Effect van ΔFosB-overexpressie op opioïde en cannabinoïde receptor-gemedieerde signalering in de nucleus accumbens (2011)

Neurofarmacologie. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

bron

Afdeling Farmacologie en Toxicologie en Instituut voor Geneesmiddelen- en Alcoholwetenschappen, Virginia Commonwealth University School of Medicine, Richmond, VA 23298, VS.

Abstract

De stabiele transcriptiefactor ΔFosB wordt in de nucleus accumbens (NAc) geïnduceerd door chronische blootstelling aan verschillende drugsmisbruiken, en transgene expressie van ΔFosB in het striatum verhoogt de belonende eigenschappen van morfine en cocaine. De mechanistische basis voor deze waarnemingen is echter onvolledig begrepen. We gebruikten een bitransgeen muismodel met induceerbare expressie van ΔFosB in dopamine D (1) receptor / dynorfine-bevattende striatale neuronen om het effect van ΔFosB-expressie op opioïde en cannabinoïdreceptorsignalering in het NAc te bepalen. De resultaten toonden aan dat mu opioïde-gemedieerde G-eiwitactiviteit en remming van adenylylcyclase werden versterkt in het NAc van muizen die AFosB tot expressie brachten. Evenzo was kappa-opioïde remming van adenylylcyclase versterkt in de ΔFosB-expressiemuizen. Daarentegen verschilde de door cannabinoïde receptor gemedieerde signalering niet tussen muizen die ΔFosB tot overexpressie brengen en controlemuizen. TDeze bevindingen suggereren dat opioïden- en cannabinoïdreceptorsignalering differentieel gemoduleerd worden door expressie van ΔFosB en aangeven dat ΔFosB-expressie een aantal van zijn effecten kan produceren via versterkte mu en kappa opioïde receptor signalering in het NAc.

sleutelwoorden: G-proteïne, adenylylcyclase, striatum

1. Inleiding

Opioïde receptoren en cannabinoïde CB₁ receptoren (CB₁R) zijn de neurobiologische doelen voor twee veelgebruikte medicijnklassen die morfine, heroïne en voorgeschreven opioïden en marihuana bevatten (Δ⁹-tetrahydrocannabinol (THC)), respectievelijk. De acute effecten van opioïden en cannabinoïden worden gemedieerd door G-eiwit-gekoppelde receptoren die voornamelijk G activeren_io eiwitten en produceren stroomafwaartse effectorreacties zoals remming van adenylylcyclase (Childers, 1991, Childers, et al., 1992, Howlett, et al., 2002). De motor, geheugenstoornissen en psychoactieve effecten van Δ⁹-THC worden geproduceerd door CB₁R (Huestis, et al., 2001, Zimmer, et al., 1999), die wijd verspreid zijn in de hersenen, met hoge niveaus in de basale ganglia, de hippocampus en de kleine hersenen (Herkenham, et al., 1991). De pijnstillende en belonende effecten van de meeste klinisch relevante en misbruikte opioïde geneesmiddelen worden voornamelijk gemedieerd door mu-opioïde-receptoren (MOR) (Matthes, et al., 1996), die verrijkt zijn in het limbisch systeem en de hersenstam (Mansour, et al., 1994). Het mesolimbische systeem, samengesteld uit dopaminerge projecties van het ventrale tegmentale gebied (VTA) tot nucleus accumbens (NAc), speelt een belangrijke rol in de lonende effecten van opioïden en cannabinoïden (Bozarth en Wise, 1984, Vaccarino, et al., 1985, Zangen, et al., 2006), evenals andere drugsverslaving (Koob en Volkow, 2010). Bovendien zijn endogene opioïde en cannabinoïde systemen betrokken bij de belonende effecten van meerdere klassen van psychoactieve drugs (Maldonado, et al., 2006, Trigo, et al., 2010). Het is dus belangrijk om mechanismen op te helderen waardoor opioïde en CB₁R-signalering wordt geregeld in het NAc.

Een centrale vraag op het gebied van drugsmisbruik was het identificeren van eiwitten die de overgang van acute naar langetermijneffecten van psychoactieve geneesmiddelen mediëren. De AP-1 transcriptiefactor ΔFosB is bijzonder interessant omdat het een stabiel verkort splitsingsvariantproduct is van de FosB gen dat zich ophoopt bij herhaalde blootstelling aan drugs van misbruik of natuurlijke beloningen (McClung, et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler, et al., 1999). We hebben ontdekt dat ΔFosB in de hersenen wordt geïnduceerd na herhaalde blootstelling aan morfine, Δ⁹-THC, cocaïne of ethanol, waarbij elk geneesmiddel een uniek regionaal patroon van ΔFosB-expressie produceert (Perrotti, et al., 2008). Een consistente vinding over geneesmiddelen was dat ΔFosB in hoge mate werd geïnduceerd in het striatum, waar alle vier geneesmiddelen ΔFosB in de NAc-kern induceerden en alle behalve Δ⁹-THC leidde significant tot expressie in de NAc-schaal en caudate-putamen.

