CRF receptory v nucleus accumbens modulujú preferenciu partnera v prériách voles (2007)

Horm Behav. Autorský rukopis; dostupné v PMC Dec 10, 2007.

Publikované v konečnom upravenom formulári ako:

PMCID: PMC2128037

NIHMSID: NIHMS22254

Konečná upravená verzia tohto článku vydavateľa je k dispozícii na stránke Horm Behav

Pozri ďalšie články v PMC to citát publikovaný článok.

Prejsť na:

abstraktné

Nedávne dôkazy naznačujú úlohu faktora uvoľňujúceho kortikotropín (CRF) pri regulácii párového viazania v prérijných volách. Doteraz sme ukázali, že monogamné a nemonogamné vole druhy majú dramaticky odlišné distribúcie CRF receptora typu 1 (CRF).1) a CRF receptor typu 2 (CRF.)2) v mozgu a CRF1 a CRF2 hustoty receptorov v nucleus accumbens (NAcc) korelujú so sociálnou organizáciou. Monogamné prérie a borovicové šišky majú významne nižšie hladiny CRF receptora typu 1 (CRF)1) a významne vyššie hladiny typu 2 (CRF)2) väzba, v NAcc ako nemonogamné lúky a horské vrcholy. Tu uvádzame, že mikroinjekcie CRF priamo do NAcc urýchľujú tvorbu preferencií partnerov v mužských prériách. Kontrolné injekcie CSF do NAcc, a CRF do caudate-putamen, neuľahčili preferenciu partnera. Podobne, CRF injekcie do NAcc nemonogamických lúčnych hrabošov tiež neuľahčili preferencie partnerov. V prairie voles, tento CRF-uľahčujúci účinok bol blokovaný spoločnou injekciou buď CRF1 alebo CRF2 antagonistov receptora NAcc. Imunocytochemické farbenie pre CRF a urokortín-1 (Ucn-1), dva endogénne ligandy pre CRF1 alebo CRF2 Receptory v mozgu odhalili, že CRF, ale nie Ucn-1, imunoreaktívne vlákna boli prítomné v NAcc. To podporuje hypotézu, že lokálne uvoľňovanie CRF do NAcc môže aktivovať CRF1 alebo CRF2 receptory v regióne. Naše výsledky spoločne odhaľujú novú úlohu akumulovaných systémov CRF v sociálnom správaní.

Kľúčové slová: nucleus accumbens, pripojenie, CRF1, CRF2, faktor uvoľňujúci kortikotropín, hormón uvoľňujúci kortikotropín, vole, receptory neuropeptidov, párové väzby, sociálne správanie, monogamia, druhové rozdiely

Systém faktoru uvoľňujúceho kortikotropín (CRF) je zapojený do neurobiológie, ktorá je základom stresu a úzkosti, ale oveľa menej je známa o jeho úlohe v sociálnom správaní. Microtine hlodavce vykazujú rôzne sociálne organizácie, a tak ponúkajú vynikajúci komparatívny prístup v štúdii neurobiológie sociálneho správania (Young a Wang, 2004). Prairie (Microtus ochrogaster) a borovicové volje (Microtus pinetorum) sú monogamné; dospelí kamaráti tvoria dlhotrvajúce selektívne párové väzby v teréne av laboratóriu (Getz, Carter a Gavish, 1981; Salo, Shapiro a Dewsbury, 1993). Naproti tomu úzko súvisiaca lúka (Microtus pennsylvanicus) a montánnych volejov (Microtus montanus) sú promiskuitné a osamelé (Gruder-Adams a Getz, 1985; Shapiro a Dewsbury, 1990). Minulý výskum ukázal, že distribúcia neuropeptidových receptorov pre oxytocín a vazopresín v mozgu je zodpovedná za druhové rozdiely v sociálnej organizácii (Insel a Shapiro, 1992; Insel, Wang a Ferris, 1994; Lim, Wang, Olazabal, Ren, Terwilliger a Young, 2004b). Avšak novšie dôkazy naznačujú, že sa zdá, že iný neuropeptidový systém, CRF, tiež moduluje párové väzby v prérijných volách (DeVries, Guptaa, Cardillo, Cho a Carter, 2002).

Existuje pomerne málo štúdií skúmajúcich úlohu stresových hormónov v sociálnom správaní. Jedna štúdia zistila, že podávanie exogénneho kortikosterónu mužským prérijným hrám uľahčilo tvorbu párových väzieb s novou samicou (DeVries, DeVries, Taymans a Carter, 1996). Následná štúdia zistila, že CRF podávané intracerebroventrikulárne (icv) uľahčili preferenciu partnera u samčích prérijných voles, dokonca aj pri extrémne nízkych dávkach, ktoré nemali vplyv na lokomotorickú aktivitu alebo správanie podobné úzkosti (DeVries a kol., 2002). Navyše, preferencia partnera bola blokovaná icv podávaním alfa-helikálneho CRF, ktoré neselektívne blokuje CRF receptory v mozgu (DeVries a kol., 2002). Tieto údaje naznačujú, že CRF môže hrať úlohu pri tvorbe párových väzieb prostredníctvom mechanizmov nezávislých od úzkosti prostredníctvom zapojenia centrálne pôsobiacich mozgových receptorov. Avšak CRF podaný infúziou icv by mohol potenciálne pôsobiť na ľubovoľný počet oblastí mozgu, aby sa uľahčila preferencia partnera, a v súčasnosti nie je známe, ktoré oblasti mozgu sú špecificky zahrnuté.

Pretože systém CRF je zapojený do regulácie tvorby párových väzieb, predpovedali sme, že neurónové obvody pre tento systém sa budú líšiť medzi monogamnými a nemonogamickými druhmi. Doteraz sme ukázali, že hoci distribúcia CRF mRNA a peptidu sa javí ako vysoko konzervovaná medzi druhmi vole, distribúcie typov CRF receptorov 1 a 2 (CRF1 a CRF2) sa dramaticky líšia v celom mozgu u štyroch druhov zveri, ktoré vykazujú rôzne sociálne organizácie (Lim, Nair a Young, 2005; Lim, Tsivkovskaia, Bai, Young a Ryabinin, 2006). Zdá sa, že väzba receptora koreluje s monogamnou sociálnou štruktúrou v niekoľkých oblastiach mozgu; avšak len nucleus accumbens (NAcc) konzistentne segregované ako s monogamnými druhmi vole, tak s oboma druhmi monogamných vole. Monogamné prérie a borovicové šišky majú významne nižšie hladiny CRF receptora typu 1 (CRF) 1) a významne vyššie hladiny typu 2 (CRF)2) väzba, v NAcc ako nemonogamné lúky a horské vrcholy (Lim et al., 2005).

