CRF-receptoren in de nucleus accumbens moduleren partnervoorkeur in prairiewolken (2007)

Horm Behav. Auteur manuscript; beschikbaar in PMC Dec 10, 2007.

Gepubliceerd in definitief bewerkte vorm als:

PMCID: PMC2128037

NIHMSID: NIHMS22254

De definitieve bewerkte versie van dit artikel is beschikbaar op Horm Behav

Zie andere artikelen in PMC dat citeren het gepubliceerde artikel.

Ga naar:

Abstract

Recent bewijs suggereert een rol voor de corticotropine-releasing factor (CRF) in de regulatie van de paarbinding in prairie woelmuizen. We hebben eerder aangetoond dat monogame en niet-monogame wespen hebben dramatisch verschillende distributies van CRF receptor type 1 (CRF1) en CRF-receptortype 2 (CRF2) in de hersenen en die CRF1 en CRF2 receptor dichtheden in de nucleus accumbens (NAcc) zijn gecorreleerd met sociale organisatie. Monogamous prairie en pine voles hebben significant lagere niveaus van CRN-receptortype 1 (CRF1), en significant hogere niveaus van type 2 (CRF2) binding, in NAcc dan niet-monogame weide en bergmuizen. Hier rapporteren we dat micro-injecties van CRF direct in de NAcc de vorming van partnervoorkeuren in mannelijke weidevliegen versnellen. Controle-injecties van CSF in NAcc en CRF in caudate-putamen hebben de voorkeur van de partner niet bevorderd. Evenzo bevorderden CRF-injecties in NAcc van niet-monogame weidewormen de partnervoorkeur niet. In prairiewolven werd dit CRF-facilitatie-effect geblokkeerd door co-injectie van CRF1 of CRF2 receptorantagonisten in NAcc. Immunocytochemische kleuring voor CRF en Urocortin-1 (Ucn-1), twee endogene liganden voor CRF1 of CRF2 receptoren in de hersenen onthulden dat CRF, maar niet Ucn-1, immuunreactieve vezels aanwezig waren in NAcc. Dit ondersteunt de hypothese dat lokale CRF-afgifte in NAcc CRF zou kunnen activeren1 of CRF2 receptoren in de regio. Samengevat onthullen onze resultaten een nieuwe rol voor accumulatieve CRF-systemen in sociaal gedrag.

sleutelwoorden: nucleus accumbens, attachment, CRF1, CRF2, corticotropin-releasing factor, corticotrophin-releasing hormone, vole, neuropeptide receptors, pair bond, sociaal gedrag, monogamie, soortverschillen

Het corticotropine-afgevende factor (CRF) -systeem is betrokken bij de neurobiologie die ten grondslag ligt aan stress en angst, maar er is veel minder bekend over zijn rol in sociaal gedrag. Microtine knaagdieren vertonen verschillende sociale organisaties en bieden dus een uitstekende vergelijkende benadering in de studie van de neurobiologie van sociaal gedrag (Young en Wang, 2004). Prairie (Microtus ochrogaster) en dennenwolven (Microtus pinetorum) zijn monogaam; volwassen partners vormen langdurige selectieve paarbanden in het veld en in het laboratorium (Getz, Carter en Gavish, 1981; Salo, Shapiro en Dewsbury, 1993). Daarentegen, nauw verwante weide (Microtus pennsylvanicus) en bergmuizen (Microtus montanus) zijn promiscue en solitaire (Gruder-Adams en Getz, 1985; Shapiro en Dewsbury, 1990). Uit eerder onderzoek is gebleken dat de hersenverdeling van neuropeptidereceptoren voor oxytocine en vasopressine verantwoordelijk lijkt te zijn voor de soortverschillen in sociale organisatie (Insel en Shapiro, 1992; Insel, Wang en Ferris, 1994; Lim, Wang, Olazabal, Ren, Terwilliger en Young, 2004b). Meer recent bewijs suggereert echter dat een ander neuropeptidesysteem, CRF, ook de binding van paren in prairiewolven lijkt te moduleren (DeVries, Guptaa, Cardillo, Cho en Carter, 2002).

Er zijn relatief weinig studies die de rol van stresshormonen in sociaal gedrag onderzoeken. Eén studie toonde aan dat toediening van exogeen corticosteron aan mannelijke prairiewolmonden de vorming van paarbindingen met een nieuwe vrouw (DeVries, DeVries, Taymans en Carter, 1996). Een daaropvolgende studie wees uit dat CRF intracerebroventriculair (icv) de partnervoorkeur in mannelijke prairiewolmelen vergemakkelijkte, zelfs bij extreem lage doses die de locomotorische activiteit of angstachtig gedrag niet lijken te beïnvloeden (DeVries et al., 2002). Verder werd partnervoorkeur geblokkeerd door icv-toediening van alfa-helix CRF dat niet-selectief CRF-receptoren in de hersenen blokkeert (DeVries et al., 2002). Deze gegevens suggereren dat CRF een rol kan spelen bij de vorming van parenbindingen via angstonafhankelijke mechanismen door de betrokkenheid van centraal werkende hersenreceptoren. Met icv geïnfundeerd CRF zou echter potentieel op elk aantal hersenregio's kunnen werken om de partnervoorkeur te bevorderen, en het is op dit moment onbekend welke hersenregio's specifiek betrokken zijn.

Omdat het CRF-systeem betrokken was bij de regulatie van de vorming van paren, voorspelden we dat neurale circuits voor dit systeem zouden verschillen tussen monogame en niet-monogame soorten. We hebben eerder aangetoond dat, hoewel de verdeling van CRF-mRNA en -peptide sterk geconserveerd zijn tussen de wespen, de verdeling van CRF-receptortypen 1 en 2 (CRF1 en CRF2) dramatisch verschillen in de hersenen van vierhoevigen met verschillende sociale organisaties (Lim, Nair en Young, 2005; Lim, Tsivkovskaia, Bai, Young en Ryabinin, 2006). Receptorbinding bleek te correleren met monogame sociale structuur in verschillende hersenregio's; echter, alleen de nucleus accumbens (NAcc) is consistent gescheiden met zowel monogame maasoorten als beide niet-monogame maasoorten. Monogamous prairie en pine voles hebben significant lagere niveaus van CRN-receptortype 1 (CRF 1), en significant hogere niveaus van type 2 (CRF2) binding, in NAcc dan niet-monogame weide en bergmuizen (Lim et al., 2005).

