Efectul supraexprimării ΔFosB asupra semnalizării mediate de receptorul opioid și receptorul canabinoid în nucleul accumbens (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

Sursă

Departamentul de Farmacologie și Toxicologie și Institutul de Studii privind Drogurile și Alcoolul, Virginia Commonwealth University School of Medicine, Richmond, VA 23298, SUA.

Abstract

Factorul stabil de transcripție ΔFosB este indus în nucleul accumbens (NAc) prin expunerea cronică la mai multe medicamente de abuz și expresia transgenică a ΔFosB în striatum sporește proprietățile pline de satisfacție ale morfinei și cocaineie. Totuși, baza mecanică a acestor observații este înțeleasă incomplet. Am folosit un model bitransgenic de șoarece cu expresia inductibilă a ΔFosB în dopamina D (1) cu neuroni striatali care conțin dynorfină pentru a determina efectul expresiei ΔFosB asupra semnalizării receptorilor opioizi și canabinoizi în NAc. Rezultatele au arătat că activitatea de proteină G mediată de opioid și inhibarea adenililciclazei au fost îmbunătățite în NAc al șoarecilor care au exprimat ΔFosB. În mod similar, inhibarea opioidului kappa a adenilil ciclazei a fost îmbunătățită la șoarecii care exprimă ΔFosB. În contrast, semnalarea mediată de receptorul canabinoid nu a fost diferită între șoarecii care au supraexprimat ΔFosB și șoarecii de control. Tconcluziile studiului sugerează că semnalarea receptorului opioid și canabinoid sunt modulate diferențiat prin exprimarea ΔFosB și indică faptul că expresia ΔFosB poate produce unele dintre efectele sale prin intermediul semnalizării receptorilor opioizi mu și kappa îmbunătățită în NAc.

Cuvinte cheie: G-proteină, adenilil ciclază, striatum

1. Introducere

Receptori opioizi și canabinoizi CB₁ receptori (CB₁R) sunt obiectivele neurobiologice pentru două clase de droguri utilizate pe scară largă care includ opioidele de morfină, heroină și prescripție și marijuana (Δ⁹-tetrahidrocanabinol (THC)). Efectele acute ale opioidelor și canabinoizilor sunt mediate de receptorii cuplați cu proteină G care activează în principal G_{i / o} proteine și produce reacții efectoare în aval, cum ar fi inhibarea adenilil ciclazei (Copii, 1991, Childers și colab., 1992, Howlett și colab., 2002). Motorul, afectarea memoriei și efectele psihoactive ale lui Δ⁹-THC sunt produse de CB₁R (Huestis și colab., 2001, Zimmer și colab., 1999), care sunt distribuite pe larg în creier, cu niveluri ridicate în ganglionii bazali, hipocampul și cerebelul (Herkenham, și colab., 1991). Efectele analgezice și de recompensare ale majorității medicamentelor opioide relevante clinic și abuzate sunt mediate în principal de receptorii mu opioizi (MOR) (Matthes și colab., 1996), care sunt îmbogățite în sistemul limbic și brainstem (Mansour și colab., 1994). Sistemul mezolimbic, compus din proiecții dopaminergice din zona tegmentală ventrală (VTA) și nucleul accumbens (NAc), joacă un rol important în efectele recompensatoare ale opioidelor și canabinoizilor (Bozarth și Wise, 1984, Vaccarino, și colab., 1985, Zangen și colab., 2006), precum și alte medicamente de abuz (Koob și Volkow, 2010). Mai mult, sistemele endogene de opiacee și canabinoide sunt implicate în efectele recompensatoare ale mai multor clase de medicamente psihoactive (Maldonado și colab., 2006, Trigo și colab., 2010). Astfel, este important să se elucideze mecanismele prin care opioide și CB₁R sunt reglementate în NAc.

O întrebare centrală în domeniul abuzului de droguri a fost identificarea proteinelor care mediază trecerea de la efectele acute până la cele pe termen lung ale medicamentelor psihoactive. Factorul de transcripție AP-1 ΔFosB este deosebit de interesant deoarece este un produs varianta trunchiată, fosb gena care se acumulează după expunerea repetată la medicamente de abuz sau recompense naturale (McClung și colab., 2004, Nestler, 2008, Nestler și colab., 1999). Am constatat că ΔFosB este indus în creier după expunerea repetată la morfină, Δ⁹-THC, cocaina sau etanol, fiecare medicament producând un model regional unic de expresie ΔFosB (Perrotti și colab., 2008). O constatare consistentă a medicamentelor a fost că ΔFosB a fost puternic indus în striatum, unde toate cele patru medicamente au indus ΔFosB în nucleul NAc și toți cu excepția Δ⁹-THC a indus semnificativ expresia în coaja NAc și caudate-putamen.