Farmacologische studies hebben aangetoond dat gelijktijdige toediening van de dopamine D₁ receptor (D.₁R) antagonist SCH 23390 blokkeerde ΔFosB-inductie in het NAc en caudate-putamen na intermitterende toediening van cocaïne of morfine, wat wijst op het potentiële belang van D₁R-expresserende neuronen (Muller en Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). Het effect van ΔFosB-inductie op door geneesmiddelen gemedieerde gedragingen is onderzocht met behulp van bitransgene muizen die ΔFosB tot expressie brengen in specifieke neuronale populaties van het NAc en dorsale striatum (Chen, et al., 1998). Muizen die ΔFosB uitdrukken in dynorphin / D₁R-positieve neuronen in het NAc en dorsale striatum (lijn 11A) vertonen veranderde reacties op misbruikende middelen, met name verhoogde gevoeligheid voor de belonende effecten van cocaïne of morfine (Colby, et al., 2003, Kelz, et al., 1999, Zachariou, et al., 2006). Deze veranderingen traden op bij afwezigheid van veranderingen in de niveaus van MOR of verschillende subeenheden van G-eiwitten. Dynorphin mRNA-niveaus waren echter verlaagd in de NAc van ΔFosB tot expressie brengende muizen (Zachariou, et al., 2006), wat suggereert dat één doelwit van ΔFosB een gen is dat codeert voor een endogeen opioïde peptide. ΔFosB-inductie kan ook gedragsveranderingen produceren door receptor-signalering in het NAc te reguleren, maar deze mogelijkheid is niet onderzocht. Daarom gebruikten de huidige studies het bitransgene muismodel om te bepalen of overexpressie van ΔFosB in dynorfine / D₁R met striatale neuronen wijzigt MOR-gemedieerde G-proteïne-activiteit en MOR- en KOR-gemedieerde adenylylcyclase-remming in het NAc. Het effect van ΔFosB op CB₁R-gemedieerde G-eiwitactiviteit werd ook beoordeeld omdat A⁹-THC-toediening induceert ΔFosB in het NAc (Perrotti, et al., 2008) en van het endocannabinoïdesysteem is bekend dat het hersenkrijgcircuits reguleert (Gardner, 2005, Maldonado, et al., 2006), maar het effect van ΔFosB op het endocannabinoïdesysteem is niet onderzocht.

2. Materialen en methodes

2.1. reagentia

[³⁵S] GTPγS (1250 Ci / mmol), [α-³²P] ATP (800 Ci / mmol) en [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) werd gekocht bij PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, GDP, cAMP, runderserumalbumine, creatinefosfokinase, papaverine, imidazool en WIN-55212-2, werden gekocht bij Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPyS werd gekocht bij Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO werd verstrekt door het Drug Supply Program van het National Institute on Drug Abuse (Rockville, MD). Econo-1 scintillatievloeistof werd verkregen van Fisher Scientific (Norcross, GA). Ecoliet scintillatievloeistof werd verkregen van ICN (Costa Mesa, CA). Alle andere chemicaliën werden verkregen van Sigma Aldrich of Fisher Scientific.

2.2. muizen

Mannelijke bitransgene muizen afgeleid van NSE-tTA (lijn A) x TetOp-ΔFosB (lijn 11) werden gegenereerd zoals beschreven in Kelz et al. (J. (Kelz, et al., 1999). Bitransgene muizen werden bedacht en opgewekt op doxycycline (100 μg in drinkwater) om transgene expressie te onderdrukken. Op 8 weken oud was doxycycline voor de helft van de muizen weggelaten uit het water om transgene expressie mogelijk te maken, terwijl de resterende muizen op doxycycline werden gehouden om het transgen te onderdrukken. Hersenen werden weken later 8 verzameld, het tijdstip waarop transcriptionele effecten van ΔFosB maximaal zijn (McClung en Nestler, 2003). Een tweede transgene muislijn werd gebruikt waarin A-Jun, een dominante negatieve antagonist van c-Jun, wordt uitgedrukt in D₁R / dynorphin en D₂R / enkefaline-cellen van het striatum, de hippocampus en de pariëtale cortex (Peakman, et al., 2003). C-Jun en gerelateerde Jun-familie-eiwitten dimeriseren met Fos-familie-eiwitten en binden aan de AP-1-plaats van doelgenen om transcriptie te reguleren. Afknotting van de N-terminus van c-Jun (Δc-Jun) maakt het complex echter transcriptioneel inactief en in staat om de DNA-binding van actieve AP-1-complexen te belemmeren. Mannelijke bitransgene muizen afgeleid van NSE-tTA (lijn A) x TetOp-FLAG-Δc-Jun (lijn E) werden gegenereerd zoals beschreven in Peakman et al. (Peakman, et al., 2003). Bitransgene muizen werden bedacht en opgewekt op doxycycline (100 μg in drinkwater) om transgene expressie te onderdrukken. Pups werden gespeend bij 3 weken, gegenotypeerd en gescheiden in groepen, waarbij de helft werd gehouden op doxycycline-bevattend water en de helft op gewoon drinkwater om FLAG-Δc-Jun-expressie te induceren. Hersenen werden weken later 6 verzameld, het tijdstip waarop de maximale niveaus van FLAG-Δc-Jun zijn gemeten (Peakman, et al., 2003). Alle dierprocedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de National Institutes of Health Guide for Care and Use of Laboratory Animals.

2.3. Membraan voorbereiding

Hersenen werden bewaard bij -80 ° C tot de dag van de test. Voorafgaand aan het testen werd elk brein ontdooid en het NAc werd op ijs ontleed. Elk monster werd gehomogeniseerd in 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (membraanbuffer) met 20-slagen van een glazen homogenisator bij 4 ° C. Het homogenaat werd gecentrifugeerd bij 48,000 x g bij 4 ° C voor 10 min, geresuspendeerd in membraanbuffer, opnieuw gecentrifugeerd bij 48,000 × g bij 4 ° C voor 10 min en geresuspendeerd in 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (testbuffer). Eiwitniveaus werden bepaald volgens de methode van Bradford (Bradford, 1976) met behulp van runderserumalbumine (BSA) als standaard.