Gebaseerd op onze neuroanatomische onderzoeken die verschillen in soorten in CRF aantonen1 en CRF2 densiteiten in NAcc, hypothetiseerden we dat CRF-actie in met name NAcc van cruciaal belang was voor monogaam sociaal gedrag bij prairiewolken. Eerst hebben we vastgesteld of CRF rechtstreeks in NAcc geïnjecteerd kan worden om de vorming van partnervoorkeuren na een verkorte samenlevingsperiode met de partner te vergemakkelijken. Vervolgens voerden we het identieke experiment uit in niet-monogame weide woelmuizen. Vervolgens hebben we CRF gemanipuleerd1 en CRF2 in NAcc met behulp van farmacologische antagonisten om hun relatieve bijdragen aan door CRF gefaciliteerde partnervoorkeurvorming te bepalen. Ten slotte laten we bewijs zien voor immunoreactieve kleuring van twee endogene liganden voor CRF1 en CRF2 receptoren in de hersenen, CRF- en Urocortin-1 (Ucn-1), in NAcc in prairiewolken. De resultaten van deze onderzoeken tonen voor de eerste keer aan dat CRF, handelend in het NAcc, sociale hechting kan bevorderen, en bovendien dat zowel CRF1 en CRF2 receptoren zijn betrokken bij dit proces.

METHODEN

vakken

Dieren waren volwassen, seksueel naïef, mannelijke en vrouwelijke prairie (70-100 dagen oud) van een kweekkolonie in het laboratorium aan de Florida State University die oorspronkelijk afkomstig waren van in het veld gevangen woelmuizen in Illinois, VS. Volwassen seksueel naïeve weidewormen waren afkomstig van de kweekkolonie in het laboratorium aan de Emory University. Na spenen op 21-dagen oud waren proefpersonen gehuisvest in paren van hetzelfde geslacht of trio's en water en Purina-konijnvoer ad libitum. Alle kooien werden gehandhaafd op een 14: 10 licht: donker cyclus met de temperatuur op 20 ° C. Gegevens van 87 mannelijke prairie woelmuizen werden opgenomen in de CRF farmacologie-experimenten, samen met gelijke aantallen stimulus vrouwelijke prairie woelmuizen voor de paarbindingsassay. Gegevens van 10 mannelijke weidewormen werden ook gebruikt, samen met gelijke aantallen vrouwelijke weidenwoesjes. Acht prairiewolven werden gebruikt in de CRF-immunocytochemiestudies (n = 4 voor elk geslacht).

CRF faciliteren van partnervoorkeur

Volwassen mannelijke prairiewolven (n = 31) werden bilateraal gecannuleerd in NAcc met behulp van stereotaxische methoden zoals eerder beschreven (Aragona, Liu, Curtis, Stephan en Wang, 2003a; Liu en Wang, 2003). Proefpersonen werden geanesthetiseerd met natriumpentobarbital (2.5 mg per 40 gm lichaamsgewicht), en 26 gauge bilaterale leidcanules (Plastics One, Roanoke, VA) gericht op de NAcc werden stereotaxisch geïmplanteerd (Anterior 1.7 mm, Bilateral ± 1 mm, Ventral -4.0 mm tot bregma). Controle-injecties (n = 6) waren gericht op het caudate-putamen (Anterior 1.7 mm, Bilateral ± 1 mm, Ventral -2.5 mm tot bregma). Na 3-5-dagenherstel ontvingen proefpersonen micro-injecties (200 nl per kant) van ofwel kunstmatige CSF of geneesmiddel opgelost in CSF. Injecties werden uitgevoerd met een 33-naald die 1 mm onder de geleidecanule uitstrekte tot in het doelgebied. De naald was verbonden met een Hamilton-spuit (Hamilton, Reno, NV) via polyethyleen-20-buis, waardoor de oplossing langzaam werd toegediend door een pomp (MasterFlex L / S standaardaandrijving, Model 7016-21) met een snelheid van 200 nl / min, per zijde. Humaan / rat CRF werd verkregen van Sigma (St. Louis, MO).

Dieren werden verdeeld in een van de vier groepen: CSF-controle (n = 7), 0.01 pg CRF in NAcc (n = 9), 0.1 pg CRF in NAcc (n = 15) en 0.1 pg CRF in caudate-putamen (n = 6). Het caudate-putamen (CP) is een hersengebied dat net achter het NAcc ligt en dat ook CRF bevat2 receptoren, en dient dus als een anatomisch controlegebied voor CRF-effecten. Elk dier ontving bilaterale injecties van 200 nl-volume voorafgaand aan een afgekort 6-uur samenwonen met een nieuw vrouwtje. De concentratie van 0.01 pg CRF in 200 nL is 10 nM, terwijl de concentratie van 0.1 pg CRF in 200 nL 100 nM is. De berekende Ki voor CRF1 is 11 nM, terwijl de berekende Ki voor CRF2 is 25 nM relatief ten opzichte van 125I-sauvagine (Primus, Yevich, Baltazar en Gallager, 1997). Samenwonen voor 6-uren zonder consistente paring leidt niet tot partnervoorkeur, zoals aangetoond in eerdere studies (Aragona et al., 2003a; Aragona, Liu, Yu, Curtis, Detwiler, Insel en Wang, 2006). Direct na samenwonen werden de proefpersonen getest op partnervoorkeur.

Het testen van de partnervoorkeur bestond uit het plaatsen van het mannetje in een 3-chambered apparaat waarin de vrouwelijke partner in één kooi werd vastgebonden, en een nieuw wijfje ("vreemdeling") van dezelfde leeftijd en socioseksuele ervaring werd vastgebonden in een tweede kooi, zoals eerder beschreven (Carter, DeVries en Getz, 1995). Elke vrouwelijke stimulus werd gebruikt in twee afzonderlijke partnervoorkeurtests, één keer als partner en weer als vreemdeling van een ander individu, en daarom had elk vrouwtje een gelijkwaardige sociale en seksuele blootstelling tijdens het samenwonen van 20-uren. Proefpersonen mochten vrij door het apparaat dwalen en de tijd doorgebracht in contact met de partner en vreemdeling werd gekwantificeerd in de loop van de 3-urentest.

Locomotorische activiteit werd gemeten tijdens de partnervoorkeurtest om te bepalen of gekozen doses van CRF-behandeling algemene locomotorische activiteit of angstachtig gedrag beïnvloedden, zoals eerder beschreven (Hotta, Shibasaki, Arai en Demura, 1999). Het aantal kooiovergangen door beide tunnels van het partnervoorkeurapparaat werd beoordeeld met behulp van infrarooddetectoren. Er zijn vier infraroodstralen verspreid over de drie kooien van het partnervoorkeurapparaat, met twee stralen die elke tunnel met elkaar verbinden en twee kooien verbinden. Het totale aantal diafragmabewegingen werd voor elk dier opgeteld gedurende de periode van drie uur. Na gedragstesten werden proefpersonen opgeofferd en werden injectieplaatsen histologisch geverifieerd.

Volwassen mannelijke weidevogels (n = 10) werden ook getest op CRF-facilitering van partnervoorkeur. Dieren werden bilateraal gecanuleerd in NAcc zoals hierboven beschreven en willekeurig toegewezen aan één van twee groepen: CSF-controle (n = 4), of CRF 0.1 pg (n = 6). Samenwoon- en partnervoorkeurtesten werden uitgevoerd precies zoals hierboven beschreven voor prairiewolken. Volwassen mannelijke weidevluchten uit onze kolonie vormen meestal geen partnervoorkeuren wanneer ze samenwonen met een vrouw (Lim et al., 2004b).

