Dopaminreceptoruttryck och distribution förändras dynamiskt i råttkärnans accumbens efter uttag från kokain självadministration. (2010)

Proteintvärbindning

Denna metod har beskrivits i detalj tidigare (Boudreau och Wolf, 2005; Ferrario et al., 2010). Råttorna deapiterade, deras hjärnor avlägsnades snabbt och hela NAc (eller kärn- och skalsubregioner) dissekerades på is från en 2mm-koronalsektion erhållen med användning av en hjärnmatris. Hela NAc-vävnaden hakades omedelbart till 400μm skivor med användning av en McIllwain vävnadshackare (Vibratome, St. Louis, MO), medan de mindre kärn- och skalsubregionerna hakades för hand med användning av en skalpell. Tissue tillsattes sedan till Eppendorf-rör innehållande iskall artificiell CSF spikad med 2 mM bis (sulfosuccinimidyl) suberat (BS³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Tvärbindningsreaktionen fick fortgå för 30 min vid 4 ° C med försiktig omröring och terminerades därefter genom tillsats av 100mM glycin (10 min vid 4 ° C). Vävnad pelleterades genom kort centrifugering, återuppslammades i iskall lysbuffert innehållande proteas- och fosfatashämmare, soncierad för 5 sek och centrifugerades igen. Alikvoter av supernatanten lagrades vid -80 ° C tills de analyserades genom Western blotting.

Western blot-analys av DAR i tvärbunden vävnad

Prover (20-30μg totalt protein / lysat) elektroforesades på 4-15% Tris-HCl-geler (Biorad, Hercules, CA). Proteiner överfördes till polyvinylidenfluoridmembran för immunoblottning med användning av konstant ström (1.15mA) för 1.5 h. En kylspole användes för att förhindra överdriven uppvärmning. Komplett överföring av aggregat med hög molekylvikt bekräftades genom färgning av geler efter överföring med Coomassie Blue. Vidare verifierade vi att tvärbundna DAR-proteiner inte detekterades i stapelgelén (data ej visade). Efter överföring tvättades membran i ddH₂O, lufttorkad för 1h vid rumstemperatur (RT), återhydratiserad med 100% MeOH, tvättades i 1x Tris-buffrad saltlösning (TBS) och nedsänktes i 0.1M NaOH, pH 10 för 15 min vid RT. Därefter tvättades de i TBS, blockerades med 3% bovint serumalbumin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) i TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, för 1h vid RT och inkuberades över natten vid 4 ° C med antikroppar som igenkänner D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P); D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) och D3 DAR (1: 1000; Millipore; Katt # AB1786P). D4- och D5-DAR analyserades inte på grund av brist på antikroppar som igenkände både tvärbundna och intracellulära receptorer. Det bör noteras att DAR-antikroppspartiklarna som användes i dessa experiment köptes i 2005-06; Nuvarande partier av dessa antikroppar (2009-10) visar olika bandningsmönster som inte förändras i vävnad från DAR knockout-möss (obublicerade observationer). Efter inkubation av primär antikropp tvättades membran med TBS-T-lösning, inkuberades för 60 min med HRP-konjugerat anti-kanin IgG eller anti-mus IgG (1: 10,000; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), tvättades med TBS- T sköljdes med ddH₂O och nedsänktes i kemiluminescensdetekterande substrat (Amersham GE, Piscataway, NJ). Efter att blottar utvecklades, togs bilder med Versa Doc Imaging Software (Bio-Rad). Diffusa densiteter av yt- och intracellulära band bestämdes med användning av Quantity One-mjukvaran (Bio-Rad). Värdena för ytnivå, intracellulär och total (yta + intracellulär) proteinnivåer normaliserades till totalt protein i banan bestämd med användning av Ponceau S (Sigma-Aldrich) och analyserades med TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK). Yt / intracellulärt förhållande krävde inte normalisering, eftersom båda värdena bestäms i samma lane. För att undersöka antikroppsspecificitet utfördes preabsorptionsstudier för DAR-antikropparna med peptiden som användes för att alstra varje antikropp. D1-, D2- eller D3 DAR-antikroppen kombinerades med en 10-faldig överskottskoncentration av peptid i 500jll av TBS, blandades för 4-timmar vid 4 ° C, utspäddes till en slutlig volym 20ml, tillsattes till membranet och inkuberades över natten vid 4 ° C.