2.4. Agonist-gestimuleerd [³⁵S] GTPγS-binding

Membranen werden vooraf geïncubeerd gedurende 10 minuten bij 30 ° C met adenosinedeaminase (3 mU / ml) in assaybuffer. Membranen (5-10 μg eiwit) werden vervolgens geïncubeerd voor 2 uur bij 30 ° C in testbuffer die 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPγS, 30 μM GDP en adenosine-deaminase (3 mU / ml) met en zonder geschikte concentraties van DAMGO of WIN55,212-2. Niet-specifieke binding werd gemeten met 20 μM GTPyS. De incubatie werd beëindigd door filtratie door GF / B glasvezelfilters, gevolgd door wassen met 3 met 3 ml ijskoud 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Gebonden radioactiviteit werd bepaald door vloeistofscintillatie spectrofotometrie na overnacht extractie van de filters in Econo-1 scintillatievloeistof.

2.5. Adenylylcyclase-assay

Membranen (5-25 μg eiwit) werden voorgeïncubeerd met adenosine-deaminase zoals hierboven beschreven, vervolgens geïncubeerd voor 15 min bij 30 ° C in aanwezigheid of afwezigheid van 1μM forskolin, met of zonder DAMGO, U50,488H of WIN55,212-2, in assaybuffer die bevat 50 μM ATP, [α-³²P] ATP (1.5 μCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 μM cyclisch AMP, 50 μM GTP, 0.2 mM papaverine, 5 mM fosfocreatine, 20 eenheden / ml creatine fosfokinase en adenosine deaminase (3 mU / ml) in een eindvolume van 100 μl. Onder deze omstandigheden is totaal [α-³²P] cAMP teruggewonnen was in het algemeen minder dan 1% van de totale hoeveelheid toegevoegd [a-³²P] ATP in elk monster. De reactie werd beëindigd door te koken voor 3 min en [³²P] Cyclisch AMP werd geïsoleerd door de dubbele kolom (Dowex en alumina) methode van Salomon (Salomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) werd aan elke buis toegevoegd voorafgaand aan kolomchromatografie als een interne standaard. Radioactiviteit werd bepaald door vloeistofscintillatiespectrofotometrie (45% efficiëntie voor ³H) na 4.5 ml van het eluaat werd opgelost in 14.5 ml Ecolite scintillatievloeistof.

2.6. Gegevensanalyse

Tenzij anders aangegeven, worden gegevens gerapporteerd als gemiddelde waarden ± SE van 4-8 afzonderlijke experimenten, die elk in drievoud werden uitgevoerd. Net-gestimuleerd [³⁵S] GTPyS-binding wordt berekend als agonist-gestimuleerde binding minus basale binding. Netto forskoline-gestimuleerde adenylylcyclase-activiteit wordt gedefinieerd als door forskoline gestimuleerde activiteit - basale activiteit (pmol / mg / min). Percentage remming van door forskoline gestimuleerde adenylylcyclase-activiteit wordt gedefinieerd als (netto forskoline-gestimuleerde activiteit in de afwezigheid van agonist-net forskoline-gestimuleerde activiteit in de aanwezigheid van agonist / netto forskoline-gestimuleerde activiteit in de afwezigheid van agonist) x 100. Alle curve-fitting en statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Concentratie-effectcurven werden geanalyseerd door iteratieve niet-lineaire regressie om EC te verkrijgen₅₀ en E_max waarden. Statistische significantie van de concentratie-effectgegevens werd bepaald door tweewegsanalyse van variantie (ANOVA), met behulp van agonistdosis en geninductie (aan of uit) als de belangrijkste factoren. Statistische significantie van curve-fit-waarden (E._max of EC₅₀) werd bepaald door de niet-gepaarde tweezijdige Student's t-test, met behulp van Welch's correctie of vierkantsworteltransformatie van de gegevens waar nodig om te corrigeren voor ongelijke varianties (gedetecteerd door F-test) in EC₅₀ waarden.

3. Resultaten

3.1. Effect van ΔFosB-expressie op opioïde en cannabinoïde receptor-gemedieerde G-proteïne activering

Bepalen of MOR- of CB₁R-gemedieerde G-proteïne-activering werd veranderd door induceerbare transgene expressie van ΔFosB in het NAc, agonist-gestimuleerde [³⁵S] GTPyS-binding werd onderzocht in geïsoleerde membranen bereid uit dit gebied van bitransgene muizen die conditioneel (GFosB aan) tot expressie brengen (of AFSB uit) het AFosB-transgen. Het MOR-selectieve enkefaline-analoog DAMGO werd gebruikt om MOR te activeren en het cannabinoïde aminoalkylindool WIN55,212-2 werd gebruikt om CB te activeren₁R. Deze liganden bleken eerder volledige agonisten te zijn bij MOR en CB₁R, respectievelijk (Breivogel, et al., 1998, Selley, et al., 1997). Het was niet mogelijk om KOR-gemedieerde G-eiwitactiviteit te onderzoeken omdat het signaal te laag is in knaagdierhersenen (Childers, et al., 1998). De resultaten toonden concentratie-afhankelijke stimulatie van G-proteïne-activiteit door zowel DAMGO als WIN55,122-2 in NAc uit AFFosB uit en AFosB op muizen (Figuur 1). Voor door DAMGO gestimuleerde activiteit (Figuur 1A), tweeweg ANOVA van de concentratie-effectgegevens onthulde significante hoofdeffecten van ΔFosB-status (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) en DAMGO-concentratie (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) zonder significante interactie (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Niet-lineaire regressieanalyse van de concentratie-effectcurves onthulde een significant grotere DAMGO E_max waarde in ΔFosB op muizen (E._max = 73 ± 5.2% stimulatie) ten opzichte van ΔFosB-off-muizen (E._max = 56 ± 4.1% stimulatie; p <0.05 verschillend van ΔFosB op muizen door Student's t-test). DAMGO EC₅₀ waarden waren niet verschillend tussen ΔFosB aan en ΔFosB uit muizen (302 ± 72 nM versus 212 ± 56 nM, respectievelijk, p = 0.346).

