Zmeny v hustote oxytocinových receptorov v Nucleus Accumbens má rozdielne účinky na afilitívne správanie v monogamných a polygamových voľbách (2009)

J Neurosci. Autorský rukopis; dostupné v PMC Oct 27, 2009.

Publikované v konečnom upravenom formulári ako:

PMCID: PMC2768419

NIHMSID: NIHMS93410

Finálna upravená verzia tohto článku vydavateľa je k dispozícii zadarmo na adrese J Neurosci

Pozri ďalšie články v PMC to citát publikovaný článok.

Prejsť na:

abstraktné

Receptory oxytocínu v nucleus accumbens sa podieľajú na regulácii aloparentálneho správania a tvorby párových väzieb v spoločensky monogamnom prérijnom vole. Hustota oxytocínového receptora v nucleus accumbens pozitívne koreluje s aloparentovaním u juvenilných a dospelých samičieho prérie a antagonista oxytocínového receptora infúziou do nucleus accumbens toto správanie blokuje. Okrem toho prérijné voly majú vyššie hustoty oxytocínových receptorov v akumulátoroch ako nemonogamné druhy hlodavcov a blokovanie akumulovaných receptorov oxytocínu zabraňuje tvorbe partnerských preferencií vyvolanej párením. Tu sme použili adeno-asociovaný prenos vírusových vektorových génov, aby sme preskúmali funkčný vzťah medzi hustotou akumulovaného oxytocínového receptora a sociálnym správaním v prériách a lúke. Dospelé samice prérie si volia, že nadmerne exprimovaný oxytocínový receptor v nucleus accumbens vykazoval zrýchlenú tvorbu preferencií partnerov po kohabitácii so samcom, ale nevykazoval zvýšené aloparentálne správanie. Avšak preferencia partnera nebola uľahčená na nemonogamných lúčnych lúkach zavedením oxytocínového receptora do nucleus accumbens. Tieto údaje potvrdzujú úlohu receptora oxytocínu v akumulátoroch pri regulácii partnerských preferencií u ženských prérií a naznačujú, že expresia oxytocínového receptora v akumulátoroch nie je dostatočná na podporu partnerských preferencií u nemonogamných druhov. Tieto údaje sú prvé, ktoré demonštrujú priamy vzťah medzi hustotou oxytocínového receptora v nucleus accumbens a variáciou v správaní sociálnych väzieb. Individuálna variácia expresie oxytocínového receptora v striate môže teda prispieť k prirodzenej diverzite v sociálnom správaní.

Kľúčové slová: maternál, vírus, preferencia, neuropeptid, kognícia, autorádiografia

ÚVOD

Microtine hlodavce vykazujú pozoruhodnú rozmanitosť v sociálnom správaní, od vysoko afiliatívnych a spoločensky monogamných až po relatívne asociálne a promiskuitné stratégie párenia (Gruderadams a Getz, 1985). Sociálne monogamné prérie vole (Microtus ochrogaster) formuje trvalé sociálne pripútanosti alebo párové putá k partnerovi opačného pohlavia, ktorý nasleduje po kohabitácii a párení, zatiaľ čo nemonogamné lúčne hraboše (Microtus pennsylvanicus) spravidla nie. Dospelé sexuálne naivné ženské prérie sa vyznačujú značnou rozmanitosťou v ich spontánnom výchovnom správaní alebo aloparentálnom správaní, pričom približne polovica vykazuje materské správanie voči mláďatám, zatiaľ čo zvyšok buď ignoruje alebo útočí na mláďatá (Lonstein a De Vries, 1999; Bales a Carter, 2003; Olazabal a Young, 2005). Tak hraboš je vynikajúcou príležitosťou na preskúmanie neurobiologických mechanizmov, ktoré sú základom sociálnej väzby a aloparentálnej starostlivosti, ako aj mechanizmov vedúcich k rôznorodosti v týchto druhoch správania medzi druhmi a medzi jednotlivcami.

Nonapeptidový oxytocín (OT) sa podieľa na regulácii tvorby partnerských preferencií a aloparentálneho správania v prérijných volách. Infúzia antagonistu oxytocínového receptora (OTR) do nucleus accumbens (NAcc), ale nie do susedného caudátového putamenu blokuje tvorbu partnerských preferencií indukovanú párovaním, laboratórny proxy tvorby párovej väzby (Young a kol., 2001). Podobné infúzie antagonistu OTR do NAcc tiež blokujú aloparentálne správanie u panenských samíc (Olazabal a Young, 2006b). Aktivácia OTR v NAcc teda uľahčuje tvorbu partnerských preferencií a aloparentálne správanie v ženských prériách.

Variácia v hustote OTR v NAcc sa predpokladala, že prispieva k druhovým rozdielom v sociálnej organizácii a aloparentálnom správaní. Prairie voles majú vysoké hustoty OTR v NAcc, zatiaľ čo nemonogamné lúky, myši a potkany nemajú (Insel a Shapiro, 1992; Olazabal a Young, 2006a). Prairie voles tiež vykazujú vyššie úrovne aloparentálneho správania ako lúčne voles, myši alebo potkany (Olazabal a Young, 2006a). Paralelne s týmto medzidruhovým vzťahom medzi hustotou OTR v NAcc a rodičovskom správaní je hustota OTR v NAcc pozitívne korelovaná s aloparentálnym správaním u mladých i dospelých samičieho prérie (Olazabal a Young, 2006b, a). V tejto štúdii sme použili prenos adeno-asociovaného vírusového vektora (AAV), aby sme priamo otestovali hypotézu, že odchýlka v hustote NAcc OTR môže prispieť k variáciám v sociálnom pripojení a aloparentálnom správaní. Dospelé samičky prairie sa bilaterálne infundovali do NAcc s AAV kódujúcim gén OTR prérie vole, čo viedlo k významnému zvýšeniu väzby OTR. Zvieratá sa potom testovali na aloparentálne správanie a tvorbu preferencií partnerov. Potom sme testovali hypotézu, že expresia OTR v NAcc bola dostatočná na uľahčenie tvorby preferencií partnerov infúziou ženských lúčnych svalov s rovnakým vektorom. Predpovedali sme, že v porovnaní s kontrolami by OTR nadmerne exprimujúce samice prérijnej prérie vykazovali zvýšené aloparentálne správanie a zrýchlené vytváranie preferencií partnerov. Okrem toho sme predpovedali, že samičky plávajúce lúky vyjadrujúce OTR v NAcc budú rozvíjať preferencie partnerov voči mužským partnerom.