Studiile farmacologice au arătat că administrarea concomitentă a dopaminei D₁ receptor (D₁R), SCH 23390 a blocat inducerea ΔFosB în NAc și caudate-putamen după administrarea intermitentă de cocaină sau morfină, sugerând importanța potențială a D₁R-neuroni (Muller și Unterwald, 2005, Nye și colab., 1995). Efectul inducției ΔFosB asupra comportamentelor mediate de medicament a fost investigat utilizând șoareci bitransgenici care exprimă ΔFosB în populațiile neuronale specifice ale NAc și striatumului dorsal (Chen și colab., 1998). Șoareci care exprimă ΔFosB în dynorfin / D₁R neuronii pozitivi în NAc și în striatul dorsal (linia 11A) prezintă răspunsuri modificate la medicamentele de abuz, în special sensibilitate crescută la efectele de recompensare ale cocainei sau morfinei (Colby și colab., 2003, Kelz și colab., 1999, Zachariou și colab., 2006). Aceste modificări au apărut în absența modificărilor nivelurilor de MOR sau a diferitelor subunități de proteine G. Cu toate acestea, nivelurile de mRNA ale dynorfinelor au fost reduse la NAc a șoarecilor care exprimă ΔFosB (Zachariou și colab., 2006), sugerând că o țintă a ΔFosB este o genă care codifică o peptidă endogenă opioidă. Induzia ΔFosB ar putea produce, de asemenea, modificări comportamentale prin reglarea semnalizării receptorului în NAc, dar această posibilitate nu a fost investigată. Prin urmare, studiile de față au utilizat modelul mouse-ului bitransgenic pentru a determina dacă supraexprimarea ΔFosB în dynorfin / D₁R conținând neuronii striatali modifică activitatea proteinei G mediată de MOR și inhibarea ADN de ciclază mediată de MOR și KOR în NAc. Efectul ΔFosB asupra CB₁Activitatea proteinei G mediată de R a fost de asemenea evaluată deoarece Δ⁹Administrarea THC induce ΔFosB în NAc (Perrotti și colab., 2008) și sistemul endocannabinoid este cunoscut pentru a reglementa circuitele de recompensare a creierului (Gardner, 2005, Maldonado și colab., 2006), dar efectul ΔFosB asupra sistemului endocannabinoid nu a fost investigat.

2. Materiale si metode

2.1. Reactivi

[³⁵S] GTPyS (1250 Ci / mmol), [a-³²P] ATP (800 Ci / mmol) și [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) au fost achiziționate de la PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, GDP, cAMP, albumină serică bovină, creatin fosfokinază, papaverină, imidazol și WIN-55212-2 au fost achiziționate de la Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPyS a fost achiziționat de la Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO a fost furnizat de programul de aprovizionare cu droguri al Institutului Național pentru Abuzul de Droguri (Rockville, MD). Fluidul de scintilație Econo-1 a fost obținut de la Fisher Scientific (Norcross, GA). Ecolitul de scintilație a fost obținut de la ICN (Costa Mesa, CA). Toate celelalte substanțe chimice au fost obținute de la Sigma Aldrich sau Fisher Scientific.

2.2. Mouse-uri

Șoarecii bitransgenici masculi derivați din NSE-tTA (linia A) x TetOp-ΔFosB (linia 11) au fost generați așa cum s-a descris în Kelz și colab. (Kelz și colab., 1999). Șoarecii bitransgenici au fost concepuți și crescuți pe doxiciclină (100 μg în apa de băut) pentru a suprima expresia transgenei. La vârsta de 8, doxiciclina a fost omisă din apă pentru jumătate din șoareci pentru a permite exprimarea transgenei, în timp ce șoarecii rămași s-au menținut pe doxiciclină pentru a suprima transgena. Creierele au fost colectate 8 săptămâni mai târziu, momentul în care efectele transcripționale ale ΔFosB sunt maxime (McClung și Nestler, 2003). A fost utilizată oa doua linie de șoarece transgenică în care Δc-Jun, un antagonist negativ dominant al c-Jun, este exprimat în D₁R / dinorfin și D₂Celulele R / enkephalin ale striatumului, hipocampului și cortexului parietal (Peakman și colab., 2003). C-Jun și proteinele din familia Jun asociate se dimerizează cu proteinele familiei Fos și se leagă la situsul AP-1 al genelor țintă pentru a regla transcripția. Cu toate acestea, trunchierea capătului N-terminal al c-Jun (Δc-Jun) transformă complexul inactiv transcripțional și capabil să obstrucționeze legarea ADN a complexelor active AP-1. Șoarecii bitransgenici masculi derivați din NSE-tTA (linia A) x TetOp-FLAG-Δc-Jun (linia E) s-au generat așa cum s-a descris în Peakman și colab. (Peakman și colab., 2003). Șoarecii bitransgenici au fost concepuți și crescuți pe doxiciclină (100 μg în apa de băut) pentru a suprima expresia transgenei. Puii au fost înțărcați la săptămâni 3, genotipați și separați în grupuri, cu jumătate întreținute pe apă care conține doxiciclină și jumătate pe apă de băut regulat pentru a induce expresia FLAG-Δc-Jun. Creierele au fost colectate 6 săptămâni mai târziu, momentul în care s-au măsurat nivelele maxime de FLAG-Δc-Jun (Peakman și colab., 2003). Toate procedurile pe animale au fost efectuate în conformitate cu Ghidul Național pentru Sănătatea și Utilizarea Animalelor de Laborator.

2.3. Pregătirea membranelor

Creierul a fost păstrat la -80 ° C până în ziua testului. Înainte de testare, fiecare creier a fost decongelat și NAc a fost disecat pe gheață. Fiecare probă a fost omogenizată în 50 mM Tris-HCI, 3 mM MgCI₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (tampon de membrană) cu curbele 20 dintr-un omogenizator de sticlă la 4 ° C. Omogenatul a fost centrifugat la 48,000x g la 4 ° C pentru 10 min, resuspendat în tampon de membrană, centrifugat din nou la 48,000 × g la 4 ° C pentru 10 min și resuspendat în 50 mM Tris-HCI, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCI, pH 7.4 (tampon de testare). Nivelurile de proteine au fost determinate prin metoda lui Bradford (Bradford, 1976) utilizând albumina serică bovină (BSA) ca standard.