CRF1- en CRF2-selectieve farmacologie en partnervoorkeur

Volwassen prairiewolven werden bilateraal gecannuleerd in NAcc zoals hierboven beschreven en verdeeld in een van de drie groepen: 0.1 pg CRF (n = 10), 0.1 pg CRF plus 10 pg CRF1 antagonist (CP-154,526) (n = 25) en 0.1 pg CRF plus 10 pg CRF2 antagonist (anti-sauvagine-30) (n = 15). Anti-sauvagine-30 werd verkregen van Sigma (St. Louis, MO), en de CP-154,526 van Michael Owens, Ph.D. (Emory University, Atlanta, GA). De concentratie van 10 pg CRF1 antagonist (CP-154,526) in 200 nL-oplossing is 100 nM, terwijl de concentratie van 10 pg CRF2 antagonist (anti-sauvagine-30) in 200 nL-oplossing is 10 nM. Elk dier ontving bilaterale injecties van 200 nl-volume direct in NAcc voorafgaand aan een afgekort 6-uur samenleven met een nieuw vrouwtje. Onmiddellijk na samenwonen werden proefpersonen getest op partnervoorkeur zoals hierboven beschreven. Na gedragstesten werden proefpersonen opgeofferd en werden injectieplaatsen histologisch geverifieerd. Dieren waarvan de cannulatieplaatsen buiten de NAcc werden geplaatst, werden uitgesloten van gegevensanalyse en werden niet weerspiegeld in het totale aantal gebruikte dieren.

Data-analyse

Gegevens van de partnervoorkeurtest voor elk experiment werden geanalyseerd met behulp van een 2 manier ANOVA waarin stimulus (partner of vreemdeling) en behandeling factoren waren. Daarnaast werden Student's t-tests gebruikt om de tijd in contact met de partner en vreemdeling in elke behandelgroep te vergelijken. Bonferroni correcties voor het significantieniveau werden gemaakt voor elk experiment om het risico van type-I foutrisico als gevolg van meerdere vergelijkingen te minimaliseren. Mannen werden gecategoriseerd als ontwikkelden een partnervoorkeur als ze meer dan twee keer zoveel tijd in contact met de partner doorbrachten dan de vreemdeling.

Gegevens verzameld voor locomotorische activiteit werden opgeteld als het aantal infraroodbundelscheuren voor elk dier en gemiddeld binnen elke behandelingsgroep. De resultaten werden geanalyseerd met behulp van een one-way ANOVA met behandeling als de onafhankelijke factor.

CRF en Urocortin-1 immunohistochemie

Volwassen prairiewolven werden diep geanesthetiseerd tussen de uren van 10: 00 en 14: 00 met isofluraan en geperfundeerd met zoutoplossing gevolgd door 2% paraformaldehyde in 10 mM (pH 7.4) fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS). Ontlede hersenen werden gedurende de nacht gefixeerd in de 2% paraformaldehyde / PBS-oplossing en cryobeschermd in 30% sucrose / PBS. Dertig μm dikke, vrij zwevende coronale secties werden op een cryostaat gesneden en verwerkt voor immunohistochemie volgens standaardprotocollen (Ryabinin, Criado, Henriksen, Bloom en Wilson, 1997; Weitemier, Tsivkovskaia en Ryabinin, 2005) met aanpassingen voor het weefsel van de vole die in eerdere experimenten zijn gemaakt (Lim et al., 2006). Kort gezegd werd de endogene peroxidase-activiteit geblust door 15-minuten incubatie met 0.3% waterstofperoxide. Voor het Urocortin-1-specifieke antilichaam werd de blokkering uitgevoerd door een incubatie van vijf uur met 2% Bovine Serum Albumine, 0.1% heparine, 0.01% Triton X-100 in PBS. Voor het CRF-specifieke antilichaam werd het blokkeren uitgevoerd door een incubatie van vijf uur met 4.5% geitenserum, 0.3% Triton X-100 in PBS. De primaire antilichamen van konijnen die Urocortin-1 herkennen (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) werden gebruikt in 1: 5,000. De primaire antilichamen die CRF herkennen (Peninsula Laboratories, San Carlos, CA) werden gebruikt in 1-verdunning: 15,000. Gebiotynyleerde anti-konijn secundaire antilichamen (Vector Laboratory Inc., Burlingame, CA) werden gebruikt om de primaire antilichamen te detecteren. Detectie van de secundaire antilichamen werd gemaakt met behulp van Vectastain ABC-kit (Vector), en enzymatische ontwikkeling werd uitgevoerd met de Metal Enhanced DAB-kit (Pierce, Rockford, IL, VS). De specificiteit van immunokleuring werd bepaald door een volledig gebrek aan immunoreactiviteit in gebieden waarvan niet bekend is dat ze CRF of Urocortin-1 tot expressie brengen. Bovendien werden eerder uitgevoerde preabsorptie-experimenten voor deze antilichamen uitgevoerd (Bachtell, Weitemier, Galvan-Rosas, Tsivkovskaia, Risinger, Phillips, Grahame en Ryabinin, 2003).

Kwalitatieve beeldanalyse werd uitgevoerd met behulp van een systeem bestaande uit een Olympus BX40-microscoop en een digitale videocamera met hoge resolutie (Olympus Qcolor3) gekoppeld aan een Macintosh-pc met OS-X. Beelden uit een enkele sectie die het best bij dieren past, werden voor elk hersengebied digitaal verzameld met dezelfde lichtintensiteit. Omdat geen immunopositieve kleuring werd waargenomen in cellichamen in NAcc, werd het aantal immunoreactieve neuronen niet kwantitatief geteld.

RESULTATEN

Farmacologische manipulatie van CRF-receptoren in NAcc

Eerder was al aangetoond dat infusie van CRF icv de voorkeur van de partner in prairieheersmuizen (DeVries et al., 2002). Gebaseerd op onze neuroanatomische gegevens die verschillen in soorten in CRF aantonen1 en CRF2 in NAcc stelden we de hypothese op dat de NAcc de actielocatie was voor de CRF-facilitering van partnervoorkeur. De eerdere studie toonde aan dat dosisafhankelijke toediening van CRF aan ijsvoedingspatiënten na een verkorte samenwoning met een vrouw (DeVries et al., 2002). Op basis van deze studie hebben we CRF-doses ontworpen voor plaatsspecifieke injecties in NAcc. De doses die we gebruikten, 0.1 pg en 0.01 pg CRF opgelost in 200 nL isotone oplossing (of 100 nM en 10 nM, respectievelijk), lagen ruim onder de minimum effectieve icv-doses van 0.1 ng en 1 ng CRF opgelost in 1 μL (of 210 nM en 2.1 μM, respectievelijk) (DeVries et al., 2002). Hoewel is aangetoond dat CRF bij voorkeur aan CRF bindt1, het bindt ook aan CRF2 met aanzienlijke affiniteit (K.i gelijk aan 11 en 25, respectievelijk) (Primus et al., 1997).

