Exprimarea și distribuția receptorului dopaminic se modifică dinamic în nucleul accumbens de șobolan după retragerea de la administrarea cocainei. (2010)

Reticularea proteinelor

Această metodă a fost descrisă în detaliu anterior (Boudreau și Wolf, 2005; Ferrario și colab., 2010). Șobolanii au fost decapitați, creierul lor a fost îndepărtat rapid și întregul NAc (sau subregiuni de miez și coajă) a fost disecat pe gheață dintr-o secțiune coronală de 2 mm obținută folosind o matrice cerebrală. Întregul țesut NAc a fost tăiat imediat în felii de 400 μm folosind un tocător de țesut McIllwain (Vibratome, St. Louis, MO), în timp ce subregiunile mai mici de miez și coajă au fost tocate manual cu ajutorul unui bisturiu. Țesutul a fost apoi adăugat la tuburile Eppendorf care conțineau LCR artificial răcit cu gheață dotat cu bis(sulfosuccinimidil)suberat (BS) 2 mM³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Reacția de reticulare a fost lăsată să se desfășoare timp de 30 min la 4°C cu agitare ușoară și apoi a fost terminată prin adăugarea de glicină 100 mM (10 min la 4°C). Țesutul a fost granulat prin centrifugare scurtă, resuspendat în tampon de liză rece cu gheață care conține inhibitori de protează și fosfatază, sonciat timp de 5 secunde și centrifugat din nou. Alicote de supernatant au fost depozitate la -80°C până la analizarea prin Western blot.

Analiza Western blot a DAR în țesutul reticulat

Probele (20-30μg proteină totală/lizat) au fost supuse electroforezei pe geluri Tris-HCl 4-15% (Biorad, Hercules, CA). Proteinele au fost transferate pe membrane de fluorură de poliviniliden pentru imunoblotare folosind curent constant (1.15 mA) timp de 1.5 ore. A fost folosită o bobină de răcire pentru a preveni încălzirea excesivă. Transferul complet al agregatelor cu greutate moleculară mare a fost confirmat prin colorarea gelurilor după transfer cu albastru Coomassie. În plus, am verificat că proteinele DAR reticulate nu au fost detectate în gelul de stivuire (datele nu sunt afișate). După transfer, membranele au fost spălate în ddH₂O, uscat la aer timp de 1 oră la temperatura camerei (RT), rehidratat cu 100% MeOH, spălat în soluție salină tamponată Tris (TBS) 1x și scufundat în NaOH 0.1 M, pH 10 timp de 15 minute la RT. Apoi, au fost spălate în TBS, blocate cu albumină serică bovină 3% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) în TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, timp de 1 oră la temperatura camerei și incubate peste noapte. la 4°C cu anticorpi care recunosc DAR D1 (1:1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1:1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) şi D3 DAR (1:1000; Millipore; Pisica # AB1786P). DAR D4 și D5 nu au fost analizate din cauza lipsei de anticorpi care recunosc atât receptorii reticulați, cât și receptorii intracelulari. Trebuie remarcat faptul că loturile de anticorpi DAR utilizate în aceste experimente au fost achiziționate în 2005-06; loturile actuale ale acestor anticorpi (2009-10) prezintă modele diferite de bandă care nu sunt modificate în țesutul de la șoarecii knockout DAR (observații nepublicate). După incubarea anticorpilor primari, membranele au fost spălate cu soluție TBS-T, incubate timp de 60 de minute cu IgG anti-iepure sau IgG anti-șoarece conjugate cu HRP (1:10,000; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), spălate cu TBS- T, clătit cu ddH₂O și scufundat în substrat de detectare a chimioluminiscenței (Amersham GE, Piscataway, NJ). După ce au fost dezvoltate petele, imaginile au fost capturate cu Versa Doc Imaging Software (Bio-Rad). Densitățile difuze ale benzilor de suprafață și intracelulare au fost determinate folosind software-ul Quantity One (Bio-Rad). Valorile pentru nivelurile de proteine ​​de suprafață, intracelulare și totale (de suprafață + intracelulare) au fost normalizate la proteina totală în banda determinată folosind Ponceau S (Sigma-Aldrich) și analizate cu TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, Marea Britanie). Raportul suprafață/intracelular nu a necesitat normalizare, deoarece ambele valori sunt determinate pe aceeași bandă. Pentru a examina specificitatea anticorpului, au fost efectuate studii de preabsorbție pentru anticorpii DAR cu peptida utilizată pentru a genera fiecare anticorp. Anticorpul DAR D1, D2 sau D3 a fost combinat cu o concentrație în exces de 10 ori de peptidă în 500μl de TBS, amestecat timp de 4 ore la 4°C, diluat la un volum final de 20 ml, adăugat la membrană și incubat peste noapte la 4°C.

