側坐核におけるDeltaFosBの過剰発現は保護嗜癖表現型を模倣するが環境強化の保護鬱病表現型を模倣しない（2014）

Front Behav Neurosci。 2014; 8：297

29、2014、8月にオンライン公開されました。 土井：  10.3389 / fnbeh.2014.00297

PMCID：PMC4148937

抽象

環境の強化は、ラットで保護中毒とうつ病の表現型を生み出す。 ΔFosBは、脳の報酬を調節する転写因子であり、心理的ストレスと乱用薬物によって誘発されます。 しかし、環境強化の保護的表現型においてΔFosBが果たす役割は十分に研究されていません。 ここでは、拘束ストレスまたはコカインに反応して、強化状態（EC）のラットと比較して、隔離状態（IC）で飼育されたラットでΔFosBが特異的に調節されることを示します。

慢性ストレスまたは慢性コカイン治療はそれぞれ、ICラットの側坐核（NAc）のΔFosBタンパク質レベルを上昇させますが、EC条件下で見られるΔFosBの基底蓄積がすでに上昇しているため、ECラットの上昇は見られません.

ペアハウスラットのNAcシェルにおけるΔFosBのウイルス媒介過剰発現（つまり、環境の濃縮/分離とは無関係）は、空腹によって動機付けられたときにショ糖に反応するオペラントを増加させますが、満腹動物では応答を減少させます。 さらに、ΔFosBの過剰発現は、コカインの自己投与を減少させ、コカイン探索の絶滅を促進し、静脈内コカインの自己投与のコカイン誘発回復を減少させます。 濃縮表現型と一致するすべての行動の発見.

しかし、対照的に、ΔFosBの過剰発現は、不安およびうつ病に関連する行動のいくつかのテストにおいて、ペアハウスのラットの反応を変えませんでした。

したがって、ΔFosB NAcシェルの模倣 保護中毒の表現型ではなく、環境の強化の保護うつ病の表現型。

キーワード： [インクリメント]FosB、環境強化、うつ病、コカイン自己投与、アデノ随伴ウイルス（AAV）、過剰発現

概要

人生経験、特に人生の初期段階での経験は、生涯を通して動物の行動に大きな影響を与えます。 環境は、人間の精神障害に対する脆弱性と抵抗において重要な役割を果たします（エリセイら、 2013; Akdeniz et al。、 2014; 加藤と岩本、 2014; van Winkel et al。、 2014). げっ歯類モデルでは、離乳から若年成人までの豊かな環境での生活が、保護中毒とうつ病の表現型を生み出すことが報告されました （グリーンら、 2002, 2003, 2010; Laviolaら、 2008; ソリナスら、 2008, 2009; エル・ラバスら、 2009; Thiel et al。、 2009, 2010）。 このパラダイムでは、動物は、動物がグループ収容されて新規オブジェクトに毎日アクセスできる濃縮状態（EC）、または動物が新規性や社会的接触なしに単身収容される隔離状態（IC）に割り当てられます。 社会的接触、運動、新規性を含む豊かな状態で飼育された動物は、静脈内薬物自己投与パラダイムでコカインまたはアンフェタミンの強化と探索をあまり示さない （グリーンら、 2002, 2010). 中毒表現型に加えて、そのような濃縮への曝露は、うつ病の動物モデルで抗うつ薬のような効果をもたらします （グリーンら、 2010; Jha et al。、 2011）。 具体的には、濃縮された動物は、ショ糖嗜好テストでの快感消失様行動の減少、社会的相互作用テストでの社会的離脱の減少、強制水泳テスト（FST）での不動の減少を示します。 私たちの以前の研究は、側坐核（NAcの転写因子CREBの活性低下の役割を示唆しているものの、濃縮の抗中毒および抗うつ薬のような効果にもかかわらず、これらの環境濃縮の保護表現型の根底にあるメカニズムは不完全に理解されたままです）環境強化の効果のいくつかを仲介する （グリーンら、 2010; Larsonら、 2011）。 したがって、これらの差動飼育研究の目標は、基礎科学のアプローチを使用して、後でクリニックに翻訳できる回復力の分子メカニズムを特定することです。 このアプローチは、選択的育種などの確立された遺伝的戦略と環境的に同等です（McBride et al。、 2014).

ここでは、コカイン、モルヒネ、アルコール、ニコチン、アンフェタミンなどの特定のストレスまたは事実上すべての乱用薬物によってNAcで顕著に誘発される別の転写因子ΔFosBに注目します（Hope et al。、 1992; ケルツとネスラー、 2000; Perrottiら、 2004, 2008）。 転写因子として、ΔFosBはJunファミリータンパク質、優先的にJunDと二量体化し、AP-1応答要素に結合して標的遺伝子の転写を増強または抑制する活性AP-1複合体を形成します（ネスラー、 2001）、新しい研究では、ΔFosBはホモダイマーとしても作用することが示唆されています（Wang et al。、 2012）。 ΔFosBタンパク質は、 FosB ΔFosBタンパク質に2つのC末端デグロンドメインを欠如させ、FosBおよび他のすべてのFosファミリータンパク質で見られる急速な分解からΔFosBタンパク質を防ぐ遺伝子。 ΔFosBはNAcで非常に安定しているため、ΔFosBは、他のFosタンパク質と比較して、急性刺激と慢性刺激に応じて非常に異なる動作をします。 乱用またはストレスの薬物に繰り返しさらされると、ΔFosBタンパク質は数日から数週間徐々に蓄積して持続しますが、FosBおよび他のFosタンパク質は短時間（数時間）だけ誘導され、その後の曝露で誘導が弱まります（ネスラーら、 2001; ネストラー、 2008).

ΔFosBの重要性は、乱用およびストレスの薬物によって高度に誘発されるだけでなく、脳内でのΔFosBの操作が動物の行動に影響を及ぼすことが示されていることです。 成体マウスのダイノルフィン中型有棘ニューロンに選択的にΔFosBを誘発すると、急性および反復コカインに応答した運動感受性、および条件付け場所の嗜好パラダイムでのコカインに対するやりがいのある応答、および自己投与パラダイムの強化が増加します （ケルツら、 1999; ケルツとネスラー、 2000; コルビーら、 2003).

保護中毒とうつ病の表現型は、環境が豊富なラットについて詳細に説明されていますが、これらの保護表現型の媒介におけるΔFosBの可能な役割は完全には評価されていません。 環境強化の以前の研究は、標準環境（SE）と比較して、強化された環境がマウスの線条体領域のD1およびD2中型有棘ニューロンの両方で基底ΔFosBレベルを増加させることを示しました （ソリナスら、 2009; ロボら、 2013). さらに、濃縮ウィスターラットは、SEラットと比較してNAcおよび前頭前野で上昇したΔFosB陽性細胞を示し、ニコチンに対する保護中毒表現型におけるΔFosBの役割の可能性を示唆しました （Venebra-Muñozet al。、 2014). さらに、マウスの線条体全体でΔFosBを過剰発現させると、毎日の車輪走行が増加します。これは、豊かな環境におけるラットの活動の増加に類似している可能性があります （Werme et al。、 2002).

