Proc Natl Acad Sci US A. 19 ian 2010; 107(3): 1217–1222.
Publicat online Dec 29, 2009. doi: 10.1073 / pnas.0911998107
PMCID: PMC2824263
Neuroştiinţe
Yan Liu,a,b Brandon J. Aragona,c Kimberly A. Young,a,b David M. Dietz,b,d,e Mohamed Kabbaj,b,d Michelle Mazei-Robison,e Eric J. Nestler,e și Zuoxin Wanga,b,1
Acest articol a fost citat de alte articole din PMC.
Abstract
Prairie vole (Microtus ochrogaster) este o specie de rozătoare monogamă socială care formează legături perechi după împerechere, un comportament în care a fost implicat dopamina centrală (DA). Aici, am folosit prele de sex masculin pentru a examina efectele expunerii la medicament asupra legării perechilor și a circuitelor neuronale asociate. În primul experiment, amfetamina (AMPH), comportamentul motivat a fost examinat utilizând o paradigmă preferată a locului preferat (CPP) și sa dovedit a fi mediată de activarea receptorilor D1-like DA. Apoi, am examinat efectele expunerii repetate AMPH asupra legării perechilor. Bărbații de control intacte și cu control salin au prezentat preferințele partenerului indus de împerechere, în timp ce bărbații pretrenați cu AMPH la dozele eficiente pentru a induce CPP nu au reușit să arate preferințele partenerului indus de împerechere. Un astfel de tratament AMPH a îmbunătățit de asemenea expresia D1, dar nu D2, receptorul DA în nucleul accumbens (NAcc). În plus, blocarea farmacologică a receptorilor DA de tip D1 în NAcc a salvat preferințele partenerului indus de împerechere la bărbații tratați cu AMPH. Împreună, datele noastre indică faptul că expunerea repetată la AMPH poate restrânge repertoriul comportamental al prelelor de sex masculin voles prin intermediul unui mecanism specific receptorului DA în NAcc, având ca rezultat deteriorarea formării legăturilor de perechi.
Este larg acceptat faptul că comportamentele motivaționale și emoționale care promovează fitness sunt reglementate de circuitele de recompensare a creierului incluzând sistemul de dopamină mezolimbică (DA) (1, 2). Deși acest sistem este adesea implicat în aportul alimentar și comportamentul sexual (3, 4), a fost, de asemenea, implicată în alte comportamente motivate în mod natural, cum ar fi jocul social între minori și legătura socială dintre părinte și descendenți (5-9). Adesea subreprezentate în cercetare sunt legăturile sociale formate între colegii adulți, și anume, obligațiunile pereche. Investigațiile recente care utilizează o specie de rozătoare monogamă socială, prairie vole (Microtus ochrogaster) (10-12), indică faptul că o mare parte a reglementării neuronale care stau la baza formării și întreținerii legăturilor perechi are loc în nucleul accumbens (NAcc) (13-15) - o regiune creierului mesolimbic critică pentru medierea comportamentelor motivate (1, 2, 16).
Deși circuitele motivaționale au evoluat pentru a promova comportamentul de sporire a nivelului de fitness, cum ar fi hrănirea, împerecherea și îmbinarea socială (1, 17), este vulnerabil la uzurparea artificială a drogurilor de abuz (8). De exemplu, administrarea medicamentelor psihostimulante de abuz, cum ar fi cocaina și amfetamina (AMPH), are ca rezultat modificări persistente ale activității DA mezolimbice (18, 19). Impactul intens asupra acestui circuit de către aceștia și alte medicamente dependente a fost sugerat să scadă valoarea percepută a stimulentelor naturale (20), inclusiv cele de natură socială (8). Deși se știe că dependenții de droguri prezintă un comportament social afectat (21), reglementarea neuronală a interacțiunilor dintre experiența de droguri și atașamentul social este puțin înțeleasă. Acest lucru se datorează faptului că, în parte, astfel de interacțiuni sunt dificil de modelat în rozătoarele tradiționale de laborator care nu prezintă legătura socială între speciile adulte.