D1 DAR

Nu au fost găsite diferențe semnificative între grupurile de cocaină și soluție salină pe WD45. Cu toate acestea, efectele autoadministrarii cocainei au fost evidente asupra WD1. Analiza întregului NAc a indicat un raport suprafață/intracelular D1 DAR semnificativ mai mare în grupul WD1-Coc în comparație cu grupurile care au auto-administrat soluție salină (Fig. 2a). Acest lucru a fost atribuit unei creșteri modeste a DAR D1 de suprafață combinată cu o scădere modestă a DAR D1 intracelulare (niciunul dintre aceste ultime două efecte nu a fost semnificativ statistic), în absența oricărei modificări a nivelurilor totale de DAR D1 (de suprafață + intracelular) (Fig. 2a). În cadrul nucleului NAc, nu a fost găsit niciun efect semnificativ pentru nicio măsură DAR D1 (Fig. 2b). Cu toate acestea, învelișul NAc a afișat modificări care au fost similare cu cele observate în întregul NAc, dar puțin mai robuste (Fig. 2c). Raportul D1 DAR suprafață/intracelular a fost crescut în grupul WD1-Coc datorită unei creșteri semnificative a expresiei D1 DAR de suprafață. Nivelurile intracelulare au fost neschimbate, dar a existat o tendință de creștere a nivelurilor totale de D1 DAR. În rezumat, o porțiune mai mare de proteină D1 DAR a fost exprimată la suprafață în coaja NAc a șobolanilor WD1-Coc, comparativ cu șobolanii WD1-Sal. Distribuția D1 DAR a revenit la starea de control după 45 de zile de retragere din autoadministrarea cocainei.

Fig. 2

Expresia suprafeței D1 DAR a fost crescută în coaja NAc după 1 zi de retragere de la autoadministrarea cocainei

D2 DAR

În întregul NAc, efectul major observat a fost scăderea expresiei D2 DAR la șobolanii care s-au auto-administrat cocaină în comparație cu martorii cu soluție salină (Fig. 3a). Acest lucru a fost cel mai pronunțat pe WD45, când s-au observat scăderi în banda de suprafață, în toate cele trei benzi intracelulare (~55, 75 și 100 kDa) și în nivelurile totale D2 DAR în comparație cu martorii salin. Raportul D2 DAR de suprafață/intracelular a fost ușor, dar semnificativ crescut în grupul WD45-Coc, datorită unei scăderi mai mari a DAR-urilor D2 intracelulare decât de suprafață, indicând probabil că celulele compensează scăderea expresiei D2 DAR prin distribuirea unei părți mai mari a DAR disponibile. D2 DAR la suprafață. Este important să rețineți că raportul crescut suprafață/intracelular nu sugerează o transmisie crescută a D2 DAR în acest caz particular, deoarece nivelul absolut al DAR-urilor D2 exprimate la suprafață a fost scăzut. În grupul WD1-Coc, singurul efect semnificativ a fost o scădere a nivelurilor intracelulare ale monomerului D2 DAR (~55kDa), în comparație cu ambele grupuri WD45-Sal și WD1-Sal, deși câteva alte măsuri au avut, de asemenea, tendința de a scădea (Fig. 3a).

