CRF-CRF1-receptorsystemet i amygdalas centrala och basolaterala kärnämne skiljer på olika sätt överdriven ätning av god mat (2013)

. nov 2013; 38(12): 2456–2466.

Publicerad online 2013 10 juli. Förpublicerad online 2013 10 juni. doi:  10.1038 / npp.2013.147

PMCID: PMC3799065

Abstrakt

Mycket välsmakande livsmedel och bantning är viktiga bidragande faktorer för utvecklingen av tvångsmässigt ätande vid fetma och ätstörningar. Vi har tidigare visat att intermittent tillgång till välsmakande mat resulterar i kortikotropinfrisättande faktor-1 (CRF)1) receptorantagonist-reversibla beteenden, som inkluderar överdrivet välsmakande matintag, hypofagi av vanlig chow och ångestliknande beteende. Hjärnområdena som förmedlar dessa effekter är dock fortfarande okända. Wistar-hanråttor fick antingen foder kontinuerligt i 7 dagar/vecka (Chow-chow grupp), eller matad chow intermittent 5 dagar/vecka, följt av en sackaros, välsmakande diet 2 dagar/vecka (Chow / Välsmakande grupp). Efter kronisk dietväxling, effekterna av mikroinfusion av CRF1 receptorantagonist R121919 (0, 0.5, 1.5 μg/sida) i den centrala kärnan av amygdala (CeA), den basolaterala kärnan av amygdala (BlA), eller bäddkärnan i stria terminalis (BNST) utvärderades vid överdriven intag av den välsmakande kosten, chow-hypofagi och ångestliknande beteende. Vidare utvärderades CRF-immunfärgning i hjärnan hos dietcyklade råttor. Intra-CeA R121919 blockerade både överdrivet välsmakande matintag och ångestliknande beteende i Chow / Välsmakande råttor, utan att påverka chow-hypofagi. Omvänt minskade intra-BlA R121919 chow-hypofagin i Chow / Välsmakande råttor, utan att påverka överdrivet välsmakande födointag eller ångestliknande beteende. Intra-BNST-behandling hade ingen effekt. Behandlingarna ändrade inte beteendet hos Chow-chow råttor. Immunhistokemi avslöjade ett ökat antal CRF-positiva celler i CeA - men inte i BlA eller BNST - av Chow / Välsmakande råttor, under både tillbakadragande och förnyad tillgång till den välsmakande kosten, jämfört med kontroller. Dessa resultat ger funktionella bevis för att CRF–CRF1 receptorsystemet i CeA och BlA har en differentiell roll i att förmedla maladaptiva beteenden som är ett resultat av välsmakande dietcykling.

Nyckelord: kortikotropinfrisättande faktor, BNST, missbruk, ångest, hypofagi, råtta

INLEDNING

Mycket välsmakande livsmedel (t.ex. livsmedel som är rika på socker och/eller fetter) tros vara en viktig bidragande orsak till uppkomsten av tvångsmässigt ätande vid vissa former av fetma och ätstörningar (; ). Det finns många analogier mellan drogberoende och överdrivet intag av mycket välsmakande livsmedel, inklusive förlust av kontroll över drog/mat, oförmåga att sluta använda/överäta trots negativa konsekvenser, ångest och dysfori när man försöker avstå från drog/mat (; ). Dessa vanliga symtom har föreslagits uppstå från dysfunktioner i hjärnans kretslopp, som överlappar varandra i drogberoende och tvångsmässigt ätande.

Kortikotropinfrisättande faktor typ 1 (CRF1) receptorantagonister har föreslagits som nya terapeutiska mål för beroendesjukdomar på grund av deras förmåga att minska de motiverande effekterna av abstinens (). CRF är en kritisk förmedlare av endokrina, sympatiska och beteendemässiga reaktioner på stress (; ). CRF i den paraventrikulära kärnan i hypotalamus kontrollerar hypotalamus-hypofys-binjure-svaret (HPA) på stress, medan beteendeeffekterna av CRF är HPA-oberoende och förmedlas av extrahypotalamus-hjärnregioner (). Den extrahypotalamus CRF–CRF1 receptorsystemet rekryteras i beroende av alla kända droger via cykler av berusning/abstinens, och denna hyperaktivering anses vara ett vanligt element, som främjar överdrivet läkemedelsintag genom en negativt förstärkt mekanism (dvs. inducerat negativt känslomässigt tillstånd; ; ; ).

Även om likheter mellan missbruk av droger och mat har studerats brett med avseende på deras positiva förstärkande egenskaper (dvs. överdrivet matintag som produceras genom att få en behaglig effekt; ; ; ; ; ), hypotesen att överdrivet matintag kan resultera som en form av "självmedicinering" för att lindra det negativa känslotillstånd som är förknippat med abstinens från mycket välsmakande livsmedel är relativt understuderad (; ; ).

Vi har tidigare visat att tillbakadragande från kronisk, intermittent tillgång till mycket välsmakande livsmedel orsakar rekryteringen av det extrahypothalamiska CRF-systemet och uppkomsten av CRF1 receptorberoende maladaptiva beteenden, som inkluderar överdrivet matintag vid förnyad tillgång till den mycket välsmakande kosten, hypofagi av den annars godtagbara chow-dieten och ångestliknande beteende under abstinens ().

Men direkta funktionella bevis för vilket hjärnområde som är ansvarigt för CRF1 receptorberoende beteendeanpassningar inducerade av välsmakande dietcykling saknas. Denna studie syftade därför till att bestämma om platsspecifik antagonism av CRF1 receptorer inom den centrala kärnan av amygdala (CeA), den basolaterala kärnan av amygdala (BlA) eller sängkärnan i stria terminalis (BNST) kunde blockera överdrivet intag av mycket välsmakande föda, abstinensinducerad hypofagi av den vanliga chow och ångestliknande beteende. Dessutom syftade denna studie till att bestämma huruvida uttrycket av CRF i CeA, BlA och BNST ökade i dietcyklade råttor jämfört med kontroller, med hjälp av immunhistokemi. Även om vi tidigare har visat att tillbakadragande från välsmakande mat är associerat med ett ökat CRF-uttryck i CeA, är hur BlA och BNST påverkas av dietcykling för närvarande okänt.