2.4. Agonist-stimulat [³⁵S] GTPyS

Membranele au fost pre-incubate timp de 10 minute la 30 ° C cu adenozin deaminază (3 mU / ml) în tampon de testare. Membranele (5-10 pg proteină) au fost apoi incubate pentru 2 hr la 30 ° C în tampon de analiză conținând 0.1% (g / v) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPyS, 30 μM GDP și adenozin deaminază (3 mU / ml) cu și fără concentrații adecvate de DAMGO sau WIN55,212-2. Legarea nespecifică a fost măsurată cu 20 uM GTPyS. Incubarea a fost terminată prin filtrare prin filtre de fibră de sticlă GF / B, urmată de spălarea cu 3 cu 3 ml de 50 mM Tris-HCI gheață rece, pH 7.4. Baza de radioactivitate legată a fost determinată prin spectrofotometrie de scintilație în lichid după extracția peste noapte a filtrelor în fluidul de scintilație Econo-1.

2.5. Testul de adenililciclază

Membranele (proteina 5-25 μg) au fost preincubate cu adenozin deaminază, așa cum s-a descris mai sus, apoi au fost incubate timp de 15 min la 30 ° C în prezența sau absența fornolinei 1μM, cu sau fără DAMGO, U50,488H sau WIN55,212-2. 50 pM ATP, [a-³²P] ATP (1.5 μCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (greutate / volum) BSA, 50 μM ciclic AMP, 50 μM GTP, 0.2 mM papaverină, 5 mM fosfocreatină, 20 unități / ml creatină fosfokinază și adenozin deaminază / ml) într-un volum final de 3 μl. În aceste condiții, [a-³²P] cAMP recuperat a fost, în general, mai mic decât 1% din cantitatea totală de [³²P] ATP în fiecare probă. Reacția s-a terminat prin fierbere pentru 3 min și [³²P] AMP ciclic a fost izolat prin metoda cu două coloane (Dowex și alumină) de Salomon (Salomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) a fost adăugat la fiecare tub înainte de cromatografia pe coloană ca un standard intern. Radioactivitatea a fost determinată prin spectrofotometrie de scintilație în lichid (randament 45% pentru ³H) după ce s-au dizolvat 4.5 ml din eluat în 14.5 ml de fluid de scintilație Ecolite.

2.6. Analiza datelor

Dacă nu se indică altfel, datele sunt raportate ca valori medii ± SE ale experimentelor separate 4-8, fiecare dintre acestea fiind efectuată în triplicat. Net-stimulat [³⁵S] GTPyS se calculează ca legare stimulată de agonist minus legarea bazală. Activitatea adenilil ciclazei stimulată de forskolin net este definită ca activitate stimulată de forskolin - activitate bazală (pmol / mg / min). Inhibarea procentuală a activității adenililciclazei stimulată de forskolin este definită ca activitate activă stimulată de forskolin în absența agoniștilor - activitate stimulată de forskolin net în prezența activității stimulată de agonist / net forskolin în absența agonistului × 100. Toate analizele de curbă și analize statistice au fost efectuate utilizând Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Curbele de concentrație-efect au fost analizate prin regresie neliniară iterativă pentru a obține EC₅₀ și E_max valori. Semnificația statistică a datelor privind efectul concentrației a fost determinată prin analiza variabilă în două sensuri (ANOVA), utilizând doza de agonist și inducția genetică (on sau off) ca factori principali. Semnificația statistică a valorilor de potrivire a curbei (E_max sau CE₅₀) a fost determinată de testul t al Studentului cu două cozi neperecheate, folosind corecția lui Welch sau transformarea rădăcinii pătrate a datelor acolo unde este necesar pentru a corecta variațiile inegale (detectate prin testul F) în EC₅₀ valori.

3. Rezultate

3.1. Efectul exprimării ΔFosB asupra activării proteinei G mediată de receptorul opioid și cannabinoid

Pentru a determina dacă MOR- sau CB₁Activarea proteinei G mediată de R a fost modificată prin expresia transgenică inductivă a ΔFosB în NAc, stimulată de agonist [³⁵S] GTPyS a fost examinată în membrane izolate preparate din această regiune a șoarecilor bitransgenici care exprimă în mod condiționat (ΔFosB on) sau nu exprima (ΔFosB off) transgena ΔFosB. Analogul de enkefalină MOR-selectiv DAMGO a fost utilizat pentru a activa MOR, iar aminoalchinindolul cannabinoid WIN55,212-2 a fost utilizat pentru a activa CB₁R. Acești liganzi s-au dovedit anterior a fi agoniști compleți la MOR și CB₁R, respectiv (Breivogel și colab., 1998, Selley și colab., 1997). Nu a fost fezabil să se examineze activitatea proteinei G mediată de KOR, deoarece semnalul este prea scăzut în creierul rozătoarelor (Childers și colab., 1998). Rezultatele au arătat stimularea dependentă de concentrație a activității proteinei G atât de DAMGO cât și de WIN55,122-2 în NAc de la ΔFosB off și ΔFosB la șoareci (Figura 1). Pentru activitatea stimulată de DAMGO (Figura 1A), ANOVA bidirecțională a datelor despre efectul concentrației a relevat efecte principale semnificative ale stării ΔFosB (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) și a concentrației DAMGO (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) fără interacțiune semnificativă (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Analiza de regresie neliniară a curbelor concentrație-efect a relevat un DAMGO E semnificativ mai mare_max valoare în ΔFosB pe șoareci (E_max = Stimulare 73 ± 5.2%) comparativ cu șoareci de tip ΔFosB (E_max = 56 ± 4.1% stimulare; p <0.05 diferit de ΔFosB la șoareci prin testul t Student). DAMGO EC₅₀ valorile nu au fost diferite între șoarecii ΔFosB și șoarecii de pe ΔFosB (302 ± 72 nM față de 212 ± 56 nM, respectiv, p = 0.346).