D1 DARs

Inga signifikanta skillnader mellan kokain och saltlösningsgrupper hittades på WD45. Effekterna av kokain självadministration visade sig emellertid på WD1. Analys av hela NAc indikerade ett signifikant högre D1 DAR-yt / intracellulärt förhållande i WD1-Coc-gruppen jämfört med grupper som självadministrerad saltlösning (Fig. 2a). Detta berodde på en blygsam ökning av yt D1 DAR kombinerat med en blygsam minskning av intracellulära D1 DAR (ingen av dessa senare två effekter var statistiskt signifikanta), i avsaknad av någon förändring av totala D1 DAR-nivåer (yta + intracellulär) (Fig. 2a). Inom NAc-kärnan sågs ingen signifikant effekt för någon D1 DAR-mätning (Fig. 2b). Det visas dock NAc-skalet som liknade dem som observerades i hela NAc men något mer robust (Fig. 2c). Yt / intracellulärt D1 DAR-förhållande ökade i WD1-Coc-gruppen på grund av en signifikant ökning av yt D1 DAR-uttryck. Intracellulära nivåer var oförändrade, men det var en trend mot ökade D1 DAR-nivåer. Sammanfattningsvis uttrycktes en större del av D1 DAR-proteinet yta i NAc-skalet hos WD1-Coc-råttor jämfört med WD1-Sal-råttor. D1 DAR-fördelningen återvände till kontrolltillståndet efter 45-dagar med återkallande från kokain självadministration.

Fig 2

D1 DAR-ytuttrycket ökades i NAc-skalet efter 1-dagen för återtagande från kokain självadministrering

D2 DARs

I hela NAc var den observerade huvudvärdet minskat D2 DAR-uttryck hos råttor att själv administrerad kokain jämfört med saltlösningskontroller (Fig. 3a). Detta var mest uttalat på WD45, när minskningar observerades i ytbandet, alla tre intracellulära banden (~ 55, 75 och 100kDa) och i totalt D2 DAR-nivåer jämfört med saltlösningskontroller. Yt / intracellulärt D2 DAR-förhållande var något men signifikant ökat i WD45-Coc-gruppen på grund av en större minskning av intracellulära än yt D2 DAR, vilket kanske indikerar att cellerna kompenserar för minskat D2 DAR-uttryck genom att fördela en större del av tillgängliga D2 DAR till ytan. Det är viktigt att komma ihåg att det förhöjda ytan / intracellulära förhållandet inte föreslår ökad D2 DAR-sändning i detta speciella fall, eftersom den absoluta nivån av ytuttryckta D2 DAR sänktes. I WD1-Coc-gruppen var den enda signifikanta effekten en minskning av intracellulära nivåer av D2 DAR-monomeren (~ 55kDa) jämfört med både WD45-Sal och WD1-Sal-grupper, även om flera andra åtgärder tenderade att minska (Fig. 3a).

Fig 3

Intracellulära och yt D2 DAR-nivåer i NAc minskade efter 45-dagar med återkallande från kokain självadministrering

En övergripande minskning av D2 DAR-uttryck var också uppenbart i kärn- och skalsubregioner av NAc (Fig. 3b och 3c, respektive), även om effekter tenderade att vara mer uttalade i skalet. Således minskade ytan D2 DAR-nivåer i kokainrotter endast på WD45 i kärnan, men på WD1 och WD45 i skal. Totalt D2 DAR minskade avsevärt endast i skalet. Minskningar i intracellulära D2 DAR-band uppträdde på båda utdragsdagarna i både kärna och skal, även om det fanns uttags- och regionspecifika skillnader i termer av vilka intracellulärt band visade en statistiskt signifikant effekt. Sammanfattningsvis minskade D2 DAR-ytan och intracellulära proteinnivåerna i NAc efter kokain självadministration. Vissa minskningar var redan uppenbara av WD1.