MATERIAL OCH METODER

Ämnen

Male Wistar-råttor (n=140, varav 33 råttor för CeA-experiment, 46 råttor för BlA-experiment, 39 råttor för BNST-experiment och 22 råttor för immunhistokemi-experimentet; Kompletterande tabell 1), som vägde 180–230 g och 41–47 dagar gamla vid ankomst (Charles River, Wilmington, MA, USA), var enstaka inhysta i plastburar med trådtopp (27 × 48 × 20 cm) på ett 12-timmars bakljus cykel (lampan släcks vid 1100 timmar), i en AAALAC-godkänd fuktighets- (60%) och temperaturkontrollerad (22 °C) vivarium. Råttor hade AD libitum tillgång till majsbaserad chow (Harlan Teklad LM-485 Diet 7012; 65 % kcal kolhydrat, 13 % fett, 21 % protein, metaboliserbar energi 310 cal/100 g; Harlan, Indianapolis, IN, USA) och vatten, om inget annat anges . Procedurerna som användes i denna studie följde National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH-publikationsnummer 85-23, reviderad 1996) och Principles of Laboratory Animal Care, och godkändes av Boston University Medical Campus Institutional Djurvårds- och användningsnämnden.

Läkemedel

R121919 (3-[6-(dimethylamino)-4-methyl-pyrid-3-yl]-2,5-dimethyl-N,N-dipropyl-pyrazolo[2,3-a]pyrimidin-7-amin, NBI 30775) syntetiserades såsom beskrivs i ). R121919 är en potent, icke-peptid CRF med hög affinitet1 receptorantagonist (Ki=2–5 nM), vilket visar över 1000 gånger svagare aktivitet vid CRF2 receptor, CRF-bindande protein eller 70 andra receptortyper (). R121919 solubiliserades med användning av en 18 : 1 : 1 blandning av saltlösning:etanol:cremophor.

Beteendestester

Ad libitum välsmakande diet alternativ tillgång

Tillgången till AD libitum välsmakande kostväxling utfördes som tidigare beskrivits (, , ; ). Kortfattat, efter acklimatisering, delades råttor in i två grupper matchade för födointag, kroppsvikt och fodereffektivitet under de föregående 3–4 dagarna. En grupp försågs sedan med AD libitum tillgång till en chow-diet (Chow) 7 dagar i veckan (Chow-chow, kontrollgruppen i denna studie) medan en andra grupp fick fri tillgång till chow under 5 dagar i veckan, följt av 2 dagars AD libitum till en mycket välsmakande diet med chokladsmak och hög sackaros (smaklig; Chow / Välsmakande grupp). Alla beteendetester utfördes på råttor som hade genomgått diet i minst 7 veckor. "Chow"-dieten var den ovan beskrivna majsbaserade chow från Harlan, medan den välsmakande kosten var en näringsmässigt komplett, chokladsmaksatt, hög sackaros (50 % kcal), AIN-76A-baserad diet som är jämförbar med makronäringsämnen proportioner och energitäthet till chow-dieten (chokladsmakad formel 5TUL: 66.7 % kcal kolhydrat, 12.7 % fett, 20.6 % protein, metaboliserbar energi 344 kcal/100 g (Test Diet, Richmond, IN, USA) formulerad som 45 mg precision matpellets för att öka dess preferens). För korthetens skull kallas de första 5 dagarna (endast chow) och de sista 2 dagarna (chow eller välsmakande enligt experimentgruppen) i varje vecka i alla experiment som C och P faser. Smaklig diet tillhandahölls i GPF20 "J"-matare (Ancare, Bellmore, NY, USA). Dieter var aldrig tillgängliga samtidigt.

Matintagsexperiment

Råttorna försågs med förvägd mat i sina hemburar när mörkercykeln började. Behandlingar gavs på råttor som cyklades på dieten i minst 7 veckor efter att ha förnyat tillgången till den välsmakande kosten (C→P fas), eller till chow-dieten (P→C fas). R121919 mikroinfunderades bilateralt inom CeA, BlA eller BNST (0, 0.5 och 1.5 μg/sida, 0.5 μl/sida, 30 minuters förbehandlingstid) med hjälp av randomiserade inom-subjekts latinska kvadratiska design.

Ljus-mörk box test

Råttor testades i 10 minuter i en ljus-mörk rektangulär låda (50 × 100 × 35 cm) i vilken det aversiva ljusfacket (50 × 70 × 35 cm) var upplyst av ett 60 lux ljus. Den mörka sidan (50 × 30 × 35 cm) hade ett ogenomskinligt lock och ~0 lux ljus. De två avdelningarna var förbundna med en öppen dörröppning, vilket gjorde att försökspersonerna kunde röra sig fritt mellan de två. Testning ägde rum efter minst 7 veckors dietväxling, 5–9 timmar efter bytet från den välsmakande kosten till chow-dieten (P→C fas); denna tidpunkt säkerställer förekomsten av ångestliknande beteende framkallat av tillbakadragande från välsmakande mat i Chow / Välsmakande råttor (, ). Råttor hölls i det tysta, mörka förrummet i minst 2 timmar före testning. Vitt brus förekom under tillvänjning och testning. På testdagen mikroinfunderades råttor bilateralt med R121919 i CeA, BlA eller BNST (0, 0.5 och 1.5 μg/sida, 0.5 μl/sida) 30 minuter innan de placerades i det mörka facket vänd mot dörröppningen och beteende spelades in på video för senare poängsättning. Behandlingarna gavs med en design mellan ämnena. Tiden i det öppna facket mättes som ett index för ångestliknande beteende. Apparaten torkades ren med vatten och torkades efter varje försöksperson.

Intrakraniella operationer, mikroinfusionsprocedur och kanylplacering

Intrakraniala operationer

Råttor implanterades stereotaxiskt med bilaterala, intrakraniella kanyler som beskrivits tidigare (; ; ). Kortfattat sänktes styrkanyler av rostfritt stål (24 gauge, Plastics One, Roanoke, VA, USA) bilateralt 2.0 mm ovanför CeA, BlA eller BNST. Fyra juvelerares skruvar i rostfritt stål sattes fast på råttans skalle runt kanylen. Dentalt reparativt fyllt harts (Henry Schein, Melville, NY, USA) och akrylcement applicerades, vilket bildade en piedestal som fast förankrade kanylen. Kanylkoordinaterna från bregma som användes för CeA var: AP +0.2, ML ±4.2, DV −7 (från skallen) med incisorstången inställd 5.0 mm ovanför den interaurala linjen, enligt atlasen för ). Kanylkoordinaterna som användes för BlA var: AP −2.64, ML ±4.8, DV −6.5 (från skalle) med platt skalle, enl. ). Kanylkoordinaterna som användes för BNST var: AP -0.6, ML ±3.5, DV -4.8 (från skallen) med platt skalle och lutningsvinkel på 14°. En dummy-stilett i rostfritt stål (Plastics One) bibehöll kanylens öppenhet. Efter operationen fick råttorna en återhämtningsperiod på 7 dagar, under vilken de hanterades dagligen.