現在の研究では、次のことを仮定しました：（1）環境の強化は、NAcの基底ΔFosBレベルの蓄積を増加させるでしょう。 （2）このΔFosBの蓄積は、環境強化の保護効果に貢献するでしょう。

（材料および方法）

動物

環境を強化するために、オスのスプラーグドーリーラット（米国テキサス州ヒューストンのハーラン）を出生後21から51までECまたはICハウジングにランダムに割り当てました。 ECラットは、いくつかの硬質プラスチックオブジェクト（子供のおもちゃ、プラスチック容器、PVCチューブなど）を備えた大きな金属ケージ（20×70×70 cm）にグループ収容（ケージあたり70）しました。 これらのオブジェクトは新しいオブジェクトに置き換えられ、毎日新しい構成に再配置されました。 ICラットは、標準のポリカーボネート製ケージに単独で収容されました。 ラットは実験を通してこれらの状態にとどまり、すべての行動試験および生化学試験は51日齢（すなわち、少なくとも30日の濃縮/分離）後に開始されました。 ΔFosBの過剰発現のために、オスのSprague-Dawleyラット（Harlan、Houston、TX、USA）をサイズ225–250 gで取得し、標準的なポリカーボネートケージにペア収容してから、定位的にアデノ随伴ウイルスベクター（AAV2）を注入しました緑色蛍光タンパク質（GFP）またはコントロールとしてのGFPのみでΔFosBを過剰発現（以下を参照）。 標準的なラットの固形飼料と水は、行動試験および食物規制中を除き、すべてのラットが自由に利用できました。 すべてのラットは、実験動物管理評価協会（AAALAC）承認コロニーで、管理された環境（温度、22°C、相対湿度、50％、および12 hの明暗サイクル、600 hの照明）で維持されました。 。 すべての実験は、NIHの実験動物の管理と使用に関するガイドおよびテキサス大学医学部施設内動物管理使用委員会に準拠していました。

環境強化は、新規性、社会的接触、運動からなる複合的な操作です。 ペア住宅は社会的接触を提供するため、ECを表します（NIHガイドを参照）。 したがって、新規性、社会的接触または運動を伴う状態に適切な対照群は、新規性、社会的接触または運動を伴わないIC状態である。 ICラットは、ECラットよりも慢性ストレスの兆候が少ない。 具体的には、ECラットは副腎が肥大している（Mlynarik et al。、 2004）、鈍化したCORT応答（Stairs et al。、 2011）、弱毒化された前初期遺伝子誘導（Zhang et al。、原稿準備中）およびΔFosB蓄積（Solinas et al。、 2009; ロボら、 2013）、慢性ストレスのすべての兆候（Crofton et al。、レビュー中）。

心理的ストレス

濃縮され分離されたラットを、使い捨ての柔らかいプラスチック製rod歯類抑制装置（DecapiCone®、Braintree Scientific Inc.、米国マサチューセッツ州）に、60日（急性）または1日（繰り返し）のいずれかで9分入れました。 短時間暴露mRNAテストでは、拘束ストレスの最後の期間の開始後30ラット（グループあたり5ラット）を30断頭し、ラット脳を抽出し、mRNA分析のためにNAcを解剖しました。 免疫組織化学のために、12ラットに生理食塩水と4％パラホルムアルデヒドを灌流し、脳を抽出し、4％パラホルムアルデヒドで後固定し、20°PBSで1xPBSの4％グリセロールに保存しました。 ラットの脳を凍結ミクロトームで40μmでスライスしました。 最終ストレスの24時間後に脳を採取して、全長FosBタンパク質を分解させました（Perrotti et al。、 2008).

環境濃縮による静脈内コカイン自己投与

静脈カテーテル留置

ケタミン（100 mg / kg IP）とキシラジン（10 mg / kg IP）を使用してラットに麻酔をかけ、Silasticカテーテルを頸静脈に挿入して固定し、動物の背中の皮膚から出ました。 毎日、カテーテルにヘパリン（0.1 U / ml）、ペニシリンGカリウム（30.0 U / ml）およびストレプトキナーゼ（250,000 IU / ml）を含む滅菌生理食塩水8000 mlを注入して、感染を防ぎ、カテーテルの開通性を維持しました実験の。

環境強化によるコカインの自己投与

20の濃縮ラットと20分離ラットをオペラントチャンバー30×24×21 cm（Med-Associates、セントオールバンズ、バーモント州）に入れ、コカイン（0.5 mg / kg / infusion、NIDA薬物供給、 Research Triangle Institute、NC、USA）または生理食塩水、合計1日間、1日あたり1時間の固定比率2（FR14）スケジュール。 ECグループとICグループの間で同様のコカイン摂取を維持するために、セッションごとに最大30注入がありました。 組織処理能力は30サンプルに制限されていたため、各グループの最低反応ラットは処理されず、コカインには8、生理食塩水グループには7が残っていました。 したがって、ECとICラットの間で、コカインの総摂取量または注入の時間経過にEC / ICの違いはありませんでした。 ラット脳は、最後の自己投与セッションの開始から3時間後に抽出され、NAcはmRNAおよびタンパク質分析のために解剖されました。 NAcの片側をウエスタンブロットに使用し、もう一方をqPCRに使用しました。

環境強化による非随伴コカイン投与

以前に公開された文献と直接比較するため（Hope et al。、 1994; Chenら、 1995）、EC（N = 12）およびICラット（N = 12）20日（急性）または1日（繰り返し）生理食塩水または9 mg / kgコカインを腹腔内（IP）注射しました。 処理中に1つのECサンプルが失われました。 急性群は、8日間生理食塩水の注射を受け、9日にコカインの注射を1回受けたため、すべてのラットが同じ回数注射を受けました。 最後の注射から30分後に脳を抽出し、mRNA分析のためにNAcを解剖しました。

qPCRを使用したmRNAの定量

RNAは、RNA STAT-60（Teltest、Friendswood、TX）でホモジナイズし、クロロホルムを使用してDNAとタンパク質からRNAを分離し、イソプロパノールで全RNAを沈殿させることにより抽出しました。 混入DNAを除去し（TURBO DNA-Free、Life Technologies、CA、USA）、5 ugの精製RNAをcDNAに逆転写しました（SuperScript III First Strand Synthesis：Invitrogen catalog＃18080051）。 ΔFosBmRNAは、Applied Biosystems 7500高速サーモサイクラーで定量的リアルタイムPCR（SYBR Green：Applied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティ）を使用して、ΔFosBのみを検出するように設計されたプライマー（前方：AGGCAGAGCTGGAGTCGGAGAT、逆：GCCGAGGACTTGAACTTCACTCG）を使用して定量化され、設計されたプライマーに正規化されましたラットGAPDHを検出する（前方：AACGACCCCTTCATTGAC;後方：TCCACGACATACTCAGCAC）。 すべてのプライマーは、実験前に特異性と直線性について検証および分析されました（Alibhai et al。、 2007).

ウエスタンブロット法

コカインまたは生理食塩水自己投与ECおよびICラットのNAcの右側を、ショ糖、ヘペス緩衝液、フッ化ナトリウム、10％SDS、およびプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤（Sigma-Aldrich：P-8340、P -2850、P-5726）。 タンパク質濃度は、Pierce BCA Protein Assay Kit（Thermo Scientific、IL、USA）を使用して評価しました。 1匹のラットから抽出されたタンパク質では分析に十分ではなかったため、同じグループの2サンプルをプールし、各グループの4サンプルを作成しました。 タンパク質サンプルを95°で5分間変性させ、10–20％ポリアクリルアミド勾配ゲル（Criterion TGX、Bio-Rad Laboratories、CA、USA）で泳動した後、ポリフッ化ビニリデン（PVDF）膜（Millipore、MA、USA）に転写しました）。 メンブレンをブロッティンググレードブロッカー（脱脂粉乳）でブロックし、ΔFosB一次抗体（ウサギ、1：1000、＃2251、Cell Signaling Technology、MA、米国）およびβ-アクチン一次抗体（マウス、1：1000 、Cell Signaling Technology、MA、USA）、TBSTで洗浄し、蛍光二次抗体（ロバ抗ウサギ（780 nm）、ロバ抗マウス（680 nm）、1：15000、Li-Cor Biosciences、NE、米国）。 次に、ウエスタンブロットを画像化し（オデッセイ、リコーバイオサイエンス、ネブラスカ州、米国）、タンパク質レベルをオデッセイソフトウェアで定量化した。