MATERIÁLY A METÓDY

zver

Prairie a lúčne voles boli umiestnené v skupinách rovnakého pohlavia s 2-3 voles / cage od doby odstavenia vo veku 21-23. Puzdro sa skladalo z ventilovanej klietky z plexiskla 36 × 18 × 19cm naplnenej laboratórnym podstielkou Bed-ocobbs pre zvieratá pod cyklom 14: 10 hr svetlo / tma pri 22 ° C s prístupom k potrave (králik LabDiet, Richmond, IN) a voda ad libitum , Prérijne voles boli získané z našej laboratórnej chovnej kolónie, ktorá pôvodne pochádzala z poľných zajatí v Illinois. Lúčne voles boli získané zo zásoby získanej z chovnej kolónie na Floridskej štátnej univerzite. Subjektmi boli 2-5 mesačne neporušené pohlavne naivné ženské voles. Stimulujúce zvieratá boli pohlavne skúsení dospelí mužské voles. Každý muž počas testu preferencií partnerov slúžil ako „partner“ a „cudzinec“ (pozri nižšie). Súrodenci boli zaradení do rôznych liečebných skupín na kontrolu variability v rámci vrhu a do klietok. Všetky procedúry boli schválené výborom Emory University Institutional Animal Care and Use.

Adeno-asociované vírusové vektory

Sekvencia kódujúca OTR bola vytvorená zostrihom prvého exónu genómu genového klonu prérie vole OTR kódujúceho prvých päť transmembránových domén (prístupové číslo Genbank AF079980) a 3 'koniec OTR amplifikovaný z cDNA prérie vole uterus. Kódujúca sekvencia bola znovu orámovaná použitím PCR, aby sa eliminovali UTR a poskytli sa nové ohraničujúce reštrikčné miesta na uľahčenie klonovania do AAV vektorového plazmidu. Modifikovaný gén bol potom klonovaný do vektorového plazmidu AAV2 medzi promótorom cytomegalovírusu (CMV) 0.6 kb a DNA fragmentom SV40 obsahujúcim SV40 malý t intrón a polyA signál. AAV2-OTR bol krížovo zabalený v AAV9 transfekciou trojitého plazmidu do buniek AAV-293 (Stratagene, La Jolla, CA) použitím štandardnej metódy zrážania fosforečnanom vápenatým. Nebol použitý žiadny pomocný vírus. Plazmid AAV2-eGFP bol paralelne zabalený v AAV9 ako negatívny kontrolný vektor. Stručne, každý AAV vektorový plazmid, plazmid AAV2 / 9 rep / cap poskytujúci AAV2 replikázy a AAV9 kapsidové funkcie a 3rd plazmid kódujúci adenovírusové pomocné funkcie, pHelper (Stratagene), boli kotransfekované do buniek 293 v molárnom pomere 1: 1: 1. Bunky sa zozbierali 48 hodín po transfekcii. Bunkové pelety sa potom resuspendovali v DMEM a intracelulárne vírusové častice sa uvoľnili tromi po sebe idúcimi cyklami zmrazenia a rozmrazenia, po čom nasledovala centrifugácia pri 13,000 rpm pre 10 min na stolnej odstredivke, aby sa odstránili častice. Zásoby vektorov boli skladované pri -80 C a titrované real-time PCR s použitím ABI Prism 7700 Sequence Detection System od firmy Perkin-Elmer Applied Biosystems (Foster City, CA). Titre boli v poradí 1012 DRP / ml. (DRP = Dnase Resistant Particles).

Vírusová vektorová infúzia

Stereotaxické infúzie sa uskutočňovali za anestézie izofluranom v Kopf stereotaxe vybavenom Ultra Micro Pump II (World Precision Instruments, Sarasota, FL) a striekačkou Hamilton 26-gauge. Samice boli vstreknuté bilaterálne do škrupiny NAcc (prérijne voles: AP + 1.7mm, ML .9mm, DV-4.5mm, lúčne voles: AP + 1.6mm, ML .9mm, DV-4.3mm) s 750nl buď AAV obsahujúceho vole receptor oxytocínu (CMV-OTR, N = 12) alebo kontrolný vektor exprimujúci eGFP (CMV-GFP, N = 16). Vírus bol infundovaný rýchlosťou 93.8nl / min. Striekačka bola ponechaná na mieste pre 5 min po infúzii, aby sa minimalizovala difúzia vektora po stope ihly. Falošne operované zvieratá (N = 9) sa anestetizovali a nechali sa rozrezať a zošiť. Po chirurgickom zákroku boli zvieratá ustajnené až do času testovania správania partnera. Predbežné štúdie ukázali, že expresia OTR v mieste injekcie bola stabilná po 10 dňoch.

Testovanie aloparentalálneho správania

Mesiac po injekcii boli hraboše prériové testované na aloparentné správanie. Testovanie sa uskutočnilo medzi 0800:1800 a 45.5 24 h. Testované zvieratá sa umiestnili do veľkej čistej klietky (20 x 15 x 2 cm) a nechali sa 5 minút aklimatizovať. Na jeden koniec klietky boli umiestnené dve mláďatá (vo veku 900 - 15 dní). Zaznamenávala sa latencia prístupu k mláďatám, počet zvierat, ktoré na mláďatá zaútočili, a množstvo času venovaného úprave, vznášaniu sa a získavaniu mláďat. Zvieratám, ktoré sa počas 30-minútového testu nepristupovali k mláďatám, bola na účely štatistickej analýzy pridelená doba XNUMX sekúnd. Testovanie bolo okamžite zastavené, ak samica zaútočila na mláďatá. Zvieratá boli klasifikované ako aloparentné, ak strávili> XNUMX sekúnd olizovaním mláďat bez útoku. Na základe výsledkov experimentu s prérijnými hrabošmi sa netolerantné správanie netestovalo u lúčnych hrabošov.