Efectul exprimării ΔFosB asupra agoniștilor [³⁵S] GTPyS în NAc. Membranele de la șoareci care exprimă ΔFosB (ΔFosB on) sau de control (ΔFosB off) au fost analizați așa cum s-a descris în Metode utilizând concentrații variate ...

Spre deosebire de rezultatele obținute cu agonistul MOR DAMGO, nu s-au observat diferențe dependente de statutul ΔFosB în activarea proteinei G cu agonistul canabinoid WIN55,212-2 (Figura 1B). ANOVA bidirecțională a datelor despre efectul concentrației WIN55,212-2 a relevat un efect principal semnificativ al concentrației WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), dar nu cu starea ΔFosB (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) și nu a existat nicio interacțiune (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). În mod similar, nu a existat niciun efect al statutului ΔFosB asupra WIN55,212-2 E_max (103 ± 6% versus 108 ± 8% stimulare în ΔFosB pe șoareci și respectiv pe șoareci, respectiv, p = 0.813 prin testul t Student) sau EC₅₀ (103 ± 20 nM comparativ cu 170 ± 23 nM în ΔFosB pe șoareci și respectiv pe șoareci, p = 0.123).

Pe baza formei curbelor și a faptului că studiile noastre anterioare au arătat curbe bifazice WIN55,212-2-concentrație în creier (Breivogel și colab., 1999, Breivogel și colab., 1998), curbele WIN55,212-2 au fost, de asemenea, analizate utilizând un model cu două situri. Analiza datelor medii a arătat o ușoară îmbunătățire a bunăstării potrivirii utilizând modelul cu două situri (R² = 0.933 și 0.914, suma pătratelor = 3644 și 5463 în ΔFosB pe șoareci și respectiv pe șoareci) comparativ cu modelul cu un singur sit (R² = 0.891 și 0.879, suma pătratelor = 6561 și 6628 în ΔFosB pe șoareci și respectiv pe șoareci). Cu toate acestea, nu s-au constatat diferențe semnificative între ΔFosB și șoareci în E_max sau CE₅₀ valorile siturilor cu potențial ridicat sau scăzut (Masa suplimentară 1), deși a existat o tendință spre un nivel mai scăzut al CE₅₀ la nivelul situsului cu potențial ridicat la șoareci cu ΔFosB la (EC₅₀înalt = 28.0 ± 10.6 nM) comparativ cu cele cu ΔFosB off (EC₅₀înalt = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Mai mult, nu a existat niciun efect al statutului ΔFosB asupra funcției bazale [³⁵S] GTPyS în membranele NAc (253 ± 14 versus 226 ± 14 fmol / mg în ΔFosB pe șoareci și respectiv pe șoareci, p = 0.188). Aceste date indică faptul că exprimarea transgenică inductibilă a ΔFosB în NAc a șoarecilor a crescut activarea proteinei G mediată de MOR fără a afecta în mod semnificativ CB₁R-mediată sau bazică a proteinei G.

3.2. Efectul ΔFosB asupra inhibiției mediate de receptorul opioid și receptorul canabinoid al adenilil ciclazei

Pentru a evalua efectul exprimării transgenice inductibile a ΔFosB asupra modulației activității efectoare în aval de MOR și CB₁R, inhibarea activității adenilil ciclazei stimulată de 1 μM forskolin a fost examinată în membranele NAc. Pe lângă MOR și CB₁R-inhibarea mediată a activității adenilil ciclazei, efectele activității KOR au fost, de asemenea, examinate utilizând agonistul complet KOR-selectiv U50,488 (Zhu și colab., 1997), deoarece rezultatele anterioare au arătat că mARN-ul dynorfin a fost o țintă a ΔFosB în modelul bitransgenic (Zachariou și colab., 2006). Rezultatele au arătat că DAMGO, U50,488 și WIN55,212-2 au produs fiecare inhibarea dependenței de concentrație a activității adenilil ciclazei atât la ΔFosB off cât și la ΔFosB la șoareci (Figura 2). Analiza ANOVA în două direcții a concentrațiilor DAMGO (Figura 2A) au relevat efecte principale semnificative ale stării ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) și a concentrației DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), dar nu au existat interacțiuni semnificative (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). Analiza de regresie neliniară a curbelor de concentrație-efect DAMGO a evidențiat un DAMGO EC semnificativ mai mic₅₀ valoare în ΔFosB la șoareci (101 ± 11 nM) comparativ cu ΔFosB off șoareci (510 ± 182 nM, p <0.05 prin testul t al elevului). Cu toate acestea, nu a existat nicio diferență semnificativă în DAMGO E_max (20.9 ± 1.26% versus 19.8 ± 1.27% inhibare în ΔFosB pe șoareci și respectiv pe șoareci, p = 0.534).

Efectul exprimării ΔFosB asupra inhibării activității adenilil ciclazei în NAc. Membranele de la șoareci care exprimă ΔFosB (ΔFosB on) sau de control (ΔFosB off) au fost analizați așa cum este descris în Metode în prezența 1 pM ...

Inhibiția de adenililciclază mediată de KOR diferă de asemenea ca o funcție a expresiei transgenice inductibile a ΔFosB (Figura 2B). ANOVA bidirecțională a datelor despre efectul concentrației U50,488 a arătat efecte principale semnificative ale stării ΔFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) și concentrației U50,488 (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , fără interacțiune semnificativă (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Analiza de regresie neliniară a curbelor concentrație-efect a relevat un U50,488 E mai mare_max valoare în ΔFosB la șoareci (18.3 ± 1.14% inhibare) comparativ cu ΔFosB off șoareci (12.5 ± 2.03% inhibare; p <0.05 diferită de ΔFosB activată prin testul t Student), fără nicio diferență semnificativă în U50,488 EC₅₀ (310 ± 172 nM comparativ cu 225 ± 48 nM în ΔFosB pe șoareci și respectiv pe șoareci, p = 0.324).