免疫組織化学

図について Figure11 (N = 3）、ΔFosBを含む細胞を可視化し、DAB（DABペルオキシダーゼ基質キット、Vector Laboratories、CA、USA）で染色したNAcスライス中のΔFosBの免疫組織化学標識によりカウントしました。 脳を抽出し、固定後、凍結保護し、スライド式凍結ミクロトーム（Leica Biosystems、IL、USA）でNAcを含む40μmスライスに切断しました。 1％トリトンおよびアビジンD（Vector Laboratories、CA、USA）を含む3％正常ヤギ血清（Jackson ImmunoResearch、PA、USA）でブロッキングする前に、スライスは浮いたままで、0.3xPBSで洗浄しました。 NAcスライスをFosB一次抗体（1：1000、Santa Cruz Biotechnology、ダラス、テキサス、米国）と3％ヤギ血清、0.3％トリトン、1xPBS、およびビオチン溶液（Vector Laboratories、カリフォルニア、米国）で一晩インキュベートしました。 この抗体はFosBとΔFosBの両方を認識しますが、以前のウェスタンブロット研究では、刺激後の24 hで、FNUMが24 hよりかなり前に分解するため、免疫組織化学シグナルの大部分がΔFosBで構成されていることが示されました（Perrotti et al。、 2008）。 洗浄後、スライスをビオチン化ヤギ抗ウサギ二次抗体IgG（Vector Laboratories、CA、USA）、ヤギ血清、および1xPBSとともにインキュベートしました。 次に、スライスをアビジン-ビオチン複合体（ABC）ペルオキシダーゼ染色とともに15分（Thermo Scientific、IL、USA）インキュベートしました。 最後に、スライスをマウントし、エタノールとCitriSolv（Fischer Scientific、MA、USA）を使用して脱水し、DPX（Fisher Scientific）でカバースリップを取り付けました。 細胞カウントのために、各動物のブレグマ+ 1.80から+ 1.44の切片をサンプリングしました。 ΔFosB免疫陽性細胞の総数は、各ラットのコアとシェルからの4つのNAc切片からカウントされました。

図1  

ストレスと [インクリメント]ECおよびICラットのFosB。 （広告） ICのNAcシェルおよびコアにおけるΔFosBの代表的な免疫組織化学DAB染色（A および B）およびEC（C および D）とラットB および D）となし（A および C）繰り返しストレス（N = 3）。 （E） 定量化 ...

アデノ随伴ウイルスの過剰発現 [インクリメント]FosB

ΔFosBおよびヒト化ウミシイタケGFP（hrGFP; Winstanley et al。、を発現するAAV2ベースのベクター 2007, 2009a,b）またはhrGFP制御ベクター（N = 10それぞれ）ラットNAcに両側から注入されました。 ICヒトはいないため、この研究ではICラットの代わりにペアハウスラットを使用して、ΔFosBの効果を実証することにより、科学界との関連性を高めました。 独立しました EC / ICパラダイムの。 hrGFPを発現するが、ΔFosBを過剰発現しないAAVを対照として使用した。 ΔFosBの発現 インビボの FosB一次抗体（1：200、ウサギ、Cell Signaling Technology、MA、USA）を用いた免疫蛍光染色により検証されました。 座標を使用して、AAVベクターをNAcシェルに両側から注入しました（1μl/ side over 10 min）（AP = 1.7、 L = 2.0、 D = −6.5）。 行動テストは、定位固定術の数週間後に3で開始されました。 行動試験の終了後、免疫組織化学的に正確な配置が決定された。

ショ糖ネオフォビア

ΔFosB過剰発現ラット（N = 10）およびコントロールラット（N = 8）動作テストの開始前の1週間処理されました。 不安のような行動をテストするために、ラットを新しい味覚（スクロース）に対する新恐怖症について評価した。 ラットを個々のケージに分け、1600時間で水を除去しました。 標準的なラットの水ボトルに、ラットの通常の「水道水」中の1％w / vスクロース溶液を満たし、1800 hで各ケージに置く前に秤量しました。 30分後、ボトルを取り外して再計量し、テスト前後のショ糖ボトルの重量の差を計算しました。 次に、スクロースをケージ上でさらに2日間交換して、スクロースの嗜好性テストの前に、ラットにスクロースの風味に慣れさせました。

高架式十字迷路

不安様行動の別のテストである高架式十字迷路（EPM）は、ショ糖新恐怖症の2日後にテストされました。 EPMは、新規で不安を引き起こす環境でのベクトル修正探索行動を測定します（Green et al。、 2008）。 12×50 cmの寸法の2つの閉じたアームと2つの開いたアーム（Med Associates Inc.、VT、米国）は床から75 cmで、各アームの入り口に光ビームがありました。 開いた腕に費やされた時間は、Med-PCソフトウェアを使用したフォトビームブレークによって5分間監視されました。

寒冷ストレスによる排便

EPMの翌日に、3番目の不安テストが使用されました：軽度のストレスの多い環境（寒さ）に応じた排便。 ポリカーボネートマウスケージ（33×17×13 cm）を氷上で10分間冷却しました。 ラットを氷上のケージに30分置き、糞塊の数を5分ごとに記録しました。

社会的接触

翌日、社会的相互作用テストを使用して、うつ病のような行動を測定しました。 ラットは、試験前に24時間分離されました。 試験日には、ラットをケージメイトと一緒に新しい環境（プラスチック容器、45×40×45 cm）に置き、30分のビデオを記録しました。 ラットのペアが互いにグルーミングするのに費やした時間は、ラットの状態を知らない調査員によって測定された。

スクロースの好み

社会的接触後、ショ糖嗜好テストは快感消失のモデルとして使用されました。 ペア飼育ラットを1600 hで餌で分離しましたが、2 hの間は水にアクセスできませんでした。 1800時間で、2つの事前に計量された水ボトルを各ケージに置き、1つは水を含み、もう1つは1％ショ糖水溶液です。 スクロースが約10 cm離れて配置されている間、水のボトルは通常の位置に配置されました。 15分後にボトルを取り外し、再計量しました。

自発運動

ショ糖嗜好の3日後、2つの40×40フォトビームマトリックス（上記の40 cmの1つ）で囲まれた、薄い層の寝具を備えた透明なプレキシガラスチャンバー（4×4×4 cm）地面と地面から1 16 cm離れて、水平歩行と垂直（育成）アクティビティを記録します。 修正されたオープンフィールド活動システム（米国カリフォルニア州サンディエゴインスツルメンツ）によって、2 hについてフォトビームの破損を監視しました。

強制水泳テスト

最後の自発的行動テストは、抗うつ薬に敏感なモデルであるFSTでした。 ラットを約14 Lの室温（24±0.5°）の水で満たされたプレキシグラスシリンダーに入れ、セッション15で1分、翌日セッション5で2分入れました。 ラットを乾燥させ、ホームケージに戻しました。 水泳活動はビデオで記録され、セッション1の不動の最初の期間（2 s）までの潜時と総不動時間は、条件を知らない調査員によって決定されました。

ショ糖オペラント応答

対照AAVラットおよびΔFosB過剰発現ラットは、85日間で自由摂食時体重の7％に規制されました。 1連続セッションの15分セッションの強化のFR5スケジュールで、すべてのラットをショ糖ペレット（Bio-Serv、ニュージャージー州、米国）のバープレスに訓練しました。 次に、ラットに3日間自由に食物を与え、1分のFR15スケジュールでスクロースペレットのバープレスを許可しました。今回は100％の自由給餌重量です。