Na základe našich neuroanatomických štúdií demonštrujúcich druhové rozdiely v CRF1 a CRF2 hustoty v NAcc, sme predpokladali, že CRF akcia v NAcc, najmä, bol kritický pre monogamné sociálne správanie v prériách voles. Najprv sme určili, či CRF vstrekovaný priamo do NAcc môže uľahčiť vytváranie preferencií partnerov po skrátenom čase spolužitia s partnerom. Ďalej sme vykonali rovnaký experiment na nemonogamických lúkach. Potom sme manipulovali s CRF1 a CRF2 v NAcc s použitím farmakologických antagonistov na stanovenie ich relatívneho príspevku k tvorbe CRF-uľahčenej partnerskej preferencie. Nakoniec sme ukázali dôkazy imunoreaktívneho farbenia dvoch endogénnych ligandov pre CRF1 a CRF2 receptory v mozgu, CRF- a Urocortin-1 (Ucn-1), v NAcc v prairie voles. Výsledky z týchto štúdií po prvýkrát ukazujú, že CRF, pôsobiaci v NAcc, môže podporiť sociálnu priľnavosť a navyše, že obidva CRF1 a CRF2 receptorov.

METÓDY

Predmety

Zvieratá boli dospelé, sexuálne naivné, mužské a ženské prérie (70 – 100 vo veku) z laboratórnej chovnej kolónie na Floridskej štátnej univerzite, ktoré boli pôvodne odvodené z poľných zajatí v Illinois, USA. Dospelé pohlavne naivné lúky boli z laboratórnej chovnej kolónie na Emory University. Po odstavení vo veku 21 sa jedinci umiestnili do párov súrodencov rovnakého pohlavia alebo do trojíc a vody a do krmiva Purina králičieho dobytka poskytli ad libitum. Všetky klietky boli udržiavané na cykle 14: 10 light: dark s teplotou pri 20 ° C. Údaje z 87 samčích prérijných volejov boli zahrnuté do CRF farmakologických experimentov, spolu s rovnakým počtom stimulačných ženských prérijných voles pre test párového párovania. Použili sa aj údaje z 10 samčích lúčnych svalov spolu s rovnakým počtom stimulačných ženských lúčnych hrabochov. V štúdiách CRF imunocytochémie bolo použitých osem prérijných voles (n = 4 pre každé pohlavie).

Uľahčenie preferencie partnerov CRF

Dospelé samce prérií prérie (n = 31) sa bilaterálne kanylovali do NAcc s použitím stereotaxických metód, ako bolo opísané vyššie (Aragona, Liu, Curtis, Stephan a Wang, 2003a; Liu a Wang, 2003). Subjekty boli anestetizované pentobarbitalom sodným (2.5 mg na 40 gm telesnej hmotnosti) a 26 obojstranná vodiaca kanyla (Plastics One, Roanoke, VA) zameraná na NAcc bola implantovaná stereotaxicky (Anterior 1.7 mm, Bilaterálna ± 1 mm, Ventral-4.0 mm do bregma). Kontrolné injekcie (n = 6) boli zamerané na caudate-putamen (Anterior 1.7 mm, Bilaterálny ± 1 mm, Ventral-2.5 mm až bregma). Po zotavení 3-5 dní dostali jedinci mikroinjekcie (200 nl na stranu) umelého CSF ​​alebo liečiva rozpusteného v CSF. Injekcie sa uskutočnili pomocou ihly 33, ktorá predĺžila 1 mm pod vodiacu kanylu do cieľovej oblasti. Ihla bola pripojená k injekčnej striekačke Hamilton (Hamilton, Reno, NV) cez polyetylén-20 trubicu, cez ktorú bol roztok pomaly infundovaný pumpou (štandardná jednotka MasterFlex L / S, model 7016-21) rýchlosťou 200 nl. / min, na stranu. Ľudský / potkaní CRF sa získal od Sigma (St. Louis, MO).

Zvieratá boli rozdelené do jednej zo štyroch skupín: kontrola CSF (n = 7), 0.01 pg CRF do NAcc (n = 9), 0.1 pg CRF do NAcc (n = 15) a 0.1 pg CRF do caudate-putamen (n = 6). Caudate-putamen (CP) je oblasť mozgu, ktorá je dorzálna k NAcc a tiež obsahuje CRF2 receptorov, čím slúži ako anatomická kontrolná oblasť pre CRF účinky. Každé zviera dostalo bilaterálne injekcie objemu 200 nl pred skráteným 6 hodinovým kohabitáciou s novou samicou. Koncentrácia 0.01 pg CRF v 200 nL je 10 nM, zatiaľ čo koncentrácia 0.1 pg CRF v 200 nL je 100 nM. Vypočítaná hodnota Ki pre CRF1 je 11 nM, zatiaľ čo vypočítaná Ki pre CRF2 je 25 nM vzhľadom na 125I-sauvagín (Primus, Yevich, Baltazar a Gallager, 1997). Kohabitácia po dobu 6 hodín bez párenia nespôsobuje uprednostňovanie partnerov, ako bolo preukázané v predchádzajúcich štúdiách (Aragona a kol., 2003a; Aragona, Liu, Yu, Curtis, Detwiler, Insel a Wang, 2006). Ihneď po kohabitácii boli jedinci testovaní na preferencie partnerov.

Test preferencie partnerov spočíval v umiestnení samca do prístroja 3 v komore, v ktorom bola partnerka uviazaná v jednej klietke, a nová žena („cudzinec“) rovnakého veku a sociosexuálnej skúsenosti bola uviazaná v druhej klietke, ako predtým. popísané (Carter, DeVries a Getz, 1995). Každá stimulačná žena sa použila v dvoch oddelených partnerských preferenčných testoch, raz ako partner a opäť ako cudzinec iného subjektu, a preto každá žena mala ekvivalentnú sociálnu a sexuálnu expozíciu počas spolužitia počas hodiny 20. Subjekty sa nechali voľne pohybovať po prístroji a čas strávený v kontakte s partnerom a cudzincom sa kvantifikoval v priebehu 3 hodinového testu.

Lokomotorická aktivita bola meraná počas testu preferencie partnera, aby sa určilo, či vybrané dávky liečby CRF ovplyvnili celkovú lokomotorickú aktivitu alebo správanie podobné úzkosti, ako bolo opísané vyššie (Hotta, Shibasaki, Arai a Demura, 1999). Počet priechodov klietok cez oba tunely partnerského preferenčného prístroja bol hodnotený pomocou infračervených detektorov. Štyri infračervené lúče prechádzajú cez tri klietky partnerského preferenčného prístroja, pričom dva tunely lemujú každý tunel spájajúci dve klietky. Celkový počet prestávok fotožiarenia bol spočítaný pre každé zviera počas trojhodinového obdobia. Po testovaní správania sa jedinci usmrtili a miesta vpichu sa overili histologicky.

Dospelé samčie lúčne hraboše (n = 10) sa tiež testovali na uľahčenie preferencie partnera pri CRF. Zvieratá sa kanylovali bilaterálne do NAcc, ako je opísané vyššie, a náhodne sa priradili k jednej z dvoch skupín: kontrola CSF (n = 4), alebo CRF 0.1 pg (n = 6). Testy kohabitácie a preferencie partnerov boli vykonávané presne tak, ako je uvedené vyššie pre prérijné voles. Dospelé samčie lúky z našej kolónie zvyčajne nevytvárajú partnerské preferencie, keď sú spolužité so ženou (Lim a kol., 2004b).