Spre deosebire de efectele observate la MOR și KOR, nu a existat nici un efect semnificativ al expresiei ΔFosB transgenice inductibile asupra inhibării adenilil ciclazei de către agonistul canabinoid WIN55212-2 (Figura 2C). Datele ANOVA bidirecționale ale datelor despre efectul concentrației WIN55,212-2 au arătat un efect semnificativ al concentrației medicamentului (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), dar nu cu starea ΔFosB (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) și nici nu a existat o interacțiune semnificativă (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Mai mult decât atât, nu a existat niciun efect al statutului osFosB asupra activității bazei sau a adenilil ciclazei stimulate de forskolin în absența oricărui agonist. Activitatea bazală a adenilil ciclazei a fost de 491 ± 35 pmol / mg / min la ΔFosB la șoareci comparativ cu 546 ± 44 la ΔFosB de la șoareci (p = 0.346 prin testul t Student). De asemenea, activitatea adenilil ciclazei în prezența forskolinului 1 uM a fost de 2244 ± 163 pmol / mg / min în ΔFosB la șoareci față de 2372 ± 138 pmol / mg / min la șoareci ΔFosB (p = 0.555).

3.3. Efectul ΔcJun asupra inhibării mediate de receptorul opioid și receptorul canabinoid al adenilil ciclazei

Deoarece expresia transgenică inductibilă a ΔFosB a amplificat transducția semnalului inhibitor de la MOR și KOR la adenilil ciclaza în NAc, a fost interesant să se determine dacă un inhibitor negativ dominant al transcripției mediate de ΔFosB ar modula semnalizarea receptorului opioid într-o manieră opusă. Pentru a aborda această întrebare, inhibarea activității adenilil ciclazei stimulată de forskolin de către DAMGO și U50,488 a fost examinată în membrane preparate din NAc a șoarecilor bitransgenici care exprimă în mod condiționat ΔcJun. Rezultatele nu au arătat nici un efect semnificativ al expresiei ΔcJun asupra inhibării activității adenilil ciclazei prin MOR sau KOR (Figura 3). ANOVA bidirecțională a curbelor de concentrație-efect DAMGO a arătat un efect principal semnificativ al concentrației DAMGO (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), dar nu cu starea ΔcJun (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) și nu a existat nicio interacțiune semnificativă (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). În mod similar, nu a existat nicio diferență semnificativă în E_max sau CE₅₀ valorile între șoareci cu ΔcJun pe (E_max = 23.6 ± 2.6%; CE₅₀ = 304 ± 43 nM) sau ΔcJun off (E_max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; CE₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Rezultate similare s-au văzut cu U50,488, astfel încât ANOVA bidirecțională a curbelor concentrație-efect a arătat un efect semnificativ al concentrației (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), dar nu a statutului ΔcJun (p = 0.127 , F = 2.391, df = 1) și nu a existat nicio interacțiune semnificativă (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). La fel, nu au existat diferențe semnificative în E_max sau CE₅₀ valorile între șoareci cu ΔcJun pe (E_max = 14.8 ± 2.9%; CE₅₀ = 211 ± 81 nM) sau oprit (E_max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; CE₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Efectul expresiei ΔcJun asupra inhibării activității adenilil ciclazei în NAc. Membranele de la șoareci care exprimă ΔcJun (ΔcJun on) sau de control (ΔcJun off) au fost incubați în prezența DAMGO (A), U50,488H (B) sau WIN55,212-2 ...

De asemenea, expresia ΔcJun nu a afectat semnificativ inhibarea adenilil ciclazei în NAc de către agonistul canabinoid. ANOVA bidirecțională a curbelor efectului concentrației WIN55,212-2 a arătat un efect principal semnificativ al concentrației WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), dar nu de genotip (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) și nu a existat nicio interacțiune semnificativă (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). La fel, nu au existat diferențe semnificative în WIN55,212-2 E_max (13.0 ± 2.3% și 13.6 ± 0.9% inhibare în ΔcJun pe șoareci versus șoareci, respectiv, p = 0.821) și sau EC₅₀ (208 ± 120 nM și 417 ± 130 nM în ΔcJun pe șoareci versus șoareci, respectiv, p = 0.270). Astfel, deși a existat o ușoară tendință spre scăderea potenței WIN55,212-2 la șoarecii care au exprimat ΔcJun, transgena nu a modificat semnificativ inhibarea canabinoidă a adenilil ciclazei. Mai mult, nu a existat niciun efect al statutului ΔcJun asupra activității adenilil ciclazei stimulată bazal sau forskolin. Activitatea adenililiciclazei bazale a fost 1095 ± 71 pmol / mg / min și 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) la șoareci cu ΔcJun activat respectiv respectiv. Activitatea de adenilil ciclază stimulată de 1 μM forskolin a fost 4185 ± 293 pmol / mg / min față de 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) la șoareci cu ΔcJun activat respectiv respectiv.