Neurobiologia unui astfel de atașament social, în special legăturile perechilor între adulți, a fost extensiv studiată în prerie (10-12) și, recent, această specie a fost stabilită ca un model viabil pentru a examina valoarea motivațională a AMPH (22). Mai mult, atât formarea legăturilor de perechi cât și armarea AMPH sunt mediate, cel puțin parțial, prin transmisia DA în cadrul NAcc (14, 15, 23). Prin urmare, studiul de față a utilizat modelul de preiuri pentru a stabili un test comportamental pentru a studia efectele expunerii la medicament asupra legăturilor sociale și sa axat pe sistemul de semnalizare NAcc DA pentru a descoperi un mecanism neural care stă la baza acestor efecte comportamentale.
REZULTATE
Starea preferată a locului condiționată indusă de AMPH (CPP) este mediată de DA într-un mod specific receptorului.
Formarea unui CPP a fost definită printr-o creștere semnificativă a timpului petrecut în cusca pereche AMPH în timpul posttestului, după ce 3 zile de condiționare a AMPH, comparativ cu pretestul. Nici injecțiile saline, nici serul care conține cele două doze cele mai scăzute de AMPH testate (0.1 și 0.5 mg / kg) nu au modificat preferințele din cuștiFig. 1A). Cu toate acestea, bărbații tratați cu doze mai mari de AMPH, inclusiv 1.0 (t = 2.87, P <0.01), 3.0 (t = 3.63, P <0.01) sau 5.0 mg / kg (t = 3.03, P <0.01), CPP afișat (Fig. 1A).
Deoarece AMPH creste semnificativ neurotransmisia DA in prairie voles (24), iar DA mediază armarea AMPH la alte specii (23), am examinat în continuare reglementarea receptorului DA (DAR) a CPP indusă de AMPH la preleuri de sex masculin. Subiecții au fost pretestați în paradigma CPP, tratați fie cu soluție salină, fie cu soluție salină conținând doze diferite de antagonist DAR neselectiv (haloperidol) înainte de injectarea AMPH (1.0 mg / kg) în timpul zilelor de condiționare 3 și apoi testate pentru CPP într-un posttest. Subiecții tratați cu soluție salină (t = 2.69, P <0.01) sau soluție salină care conține cele mai mici două doze de haloperidol (0.1 mg / kg; t = 3.62, P <0.01; 1.0 mg / kg; t = 3.89, P <0.01) înainte de condiționarea AMPH afișat CPP indus de AMPH, în timp ce haloperidolul la 5.0 mg / kg a blocat CPP indus de AMPH, arătând implicarea DAR în efectele comportamentale ale AMPH (Fig. 1B). Pentru a determina care subtip DAR mediază CPP indus de AMPH, am administrat mai apoi un antagonist specific D1 (SCH23390) sau un antagonist specific D2 (eticloprid) înainte de injectarea AMPH în timpul condiționării. Antagonismul asemănător cu D2 nu a blocat CPP indus de AMPH (t = 3.15, P <0.01 pentru 0.5 mg / kg și t = 2.60, P <0.05 pentru 5.0 mg / kg eticlopridă), dar blocarea receptorilor de tip D1 a eliminat CPP indus de AMPH (Fig. 1B), care demonstrează că CPP indusă de AMPH este mediată de activarea receptorilor de tip D1, dar nu și de D2, la preleuri de sex masculin.
Experiența AMPH alternează formarea preferințelor partenerilor implicați în împerechere.