CRF1- a CRF2- selektívna farmakológia a preferencia partnerov

Dospelé prairie voles sa kanylovali bilaterálne do NAcc, ako je opísané vyššie, a rozdelili sa do jednej z troch skupín: 0.1 pg CRF (n = 10), 0.1 pg CRF plus 10 pg CRF1 antagonistu (CP-154,526) (n = 25) a 0.1 pg CRF plus 10 pg CRF2 antagonistu (anti-sauvagín-30) (n = 15). Anti-sauvagín-30 bol získaný od Sigma (St. Louis, MO) a CP-154,526 od Michael Owens, Ph.D. (Emory University, Atlanta, GA). Koncentrácia 10 pg CRF1 antagonistom (CP-154,526) v roztoku 200 nL je 100 nM, zatiaľ čo koncentrácia 10 pg CRF2 antagonistom (anti-sauvagín-30) v roztoku 200 nL je 10 nM. Každé zviera dostalo bilaterálne injekcie objemu 200 nl priamo do NAcc pred skráteným 6 hodinovým kohabitáciou s novou samicou. Ihneď po kohabitácii boli jedinci testovaní na preferenciu partnera, ako je opísané vyššie. Po testovaní správania sa jedinci usmrtili a miesta vpichu sa overili histologicky. Zvieratá, ktorých kanylačné miesta boli umiestnené mimo NAcc, boli z analýzy údajov vylúčené a neodrážali sa v celkovom počte použitých zvierat.

Analýza dát

Dáta z testu preferencie partnerov pre každý experiment boli analyzované s použitím ANOVA 2 spôsobom, v ktorom boli stimulom (partner alebo cudzinec) a liečbou faktory. Okrem toho boli Studentove t-testy použité na porovnanie času v kontakte s partnerom a cudzincom v rámci každej liečebnej skupiny. Bonferroni korekcie pre úroveň významnosti boli vykonané pre každý experiment, aby sa minimalizovalo riziko rizika typu I v dôsledku viacnásobných porovnaní. Muži boli zaradení do kategórie, že vyvinuli preferenciu partnera, ak strávili viac ako dvojnásobok času v kontakte s partnerom ako cudzinec.

Údaje zozbierané pre lokomotorickú aktivitu boli spočítané ako počet prerušení infračerveného lúča pre každé zviera a spriemerované v rámci každej liečenej skupiny. Výsledky boli analyzované pomocou jednosmernej ANOVA s liečbou ako nezávislým faktorom.

CRF a Urocortin-1 Imunohistochémia

Dospelý prérijný voles bol hlboko anestetizovaný medzi hodinami 10: 00 a 14: 00 s izofluranom a perfundovaný fyziologickým roztokom nasledovaným 2% paraformaldehydom v fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom 10MM (pH 7.4) (PBS). Rozštiepené mozgy sa postfixovali cez noc v roztoku 2% paraformaldehyd / PBS a kryogénne chránili v 30% sacharóze / PBS. Tridsať μm hrubých, voľne plávajúcich koronálnych rezov sa narezalo na kryostat a spracovalo na imunohistochémiu podľa štandardných protokolov (Ryabinin, Criado, Henriksen, Bloom a Wilson, 1997; Weitemier, Tsivkovskaia, a Ryabinin, 2005) s úpravami na tkanivo vole vykonané v predchádzajúcich pokusoch (Lim et al., 2006). V stručnosti, endogénna peroxidázová aktivita sa zastavila inkubáciou s 15 minút s 0.3% peroxidom vodíka. Pre protilátku špecifickú pre urokortín-1 sa blokovanie uskutočnilo päťhodinovou inkubáciou s 2% albumínom hovädzieho séra, 0.1% heparínom, 0.01% Triton X-100 v PBS. Pre CRF-špecifickú protilátku bolo blokovanie uskutočňované päťhodinovou inkubáciou s 4.5% kozím sérom, 0.3% Triton X-100 v PBS. Primárne králičie protilátky rozpoznávajúce urokortín-1 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) boli použité v zriedení 1: 5,000. Primárne protilátky rozpoznávajúce CRF (Peninsula Laboratories, San Carlos, CA) boli použité v zriedení 1: 15,000. Na detekciu primárnych protilátok sa použili biotynylované anti-králičie sekundárne protilátky (Vector Laboratory Inc., Burlingame, CA). Detekcia sekundárnych protilátok bola uskutočnená s použitím súpravy Vectastain ABC (Vector) a enzymatický vývoj bol uskutočnený pomocou súpravy Metal Enhanced DAB (Pierce, Rockford, IL, USA). Špecificita imunofarbenia bola hodnotená úplným nedostatkom imunoreaktivity v oblastiach, o ktorých nie je známe, že exprimujú CRF alebo Urocortin-1. Okrem toho sa predtým uskutočnili kontrolné experimenty s preabsorpciou pre tieto protilátky (Bachtell, Weitemier, Galvan-Rosas, Tsivkovskaia, Risinger, Phillips, Grahame a Ryabinin, 2003).

Kvalitatívna analýza obrazu sa uskutočnila s použitím systému, ktorý sa skladá z mikroskopu Olympus BX40 a digitálnej videokamery s vysokým rozlíšením (Olympus Qcolor3) prepojenej s osobným počítačom Macintosh so systémom OS-X. Obrazy z jednej sekcie, ktoré boli najlepšie prispôsobené zvieratám pre každú oblasť mozgu, boli digitálne zhromaždené pri rovnakej intenzite osvetlenia. Pretože v bunkách tela v NAcc nebolo pozorované žiadne imunopozitívne farbenie, počet imunoreaktívnych neurónov nebol kvantitatívne spočítaný.

VÝSLEDKY

Farmakologická manipulácia receptorov CRF v NAcc

V minulosti sa preukázalo, že infúzia CRF icv uľahčuje preferenciu partnera v prérijných volách (DeVries a kol., 2002). Na základe našich neuroanatomických údajov preukazujúcich druhové rozdiely v CRF1 a CRF2 v NAcc sme predpokladali, že NAcc je miestom konania pre uľahčenie preferencie partnera CRF. Predchádzajúca štúdia ukázala, že dávkovanie CRF závislé od dávky by mohlo uľahčiť partnerské preferencie u mužských prérijných voles po skrátenom spolužití so samicou (DeVries a kol., 2002). Na základe tejto štúdie sme navrhli CRF dávky pre miestne špecifické injekcie do NAcc. Dávky, ktoré sme použili, 0.1 pg a 0.01 pg CRF rozpustené v izotonickom roztoku 200 nL (alebo 100 nM a 10 nM), boli výrazne nižšie ako minimálne účinné icv dávky 0.1 ng a 1 ng CRF rozpustené v 1 μL (alebo 210 nM a 2.1 μM) (DeVries a kol., 2002). Hoci sa ukázalo, že CRF sa viaže prednostne na CRF1, viaže sa aj na CRF2 s podstatnou afinitou (Ki 11 a 25) (Primus a kol., 1997).

