisión mediada por NAc CP-AMPAR en ratas propensas a la obesidad en ausencia de diferencias en el peso o el consumo de comida chatarra

Luego, determinamos si el consumo de comida chatarra en ausencia de aumento de peso es suficiente para mejorar los AMPAR NAc. Una cohorte separada de ratas criadas selectivamente recibió chow o comida chatarra durante los días 9-10 (para minimizar el desarrollo de la obesidad), seguido de 2 semanas de privación de la comida chatarra y la medición de la transmisión mediada por CP-AMPAR como se describe anteriormente. Naspm redujo la amplitud eEPSC mediada por AMPAR en todos los grupos (Figura 4a; RM ANOVA de dos vías: efecto principal de naspm: F_(1,20)= 22.5, p= 0.0001; grupo × interacción farmacológica: F_(3,20)= 4.29, p= 0.02; OP-JF y OR-JF: N= Células 7, ratas 5; OP-Chow: N= Células 4, ratas 3; O-Chow N= Células 5, ratas 3). Sin embargo, el efecto de naspm fue significativamente mayor en ratas propensas a la obesidad que recibieron comida chatarra en comparación con todos los otros grupos (Figura 4b: RM ANOVA bidireccional, interacción grupo × tiempo: F_(18,114)= 2.87, p= 0.0003; *p<0.05 OP-JF vs todos los otros grupos; Figura 4c: ANOVA unidireccional, F_(3,20)= 9.53, p= 0.0004; OP-JF vs OR-JF y OP-Chow vs OP-JF, p<0.01). Además, el efecto de naspm fue similar en los grupos OP-Chow, OR-Chow y OR-JF y fue comparable al observado en ratas exógamas (arriba) y a la transmisión basal CP-AMPAR previamente informada (Conrad et al, 2008; Scheyer et al, 2014). Además, el aumento de peso, el peso en el día de registro y la cantidad de comida chatarra consumida fue similar entre los grupos propensos a la obesidad y los grupos resistentes (Figura 4d y e). Por lo tanto, estos datos muestran que el consumo de comida chatarra aumenta de manera preferencial los CP-AMPAR en ratas propensas a la obesidad antes del inicio del aumento de peso diferencial.

Una posibilidad es que la comida chatarra produce una regulación positiva de CP-AMPAR en ratas resistentes a la obesidad, pero que este efecto disminuye después de 2 semanas de privación de la comida chatarra. Para solucionar esto, se realizaron grabaciones después del día 1 de la privación de comida chatarra en otra cohorte de ratas con tendencia a la obesidad y resistentes a la misma exposición (días 9-10; OR-JF: N= Células 7, ratas 4; OP-JF: N= Células 6, ratas 3). Nuevamente, encontramos que el efecto de naspm fue mucho mayor en el grupo OP-JF (Figura 5a; RM ANOVA bidireccional: efecto principal de naspm: F_(1,11)= 53.94, p<0.0001; interacción grupo × naspm: F_(1,11)= 13.75, p= 0.0035; Figura 5b: efecto principal de naspm: F_(7,77)= 13.39, p<0.0001; interacción grupo × naspm: F_(7,77)= 7.57, p<0.0001, posprueba *p<0.05; Figura 5c: impar t-prueba: p= 0.001). Además, la magnitud del efecto de naspm en el grupo OR-JF fue comparable a los controles de chow. En conjunto, estos datos muestran que los aumentos inducidos por la comida chatarra en CP-AMPAR están ausentes en ratas resistentes a la obesidad después de los períodos de privación temprana y tardía. Además, el aumento de peso y la ingesta de alimentos fueron de nuevo similares en ratas con tendencia a la obesidad y resistentes (Figura 5d y e). Por lo tanto, los aumentos de CP-AMPAR inducidos por la comida chatarra en ratas propensas a la obesidad no se deben al aumento de peso ni a las diferencias en la cantidad de comida chatarra consumida. Finalmente, no se encontraron diferencias en la amplitud eEPSC de referencia en todos los grupos estudiados (Figura 5f Amplitudes de línea base de ANOVA de una vía: F_(7,44)= 1.993, p= 0.09). Por lo tanto, las diferencias en la sensibilidad de naspm mencionadas anteriormente no se deben a diferencias en la respuesta inicial. Las amplitudes en bruto antes y después de naspm para todos los datos se muestran en Figura 5f.

Financiamiento y divulgación

La cocaína fue proporcionada por el programa de suministro de drogas NIDA. Este trabajo fue apoyado por NIDDK R01DK106188 a CRF; MFO fue apoyado por NIDA T32DA007268. El Centro de Investigación de Diabetes de Michigan (NIH Grant P30 DK020572) y el Centro de Investigación de Obesidad y Nutrición de Michigan (P30 DK089503) proporcionaron apoyo para la investigación de PBG. Los autores declaran no tener conflicto de intereses.

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