Analyse van de totale dataset met behulp van een 2-weg ANOVA onthulde een significant hoofdeffect van stimulusdier (F (1,66) = 6.77, p <0.05), maar er werden geen andere hoofdeffecten of interacties gedetecteerd. Om te bepalen welke groepen bij voorkeur tijd doorbrachten in contact met de partners boven de vreemden, werden Student's t-tests uitgevoerd met Bonferroni-correcties van de p-waarde. Controle prairiewoelmuizen met bilaterale injecties van kunstmatige liquor in de NAcc-septumpool, of 0.1 pg CRF in het caudate-putamen, brachten niet significant meer tijd door in contact met de partner dan het vreemde stimulusdier (p> 0.3, Student's t-test , Bonferroni-niveau ingesteld op p <0.01) (Figuur 1A). Prairiewoelmuizen geïnjecteerd met de lagere CRF-dosis, 0.01 pg, hadden de neiging om meer tijd door te brengen in contact met de partner dan de vreemdeling (p> 0.08, Student's t-test, Bonferroni-niveau ingesteld op p <0.01). Daarentegen brachten prairiewoelmuizen die bilaterale injecties kregen van de 10-voudig hogere CRF-dosis, 0.1 pg in de NAcc-septumpool, significant meer tijd door in contact met de partner dan met de vreemdeling (p <0.01, Student's t-test, Bonferroni-niveau ingesteld bij p <0.01) (Figuur 1A). Bovendien, terwijl alleen 6 van de 13-controledieren een partnervoorkeur vertoonden, gedefinieerd als twee keer zoveel tijd besteden in contact met de partner vergeleken met de vreemdeling, toonde 12 van de 15-dieren die 0.1 pg van CRF ontvingen een partnervoorkeur (Figuur 1B). De 3-dieren die geen partnervoorkeur vertoonden, hadden een sterk onbekende voorkeur, wat waarschijnlijk heeft bijgedragen aan het ontbreken van een hoofdeffect van behandeling of een interactie-effect in de 2-way ANOVA. Hoewel CRF-infusies in de NAcc de tijd in contact met de partner ten opzichte van de vreemdeling aanzienlijk hebben verlengd, resulteerde dit niet in een algemene toename van de contacttijd met de partner.

Figuur 1 

Bilaterale micro-injecties van CRF in NAcc vergemakkelijken de voorkeur van de partner in mannelijke weidevliegen. (A) Controledieren die kunstmatige CSF in de NAcc of 0.1 pg CRF in het caudate-putamen (CP) kregen, gaven de partner niet significant de voorkeur boven ...

Vanwege dramatische soortenverschillen in CRF1 en CRF2 dichtheden in NAcc, veronderstelden we dat CRF-actie binnen NAcc alleen de vorming van partnervoorkeuren in prairiewoelmuizen zou vergemakkelijken, en niet in niet-monogame weidemuizen. Inderdaad, veldmuizen geïnjecteerd met CSF, of de hoge dosis 0.1 pg CRF, brachten niet significant meer tijd door in contact met de partner dan de vreemdeling (p> 0.5, Student's t-test) (Figuur 2).

Figuur 2 

Bilaterale micro-injecties van CRF in NAcc falen in het bevorderen van partnervoorkeur in niet-monogame mannelijke weidevliegen. Volwassen weidevluchtmuizen geïnjecteerd met kunstmatige CSF, of 0.1 pg van CRF in NAcc, bracht niet meer tijd door in contact met de partner dan ...

Gebaseerd op de soortverschillen in CRF1 en CRF2 distributie in NAcc, hypothetiseerden we dat beide CRF1 en CRF2 zou het gedrag van partnervoorkeuren moduleren, misschien in tegengestelde richtingen. Analyse van de totale gegevensset met behulp van een 2-weg ANOVA onthulde een significant hoofdeffect van stimulusdier (F (1,94) = 7.52, p <0.05), maar er werden geen andere hoofdeffecten of interacties gedetecteerd. Prairiewoelmuizen geïnjecteerd met een cocktail van 0.1 pg CRF, plus 10 pg selectieve CRF2 antagonist anti-sauvagine-30, bracht niet significant meer tijd door met de partner of de vreemdeling (p> 0.3, Student's t-test, Bonferroni-niveau ingesteld op p <0.016) (Figuur 3A). Interessant is dat prairie woelmuizen geïnjecteerd met een cocktail van 0.1 pg van CRF, plus 10 pg selectieve CRF1 antagonist CP-154,526-1, vertoonde ook een blokkade van partnervoorkeur (p> 0.5, Student's t-test, Bonferroni-niveau ingesteld op p <0.016) (Figuur 3A). Controle prairiewoelmuizen geïnjecteerd met 0.1, 0.01 pg CRF in de NAcc werden gelijktijdig getest en bleken de oorspronkelijke resultaten van facilitering van partnervoorkeur te repliceren (p <0.016, XNUMX, Student's t-test, Bonferroni-niveau ingesteld op p <XNUMX, XNUMX) (Figuur 3A). Terwijl 8 uit de 10 CRF-behandelde prairiewolven een partnervoorkeur vertoonde, vertoonde alleen 11 van de 25-dieren CRF1 antagonist en 6 van 15-dieren die CRF kregen2 antagonist, gaf een partnervoorkeur weer (Figuur 3B). Onze resultaten suggereren dat de activering van beide CRF1 en CRF2 receptoren in NAcc zijn noodzakelijk voor CRF-geïnduceerde facilitering van partnervoorkeur in prairieheersmotten.

Figuur 3 

Beide CRF1 en CRF2 receptoren in de NAcc zijn nodig voor door CRF gefaciliteerde vorming van partnervoorkeuren in veldmuizen. (A) Dieren geïnjecteerd met 0.1 pg CRF in NAcc brachten meer tijd door in contact met de partner dan met de vreemdeling (p <0.01, Student's ...

De locomotorische activiteit verschilde niet significant tussen de behandelingsgroepen (F (1,80) = 1.37, p> 0.05, eenrichtings-ANOVA), hoewel de locomotorische activiteit de neiging had lager te zijn bij de dieren die CRF in de NAcc kregen. Resultaten worden weergegeven in Tabel 1. Een representatieve histologische sectie die de canulatieplaats voor de NAcc laat zien, wordt getoond in Figuur 4.

Figuur 4 

Histologische verificatie van plaatsing van de canule. (a) Receptor autoradiogram op de linkerhelft geeft de locatie van CRF weer2 in prairie vole NAcc. (b) Representatieve microfoto van met Nissl gekleurd hersenseel dat de plaatsing van de canule afbeeldt en daarin eindigt ...
Tabel 1 

Locomotorische activiteit vertegenwoordigd door het totale aantal infraroodstraalonderbrekingen of kooikruisingen, gemiddeld binnen elke behandelgroep. Er zijn geen significante verschillen tussen behandelingsgroepen (F = 1.37, p> 0.05, eenrichtings-ANOVA).