Analýza celkového súboru dát pomocou 2-cestnej ANOVA odhalila významný hlavný účinok stimulačného zvieraťa (F (1,66) = 6.77, p <0.05), ale neboli zistené žiadne ďalšie hlavné účinky alebo interakcie. Na určenie, ktoré skupiny prednostne trávili čas v kontakte s partnermi pred cudzincami, sa uskutočňovali Studentove t-testy s Bonferroniho korekciami p-hodnoty. Kontrolné prérijné hraboše s bilaterálnymi injekciami umelého mozgovomiechového moku do septálneho pólu NAcc alebo 0.1 pg CRF do kaudát-putamenu nestrávili pri kontakte s partnerom signifikantne viac času ako cudzie stimulačné zviera (p> 0.3, Studentov t-test , Úroveň Bonferroni nastavená na p <0.01) (Obrázok 1A). Prairie hraboše injikované s nižšou dávkou CRF, 0.01 pg, smerovali k tráveniu viac času v kontakte s partnerom ako s cudzincom (p> 0.08, Studentov t-test, hladina Bonferroni nastavená na p <0.01). Naproti tomu prérijné hraboše dostávajúce bilaterálne injekcie 10-násobne vyššej dávky CRF, 0.1 pg do septálneho pólu NAcc, strávili kontaktom s partnerom podstatne viac času ako cudzincom (p <0.01, Studentov t-test, nastavená hladina Bonferroni pri p <0.01) (Obrázok 1A). Okrem toho, zatiaľ čo iba 6 kontrolných zvierat 13 zobrazovalo preferencie partnerov, definované ako výdavky dvakrát toľko času v kontakte s partnerom v porovnaní s cudzincom, 12 zvierat 15, ktorí dostávali 0.1 pg CRF, zobrazoval preferencie partnera (Obrázok 1B). Zvieratá 3, ktoré nevykazovali preferencie partnera, mali silné cudzie preferencie, čo pravdepodobne prispelo k chýbajúcemu hlavnému účinku liečby alebo interakčnému efektu v ANOVA 2-way. Teda, kým CRF infúzie do NAcc významne zvýšili čas v kontakte s partnerom vo vzťahu k cudzincovi, neviedli k celkovému zvýšeniu kontaktného času s partnerom.

Obrázok 1 

Dvojstranné mikroinjekcie CRF do NAcc uľahčujú preferenciu partnerov v samčích prériách. (A) Kontrolné zvieratá, ktoré dostávali umelý CSF do NAcc alebo 0.1 pg CRF do caudate-putamen (CP), významne nepreferovali ...

Kvôli dramatickým druhovým rozdielom v CRF1 a CRF2 hustoty v NAcc, predpokladali sme, že pôsobenie CRF v rámci NAcc by iba uľahčilo formovanie partnerských preferencií u hrabošov prérijných, a nie u nemogamných lúčnych hrabošov. V skutočnosti lúčne hraboše injikované s CSF alebo s vysokou dávkou 0.1 pg CRF nestrávili podstatne viac času v kontakte s partnerom ako s cudzincom (p> 0.5, Studentov t-test) (Obrázok 2).

Obrázok 2 

Dvojstranné mikroinjekcie CRF do NAcc nepodporujú preferencie partnerov v monogamných samčích lúčnych volách. Dospelý lúka voles vstreknuté s umelým CSF, alebo 0.1 pg CRF do NAcc, nemal tráviť viac času v kontakte s partnerom ako ...

Na základe druhových rozdielov v CRF1 a CRF2 distribúciu v NAcc sme predpokladali, že obidva CRF1 a CRF2 by modulovalo preferenčné správanie partnera, možno opačným smerom. Analýza celkového súboru dát pomocou 2-cestnej ANOVA odhalila významný hlavný účinok stimulačného zvieraťa (F (1,94) = 7.52, p <0.05), ale neboli zistené žiadne ďalšie hlavné účinky alebo interakcie. Prairie hraboše injikované kokteilom 0.1 pg CRF plus 10 pg selektívneho CRF2 antagonista anti-sauvagín-30, nestrávil významne viac času s partnerom alebo cudzincom (p> 0.3, Studentov t-test, hladina Bonferroni nastavená na p <0.016) (Obrázok 3A). Zaujímavé je, že prérijne voles vstrekuje koktail 0.1 pg CRF, plus 10 pg selektívny CRF1 antagonista CP-154,526-1, tiež ukázal blokádu preferencie partnera (p> 0.5, Studentov t-test, hladina Bonferroni nastavená na p <0.016) (Obrázok 3A). Kontrolné prérijné hraboše injikované 0.1 pg CRF do NAcc sa testovali súčasne a zistilo sa, že replikujú pôvodné výsledky uľahčenia preferencie partnera (p <0.01, Studentov t-test, hladina Bonferroni nastavená na p <0.016) (Obrázok 3A). Okrem toho, zatiaľ čo 8 z prérií 10 CRF ošetrených prérijnými prameňmi vykazoval preferencie partnerov, iba 11 zvierat 25, ktorí dostávali CRF1 a 6 zo zvierat 15 dostávajúcich CRF2 zobrazil preferenciu partnera (Obrázok 3B). Naše výsledky naznačujú, že aktivácia oboch CRF1 a CRF2 Receptory v NAcc sú nevyhnutné pre CRF-indukované uľahčenie preferencie partnerov v prérijných volách.

Obrázok 3 

Obidva CRF1 a CRF2 receptory v NAcc sú nevyhnutné pre formovanie preferencií partnera s uľahčením CRF v prérijných hrabošoch. (A) Zvieratá, ktorým bol injikovaný 0.1 pg CRF do NAcc, strávili viac času v kontakte s partnerom ako s cudzincom (p <0.01, Studentova ...

Lokomotorická aktivita sa medzi liečenými skupinami významne nelíšila (F (1,80) = 1.37, p> 0.05, jednosmerná ANOVA), hoci lokomočná aktivita mala tendenciu byť nižšia u zvierat, ktoré dostávali CRF do NAcc. Výsledky sú zobrazené v Tabuľka 1, Reprezentatívna histologická časť znázorňujúca miesto kanylácie pre NAcc je znázornená na Obr Obrázok 4.

Obrázok 4 

Histologické overenie umiestnenia kanyly. (a) Autorádiogram receptora na ľavej polovici znázorňuje umiestnenie CRF2 v Prairie vole NAcc. (b) Reprezentatívna fotomikrografia Nisslovho zafarbeného mozgového rezu znázorňujúca umiestnenie kanyly končiacej vnútri ...
Tabuľka 1 

Lokomotorická aktivita predstavovaná celkovým počtom zlomov infračerveného lúča alebo prechodov klietkou, spriemerovaná v rámci každej liečenej skupiny. Medzi liečebnými skupinami nie sú významné rozdiely (F = 1.37, p> 0.05, jednosmerná ANOVA).