Testovanie preferencií partnerov (Prairie Vole)

Jeden mesiac po testovaní aloparentálneho správania a dva mesiace po infúzii AAV boli samiciam podané 4 μg estradiol benzoátu (EB; Fisher, Pittsburgh, PA) rozpusteného v 0.1ml sezamového oleja IP denne počas 3 dní pred párením na vyvolanie sexuálnej vnímavosti , 16 hodín po poslednom injekčnom podaní EB sa zvieratá umiestnili do čistej klietky (28 × 17 × 12cm) so dospelým dospelým mužom so sexuálnou skúsenosťou počas 6 hodín a potom sa vrátili do skupinového bývania. Počas počiatočného spolužitia 6 hodín bolo zaznamenané párenie. Bola zaznamenaná latencia na prvú intromisiu a počet páriacich záchvatov v prvej hodine. Latencia 3600 sekúnd bola priradená zvieratám, ktoré sa neprejavili počas 1 hodinovej periódy na účely štatistickej analýzy. Nasledujúce ráno (14 hodín po kohabitácii) sa zvieratá testovali na preferencie partnerov. V teste preferencií partnerov sa pokusná samica umiestni do neutrálnej stredovej komory trojkomorového zariadenia, v ktorom je partnerský samec uviazaný v jednej bočnej komore a druhý „cudzí“ samec je uviazaný v druhom (Williams a kol., 1992). Experimentálne zviera sa môže voľne pohybovať v komorách a čas strávený v tesnej blízkosti každého samca sa zaznamenáva pomocou automatického systému lámania lúčov (Curtis a Wang, 2005b, a; Lim et al., 2007).

O deň neskôr boli samice znovu párované s rovnakým partnerom počas ďalších 12 hodín spolužitia. Samice sa potom znovu testovali na preferenciu partnera (celkový kontaktný čas 18 hodín). Toto dvojfázové paradigma sa použilo na maximalizáciu našej detekcie uľahčenia testu preferencií partnerov, pretože je potrebná variabilita prahovej doby potrebnej na vytvorenie preferencie partnera. Zvieratá boli považované za zvieratá s preferenciou partnera, ak strávili dvakrát viac času v tesnej blízkosti s partnerom v porovnaní s cudzincom.

Testovanie preferencií partnerov (louka vole)

Typicky lúčne struky z našej kolónie nevytvárajú párovú väzbu po 24hrs expozície. Preto sa pri tomto experimente uskutočňovali testy preferencií partnerov po kohabitácii 24 a ďalších 48 hodín (celkový súčet 72 hodín). Všetky ostatné metódy spracovania a testovania sú rovnaké ako vyššie.

Zber a spracovanie tkanív

Po behaviorálnych pokusoch boli zvieratá po hlbokej anestézii izofluoránom dekapitované. Mozgy sa potom zhromaždili a zmrazili na práškovom suchom ľade. Mozgy boli rozdelené cez NAcc v sérii 6 na 20μm, na kryostat, na diapozitívy Fisher Frost-plus. Sklíčka sa uchovávali pri -80C až do použitia v autorádiografii.

Autorádiografia OTR

Autorádiografia OTR receptora sa použila na stanovenie väzby OTR u zvierat injikovaných AAV. Autorádiografia bola vykonaná tak, ako bolo opísané vyššie s miernymi modifikáciami (Insel a kol., 1991; Wang a Young, 1997). Rezy sa odstránili z -80C skladovania, nechali sa na vzduchu, ponorili sa do 0.1% paraformaldehydu vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom (pH 7.4) a dvakrát sa premyli v pufri 50 mM Tris (pH 7.4) na odstránenie endogénneho OT. Potom sa tkanivo inkubovalo v 50 pM 125I-OVTA (NEX 254050UC PerkinElmer, Waltham, MA) počas jednej hodiny. Nenaviazaný rádioligand sa odstránil štyrmi premytiami v 50mM Tris plus 2% MgCl2 (pH 7.4) a potom sa ponorili do dH20 a vysušený na vzduchu pod prúdom studeného vzduchu. Po vysušení boli sklíčka vystavené BioMax MR filmu (Kodak, Rochester, NY) po dobu 72 hodín. Dve CMV-OTR a jedno CMV-GFP zvieratá boli vylúčené z analýzy správania v dôsledku chýbajúcich injekcií.

GFP Imunohistochémia

Podskupina zvierat (N = 5) injikovaná s CMV-GFP bola perfundovaná transkardiálne s 50 ml PBS, po čom nasledoval 50 ml 4% paraformaldehydu v fosfátovom pufri 0.1 M obsahujúcom 2.5% akroleínu (Polysciences, Warrington, PA). Ihneď po premývaní sa mozgy odstránili a uskladnili pri 4 ° C v roztoku 30% sacharózy až do rozdelenia. Mozgy boli narezané na koronálne rezy 25μm s mraziacim mikrotómom a skladované voľne plávajúce v roztoku kryoprotektantu pri -20 ° C až do imunohistochemického spracovania.

Pre GFP bola spracovaná séria 1: 6 cez rostrocaudálnu os každého mozgu. Stručne, rezy sa odstránili z roztoku kryoprotektantu, dôkladne sa prepláchli vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosforečnanom draselným (pH 7.4) a potom sa nechali reagovať počas 15 minút v borohydride sodnom v blanhydride 1, aby sa odstránili nadbytočné aldehydy. Rezy sa potom inkubovali v primárnom roztoku protilátky namierenom proti GFP vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosforečnanom draselným (KPBS) obsahujúcom 0.1% Triton-X počas 1 hodiny pri teplote miestnosti, po čom nasledovali 48 hodiny pri 4 ° C. Bunky obsahujúce GFP boli identifikované s použitím polyklonálnej králičej anti-GFP protilátky (kat. Č. A6455, Invitrogen, Carlsbad, CA) v koncentrácii 1: 100,000. Po inkubácii s primárnou protilátkou sa tkanivo prepláchlo v KPBS, inkubovalo sa 1 hodinu v biotinylovanom kozom anti-králičom IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) pri koncentrácii 1: 600 a opláchlo sa v KPBS, nasledovalo 1- hodinová inkubácia v komplexe avidín-biotín peroxidáza (ABC Elite Kit PK-6100 Vector, Burlingame, CA) pri koncentrácii 1: 200. Po opláchnutí v KPBS a Tris pufri (pH 7.2) sa GFP vizualizoval ako hnedý reakčný produkt použitím 3,3-diaminobenzidínu obsahujúceho 0.08% peroxidu vodíka v Tris pufri. Reakčný produkt bol ukončený po približne 20 minútach opláchnutím v Tris pufri. Rezy sa umiestnili z fyziologického roztoku na podložné sklíčka so želatínou, vysušili na vzduchu, dehydratovali v sérii odstupňovaných alkoholov, vyčistili v Histoclear (National Diagnostics, Atlanta, GA) a zakryli sa použitím Krystalon (EMD Chemicals, Gibbstown, NJ).