Fig. 3

Nivelurile intracelulare și de suprafață de D2 DAR din NAc au scăzut după 45 de zile de retragere de la autoadministrarea cocainei

O scădere generală a expresiei D2 DAR a fost, de asemenea, evidentă în subregiunile de bază și înveliș ale NAc (Fig. 3b și 3c, respectiv), deși efectele tindeau să fie mai pronunțate în coajă. Astfel, nivelurile de suprafață D2 DAR au scăzut la șobolanii de cocaină numai pe WD45 în miez, dar pe WD1 și WD45 în coajă. Totalul DAR D2 a scăzut semnificativ doar în shell. Scăderi ale benzilor intracelulare D2 DAR au avut loc în ambele zile de retragere atât în ​​miez, cât și în înveliș, deși au existat diferențe specifice de retragere și regiune în ceea ce privește banda intracelulară a arătat un efect semnificativ statistic. În rezumat, nivelurile de proteine ​​​​de suprafață și intracelulare D2 DAR au fost scăzute în NAc după autoadministrarea cocainei. Unele scăderi au fost deja evidente de către WD1.

Expresia suprafeței D1 DAR crește tranzitoriu în coaja NAc după întreruperea autoadministrarii cocainei

După autoadministrarea cocainei, expresia suprafeței D1 DAR a fost crescută în coaja NAc pe WD1, dar normalizată de WD45, în timp ce nu au fost observate modificări în miez, indicând o creștere tranzitorie limitată la coajă. Rezultate similare au fost obținute în studiile anterioare folosind autoradiografia receptorului. Ben-Shahar și colab. (2007) a găsit o densitate crescută a D1 DAR în coaja NAc la șobolani la 20 de minute (dar nu la 14 sau 60 de zile) după întreruperea accesului prelungit (6 ore/zi) auto-administrare de cocaină, în timp ce nu s-au observat modificări în miez sau după un acces scurt de cocaină. -administrare (2 h/zi). Nader și colab. (2002) a observat o mică creștere a densității D1 DAR în coajă, dar nu în miez, a maimuțelor rhesus ucise după ultimele din 100 de sesiuni de autoadministrare a cocainei. Maimuțele evaluate la 30 de zile după întreruperea aceluiași regim au arătat o densitate crescută a DAR D1 în NAc rostral și atât în ​​miez cât și în coajă la niveluri mai caudale, dar densitatea DAR D1 s-a normalizat cu 90 de zile (Beveridge et al., 2009). Toate aceste rezultate, ca și ale noastre, indică o creștere tranzitorie a nivelurilor D1 DAR, în special în coajă, după întreruperea autoadministrarii cocainei. Cu toate acestea, un studiu anterior realizat de acest grup a indicat o scădere a densității D1 DAR în NAc (cel mai robust în coajă) la maimuțele rhesus care și-au auto-administrat cocaină pentru o perioadă mult mai lungă de timp (18 luni; Moore şi colab., 1998a). Scăderea legării D1 DAR în NAc a fost, de asemenea, găsită la 18 ore după întreruperea unui regim de acces extins la șobolani, deși aportul total de cocaină în acest studiu a fost mai mare decât în ​​studiile la șobolan discutate mai sus (De Montis și colab., 1998). Aceste rezultate indică faptul că adaptările D1 DAR depind de multe aspecte ale expunerii la cocaină. O altă considerație este că autoradiografia receptorilor măsoară receptorii celulari totali, în timp ce experimentele noastre de reticulare a proteinelor pot distinge între receptorii de suprafață și cei intracelulari. Interesant, un studiu de imunoblotting a constatat o tendință de creștere a nivelurilor D1 DAR în NAc al consumatorilor umani de cocaină (Worsley și colab., 2000).