CRF- a Ucn-1 imunoreaktivita v NAcc

Aby sme ukázali mikrofotografiu, v ktorej sú v NAcc prítomné endogénne ligandy receptora CRF, vykonali sme imunoreaktivitu CRF- a Urocortin-1 (Ucn-1) v dospelých prériách. Reprezentatívne mozgové rezy spracované na CRF imunocytochémiu sú ukázané v Obrázok 5, CRF-imunoreaktívne vlákna boli pozorované v NAcc u oboch pohlaví bez zjavných rozdielov v distribúcii alebo hustote vlákien (Obrázok 5b). Ucn-1 vlákna neboli detegované v NAcc ani u samcov, ani u ženských prérií (Obrázok 5c). Je teda možné, že CRF je jedným z endogénnych ligandov, ktoré by mohli fyziologicky viazať CRF1 a CRF2 receptory vo vole NAcc na uľahčenie preferencie partnera. Je zrejmé, že CRF sa viaže na obidva CRF1 a CRF2s približne dvoj- až desaťnásobnou afinitou vyššou afinitou k CRF1 (Primus a kol., 1997). Nemôžeme však vylúčiť možnosť, že iné endogénne ligandy, ako je Urocortin-2 alebo Urocortin-3, môžu tiež prispievať k neurálnej kontrole tvorby párových väzieb.

Obrázok 5 

CRF a Ucn-1 imunoreaktivita v prérijných volách. (a) Schéma atlasu potkana znázorňujúce plochu zväčšenia 10x NAcc (pozri obdĺžnik) (Paxinos a Watson, 1998). (b) Časť vŕn prérijnej, ktorá ukazuje CRF-imunoreaktívne vlákna v NAcc (pozri šípky). c) Prairie ...

DISKUSIA

V predchádzajúcich štúdiách sme identifikovali druhové rozdiely v akumulovaných CRF1- a CRF2 výraz, ktorý koreloval so sociálnou organizáciou v štyroch druhoch zveri. Monogamné prérie a borovicové šišky mali vyššie hladiny CRF2 v NAcc a nižšie hladiny CRF1 v NAcc, v porovnaní s nemonogamickými druhmi lúk a montánnych druhov (Lim et al., 2005). Na základe týchto údajov sme predpokladali, že pôsobenie CRF v NAcc bolo kritické pre monogamné sociálne správanie v prérijných volách. V tejto štúdii prvýkrát uvádzame, že mikroinjekcie CRF priamo do NAcc v skutočnosti uľahčujú preferenciu partnerov v mužských prériách. Dvojcestná ANOVA analýza zistila hlavný účinok stimulačného zvieraťa, tj celkovo viac času bolo strávených v kontakte s partnerom ako cudzinec, ale nebol zistený žiadny hlavný účinok liečby alebo interakcie. Silné cudzie preferencie u 3 zvierat 0.1 pg CRF NAcc skupiny nafúkli rozptyl, čím sa zabránilo detekcii interakčného účinku. Samostatné porovnania času stráveného s partnerskými veršmi však odhalili významné preferencie pre partnera v skupine 0.1 pg CRF NAcc. Tento účinok sa opakoval v štúdii antagonistov, čo potvrdzuje robustnosť účinku. Tento posun v partnerských preferenciách nebol spojený so štatisticky významným zvýšením času stráveného s partnerom alebo poklesom času stráveného s cudzincom, ale skôr výsledkom celkovej zvýšenej preferencie partnera voči cudzincovi. Na rozdiel od toho, CRF nemá žiadny vplyv na preferencie partnerov v monogamných lúkach. Okrem toho sme ukázali, že tento uľahčujúci účinok je modulovaný pôsobením CRF na oboch CRF1 a CRF2 receptory. Nakoniec sme ukázali mikrofotografiu, že CRF-imunoreaktívne vlákna sú prítomné v prérijnom vole NAcc, čo naznačuje, že CRF môže byť jedným z endogénnych ligandov pôsobiacich na CRF.1 a CRF2 v NAcc počas tvorby partnerských preferencií. Súhrnne povedané, tieto údaje ukazujú novú úlohu systémov CRF pôsobiacich v NAcc v sociálnom správaní.

Naše údaje, ktoré ukazujú, že CRF v NAcc uľahčuje preferencie partnerov, podporujú našu počiatočnú hypotézu, že akumulačné CRF systémy sa podieľajú na tvorbe párových väzieb v prérijných volách. Ďalej sme predpokladali, že CRF2 Vzhľadom na hojnosť CRF boli kritické najmä receptory2 v dvoch druhoch monogamných vole, ale nie v dvoch nemonogamných druhoch (Lim et al., 2005). Výsledky z experimentu s lúčnymi žilami podporujú túto hypotézu, pretože infúzia CRF nemá žiadny vplyv na preferenciu partnera u druhu, ktorý účinne nemá CRF.2 receptory v NAcc. Okrem toho sme zistili, že spoločné podávanie CRF2- selektívny antagonista blokuje preferenciu partnera v prérijných volách. Tieto údaje odhaľujú potenciálne kritickú úlohu CRF2 receptory vo vytváraní párových väzieb.

Zistili sme však, že spoločná správa CRF1- selektívna antagonistická blokovaná preferencia partnera v prérijných volách. Tento výsledok bol prekvapivejší vzhľadom na to, že CRF1 Receptory receptorov sú exprimované v NAcc u monogamných aj monogamných druhov. Tieto údaje spolu zdôrazňujú dôležitosť oba Subtypy receptora pre expresiu preferencie partnera a poukazujú na možnosť, že špecifickosť receptora je komplexným problémom, ktorý môže byť prospešný z ďalšieho skúmania. Je možné, že môže existovať dynamická súhra medzi dvomi receptorovými subtypmi v NAcc počas správania párového párovania a mohlo by byť zaujímavé ďalej skúmať bunkové fenotypy CRF.1- a CRF2-exprimujúcich neurónov, alebo zistiť, či CRF1 a CRF2 receptory môžu dokonca kolokalizovať na rovnaké neuróny. Je tiež možné, že môžu byť zahrnuté aj iné činidlá, ako napríklad proteín viažuci CRF, ktorý môže pôsobiť ako rezervoár endogénneho CRF (Jahn, Eckart, Brauns, Tezval a Spiess, 2002).

Účinné dávky CRF pre miestne špecifické injekcie do NAcc, ktoré uľahčili preferenciu partnera, neviedli k žiadnemu signifikantnému účinku liečby liečivom na lokomotorickú aktivitu, ktorá sa bežne interpretuje ako správanie podobné úzkosti. DeVries a Carter (2002) zistili účinné dávky CRF icv pre preferencie partnerov pri liekoch 0.1 a 1.0 ng (210 nM a 2.1 μM) a nezistili rozdiely v lokomotorickej aktivite medzi liečebnými skupinami (DeVries a kol., 2002). Ich dávky boli 1000 až 10,000 násobne vyššie a aspoň dvakrát až dvadsaťkrát vyššie v porovnaní s dávkami, ktoré sme použili miestne špecificky do NAcc (10 nM a 100 nM). V našej štúdii, hoci sme nezistili signifikantné rozdiely v lokomotorickej aktivite v liečebných skupinách, bol však pozorovaný mierny trend smerom k nižšiemu prekročeniu klietok u zvierat dostávajúcich samotný CRF do NAcc. Aj keď je možné, že CRF môže vyvinúť jemné účinky na správanie podobné úzkosti, a teda lokomóciu, ktorá by mohla mať vplyv na tvorbu preferencií partnerov, veríme, že pravdepodobnejšie vysvetlenie je, že zníženie kríženia v klietkach v skupine samotnej CRF je vedľajším produktom zvýšenia preferencia partnera, tj čas strávený len v klietke partnera. To podporuje hypotézu, že CRF môže mať novú, samostatnú úlohu pri regulácii sociálneho správania, pravdepodobne nezávislej od účinkov HPA osí na úzkosť.