Cu toate că CPP indusă de AMPH necesită activarea receptorilor de tip D1 (Fig. 1B), am arătat anterior că activarea receptorilor de tip D1 previne formarea legăturilor induse de împerechere (14). Prin urmare, am presupus că tratamentul prealabil cu AMPH ar interfera cu legarea perechilor induse de împerechere la preleiul de sex masculin. Bărbații au fost împărțiți în patru grupe care nu au primit injecții (intacte), injecții saline sau injecții cu 1.0 sau 5.0 mg / kg AMPH pentru zilele 3 (o paradigmă de injectare suficientă pentru a induce CPP). În a patra zi, toți bărbații au fost împerecheați cu o femeie receptivă sexuală pentru 24 h și apoi testate pentru preferințele partenerilor. În conformitate cu studiile anterioare (14, 25-27), masculii și masculii intacți care au primit injecții saline timp de 3 zile înainte de împerechere au prezentat preferințe partener induse de împerechere (bărbați intacți; t = 3.05, P <0.01, masculi injectați cu soluție salină; t = 3.21, P <0.01; Fig. 2A). Cu toate acestea, bărbații care au fost tratați cu o doză de AMPH timp de 3 înainte de împerechere nu au prezentat preferințele partenerilor (Fig. 2A). Foarte important, pre-tratamentul AMPH nu a afectat frecvența de împerechere în timpul perioadei de coabitare (F(3, 26) = 0.26, P = 0.85; Fig. 2B) sau activitatea locomotorie în timpul testului de preferință al partenerului (F(3, 26)= 2.34, P = 0.10; Fig. 2C), indicând faptul că AMPH interferează direct cu preferințele partenerului indus de împerechere.
Experiența AMPHE ridică receptorii D1 în NAcc.
Având în vedere faptul că preferințele partenerului afectat de preexpunerea AMPH și CPP induse de AMPH (vezi mai sus) și legarea perechilor (14) sunt reglementate de NAcc DA, am emis ipoteza că AMPH ar modifica în mod semnificativ circuitele DA mesolimbice la preleuri de sex masculin. Creierele subiecților din experimentul comportamental menționat mai sus au fost procesate pentru marcarea in situ a mARN-urilor marker DA. Bărbații tratați cu AMPH (1.0 mg / kg) au prezentat o creștere semnificativă a receptorului D1 (D1R; t = 3.06, P <0.01), dar nu și receptorul D2 (D2R), marcarea mARN-ului în cadrul NAcc, comparativ cu bărbații care primesc pretratare salină (Fig. 3 A-C). Cu toate acestea, nu s-au găsit diferențe de grup în densitatea marcării ARNm pentru tirozin hidroxilază (TH), transportor DA (DAT) sau D2R din zona tegmentală ventrală (VTA) - regiunea creierului care furnizează intrarea dopaminergică primară în NAcc (Fig. 3 D-G). Creșterea expresiei D1Rs în NAcc a fost confirmată suplimentar prin Western blotting (t = 1.90, P <0.05; Fig. 3 H și I). Împreună, aceste date indică faptul că expunerea la AMPH are efecte specifice receptorilor și site-urilor asupra sistemului DA mezolimbic al preleurilor de sex masculin - crescând nivelul de D1Rs în NAcc.
Receptorii D1 din NAcc Mediate AMPH Deteriorarea Preferințelor Partenerului.
Am arătat anterior că, la prerile de sex masculin, activarea D1R în cadrul formării preferențiale a partenerului prevenit de NAcc (14), iar studiul actual demonstrează că expunerea AMPH up-regulate D1Rs în NAcc (Fig. 3). Prin urmare, am testat ipoteza că afectarea indusă de AMPH a preferințelor partenerului este mediată de D1R în cadrul NAcc. Bărbații au primit canulări stereotaxice vizate bilateral la cochilia NAcc (Fig. 4A). Lichidul cerebrospinal lichid (CSF) singur sau CSF care conține doze diferite de antagonist al receptorilor de tip D1 SCH23390 a fost injectat în injecțiile cu NAcc înainte de AMPH (1.0 mg / kg) în timpul zilelor de condiționare 3. Ulterior, subiecții au fost împerecheați cu o femeie pentru 24 h și apoi au fost testați pentru preferințele partenerului. Ca și în cazul experimentului de mai sus (Fig. 2), Expunerea la AMPH a împiedicat preferințele partenerului indus de împerechere la bărbații care au primit injectări intra-NAcc de CSF sau o doză mică de SCH23390 (Fig. 4B). Cu toate acestea, bărbații care au fost injectați cu o doză mare de SCH23390 (100 ng / kg) au prezentat preferințele partenerilor (t = 2.55, P <0.05), indicând faptul că blocarea D1R în NAcc a eliminat afectarea indusă de AMPH a formării preferințelor partenerului (Fig. 4B). Nu au fost identificate diferențe de grup în frecvența de împerechere în timpul activității de coabitare sau locomotorie în timpul testului de preferință pentru partener.