Effect van ΔFosB-expressie op agonist-gestimuleerde [³⁵S] GTPyS-binding in het NAc. Membranen van AFosB tot expressie brengende (AFosB aan) of controle (AFosB uit) muizen werden getest zoals beschreven in Methoden met verschillende concentraties ...

In tegenstelling tot resultaten die werden verkregen met de MOR-agonist DAMGO, werden geen ΔFosB-statusafhankelijke verschillen in G-eiwitactivering waargenomen met de cannabinoïde agonist WIN55,212-2 (Figuur 1B). Tweeweg-ANOVA van de WIN55,212-2-concentratie-effectgegevens onthulde een significant hoofdeffect van WIN55,212-2-concentratie (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), maar niet van ΔFosB-status (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) en er was geen interactie (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Evenzo was er geen effect van ΔFosB-status op WIN55,212-2 E_max waarden (103 ± 6% versus 108 ± 8% stimulatie in ΔFosB aan en uit muizen, respectievelijk, p = 0.813 door Student's t-test) of EC₅₀ waarden (103 ± 20 nM versus 170 ± 23 nM in ΔFosB aan en uit muizen, respectievelijk, p = 0.123).

Gebaseerd op de vorm van de curves en het feit dat onze vorige onderzoeken bifasische WIN55,212-2 concentratie-effectcurven in de hersenen hebben laten zien (Breivogel, et al., 1999, Breivogel, et al., 1998), werden de WIN55,212-2-curven ook geanalyseerd met behulp van een tweesitemap. Analyse van de gemiddelde gegevens toonde een lichte verbetering van de fitheid met behulp van het tweesitemodel (R² = 0.933 en 0.914, som van vierkanten = 3644 en 5463 in ΔFosB aan-en-uit muizen, respectievelijk) in vergelijking met het single-site model (R² = 0.891 en 0.879, som van vierkanten = 6561 en 6628 in ΔFosB aan-en-uit muizen, respectievelijk). Er werden echter geen significante verschillen gevonden tussen ΔFosB aan-en-uit muizen in de E_max of EC₅₀ waarden van de sites met een hoge of lage potentie (Aanvullende tabel 1), hoewel er een trend was naar een lagere EC₅₀ waarde op de hoge potentieplaats bij muizen met ΔFosB aan (EC₅₀hoog = 28.0 ± 10.6 nM) vergeleken met die met ΔFosB uit (EC₅₀hoog = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Bovendien was er geen effect van de ΔFosB-status op de basale [³⁵S] GTPyS-binding in NAc-membranen (253 ± 14 versus 226 ± 14 fmol / mg in ΔFosB aan en uit muizen, respectievelijk, p = 0.188). Deze gegevens geven aan dat induceerbare transgene expressie van ΔFosB in het NAc van muizen MOR-gemedieerde G-eiwitactivering verhoogde zonder CB significant te beïnvloeden.₁R-gemedieerde of basale G-eiwitactiviteit.

3.2. Effect van ΔFosB op opioïde en door cannabinoïde receptor gemedieerde remming van adenylylcyclase

Het effect evalueren van induceerbare transgene expressie van ΔFosB op modulatie van stroomafwaartse effectoractiviteit door MOR en CB₁R, remming van 1 μM forskoline-gestimuleerde adenylylcyclaseactiviteit werd onderzocht in NAc-membranen. Naast MOR- en CB₁R-gemedieerde remming van adenylylcyclase-activiteit, effecten van KOR-activiteit werden ook onderzocht met behulp van de KOR-selectieve volledige agonist U50,488 (Zhu, et al., 1997), omdat eerdere resultaten aantoonden dat dynorphin-mRNA een doel was van ΔFosB in het bitransgene model (Zachariou, et al., 2006). De resultaten toonden aan dat DAMGO, U50,488 en WIN55,212-2 elk een concentratie-afhankelijke remming van adenylylcyclase-activiteit produceerden in zowel ΔFosB uit als ΔFosB op muizen (Figuur 2). Two-way ANOVA van DAMGO concentratie-effectgegevens (Figuur 2A) onthulde significante hoofdeffecten van ΔFosB-status (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) en DAMGO-concentratie (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), maar geen significante interactie (p = 0.441, F = 0.986) , df = 6). Niet-lineaire regressieanalyse van DAMGO-concentratie-effectcurves onthulde een significant lagere DAMGO EC₅₀ waarde in ΔFosB op muizen (101 ± 11 nM) vergeleken met ΔFosB op muizen (510 ± 182 nM, p <0.05 volgens de t-test van de student). Er was echter geen significant verschil in DAMGO E_max waarden (20.9 ± 1.26% versus 19.8 ± 1.27% remming in ΔFosB aan en uit muizen, respectievelijk, p = 0.534).

Effect van ΔFosB-expressie op remming van adenylylcyclase-activiteit in het NAc. Membranen van AFosB tot expressie brengende (AFosB aan) of controle (AFosB uit) muizen werden getest zoals beschreven in Methoden in de aanwezigheid van 1 μM ...

Door KOR gemedieerde remming van adenylylcyclase verschilde ook als een functie van induceerbare transgene expressie van ΔFosB (Figuur 2B). Tweeweg-ANOVA van U50,488-concentratie-effectgegevens toonde significante hoofdeffecten van de ΔFosB-status (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) en U50,488-concentratie (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , zonder significante interactie (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Niet-lineaire regressieanalyse van concentratie-effectcurves onthulde een grotere U50,488 E_max waarde in ΔFosB op muizen (18.3 ± 1.14% remming) vergeleken met ΔFosB bij muizen (12.5 ± 2.03% remming; p <0.05 anders dan ΔFosB op door Student's t-test), zonder significant verschil in U50,488 EC₅₀ waarden (310 ± 172 nM versus 225 ± 48 nM in ΔFosB aan en uit muizen, respectievelijk, p = 0.324).