D1 DAR-ytuttrycket ökar gradvis i NAc-skalet efter avbrytande av kokain självadministration

Efter kokain självadministration ökade D1 DAR-ytaxpressionen i NAc-skalet på WD1 men normaliserades av WD45, medan inga förändringar observerades i kärnan, vilket indikerar en övergående ökning begränsad till skalet. Liknande resultat har erhållits i tidigare studier med användning av receptorautadiadiografi. Ben-Shahar et al. (2007) fann ökad D1 DAR-densitet i NAc-skalet hos råttor 20 min (men inte 14 eller 60 dagar) efter avbrytande av utökad åtkomst (6 hr / dag) kokain självadministration, medan inga förändringar observerades i kärnan eller efter kort åtkomst kokain själv -administration (2 hr / dag). Nader et al. (2002) observerade en liten ökning av D1 DAR-densiteten i skalet men inte kärnan av rhesusapa som dödades efter den sista 100-kokainens självadministrationssessioner. Apor som utvärderades 30 dagar efter avbrytande av samma behandling visade ökad D1 DAR-densitet i rostral NAc och i både kärna och skal vid mer caudala nivåer, men D1 DAR-densitet hade normaliserats med 90-dagar (Beveridge et al., 2009). Alla dessa resultat, som vår, indikerar en övergående ökning av D1 DAR-nivåerna, särskilt i skalet, efter att ha upphört med självständig kokain. En tidigare studie av denna grupp indikerade emellertid en minskning av D1 DAR-densiteten i den mest robusta i näsan av rhesusapa som hade självförvaltad kokain under en mycket längre tidsperiod (18 månader; Moore et al., 1998a). Minskad D1 DAR-bindning i NAc hittades också 18-tim efter avbrytande av en utvidgad åtkomstregim hos råttor, även om totalt kokainintag i denna studie var högre än i råttstudier som diskuterats ovan (De Montis et al., 1998). Dessa resultat tyder på att D1 DAR-anpassningar beror på många aspekter av kokainexponering. En annan övervägning är att receptorautoradiografi mäter totala cellreceptorer, medan våra proteintvärbindningsexperiment kan skilja mellan yt- och intracellulära receptorer. Intressant visade en immunoblottningsstudie en trend mot ökade D1 DAR-nivåer i NAc av humana kokainanvändare (Worsley et al., 2000).

Är den transienta ökningen i D1 DAR-ytaxpression som vi observerade i NAc-skalet viktigt för inkubationen av cue-inducerad kokainbehov? Detta är svårt att bedöma, eftersom inga studier har testat effekten av intra-NAc-injektion av D1 DAR-agonister eller antagonister på cue-inducerad kokain som söker efter hemburstillfällning (eller cue-inducerad återinställning av kokain som söker efter utrotningsträning). D1-receptorer i medial NAc (skal och medial kärna) är emellertid inblandade i kokainprimerad återinställning av kokain som söker efter utrotning, tydligen genom en mekanism som kräver kooperativ aktivering av D1 och D2 DARs (Anderson et al., 2003; 2008; Bachtell et al., 2005; Schmidt och Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Tillsammans med våra resultat kan detta tyder på att neuroner i NAc-skalet är mer mottagliga för D1 DAR-medierad kokain som söker i tidigt tillbakadragande på grund av övergående D1R-uppreglering. Försiktighet måste emellertid användas vid extrapolering från återinförsel till inkubationsstudier, eftersom utrotningsträning och hemkorgsavbrott är associerade med olika neuroadaptationer i NAc (Sutton et al., 2003; Ghasemzadeh et al., 2009; Wolf och Ferrario, 2010). Det är viktigt att notera att D1 DAR i den basolaterala amygdala och prefrontal cortex är också viktiga för cue-inducerad återinställning av kokainsökning (t.ex. Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt et al., 2006; Berglind et al., 2006).

På cellulär nivå kan både presynaptiska och postsynaptiska DAR-moduler modulera excitabiliteten hos medelstarka nervceller, den dominerande celltypen och utgående neuron hos NAc (Nicola et al., 2000; O'Donnell, 2003). Upprepad icke-kontingent kokainadministration är känd för att förbättra vissa effekter av D1 DAR-aktivering i NAc. Således observerades en dag till en månad efter avbrytande av kokainbehandling ökad förmåga hos D1 DAR-agonister att hämma aktiviteten hos medelstora nervceller (driven av jontoforetiskt glutamat) i hela NAc (Henry och White, 1991; 1995). Det här är dock inte troligt att det ökade D1 DAR-ytuttrycket som rapporteras här kommer att förklara dessa tidigare resultat eftersom det är begränsat till skalet och endast har visats på WD1. En dag efter att en kokainutmaning gav 10-14 dagar efter att ha avbrutit upprepade kokaininjektioner, Beurrier och Maleka (2002) observerade en förbättring av DA-medierad inhibering av excitatoriska synaptiska svar i NAc-mediumspina neuroner som tydligen medierades av presynaptiska D1-liknande DAR på glutamat-nervterminaler. Dock möjliga effekter av utmaningsinjektionen (till exempel se Boudreau et al., 2007 och Kourrich et al., 2007), i kombination med artskillnader och brist på inspelningar i kärnan, gör det svårt att jämföra sina resultat till våra egna. Det bör också noteras att DAR-agonisterna och antagonisterna som används av Henry och White (1991; 1995) och Beurrier och Malenka (2002) skilde inte mellan D1 och D5 DARs.