Mikroinfusionsförfarande

Läkemedlet mikroinfunderades i hjärnan på råttor som tidigare beskrivits (; ). För intrakraniell mikroinfusion togs blindstiletten bort från styrkanylen och ersattes med en 31-gauge injektor av rostfritt stål som skjuter ut 2 mm utanför spetsen på styrkanylen; injektorn kopplades via PE 20-slang till en Hamilton-mikrospruta (Hamilton, Reno, Nevada) som drevs av en mikroinfusionspump med flera sprutor (KD Scientific/Biological Instruments, Holliston, MA, USA). Mikroinfusioner utfördes i 0.5 μl volym levererad under 2 minuter; injektorerna lämnades på plats under ytterligare 1 minut för att minimera tillbakaflödet.

Kanylplacering

Kanylplaceringen verifierades i slutet av alla tester (se Figur 1). Försökspersonerna bedövades (isofluran, 2–3 % i syre) och transkardiellt perfunderades med iskall 4 % paraformaldehyd (PFA) i vatten (pH 7.4) och mikroinfunderades med Cresylviolett (0.5 μl/sida). Hjärnor fixerades sedan över natten i 4% PFA och ekvilibrerades i 30% sackaros i PFA. Koronala sektioner på 40 μm samlades upp med en kryostat (Thermo Scientific HM-525) och placeringar verifierades under ett mikroskop. Fyrtio försökspersoner (14 för CeA, 16 för BlA och 10 för BNST) uteslöts från analys på grund av felaktig kanylplacering. Data från felaktiga placeringar analyserades för att hjälpa till att tolka effekternas platsspecificitet.

Figur 1 

Ritning av koronala råttors hjärnskivor. Prickar representerar injektionsställena i den centrala kärnan av amygdala (CeA) (a), basolateral kärna av amygdala (BlA) (b) och bäddkärnan i stria terminalis (BNST) (c) som ingår i dataanalysen. .

CRF immunhistokemi

Beteendeförfarande, perfusioner och immunhistokemi

Råttor (n=22) dietcyklades i 7 veckor, sövdes och perfuserades 2–4 timmar efter att ha bytt antingen från den välsmakande kosten till chow-dieten (P→C fas) eller från chow-dieten till den välsmakande kosten (C→P fas). Råttorna bedövades och sedan transkardialt perfunderades med saltlösning + 2 % (vikt/volym) natriumnitrit (pH=7.4) först och därefter med 4 % paraformaldehyd buffrad i Borax (pH=9.5). Råttor halshöggs sedan och hjärnorna samlades omedelbart upp, placerades i ~20 ml 4% PFA och lagrades i en 30% sackaros i 4% PFA-lösning vid 4 °C tills mättnad.

För CRF-visualisering skars hjärnor i 40 μm koronala sektioner med hjälp av en kryostat och lagrades därefter i ett kryoskyddsmedel vid -20 ° C. Var sjätte sektion (240 μm från varandra) av hela CeA, BlA och BNST valdes på ett systematiskt slumpmässigt sätt och bearbetades för immuncytokemi. Fritt flytande sektioner tvättades i kaliumfosfatbuffertsaltlösning (KPBS). Efter den första tvätten fick sektionerna inkubation i 0.3% väteperoxid KPBS-lösning i 30 minuter för att blockera endogena peroxidaser. Sektioner tvättades sedan igen och placerades i blockerande lösning (3 % normalt getserum, 0.25 % Triton X100 och 0.1 % bovint serumalbumin) under 2 timmar. Sektioner överfördes sedan till primär antikropp (1:100 spädning, anti-CRF (sc-10718), Santa Cruz Biotechnology) i blockeringslösning och inkuberades i 72 timmar vid 4 °C. Efter en ytterligare tvätt inkuberades sektioner i sekundär antikropp (1:1000 spädning, biotinylerad anti-kanin (BA-1000) Vector Laboratories, Burlingame, Kalifornien) i blockerande lösning under 2 timmar vid rumstemperatur. Sektioner tvättades och inkuberades sedan i en avidin-biotin pepparrotsperoxidas ABC-lösning (Vector Laboratories) i blockerande lösning i 1 timme. Sektioner inkuberades sedan med användning av ett diaminobensidinsubstratkit (Vector Laboratories) enligt tillverkarens instruktioner och när reaktionen väl var klar sköljdes sektionerna i KPBS, monterades på objektglas och fick torka över natten. Följande dag dehydrerades objektglasen med användning av graderade alkoholkoncentrationer och täckglas med DPX-monteringsmedel (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA).

Kvantifiering av CRF+ cellkroppar

Kvantifiering av CRF+-cellkroppar utfördes i enlighet med den opartiska stereometoden. Serien av sektioner analyserades för varje färgningssats. Sektioner analyserades med ett Olympus (Center Valley, PA, USA) BX-51-mikroskop utrustat med en Rotiga 2000R livevideokamera (QImaging, Surrey, BC, Kanada), en treaxlig MAC6000 XYZ motoriserad scen (Ludl Electronics, Hawthorne, NY, USA), och en arbetsstation för persondator. Alla cellräkningar gjordes på kodade objektglas av en utredare som var blind för behandlingsförhållandena. Varje region skisserades praktiskt taget på den digitaliserade bilden av varje slumpmässigt vald sektion med hjälp av den optiska fraktioneringsarbetsflödesmodulen i Stereo Investigator-mjukvaran (MicroBrightField, Williston, VT, USA). Alla konturer ritades med låg förstoring med ett Olympus PlanApo N 2X-objektiv med numerisk bländare 0.08 och räknades med ett Olympus UPlanFL N 40X-objektiv med numerisk bländare 0.75. Rutnätsramen och räkneramen var inställda på 275 × 160 μm. En skyddszon på 2 μm och en dissektorhöjd på 20 μm användes. De frusna sektionerna skars ursprungligen med en nominell tjocklek av 40 μm. Immunfärgning och montering resulterar i ändrad snitttjocklek, som mättes vid varje räkneställe. En genomsnittlig sektionstjocklek beräknades av programvaran och användes för att uppskatta den totala volymen av provregionen och det totala antalet CRF+-celler.

Statistisk analys

Studentens t-tester användes för att analysera faktorer med två nivåer. ANOVA utfördes för att analysera faktorer med mer än två nivåer. Efter betydande omnibuseffekt av ANOVAs (p<0.05), Fishers LSD post hoc jämförelsetest användes. Dunnetts test användes för att fastställa om R121919 normaliserade intaget av Chow / Välsmakande råttor till fordonsbehandlade Chow-chow-matade nivåer. Programvaran/grafikpaketen som användes var Systat 11.0, SigmaPlot 11.0 (Systat Software, Chicago, IL, USA), InStat 3.0 (GraphPad, San Diego, CA, USA), Statistica 7.0 (Statsoft, Tulsa, OK, USA) och PASW Statistik 18.0 (SPSS, Chicago, IL, USA).