In tegenstelling tot effecten die werden waargenomen met MOR en KOR, was er geen significant effect van induceerbare transgene ΔFosB-expressie op remming van adenylylcyclase door de cannabinoïde agonist WIN55212-2 (Figuur 2C). Tweeweg-ANOVA van WIN55,212-2-concentratie-effectgegevens toonde een significant effect van geneesmiddelconcentratie (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), maar niet van ΔFosB-status (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) noch was er een significante interactie (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Bovendien was er geen effect van de ΔFosB-status op basale of door forskoline gestimuleerde adenylylcyclase-activiteit in afwezigheid van enige agonist. Basale adenylylcyclase-activiteit was 491 ± 35 pmol / mg / min in ΔFosB op muizen vergeleken met 546 ± 44 in ΔFosB bij muizen (p = 0.346 volgens Student's t-test). Evenzo was de adenylylcyclase-activiteit in aanwezigheid van 1 µM forskoline 2244 ± 163 pmol / mg / min in ΔFosB bij muizen versus 2372 ± 138 pmol / mg / min in ΔFosB bij muizen (p = 0.555).

3.3. Effect van ΔcJun op opioïde en door cannabinoïde receptor gemedieerde remming van adenylylcyclase

Omdat induceerbare transgene expressie van AFosB verbeterde remmende signaaltransductie van MOR en KOR naar adenylylcyclase in het NAc, was het van belang om te bepalen of een dominante negatieve remmer van AFosB-gemedieerde transcriptie opioïde receptorsignalering op een tegengestelde manier zou moduleren. Om deze vraag aan te pakken, werd de remming van door forskoline gestimuleerde adenylylcyclase-activiteit door DAMGO en U50,488 onderzocht in membranen die waren bereid uit het NAc van bitransgene muizen die voorwaardelijk CDCun tot expressie brengen. De resultaten toonden geen significant effect van ΔcJun-expressie op remming van adenylylcyclase-activiteit door MOR of KOR (Figuur 3). Tweeweg-ANOVA van DAMGO-concentratie-effectcurves toonde een significant hoofdeffect van DAMGO-concentratie (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), maar niet van ΔcJun-status (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) en er was geen significante interactie (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Evenzo was er geen significant verschil in E_max of EC₅₀ waarden tussen muizen met ΔcJun op (E._max = 23.6 ± 2.6%; EC₅₀ = 304 ± 43 nM) of ΔcJun uit (E_max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Vergelijkbare resultaten werden gezien met U50,488, zodat de tweeweg-ANOVA van de concentratie-effectcurves een significant effect van concentratie (p <0.0001, F = 11.94, df = 6) liet zien, maar niet van ΔcJun-status (p = 0.127 , F = 2.391, df = 1) en er was geen significante interactie (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Evenzo waren er geen significante verschillen in E._max of EC₅₀ waarden tussen muizen met ΔcJun op (E._max = 14.8 ± 2.9%; EC₅₀ = 211 ± 81 nM) of uit (E_max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Effect van ΔcJun-expressie op remming van adenylylcyclase-activiteit in het NAc. Membranen van de ΔcJun tot expressie brengende (ΔcJun aan) of controle (ΔcJun uit) muizen werden geïncubeerd in de aanwezigheid van DAMGO (A), U50,488H (B) of WIN55,212-2 ...

ΔcJun-expressie had ook geen significante invloed op de remming van adenylylcyclase in het NAc door de cannabinoïde-agonist. Tweeweg-ANOVA van de WIN55,212-2-concentratie-effectcurves toonde een significant hoofdeffect van de WIN55,212-2-concentratie (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), maar niet van genotype (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) en er was geen significante interactie (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Evenzo waren er geen significante verschillen in WIN55,212-2 E_max waarden (13.0 ± 2.3% en 13.6 ± 0.9% remming in ΔcJun aan versus uit muizen, respectievelijk p = 0.821) en of EC₅₀ waarden (208 ± 120 nM en 417 ± 130 nM in ΔcJun aan versus uit muizen, respectievelijk, p = 0.270). Dus hoewel er een lichte trend was in de richting van verminderde potentie van WIN55,212-2 in muizen die Akcun tot expressie brachten, veranderde het transgen de cannabinoïdremming van adenylylcyclase niet significant. Bovendien was er geen effect van de AcJun-status op basale of forskoline-gestimuleerde adenylylcyclase-activiteit. Basale adenylylcyclase-activiteit was respectievelijk 1095 ± 71 pmol / mg / min en 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) bij muizen met ΔcJun aan of uit. Adenylylcyclaseactiviteit gestimuleerd door 1 μM forskoline was 4185 ± 293 pmol / mg / min versus 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) bij muizen met respectievelijk de ΔcJun aan of uit.