Creșterea tranzitorie a expresiei suprafeței D1 DAR pe care am observat-o în coaja NAc este importantă pentru incubarea poftei de cocaină indusă de indicii? Acest lucru este dificil de evaluat, deoarece niciun studiu nu a testat efectul injectării intra-NAc a agoniştilor sau antagoniştilor D1 DAR asupra căutării cocainei induse de indicii după retragerea în cuşcă de acasă (sau reintroducerea indusă de indicii a căutării cocainei după antrenamentul de extincţie). Cu toate acestea, receptorii D1 din NAc medial (înveliș și miez medial) sunt implicați în restabilirea amorsată de cocaină a cocainei care caută după extincție, aparent printr-un mecanism care necesită activarea cooperantă a DAR D1 și D2 (Anderson și colab., 2003; 2008; Bachtell și colab., 2005; Schmidt și Pierce, 2006; Schmidt și colab., 2006). Împreună cu rezultatele noastre, acest lucru ar putea sugera că neuronii din învelișul NAc sunt mai sensibili la cocaina mediată de D1 DAR care caută în retragerea timpurie din cauza reglării pozitive tranzitorii D1R. Cu toate acestea, trebuie folosită prudență în extrapolarea de la studiile de reintegrare la studiile de incubație, deoarece antrenamentul pentru extincție și retragerea în cușcă acasă sunt asociate cu diferite neuroadaptari în NAc (Sutton și colab., 2003; Ghasemzadeh și colab., 2009; Wolf și Ferrario, 2010). Este important de reținut că DAR-urile D1 din amigdala bazolaterală și cortexul prefrontal sunt, de asemenea, importante pentru restabilirea indusă de indicii a căutării de cocaină (de exemplu, Ciccocioppo și colab., 2001; Alleweireldt și colab., 2006; Berglind și colab., 2006).

La nivel celular, atât DAR presinaptice cât și postsinaptice pot modula excitabilitatea neuronilor spinoși medii, tipul celular predominant și neuronul de ieșire al NAc (Nicola și colab., 2000; O'Donnell, 2003). Se știe că administrarea repetată de cocaină necontingentă sporește unele efecte ale activării D1 DAR în NAc. Astfel, la o zi până la o lună după întreruperea tratamentului cu cocaină, s-a observat o capacitate îmbunătățită a agoniștilor D1 DAR de a inhiba activitatea neuronilor spinoși medii (conduși de glutamatul iontoforetic) pe tot parcursul NAc (Henry și White, 1991; 1995). Cu toate acestea, este puțin probabil ca expresia crescută a suprafeței D1 DAR raportată aici să explice aceste rezultate anterioare, deoarece este limitată la înveliș și a fost demonstrată doar pe WD1. La o zi după o provocare cu cocaină administrată la 10-14 zile după întreruperea injecțiilor repetate cu cocaină, Beurrier și Maleka (2002) a observat o îmbunătățire a inhibării mediate de DA a răspunsurilor sinaptice excitatoare în neuronii spinoși medii NAc, care a fost mediată aparent de DAR presinaptice asemănătoare D1 pe terminalele nervoase glutamat. Cu toate acestea, posibilele efecte ale injecției provocate (de exemplu, vezi Boudreau și colab., 2007 și Kourrich și colab., 2007), combinate cu diferențele dintre specii și lipsa înregistrărilor în miez, fac dificilă compararea constatărilor lor cu ale noastre. De asemenea, trebuie remarcat faptul că agoniştii şi antagoniştii DAR utilizaţi de Henry și White (1991; 1995) și Beurrier și Malenka (2002) nu a făcut distincție între DAR D1 și D5.

Nivelurile D2 DAR scad în NAc după întreruperea autoadministrarii cocainei

Efectul principal observat în studiul nostru a fost o scădere a proteinei D2 DAR atât în ​​miezul NAc, cât și în înveliș după întreruperea autoadministrarii cocainei, comparativ cu controalele cu soluție salină. Acest lucru a fost mai pronunțat în înveliș, unde benzile intracelulare, de suprafață și totale au fost scăzute atât pe WD1, cât și pe WD45. În miez, expresia suprafeței D2 DAR a scăzut doar pe WD45, iar nivelurile totale D2 DAR nu au scăzut semnificativ. Câteva alte studii au găsit în mod similar o scădere a expresiei D2 DAR după întreruperea autoadministrarii cocainei. La maimuțele rhesus cu experiență extinsă în autoadministrarea cocainei, densitatea D2 DAR, măsurată cu autoradiografia receptorului, a fost scăzută în multe regiuni striatale, inclusiv miezul și învelișul NAc, atunci când țesutul a fost obținut imediat după ultima sesiune (Moore şi colab., 1998b; Nader și colab., 2002). Folosind PET, acest efect în ganglionii bazali a fost detectat în decurs de 1 săptămână de la inițierea autoadministrarii cocainei (Nader și colab., 2006). Rata cu care nivelurile de D2 DAR se recuperează în timpul sevrajului poate depinde de consumul total de cocaină. Într-un studiu de autoradiografie, nivelurile D2 DAR din NAc au revenit la valorile de control după 30 sau 90 de zile de retragere de la 100 de sesiuni de auto-administrare de cocaină (Beveridge et al., 2009). Cu toate acestea, într-un studiu PET al maimuțelor cu expunere mai lungă (1 an) și, prin urmare, cu un aport total mai mare de cocaină, 3 din 5 maimuțe au arătat o recuperare a nivelurilor D2 DAR după 90 de zile, în timp ce 2 maimuțe nu au prezentat nicio recuperare nici după 12 luni (Nader și colab., 2006). În general, aceste rezultate corespund bine cu constatările noastre privind scăderea nivelurilor D2 DAR pe parcursul retragerii.