Discuție
În acest studiu, replicăm concluzia noastră anterioară că expunerea la AMPH induce CPP la prerile de sex masculin voles (22) și demonstrează că activarea D1R în NAcc este necesară pentru acest comportament, un rezultat compatibil cu studiile la alte specii de rozătoare (28). Această concluzie, împreună cu studii anterioare, sugerează că mecanismele DAergice distincte în NAcc reglementează comportamentele AMPH și partenerul motivațional: comportamentul motivat AMPH (CPP) este mediat de D1R, în timp ce comportamentul motivat de partener (preferințele partenerilor) este facilitat de D2R activare și inhibată prin activarea D1R în cadrul NAcc (13-15). [Este important de reținut că, în NAcc, activarea D2R mediază CPP indus de medicamente în anumite condiții (29) și activarea D1R este implicată în alte comportamente motivate social, cum ar fi cele orientate spre descendenți (7, 30)].
Reglarea diferențială DAergică a CPP și a formării preferințelor partenerului este cel mai probabil realizată prin diferențe în gradul de concentrație DA declanșată de stimulare, care activează diferite subtipuri DAR. Datorită diferențelor de afinități de legare, sunt necesare creșterea robustă a concentrației de DA pentru a activa D1R-urile cu afinitate scăzută, în timp ce creșterile modeste ale concentrațiilor DA activează în mod preferențial D2R-urile cu afinitate ridicată31). În prairie voles, AMPH evocă creșteri mult mai mari ale concentrației DA (24) comparativ cu cea evocată prin împerechere (15, 25). Aceste date sugerează că creșteri relativ modeste ale concentrației DA în timpul interacțiunilor sociale (15, 25) permit activarea specifică a D2Rs cu afinitate ridicată și astfel facilitează formarea legăturilor de perechi. În schimb, creșterea robustă a concentrației DA după administrarea AMPH este probabil suficientă pentru a activa D1R-urile cu afinitate scăzută, facilitând astfel CPP indus de AMPH.
Reglarea comportamentală specifică receptorului prin DA este compatibilă cu studiile electrofiziologice extracelulare la șobolanii care se mișcă liber, arătând că medicamentele și stimulii naturali sunt tratați de către populații distincte neuronale în cadrul NAcc (32). Deși astfel de studii electrofiziologice nu reușesc să identifice subtipul receptorilor DA exprimați pe neuroni individuali, studiile anatomice demonstrează că NAcc este alcătuit din neuroni de proiecție care exprimă fie D1R, fie D2R cu foarte puțină coexpresie (33). Psihostimulantele activează în mod preferențial căile de semnalizare intracelulare în aval de D1Rs (determinate de fosforilarea crescută a moleculelor de semnalizare) (34) și am arătat anterior că activarea crescută a acestor căi de semnalizare împiedică formarea preferințelor partenerului (35). Astfel, deși transmiterea DA în cadrul NAcc joacă un rol important în răspunsul la AMPH și formarea preferințelor partenerului, aceste comportamente sunt probabil mediate prin microcircuituri distincte care cuprind sisteme de proiecție striatală (33, 36). Acest lucru prezintă un interes deosebit, deoarece formarea legăturilor de perechi este mediată de activarea neuronilor care exprimă D2R care se proiectează preferențial în pallidum ventral (33), o altă regiune a creierului importantă pentru legarea perechilor (26).