3.4. Discuţie

Rezultatele acestui studiu au evidențiat îmbunătățirea activării proteinei G mediată de MOR și inhibarea adenilil ciclazei în NAc a șoarecilor cu exprimare transgenică inductibilă a ΔFosB în dynorfin / D₁R conținând neuroni. Inhibarea mediată de KOR a activității adenililciclazei a fost de asemenea îmbunătățită la NAc a șoarecilor care exprimă ΔFosB, sugerând că ΔFosB reglează sistemul opioid endogen în NAc. DAMGO E_max valoarea a fost mai mare pentru MOR-stimulat [³⁵S] GTPyS și EC₅₀ a fost mai mică pentru inhibarea adenilil ciclazei, în șoareci cu exprimare excesivă față de șoarecii martor. Aceste constatări sugerează posibilitatea rezervării receptorilor pentru modularea efectoare, dar nu pentru activarea proteinei G în condițiile testului examinate. Constatarea că inhibarea maximă a adenilil ciclazei de către agonistul KOR a fost afectată de expresia ΔFosB sugerează o rezervă scăzută a receptorului pentru răspunsul mediat de KOR, în concordanță cu nivelele scăzute de situsuri de legare a KOR în creierul de șoarece (Unterwald și colab., 1991). În schimb, CB₁Activitatea proteinei G mediată de R și inhibarea adenilil ciclazei nu au fost afectate de expresia ΔFosB, sugerând că sistemele opioide și canabinoide diferă în răspunsul lor la ΔFosB în acești neuroni NAc.

Efectul ΔFosB asupra semnalizării mediate de receptorul opioid este în concordanță cu raportul nostru anterior că expresia ΔFosB în striatum a modificat efectele acute și cronice ale morfinei (Zachariou și colab., 2006). O constatare a acestui studiu a fost că șoarecii cu exprimare transgenică a ΔFosB în dynorfin / D₁Neuronii striatali R au fost mai sensibili la morfină în condiționarea locului decât în control. Mai mult, acest efect a fost imitat de exprimarea mediată virală a ΔFosB prin injectare specifică locului în NAc. Aceste observații sunt în concordanță cu rezultatele curente care arată o semnalizare MOR îmbunătățită în NAc.

Am identificat anterior codificarea genei dynorphin ca țintă a ΔFosB și a sugerat că dinorfinul redus ar fi în concordanță cu proprietățile îmbogățite îmbunătățite ale morfinei în șoarecii bitransgenici ΔFosB (Zachariou și colab., 2006). Rezultatele prezente arată că inhibiția mediată de KOR a adenilil ciclazei în NAc este crescută la șoarecii care exprimă ΔFosB, ceea ce ar putea reflecta o creștere compensatorie a sensibilității KOR în urma reducerii dinorfinului. Studiile anterioare au arătat că KOR a fost reglat în anumite regiuni ale creierului cu șoareci knock-out prodynorphin, incluzând NAc (Clarke și colab., 2003).

Spre deosebire de ΔFosB, expresia transgenică inductibilă a ΔcJun, mutantul dominant trunchi negativ al partenerului de legare ΔFosB cJun, nu a modificat inhibarea adenilil ciclazei prin agoniști MOR sau KOR. Aceste rezultate sugerează că nivelurile bazale ale expresiei ΔFosB, care sunt relativ scăzute, nu joacă un rol semnificativ în menținerea semnalizării receptorilor opioizi la acest nivel al transducției semnalului în NAc. Faptul că efectul de recompensare condiționat al morfinei a fost scăzut prin exprimarea ΔcJun în studiul nostru anterior (Zachariou și colab., 2006) sugerează fie că inducerea de morfină a ΔFosB în timpul procedurii de condiționare este importantă în reglarea răspunsurilor comportamentale la medicament, fie că efectele transcripționale ale ΔFosB, altele decât cele care afectează semnalizarea proximală de către receptorii opioizi, pot influența recompensa opioidului. În orice caz, rezultatele acestui studiu arată clar că, când expresia ΔFosB este crescută peste nivelele bazale în dinorfin striatal / D₁R-exprimând neuroni, există o creștere robustă a cuplării MOR și KOR la inhibarea adenilil ciclazei în NAc.

Mecanismele prin care semnalarea mediată de MOR și KOR sunt amplificate de supraexprimarea ΔFosB sunt neclare, însă am arătat anterior că nivelurile de MOR, evaluate de [³H], nu diferă în NAc a ΔFosB pe șoareci versus șoareci off (Zachariou și colab., 2006). Același studiu a constatat că Gα_iNivelurile de proteine 1 și 2 nu au fost afectate în această regiune prin expresia ΔFosB. Cu toate acestea, analizele anterioare ale matricei de expresie a genei au arătat că Gα_o ARNm a fost reglat în NAc a ΔFosB pe șoareci (McClung și Nestler, 2003). Va fi de interes în studiile viitoare să se examineze în mod cuprinzător efectul exprimării transgenice ΔFosB asupra exprimării subunității proteinei G la nivelul proteinei, precum și asupra exprimării multor proteine G modulatoare proteice.