Tiež sme ukázali mikrofotografiu dôkazu CRF-imunoreaktivity v NAcc v rovnakej oblasti ako CRF2 receptory v monogamných prériách. To naznačuje, že CRF môže byť jedným z endogénnych ligandov, ktoré pôsobia na CRF1 a CRF2 receptory v NAcc. Hoci sa ukázalo, že CRF sa viaže prednostne na CRF1, viaže sa aj na CRF2 s podstatnou afinitou (Primus a kol., 1997). Ucn-1-imunoreaktívne vlákna neboli pozorované v NAcc, ale boli pozorované v iných oblastiach mozgu, ako je Edinger-Westphal jadro (Lim et al., 2006). Urocortin-2 alebo Urocortin-3 vlákna sme nemohli mapovať v mozgu vole kvôli nedostatku špecifického imunoznačenia; Bolo by však zaujímavé určiť, či tieto potenciálne ligandy, ktoré tiež viažu CRF2 receptory s vysokou afinitou, sú tiež prítomné v NAcc spolu s CRF2 receptory.

Ventrálny predný mozog, a najmä NAcc, bol opakovane identifikovaný ako kritická oblasť mozgu pre tvorbu párových väzieb v prérijných volách. Vzhľadom na úlohu NAcc v metóde mezolimbického dopamínového odmeňovania sa predpokladalo, že prirodzené odmeňovanie a posilňovacie mechanizmy sú základom vytvárania párových väzieb, takže partner je selektívne spojený s odmenou (Aragona a kol., 2003a; Lim, Murphy a Young, 2004a). Farmakologické a genetické manipulácie ukázali, že vazopresínové receptory V1a ventrálneho predného mozgu sú nevyhnutné pre tvorbu párov mužských párov, dokonca aj keď sú nadmerne exprimované v nemonogamných druhoch molekúl (Lim a kol., 2004b; Lim a Young, 2004). Receptory oxytocínu v NAcc sú potrebné pre preferencie partnerov v ženských prériách.Young, Lim, Gingrich a Insel, 2001). Ukázalo sa tiež, že receptory akumulovaného dopamínu D1 a D2 modulujú tvorbu preferencií partnerov a ich udržanie u mužov aj žien a v skutočnosti dopamín interaguje s oxytocínom počas tohto behaviorálneho procesu (Aragona a kol., 2003a; Aragona a kol., 2006; Aragona, Liu, Yu, Damron, Perlman a Wang, 2003b; Liu a Wang, 2003). Aktivácia CRF receptora teda pravdepodobne prispieva k väčšiemu okruhu, ktorý konverguje v NAcc, aby produkoval toto komplexné sociálne správanie. V súlade s touto hypotézou existuje dôkaz, že receptory CRF v NAcc môžu modulovať uvoľňovanie dopamínu do striata (Lu, Liu, Huang a Zhang, 2003), a nedávne predbežné dôkazy naznačujúce, že aktivácia receptora NAcc CRF môže stimulovať lisovanie tyčinky pre prirodzené vystuženie (Berridge, Pecine a Schulkin, 2004). Ďalšia štúdia ukázala, že CRF2 receptory vo ventrálnej tegmentálnej oblasti, ktoré odosielajú dopaminergné projekcie do NAcc, môžu indukovať dlhodobú potenciáciu, fyziologickú koreláciu asociácie behaviorálneho učenia a odmeňovania (Bezmocní, Singh, Crowder, Yaka, Ron a Bonci, 2003). Pretože sa predpokladá, že preferencia partnera je formou prirodzeného učenia sa odmeňovania, CRF receptory v NAcc môžu hrať podobnú úlohu v základnom synaptickom potenciovaní počas tvorby párových väzieb v prérijných volách.

Tvorba párových väzieb v prírode je komplexný kognitívny proces, ktorý vyžaduje integráciu mnohých vonkajších stimulov a vnútorných stavov. Tvorba párových väzieb vyplýva zo syntézy niekoľkých procesov správania vrátane sociálneho rozpoznávania, prístupu a sociálnej motivácie a zahŕňa učenie a pamäť. Oxytocín a vazopresín sa integrálne podieľajú na nervovom spracovaní sociálnych stimulov a vytváraní sociálnych spomienok (Bielsky, Hu, Szegda, Westphal a Young, 2004; Ferguson, Young, Hearn, Matzuk, Insel a Winslow, 2000). Dopamín môže byť zapojený do zvýšeného motivačného stavu, ktorý poháňa sociálnu interakciu s partnerom a posilňovanie potrebné na stanovenie preferencie partnera. CRF môže poskytnúť mechanizmus, ktorým vnútorný stresový stav moduluje preferencie partnera. CRF signalizácia môže tiež umožniť dlhodobé zmeny neurálnej plasticity počas tvorby párových väzieb. Každý neurotransmiterový systém hrá inú, ale rozhodujúcu úlohu v komplexnom správaní párových väzieb a blokáda ktoréhokoľvek systému by narušila tvorbu párovej väzby.

Úloha CRF v regulácii sociálneho správania bola minimálne študovaná, napriek množstvu štúdií týkajúcich sa CRF voči stresovému a úzkostnému správaniu. Existuje silný dôkaz, že CRF2 aktivácie receptora na zníženie úzkosti a správania podobného depresii u myší (Bale, Contarino, Smith, Chan, Gold, Sawchenko, Koob, Vale a Lee, 2000; Bale a Vale, 2003). Sociálne správanie, stres a úzkosť sú silne vzájomne prepojené, najmä v správaní, ktoré zahŕňa sociálnu podporu alebo zvládanie sociálnej izolácie. Prairie voles, ktoré vytvorili párové väzby, vykazujú zvýšené hladiny kortikosterónu v plazme počas sociálnej separácie od partnera a opätovné spojenie s partnerom vráti tieto hladiny späť na základnú úroveň (Carter, DeVries, Taymans, Roberts, Williams a Getz, 1997). Mužské prérie, ktoré prechádzajú núteným plávaním, psychologickým stresorom, ukazujú uľahčenie tvorby párových väzieb po skrátenom spolužití s ​​partnerom (DeVries a kol., 1996). Nakoniec, párovo viazaní samci, ktorí sú oddelení od svojich partnerov, vykazujú pasívnejšie stratégie zvládania pri teste s núteným plávaním ako ich náprotivky oddelené súrodencami a takéto zmeny správania sú sprevádzané zvýšením mRNA CRF v NAcc (Bosch, Nair, Neumann a Young, 2005).