コカイン自己投与

買収

カテーテル手術（上記）の1週間後、すべてのラット（7対照ラットと10ΔFosB過剰発現ラット、1匹の対照ラットはカテーテル手術で失われた）をオペラントチャンバー30×24×21 cm（Med-Associates、St. Albans、VT）、および0.2日間のセッションごとに2 hの間、4 mg / kg /注入単位用量のコカインを自己投与できます。 次に、FR0.5スケジュールで3日間1 mg / kg / infusion。 各注入は、0.01を超える量の5.8 mlで静脈内に送達されました。 注入は、20の2つのキューライトの点灯によって通知されました。これは、それ以上の注入を達成できないタイムアウト期間を通知しました。

絶滅

慢性コカイン曝露はおそらくコントロールラットにΔFosBの蓄積を誘発し、それにより両方のベクター条件のラットに脳内の高レベルのΔFosBが生じるため、ラットは4日間は自己投与せずにホームケージに閉じ込められました対照ベクターラットで減少するΔFosBタンパク質レベル。 4日間の禁欲後、ラットをオペラントチャンバーに入れ、1連続セッションの1 hセッションのFR3スケジュールでコカインの代わりに生理食塩水を自己投与させました。

固定比率の用量反応

各ラット（コントロールおよびΔFosB過剰発現）は、0.00325連続日の間、FR0.0075スケジュールで毎日昇順で0.015、0.03、0.06、0.125、0.25、0.5、1、5 mg / kg /注入コカインを自己管理することができました。 ラットは、コカインの各用量を30分間自己投与しました。

コカイン誘発の回復

ラットは、セッション内での復職手続きを受けました。 ラットは、0.5 minのFR1スケジュールで60 mg / kg /注入を受け、その後3 hの絶滅が発生しました（条件付きコカインキューを使用）。 次に、彼らはIPインジェクションを受けました（Green et al。、 2010）回復の0セッション全体で各ラットのランダムな順序での5つの用量（2.5、5、10、20、または5 mg / kg）のいずれかのコカイン。 セッションの最後の3 hフェーズは、再びコカインの手がかりを伴った回復応答でしたが、コカイン注入はありませんでした。 各コカイン誘発復職セッションの後、2 hのFR0.5スケジュールで、高用量（1 mg / kg /注入）の2介入コカインをラットに投与し、セッション全体で高い応答率を維持しました。 コカインの自己投与プロセス中に、一部のラットのカテーテルは徐々に開通性を失いました。 したがって、この分析では、6対照ラットと7ΔFosB過剰発現ラットのデータを使用しました。

統計分析

4つの治療グループを比較するために、2因子分散分析（ANOVA）および2因子反復測定ANOVAを行い、条件間の違いを比較するために計画比較を使用しました。 2つの条件の間の有意性は、学生の t-テスト。 すべて t-テストデータは、正常性のシャピロウィルクテストに合格しました。 すべてのデータは平均±SEMとして表されます。 統計的有意性は p <0.05。 XNUMX回の実験で濃縮されたラットはすべてXNUMXつのケージに収容されましたが、別々の被験者として扱われ、潜在的な疑似複製の問題に関する影響がありました。

結果

ECラットは、より高い基礎レベルを示します [インクリメント]ICラットよりもNAcのFosB

ICラットと比較して、ECラットは両方のNAcコアに有意に多くのΔFosB陽性細胞を持っています（t(4) = - 3.31、 p <0.05）およびシェル (t(4) = - 6.84、 p <0.05）（図 1A、C、E、F), ICラットと比較してECラットではΔFosBの基底トーンが高いことを示唆。 さらに、ウェスタンブロットの結果は、IC生理食塩水ラットと比較して、NAcのΔFosBタンパク質の基礎レベルが高いEC生理食塩水ラットの強い傾向を示しました（t(6) = - 2.03、 p = 0.089; 図 図2A）2A）両側検定を使用します。 ただし、図の表現が増加していることを考えると 1A–F 他の論文で見られた増加（Solinas et al。、 2009）、この効果に自信があります。 ウエスタンブロットの結果はまた、免疫組織化学によって検出された実質的にすべてのFosB様免疫反応性が24 hでは検出できなかったFosBではなくΔFosBであったことを確認します。

図2  

コカインと [インクリメント]ECおよびICラットのFosB。 （A–B） 平均ΔFosBタンパク質 （） およびmRNA （B） ICおよびECラットにおける生理食塩水またはコカインの自己投与の14日後のNAcのレベル（±SEM）（N = 7–8）。 パネルaの赤い帯は、 ...

[インクリメント]FosBは、ストレスによってECおよびICラットで差別的に誘導されます

両方のシェルで繰り返し拘束応力の重要な主効果がありました（F（1、8） = 16.6、 P <0.005）およびコア（F（1、8） = 7.9、 P <0.05）のNAcと殻の環境濃縮の主な効果（F（1、8） = 22.3、 P <0.005; 数字 1A–F）。 さらに重要なことは、ストレスと環境の強化の間の相互作用は、両方のシェル（F（1、8） = 25.6、 P <0.01）およびコア（F（1、8） = 6.7、 P <0.05）。 相互作用は、拘束ストレスを繰り返した後、ΔFosB陽性細胞の数がICラットで有意に増加したが、この数はストレスを繰り返した後のECラットでは変化しなかった。

ΔFosBが急性ストレスと反復ストレスによって動的に調節される方法をさらに調査し、以前の研究と比較できるようにする（Alibhai et al。、 2007）、ΔFosBの誘導 mRNA 急性および反復拘束ストレスで研究されました（図 （図1G）.1G）。 ストレスの重要な主な影響がありました（F（2、24） = 31.9、 P <0.001）および環境強化（F（1、24） = 5.1、 P <0.05）。 ICラットでは、ΔFosBmRNAは急性拘束ストレス後に強く誘導された。 しかし、ストレスを繰り返すと、ΔFosBmRNAの誘導は急性誘導と比較して大幅に減衰しました。 重要な相互作用もありました（F（2、24） = 4.6、 P <0.05）、ΔFosBmRNAの急性誘導がICラットと比較してECラットで少なかったことを示しています。 したがって、ECラットのΔFosBの基礎レベルは高くなります タンパク質 NAcでは、ΔFosBは少ない mRNA 急性ストレッサーに応じた誘導。

[インクリメント]FosBはECおよびICラットのNAcにおいてコカインにより差次的に誘導される

ECラットとICラットがコカインに対して異なる反応をするかどうかを判断するために、コカインの自己投与後のラットNAcにおけるΔFosBタンパク質とmRNAの調節を研究しました（図 2A、B それぞれ）。 ウェスタンブロットにより、コカインの有意な主効果が明らかになりました（F（1、12） = 24.9、 P <0.001）および有意な交互作用（F(1,12) = 5.5、 P <0.05）。 相互作用は、ΔFosBがECラットよりもICラットでより増加するようなものでした（図 （図2A）.2A). 実際、コカインの自己投与後、ΔFosBタンパク質レベルは有意に上昇しました の ICラット。 mRNAレベルに関して、qPCRの結果は、コカインの重要な主な効果も明らかにしました（F（1、26） = 47.1、 P <0.001）および環境強化の主な効果（F（1、26） = 13.8、 P <0.005）。 全体的なレベルはECラットで低かったが、両方のグループがΔFosBmRNAを増加させた（図 （図2B2B).

タンパク質データは元の仮説を支持しましたが、図から仮説が立てられました フィギュア1G1G ECのラットはより少なく示す mRNA 上記のコカイン実験での孤立ラットよりも誘導 フィギュア1G1G 30 minのタイムポイントを使用し、コカイン実験では3 hのタイムポイントを使用しました。 mRNA仮説をさらに調べるために、30の最小時間ポイントを使用して、図とのより良い比較として、急性および反復コカイン治療の両方を調査しました 図1G.1G。 急性コカインの自己投与は本質的に問題があるため（習得学習など）、ECラットとICラットには、急性または9日間の非偶発的コカインIP注射（20 mg / kg）が繰り返し行われました。 仮説として、環境の強化の重要な主な効果があった（F（1、17） = 14.3、 P <0.005）、しかしコカイン治療の主な効果（F（2、17） = 3.4、 P = 0.057）および相互作用（F（2、17） = 3.4、 P = 0.055）両側検定でのみ強い傾向を示しました。 しかし、図から方向性仮説があったことを考えると Figure1G、1G、ECラットはICラットよりも少ない誘導を示すという意見に非常に満足しています（図 （図2C2C).