În acest studiu, furnizăm dovezi că experiența AMPH împiedică legarea perechilor indusă de împerechere. Dat fiind că testele de preferință ale partenerilor în aceste experimente au fost efectuate 48 h după ultima expunere AMPH (adică, după ce medicamentul a fost complet metabolizat), aceste date sugerează un efect persistent al AMPH asupra legării sociale. Un mecanism potențial, compatibil cu efectele AMPH la alte specii (37, 38), prin care AMPH poate afecta legarea perechilor este prin creșterea expresiei D1R în cadrul NAcc. Această noțiune este susținută de rolul antagonist al NAcc D1Rs în formarea partenerului preferat (14, 24) și de datele actuale care demonstrează salvarea preferințelor partenerului indus de împerechere prin blocarea intra-NAcc D1R la animalele tratate cu AMPH (Fig. 4). Interesant, am arătat anterior că, în prerile de sex masculin, reglarea supraviețuirii NAcc D1R după săptămâna 2 de legare a perechilor facilitează agresiunea selectivă față de străinii conspecifici, inclusiv femeile receptive sexual, sugerând că această plasticitate neuronală este un mecanism evoluat prin care voele de sex masculin să mențină deja obligațiunile pereche (14). Studiul actual sugerează că AMPH declanșează în mod artificial această neuroplasticitate, ducând la afectarea AMPH a lipirii perechilor. Este, de asemenea, posibil ca bărbații tratați cu AMPH să poată asocia femelele cu o stare aversivă de retragere a AMPH și, prin urmare, această asociere negativă ar putea să stea la baza diminuării AMPH a legării perechilor. Un studiu anterior a demonstrat că retragerea dintr-un program de creștere a dozelor de comportament sexual afectat d-amfetaminic la șobolani masculi (39). În studiul nostru, cu toate acestea, voles de la diferite grupuri de tratament a prezentat bout similare de împerechere (Fig. 2B), indicând faptul că probabil că nu se aflau într-o stare de retragere din amfetamină. Cu toate acestea, această posibilitate justifică investigații suplimentare.
Este bine stabilit că plasticitatea neurală indusă de droguri este fundamentală pentru dependența de droguri (40). Psiostimulantele modifică dramatic plasticitatea structurală în sistemul DA mezolimbic (41) și există dovezi care sugerează că astfel de modificări sunt mai durabile în exprimarea neuronilor D1 (37). Mai mult, studiile electrofiziologice au arătat că experiența de cocaină poate reduce neuroplasticitatea ulterioară în cadrul NAcc (42). Intr-adevar, reorganizarea neurala indusa de medicamente a NAcc atenueaza reorganizarea neuronala in mod natural in urma expunerii noi la medii complexe (43). Prin urmare, deși dependența de droguri este larg recunoscută ca o tulburare a învățării și memoriei (1, 40, 44), este adesea subapreciat faptul că o pierdere indusă de consumul de droguri a potențialului de alterare a circuitelor mezolimbice poate fi, de asemenea, esențială pentru dependență. O astfel de reducere a plasticității poate limita un repertoriu comportamental la căutarea de droguri. Prin urmare, nu este surprinzător faptul că volesii tratați cu AMPH au demonstrat un comportament redus de legare a perechilor. Efectele actuale ale expunerii AMPH asupra legării perechilor sunt în concordanță cu studiile anterioare care ilustrează efectele nocive ale psiștimulanților asupra altor comportamente sociale, inclusiv a comportamentului matern (45-47) și jocul social (48-50). Împreună, o astfel de activitate prevede promisiunea că examinarea modului în care drogurile și stimulii sociali interacționează în creier poate extinde în mod semnificativ înțelegerea noastră a interacțiunilor puternice dintre comportamentul social și consumul de droguri la om (21).
Materiale și metode
Subiect.
Subiecții au fost prelectori de sex masculin de la o colonie de reproducere de laborator. Subiecții au fost înțărcați la vârsta de 21 și au fost adăpați în perechi de femele de același sex în cuști de plastic (12 × 28 × 16 cm), unde apa și mâncarea au fost furnizate ad libitum. Toate cuștile au fost menținute sub un ciclu 14: 10 lumină-întuneric și temperatura a fost de aproximativ 20 ° C. Toți subiecții aveau aproximativ 90 de vârstă când au fost testați. Canularea stereotaxică și perfuzia specifică a site-ului cu medicamente DA au fost descrise în detaliu în altă parte (14).
Testarea comportamentală.
Testarea CPP a fost efectuată așa cum a fost descris anterior (22) cu următoarele excepții. Preferința inițială a coliviei pentru fiecare subiect a fost determinată într-un pretest 30-min în ziua 1. Subiecții au fost apoi condiționați, în cursul sesiunilor min. 40, cu AMPH în colivie și salină, fără a fi preferată, în colivia preferată (ambele AMPH și injecții saline au fost administrate în aceeași zi, 6 h) pentru zile consecutive 3 (zile 2-4). Ulterior, subiecții au fost testați (posttest) pentru prezența unui CPP în ziua 5.