CRF- en Ucn-1 immunoreactiviteit in NAcc

Om microfoto's te laten zien waarvan endogene CRF-receptorliganden aanwezig zijn in NAcc, voerden we CRF- en Urocortin-1 (Ucn-1) immunoreactiviteit uit in volwassen volantwavotten. Representatieve hersensecties die zijn verwerkt voor CRF-immunocytochemie zijn weergegeven in Figuur 5. CRF-immuunreactieve vezels werden gezien in NAcc in beide geslachten zonder duidelijke verschillen in verdeling of dichtheid van vezels (Figuur 5b). Ucn-1-vezels werden niet gedetecteerd in NAcc in mannelijke of vrouwelijke prairie-woelmuizen (Figuur 5c). Het is dus mogelijk dat CRF een van de endogene liganden is die fysiologisch CRF zouden kunnen binden1 en CRF2 receptoren in het veld NAcc om de voorkeur van de partner te vergemakkelijken. Van belang is dat CRF aan beide CRF bindt1 en CRF2, met een ongeveer twee- tot tienvoudige affiniteit hogere affiniteit voor CRF1 (Primus et al., 1997). We kunnen echter niet uitsluiten dat andere endogene liganden zoals Urocortin-2 of Urocortin-3 ook kunnen bijdragen aan de neurale controle van de vorming van paarbindingen.

Figuur 5 

CRF en Ucn-1 immunoreactiviteit in veldmuizen. (a) Diagram van rattenatlas dat het gebied van 10x-vergroting van NAcc toont (zie rechthoek) (Paxinos en Watson, 1998). (b) Prairie-woldersectie met CRF-immuunreactieve vezels in NAcc (zie pijlen). (c) Prairie ...

DISCUSSIE

In de vorige studies hebben we verschillen in soorten CRF geïdentificeerd1- en CRF2 expressie die correleerde met de sociale organisatie van vierhoevige soorten. Monogamous prairie en pine voles hadden hogere niveaus van CRF2 in NAcc en lagere niveaus van CRF1 in NAcc, vergeleken met niet-monogame weide- en bergmuisachtigen (Lim et al., 2005). Op basis van deze gegevens, stelden we de hypothese vast dat CRF-actie binnen NAcc van cruciaal belang was voor monogaam sociaal gedrag in prairieheersmotten. In de huidige studie laten we voor het eerst zien dat micro-injecties van CRF direct in NAcc in feite de voorkeur van de partner in mannelijke weidevliegen bevorderen. Twee-weg ANOVA-analyse detecteerde een hoofdeffect van een stimulusdier, dwz er werd in het algemeen meer tijd doorgebracht in contact met de partner dan de vreemdeling, maar geen hoofdeffect van behandeling of interactie werd gedetecteerd. Sterke vreemde voorkeuren bij 3-dieren van de 0.1 pg CRF NAcc-groep verhoogden de variantie, waardoor detectie van een interactie-effect werd voorkomen. Echter, afzonderlijke vergelijkingen van tijd doorgebracht met partner verzen vreemden onthulden significante voorkeuren voor de partner in de 0.1 pg CRF NAcc groep. Dit effect werd gerepliceerd in de antagoniststudie, wat de robuustheid van het effect bevestigt. Deze verschuiving in partnervoorkeuren ging niet gepaard met een statistisch significante toename van de tijd die met de partner werd doorgebracht of met een afname in de tijd doorgebracht met vreemdeling, maar was eerder het resultaat van een algehele verhoogde voorkeur voor de partner ten opzichte van de vreemdeling. Daarentegen heeft CRF geen effect op de partnervoorkeur in niet-monogame weidewolds. Bovendien laten we zien dat dit facilitatie-effect gemoduleerd wordt door de actie van CRF bij zowel CRF1 en CRF2 receptoren. Ten slotte laten we microscopisch bewijs zien dat CRF-immuunreactieve vezels aanwezig zijn in de prairieholm NAcc, wat aangeeft dat CRF een van de endogene liganden zou kunnen zijn die inwerken op CRF1 en CRF2 receptoren in NAcc tijdens vorming van partnervoorkeuren. Samengevat tonen deze gegevens een nieuwe rol aan voor CRF-systemen die binnen NAcc werken in sociaal gedrag.

Onze gegevens die aantonen dat CRF in NAcc de voorkeur van de partner bevordert, ondersteunen onze aanvankelijke hypothese dat accumulerende CRF-systemen betrokken zijn bij de vorming van paarobligaties in veldmuizen. We hadden verder de hypothese opgesteld dat CRF2 receptoren waren in het bijzonder kritisch gezien de overvloed aan CRF2 receptoren in de twee monogame veldmuizen, maar niet de twee niet-monogame veldmuizen (Lim et al., 2005). De resultaten van het weidewolde-experiment ondersteunen deze hypothese, omdat CRF-infusie geen effect heeft op de partnervoorkeur bij een soort die CRF effectief mist2 receptoren in NAcc. Bovendien vonden we dat gelijktijdige toediening van een CRF2-selectieve antagonist blokkeert de voorkeur van de partner in veldmuizen. Deze gegevens onthullen een mogelijk kritische rol voor CRF2 receptoren in de vorming van paarbanden.

We hebben echter ook gevonden dat het gelijktijdig toedienen van een CRF1-selectieve antagonist blokkeerde partnervoorkeur in prairiewoldertjes. Dit resultaat was meer verrassend, gezien CRF1 receptoren worden uitgedrukt in NAcc in zowel niet-monogame als monogame soorten. Alles bij elkaar onderstrepen deze gegevens het belang van zowel receptorsubtypen voor de expressie van partnervoorkeur, en wijzen op de mogelijkheid dat receptorspecificiteit een complex probleem is dat baat kan hebben bij verder onderzoek. Het is mogelijk dat er een dynamisch samenspel is tussen de twee receptor-subtypen in NAcc tijdens het gedrag van het binden van een paar, en het kan interessant zijn om de cellulaire fenotypen van CRF verder te onderzoeken.1- en CRF2-expressie van neuronen, of om te zien of CRF1 en CRF2 receptoren zouden zelfs kunnen colocaliseren naar dezelfde neuronen. Het is ook mogelijk dat andere middelen zoals het CRF-bindende eiwit, dat als een reservoir voor endogene CRF kan werken, mogelijk een rol spelen (Jahn, Eckart, Brauns, Tezval en Spiess, 2002).