Štatistická analýza

Údaje sú uvedené ako priemer ± štandardná chyba priemeru (SEM). Bola uskutočnená obojsmerná RM ANOVA s použitím času stráveného s každým stimulačným zvieraťom ako závislou premennou, pričom faktor medzi subjektmi bol partner alebo cudzinec, a liečebná skupina ako faktor medzi subjektmi. Holm-Sidakov test sa použil na post hoc párové porovnanie, keď sa zistil významný interakčný efekt. Jedným zo spôsobov, ako boli ANOVA spustené na aloparentnom a párení pre prérijnej hraboše. Správanie, ktoré nespĺňalo kritériá normality, sa analyzovalo pomocou Kruskal-Wallisovej jednosmernej analýzy odchýlky v hodnotách. Na stanovenie skupinových rozdielov v podiele zvierat vykazujúcich aloparentné správanie sa použil Fisherov exaktný test. Správanie pri párení hraboša lúčneho sa analyzovalo pomocou t-testu a Mann-Whitneyho Rank Sum testu, keď test normality zlyhal.

VÝSLEDKY

Alloparental správanie v Prairie Voles

Podiel CMV-OTR injikovaných samíc prérie hraboša vykazujúcich aloparentné správanie (3/9) sa nelíšil od kontrolných (4/15) alebo fingovaných hrabošov (3/10) (p> 0.5; Obrázok 1A). Mláďatá napadli dve CMV-OTR, štyri CMV-GFP kontroly a dve falošné samice, ktoré boli zaradené do kategórie non-alloparental. Latencia na priblíženie mláďat (Obrázok 1B) a čas strávený olizovaním / úpravou sa tiež medzi skupinami významne nelíšil (H = 0.31, P> 0.8 pre latenciu, H = 0.40, P> 0.8 pre úpravu). Keď sa porovnali iba zvieratá, ktoré dosiahli kritériá aloparentnosti, latencia priblíženia sa k mláďatám u CMV-OTR žien (140.2 ± 65.2 sekundy) sa nelíšila od CMV-GFP (62.5 ± 39.3 sekundy) alebo fingovanej (169.4 ± 51.7 sekundy) ) ženy (F (2,7) = 1.27, p> 0.3). Nebol tiež žiadny rozdiel v množstve času, ktoré aloparentné ženy CMV-OTR strávili lízaním mláďat v porovnaní s aloparentnými CMV-GFP alebo fingovanými ženami (F (2,7) = 1.94, p> 0.2; Obrázok 1C). Celkový čas, ktorý každá skupina strávila olizovaním / úpravou, vznášaním sa a nosením mláďat, sa tiež nelíšila medzi aloparentným CMV-OTR (695.2 ± 77.1 sekundy) CMV-GFP (387.5 ± 132.7 sekundy) alebo fingovaným (503.8 ± 82.8 sekundy) ) zvieratá (F (2,7) = 1.98, p> 0.2).

Obrázok 1  

Alloparentálne správanie v ženských prériách CMV-GFP a CMV-OTR. A) Neexistoval žiadny účinok liečby na podiel žien v každej liečenej skupine, ktorá vykazovala aloparentálne správanie. Tmavé stĺpce predstavujú percento zvierat, ktoré ...

Párenie správania v Prairie Voles

Párovacie správanie nebolo významne ovplyvnené predchádzajúcou chirurgickou liečbou žien. Latencia k prvej intromisii sa signifikantne nelíšila u mužov spárovaných s CMV-OTR ženami v porovnaní s mužmi spárenými s CMV-GFP alebo fingovanými ženami (H = 5.043, p = 08; Obrázok 2A). Aj keď skupina CMV-OTR mala tendenciu páriť sa skôr ako ostatné skupiny, nepárila sa častejšie. Počet párení v prvej hodine sa nelíšil u párov obsahujúcich samice CMV-OTR od párov obsahujúcich CMV-GFP alebo fingovaných samíc (F (2,31) = 0.46, p> 0.6; Obrázok 2B).

Obrázok 2  

Správanie párenia a preferencie partnerov v simulovaných, CMV-GFP a ženských prériách CMV-OTR. Latencia prvej intromisie (A) a počet páriacich záchvatov (B) sa medzi skupinami významne nelíšili. C) Po období spolužitia v hodine 6 ...

Partner Preference Behavior v Prairie Voles

Po období spolužitia 6 hr žiadna zo skupín nezobrazila významnú preferenciu partnerov (Obrázok 2C). Nezistil sa žiadny hlavný účinok liečby (F (2,31) = 0.56, p> 0.5) alebo času stráveného s partnerom oproti cudzincovi (F (1,31) = 0.46, p> 0.5). Po ďalších 12 hodinách spolužitia nedošlo k žiadnemu hlavnému účinku liečby (F (2,29) = 78, p = 0.5) alebo k času strávenému s partnerom oproti cudzincovi (F (1,29) = 3.71). , p = 0.06). Avšak došlo k významnému interakčnému efektu (F (2,29) = 5.56, p = 0.009). Post-hoc test odhalil, že ženy CMV-OTR trávili podstatne viac času v tesnej blízkosti partnera ako cudzinca (p <0.001; Obrázok 2D). Avšak CMV-GFP a fingované ženy nedokázali po tomto časovom období preukázať partnerskú preferenciu (p> 0.05; Obrázok 2D). Okrem toho, 80% CMV-OTR injikovaných voles dosiahla kritériá preferencie partnera, tj strávila dvakrát viac času s partnerom ako cudzinec, v porovnaní s iba 31% injikovaných CMV-GFP a 44% simulovaných zvierat (Obrázok 2E, F).

OTR a GFP výraz v NAcc Prairie Voles

Na stanovenie umiestnenia injekcie AAV a overenie, či vektor CMV-OTR vyústil do zvýšenia väzby OTR v porovnaní s kontrolami, bola vykonaná autorádiografia. Ako už bolo uvedené, v NAcc kontrolných CMV-GFP prairie voles bola signifikantná individuálna odchýlka väzby OTR v NAcc (Obrázok 3A, B). V NAcc CMV-OTR injektovaných prérijných voles boli zistené výrazné zvýšenia väzby OTR.Obrázok 3C). Okrem toho sa na mozgových rezoch zvierat CMV-GFP uskutočnila imunohistochémia GFP, aby sa určil rozsah expresie v neurónoch NAcc. Bolo zistené jasné značenie buniek neuronálnymi charakteristikami, čo potvrdzuje, že vektory CMV AAV riadili expresiu v neurónoch (Obrázok 3E, F).

Obrázok 3  

Analýza expresie OTR a GFP v CMV-OTR a ženských prériách CMV-GFP. Hustota OTR bola stanovená pomocou autorádiografie receptora. A, B) V NAcc CMV-GFP samíc bola signifikantná odchýlka v hustote väzby OTR. To je v kontraste ...