Testarea preferințelor partenerilor a fost efectuată așa cum a fost descris anterior (14). Pe scurt, aparatul de testare a constat dintr-o colivie centrală (12 × 28 × 16 cm) îmbinată cu tuburi goale (7.5 × 16 cm) cu două cuști paralele identice, fiecare având un animal stimulant. Animalele de stimulare erau "partenerul" familiar (partenerul feminin al subiectului) și un "străin" necunoscut (o femeie care nu sa întâlnit anterior cu acest subiect) care erau în mod liber legați în cuștile lor separate, fără contact direct între ele. La inițierea testului 3-h, subiecții au fost plasați în cușca centrală și lăsați să se miște liber pe tot aparatul. Comportamentul a fost înregistrat utilizând un sistem de înregistrare video cu timp îndelungat. Experimentatorii orbi față de manipulare au revizuit banda și comportamentul subiectului înregistrat. O preferință a partenerului a fost definită ca subiectul cheltuind mult mai mult timp în contactul paralel cu partenerul decât cel străin, așa cum este indicat de un eșantion pereche t Test (27).
In situ hibridizare și imunoblotting occidental.
Anticorpi specifici antisens (Tabelul 1) au fost utilizate pentru marcarea in situ a ARNm D1R, D2R, TH și DAT. Etichetarea a fost efectuată cu 35S-marcate și mRNA de control pentru fiecare marker DA așa cum a fost descris anterior (51). Pentru analiza Western Blotting, proteina DAR a fost extrasă din supernatantul panglicilor de țesut NAcc și testată așa cum s-a descris anterior (52).
Cuantificarea și analiza datelor.
CPP și preferințele partenerului au fost determinate de eșantioane pereche t teste. Diferențele de grup în perioadele de împerechere în timpul primului 6 h de împerechere cu intrări pentru femei și cuști în timpul testului de preferință pentru parteneri au fost analizate de ANOVA. Densitățile optice ale marcajului ARNm de la D1R și D2R în marcarea NAcc, precum și în marcarea ARNm ale TH, DAT și D2R în VTA au fost cuantificate din autoradiograme utilizând un program de imagine computerizat (NIH IMAGE 1.64). Datele au fost prezentate ca schimbări procentuale ale mediei grupului de control salin și diferențele de grup au fost analizate prin t teste. În final, densitățile optice ale marcării D1R și D2R pe filmul cu raze X din experimentele Western blotting au fost analizate prin t teste.
Experimental Design.
Experimentul 1a a stabilit o curbă doză-răspuns pentru CPP indusă de AMPH. Subiecții au fost pretestați în aparatul CPP în ziua 1, repartizați aleatoriu într-una din cele șase grupuri experimentale care au primit ip (ip) injecții de soluție salină conținând concentrații diferite de AMPH [0n = 12), 0.1 (n = 8), 0.5 (n = 9), 1.0 (n = 12), 3.0 (n = 12) sau 5.0 mg / kg (n = 13)] în timpul zilei 3 (ziua 2-4) de condiționare și apoi testat pentru CPP într-un test posttest în ziua 5.
Experimentul 1b a dezvăluit rolurile receptorilor DA în CPP indusă de AMPH. Subiecții au fost pretestați în aparatul CPP și repartizați aleatoriu într-una din cele opt grupuri experimentale care au primit o injecție sc (sc) de soluție salină (n = 10) sau cu soluție salină conținând concentrații diferite ale unui antagonist neselectiv al receptorului DA [haloperidol; 0.1 (n = 8), 1.0 (n = 8) sau 5.0mg / kg (n = 8)] sau un tip specific D1 (SCH23390; 0.5 (n = 7) sau 5.0 mg / kg (n = 7)] sau cu antagoniști ai receptorilor DA specifici D2 [eticloprid; 0.5 (n = 8) sau 5.0 mg / kg (n = 8)]. Treizeci de minute mai târziu, o doză prag de AMPH (1.0mg / kg), care a indus CPP în experimentul 1a, a fost utilizată pentru condiționarea AMPH. După ce 3 zile de condiționare AMPH, toți subiecții au primit un posttest CPP.