3.4. Discussie

De resultaten van deze studie toonden verhoogde MOR-gemedieerde G-proteïneactivering en remming van adenylylcyclase in het NAc van muizen met induceerbare transgene expressie van ΔFosB in dynorfine / D aan.₁R met neuronen. Door KOR gemedieerde remming van adenylylcyclase-activiteit was ook verhoogd in het NAc van muizen die ΔFosB tot expressie brachten, wat suggereert dat ΔFosB het endogene opioïde systeem in het NAc reguleert. De DAMGO E_max waarde was groter voor MOR-gestimuleerde [³⁵S] GTPyS-binding en de EC ervan₅₀ waarde was lager voor adenylylcyclase-inhibitie, in AFosB over tot expressie brengende muizen vergeleken met controlemuizen. Deze bevindingen suggereren de mogelijkheid van receptorreserve voor effectormodulatie maar niet voor activering van G-proteïne onder de onderzochte bepalingsomstandigheden. De bevinding dat maximale remming van adenylylcyclase door de KOR-agonist werd beïnvloed door ΔFosB-expressie suggereert lage receptorreserve voor de door KOR gemedieerde respons, consistent met de lage niveaus van KOR-bindingsplaatsen in muizenhersenen (Unterwald, et al., 1991). Daarentegen CB₁R-gemedieerde activiteit van G-proteïne en remming van adenylylcyclase werden niet beïnvloed door ΔFosB-expressie, suggererend dat de opioïde en cannabinoïde systemen verschillen in hun respons op ΔFosB in deze NAc neuronen.

Het effect van ΔFosB op opioïde receptor-gemedieerde signalering komt overeen met ons vorige rapport dat ΔFosB-expressie in het striatum de acute en chronische effecten van morfine wijzigde (Zachariou, et al., 2006). Een van de bevindingen van die studie was dat muizen met transgene expressie van ΔFosB in dynorfine / D₁R striatale neuronen waren gevoeliger voor conditionering van morfine dan controles. Bovendien werd dit effect nagebootst door viraal gemedieerde expressie van AFosB door plaatsspecifieke injectie in het NAc. Deze waarnemingen komen overeen met de huidige resultaten die verbeterde MOR-signalering in het NAc laten zien.

We hebben eerder de gencodering geïdentificeerd dynorfine als een doelwit van ΔFosB, en stelde voor dat gereduceerd dynorphin consistent zou zijn met verbeterde belonende eigenschappen van morfine in ΔFosB bitransgene muizen (Zachariou, et al., 2006). De huidige resultaten laten zien dat door KOR gemedieerde remming van adenylylcyclase in het NAc wordt versterkt bij AZosB tot expressie brengende muizen, hetgeen een compenserende toename in KOR-gevoeligheid na gereduceerd dynorfine zou kunnen weerspiegelen. Eerdere studies hebben aangetoond dat KOR werd opgereguleerd in bepaalde hersengebieden van muizen met prodynorfine-knock-out, waaronder NAc (Clarke, et al., 2003).

In tegenstelling tot ΔFosB veranderde de induceerbare transgene expressie van ΔcJun, de dominante negatieve ingekorte mutant van de ΔFosB-bindingspartner cJun, de remming van adenylylcyclase door MOR- of KOR-agonisten niet. Deze resultaten suggereren dat basale niveaus van AFosB-expressie, die relatief laag zijn, geen significante rol spelen bij het handhaven van opioïde receptorsignalering op dit niveau van signaaltransductie in het NAc. Het feit dat het geconditioneerde belonende effect van morfine in onze eerdere studie was verminderd met de ΔcJun-expressie (Zachariou, et al., 2006) suggereert dat morfine-inductie van ΔFosB tijdens de conditioneringsprocedure belangrijk is bij het reguleren van gedragsreacties op het geneesmiddel of dat transcriptionele effecten van ΔFosB anders dan die van invloed zijn op proximale signalering door opioïde-receptoren, de beloning van opioïden zouden kunnen beïnvloeden. In ieder geval laten de resultaten van de huidige studie duidelijk zien dat, wanneer AFosB-expressie verhoogd is boven basale niveaus in striatale dynorfine / D₁R-expresserende neuronen, er is een robuuste toename in de koppeling van MOR en KOR aan remming van adenylylcyclase in het NAc.

De mechanismen waardoor MOR- en KOR-gemedieerde signalering worden versterkt door ΔFosB-overexpressie zijn onduidelijk, maar we hebben eerder aangetoond dat MOR-niveaus, beoordeeld door [³H] naloxon-binding, zijn niet verschillend in de NAc van ΔFosB on versus off-muizen (Zachariou, et al., 2006). Uit dezelfde studie bleek dat Gα_i1- en 2-eiwitniveaus werden in deze regio niet beïnvloed door ΔFosB-expressie. Eerdere genexpressie array-analyses toonden echter aan dat Gα_o mRNA was opgereguleerd in NAc van ΔFosB op muizen (McClung en Nestler, 2003). Het zal in toekomstige studies van belang zijn om het effect van transgene ΔFosB-expressie op G-eiwitsubeenheidexpressie op het eiwitniveau evenals op de expressie van veel G-eiwitmodulerende eiwitten uitgebreid te onderzoeken.