De effectieve CRF-doses voor plaatsspecifieke injecties in NAcc die partnervoorkeur mogelijk maakten, resulteerden niet in een significant effect van medicamenteuze behandeling op locomotorische activiteit, wat gewoonlijk wordt geïnterpreteerd als angstachtig gedrag. DeVries en Carter (2002) vonden effectieve CRF-icv-doses voor partnervoorkeur bij respectievelijk 0.1 en 1.0 ng (210 nM en 2.1 μM) en detecteerden geen verschillen in locomotorische activiteit tussen behandelingsgroepen (DeVries et al., 2002). Hun doses waren 1000 tot 10,000 vouw groter en ten minste tweemaal tot twintig maal hoger in concentratie dan de doses die we plaatsspecifiek gebruikten in NAcc (10 nM en 100 nM). Hoewel we in onze studie geen significante verschillen in voortbewegingsactiviteit in behandelingsgroepen ontdekten, was er een lichte trend naar minder cage-kruisingen bij de dieren die CRF alleen in NAcc kregen. Hoewel het mogelijk is dat de CRF subtiele effecten kan uitoefenen op angstachtig gedrag en dus voortbeweging, die op hun beurt van invloed kunnen zijn op de vorming van partnervoorkeuren, geloven we dat de meer aannemelijke verklaring is dat verminderde kooiovergangen in de CRF-alleen groep een bijproduct is van toegenomen partnervoorkeur, dwz tijd doorgebracht in de kooi van de partner alleen. Dit ondersteunt de hypothese dat CRF een nieuwe, aparte rol kan spelen in het reguleren van sociaal gedrag, mogelijk onafhankelijk van HPA-aseffecten op angst.

We tonen ook fotomicrograaf bewijs van CRF-immunoreactiviteit in NAcc in dezelfde regio als CRF2 receptoren in monogame prairiewoldermuizen. Dit suggereert dat CRF een van de endogene liganden kan zijn die werkt op CRF1 en CRF2 receptoren in NAcc. Hoewel is aangetoond dat CRF bij voorkeur aan CRF bindt1, het bindt ook aan CRF2 met aanzienlijke affiniteit (Primus et al., 1997). Ucn-1-immuunreactieve vezels werden niet gezien in NAcc, maar werden waargenomen in andere delen van de hersenen, zoals de Edinger-Westphal-kern (Lim et al., 2006). We konden Urocortin-2 of Urocortin-3-vezels in het brein van de wolven niet in kaart brengen vanwege een gebrek aan specifieke immunokleuring; het zou echter interessant zijn om te bepalen of deze potentiële liganden, die ook CRF binden2 receptoren met hoge affiniteit, zijn ook aanwezig in NAcc samen met CRF2 receptoren.

De ventrale voorhersenen, en in het bijzonder de NAcc, is herhaaldelijk geïdentificeerd als het kritieke hersengebied voor de vorming van paarbindingen in veldmuizen. Gezien de rol van NAcc in de mesolimbische dopamine-beloningsroute, is de hypothese geopperd dat natuurlijke belonings- en versterkingsmechanismen ten grondslag liggen aan de vorming van een paar-binding, zodanig dat de partner selectief wordt geassocieerd met beloning (Aragona et al., 2003a; Lim, Murphy en Young, 2004a). We hebben eerder door middel van farmacologische en genetische manipulaties aangetoond dat ventrale voorhersenen vasopressine V1a-receptoren nodig zijn voor de vorming van mannelijke paren, zelfs wanneer ze tot overexpressie worden gebracht in niet-monogame veldmuizen (Lim et al., 2004b; Lim en Young, 2004). Oxytocinereceptoren in de NAcc zijn noodzakelijk voor partnervoorkeur in vrouwelijke weidewormen (Young, Lim, Gingrich en Insel, 2001). Van accumulerende dopamine D1- en D2-receptoren is ook aangetoond dat ze partnervoorkeurvorming en -onderhoud moduleren bij zowel mannen als vrouwen, en in feite interacteert dopamine met oxytocine tijdens dit gedragsproces (Aragona et al., 2003a; Aragona et al., 2006; Aragona, Liu, Yu, Damron, Perlman en Wang, 2003b; Liu en Wang, 2003). Derhalve draagt ​​de activering van de CRF-receptor waarschijnlijk bij tot een groter circuit dat convergeert in de NAcc om dit complexe sociale gedrag te produceren. Consistent met deze hypothese is er bewijs dat CRF-receptoren in de NAcc de dopamine-afgifte in het striatum kunnen moduleren (Lu, Liu, Huang en Zhang, 2003) en recent voorlopig bewijs dat suggereert dat activering van NAcc-CRF-receptor barpers voor natuurlijke versterking kan stimuleren (Berridge, Pecine en Schulkin, 2004). Een andere studie heeft aangetoond dat CRF2 receptoren in het ventrale tegmentale gebied, die dopaminerge projecties naar NAcc sturen, kunnen op lange termijn potentiëren, een fysiologisch correlaat van gedragsonderwijs en beloningsassociatie (Ungless, Singh, Crowder, Yaka, Ron en Bonci, 2003). Omdat partnervoorkeur wordt gepostuleerd als een vorm van natuurlijk beloningsleren, kunnen CRF-receptoren in NAcc een vergelijkbare rol spelen in onderliggende synaptische versterking tijdens de vorming van paarobligaties in veldmuizen.

Pair bond formation in nature is een complex cognitief proces dat de integratie van veel externe stimuli en interne toestanden vereist. Pair bond formation resulteert uit de synthese van verschillende gedragsprocessen, waaronder sociale herkenning, aanpak en sociale motivatie, en omvat leren en geheugen. Oxytocine en vasopressine zijn volledig betrokken bij de neurale verwerking van sociale stimuli en de vorming van sociale herinneringen (Bielsky, Hu, Szegda, Westphal en Young, 2004; Ferguson, Young, Hearn, Matzuk, Insel en Winslow, 2000). Dopamine kan een rol spelen in de verhoogde motivationele staat die de sociale interactie met de partner stimuleert, en de versterking die nodig is om een ​​partnervoorkeur vast te stellen. CRF kan een mechanisme bieden waarmee de interne stressstatus partnervoorkeur moduleert. CRF-signalering kan ook de langetermijnveranderingen in neurale plasticiteit mogelijk maken tijdens de vorming van paarbanden. Elk neurotransmittersysteem speelt een andere maar cruciale rol in het complexe gedrag van paarbinding en blokkering van een willekeurig systeem zou de vorming van een paarband verstoren.

De rol van CRF in de regulatie van sociaal gedrag is minimaal bestudeerd, ondanks de overvloed aan onderzoeken met betrekking tot CRF voor stress en angstgedrag. Er is sterk bewijs dat CRF2 receptoractivering functioneert om angst en depressie-achtig gedrag bij muizen te verminderen (Bale, Contarino, Smith, Chan, Gold, Sawchenko, Koob, Vale en Lee, 2000; Bale and Vale, 2003). Sociaal gedrag, stress en angst hangen nauw met elkaar samen, vooral in gedrag dat sociale steun of sociaal isolement met zich meebrengt. Prairiemuizenmuizen die paarbanden hebben gevormd, vertonen verhoogde plasma-corticosteronspiegels tijdens sociale scheiding van de partner en reünie met de partner geeft deze niveaus terug naar de uitgangssituatie (Carter, DeVries, Taymans, Roberts, Williams en Getz, 1997). Mannelijke weidewolfmuizen die gedwongen zwemmen ondergaan, een psychologische stressfactor, laten een vergemakkelijking zien van de vorming van paarbanden na een verkort samenlevingsverband met de partner (DeVries et al., 1996). Tenslotte tonen paren gebonden mannen die gescheiden zijn van hun partners meer passieve copingstrategieën in de gedwongen zwemtest dan hun broer of zus gescheiden tegenhangers, en dergelijke gedragsveranderingen gaan gepaard met een toename in CRF mRNA in de NAcc (Bosch, Nair, Neumann en Young, 2005).