Správanie párenia v lúke

Medzi ošetrenými skupinami u hraboša lúčneho neboli pozorované významné rozdiely v správaní pri párení. Latencia do prvej intromisie sa nelíšila u mužov spárovaných s CMV-OTR (1245.1 ± 1465.9 sekúnd) ženami v porovnaní s mužmi spojenými s kontrolnými CMV-GFP (566.6 ± 989.8 sekúnd) ženami (T = 128.0, p> 0.2). Počet párení v prvej hodine sa tiež nelíšil u párov obsahujúcich samice CMV-OTR (6.8 ± 5.1) od párov obsahujúcich samice CMV-GFP (9.5 ± 4.4) (t = 1.42, p> 0.1).

Partner preferencie v lúke voles

Po období spolužitia 24hr žiadna zo skupín nezobrazila významnú preferenciu partnerov (Obrázok 4A). Nebol zaznamenaný žiadny hlavný účinok liečby (F (1,20) = 0.19, p> 0.6) alebo času stráveného s partnerom oproti cudzincovi (F (1,20) = 0.09, p> 0.7). Po ďalších 48 hodinách spoločného života opäť nedošlo k významnému hlavnému účinku liečby (F (1,19) = 65, p> 0.4) alebo času stráveného s ktoroukoľvek ženou (F (1,19) = 0.62, p> .4; Obrázok 4B).

Obrázok 4  

Správanie partnerských preferencií ženských lúčnych húb po 24 hr kohabitácii (A) a po kulminačnom 72 hodinovom kohabitácii (B). Samice, ktorým boli injikované CMV-OTR a CMV-GFP, nepreukázali preferencie partnerov. S partnerom strávili rovnaký čas ...

OTR výraz v NAcc lúčnych voles

Lukové hraby s CMV-GFP vstrekovaním mali malú alebo žiadnu väzbu OTR v NAcc (Figure5A). Naproti tomu, CMV-OTR vstrekované lúčne hrabosy mali signifikantnú väzbu OTR v NAcc, porovnateľnú s väzbou na prérijne voles (Obrázok 5B).

Obrázok 5  

Autorádiografia receptora ilustrujúca OTR väzbovú hustotu v NAcc CMV-OTR (A) a CMV-GFP (B) lúčnych volách. Všimnite si, že CMV-GFP samičie lúky mali malé alebo žiadne OTR viazanie v NAcc. Avšak väzba OTR v NAcc bola dramaticky zvýšená ...

DISKUSIA

Rozdiely v hustote OTR v NAcc boli spojené s druhovými rozdielmi v stratégii párenia (sociálna monogamia vs polygamia) a aloparentálne správanie, čo naznačuje, že variácie v expresii OTR receptora môžu byť základom druhových rozdielov v sociálnej organizácii a správaní (Insel a kol., 1991; Young a Wang, 2004; Olazabal a Young, 2006b). Sociálne monogamné prairie voles majú vyššie hustoty OTR v NAcc ako non-monogamické lúky a montánne voles a farmakologická blokáda týchto receptorov zabraňuje vytváraniu partnerských preferencií vyvolaných párením (Young a kol., 2001; Olazabal a Young, 2006b). Tam je tiež významné individuálne variácie v hustote OTR v NAcc v prériách voles (Obrázok 3A, B). Hustota OTR v tejto oblasti pozitívne koreluje s individuálnou variáciou aloparentálneho správania dospelých pohlavne naivných ženských prérijných voliér (Young, 1999; Olazabal 2006) a podávanie antagonistov OTR do NAcc eliminuje toto správanie (Olazabal a Young, 2006a). Preto sme sa v tejto štúdii snažili priamo otestovať vzťah medzi hustotou receptora v NAcc a afiliatívnom správaní v hraboch pomocou AAV prenosu génov.

Naše výsledky ukazujú, že, ako sa predpokladalo, samičie prérie so zvýšenými hladinami OTR v NAcc vykazujú zrýchlenú tvorbu preferencií partnerov v porovnaní so ženami s nižšou hustotou OTR (CMV-GFP alebo shams). Cna rozdiel od našej predpovede nebol rozdiel v aloparentálnom správaní medzi skupinami, čo svedčí o diferenciálnych mechanizmoch, pomocou ktorých akumulátorová OTR reguluje tvorbu preferencií partnerov a aloparentálne správanie. Naše výsledky podporujú hypotézu, že individuálne rozdiely v expresii OTR prispievajú k vnútrodruhovým variáciám v niektorých aspektoch afiliatívneho správania. Zvýšenie expresie OTR v NAcc však nestačilo na vyvolanie tvorby preferencií partnerov na lúčnych hrách, dokonca ani po 72 hodinách spolužitia, čo naznačuje, že rozdiely medzi druhmi v samotnom akumulovanom OTR nie sú dostatočné na vysvetlenie rozdielov v druhoch v schopnosti tvoriť partnera. preferencie. Je dôležité poznamenať, že v žiadnom z testovaných parametrov neboli žiadne rozdiely v párovaní. Zvýšená preferencia partnerov v experimentálnych prériách sa preto nemôže pripísať zvýšenej sexuálnej aktivite počas počiatočného obdobia spolužitia.

Dospelé samice prérie voles vykazujú pozoruhodné individuálne variácie v ich zobrazení aloparentálnej starostlivosti. O 50% pohlavne naivných žien spontánne získa, líza / ženícha a vznáša sa nad mláďatami, ktoré im boli predložené (Lonstein a De Vries, 1999; Bales a Carter, 2003; Olazabal a Young, 2005). Existuje tiež významná individuálna odchýlka v hustote OTR v NAcc medzi prérijnými volmi (Young, 1999). Samice s vyššími hustotami OTR v NAcc s väčšou pravdepodobnosťou vykazujú aloparentálnu odozvu než zvieratá s nižšou OTR v tejto oblasti. Bolo teda prekvapujúce, že zvýšenie hustoty OTR v NAcc prérijných volejov nezlepšilo aloparentálne správanie. Skutočnosť, že tieto zvieratá vykazovali zrýchlenú tvorbu preferencií partnerov, naznačujú, že OTR odvodený z vírusového vektorového transgénu bol funkčne spojený s signálnymi transdukčnými dráhami v NAcc.