Het is interessant dat ΔFosB-expressie CB niet versterkte₁R-gemedieerde signalering in het NAc. Het is mogelijk dat wijzigingen in CB₁R-signalering vindt plaats in een afzonderlijke populatie van neuronen die verduisterd is in het gehele NAc-preparaat. Bijvoorbeeld toediening van Δ⁹- THC veroorzaakte significant ΔFosB in de kern, maar niet in de schaal, van het NAc (Perrotti, et al., 2008). Ikndeed, is aangetoond dat uitdaging met Δ⁹-THC na herhaalde toediening van Δ⁹-THC verhoogde dopamine-afgifte in de NAc-kern, maar verminderde afgifte in de schaal (Cadoni, et al., 2008). Het is ook belangrijk om op te merken dat de 11A-lijn van bitransgene muizen AFFB alleen tot expressie brengt in dynorfine / D₁R positieve medium stekelige neuronen van het striatum, maar CB₁R worden uitgedrukt in zowel dynorphin / D₁R en enkephalin / D₂R positieve striatale neuronen (Hohmann en Herkenham, 2000), evenals op terminals van corticale afferenten (Robbe, et al., 2001). Expressie van de dominante negatieve regulator van ΔFosB-gemedieerde transcriptie, ΔcJun, had ook geen significant effect op de cannabinoïdreceptorsignalering, hoewel ΔcJun induceerbaar tot expressie wordt gebracht in zowel D₁ en D₂-bevattende populaties van middelgrote stekelige neuronen in deze muizen (Peakman, et al., 2003). Het is echter mogelijk dat de basale ΔFosB-expressie voldoende laag is, zodat ΔcJun de receptorsignalering niet zou beïnvloeden, zoals wordt gesuggereerd door resultaten met MOR en KOR. Het is ook mogelijk dat CB₁R-signalering wordt bescheiden versterkt door basale AFBB-expressie, zodanig dat een verdere toename van AFosB-expressie of het blokkeren van de werking ervan met AkcJun slechts geringe effecten had die niet het niveau van statistische significantie bereikten. Indirecte ondersteuning voor deze interpretatie kan worden gezien door WIN55,212-2 EC te vergelijken₅₀ waarden tussen muizen die ΔcJun versus ΔFosB uitdrukken. De verhouding van de WIN55,212-2 EC₅₀ waarde voor adenylylcyclase-inhibitie bij muizen met geïnduceerde expressie van Akcun tot zijn EC₅₀ waarde voor G-proteïneactivering bij muizen met geïnduceerde expressie van ΔFosB was 4.0, terwijl dezelfde verhouding bij muizen zonder inductie van elk transgen 1.2 was.

Als alternatief kunnen cannabinoïden ΔFosB-expressie induceren zonder enig direct effect op CB₁R-signalering. In dit scenario kunnen cannabinoïden de responsiviteit op de psychoactieve effecten van andere geneesmiddelen moduleren via ΔFosB-gemedieerde transcriptionele regulatie. ikn feit, toediening van Δ⁹-THC produceert kruisovergevoeligheid voor opioïden en amfetamine (Cadoni, et al., 2001, Lamarque, et al., 2001), consistent met deze hypothese. Bovendien werd gerapporteerd dat herhaalde toediening van de cannabinoïde agonist CP55,940 de door MOR gemedieerde G-eiwit activering in het NAc verhoogt, vergelijkbaar met muizen die op induceerbare wijze AFosB in het onderhavige onderzoek tot expressie brachten (Vigano, et al., 2005). Het effect van ΔFosB-expressie op Δ⁹-THC-gemedieerde gedragingen zijn niet geëvalueerd, maar de huidige resultaten sluiten interactie niet uit. De resultaten van deze en onze vorige studie (Zachariou, et al., 2006) tonen ΔFosB-geïnduceerde veranderingen in MOR en KOR / dynorfine in het striatum. De lonende effecten van Δ⁹-THC, gemeten op basis van plaatsvoorkeur, worden in MOR nulmuizen afgeschaft, terwijl deletie van KOR verzwakt Δ⁹-THC plaatst afkeer en onthult Δ⁹-THC plaatsvoorkeur (Ghozland, et al., 2002). Evenzo is de geconditioneerde plaatsaversie voor Δ⁹-THC is afwezig in pro-dynorfine knock-out in vergelijking met wild-type muizen (Zimmer, et al., 2001). Deze gegevens suggereren dat Δ⁹-THC kan meer voldoening geven na ΔFosB-inductie en consequente inductie van MOR-signalering met reducties in dynorfine-expressie.

Kort samengevaty, de resultaten van deze studie lieten zien dat expressie van ΔFosB in D₁R / dynorfine-positieve striatale neuronen verbeterden MOR- en KOR-gemedieerde signalering op het niveau van door G-eiwit gemedieerde remming van adenylylcyclase-activiteit in het NAc. Deze bevinding komt overeen met studies die een rol hebben gedemonstreerd voor het endogene opioïdesysteem bij beloning (Trigo, et al., 2010) en bieden een mogelijk mechanisme voor ΔFosB-gemedieerde effecten op beloning. Daarentegen CB₁R-gemedieerde signalering in het NAc werd niet significant beïnvloed door striatale AVosB-expressie onder de onderzochte aandoeningen, hoewel verdere studies gerechtvaardigd zijn om het effect van ΔFosB-inductie op het endocannabinoïdesysteem te bepalen.

onderzoekshoogtepunten

MOR-signalering is versterkt in de nucleus accumbens van muizen die AFosB tot expressie brengen
KOR-remming van adenylylcyclase is ook verhoogd bij muizen die AFosB tot expressie brengen
Expressie van ΔFosB verandert CB niet₁R-signalering in de nucleus accumbens

Aanvullend materiaal

01

Klik hier om te bekijken.^{(45K, pdf)}

Danksagung

De auteurs danken Hengjun He, Jordan Cox en Aaron Tomarchio voor technische assistentie met de [³⁵S] GTPyS-bindingstesten. Deze studie werd ondersteund door USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) en P01 DA08227 (EJN).

voetnoten

Disclaimer uitgever: Dit is een PDF-bestand van een onbewerkt manuscript dat is geaccepteerd voor publicatie. Als service aan onze klanten bieden wij deze vroege versie van het manuscript. Het manuscript zal een copy-editing ondergaan, een typografie en een review van het resulterende bewijs voordat het in zijn definitieve citeervorm wordt gepubliceerd. Houd er rekening mee dat tijdens het productieproces fouten kunnen worden ontdekt die van invloed kunnen zijn op de inhoud en alle wettelijke disclaimers die van toepassing zijn op het tijdschrift.