Tieto údaje naznačujú, že sociálne a stresové správanie má vzájomný vzťah, a navyše, rovnaké molekuly, ktoré sa podieľajú na strese a úzkosti, tiež zohrávajú dôležitú úlohu v sociálnom správaní. V skutočnosti existujú dôkazy, že „sociálne“ neuropeptidy vazopresínu a oxytocínu môžu modulovať stres a úzkostné správanie (Bielsky a kol., 2004; Landgraf, Gerstberger, Montkowski, Probst, Wotjak, Holsboer a Engelmann, 1995; Liebsch, Wotjak, Landgraf a Engelmann, 1996; Mantella, Vollmer, Li a Amico, 2003; Ring, Malberg, Potestio, Ping, Boikess, Luo, Schechter, Rizzo, Rahman a Rosenzweig-Lipson, 2006; Windle, Shanks, Lightman a Ingram, 1997). Teda tie isté molekuly, ktoré modulujú stav vnútorného stresu, môžu prispievať k regulácii sociálneho správania, ako je vytváranie párových väzieb, a že molekuly a okruhy vyvinuté na účely jedného správania môžu v skutočnosti dynamicky riadiť druhú.

Poďakovanie

Na Univerzite Emory by sme chceli poďakovať Dr. Michaelovi J. Owensovi za láskavosť, že nám poskytol zmes CP-154,526. Taktiež by sme chceli poďakovať Lorre Millerovej a Meerovi Modimu za pomoc pri experimente s lúkovým vole. Na záver by sme chceli poďakovať Drsovi. A. Courtney DeVries na Ohio State University a C. Sue Carter na University of Illinois v Chicagu za ich priekopnícku prácu na CRF v prérijných hrách a korešpondenciu Dr. DeVriesa o farmakologických experimentoch.

Grantová podpora: Tento výskum bol podporený NIH grantmi MH65050 pre MML, AA13738 pre AER, MH58616 pre ZXW, MH64692 pre LJY a NSF STC IBN-9876754 a Yerkes Center Grant RR00165.

poznámky pod čiarou

Zrieknutie sa zodpovednosti vydavateľa: Toto je súbor PDF s neupraveným rukopisom, ktorý bol prijatý na uverejnenie. Ako službu pre našich zákazníkov poskytujeme túto skoršiu verziu rukopisu. Rukopis sa podrobí kopírovaniu, sádzaniu a preskúmaniu výsledného dôkazu skôr, ako sa uverejní vo svojej konečnej podobe. Upozorňujeme, že počas výrobného procesu môžu byť zistené chyby, ktoré by mohli mať vplyv na obsah, a všetky právne zrieknutia sa zodpovednosti, ktoré sa vzťahujú na časopis.