の過剰発現 [インクリメント]NAcシェルのFosBは、保護強化によって誘発された嗜癖表現型を模倣します

環境の濃縮/分離に依存しないラットの行動に対するΔFosBの影響を調査するために（すなわち、これらの結果を非EC / IC研究により関連させるため）、アデノ随伴ウイルス（AAV）を使用してNAcで両側にΔFosBを過剰発現させました強化されていないペアハウスのラット。 以前の研究によると、NAcシェルはうつ病関連および薬物摂取/探索行動の制御に最も敏感であるため、この研究ではAAVベクターがNAcシェルに注入されました（Green et al。、 2006, 2008, 2010）。 フィギュア 3A、B 対照ベクター（パネルA、すなわち内因性ΔFosB発現）およびNAcシェル内のΔFosB過剰発現ベクター（パネルB）を用いたΔFosBの代表的な免疫組織蛍光を示しています。

図3  

の過剰発現 [インクリメント]NAcシェルのFosBは、環境強化の保護中毒表現型を模倣しています。 （A–B） hrGFP制御のためのΔFosBの代表的な免疫組織化学 （） およびΔFosB過剰発現 （B） AAVベクター。 ...

力価を検証したら、 インビボの ウイルスベクターの発現と一般的な配置、我々は最初に不安モデルにおけるΔFosBの過剰発現の影響を研究した。 NAcシェルでのΔFosBの過剰発現は、ショ糖新恐怖症および寒冷ストレス誘発排便パラダイムにおける環境強化の不安原性効果を再現するのに十分ではなかった （データは表示されません）。 さらに、EPMには影響がありませんでした（データは示していません）。 環境の強化はラットで抗うつ薬のような効果を生み出すため、次にΔFosB過剰発現ラットでうつ病関連の試験を実施しました。 不安モデルと同様に、NAcシェルでのΔFosBの過剰発現は、ショ糖嗜好テスト、社会的相互作用テスト、またはFSTでうつ病様行動を減少させるのに十分ではないことが示されました （データは表示されません）。

環境強化パラダイムでは、ECラットはICラットよりも低い基礎運動活性を示します（Bowling et al。、 1993; ボウリングとバルド、 1994; Smithら、 1997; Greenら、 2003, 2010）。 NAcシェルでのΔFosBの過剰発現の影響を調べるために、120 minで自発的な運動活動をテストしました。 両側検定を使用すると、NAcシェルでΔFosBを過剰発現すると、ラットの基底運動活性が低下する強い傾向が生じることがわかりました（図 （図3C; 3C; t(16) = 1.84、 p = 0.084）。 両側検定では統計的に有意ではありませんが、これらのデータは、Green et al。に基づく明示的な方向性仮説に準拠しているため、依然として興味深いものです。 （2010）、これは環境強化の効果と一致しています。

Iうつ病および不安モデルとは対照的に、NAcシェルでのΔFosBの過剰発現は、複数の中毒/強化パラダイムでECのような表現型を生み出すことができました。 私nショ糖ペレットオペラント自己投与試験では、ΔFosBの過剰発現とラットの空腹動機との間に有意な相互作用があった（F（1、16） = 7.4、 P <0.01）。 NAcシェルでΔFosBを過剰発現しているラットは有意に 他には？ 飢motivに動機付けられた条件（すなわち、85％の自由飼料体重）でショ糖ペレットが、低動機条件（すなわち、100％の自由飼料重量）でより少ないペレット 図3D）、3D）、EC表現型を完全に模倣します（Green et al。、 2010).

環境強化パラダイムにおいて、ECラットは、絶滅およびコカイン誘発の回復におけるコカイン探索行動の減少を示した （グリーンら、 2010). したがって、コカイン摂取および探索行動は、静脈内コカイン自己投与パラダイムを使用して、ΔFosB発現ラットで測定されました。 渇望のモデルとして、コカインの絶滅パラダイムは、NAcシェルでのΔFosBの過剰発現が薬物探索行動を減少させることを明らかにしましたr（F（1、15） = 6.7、 P <0.05; 図 図3E）.3E）。 セッションの重要な主な効果もありました（F（2、30） = 74.0、 P <0.001）。 FR1スケジュールの下で対応するメンテナンスについては、用量の重要な主効果がありました（F（7、105） = 222.6、 P <0.001）および有意な交互作用（F（7、105） = 2.3、 P <0.05）累積コカイン摂取量。 相互作用の性質は、コカインの高用量でのみ違いが明らかになるようなものでした（図 （図3F）.3F）。 最後に、コカイン誘発の回復には、用量の有意な主効果がありました（F（4、44） = 15.5、 P <0.001）および両側検定を使用したΔFosB過剰発現の主効果の傾向（F（1、11） = 4.1、 P = 0.067）。 しかし、グリーンらからの方向性仮説を考えると。 （2010）および図の統計的に有意で一貫した結果 3D、E、F、ΔFosBは回復を減少させる可能性が高い（図 （図3G）.3G）。 10 mg / kg用量での応答は、ΔFosB発現ラットで有意に低かった。 全体としての結果は、ラットNAcシェルでΔFosBを過剰発現させると、コカイン摂取および探索行動が減少することを示しており、これは環境強化の行動効果と一致しています。

議論

中毒やうつ病に対する個人の脆弱性は、環境要因によって大きく影響を受けます。 環境強化は、動物の生活環境を操作するパラダイムであり、多くの精神疾患に対する保護効果を生み出します。 ΔFosBは、NAcおよび背側線条体を含む複数の脳領域の報酬機能の調節に重要な役割を果たします（Koob et al。、 1998; 賢い、 1998; Wallaceら、 2008; Grueter et al。、 2013; Pitchersら、 2013). このプロジェクトでは、濃縮ラットと隔離ラットの拘束ストレスとコカインによるΔFosBの動的調節を研究しました。 このプロジェクトの主な発見は:

(1）ECラットは、ICラットと比較して、ベースラインでNAcのΔFosBレベルが上昇しています。

（2）ICラットのみが、繰り返しストレスを伴う追加のΔFosBタンパク質を蓄積します。

（3）ECラットは、ストレスまたはコカインに続いてΔFosBmRNAの誘導の減衰を示します。 そして

（4）ペアハウスのラットのNAcでΔFosBを過剰発現させると、保護中毒の表現型を模倣しますが、保護的なうつ病の表現型は模倣しません。

トランスジェニックΔFosB過剰発現マウスは、低薬物用量でコカイン報酬および自己投与に対する感受性の増加を示すことを示す、公開された文献から期待するかもしれません（ケルツら、 1999; コルビーら、 2003; Vialouら、 2010; Robison他、 2013), 現在の実験におけるΔFosB過剰発現ラットは、コカインの自己投与および探索の傾向が増加することを示します。 Iしかし、現在の実験では、NAcシェルでのΔFosBの過剰発現は、コカイン摂取と、絶滅および回復中のコカイン探索を減少させ、コカインの動機の低下を示しています。 矛盾は、トランスジェニックマウスが線条体全体でΔFosBを発現したが、ダイノルフィン+細胞のみで発現したという事実による可能性があります （Colby et al。、 2003). 現在の実験では、ΔFosBは、ダイノルフィン+およびエンケファリン+ニューロンに感染するAAVベクターを介して過剰発現しました。 第二に、現在の研究は線条体領域全体ではなくNAcシェルに焦点を当てています。