Referenties

Bozarth MA, Wise RA. Anatomisch onderscheiden opiaatreceptorvelden bemiddelen beloning en fysieke afhankelijkheid. Science. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Een snelle en gevoelige methode voor het kwantificeren van microgram hoeveelheden eiwit met behulp van het principe van eiwit-kleurstofbinding. Anaal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Chronische delta⁹-Tetrahydrocannabinolbehandeling produceert een tijdsafhankelijk verlies van door cannabinoïde receptor geactiveerde G-eiwitten in de hersenen. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Cannabinoïde receptor agonist werkzaamheid voor het stimuleren van [³⁵S] GTPyS-binding aan cerebellaire membranen van de rat correleert met agonist-geïnduceerde dalingen van de affiniteit van het bbp. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Gedragssensibilisatie na herhaalde blootstelling aan Delta 9-tetrahydrocannabinol en kruissensibilisatie met morfine. Psychopharmacology (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Gedragsensitisatie tot delta 9-tetrahydrocannabinol en kruissensibilisatie met morfine: differentiële veranderingen in de accumale schaal en kerndopaminetransmissie. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgene dieren met induceerbare, gerichte genexpressie in de hersenen. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Opioïde receptor-gekoppelde tweede boodschappers. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid en cannabinoïde receptorremming van adenylylcyclase in de hersenen. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioïde receptor stimulatie van [³⁵S] GTPγS-binding in de hersenen van cavia's: gebrek aan bewijs voor kappa₂-selectieve activering van G-eiwitten. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Regionale selectieve up-regulatie van micro-, delta- en kappa-opioïde receptoren, maar geen opioïde receptor-achtige 1-receptoren in de hersenen van enkefaline en dynorfine knock-out muizen. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatale celtypespecifieke overexpressie van DeltaFosB verhoogt de stimulans voor cocaïne. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Endocannabinoïde signaleringssysteem en hersenbeloning: nadruk op dopamine. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Motiverende effecten van cannabinoïden worden gemedieerd door mu-opioïde en kappa-opioïde receptoren. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Karakterisering en lokalisatie van cannabinoïde-receptoren in het brein van de rat: een kwantitatieve in vitro autoradiografische studie. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Lokalisatie van cannabinoïde CB (1) receptor-mRNA in neuronale subpopulaties van rattenstriatum: een dubbel-label in situ hybridisatie-onderzoek. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Internationale Unie van Farmacologie. XXVII. Classificatie van cannabinoïde-receptoren. Farmacologisch onderzoek. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Blokkering van de effecten van gerookte marihuana door de CB1-selectieve cannabinoïde receptorantagonist SR141716. Boog. Gen. Psychiatry. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Expressie van de transcriptiefactor deltaFosB in de hersenen regelt de gevoeligheid voor cocaïne. Natuur. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Neurocircuit van verslaving. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC gratis artikel] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Chronische behandeling met Delta (9) -tetrahydrocannabinol verbetert de reactie van het locomotorisme op amfetamine en heroïne. Gevolgen voor de kwetsbaarheid voor drugsverslaving. Neurofarmacologie. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Betrokkenheid van het endocannabinoïdesysteem bij drugsverslaving. Trends Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-Opioid receptor mRNA-expressie in het CNS van de rat: vergelijking met mu-receptor binding. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Verlies van door morfine geïnduceerde analgesie, beloningseffect en ontwenningsverschijnselen bij muizen die het u-opioïdreceptorgen missen. Natuur. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Regulatie van genexpressie en cocaïnebeloning door CREB en DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: een moleculaire switch voor langdurige aanpassing in de hersenen. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. D1-dopaminereceptoren moduleren deltaFosB-inductie in rattenstriatum na intermitterende toediening van morfine. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Beoordeling. Transcriptionele verslavingsmechanismen: rol van DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC gratis artikel] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: een moleculaire bemiddelaar van langetermijn neurale en gedragsmatige plasticiteit. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmacologische studies van de regulatie van chronische FOS-gerelateerde antigeeninductie door cocaïne in het striatum en nucleus accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Induceerbare, hersenregio-specifieke expressie van een dominante negatieve mutant van c-Jun in transgene muizen verlaagt de gevoeligheid voor cocaïne. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Verschillende patronen van DeltaFosB-inductie in de hersenen door misbruik van drugs. Synapse. 2008;62: 358-369. [PMC gratis artikel] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Lokalisatie en werkingsmechanismen van cannabinoïde-receptoren bij de glutamaterge synapsen van de muis nucleus accumbens. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Adenylaatcyclasetest. Adv. Cyclic Nucleotide Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioïde receptor-gestimuleerd [³⁵S] GTPyS-binding in thalamus van ratten en gekweekte cellijnen: Signaaltransductiemechanismen die ten grondslag liggen aan agonist-werkzaamheid. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Het endogene opioïde systeem: een veel voorkomend substraat bij drugsverslaving. Drug Alcohol Depend. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Neuro-anatomische lokalisatie van κ1 en κ2 opioïde receptoren in hersenen van ratten en cavia's. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blokkering van nucleus accumbens opiaatreceptoren verzwakt de intraveneuze heroïnebeloning bij de rat. Psychopharmacology (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Moleculaire mechanismen betrokken bij de asymmetrische interactie tussen cannabinoïde en opioïde systemen. Psychopharmacology (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Een essentiële rol voor DeltaFosB in de nucleus accumbens in morfineactie. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Twee hersensites voor cannabinoïde-beloning. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Activering van de gekloneerde humane kappa-opioïde receptor door agonisten verhoogt [35S] GTPyS-binding aan membranen: bepaling van potenties en werkzaamheid van liganden. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Afwezigheid van delta -9-tetrahydrocannabinol dysfore effecten bij muizen met dynorfine-deficiëntie. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Verhoogde mortaliteit, hypoactiviteit en hypoalgesie bij cannabinoïde CB1-receptor knock-out muizen. Proc. Natl. Acad. Sci. VS 1999;96: 5780-5785. [PMC gratis artikel] [PubMed]