Deze gegevens suggereren dat sociaal en stressgedrag een wederkerige relatie hebben, en bovendien spelen dezelfde moleculen die betrokken zijn bij stress en angst, ook een belangrijke rol in sociaal gedrag. Er zijn zelfs aanwijzingen dat de "sociale" neuropeptiden vasopressine en oxytocine stress- en angstgedrag kunnen moduleren (Bielsky et al., 2004; Landgraf, Gerstberger, Montkowski, Probst, Wotjak, Holsboer en Engelmann, 1995; Liebsch, Wotjak, Landgraf en Engelmann, 1996; Mantella, Vollmer, Li en Amico, 2003; Ring, Malberg, Potestio, Ping, Boikess, Luo, Schechter, Rizzo, Rahman en Rosenzweig-Lipson, 2006; Windle, Shanks, Lightman en Ingram, 1997). Dezelfde moleculen die de interne stress-toestand moduleren, kunnen dus bijdragen aan de regulering van sociaal gedrag, zoals de vorming van paren, en dat de moleculen en circuits die zijn ontwikkeld met het oog op het ene gedrag, in feite het andere dynamisch kunnen controleren.

Dankwoord

Bij Emory University willen we Dr. Michael J. Owens bedanken voor het dankbaar aanbieden van de CP-154,526-verbinding. We willen ook Lorra Miller en Meera Modi bedanken voor hun hulp bij het weidewolde-experiment. Tot slot willen we Drs bedanken. A. Courtney DeVries van de Ohio State University en C. Sue Carter van de University of Illinois, Chicago voor hun baanbrekend werk op CRF in prairie-woelmuizen en de correspondentie van Dr. DeVries over de farmacologische experimenten.

Subsidiesteun: dit onderzoek werd ondersteund door NIH verleent MH65050 aan MML, AA13738 aan AER, MH58616 aan ZXW, MH64692 aan LJY, en NSF STC IBN-9876754 en de Yerkes Center Grant RR00165.

voetnoten

Disclaimer uitgever: Dit is een PDF-bestand van een onbewerkt manuscript dat is geaccepteerd voor publicatie. Als service aan onze klanten bieden wij deze vroege versie van het manuscript. Het manuscript zal een copy-editing ondergaan, een typografie en een review van het resulterende bewijs voordat het in zijn definitieve citeervorm wordt gepubliceerd. Houd er rekening mee dat tijdens het productieproces fouten kunnen worden ontdekt die van invloed kunnen zijn op de inhoud en alle wettelijke disclaimers die van toepassing zijn op het tijdschrift.