Experimentul 2 a examinat dacă experiența AMPH a interferat cu legarea perechilor. Subiecții au fost repartizați aleatoriu într-una din cele trei grupuri experimentale care au primit ip injecții de soluție salină (n = 8) sau cu soluție salină conținând 1.0 mg / kg (n = 8) sau 5.0 mg / kg (n = 7) AMPH o dată pe zi pentru 3 zile consecutive - o paradigmă care a indus CPP la prele bărbați voles. În cea de-a patra zi, subiecții au fost împerecheați cu o femeie primită cu estrogen pentru 24 h (14) și au fost apoi testați într-un test de preferință pentru partener 3-h. Pentru a controla efectele potențiale ale injecțiilor asupra legării perechilor, un al patrulea grup experimental de bărbați intacți care nu au primit nici o injecție (n = 6) a fost asociat cu femele primate cu estrogen pentru 24 h și apoi testat pentru preferințele partenerului. Toate testele comportamentale au fost înregistrate video pentru verificarea împerecherii. A fost cuantificată durata subiecților de contact alături de partener și străin. În plus, s-au cuantificat frecvențele perioadelor de împerechere în timpul primului 6 h de asociere și activitate locomotorie (indicată prin intersecția cu colivii) în timpul testului de preferință al partenerului 3-h. După testul de preferință pentru parteneri, subiecții au fost uciși imediat. Toate creierele au fost recoltate, înghețate pe gheață uscată și depozitate la -80 ° C pentru etichetarea hibridizării in situ a mARN-urilor marker DA.
Experimentul 3 a examinat dacă legarea perechilor cu deficiență de AMPH a fost asociată cu modificări ale activității DA mezolimbice. Creierul de la subiecții care au primit soluție salină (n = 8) sau 1.0 mg / kg AMPH (n = 8) din experimentul 2 au fost tăiate pe un criostat în secțiuni coronale (14 μm grosime) care au fost dezghețate pe tobogane Superfrost / plus (Fisher Scientific). Secțiunile de creier la intervale 98-μm au fost procesate pentru etichetarea hibridizării in situ a mRNA D1R, D2R, TH și DAT. Deoarece volii experimentați cu 1.0 mg / kg AMPH au prezentat o creștere a etichetei D1R, dar nu D2R, marcarea ARNm în NAcc, comparativ cu martorii injectați cu salin, au fost generate două grupuri suplimentare de subiecți care au primit injecții cu soluție salinăn = 6) sau 1.0 mg / kg AMPH (n = 6), 24 h de împerechere și apoi testarea preferințelor partenerului, așa cum este descris mai sus. Subiecții au fost decapitați și creierele au fost tăiate pe un criostat la grosimea 300 μm. Tampoanele de țesuturi luate bilateral de la NAcc au fost prelucrate pentru D1R și D2R Western blotting.
Experimentul 4 a examinat dacă activarea receptorilor de tip D1 din NAcc a fost responsabilă de deteriorarea AMPH a legării perechilor. Subiecții au fost implantați cu canule de ghidare direcționate bilateral la cochilia NAcc. După 3 zile de recuperare, au fost repartizate aleatoriu într-una din cele trei grupuri experimentale în care au primit injecții intra-NAcc de CSF (200 nL / n = 11) sau CSF care conține 0.4 (n = 6) sau 100 ng / lateral (n = 7) SCH23390. Treizeci de minute mai târziu, au primit injecții ip de 1.0 mg / kg AMPH. Această procedură a fost repetată pentru zile consecutive 3. În cea de-a patra zi, subiecții au fost împerecheați cu o femeie primită de estrogen pentru 24 h și apoi au fost testați pentru preferințele partenerului.
recunoasteri
Autorii le mulțumesc lui Kyle Gobrogge, Claudia Lieberwirth, Kelly Lei și Melissa Martin pentru citirea critică a acestui manuscris. Această lucrare a fost susținută de National Institutes of Health Grants MHR01-58616, DAR01-19627 și DAK02-23048 către ZW
Note de subsol
Autorii nu declară nici un conflict de interese.
Acest articol este o transmitere directă PNAS.
Referinte