RESULTAT

Effekter av mikroinfusion av R121919 i CeA

Överdrivet intag av välsmakande mat

För att avgöra om CRF1 receptorer i CeA förmedlar överdrivet intag av välsmakande mat i dietcyklade råttor, vi mikroinfunderade platsen specifikt den selektiva CRF1 receptorantagonist R121919 in i detta hjärnområde och mätte födointaget i början av P fas. Som visas i Figur 2a, intaget av vehikel-behandlad välsmakande diet-matad Chow / Välsmakande råttor var dubbelt högre än den för chow-utfodrade kontroll Chow-chow råttor. Antagonism av CeA CRF1 receptorer blockerade helt denna överdrivna intag av välsmakande mat Chow / Välsmakande råttor, utan att påverka födointaget hos kontrollråttor (Chow-chowF(2)=20, NS; Chow / Välsmakande, F(2, 14)=5.02, p Post hoc jämförelse visade att den högsta dosen av R121919 (1.5 μg/sida) signifikant reducerade välsmakande födointag jämfört med vehikel i Chow / Välsmakande råttor. Intag av Chow / Välsmakande råttor efter mikroinfusionen av 1.5 μg/sidedosen skilde sig inte signifikant från intaget av vehikelbehandlade Chow-chow råttor. Bekräftelse av specificiteten hos effekterna för CRF1 receptorer i CeA, observerades ingen effekt vid födointag hos försökspersoner med felplacerade kanyler (Chow / VälsmakandeF(2)=2, NS).

Figur 2 

Effekter av mikroinfusion av den selektiva kortikotropinfrisättande faktorn-1 (CRF1) receptorantagonist R121919 (0, 0.5, 1.5 μg/sida) i den centrala kärnan av amygdala (CeA) vid överdriven ätning av välsmakande mat, hypofagi av vanlig .

Hypofagi av den vanliga chow-dieten

För att avgöra om CRF1 receptorer i CeA medierar hypofagin av chow-dieten hos dietcyklade råttor, vi mikroinfunderade R121919 i detta hjärnområde och mätte födointaget i början av C fas. Som visas i Figur 2b, intaget av fordonsbehandlade Chow / Välsmakande råttor var ~1/3 av intaget av vehikelbehandlade Chow-chow råttor (hypofagi). Behandling med R121919 påverkade inte hypofagin hos vanlig chow in Chow / Välsmakande råttor (Chow / VälsmakandeF(2, 12)=0.14, NS). Bekräftar resultaten som erhållits i P fas, R121919 mikroinfusion i CeA påverkade inte foderintaget i kontrollen Chow-chow råttor (Chow-chowF(2)=20, NS).

Akut abstinensutlöst ångestliknande beteende

För att avgöra om CeA CRF1 receptorer förmedlar det negativa känslomässiga tillståndet som induceras genom att dra tillbaka den välsmakande maten i cyklade råttor, vi mikroinfunderade plats specifikt R121919 i detta hjärnområde och mätte ångestliknande beteende med hjälp av ljus-mörk box-testet 5 timmar in i C fas. Som visas i Figur 2c, visade råttor som akut drogs tillbaka från kronisk, intermittent tillgång till den mycket välsmakande kosten en signifikant minskning av den tid som spenderades i det ljusa facket i den ljus-mörka lådan. Mikroinfusion av 1.5 μg/sida av R121919 i CeA, dosen som effektivt minskade överdriven ätning av välsmakande mat, blockerade helt ångestliknande beteende genom att öka tiden som spenderades i det ljusa området av lådan i Chow / Välsmakande råttor, utan att påverka beteendet i Chow-chow råttor (DOS: F(1, 24)=4.40, p<0.05). Bekräftelse av specificiteten hos effekterna för CRF1 receptorer i CeA, observerades ingen effekt på födointag hos försökspersoner med felplacerade kanyler (DOS: F(2, 2)=4.32, NS).

Effekter av mikroinfusion av R121919 i BlA

Överdrivet intag av välsmakande mat

För att avgöra om BlA CRF1 receptorer förmedlar överdriven ätning av välsmakande mat hos dietcyklade råttor, vi mikroinfunderade plats specifikt R121919 i detta hjärnområde och mätte matintaget i början av P fas. Till skillnad från vad som observerades efter administrering av R1219191 i CeA, som visas i Figur 3a bilateral mikroinfusion av selektiv CRF1 receptorantagonist i BlA inte signifikant påverkade välsmakande födointag i Chow / Välsmakande råttor (Chow / VälsmakandeF(2)=26, NS). På samma sätt, regelbunden chowkonsumtion i Chow-chow råttor påverkades inte av R121919 mikroinfusion (Chow-chowF(2)=18, NS).

Figur 3 

Effekter av mikroinfusion av den selektiva kortikotropinfrisättande faktorn-1 (CRF1) receptorantagonist R121919 (0, 0.5, 1.5 μg/sida) i den basolaterala kärnan av amygdala (BlA) vid överdriven ätning av välsmakande mat, hypofagi av vanlig .

Hypofagi av den vanliga chow-dieten

För att avgöra om CRF1 receptorer i BlA medierar hypofagi av chow i cyklade råttor, vi mikroinfunderade R121919 i detta hjärnområde och mätte födointaget i början av C fas. Som visas i Figur 3bobserverades en signifikant ökning av vanligt foderintag efter mikroinfusion av CRF1 receptorantagonist i BlA av Chow / Välsmakande råttor (Chow / Välsmakande, F(2, 26)=4.46, p<0.05). Den högsta dosen (1.5 μg) av R121919 mikroinfunderad i BlA under C fas ökade signifikant konsumtionen av den vanliga foderdieten med 221.1±33.1 (M±SEM) procent jämfört med vehikelbehandlad Chow-chow råttor. R121919 försvagade, men blockerade inte helt, den abstinensinducerade hypofagin vid den högsta injicerade dosen. Bekräfta de uppgifter som erhållits i P fas, R121919 mikroinfusion påverkade inte regelbundet foderintag i Chow-chow råttor (Chow-chowF(2)=20, NS). Bekräftelse av specificiteten hos effekterna för CRF1 receptorer i BlA, observerades ingen effekt vid födointag hos försökspersoner med felplacerade kanyler (Chow / VälsmakandeF(2)=8, NS).