Predpokladáme, že individuálna variácia v aktivácii OTR v NAcc počas vývoja môže hrať dôležitejšiu úlohu pri produkcii vnútrodruhovej variácie v aloparentálnom správaní. Pozitívna korelácia v hustote OTR v NAcc a aloparentálnom správaní sa ukázala u mladistvých prérijných voles aj dospelých (Olazabal a Young, 2006b, a). Zdá sa, že aloparental správanie v prérijných volách je obzvlášť citlivé na poruchy počas vývoja. Napríklad perinatálna expozícia OT mení aloparentálne správanie v ženských prériách.Bales a kol., 2007). Preto jedinci s vyššími hustotami OTR počas vývoja môžu zaznamenať zvýšenú OTR signalizáciu v NAcc, čo vedie k dlhodobým neurochemickým zmenám, ktoré zvyšujú pravdepodobnosť zobrazenia aloparentálneho správania sa, keď sa stanú dospelými. Ak je táto hypotéza správna, predpokladáme, že zvýšenie expresie OTR v novorodeneckom novorodeneckom prostredí by zvýšilo frekvenciu aloparentálneho správania.

Ďalším vysvetlením zlyhania zvýšenia expresie OTR v NAcc na zvýšenie aloparentálneho správania je, že zmena expresie OTR vo viacerých oblastiach mozgu môže byť nevyhnutná na dosiahnutie očakávanej diverzity v správaní. Napríklad expresia OTR v laterálnej priehradke negatívne koreluje s aloparentálnym správaním (Olazabal a Young, 2006a). Nakoniec je tiež možné, že variácia v expozícii hormónom alebo v sociálnych skúsenostiach ovplyvňuje OTR hustotu v NAcc okrem zmeny aloparentálneho správania. Napríklad prítomnosť alebo neprítomnosť otca počas vývoja alebo perinatálnej manipulácie so steroidnými hormónmi môže ovplyvniť zobrazenie aloparentálnej reakcie u ženských prérií (Roberts a kol., 1996; Roberts a kol., 1998; Lonstein a De Vries, 2000).

V mužských prériách hrá vasopresín rozhodujúcu úlohu pri zobrazovaní otcovského správania, ako aj pri tvorbe partnerských preferencií, čo je paralelné s úlohou oxytocínu u žien (Winslow a kol., 1993; Wang a kol., 1994). Farmakologické štúdie špecifické pre dané miesto dokazujú, že V1aR vo ventrálnej pallidum, hlavný výstup NAcc, je kritický pre tvorbu párových väzieb (Lim a Young, 2004). Zvýšenie V1aR vo ventrálnom palideum pomocou prenosu génov sprostredkovaného vírusovým vektorom urýchľuje tvorbu preferencií u samcov prérijných volejov (Pitkow a kol., 2001), zistenie, ktoré je paralelné so súčasnou štúdiou. Napriek tomu, že nadmerná expresia V1aR v ventrálnej palideum samčích lúčnych svalov nebola dostatočná na vyvolanie otcovského správania, podporovala preferencie partnerov (Lim et al., 2004); na rozdiel od toho, v tejto štúdii nadmerná expresia OTR v NaCC nestimulovala tvorbu preferencií partnerov v ženských lúkach.

Existuje niekoľko potenciálnych vysvetlení pre zlyhanie samičieho lúčneho svalu so zvýšeným OTR v NAcc na vytvorenie preferencií partnerov. Po prvé, druhové rozdiely v uvoľňovaní OT v rámci NAcc počas párenia sa môžu líšiť medzi ženskými prérijnými volmi a lúčnymi volmi. Hoci lokalizácia OTR sa medzi druhmi líši, prérijné voles a lúčne voles majú OT-imunoreaktívne vlákna v NAcc (Ross a Young, nepublikované údaje). In vivo Experimenty s mikrodialýzou ukázali, že párenie stimuluje uvoľňovanie OT v NAcc ženských prérijných voles, ale paralelné štúdie sa neuskutočnili na lúčnych hrách (CD Cole a Young, nepublikované údaje). Je možné, že infúzia OT do zvierat ošetrených CMV-OTR by uľahčila tvorbu preferencií partnerov na lúke. Treba však poznamenať, že u potkanov a oviec zvyšuje vaginálna stimulácia centrálne uvoľňovanie OT (Kendrick a kol., 1986; Sansone a kol., 2002). Preto je pravdepodobné, že lúčne hraboše už zažívajú nárast akumulovaných OT s párením. Ďalším vysvetlením zlyhania expresie NAcc OTR stimulovať tvorbu partnerských preferencií u samičieho lúčneho svalu je, že pre párové väzby sú potrebné aj druhové rozdiely v expresii OTR v iných oblastiach mozgu. Napríklad hustota OTR je tiež vyššia v prefrontálnom kortexe a laterálnej amygdale v prérijných volách v porovnaní s neogogamálnymi druhmi vole (Insel a kol., 1991; Young a kol., 1996; Smeltzer a kol., 2006). Zvýšená expresia OTR na viacerých miestach môže byť preto nevyhnutná na stimuláciu partnerských preferencií vyvolaných párením na lúke. Nakoniec je možné, že viacnásobné neurochemické rozdiely medzi druhmi sú zodpovedné za druhové rozdiely v správaní (napr. Dopamín, faktor uvoľňujúci kortikotropín) (Gingrich a kol., 2000; Liu a Wang, 2003; Smeltzer a kol., 2006; Lim et al., 2007).

Existuje niekoľko dôležitých námietok nášho experimentálneho prístupu, ktoré si vyžadujú diskusiu. Po prvé, CMV-OTR pravdepodobne zvyšuje expresiu OTR vo všetkých typoch buniek v oblasti injekcie, vrátane neuronálnych populácií, ktoré normálne nereagujú na OT. Je však možné, že transgénny OTR vyústil do väčšej signalizácie v neurónoch, ktoré normálne exprimujú endogénne OTR z dôvodu zvýšenej senzibilizácie na OT uvoľnenej na tieto neuróny alebo prítomnosti vhodných downstream signálnych molekúl. Po druhé, oblasť expresie transgénu produkovaná infúziou vírusového vektora nebola jednotne exprimovaná v celom rozsahu rostrálno-kaudálneho alebo stredne laterálneho rozsahu NAcc. V samičkách CMV-OTR bola expresia OTR konzistentne zvýšená v oblasti plášťa a priľahlých jadrových oblastiach NAcc. Treba však poznamenať, že shell NAcc sa najviac podieľa na regulácii tvorby partnerských preferencií a hustota OTR v tejto oblasti je silnejšie korelovaná s aloparentálnym správaním ako jadrová oblasť.