D2 DAR-nivåerna minskar i NAc efter avbrytande av kokain självadministration

Den huvudsakliga effekten som observerades i vår studie var en minskning av D2 DAR-proteinet i både NAc-kärnan och skalet efter avbrytande av kokain självadministration i förhållande till saltlösningskontroll. Detta var mer uttalat i skalet, där intracellulära, yt- och totala band minskade på både WD1 och WD45. I kärnan minskade D2 DAR-ytaxpressionen enbart på WD45 och totala D2 DAR-nivåer minskade inte signifikant. Flera andra studier har på liknande sätt funnit minskat D2 DAR-uttryck efter avbrytande av kokain självadministration. I rhesusapar med omfattande erfarenhet av kokain självadministrering minskade D2 DAR-densiteten, mätt med receptorautadiadiografi, i många striatala regioner, inklusive NAc-kärna och skal, när vävnad erhölls omedelbart efter den senaste sessionen (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002). Med användning av PET detekterades denna effekt i basalganglierna inom 1-veckan för initiering av kokain självadministrering (Nader et al., 2006). Den takt som D2 DAR-nivåer återhämtar under uttag kan bero på totalt kokainintag. I en autoradiografistudie återhämtade D2 DAR-nivåerna i NAc till kontrollvärden efter 30- eller 90-dagars återtagande från 100-sessioner av kokain självadministration (Beveridge et al., 2009). I en PET-studie av apor med längre exponering (1-år) och därmed högre totalt kokainintag visade 3 av 5-apor återhämtning av D2 DAR-nivåer efter 90-dagar medan 2-apor inte visade någon återhämtning även efter 12-månader (Nader et al., 2006). Sammantaget överensstämmer dessa resultat bra med våra resultat av minskade D2 DAR-nivåer under hela uttagningen.

PET-studier av humana kokainmissbrukare har också funnit reducerade D2 DAR-nivåer i många striatala regioner, inklusive ventralstriatum, som uppenbarades vid tidig avstängning såväl som efter 3-4-månader av avgiftning (Volkow et al., 1990, 1993, 1997). Betydelsen för beteende är emellertid oklart, eftersom D2 DAR-tillgängligheten inte korrelerade med positiva subjektiva effekter av kokain eller beslutet att ta mer kokain efter en primingdos (Martinez et al., 2004). Det är viktigt att notera att medan cueinducerat kokainbehov visar en tidsberoende ökning vid återkallande ("inkubation"), sker detta inte för kokainbaserad kokainsökning (Lu et al., 2004a). Därför resultaten av Martinez et al. (2004) lämna möjligheten att D2 DAR-tillgängligheten kan korrelera med cue-inducerad kokain som söker fokusen för inkubationsmodellen som studeras häri. Låg D2 DAR tillgänglighet hos humana kokainanvändare är korrelerad med minskad frontal kortikal metabolism (Volkow et al., 1993). Tillsammans med andra förändringar kan detta bidra till förlust av kontroll som uppstår när missbrukare utsätts för droger eller drogparametrar, och till ökad läkemedelssäkerhet jämfört med icke-drogbelöningar (Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). Det bör noteras att minskade D2 DAR-nivåer i en PET-studie kan indikera förhöjd DA-frisättning snarare än minskade D2 DAR-nivåer, men nya resultat argumenterar mot denna förklaring när det gäller kokainberoende patienter (Martinez et al., 2009). Vidare fann en postmortemstudie av humana kokainanvändare en trend mot minskad D2 DAR-nivå i NAc med immunoblottning (Worsley et al., 2000).