Akut abstinensutlöst ångestliknande beteende

För att avgöra om BlA CRF1 receptorer medierar det negativa känslomässiga tillståndet som induceras genom att akut dra tillbaka den välsmakande maten i cyklade råttor, vi mikroinfunderade plats specifikt R121919 i detta hjärnområde och mätte ångestliknande beteende 5 timmar in i C fas. Som visas i Figur 3c, välsmakande mat - tillbakadragen Chow / Välsmakande råttor tillbringade mindre tid i ljusfacket jämfört med Chow-chow råttor (DIET: F(1, 23)=84.03, p<0.001). R121919, mikroinfunderad i BlA, påverkade inte signifikant tiden som spenderades i det ljusa området (DOS: F(1, 39)=0.01, NS).

Effekter av mikroinfusion av R121919 i BNST

Överdrivet intag av välsmakande mat

För att avgöra om BNST CRF1 receptorer medierar överdrivet ätande av välsmakande mat hos dietcyklade råttor, R121919 var platsspecifikt mikroinfunderad i detta hjärnområde och matintaget mättes i början av P fas. Som visas i Figur 4b, bilateral mikroinfusion av den selektiva CRF1 receptorantagonist till BNST påverkade inte signifikant ätbart födointag i Chow / Välsmakande råttor (Chow / VälsmakandeF(2)=18, NS). På samma sätt, regelbunden chowkonsumtion i Chow-chow råttor påverkades inte av R121919 mikroinfusion (Chow-chowF(2)=20, NS).

Figur 4 

Effekter av mikroinfusion av den selektiva kortikotropinfrisättande faktorn-1 (CRF1) receptorantagonist R121919 (0, 0.5, 1.5 μg/sida) i bäddkärnan i stria terminalis (BNST) vid överdriven ätning av välsmakande mat, hypofagi av .

Hypofagi av den vanliga chow-dieten

För att avgöra om BNST CRF1 receptorer förmedlar hypofagin av chow-dieten i cyklade råttor, vi mikroinfunderade R121919 i detta hjärnområde och mätte födointaget i början av C fas. Som visas i Figur 4a, R121919 mikroinfusion påverkade inte regelbundet chow-intag i Chow-chow råttor (Chow-chowF(2, 14)=0.03, NS). På samma sätt påverkade inte R121919-behandling hypofagin hos den vanliga chow i Chow / Välsmakande råttor (Chow / VälsmakandeF(2)=20, NS).

Akut abstinensutlöst ångestliknande beteende

För att avgöra om BNST CRF1 receptorer medierar det negativa känslomässiga tillståndet som induceras genom att akut dra tillbaka den välsmakande maten i cyklade råttor, vi mikroinfunderade plats specifikt R121919 i detta hjärnområde och mätte ångestliknande beteende 5 timmar efter bytet från P→C fas. Som visas i Figur 4c, välsmakande mat - tillbakadragen Chow / Välsmakande råttor tillbringade mindre tid i ljusfacket jämfört med kontroll Chow-chow råttor (DIET: F(1, 17)=17.11, p<0.01). R121919, bilateralt mikroinfunderad med dosen 1.5 μg/sida i BNST påverkade inte signifikant tiden som spenderades i det ljusa området (DOS: F(1, 33)=0.47, NS).

CRF immunhistokemi

Figur 5 illustrerar representativa mikrofotografier av CRF+-celler i CeA, BlA och BNST i Chow-chow och Chow / Välsmakande råttor, efter AD libitum välsmakande kost alternerande procedur. Analys av CRF-immunreaktivitet hos CeA visade att en signifikant skillnad mellan Chow / Välsmakande och Chow-chow råttor under både den C och P fas (F(2, 19)=4.19, p<0.05). Inga statistiskt signifikanta skillnader mellan grupper observerades i varken BlA (F(2, 17)=1.13, NS) eller BNST (F(2, 19)=1.16, NS).

Figur 5 

Representativa mikrofotografier av corticotropin-releasing factor (CRF) immunreaktivitet i den centrala kärnan av amygdala (CeA) (a–d), basolateral kärna av amygdala (BlA) (e–h), och bäddkärnan i stria terminalis (BNST) ) (i–l) .

DISKUSSION

Denna studie utformades för att funktionellt identifiera hjärnplatsen som är ansvarig för det CRF-medierade överdrivna intaget av mycket välsmakande mat hos råttor under dietväxling. Våra fynd visar sig vara en viktig roll för CeA i att förmedla överdriven ätning av mycket välsmakande mat. Dessutom visar vi att CRF-systemet i BlA, till skillnad från CeA, har en roll i devalveringsprocessen som uppstår vid nedväxling i matbelöningsstorlek.

Vi har tidigare visat att upprepade cykler av tillgång till och akut abstinens från en sockerrik, mycket välsmakande diet leder till överdriven ätning av välsmakande mat såväl som till akut abstinensberoende hypofagi av den vanliga chow-dieten och ångestliknande beteende (; , ). Överdriven ätning som observerats här antas vara driven av det negativa känslomässiga tillståndet som induceras av upprepade episoder av akut abstinens från mycket välsmakande livsmedel via en extrahypothalamisk CRF-CRF1 receptorsystemmedierad mekanism, som liknar den "tändningsliknande" process som ligger bakom beroendesjukdomar (; ; ; ).

Resultaten av denna studie visar att CRF1 receptorer av CeA och BlA förmedlar differentiellt matningsanpassningar och ångestliknande beteende hos råttor som cyklar med kronisk diet. Administration av den selektiva CRF1 receptorantagonist inom CeA blockerade både överdrivet ätande och ångestliknande beteende i Chow / Välsmakande råttor, utan att påverka hypofagin hos den underaccepterade, vanliga kosten. Intressant nog dämpade administrering av R121919 i BlA hypofagin hos den mindre aptitliga chow-dieten (dvs ökat regelbundet chow-intag) i Chow / Välsmakande råttor, utan att påverka överdrivet ätande eller ångestliknande beteende. Vid mikroinfundering i BNST påverkade inte R121919 någon av variablerna som mättes i Chow / Välsmakande råttor (överdrivet ätande av den mycket välsmakande kosten, intag av den vanliga chow-dieten och det akuta abstinensinducerade ångestliknande beteendet). De observerade farmakologiska effekterna var selektiva för Chow / Välsmakande råttor eftersom R121919, mikroinfunderas i CeA, BlA eller BNST av Chow-chow kontrollråttor, utövade ingen effekt. Därför CRF–CRF1 receptorsystem av CeA och BlA tycks differentiellt förmedla de beteendemässiga resultat som är ett resultat av kronisk välsmakande dietcykling. Å andra sidan, CRF–CRF1 BNST:s receptorsystem verkar inte vara involverat i de beteendeanpassningar som induceras av välsmakande dietväxling.