Toto je prvá štúdia, ktorá má presvedčivo preukázať, že variácia v expresii OTR v mozgu môže prispieť k zmenám v sociálnom správaní. OT sa vo veľkej miere podieľa na regulácii niekoľkých správaní, vrátane spracovania sociálnych informácií a pamäte, výberu partnera, výchovy a väzby matky (Dantzer a kol., 1987; Kendrick, 2000; Ferguson a kol., 2001; Kavaliers a kol., 2003). V súčasnosti existuje jasný dôkaz, že OT moduluje aj ľudskú sociálnu kogníciu, vrátane interpersonálnej dôvery, očí, očí a vnímania emócií (Kosfeld a kol., 2005; Domes a kol., 2007; Guastella a kol., 2008; Savaskan a kol., 2008). Podávanie OT zvyšuje retenciu sociálnej kognície pri úlohe intonácie hlasu u autistických subjektov (Hollander a kol., 2007), a niekoľko genetických štúdií uviedlo mierne asociácie medzi nekódujúcimi polymorfizmami génu OTR a poruchou autistického spektra (Wu a kol., 2005; Jacob a spol., 2007; Lerer a kol., 2007; Yrigollen a kol., 2008). Informácie o distribúcii OTR sú obmedzené a nie je známe nič, čo sa týka individuálnej zmeny hustoty OTR v ľudskom mozgu. Naše výsledky naznačujú, že rozdiely v hustote OTR v špecifických oblastiach mozgu môžu prispieť k individuálnym rozdielom v sociálnej kognitívnej funkcii u ľudí.

Poďakovanie

Autori chcú poďakovať Lorre Mathewsovej za jej vynikajúcu prácu pri riadení našej kolónie. Táto štúdia bola podporená NIH grantmi MH064692 na LJY, RR00165 na Yerkes National Primates Research Center a NSF STC IBN-9876754.