Studier hos mänskliga kokainmissbrukare kan inte avgöra om minskad tillgänglighet av D2 DAR är ett predisponeringsegenskaper eller ett resultat av kokainexponering, men andra resultat indikerar att båda är sanna. Å ena sidan har experiment i icke-narkotikamissbrukande människor funnit en invers korrelation mellan D2 DAR-tillgänglighet och rapporter om "läkemedelsliknande" när det administreras metylfenidat (Volkow et al., 1999; 2002). Dessa resultat tyder på att tillgången på låg D2 DAR kan öka sårbarheten mot missbruk. En liknande slutsats stöds av studier i rhesus apor. I socialt inhemska apor ökar uppnåendet av social dominans D2 DAR tillgänglighet i striatumen och detta förknippas med lägre känslighet för de förstärkande effekterna av kokain jämfört med underordnade apor (Morgan et al., 2002). Social status är också korrelerad med striatal D2 DAR tillgänglighet i drogfria mänskliga volontärer (Martinez et al., 2010). Å andra sidan visar både PET- och receptorautadiografistudier att långvarig kokain självadministration minskar striatal D2 DAR-receptortillgänglighet i individuellt inrymda apor, som diskuterats ovan (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002; Nader et al., 2006). Kronisk kokain självadministration verkar också minska D2 DAR tillgängligheten hos dominerande socialt inhemska apor (Czoty et al., 2004). Således efter långvarig kokain självadministration var det inte längre signifikanta skillnader i tillgänglighet av D2-receptorer eller förstärkande effekter av kokain mellan dominerande och underordnade apor (Czoty et al., 2004). Emellertid uppstod förhöjda D2 DAR-nivåer hos de dominerande aporna under avhållsamhet och detta korrelerades med längre latens som reaktion på nyhet, ett drag som förutsäger minskad känslighet för kokainens förstärkande effekter (Czoty et al., 2010).

Som hos människor och apor visar råttstudier att låg tillgänglighet för D2 DAR är en riskfaktor för kokainsårbarhet. PET-studier på råttor med hög impulsivitet (ett drag i samband med ökad självständig administrering av kokain) visar således minskad D2 / D3 DAR tillgänglighet i ventralstriatumet (Dalley et al., 2007). D2 DAR-nivåerna i NAc reduceras också hos råttor som visar ett högt lokomotoriskt svar på nyhet, ett annat drag i samband med missbrukssårbarhet (Hooks et al., 1994). Våra resultat i råttor indikerar att minskade D2 DAR-nivåer i NAc kan också vara en följd av upprepad kokainexponering, i överensstämmelse med studier på apor och människor (ovan). Däremot fann två röntgenundersökningar på råttor resultaten som skiljer sig från våra. Ben-Shahar et al. (2007) observerade inte minskade D2 DAR-nivåer i NAc efter uttagning (20 min, 14-dagar i 60 dagar) från en utökad självständig administrationskokain som liknar vår egen (6 hr / dag), även om minskningar observerades i NAc-skalet efter en begränsad åtkomstregim (2 hr / dag) och 14-dagar för återkallande (Ben-Shahar et al., 2007). Stéfanski et al. (2007) fann inga förändringar i D2 DAR-nivåerna i kärnan eller skalet 24 h efter att ha avbrutit begränsad tillgång till kokain självadministration (2 hr / dag), även om D2 DAR-nivåerna minskade i kontrollerad kokainkontroll. Som noterat ovan mäter receptorautadiadiografi totala cellreceptorer, medan PET- och proteintvärbindningsstudier mäter cellytreceptorer.