Studiile PET ale dependenților de cocaină umani au găsit, de asemenea, niveluri reduse de D2 DAR în multe regiuni striate, inclusiv striatul ventral, care au fost evidente în retragerea timpurie, precum și după 3-4 luni de detoxifiere (Volkow și colab., 1990, 1993, 1997). Cu toate acestea, semnificația comportamentului este neclară, deoarece disponibilitatea D2 DAR nu s-a corelat cu efectele subiective pozitive ale cocainei sau cu decizia de a consuma mai multă cocaină după o doză de amorsare (Martinez și colab., 2004). Este important de remarcat faptul că, în timp ce pofta de cocaină indusă de indicii arată o creștere dependentă de timp în timpul sevrajului („incubare”), acest lucru nu se întâmplă pentru căutarea de cocaină amorsată de cocaină (Lu şi colab., 2004a). Prin urmare, rezultatele de Martinez şi colab. (2004) lăsați deschisă posibilitatea ca disponibilitatea D2 DAR să se coreleze cu căutarea de cocaină indusă de indicii, punctul central al modelului de incubație studiat aici. Disponibilitatea scăzută a D2 DAR la consumatorii umani de cocaină se corelează cu scăderea metabolismului cortical frontal (Volkow și colab., 1993). Împreună cu alte schimbări, acest lucru poate contribui la pierderea controlului care apare atunci când dependenții sunt expuși la droguri sau indicii asociate cu droguri și la o mai mare importanță a drogurilor în comparație cu recompensele non-drog (Volkow și colab., 2007; Volkow și colab., 2009). Trebuie remarcat faptul că scăderea nivelurilor D2 DAR într-un studiu PET poate indica o eliberare crescută de DA mai degrabă decât scăderea nivelurilor D2 DAR, dar rezultatele recente argumentează împotriva acestei explicații în cazul pacienților dependenți de cocaină (Martinez și colab., 2009). Mai mult, un studiu post-mortem asupra consumatorilor umani de cocaină a constatat o tendință către scăderea nivelurilor D2 DAR în NAc folosind imunoblot (Worsley și colab., 2000).

Studiile la pacienții umani de cocaină nu pot determina dacă disponibilitatea scăzută a D2 DAR este o trăsătură predispozantă sau un rezultat al expunerii la cocaină, dar alte rezultate indică faptul că ambele sunt adevărate. Pe de o parte, experimentele efectuate pe oameni care nu consumă droguri au găsit o corelație inversă între disponibilitatea D2 DAR și rapoartele de „placi de droguri” atunci când este administrat metilfenidat (Volkow și colab., 1999; 2002). Aceste constatări sugerează că disponibilitatea scăzută a D2 DAR poate crește vulnerabilitatea la dependență. O concluzie similară este susținută de studiile la maimuțele rhesus. La maimuțele găzduite social, atingerea dominanței sociale crește disponibilitatea D2 DAR în striat și aceasta este asociată cu o sensibilitate mai scăzută la efectele de întărire ale cocainei în comparație cu maimuțele subordonate (Morgan și colab., 2002). Statutul social este, de asemenea, corelat cu disponibilitatea DAR striatală D2 la voluntarii umani fără droguri (Martinez și colab., 2010). Pe de altă parte, atât studiile PET, cât și studiile de autoradiografie a receptorilor arată că autoadministrarea de cocaină pe termen lung scade disponibilitatea receptorului striat D2 DAR la maimuțele adăpostite individual, așa cum sa discutat mai sus (Moore şi colab., 1998b; Nader și colab., 2002; Nader și colab., 2006). De asemenea, autoadministrarea cronică a cocainei pare să scadă disponibilitatea D2 DAR la maimuțele dominante adăpostite social (Czoty și colab., 2004). Astfel, după autoadministrarea pe termen lung a cocainei, nu au mai existat diferențe semnificative în disponibilitatea receptorului D2 sau efectele de întărire ale cocainei între maimuțele dominante și subordonate (Czoty și colab., 2004). Cu toate acestea, nivelurile crescute de D2 DAR au reapărut la maimuțele dominante în timpul abstinenței și acest lucru a fost corelat cu o latență mai lungă ca reacție la noutate, o trăsătură predictivă a sensibilității scăzute la efectele de întărire ale cocainei (Czoty și colab., 2010).