中毒の表現型に加えて、環境の強化は、ラットで抗うつ薬と不安原性のようなプロファイルを生成します （グリーンら、 2010; Vialouら、 2010). 現在の研究では、NAcでのΔFosBの過剰発現は、3つのうつ病または3つの不安テストのいずれにおいても効果を生みませんでした。 うつ病の表現型ではなく、濃縮中毒を模倣するΔFosBに寄与する可能性のある多くの要因がありますが、うつ病関連の行動は他の地域によってより強く媒介される可能性があるのに対し、NAcシェルは中毒関連の行動に対してより支配的である可能性があります。 現在の所見は、以下の研究と対立している マウス NAcでのΔFosBの過剰発現（シェルとコアを確実に区別できない場合）は、いくつかの行動アッセイで堅牢な抗うつ薬のような効果をもたらしました（Vialou et al。、 2010). 考えられる理由の1つは、社会的敗北ストレスのような重度のストレス行動モデルに対するΔFosBの効果が見やすいことです。 現在の過剰発現研究では、重度のストレッサーが存在しない場合のうつ病様行動が調査されました。

この研究全体で一貫して、ΔFosBの高い基礎レベル（例えば、濃縮、繰り返しストレスまたはコカインから）は、その後のΔFosBのより弱い誘導と相関した。 これは天井効果を表している可能性があり、タンパク質の基礎レベルの上昇に加えてさらに誘導することはできません。 ΔFosBの蓄積レベルがフィードバックして、ストレス後のΔFosBmRNAのさらなる誘導または負帰還ループとしてのコカインを阻害する可能性もあります。 たとえば、 ECラットはΔFosBのレベルが高く、ストレスまたはコカイン後にΔFosBの減弱した誘導を示しました。 これは、ΔFosBタンパク質レベルとそのmRNA誘導の間の負の相関を強調しています。 蓄積されたΔFosBの負のフィードバックは、ICラットでの繰り返しストレスによるΔFosBの誘導の減衰を説明します。

明確にするために、真の剥奪で育った子どもはほとんどいないため、環境強化パラダイムが直接的な翻訳関連性を持っていると主張することはありません（社会経済的剥奪は環境剥奪と同等ではないことに注意してください）。 このパラダイムの有用性は、中毒やうつ病の保護行動表現型を生成する非薬物、非外科的、非遺伝的操作であり、分子メカニズムを特定するための基礎科学ツールとして研究室制御環境で活用できることです。精神疾患に対する根本的な回復力。 先行研究では、行動表現型が詳細に説明されています（Bowling et al。、 1993; ボウリングとバルド、 1994; バルドら、 1995; Greenら、 2002, 2003; エル・ラバスら、 2009）および最近の研究（Solinas et al。、 2009; Greenら、 2010; ロボら、 2013現在の研究とともに、これらの行動表現型の根底にある転写メカニズムに関する手がかりを提供しています。 保護表現型を生成する下流の転写標的遺伝子/タンパク質は現在調査中です（ファンら、 2013a,b; Lichti et al。、 2014).

環境の濃縮の概念化は、濃縮はローエンドでの分離とハイエンドでの完全な濃縮の連続体であるということです。 「この場合の「完全な」濃縮とは、被験者が同種との目新しい、脅迫的でない社会的接触にさらされ、運動のための空間と物体が許可される環境として定義されます。 Tこれらの3つの要因はすべて「エンリッチメント」の複合条件を表します。これらはそれぞれ報われ、ドーパミンをNAcに放出するため、共通の神経生物学的回路を活性化するからです。 （ルイロット他、 1986; CalcagnettiとSchechter、 1992; クラウダーとハット、 1992; Rebec et al。、 1997; ベビンズら、 2002）。 この概念化では、隔離は操作の欠如を表すため、コントロールグループと見なされます（つまり、濃縮; Crofton et al。、in review）。 ただし、他の概念化も可能です。 1つの代替概念化では、連続体は同じですが、隔離グループは実験グループであり、強化グループはコントロールです。 私このモデルでは、被験者の通常の濃縮を奪います is 実際の操作。 Iこの場合、濃縮は保護的であると言う代わりに、隔離は感受性をもたらすと言うでしょう。 3番目の概念化では、連続性はなく、濃縮と分離は根本的に異なる2つの操作であると仮定しています。 この観点では、濃縮と分離を分離し、両方をペアハウスコントロールと比較する必要があります。 濃縮の性質に関する普遍的なコンセンサスの欠如は、パラダイムの制限を表しますが、将来の研究の方向性を提供します。 とにかく、これらの実験の結果は、その後の解釈に関係なく確固たるものです。

環境と生活の経験は、多くの精神疾患の発達と発現に強い影響を及ぼします。 環境保護の保護中毒とうつ病の表現型のメカニズムを理解することは、精神障害の研究における根本的な問題、すなわち、精神疾患に対する感受性または回復力への環境の寄与に対処します。 この研究は、依存症に関連する行動の調節におけるΔFosBの重要性を強調しています。 将来の研究では、ΔFosBの作用と特定の標的遺伝子に対するその活性化および阻害効果を、環境強化モデル内でさらに調査する必要があります。

資金と開示

ヤファン・チャン、なし; エリザベスJ.クロフトン、なし。 ディンゲ・リー、なし; メアリーケイロボ、なし; Xiuzhen Fan、なし; エリック・J・ネスラー R37DA007359; トーマス・A・グリーン、 DA029091.

利益相反の声明

著者らは、潜在的な利益相反として解釈される可能性がある商業的または金銭的関係がない状態で研究が行われたと宣言しています。

謝辞

これらの実験は、薬物乱用に関する国立研究所、DA029091およびR37DA007359からの助成金によって資金提供されました。 薬物乱用の国立研究所によって提供されるコカイン。