Sammanfattningsvis stöder studier om förhållandet mellan D2 DAR-nivåer och självständig administration av kokain en modell där D2 DAR normalt begränsar självständig administration av kokain. Därför föreslår vi att de minskade D2 DAR-nivåerna som observerats i våra experiment kan bidra till cueinducerad kokain som söker efter återtag av kokain. I synnerhet var det faktum att D2 DAR-ytaxpression i NAc-kärnan minskades på WD45 men inte WD1 kombinerat med en nyckelroll för NAc-kärnan vid cueinducerad kokainsökning, tyder på att tidsberoende D2 DAR-nedreglering i NAc-kärnan kan bidra till den tidsberoende intensifieringen av cueinducerad kokainsökning. Detta skulle förutsäga att intra-NAc-infusion av en D2-agonist under uttag skulle minska cueinducerad kokainsökning. Tyvärr har inga studier undersökt effekter av intra-NAc D2 DAR-läkemedel i inkubationsmodellen. Å andra sidan visar studier av kokainprimerad återinställning att D1 och D2 DAR i skalet och medialkärnan arbetar tillsammans för att främja kokainsökande (Anderson et al., 2003; Bachtell et al., 2005; Schmidt och Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Baserat på dessa resultat kan det minskade D2 DAR-uttrycket som observerats i våra experiment förutsägas för att minska kokainsökningen, det vill säga producera en effekt som är motsatt till den intrångsberoende intensifieringen som faktiskt observeras. Avvikelsen kan återspegla problem som introduceras genom att generalisera från kokainprimerad återinställning efter utrotningsträning till cue-inducerad kokain som söker efter återkallande.

En tidsberoende ökning av D3 DAR-ytuttrycket förekommer i NAc-kärnan efter avbrytande av kokain självadministration

Studier av D3 DAR-föredragna läkemedel i kokain självadministrations- och återinställningsparadigmer tyder på att D3 DAR-antagonister kan vara användbara vid behandling av kokainberoende och i synnerhet för att minska reaktiviteten gentemot kokainrelaterade signaler (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll et al., 2005; Xi och Gardner, 2007). Dessa resultat innebär att aktivering av D3 DAR av endogen DA kan vara involverad i att mediera cue-inducerad kokainsökning. Våra resultat visar att D3 DAR-ytaxpressionen i NAc-kärnan är oförändrad på WD1 från egenadministration med utökad tillgång till kokain men ökat på WD45 i samband med inkubation av kokainbehov. D3 DAR-ytaxpressionen ökade inte signifikant i skalet, även om det fanns en liten men signifikant ökning av yt / intracellulärt förhållande. Med tanke på rollen av D3 DAR-överföring i svar på kokainrelaterade signaler och betydelsen av kärnan för cueinducerad kokainsökning är det frestande att spekulera på att ökat D3 DAR-ytuttryck i NAc-kärnan bidrog till inkubation av cueinducerad kokain begär som observeras på WD45. Den neurala platsen vid vilken D3 DAR-antagonister verkar för att minska kokainsökning har dock inte fastställts. Specifikt har inga studier undersökt effekten av intra-NAc-injektion av D3 DAR-föredragna läkemedel på cue-inducerad kokainsökning. I en annan modell, Schmidt et al. (2006) fann att injektion av D3-föredragande agonisten PD 128,907 i kärna eller skal gav upphov till återinförande av kokain som söker efter utrotningsträning.

Våra resultat överensstämmer generellt med receptor-autoradiografistudier som uppmätta totala D3 DAR-nivåer i NAc efter kokainexponering. Staley och Mash (1996) rapporterade att D3 DAR-bindningen var högre i NAc för överdosering av kokain jämfört med åldersmatchade kontroller. Efter exponering för kokain i ett konditionerat platspreferensparadigm och tre dagar med återkallelse uppvisade möss ökad D3 DAR-bindning i NAc-kärnan och skalet (Le Foll et al., 2002). Neisewander et al. (2004) uppmätt D3 DAR-bindning hos råttor med omfattande kokain-självadministrationserfarenhet som testades för kokainprimerad återinställning efter olika tillbakadragningsperioder och dödade därefter 24 h senare. D3 DAR-bindningen i NAc var oförändrad på WD1 men ökade efter en längre tid (WD31-32), vilket överensstämde med vår observation av en tidsberoende ökning. Vidare drog en läkemedelsbehandling vid återkallande som reducerade kokainen också försvagningen av D3 DAR-bindningen, vilket tyder på att D3 DAR-uppreglering är funktionellt kopplad till kokainsökande. Det bör noteras att D3 DAR ökar i Neisewander et al. (2004) var signifikanta i kärnan medan endast trender observerades i skal, men subregionerna analyserades i en rostraldel av NAc där kärnan och skalet är mindre distinkta. Vår analys utfördes på kärna och skal från rostral och caudala delar av NAc.

Detta arbete stöddes av DA009621, DA00453 och en NARSAD Distinguished Investigator Award till MEW, DA020654 till MM, och predoctoral National Research Service Award DA021488 till KLC