Våra beteendemässiga och farmakologiska fynd stöddes av observationen att CRF-immunreaktivitet inom CeA av Chow / Välsmakande råttor ökade signifikant jämfört med Chow-chow kontrollråttor, under tillbakadragande från och efter förnyad tillgång till den mycket välsmakande kosten (). Intressant nog observerades ingen signifikant skillnad i CRF-immunreaktivitet mellan grupper inom BlA eller BNST. Den ökade CRF-immunreaktiviteten som observerades i CeA av Chow / Välsmakande råttor överensstämmer med vårt tidigare fynd att akut tillbakadragande från den välsmakande kosten är associerad med en ökad frisättning av CRF i CeA (). Men i motsats till vad som visats tidigare, orsakade förnyad tillgång till den välsmakande kosten inte en återgång av CRF-uttryck i CeA till kontrollnivåer. Avvikelsen mellan resultaten som erhållits här och den tidigare observationen kan vara relaterad till den olika tidpunkten för hjärninsamlingen och den olika anatomiska upplösningen av de tekniker som används för att mäta CRF-uttryck. Icke desto mindre överensstämmer den observerade ökningen av CRF-uttryck i CeA under abstinens och efter förnyad tillgång till den välsmakande kosten med de selektiva effekterna av blockad av ångestliknande beteende (under abstinens) och överdriven ätning (förnyad tillgång) i Chow / Välsmakande råttor. Den uppenbara inkonsekvensen mellan de två studierna kan därför kollektivt tolkas enligt följande: under akut välsmakande födointag ökar CRF-uttrycket i CeA hos dietcyklade råttor jämfört med kontroller och det är ansvarigt för uppkomsten av en negativ påverkan. CeA CRF-uttrycket förblir förändrat upp till de första timmarna av mycket välsmakande tillgång, vilket inducerar överdriven ätning. Efter överdriven välsmakande matkonsumtion återgår CRF dock tillbaka till kontrollnivåer ().

De beteendemässiga, farmakologiska och molekylära resultaten som visas stöder hypotesen att CRF-CRF1 receptorsystemet i CeA har en viktig roll i att mediera det negativa affektiva tillståndet och det överdrivna intaget av välsmakande föda hos dietcyklade råttor, på samma sätt som vad som i stor utsträckning har visats för alkohol- och drogberoende (). Faktum är att etanolberoende råttor uppvisar ökad extracellulär frisättning av CRF i CeA under utsättning och administrering av en CRF-receptorantagonist i CeA kan blockera eskalerad etanolsjälvadministrering under uttag (; ). Analogt visar opiatberoende djur ökat CRF-uttryck i CeA under uttag () och blockering av CRF-receptorer i CeA, men inte BNST, minskar beteendetecknen på abstinens (; ). En nyckelroll för CRF–CRF1 system i CeA har också visats i nikotinberoende. I själva verket är mecamylamin-utfälld nikotinabstinens associerad med en hyperaktivering av CRF-CRF1 receptorsystem i CeA () och intra-CeA, men inte intra-BlA, mikroinfusion av en CRF1 receptorantagonist minskar de nikotinabstinensberoende höjningarna i hjärnans belöningströskel (). Hos cannabinoidberoende råttor är utfälld abstinens associerad med en markant förhöjning av extracellulär CRF-koncentration i CeA (). Sammantaget stöder detta bevis starkt hypotesen att CRF–CRF1 receptorsystemet i CeA är en nyckelmediator för akut abstinensinducerad negativ påverkan, tillsammans med överdrivet drog- och alkoholintag under beroende. Våra resultat utökar denna kunskap till överdriven ätning av mycket välsmakande mat, vilket tyder på att analoga neuroanpassningar förekommer.

Resultaten av denna studie visar att den välsmakande matabstinensberoende hypofagin i den mindre aptitliga chow-dieten dämpas av mikroinfusion inom BlA av den selektiva CRF1 receptorantagonist, medan överdrivet ätande och ångestliknande beteende inte påverkades av intra-BlA läkemedelsbehandlingen. Den differentiella inblandningen av BlA CRF-CRF1 receptorsystemet i resultaten av dietcykling tyder på att hypofagi av chow kan representera en beteendeprocess oberoende av ångestliknande beteende. Snarare överensstämmer dessa fynd med hypotesen att BlA förmedlar sensoriska och incitamentsaspekter av motiverande framträdande händelser. Det finns faktiskt avsevärda bevis för att BlA är avgörande för att förmedla devalveringsprocesser och aversiva svar på belöningsreduktion (dvs Crespi-effekt, successiv negativ kontrast, belöningsdevalvering, och så vidare; ; ; ), och därför kan hypofagin till följd av övergången från den mycket välsmakande kosten till den mindre aptitliga chow-dieten representera en hedonisk devalveringsprocess snarare än en energihomeostasberoende mekanism (dvs. oberoende av tidigare energiintag eller kroppsviktsökning ; , ). Blockad av CRF1 receptorer inom BlA antas därför minska chow-hypofagi (dvs. att öka chow-intaget) genom att dämpa devalveringsprocessen som inträffar när man byter från den mycket välsmakande maten till den mindre aptitliga chow. Relevant för detta sammanhang är också den uppenbara inkonsekvensen mellan de molekylära och de beteendemässiga/farmakologiska resultaten som erhålls i BlA. Även om CRF1 receptorantagonist kunde minska storleken på chow-hypofagin när den injicerades i BlA, inga signifikanta skillnader i CRF-immunreaktivitet observerades i detta område när man jämförde kontroll- och dietcyklade råttor. Denna uppenbara diskrepans kan förklaras med tanke på att BlA-beroende devalveringsprocesser av alternativa belöningar sker fysiologiskt och har en viktig evolutionär betydelse i valet av livsmedel som ger det högsta belönings-/energivärdet (). Som sådan kan det argumenteras att förmedlingen av dessa processer i BlA inte kräver neuroanpassningar i CRF-systemet (liknande de som observeras i CeA). Till stöd för denna hypotes, medan överdriven ätning kräver kronisk dietcykling för att utvecklas, inträffar hypofagi hos den mindre föredragna alternativa chow efter den allra första övergången från den mycket välsmakande kosten tillbaka till den vanliga chow (). Dessutom är det viktigt att betona att, baserat på de resultat som erhållits genom att injicera CRF1-receptorantagonisten i BlA och CeA, CRF1 receptorberoende hypofagi som observeras här verkar vara en annan beteendeprocess än den anhedoni som ses vid drogabstinens. Ändå har akut abstinens från intermittent tillgång till välsmakande föda visat sig inducera andra hypohedonliknande reaktioner såsom ökad orörlighet i tvångssimtestet och minskad respons i ett progressivt schema för förstärkning (; ).