Referenties

  1. Aragona BJ, Liu Y, Curtis JT, Stephan FK, Wang Z. Een cruciale rol voor dopamine accumbens dopamine bij de vorming van partnerpreferenties in mannelijke weidevliegen. J Neurosci. 2003a; 23 (8) 3483-90. [PubMed]
  2. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Curtis JT, Detwiler JM, Insel TR, Wang Z. Nucleus accumbens dopamine bemiddelt op differentiële wijze de vorming en instandhouding van monogame parenbindingen. Nat Neurosci. 2006, 9 (1) 133-9. [PubMed]
  3. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Damron A, Perlman G, Wang ZX. Tegenover modulatie van sociale hechting door dopamine-receptoractivatie D1- en D2-type in nucleus accumbens-schaal. Horm Behav. 2003b; 44: 37.
  4. Bachtell RK, Weitemier AZ, Galvan-Rosas A, Tsivkovskaia NO, Risinger FO, Phillips TJ, Grahame NJ, Ryabinin AE. Het Edinger-Westphal-laterale septum urocortin pathway en de relatie met alcoholgebruik. J Neurosci. 2003, 23 (6) 2477-87. [PubMed]
  5. Bale TL, Contarino A, Smith GW, Chan R, Gold LH, Sawchenko PE, Koob GF, Vale WW, Lee KF. Muizen die deficiënt zijn voor corticotropine-releasing hormone receptor-2 vertonen angstachtig gedrag en zijn overgevoelig voor stress. Nat Genet. 2000, 24 (4) 410-4. [PubMed]
  6. Bale TL, Vale WW. Verhoogd depressie-achtig gedrag in corticotropine-releasing factor receptor-2-deficiënte muizen: seksueel dichotome responsen. J Neurosci. 2003, 23 (12) 5295-301. [PubMed]
  7. Berridge KK, Pecine S, Schulkin J. Appetitive effect van CRF in accumbens shell op geconditioneerde aanpak voor sucrose-beloning. Society for Neuroscience Abstract Viewer / Wegwijzer Planner. 2004: 437.12.
  8. Bielsky IF, Hu SB, Szegda KL, Westphal H, Young LJ. Ernstige stoornissen in sociale herkenning en vermindering van angstachtig gedrag in vasopressine V1a-receptor knock-out muizen. Neuropsychopharmacology. 2004, 29 (3) 483-93. [PubMed]
  9. Bosch OJ, Nair HP, Neumann ID, Young LJ. Depressief-achtig gedrag na isolatie van een vrouwelijke partner wordt in verband gebracht met veranderde hersen-CRF-mRNA- en HPA-asactiviteit in de mannelijke prairiewolf. Society for Neuroscience Abstract Viewer / Wegwijzer Planner; 2005. (Programnr. 420.4)
  10. Carter CS, DeVries AC, Getz LL. Fysiologische substraten van zoogdiermonogamie: het prairie veldmuismodel. Neurosci Biobehav Rev. 1995; 19 (2): 303-14. [PubMed]
  11. Carter CS, DeVries AC, Taymans SE, Roberts RL, Williams JR, Getz LL. Peptiden, steroïden en paarbinding. Ann NY Acad Sci. 1997, 807: 260-72. [PubMed]
  12. DeVries AC, DeVries MB, Taymans SE, Carter CS. De effecten van stress op sociale voorkeuren zijn seksueel dimorf in de veldmuizen. Proc Natl Acad Sci US A. 1996; 93 (21): 11980-4. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  13. DeVries AC, Guptaa T, Cardillo S, Cho M, Carter CS. Corticotropine-vrijgevende factor induceert sociale voorkeuren in mannelijke weidevliegen. Psychoneuroendocrinology. 2002, 27 (6) 705-14. [PubMed]
  14. Ferguson JN, Young LJ, Hearn EF, Matzuk MM, Insel TR, Winslow JT. Sociaal geheugenverlies bij muizen zonder het oxytocine-gen. Nat Genet. 2000, 25 (3) 284-8. [PubMed]
  15. Getz LL, Carter CS, Gavish L. Het paarsysteem van de veldmuismuis Microtus ochragaster: Veld- en laboratoriumbewijs voor pair-bonding. Gedragsecologie en sociobiologie. 1981, 8: 189-194.
  16. Gruder-Adams S, Getz LL. Vergelijking van het paarsysteem en het gedrag van de vader in Microtus ochragaster en M. pennsylvanicus. Journal of Mammalogy. 1985, 66 (1) 165-167.
  17. Hotta M, Shibasaki T, Arai K, Demura H. Corticotropine-releasing factor receptor type 1 bemiddelt door emotionele stress geïnduceerde remming van voedselinname en gedragsveranderingen bij ratten. Brain Res. 1999, 823 (1-2) 221-5. [PubMed]
  18. Insel TR, Shapiro LE. Oxytocinereceptorverdeling weerspiegelt sociale organisatie in monogame en polygame woelmuizen. Proc Natl Acad Sci US A. 1992; 89 (13): 5981-5. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  19. Insel TR, Wang ZX, Ferris CF. Patronen van distributie van hersenvasopressine-receptor geassocieerd met sociale organisatie in knaagdieren van de knaagdieren. J Neurosci. 1994, 14 (9) 5381-92. [PubMed]
  20. Jahn O, Eckart K, Brauns O, Tezval H, Spiess J. Het bindende eiwit van corticotropine-afgevende factor: ligand-bindende site en subeenheid structuur. Proc Natl Acad Sci US A. 2002; 99 (19): 12055-60. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  21. Landgraf R, Gerstberger R, Montkowski A, Probst JC, Wotjak CT, Holsboer F, Engelmann M. V1 vasopressine receptor antisense oligodeoxynucleotide in septum vermindert vasopressinebinding, sociale onderscheidingsvermogens en angstgerelateerd gedrag bij ratten. J Neurosci. 1995, 15 (6) 4250-8. [PubMed]
  22. Liebsch G, Wotjak CT, Landgraf R, Engelmann M. Septal vasopressine moduleert angstgerelateerd gedrag bij ratten. Neurosci Lett. 1996, 217 (2-3) 101-4. [PubMed]
  23. Lim MM, Murphy AZ, Young LJ. Ventrale striatopallidal oxytocine en vasopressine V1a-receptoren in de monogame prairie-woelmuis (Microtus ochrogaster) J Comp Neurol. 2004a; 468 (4) 555-70. [PubMed]
  24. Lim MM, Nair HP, Young LJ. Soorten en geslachtsverschillen in de hersendistributie van corticotropine-releasing factor receptor subtypen 1 en 2 in monogame en promiscue veldmuisdieren. J Comp Neurol. 2005, 487 (1) 75-92. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  25. Lim MM, Tsivkovskaia NO, Bai Y, Young LJ, Ryabinin AE. Distributie van Corticotropin-Releasing Factor en Urocortin 1 in de Vole Brain. Brain Behav Evol. 2006, 68 (4) 229-240. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  26. Lim MM, Wang Z, Olazabal DE, Ren X, Terwilliger EF, Young LJ. Verbeterde partnervoorkeur in een promiscue soort door de expressie van een enkel gen te manipuleren. Natuur. 2004b; 429 (6993) 754-7. [PubMed]
  27. Lim MM, Young LJ. Vasopressine-afhankelijke neurale circuits die ten grondslag liggen aan de vorming van paarbindingen in de monogame prairiewolf. Neuroscience. 2004, 125 (1) 35-45. [PubMed]
  28. Liu Y, Wang ZX. Nucleus accumbens oxytocine en dopamine werken samen om de vorming van paarlobbigen in vrouwelijke volken te reguleren. Neuroscience. 2003, 121 (3) 537-44. [PubMed]
  29. Lu L, Liu Z, Huang M, Zhang Z. Dopamine-afhankelijke responsen op cocaïne hangen af ​​van corticotropine-afgevende factor-receptorsubtypen. J Neurochem. 2003, 84 (6) 1378-86. [PubMed]
  30. Mantella RC, Vollmer RR, Li X, Amico JA. Vrouwelijke oxytocine-deficiënte muizen vertonen verbeterd angstgerelateerd gedrag. Endocrinology. 2003, 144 (6) 2291-6. [PubMed]
  31. Paxinos G, Watson C. De hersenen van de rat in stereotaxische coördinaten. 4. Academische pers; 1998.
  32. Primus RJ, Yevich E, Baltazar C, Gallager DW. Autoradiografische lokalisatie van CRF1- en CRF2-bindingsplaatsen in hersenen van volwassen ratten. Neuropsychopharmacology. 1997, 17 (5) 308-16. [PubMed]
  33. Ring RH, Malberg JE, Potestio L, Ping J, Boikess S, Luo B, Schechter LE, Rizzo S, Rahman Z, Rosenzweig-Lipson S. Anxiolytisch-achtige activiteit van oxytocine bij mannelijke muizen: gedrags- en autonoom bewijs, therapeutische implicaties. Psychopharmacology (Berl) 2006: 1-8. [PubMed]
  34. Ryabinin AE, Criado JR, Henriksen SJ, Bloom FE, Wilson MC. Differentiële gevoeligheid van c-Fos-expressie in hippocampus en andere hersengebieden tot matige en lage doses alcohol. Mol Psychiatry. 1997, 2 (1) 32-43. [PubMed]
  35. Salo AL, Shapiro LE, Dewsbury DA. Affiliatief gedrag bij verschillende soorten woelmuizen (Microtus) Psychol Rep. 1993; 72 (1): 316-8. [PubMed]
  36. Shapiro LE, Dewsbury DA. Verschillen in affiliatief gedrag, paarbinding en vaginale cytologie bij twee soorten mieren (Microtus ochrogaster en M. montanus) J Comp Psychol. 1990, 104 (3) 268-74. [PubMed]
  37. Ungless MA, Singh V, Crowder TL, Yaka R, Ron D, Bonci A. Corticotropin-releasing factor vereist CRF-bindend eiwit om NMDA-receptoren te stimuleren via CRF-receptor 2 in dopamine-neuronen. Neuron. 2003, 39 (3) 401-7. [PubMed]
  38. Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE. De distributie van Urocortin 1 in muizenhersenen is stamafhankelijk. Neuroscience. 2005, 132 (3) 729-40. [PubMed]
  39. Windle RJ, Shanks N, Lightman SL, Ingram CD. Centrale toediening van oxytocine vermindert stress-geïnduceerde afgifte van corticosteron en angstgedrag bij ratten. Endocrinology. 1997, 138 (7) 2829-34. [PubMed]
  40. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Cellulaire mechanismen van sociale hechting. Horm Behav. 2001, 40 (2) 133-8. [PubMed]
  41. Young LJ, Wang Z. De neurobiologie van pair bonding. Nat Neurosci. 2004, 7 (10) 1048-54. [PubMed]