Este interesant faptul că expresia ΔFosB nu a îmbunătățit CB₁R-mediată în NAc. Este posibil ca modificările în CB₁R au loc într-o populație discretă de neuroni care este obscură în întregul preparat NAc. De exemplu, administrarea Δ⁹- THC a indus semnificativ ΔFosB în nucleul, dar nu în coajă, al NAc (Perrotti și colab., 2008). eundeed, sa arătat că provocarea cu Δ⁹-THC după administrarea repetată de Δ⁹-THC a crescut eliberarea de dopamină în nucleul NAc, dar scăderea eliberării în cochilie (Cadoni și colab., 2008). De asemenea, este important de observat că linia 11A a șoarecilor bitransgenici exprimă ΔFosB numai în dinorfin / D₁Neuronii pozitivi ai spiralei medii ale striatumului, dar CB₁R sunt exprimate în ambele dynorphin / D₁R și enkefalină / D₂R Neuronii striatali pozitivi (Hohmann și Herkenham, 2000), precum și pe terminalele aferente corticale (Robbe și colab., 2001). Exprimarea regulatorului negativ dominant al transcripției mediate de ΔFosB, ΔcJun, nu a avut, de asemenea, nici un efect semnificativ asupra semnalizării receptorului canabinoid, deși ΔcJun este exprimat indusă în ambele D₁ și D₂- conținând populații de neuroni spinoși medii la acești șoareci (Peakman și colab., 2003). Este totuși posibil ca expresia bazală ΔFosB să fie suficient de scăzută încât ΔcJun să nu afecteze semnalizarea receptorului, așa cum sugerează rezultatele cu MOR și KOR. De asemenea, este posibil ca CB₁R este sporită modest prin expresia bazală ΔFosB, astfel încât creșterea expresiei ΔFosB în continuare sau blocarea acțiunilor sale cu ΔcJun au avut doar efecte ușoare care nu au atins nivelul semnificației statistice. Sprijinul indirect pentru această interpretare poate fi văzut prin compararea WIN55,212-2 CE₅₀ valorile dintre șoarecii care exprimă ΔcJun față de ΔFosB. Raportul WIN55,212-2 CE₅₀ valoare pentru inhibarea adenilil ciclazei la șoareci cu expresia indusă de ΔcJun la CE₅₀ valoarea pentru activarea proteinei G la șoareci cu expresie indusă de ΔFosB a fost 4.0, în timp ce același raport la șoareci fără inducerea fiecărei transgene a fost 1.2.

Alternativ, canabinoidele pot induce exprimarea ΔFosB fără nici un efect direct asupra CB₁R semnalizare. În acest scenariu, canabinoizii ar putea modula răspunsul la efectele psihoactive ale altor medicamente prin reglarea transcripțională mediată de ΔFosB. eun fapt, administrarea lui Δ⁹-THC produce sensibilizare încrucișată la opioide și amfetamină (Cadoni și colab., 2001, Lamarque și colab., 2001), în concordanță cu această ipoteză. Mai mult, s-a raportat că administrarea repetată a agonistului cannabinoid CP55,940 crește activarea proteinei G mediată de MOR în NAc, similar cu șoarecii care exprimă inductiv DFosB în studiul prezent (Vigano și colab., 2005). Efectul expresiei ΔFosB asupra lui Δ⁹- comportamente mediate de THC nu au fost evaluate, dar rezultatele prezente nu exclud o interacțiune. Rezultatele acestui studiu și al studiului nostru anterior (Zachariou și colab., 2006) prezintă modificări induse de ΔFosB în MOR și KOR / dinorfin în striatum. Efectele de recompensare ale Δ⁹-THC, măsurate prin preferința locului, sunt eliminate la șoareci MOR null, în timp ce eliminarea KOR atenuată Δ⁹- THC a făcut loc aversiunii și a dezvăluit Δ⁹- preferința locului THC (Ghozland și colab., 2002). În mod similar, aversiunea condiționată față de Δ⁹-THC absent în pro-dynorphin knockout comparativ cu șoareci de tip sălbatic (Zimmer și colab., 2001). Aceste date sugerează că Δ⁹-THC ar putea fi mai satisfacatoare dupa inductia ΔFosB si inducerea consecutiva a semnalizarii MOR cu reducerea exprimarii dinorfinului.

În rezumaty, rezultatele acestui studiu au arătat că exprimarea ΔFosB în D₁Neuronii striatali pozitivi R / dynorphin au îmbunătățit semnalizarea mediată de MOR și KOR la nivelul inhibării mediate de proteina G a activității adenilil ciclazei în NAc. Această constatare este în concordanță cu studiile care au demonstrat un rol pentru sistemul opioid endogen în recompensă (Trigo și colab., 2010) și oferă un mecanism potențial pentru efecte mediate de ΔFosB pe răsplată. În schimb, CB₁Semnalul R mediat în NAc nu a fost semnificativ afectat de expresia striatală ΔFosB în condițiile examinate, cu toate că sunt necesare studii suplimentare pentru a determina efectul inducerii ΔFosB asupra sistemului endocannabinoid.

Cercetări importante

Semnalarea MOR este sporită în nucleul accumbens al șoarecilor care exprimă ΔFosB
Inhibarea KOR a adenilil ciclazei este de asemenea îmbunătățită la șoarecii care exprimă ΔFosB
Exprimarea ΔFosB nu modifică CB₁R în nucleul accumbens

Material suplimentar

01

Faceți clic aici pentru a vizualiza.^{(45K, pdf)}

Mulţumiri

Autorii mulțumesc lui Hengjun He, Jordan Cox și Aaron Tomarchio pentru asistență tehnică cu [³⁵S] GTPyS. Acest studiu a fost susținut de USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) și P01 DA08227 (EJN).

Note de subsol

Declinarea responsabilității editorului: Acesta este un fișier PDF al unui manuscris needitat care a fost acceptat pentru publicare. Ca serviciu pentru clienții noștri oferim această versiune timpurie a manuscrisului. Manuscrisul va fi supus copierii, tipăririi și revizuirii probelor rezultate înainte de a fi publicat în forma sa finală. Rețineți că în timpul procesului de producție pot fi descoperite erori care ar putea afecta conținutul și toate denunțările legale care se referă la jurnal.