Det är anmärkningsvärt att nämna det, även om Chow / Välsmakande råttor har genomgått en kronisk dietcykel, de beteendemässiga och neurokemiska förändringarna som visas här inträffar under ett akut, snarare än ett kroniskt, tillbakadragande från välsmakande diet. Att betona denna aspekt är särskilt relevant eftersom det i beroendeforskning är djupgående skillnader i beteendemässiga, farmakologiska och neurokemiska konsekvenser av akuta vs långvarig abstinens har observerats (; ). Framtida studier kommer att vara värdefulla för att avgöra hur långvarig abstinens kan påverka resultaten av dietcykling.

En relevant diskussionspunkt är om det överdrivna välsmakande födointagsbeteendet vi observerar i samband med denna djurmodell kan anses vara "tvångsmässigt". Inom preklinisk beroendeforskning har termen "tvångsmässig" använts i stor utsträckning för att beskriva överdrivet drogintag under abstinens, vilket drivs av ett negativt affektivt tillstånd och lindras vid förnyad tillgång till drogen (; ). Denna acceptans av termen "tvångsmässig" är baserad på den konceptuella ramen att tvångsstörningar kännetecknas av ångest och stress innan man begår ett tvångsmässigt beteende, och lättnad från stressen genom att utföra det tvångsmässiga beteendet (; ). Inom ramen för den djurmodell som används här kan det överdrivna ätbeteendet tolkas som en form av "tvångsmässigt" beteende givet de tidigare publicerade bevisen att råttor med intermittent tillgång till den välsmakande kosten uppvisar ett negativt känslomässigt tillstånd under välsmakande matabstinens, karakteriserat av ångestliknande och depressiva beteenden, som lindras vid förnyad tillgång (, ; ).

Sammanfattningsvis ger resultaten av denna studie kritiska funktionella bevis för att CRF-CRF1 receptorsystemet av CeA och BlA har en differentiell roll i att förmedla maladaptiva beteenden som är ett resultat av intermittent tillgång till välsmakande mat. I CeA, CRF–CRF1 receptorsystemet är en nyckelmediator för överdrivet ätande av välsmakande mat och den abstinensberoende negativa effekten, medan det i BlA förmedlar försökspersonernas aversiva svar framkallade av belöningsreduktion.

FINANSIERING OCH AVSLUTNING

Författarna förklarar ingen intressekonflikt.

Erkännanden

Vi tackar Duncan Momaney, Aditi R Narayan, Jina Kwak för teknisk assistans och Tamara Zeric för teknisk och redaktionell hjälp. Vi tackar också Elena F Crawford för användbara förslag relaterade till CRF-immunhistokemi. Denna publikation möjliggjordes av bidragsnummer DA023680, DA030425, MH091945, MH093650 och AA016731, från National Institute on Drug Abuse (NIDA), National Institute of Mental Health (NIMH) och National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism ( NIAAA), av Peter Paul Career Development Professorship (PC) och av Boston University's Undergraduate Research Opportunities Program (UROP). Denna forskning stöddes också av NIH Intramural Research Programs av National Institute on Drug Abuse och National Institute of Alcohol Abuse and Alcoholism, NIH, DHHS. Dess innehåll är enbart författarnas ansvar och representerar inte nödvändigtvis de officiella åsikterna från National Institutes of Health.

fotnoter

 

Kompletterande information medföljer artikeln på Neuropsychopharmacologys webbplats (http://www.nature.com/npp)

 

 