参考文献

  1. Akdeniz C.、Tost H.、Meyer-Lindenberg A.（2014）。 統合失調症の社会的環境リスクの神経生物学：進化する研究分野。 Soc。 精神医学 エピデミオール。 49、507–517 10.1007 / s00127-014-0858-4 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  2. アリバイIN、グリーンTA、ポタシキンJA、ネスラーEJ（2007）。 fosBおよびDeltafosB mRNA発現の調節：in vivoおよびin vitroの研究。 脳の解像度。 1143、22–33 10.1016 / j.brainres.2007.01.069 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  3. バルドMT、ボウリングSL、ロウレットJK、マンダーシャイトP.、バクストンST、ドスキンLP（1995）。 環境の強化は、アンフェタミンによって誘発される運動感作を減弱するが、in vitroドーパミン放出は減弱しない。 薬局。 生化学。 行動。 51、397–405 10.1016 / 0091-3057（94）00413-d [PubMedの] [クロスリファレンス]
  4. Bevins RA、Besheer J.、Palmatier MI、Jensen HC、Pickett KS、Eurek S.（2002）。 新規オブジェクトの場所の条件付け：新規性報酬の発現における行動およびドーパミン作動性プロセス。 行動。 脳の解像度。 129、41–50 10.1016 / s0166-4328（01）00326-6 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  5. ボウリングSL、バルドーMT（1994）。 豊かで、社会的で隔離された飼育ラットにおけるアンフェタミンの運動および報酬効果。 薬局。 生化学。 行動。 48、459–464 10.1016 / 0091-3057（94）90553-3 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  6. ボウリングSL、ローレットJK、バルドMT（1993）。 アンフェタミン刺激運動活動、ドーパミン合成およびドーパミン放出に対する環境強化の効果。 神経薬理学32、885–893 10.1016 / 0028-3908（93）90144-r [PubMedの] [クロスリファレンス]
  7. Calcagnetti DJ、Schechter MD（1992）。 場所の条件付けは、幼若ラットの社会的相互作用のやりがいのある側面を明らかにします。 生理。 行動。 51、667–672 10.1016 / 0031-9384（92）90101-7 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  8. Chen J.、Nye HE、Kelz MB、Hiroi N.、Nakabeppu Y.、Hope BTなど （1995）。 電気けいれん発作およびコカイン治療によるデルタFosBおよびFosB様タンパク質の調節。 Mol。 薬局。 48、880–889 [PubMedの]
  9. Colby CR、Whisler K.、Steffen C.、Nestler EJ、Self DW（2003）。 線条体細胞型固有のDeltaFosBの過剰発現は、コカインのインセンティブを高めます。 J. Neurosci。 23、2488–2493 [PubMedの]
  10. クラウダーWF、Hutto CW（1992）。 2つの非薬物強化剤を使用して調べたオペラント場所の条件付け対策。 薬局。 生化学。 行動。 41、817–824 10.1016 / 0091-3057（92）90233-6 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  11. Elisei S.、Sciarma T.、Verdolini N.、Anastasi S.（2013）。 回復力と抑うつ障害。 精神科医。 ダナブ。 25（Suppl。2）、S263–S267 [PubMedの]
  12. El Rawas R.、Thiriet N.、Lardeux V.、Jaber M.、Solinas M.（2009）。 環境強化は、ヘロインの活性化効果ではなく、やりがいを減らします。 精神薬理学（ベル）203、561–570 10.1007 / s00213-008-1402-6 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  13. ファンX.、Li D.、Lichti CF、Green TA（2013a）。 環境が豊富で隔離されたラットの急性心理的ストレスに反応した側坐核の動的プロテオミクス。 PLoS One 8：e73689 10.1371 / journal.pone.0073689 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  14. ファンX.、Li D.、Zhang Y.、Green TA（2013b）。 急性ストレスに応答した環境的に富化され単離されたラットにおける側坐核の異なるホスホプロテオーム調節 PLoS One 8：e79893 10.1371 / journal.pone.0079893 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  15. Green TA、Alibhai IN、Hommel JD、Dileone RJ、Kumar A.、Theobald DEなど （2006）。 ストレスまたはアンフェタミンによる側坐核の誘導性cAMP初期リプレッサー発現の誘導は、感情刺激に対する行動反応を増加させます。 J. Neurosci。 26、8235–8242 10.1523 / jneurosci.0880-06.2006 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  16. Green TA、Alibhai IN、Roybal CN、Winstanley CA、Theobald DE、Birnbaum SGなど （2010）。 環境の強化は、側坐核における低環状アデノシン一リン酸応答要素結合（CREB）活性によって媒介される行動表現型を生成します。 バイオ 精神医学67、28–35 10.1016 / j.biopsych.2009.06.022 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  17. Green TA、Alibhai IN、Unterberg S.、Neve RL、Ghose S.、Tamminga CAなど （2008）。 側坐核における活性化転写因子（ATF）ATF2、ATF3およびATF4の誘導と感情的行動の調節。 J. Neurosci。 28、2025–2032 10.1523 / jneurosci.5273-07.2008 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  18. Green TA、Cain ME、Thompson M.、Bardo MT（2003）。 環境の強化は、ラットのニコチン誘発性多動を減少させます。 精神薬理学（ベル）170、235–241 10.1007 / s00213-003-1538-3 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  19. グリーンTA、ゲールケBJ、バルドMT（2002）。 環境の強化は、ラットにおけるアンフェタミンの静脈内自己投与を減少させます：固定および進行比のスケジュールに対する用量反応機能。 精神薬理学（ベル）162、373–378 10.1007 / s00213-002-1134-y [PubMedの] [クロスリファレンス]
  20. Grueter BA、ロビソンAJ、Neve RL、Nestler EJ、Malenka RC（2013）。 ΔFosBは、側坐核の直接および間接経路機能を特異的に調節します。 手続き ナトル Acad。 科学 USA 110、1923–1928 10.1073 / pnas.1221742110 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  21. Hope B.、Kosofsky B.、Hyman SE、Nestler EJ（1992）。 慢性コカインによるラット側座核の即時初期遺伝子発現とAP-1結合の調節。 手続き ナトル Acad。 科学 USA 89、5764–5768 10.1073 / pnas.89.13.5764 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  22. ホープBT、ナイHE、ケルツMB、セルフDW、イアダロラMJ、中別府Y.、他 （1994）。 長期コカインおよび他の慢性治療による脳内の改変されたFos様タンパク質で構成される長期持続AP-1複合体の誘導。 Neuron 13、1235–1244 10.1016 / 0896-6273（94）90061-2 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  23. Jha S.、Dong B.、Sakata K.（2011）。 強化された環境治療は、うつ病のような行動を逆転させ、プロモーターIVを介してその発現を欠くマウスの海馬神経新生と脳由来神経栄養因子のタンパク質レベルの低下を回復します。 翻訳 精神医学1：e40 10.1038 / tp.2011.33 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  24. 加藤T.、岩本K.（2014）。 ヒトの脳における包括的なDNAメチル化およびヒドロキシメチル化分析と、精神障害におけるその意味。 神経薬理学80、133–139 10.1016 / j.neuropharm.2013.12.019 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  25. Kelz MB、Chen J.、Carlezon WA、Whisler K.、Gilden L.、Beckmann AMなど （1999）。 脳における転写因子deltaFosBの発現は、コカインに対する感受性を制御します。 Nature 401、272–276 10.1038 / 45790 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  26. ケルツMB、ネスラーEJ（2000）。 deltaFosB：長期的な神経可塑性の基礎となる分子スイッチ。 Curr。 意見。 ニューロン。 13、715–720 10.1097 / 00019052-200012000-00017 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  27. Koob GF、Sanna PP、Bloom FE（1998）。 中毒の神経科学。 Neuron 21、467–476 [PubMedの]