Referinte

Bozarth MA, Wise RA. Domeniile anatomice distincte ale receptorilor de opiacee mediază recompensa și dependența fizică. Știință. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. O metodă rapidă și sensibilă pentru cuantificarea cantităților de micrograme de proteine care utilizează principiul de legare a colorantului proteic. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Delta cronică⁹-tetrahidrocanabinol produce o pierdere dependentă de timp a proteinelor G activate în receptorul canabinoid din creier. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Eficacitatea agonistului receptorului canabinoid pentru stimularea [³⁵S] GTPyS la membranele cerebelice de șobolan se corelează cu scăderile induse de agonist în afinitatea GDP. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Sensibilizarea comportamentală după expunerea repetată la Delta 9-tetrahidrocanabinol și sensibilizarea încrucișată cu morfină. Psihofarmacologie (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Sensibilizarea comportamentală la delta 9-tetrahidrocanabinol și sensibilizarea încrucișată cu morfină: modificări diferențiale în coaja accumbal și transmisia de bază a dopaminei. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Animale transgenice cu expresie genică inductibilă, țintită în creier. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Receptoare de receptori de opiacee. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childs SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid și inhibitorul receptorului canabinoid al adenilil ciclazei în creier. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Stimularea receptorului opioid Kappa de [³⁵S] GTPyS în creierul de cobai: Lipsa dovezilor pentru kappa₂-activarea selectivă a proteinelor G. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Bucătăria I. Regiunea selectivă reglarea selectivă a receptorilor micro-, delta- și kappa-opioid, dar nu și a receptorilor opioizi 1 în creierul șoarecilor enkephalin și dynorphin knockout. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Supraexpresia specifică de tip celular de tip Striatal a DeltaFosB sporește stimularea cocainei. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Sistemul de semnalizare endocannabinoid și recompensa creierului: accentul pus pe dopamină. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Efectele motivaționale ale canabinoizilor sunt mediate de receptorii mu-opioizi și kappa-opioizi. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Caracterizarea și localizarea receptorilor canabinoizi în creierul de șobolan: un studiu autoradiografic cantitativ in vitro. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Localizarea receptorului ARN al canabinoidului CB (1) în subpopulațiile neuronale ale striatumului de șobolan: un studiu de hibridizare dublu-in-situ. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Uniunea Internațională de Farmacologie. XXVII. Clasificarea receptorilor canabinoizi. Revista farmacologică. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Blocarea efectelor marijuanei afumate de antagonistul receptorului canxabinoid selectiv CB1 SR141716. Arc. Gen. Psihiatrie. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Nestler EJ. Exprimarea factorului de transcripție deltaFosB în creier controlează sensibilitatea la cocaină. Natura. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Neurocircuitarea dependenței. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Tratamentul cronologic cu Delta (9) -tetrahidrocannabinol sporește răspunsul locomotor la amfetamină și heroină. Implicații pentru vulnerabilitatea la dependența de droguri. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Implicarea sistemului endocannabinoid în dependența de droguri. Tendințe Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-expresia mRNA a receptorului opioid la SNC de șobolan: comparație cu legarea mu-receptor. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Bucătăria I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Pierderea analgeziei induse de morfină, efectul de recompensă și simptomele de sevraj la șoareci lipsiți de gena receptorului-opioid. Natura. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Reglementarea expresiei genelor și a recompensei cocainei de către CREB și DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: un comutator molecular pentru adaptarea pe termen lung în creier. Rez. Creier Mol. Rez. Creier 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. Receptorii dopaminei D1 modulează inducerea deltaFosB în striatum de șobolan după administrarea intermitentă a morfinei. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Revizuire. Mecanisme transcripționale ale dependenței: rolul DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: un mediator molecular al plasticității neuronale și comportamentale pe termen lung. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Studii farmacologice privind reglarea inducției cronice asociate cu FOS cu cocină în striatum și nucleul accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Explicarea specifică a regiunii cerebrale a unui mutant negativ dominant al c-Jun la șoarecii transgenici reduce sensibilitatea la cocaină. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Modele distincte ale inducției DeltaFosB în creier prin medicamente de abuz. Synapse. 2008;62: 358-369. [Articol gratuit PMC] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Localizarea și mecanismele de acțiune a receptorilor canabinoizi la sinapsele glutamatergice ale nucleului accumbens de șoarece. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Testul de adenilat de ciclază. Adv. Nucleotide ciclice. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu receptor stimulat de opioid [³⁵S] GTPyS în linii de celule talamice de șobolan și culturi: mecanisme de transducție a semnalului care stau la baza eficacității agoniste. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Sistemul opioid endogen: un substrat comun în dependența de droguri. Alcoolul de droguri depinde. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Localizarea neuroanatomică a receptorilor opioizi k1 și k2 la creierul de șobolan și de cobai. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blocarea receptorilor de opiacee nucleu accumbens atenuează recompensa heroină intravenoasă la șobolan. Psihofarmacologie (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Mecanismele moleculare implicate în interacțiunea asimetrică între sistemele canabinoide și opioide. Psihofarmacologie (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Un rol esențial pentru DeltaFosB în nucleul accumbens în acțiunea morfinei. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Două site-uri ale creierului pentru recompensa canabinoidă. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Activarea receptorului opioid kappa uman clonat de agoniști îmbunătățește legarea [35S] GTPyS la membrane: determinarea potențelor și eficacității liganzilor. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Absența efectelor dysphorice delta-9-tetrahidrocanabinol la șoarecii cu deficit de dinorfin. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Creșterea mortalității, a hipoactivității și a hipoalgeziei la șoarecii knock-out de canabinoizi CBBNUMX. Proc. Natl. Acad. Sci. Statele Unite ale Americii 1999;96: 5780-5785. [Articol gratuit PMC] [PubMed]