Ca și la oameni și maimuțe, studiile pe șobolani indică faptul că disponibilitatea scăzută a D2 DAR este un factor de risc pentru vulnerabilitatea la cocaină. Astfel, studiile PET la șobolani cu impulsivitate ridicată (o trăsătură asociată cu autoadministrarea crescută a cocainei) arată o disponibilitate redusă a DAR D2/D3 în striatul ventral (Dalley și colab., 2007). Nivelurile D2 DAR din NAc sunt, de asemenea, reduse la șobolanii care prezintă un răspuns locomotoriu ridicat la noutate, o altă trăsătură asociată cu vulnerabilitatea la dependență (Hooks și colab., 1994). Rezultatele noastre la șobolani indică faptul că scăderea nivelurilor D2 DAR în NAc poate fi, de asemenea, o consecință a expunerii repetate la cocaină, în concordanță cu studiile la maimuțe și oameni (mai sus). Cu toate acestea, două studii de autorradiografie a receptorilor la șobolani au găsit rezultate care diferă de ale noastre. Ben-Shahar și colab. (2007) nu a observat scăderea nivelurilor D2 DAR în NAc după retragerea (20 min, 14 zile din 60 de zile) dintr-un regim de autoadministrare a cocainei cu acces extins similar cu al nostru (6 ore/zi), deși s-au observat scăderi în învelișul NAc după un regim de acces limitat (2 ore/zi) și 14 zile de retragere (Ben-Shahar și colab., 2007). Stéfanski și colab. (2007) nu au găsit modificări ale nivelurilor D2 DAR în miez sau înveliș la 24 de ore după întreruperea autoadministrarii de cocaină cu acces limitat (2 ore/zi), deși nivelurile D2 DAR au scăzut în controalele cocainei în jug. După cum sa menționat mai sus, autoradiografia receptorilor măsoară receptorii celulari totali, în timp ce studiile PET și de reticulare a proteinelor măsoară receptorii de suprafață celulară.

În general, studiile privind relația dintre nivelurile D2 DAR și autoadministrarea cocainei susțin un model în care D2 DAR limitează în mod normal autoadministrarea cocainei. Prin urmare, sugerăm că nivelurile scăzute de D2 DAR observate în experimentele noastre pot contribui la căutarea de cocaină indusă de indicii după retragerea cocainei. În special, faptul că expresia suprafeței D2 DAR în miezul NAc a fost scăzută pe WD45, dar nu pe WD1, combinat cu un rol cheie pentru miezul NAc în căutarea de cocaină indusă de indicii, sugerează că reglarea scăderii D2 DAR dependentă de timp în miezul NAc poate contribuie la intensificarea dependentă de timp a căutării de cocaină indusă de indicii. Acest lucru ar prezice că perfuzia intra-NAc a unui agonist D2 în timpul sevrajului ar reduce căutarea de cocaină indusă de indicii. Din păcate, niciun studiu nu a examinat efectele medicamentelor intra-NAc D2 DAR în modelul de incubație. Pe de altă parte, studiile privind reintegrarea amorsată cu cocaină indică faptul că DAR D1 și D2 din coajă și miezul medial lucrează în cooperare pentru a promova căutarea de cocaină (Anderson și colab., 2003; Bachtell și colab., 2005; Schmidt și Pierce, 2006; Schmidt și colab., 2006). Pe baza acestor constatări, scăderea expresiei D2 DAR observată în experimentele noastre ar putea fi prezisă pentru a reduce căutarea de cocaină, adică va produce un efect opus intensificării dependente de sevraj care este de fapt observată. Discrepanța poate reflecta problemele introduse prin generalizarea de la reintegrarea alimentată de cocaină după antrenamentul de extincție la căutarea indusă de cocaină după retragere.