REFERENCIE

  1. Balíky KL, Carter CS. Pohlavné rozdiely a vývojové účinky oxytocínu na agresiu a sociálne správanie v prérijných volách (Microtus ochrogaster) Horm Behav. 2003, 44: 178-184. [PubMed]
  2. Bales KL, van Westerhuyzen JA, Lewis-Reese AD, Grotte ND, Lanter JA, Carter CS. Oxytocín má na dávke závislé vývojové účinky na párovú väzbu a aloparentálnu starostlivosť v ženských prériách. Horm Behav. 2007, 52: 274-279. [Článok bez PMC] [PubMed]
  3. Curtis JT, Wang Z. Zapojenie ventrálnej tegmentálnej oblasti do párového spojenia v mužských prériách. Physiol Behav. 2005; 86: 338-346. [PubMed]
  4. Curtis JT, Wang Z. Zapojenie glukokortikoidného receptora do párového spojenia v ženských prériách: účinky akútnej blokády a interakcií s centrálnymi systémami odmeňovania dopamínu. Neuroscience. 2005b; 134: 369-376. [PubMed]
  5. Dantzer R, Bluthe RM, Koob GF, Le Moal M. Modulovanie sociálnej pamäte u samcov potkanov neurohypofyálnymi peptidmi. Psychofarmakológia (Berl) 1987, 91: 363 – 368. [PubMed]
  6. Domes G, Heinrichs M, Michel A, Berger C, Herpertz SC. Oxytocín u ľudí zlepšuje „čítanie mysle“. Biol Psychiatria. 2007, 61: 731-733. [PubMed]
  7. Ferguson JN, Aldag JM, Insel TR, Young LJ. Oxytocín v mediálnej amygdale je nevyhnutný pre sociálne rozpoznanie u myši. J Neurosci. 2001, 21: 8278-8285. [PubMed]
  8. Gingrich B, Liu Y, Cascio C, Wang Z, Insel TR. Dopamínové receptory D2 v nucleus accumbens sú dôležité pre sociálnu väzbu v ženských prériách.Microtus ochrogaster) Behav Neurosci. 2000, 114: 173-183. [PubMed]
  9. Gruderadams S, Getz LL. Porovnanie systému párenia a otcovského správania v roku 2006. \ T Microtus ochrogaster a Microtus pennsylvanicus, Journal of Mammalogy. 1985, 66: 165-167.
  10. Guastella AJ, Mitchell PB, Dadds MR. Oxytocín zvyšuje pohľad do oblasti očí ľudských tvárí. Biol Psychiatria. 2008, 63: 3-5. [PubMed]
  11. Hollander E, Bartz J, Chaplin W, Phillips A, Sumner J, Soorya L, Anagnostou E, Wasserman S. Oxytocin zvyšuje retenciu sociálneho poznávania v autizme. Biol Psychiatria. 2007, 61: 498-503. [PubMed]
  12. Insel TR, Shapiro LE. Distribúcia oxytocínového receptora odráža sociálnu organizáciu v monogamných a polygamných hraboch. Proc Natl Acad Sci US A. 1992: 89: 5981 – 5985. [Článok bez PMC] [PubMed]
  13. Insel TR, Gelhard R, Shapiro LE. Porovnávacia distribúcia receptorov predného mozgu pre neurohypofyzálne peptidy u monogamných a polygamných myší. Neuroscience. 1991, 43: 623-630. [PubMed]
  14. Jacob S, Brune CW, Carter CS, Leventhal BL, Lord C, Cook EH., Jr Asociácia génu oxytocínového receptora (OXTR) u kaukazských detí a dospievajúcich s autizmom. Neurosci Lett. 2007, 417: 6-9. [Článok bez PMC] [PubMed]
  15. Kavaliers M, Colwell DD, Choleris E, Agmo A, Muglia LJ, Ogawa S, Pfaff DW. Poškodená diskriminácia a averzia voči parazitovaným mužským pachom u samíc myší s vyradeným oxytocínom. Gény Brain Behav. 2003, 2: 220-230. [PubMed]
  16. Kendrick KM. Oxytocín, materstvo a väzba. Exp Physiol. 2000; 85 (Spec No): 111S – 124S. [PubMed]
  17. Kendrick KM, Keverne EB, Baldwin BA, Sharman DF. Hladiny cerebrospinálnej tekutiny acetylcholinesterázy, monoamínov a oxytocínu počas pôrodu, pôrodov, vaginocervikálnej stimulácie, separácie jahniat a sania u oviec. Neuroendokrinologie. 1986, 44: 149-156. [PubMed]
  18. Kosfeld M, Heinrichs M, Zak PJ, Fischbacher U, Fehr E. Oxytocín zvyšuje dôveru v ľudí. Nature. 2005, 435: 673-676. [PubMed]
  19. Lerer E, Levi S, Salomon S, Darvasi A, Yirmiya N, Ebstein RP. Asociácia medzi génom oxytocínového receptora (OXTR) a autizmom: vzťah k váham Vineland Adaptive Behavior Scales a kognícia. Mol Psychiatria. 2007 [PubMed]
  20. Lim MM, Young LJ. Vazopresín-dependentné nervové obvody tvoriace párové väzby v monogamnom prérijnom vole. Neuroscience. 2004, 125: 35-45. [PubMed]
  21. Lim MM, Wang Z, Olazabal DE, Ren X, Terwilliger EF, Young LJ. Zvýšená preferencia partnera v promiskuitnom druhu manipuláciou expresie jedného génu. Nature. 2004, 429: 754-757. [PubMed]
  22. Lim MM, Liu Y, Ryabinin AE, Bai Y, Wang Z, Young LJ. CRF receptory v nucleus accumbens modulujú preferenciu partnera v prérijných volách. Horm Behav. 2007, 51: 508-515. [Článok bez PMC] [PubMed]
  23. Liu Y, Wang ZX. Nukleus accumbens oxytocín a dopamín interagujú a regulujú tvorbu párových väzieb u ženských prérií. Neuroscience. 2003, 121: 537-544. [PubMed]
  24. Lonstein JS, De Vries GJ. Pohlavné rozdiely v rodičovskom správaní dospelých panenských prairie voles: nezávislosť od gonádových hormónov a vazopresínu. J Neuroendokrinol. 1999, 11: 441-449. [PubMed]
  25. Lonstein JS, De Vries GJ. Vplyv gonádových hormónov na vývoj rodičovského správania u dospelých panenských prairie voles (Microtus ochrogaster) Behav Brain Res. 2000, 114: 79-87. [PubMed]
  26. Olazabal DE, Young LJ. Variabilita v „spontánnom“ materinskom správaní je spojená s anxióznym správaním a afiliáciou u naivných juvenilných a dospelých ženských prérií (Microtus ochrogaster) Dev Psychobiol. 2005, 47: 166-178. [PubMed]
  27. Olazabal DE, Young LJ. Druhy a individuálne rozdiely v juvenilnej ženskej aloparentálnej starostlivosti sú spojené s hustotou oxytocínového receptora v striate a laterálnej priehradke. Horm Behav. 2006; 49: 681-687. [PubMed]
  28. Olazabal DE, Young LJ. Receptory oxytocínu v jadre accumbens uľahčujú „spontánne“ materinské správanie dospelých dospelých prérií. Neuroscience. 2006b; 141: 559-568. [PubMed]
  29. Paxinos G, Watson C. Mozog potkana v stereotaxických súradniciach. štvrté vydanie Academic Press; San Diego, CA: 1998.
  30. Pitkow LJ, Sharer CA, Ren X, Insel TR, Terwilliger EF, Young LJ. Uľahčenie afilácie a tvorba párovej väzby väzbou génu vazopresínového receptora do ventrálneho predného mozgu monogamného vole. J Neurosci. 2001, 21: 7392-7396. [PubMed]
  31. Roberts RL, Zullo A, Gustafson EA, Carter CS. Liečba perinatálnymi steroidmi mení aloparentálne a afiliatívne správanie v prériách. Horm Behav. 1996, 30: 576-582. [PubMed]
  32. Roberts RL, Williams JR, Wang AK, Carter CS. Kooperatívny chov a monogamia v prériách: Vplyvy otca a geografické variácie. Anim Behav. 1998, 55: 1131-1140. [PubMed]
  33. Sansone GR, Gerdes CA, Steinman JL, Winslow JT, Ottenweller JE, Komisaruk BR, Insel TR. Vaginocervikálna stimulácia uvoľňuje oxytocín v mieche potkanov. Neuroendokrinologie. 2002, 75: 306-315. [PubMed]
  34. Savaskan E, Ehrhardt R, Schulz A, Walter M, Schachinger H. Post-learning intranazálny oxytocín moduluje ľudskú pamäť pre identitu tváre. Psychoneuroendocrinology. 2008, 33: 368-374. [PubMed]
  35. Smeltzer MD, Curtis JT, Aragona BJ, Wang Z. Dopamín, oxytocín a vazopresínová receptorová väzba v mediálnom prefrontálnom kortexe monogamných a promiskuitných hrabochov. Neurosci Lett. 2006, 394: 146-151. [PubMed]
  36. Wang Z, Young LJ. Ontogenéza väzby oxytocínu a vazopresínového receptora v laterálnej priehradke v prériách a montánnych volách. Brain Res Dev Brain Res. 1997, 104: 191-195. [PubMed]
  37. Wang Z, Ferris CF, De Vries GJ. Úloha invazie septálneho vazopresínu pri otcovskom správaní v prérijných volách (Microtus ochrogaster) Proc Natl Acad Sci US A. 1994: 91: 400 – 404. [Článok bez PMC] [PubMed]
  38. Williams JR, Catania KC, Carter CS. Vývoj partnerských preferencií v ženských prériách (Microtus ochrogaster): úloha sociálnych a sexuálnych skúseností. Horm Behav. 1992, 26: 339-349. [PubMed]
  39. Winslow JT, Hastings N, Carter CS, Harbaugh CR, Insel TR. Úloha centrálneho vazopresínu v párovom viazaní v monogamných prériách. Nature. 1993, 365: 545-548. [PubMed]
  40. Wu S, Jia M, Ruan Y, Liu J, Guo Y, Shuang M, Gong X, Zhang Y, Yang X, Zhang D. Pozitívna asociácia génu oxytocínového receptora (OXTR) s autizmom v čínskej populácii Han. Biol Psychiatria. 2005, 58: 74-77. [PubMed]
  41. Mladý LJ. Frank A. Beach Award. Receptory oxytocínu a vazopresínu a druhovo typické sociálne správanie. Horm Behav. 1999, 36: 212-221. [PubMed]
  42. Young LJ, Wang Z. Neurobiológia párového viazania. Nat Neurosci. 2004, 7: 1048-1054. [PubMed]
  43. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Bunkové mechanizmy sociálnej väzby. Horm Behav. 2001, 40: 133-138. [PubMed]
  44. Young LJ, Huot B, Nilsen R, Wang Z, Insel TR. Druhové rozdiely v expresii génu centrálneho receptora oxytocínu: porovnávacia analýza promótorových sekvencií. J Neuroendokrinol. 1996, 8: 777-783. [PubMed]
  45. Yrigollen CM, Han SS, Kochetkova A, Babitz T, Chang JT, Volkmar FR, Leckman JF, Grigorenko EL. Gény kontrolujúce afiliatívne správanie ako kandidátske gény pre autizmus. Biol Psychiatria. 2008, 63: 911-916. [Článok bez PMC] [PubMed]