  28. Larson EB、Graham DL、Arzaga RR、Buzin N.、Webb J.、Green TAなど （2011）。 側坐核シェルにおけるCREBの過剰発現は、自己投与ラットのコカイン強化を増加させます。 J. Neurosci。 31、16447–16457 10.1523 / JNEUROSCI.3070-11.2011 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  29. Laviola G.、Hannan AJ、MacrìS.、Solinas M.、Jaber M.（2008）。 神経変性疾患および精神障害の動物モデルに対する環境の強化の影響。 ニューロバイオオール。 Dis。 31、159–168 10.1016 / j.nbd.2008.05.001 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  30. Lichti CF、Fan X.、English RD、Zhang Y.、Li D.、Kong F.、他 （2014）。 環境の強化はタンパク質発現とラット側坐核のコカインへのプロテオーム応答を変更します。 前面。 行動。 神経科学。 8：246 10.3389 / fnbeh.2014.00246 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  31. Lobo MK、Zaman S.、Damez-Werno DM、Koo JW、Bagot RC、Dinieri JAなど （2013）。 慢性の薬理学的、感情的および光遺伝学的刺激に反応した線条体中型有棘ニューロンのサブタイプにおけるΔFosB誘導。 J. Neurosci。 33、18381–18395 10.1523 / JNEUROSCI.1875-13.2013 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  32. Louilot A.、Le Moal M.、Simon H.（1986）。 異なる行動状況に応じた側坐核のドーパミン作動性ニューロンの異なる反応性。 自由に動くラットの生体内ボルタンメトリー研究。 脳の解像度。 397、395–400 10.1016 / 0006-8993（86）90646-3 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  33. McBride WJ、Kimpel MW、Mcclintick JN、Ding ZM、Edenberg HJ、Liang T.、他 （2014）。 思春期のアルコール嗜好（P）ラットによる過食症様アルコール飲酒後の扁桃体内の遺伝子発現の変化。 薬局。 生化学。 行動。 117、52–60 10.1016 / j.pbb.2013.12.009 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  34. Mlynarik M.、Johansson BB、Jezova D.（2004）。 豊かな環境は、ラット海馬における免疫チャレンジとグルタミン酸受容体遺伝子発現に対する副腎皮質反応に影響します。 アン。 NY Acad。 科学 1018、273–280 10.1196 / annals.1296.032 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  35. ネスラーEJ（2001）。 中毒の分子神経生物学。 あ。 J.アディクト。 10、201–217 10.1080 / 105504901750532094 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  36. ネスラーEJ（2008）。 レビュー。 中毒の転写メカニズム：DeltaFosBの役割。 フィロス。 トランス R. Soc。 ロンド。 B Biol。 科学 363、3245–3255 10.1098 / rstb.2008.0067 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  37. Nestler EJ、Barrot M.、Self DW（2001）。 DeltaFosB：中毒のための持続的な分子スイッチ。 手続き ナトル Acad。 科学 USA 98、11042–11046 10.1073 / pnas.191352698 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  38. Perrotti LI、Hadeishi Y.、Ulery PG、Barrot M.、Monteggia L.、Duman RSなど （2004）。 慢性ストレス後の報酬関連脳構造におけるdeltaFosBの誘導。 J. Neurosci。 24、10594–10602 10.1523 / jneurosci.2542-04.2004 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  39. ペロッティLI、ウィーバーRR、ロビソンB.、レンタルW.、メイズI.、ヤズダニS.、他 （2008）。 乱用薬物による脳内のDeltaFosB誘導の明確なパターン。 シナプス62、358–369 10.1002 / syn.20500 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  40. 投手株式会社、Vialou V.、Nestler EJ、Laviolette SR、Lehman MN、Coolen LM（2013）。 自然および薬物の報酬は、ΔFosBを主要なメディエーターとして、一般的な神経可塑性メカニズムに作用します。 J. Neurosci。 33、3434–3442 10.1523 / jneurosci.4881-12.2013 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  41. Rebec GV、Chrissensen JR、Guerra C.、Bardo MT（1997）。 自由選択の新規性の間の側坐核におけるリアルタイムドーパミン流出の地域的および時間的差異 脳の解像度。 776、61–67 10.1016 / s0006-8993（97）01004-4 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  42. ロビソンAJ、ヴィアロウV.、マゼイロビソンM.、フェンJ.、クールリッチS.、コリンズM. （2013）。 慢性コカインに対する行動的および構造的反応には、側坐核の殻にΔFosBおよびカルシウム/カルモジュリン依存性プロテインキナーゼIIが関与するフィードフォワードループが必要です。 J. Neurosci。 33、4295–4307 10.1523 / jneurosci.5192-12.2013 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  43. Smith JK、Neill JC、Costall B.（1997）。 離乳後の住宅条件は、コカインとd-アンフェタミンの行動への影響に影響します。 精神薬理学（ベル）131、23–33 10.1007 / s002130050261 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  44. Solinas M.、Chauvet C.、Thiriet N.、El Rawas R.、Jaber M.（2008）。 環境強化によるコカイン中毒の逆転。 手続き ナトル Acad。 科学 USA 105、17145–17150 10.1073 / pnas.0806889105 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  45. Solinas M.、Thiriet N.、El Rawas R.、Lardeux V.、Jaber M.（2009）。 人生の初期段階での環境の強化は、コカインの行動的、神経化学的、分子的影響を減らします。 神経精神薬理学34、1102–1111 10.1038 / npp.2008.51 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  46. 階段DJ、Prendergast MA、Bardo MT（2011）。 ラットにおけるアンフェタミン自己投与のコルチコステロンおよびグルココルチコイド受容体遮断における環境誘発性の違い 精神薬理学（ベル）218、293–301 10.1007 / s00213-011-2448-4 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  47. Thiel KJ、Pentkowski NS、Peartree NA、Painter MR、Neisewander JL（2010）。 強制的禁断中に導入された環境生活条件は、コカイン探索行動とFosタンパク質発現を変化させます。 ニューロサイエンス171、1187–1196 10.1016 / j.neuroscience.2010.10.001 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  48. ティエルKJ、サナブリアF.、ペントコウスキNS、ニースワンダーJL（2009）。 環境強化の渇望防止効果。 Int。 J. Neuropsychopharmacol。 12、1151–1156 10.1017 / s1461145709990472 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  49. van Winkel M.、Peeters F.、Van Winkel R.、Kenis G.、Collip D.、Geschwind N.、他 （2014）。 社会的ストレス感受性に対するBDNF遺伝子の変動の影響と、ポジティブな感情の緩衝効果：遺伝子と環境の相互作用の複製と拡大。 ユーロ。 神経精神薬。 24、930–938 10.1016 / j.euroneuro.2014.02.005 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  50. Venebra-MuñozA.、Corona-Morales A.、Santiago-GarcíaJ.、Melgarejo-GutiérrezM.、Caba M.、García-GarcíaF.（2014）。 豊かな環境は、ニコチンの自己投与を減衰させ、ラット前頭前野および側坐核におけるΔFosB発現の変化を誘発します。 Neuroreport 25、694–698 10.1097 / wnr.0000000000000157 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  51. Vialou V.、ロビソンAJ、ラプラントQC、コビントンHE、ディーツDM、大西YNなど （2010）。 脳の報酬回路のDeltaFosBは、ストレスと抗うつ反応に対する回復力を仲介します。 Nat。 神経科学。 13、745–752 10.1038 / nn.2551 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  52. Wallace DL、Vialou V.、Rios L.、Carle-Florence TL、Chakravarty S.、Kumar A.、他 （2008）。 自然な報酬関連行動に対する側坐核のDeltaFosBの影響。 J. Neurosci。 28、10272–10277 10.1523 / jneurosci.1531-08.2008 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  53. Wang Y.、Cesena TI、Ohnishi Y.、Burger-Caplan R.、Lam V.、Kirchhoff PDなど （2012）。 小分子スクリーニングは、転写因子ΔFosBの調節因子を特定します。 ACS Chem。 神経科学。 3、546–556 10.1021 / cn3000235 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  54. Werme M.、Messer C.、Olson L.、Gilden L.、Thoren P.、Nestler EJ、他 （2002）。 Delta FosBは、車輪の走行を調整します。 J. Neurosci。 22、8133–8138 [PubMedの]
  55. Winstanley CA、Bachtell RK、Theobald DE、Laali S.、Green TA、Kumar A.、他 （2009a）。 コカインの自己投与からの離脱中の衝動性の増加：眼窩前頭皮質におけるDeltaFosBの役割。 セレブ。 Cortex 19、435–444 10.1093 / cercor / bhn094 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  56. Winstanley CA、Green TA、Theobald DE、Renthal W.、LaPlant Q.、DiLeone RJなど （2009b）。 眼窩前頭皮質におけるDeltaFosB誘導は、コカインによって引き起こされる認知機能障害を軽減するにもかかわらず、運動感作を増強します。 薬局。 生化学。 行動。 93、278–284 10.1016 / j.pbb.2008.12.007 [PMCフリーの記事] [PubMedの] [クロスリファレンス]
  57. Winstanley CA、LaPlant Q.、Theobald DE、Green TA、Bachtell RK、Perrotti LIなど （2007）。 眼窩前頭皮質におけるDeltaFosB誘導は、コカイン誘発性認知機能障害に対する耐性を媒介します。 J. Neurosci。 27、10497–10507 10.1523 / jneurosci.2566-07.2007 [PubMedの] [クロスリファレンス]
  • ワイズRA（1998）。 脳の報酬経路の薬物活性化。 薬物アルコール依存。 51、13–22 10.1016 / s0376-8716（98）00063-5 [PubMedの] [クロスリファレンス]