Referencie

  1. Aragona BJ, Liu Y, Curtis JT, Stephan FK, Wang Z. Kritická úloha pre nucleus accumbens dopamín v tvorbe preferencií u samcov prérijných voles. J Neurosci. 2003, 23 (8): 3483-90. [PubMed]
  2. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Curtis JT, Detwiler JM, Insel TR, Wang Z. Nucleus accumbens dopamín odlišne sprostredkováva tvorbu a udržiavanie monogamných párových väzieb. Nat Neurosci. 2006, 9 (1): 133-9. [PubMed]
  3. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Damron A, Perlman G, Wang ZX. Opačná modulácia sociálnej väzby prostredníctvom aktivácie dopamínového receptora typu D1 a D2 v jadre nucleus accumbens. Horm Behav. 2003b; 44: 37.
  4. Bachtell RK, Weitemier AZ, Galvan-Rosas A, Tsivkovskaia NO, Risinger FO, Phillips TJ, Grahame NJ, Ryabinin AE. Edinger-Westphal-laterálna priehradková urokortínová dráha a jej vzťah k požívaniu alkoholu. J Neurosci. 2003, 23 (6): 2477-87. [PubMed]
  5. Bale TL, Contarino A, Smith GW, Chan R, Gold LH, Sawchenko PE, Koob GF, Vale WW, Lee KF. Myši s nedostatkom receptora hormónu uvoľňujúceho kortikotropín-2 vykazujú správanie podobné úzkosti a sú precitlivené na stres. Nat Genet. 2000, 24 (4): 410-4. [PubMed]
  6. Balík TL, Vale WW. Zvýšené správanie podobné depresii u myší s deficitom faktora receptora kortikotropínu-2: sexuálne dichotomické reakcie. J Neurosci. 2003, 23 (12): 5295-301. [PubMed]
  7. Berridge KK, Pecine S, Schulkin J. Chutný účinok CRF v akumulovanom prostredí na podmienený prístup k odmeňovaniu sacharózy. Spoločnosť pre Neuroscience Abstraktný divák / Itinerár Plánovač. 2004: 437.12.
  8. Bielsky IF, Hu SB, Szegda KL, Westphal H, Young LJ. Hlboké poškodenie v sociálnom rozpoznaní a redukcia správania podobného úzkosti u myší s vyradeným receptorom vazopresínu V1a. Neuropsychofarmakologie. 2004, 29 (3): 483-93. [PubMed]
  9. Bosch OJ, Nair HP, Neumann ID, Young LJ. Depresívne správanie sa po izolácii od samičieho partnera je spojené so zmenenou mozgovou CRF mRNA a HPA osovou aktivitou u samčích prérií vole. Spoločnosť pre neurovedcov abstraktný divák / itinerár plánovač; 2005. (Číslo programu 420.4)
  10. Carter CS, DeVries AC, Getz LL. Fyziologické substráty cicavčej monogamie: model prérie vole. Neurosci Biobehav Rev. 1995, 19 (2): 303 – 14. [PubMed]
  11. Carter CS, DeVries AC, Taymans SE, Roberts RL, Williams JR, Getz LL. Peptidy, steroidy a párové väzby. Ann NY Acad Sci. 1997, 807: 260-72. [PubMed]
  12. DeVries AC, DeVries MB, Taymans SE, Carter CS. Účinky stresu na sociálne preferencie sú v prérijných volách sexuálne dimorfné. Proc Natl Acad Sci US A. 1996, 93 (21): 11980 – 4. [Článok bez PMC] [PubMed]
  13. DeVries AC, Guptaa T, Cardillo S, Cho M, Carter CS. Kortikotropín uvoľňujúci faktor indukuje sociálne preferencie u samčích prérijných voles. Psychoneuroendocrinology. 2002, 27 (6): 705-14. [PubMed]
  14. Ferguson JN, Young LJ, Hearn EF, Matzuk MM, Insel TR, Winslow JT. Sociálna amnézia u myší bez génu oxytocínu. Nat Genet. 2000, 25 (3): 284-8. [PubMed]
  15. Getz LL, Carter CS, Gavish L. Systém párenia prérie vole Microtus ochragaster: Terénne a laboratórne dôkazy pre párové väzby. Behaviorálna ekológia a Sociobiológia. 1981, 8: 189-194.
  16. Gruder-Adams S, Getz LL. Porovnanie systému párenia a otcovského správania v Microtus ochragaster a M. pennsylvanicus. Journal of Mammalogy. 1985, 66 (1): 165-167.
  17. Hotta M, Shibasaki T, Arai K, Demura H. Receptor faktora uvoľňujúceho kortikotropín typu 1 sprostredkúva inhibíciu príjmu potravy a zmeny správania u potkanov vyvolanú emocionálnym stresom. Brain Res. 1999, 823 (1-2): 221-5. [PubMed]
  18. Insel TR, Shapiro LE. Distribúcia oxytocínového receptora odráža sociálnu organizáciu v monogamných a polygamných hraboch. Proc Natl Acad Sci US A. 1992, 89 (13): 5981 – 5. [Článok bez PMC] [PubMed]
  19. Insel TR, Wang ZX, Ferris CF. Vzory distribúcie mozgového vazopresínového receptora spojené so sociálnou organizáciou v mikrotínových hlodavcoch. J Neurosci. 1994, 14 (9): 5381-92. [PubMed]
  20. Jahn O, Eckart K, Brauns O, Tezval H, Spiess J. Väzbový proteín faktoru uvoľňujúceho kortikotropín: miesto viazania ligandu a štruktúra podjednotky. Proc Natl Acad Sci US A. 2002, 99 (19): 12055 – 60. [Článok bez PMC] [PubMed]
  21. Landgraf R, Gerstberger R, Montkowski A, Probst JC, Wotjak CT, Holsboer F, Engelmann M. V1 vazopresínový antisense oligodeoxynukleotid do septum znižuje väzbu vazopresínu, schopnosti sociálnej diskriminácie a správanie súvisiace s úzkosťou u potkanov. J Neurosci. 1995, 15 (6): 4250-8. [PubMed]
  22. Liebsch G, Wotjak CT, Landgraf R, Engelmann M. Septálny vazopresín moduluje správanie spojené s úzkosťou u potkanov. Neurosci Lett. 1996, 217 (2-3): 101-4. [PubMed]
  23. Lim MM, Murphy AZ, Young LJ. Receptory ventrálneho striatopalídneho oxytocínu a vazopresínu V1a v monogamnom prérijnom vole (Microtus ochrogaster) J Comp Neurol. 2004, 468 (4): 555-70. [PubMed]
  24. Lim MM, Nair HP, Young LJ. Rozdiely medzi druhmi a pohlaviami v distribúcii mozgových receptorov subtypov faktora receptora uvoľňujúceho kortikotropín 1 a 2 u monogamných a promiskuitných druhov hrabochov. J Comp Neurol. 2005, 487 (1): 75-92. [Článok bez PMC] [PubMed]
  25. Lim MM, Tsivkovskaia NO, Bai Y, Young LJ, Ryabinin AE. Distribúcia faktora uvoľňujúceho kortikotropín a Urocortin 1 vo Vole Brain. Brain Behav Evol. 2006, 68 (4): 229-240. [Článok bez PMC] [PubMed]
  26. Lim MM, Wang Z, Olazabal DE, Ren X, Terwilliger EF, Young LJ. Zvýšená preferencia partnera v promiskuitnom druhu manipuláciou expresie jedného génu. Nature. 2004b, 429 (6993): 754-7. [PubMed]
  27. Lim MM, Young LJ. Vazopresín-dependentné nervové obvody tvoriace párové väzby v monogamnom prérijnom vole. Neuroscience. 2004, 125 (1): 35-45. [PubMed]
  28. Liu Y, Wang ZX. Nukleus accumbens oxytocín a dopamín interagujú a regulujú tvorbu párových väzieb u ženských prérií. Neuroscience. 2003, 121 (3): 537-44. [PubMed]
  29. LuL, Liu Z, Huang M, Zhang Z. Odozvy závislé od dopamínu na kokaín závisia od podtypov receptora faktora uvoľňujúceho kortikotropín. J Neurochem. 2003, 84 (6): 1378-86. [PubMed]
  30. Mantella RC, Vollmer RR, Li X, Amico JA. Samice myší s deficitom oxytocínu vykazujú zvýšené správanie spojené s úzkosťou. Endocrinology. 2003, 144 (6): 2291-6. [PubMed]
  31. Paxinos G, Watson C. Mozog potkana v stereotaxických súradniciach. 4. Akademická tlač; 1998.
  32. Primus RJ, Yevich E, Baltazar C, Gallager DW. Autoradiografická lokalizácia väzbových miest CRF1 a CRF2 v mozgu dospelých potkanov. Neuropsychofarmakologie. 1997, 17 (5): 308-16. [PubMed]
  33. Ring RH, Malberg JE, Potestio L, Ping J, Boikess S, Luo B, Schechter LE, Rizzo S, Rahman Z, Rosenzweig-Lipson S. Anxiolytická aktivita oxytocínu u samcov myší: behaviorálne a autonómne dôkazy, terapeutické dôsledky. Psychofarmakológia (Berl) 2006: 1 – 8. [PubMed]
  34. Ryabinin AE, Criado JR, Henriksen SJ, Bloom FE, Wilson MC. Diferenciálna citlivosť expresie c-Fos v hipokampe a iných oblastiach mozgu na stredné a nízke dávky alkoholu. Mol Psychiatria. 1997, 2 (1): 32-43. [PubMed]
  35. Salo AL, Shapiro LE, Dewsbury DA. Affiliatívne správanie u rôznych druhov voles (Microtus) Psychol Rep. 1993; 72 (1): 316 – 8. [PubMed]
  36. Shapiro LE, Dewsbury DA. Rozdiely v afiliatívnom správaní, párovom spojení a vaginálnej cytologii u dvoch druhov vole (Microtus ochrogaster a M. montanus) J Comp Psychol. 1990, 104 (3): 268-74. [PubMed]
  37. Ungless MA, Singh V, Crowder TL, Yaka R, Ron D, Bonci A. Faktor uvoľňujúci kortikotropín vyžaduje proteín viažuci CRF na potencovanie receptorov NMDA prostredníctvom receptora CRF 2 v neurónoch dopamínu. Neurón. 2003, 39 (3): 401-7. [PubMed]
  38. Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE. Distribúcia urokortínu 1 v mozgu myši je závislá od kmeňa. Neuroscience. 2005, 132 (3): 729-40. [PubMed]
  39. Windle RJ, Shanks N, Lightman SL, Ingram CD. Podávanie centrálneho oxytocínu znižuje uvoľňovanie kortikosterónu a úzkostné správanie u potkanov vyvolané stresom. Endocrinology. 1997, 138 (7): 2829-34. [PubMed]
  40. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Bunkové mechanizmy sociálnej väzby. Horm Behav. 2001, 40 (2): 133-8. [PubMed]
  41. Young LJ, Wang Z. Neurobiológia párového viazania. Nat Neurosci. 2004, 7 (10): 1048-54. [PubMed]