O creștere dependentă de timp a exprimării suprafeței D3 DAR apare în miezul NAc după întreruperea autoadministrarii cocainei

Studiile asupra drogurilor care preferă D3 DAR în paradigmele de autoadministrare și restabilire a cocainei sugerează că antagoniștii D3 DAR pot fi utili în tratarea dependenței de cocaină și, în special, în reducerea reactivității la indicii asociate cocainei (Heidbreder și colab., 2005; 2008; Le Foll și colab., 2005; Xi și Gardner, 2007). Aceste rezultate implică faptul că activarea D3 DAR de către DA endogen poate fi implicată în medierea căutării de cocaină indusă de indicii. Rezultatele noastre arată că expresia suprafeței D3 DAR în miezul NAc este neschimbată pe WD1 de la autoadministrarea de cocaină cu acces extins, dar a crescut pe WD45 în asociere cu incubarea poftei de cocaină. Expresia suprafeței D3 DAR nu a crescut semnificativ în coajă, deși a existat o creștere mică, dar semnificativă a raportului suprafață/intracelular. Având în vedere rolul transmisiei D3 DAR în răspunsul la indicii asociate cocainei și importanța miezului pentru căutarea cocainei induse de indicii, este tentant să speculăm că expresia crescută a suprafeței D3 DAR în miezul NAc a contribuit la incubarea cocainei induse de indicii. pofta care se observă pe WD45. Cu toate acestea, locul neural la care antagoniștii D3 DAR acționează pentru a reduce căutarea de cocaină nu a fost stabilit. În mod specific, niciun studiu nu a examinat efectul injectării intra-NAc a drogurilor preferând D3 DAR asupra căutării de cocaină indusă de indicii. Într-un alt model, Schmidt şi colab. (2006) a constatat că injectarea agonistului care preferă D3 PD 128,907 în miez sau înveliș nu a produs repunerea în căutarea cocainei după antrenamentul de extincție.

Rezultatele noastre sunt în general în concordanță cu studiile de autorradiografie a receptorilor care au măsurat nivelurile totale de D3 DAR în NAc după expunerea la cocaină. Staley și Mash (1996) a raportat că legarea D3 DAR a fost mai mare în NAc al victimelor supradozajului de cocaină, în comparație cu martorii potrivite în funcție de vârstă. După expunerea la cocaină într-o paradigmă de preferință a locului condiționat și trei zile de retragere, șoarecii au prezentat o legare crescută a D3 DAR în miezul și învelișul NAc (Le Foll și colab., 2002). Neisewander și colab. (2004) a măsurat legarea D3 DAR la șobolani cu experiență extinsă de autoadministrare a cocainei, care au fost testați pentru restabilirea amorsată cu cocaină după diferite perioade de retragere și apoi uciși 24 de ore mai târziu. Legarea D3 DAR în NAc a fost neschimbată pe WD1, dar a crescut după un timp mai lung (WD31-32), în concordanță cu observația noastră a unei creșteri dependente de timp. În plus, un tratament medicamentos în timpul sevrajului, care a redus căutarea de cocaină, a atenuat și creșterea legării D3 DAR, sugerând că reglarea D3 DAR este legată funcțional de căutarea de cocaină. Trebuie remarcat faptul că D3 DAR crește în Neisewander și colab. (2004) au fost semnificative în miez, în timp ce doar tendințele au fost observate în coajă, dar subregiunile au fost analizate într-o porțiune rostrală a NAc unde miezul și coaja sunt mai puțin distincte. Analiza noastră a fost efectuată pe miez și înveliș din porțiunile rostrale și caudale ale NAc.

Această lucrare a fost susținută de DA009621, DA00453 și un NARSAD Distinguished Investigator Award pentru MEW, DA020654 către MM și predoctoral National Research Service Award DA021488 pentru KLC