Extramaterial

Kompletterande information

Referensprojekt

  • Ahmed SH, Koob GF. Övergång till drogberoende: en negativ förstärkningsmodell baserad på en allostatisk minskning av belöningsfunktionen. Psykofarmakologi (Berl) 2005;180:473–490. [PubMed]
  • Avena NM, Bocarsly ME, Hoebel BG. Djurmodeller av socker- och fettomträngande: förhållande till matberoende och ökad kroppsvikt. Metoder Mol Biol. 2012;829:351–365. [PubMed]
  • Bakshi VP, Kalin NH. Kortikotropinfrisättande hormon och djurmodeller av ångest: gen-miljöinteraktioner. Biol Psykiatri. 2000;48:1175–1198. [PubMed]
  • Bal TL. Känslighet för stress: dysregulation av CRF-vägar och sjukdomsutveckling. Horm Behav. 2005;48:1–10. [PubMed]
  • Blasio A, Iemolo A, Sabino V, Petrosino S, Steardo L, Rice KC. 2013aRimonabant utlöser ångest hos råttor som dras tillbaka från välsmakande föda: den centrala amygdalas roll Neuropsychopharmacologydoi:10.1038/npp.2013.153 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Blasio A, Steardo L, Sabino V, Cottone P. 2013bOpioidsystemet i den mediala prefrontala cortex förmedlar hetsätning Addict Bioldoi:10.1111/adb.12033 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Breese GR, Overstreet DH, Knapp DJ. Konceptuell ram för alkoholismens etiologi: en "tändande"/stresshypotes. Psykofarmakologi (Berl) 2005;178:367–380. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Bruijnzeel AW, Ford J, Rogers JA, Scheick S, Ji Y, Bishnoi M, et al. Blockad av CRF1-receptorer i den centrala kärnan av amygdala dämpar dysforin som är förknippad med nikotinabstinens hos råttor. Pharmacol Biochem Behav. 2012;101:62–68. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Chen C, Wilcoxen KM, Huang CQ, Xie YF, McCarthy JR, Webb TR, et al. Design av 2,5-dimetyl-3-(6-dimetyl-4-metylpyridin-3-yl)-7-dipropylaminopyrazolo[1,5-a]py rimidin (NBI 30775/R121919) och struktur-aktivitetsförhållanden i en serie av potenta och oralt aktiva kortikotropinfrisättande faktorreceptorantagonister. J Med Chem. 2004;47:4787–4798. [PubMed]
  • Corwin RL. Hetsande råttor: en modell av intermittent överdrivet beteende. Aptit. 2006;46:11–15. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Corwin RL, Grigson PS. Symposiumöversikt — matberoende: fakta eller fiktion. J Nutr. 2009;139:617–619. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Nagy TR, Coscina DV, Zorrilla EP. Matningsmikrostruktur i diet-inducerad fetma mottagliga kontra resistenta råttor: centrala effekter av urocortin 2. J Physiol. 2007;583 (Pt 2:487–504. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Roberto M, Bajo M, Pockros L, Frihauf JB, et al. CRF-systemrekrytering förmedlar mörka sidan av tvångsmässigt ätande. Proc Natl Acad Sci USA. 2009a;106:20016–20020. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Intermittent tillgång till föredragen föda minskar den förstärkande effekten av foder hos råttor. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2008;295:R1066–R1076. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Fullständiga, ångestrelaterade och metaboliska anpassningar hos honråttor med alternerande tillgång till föredragen mat. Psykoneuroendokrinologi. 2009b;34:38–49. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Cottone P, Wang X, Park JW, Valenza M, Blasio A, Kwak J, et al. Antagonism av sigma-1-receptorer blockerar tvångsliknande ätande. Neuropsykofarmakologi. 2012;37:2593–2604. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Dore R, Iemolo A, Smith KL, Wang X, Cottone P, Sabino V. 2013CRF förmedlar de anxiogena och antibelönande, men inte de anorektiska effekterna av PACAP Neuropsychopharmacologydoi:10.1038/npp.2013.113 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Cross Ref]
  • Funk CK, O'Dell LE, Crawford EF, Koob GF. Cortikotropinfrigörande faktor inom amygdalans centrala kärna medierar ökad etanol självadministrering i utdragen etanolberoende råttor. J Neurosci. 2006; 26: 11324-11332. [PubMed]
  • George O, Ghozland S, Azar MR, Cottone P, Zorrilla EP, Parsons LH, et al. CRF-CRF1-systemaktivering förmedlar abstinensinducerade ökningar av nikotin-självadministrering hos nikotinberoende råttor. Proc Natl Acad Sci USA. 2007;104:17198–17203. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Grigoriadis DE, Chen C, Wilcoxen K, Chen T, Lorang MT, Bozigion H, et al. In vitro karakterisering av R121919: en ny icke-peptid kortikotropinfrisättande faktor1 (CRF1) receptorantagonist för potentiell behandling av depression och ångestrelaterade störningar. Society for Neuroscience. 2000;Abstract 807:4–9.
  • Hagan MM, Chandler PC, Wauford PK, Rybak RJ, Oswald KD. Rollen av välsmakande mat och hunger som utlösande faktorer i en djurmodell av stressinducerad hetsätning. Int J Eat Disord. 2003;34:183–197. [PubMed]
  • Hatfield T, Han JS, Conley M, Gallagher M, Holland P. Neurotoxiska lesioner av basolaterala, men inte centrala, amygdala stör Pavlovian andra ordningens konditionering och förstärkare devalveringseffekter. J Neurosci. 1996;16:5256-5265. [PubMed]
  • Heilig M, Egli M, Crabbe JC, Becker HC. Akut abstinens, utdragen abstinens och negativ påverkan vid alkoholism: är de kopplade. Addict Biol. 2010;15:169–184. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Heilig M, Koob GF. En nyckelroll för kortikotropinfrisättande faktor vid alkoholberoende. Trender Neurosci. 2007;30:399–406. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Heinrichs SC, Menzaghi F, Schulteis G, Koob GF, Stinus L. Suppression av kortikotropinfrisättande faktor i amygdala dämpar aversiva konsekvenser av morfinavtagning. Behav Pharmacol. 1995; 6: 74-80. [PubMed]
  • Iemolo A, Valenza M, Tozier L, Knapp CM, Kornetsky C, Steardo L, et al. Abstinens från kronisk, intermittent tillgång till ett mycket välsmakande foder inducerar depressivt beteende hos råttor som äter tvångsmässigt. Behav Pharmacol. 2012;23:593–602. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Koob GF. En roll för hjärnspänningssystem i beroende. Nervcell. 2008; 59: 11-34. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Koob GF. Neurobiologiska substrat för den mörka sidan av tvångsmässighet i missbruk. Neurofarmakologi. 2009;56 (Suppl 1:18–31. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Koob GF. Rollen för CRF och CRF-relaterade peptider i den mörka sidan av beroende. Brain Res. 2010; 1314: 3-14. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Koob GF, Heinrichs SC. En roll för kortikotropinfrisättande faktor och urokortin i beteendemässiga svar på stressorer. Brain Res. 1999;848:141–152. [PubMed]
  • Koob GF, Le Moal M. Plasticity of belöning neurokredsläge och den "mörka sidan" av narkotikamissbruk. Nat Neurosci. 2005; 8: 1442-1444. [PubMed]
  • Koob GF, Le Moal M. Recension. Neurobiologiska mekanismer för motståndares motivationsprocesser i beroende. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2008; 363: 3113-3123. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND. Neurocircuitry av beroende. Neuropsychopharmacology. 2010; 35: 217-238. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Logrip ML, Koob GF, Zorrilla EP. Roll av kortikotropinfrisättande faktor i drogberoende: potential för farmakologisk intervention. CNS-läkemedel. 2011;25:271–287. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Maj M, Turchan J, Smialowska M, Przewlocka B. Morfin och kokainpåverkan på CRF-biosyntes i råttans centrala kärna i amygdala. Neuropeptider. 2003; 37: 105-110. [PubMed]
  • McNally GP, Akil H. Roll av kortikotropinfrisättande hormon i amygdala och sängkärnan i stria terminalis i de beteendemässiga, smärtmodulerande och endokrina konsekvenserna av opiatabstinens. Neurovetenskap. 2002;112:605–617. [PubMed]
  • Merlo Pich E, Lorang M, Yeganeh M, Rodriguez de Fonseca F, Raber J, Koob GF, et al. Ökning av extracellulära kortikotropinfrisättande faktorliknande immunreaktivitetsnivåer i amygdala hos vakna råttor under begränsningsstress och etanolabstinens mätt med mikrodialys. J Neurosci. 1995;15:5439-5447. [PubMed]
  • Murray E, Wise S, Rhodes S. 2011Vad kan olika hjärnor göra med belöning In Gottfried JA (red).Neurobiology of Sensation and Reward, Kapitel 4 CRC Press: Boca Raton, FL, USA [PubMed]
  • Parylak SL, Koob GF, Zorrilla EP. Den mörka sidan av matberoende. Physiol Behav. 2011;104:149–156. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Paxinos G, Watson C. 2007The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates6th edn.Academic Press
  • Pellegrino A. A Stereotaxic Atlas of the Rat Brain. Plenum: New York; 1979.
  • Rodriguez de Fonseca F, Carrera MR, Navarro M, Koob GF, Weiss F. Aktivering av kortikotropinfrisättande faktor i det limbiska systemet vid cannabinoiduttag. Vetenskap. 1997; 276: 2050-2054. [PubMed]
  • Sabino V, Cottone P, Steardo L, Schmidhammer H, Zorrilla EP. 14-Methoxymetopon, en mycket potent mu-opioidagonist, påverkar tvåfasiskt etanolintaget hos råttor som föredrar alkohol från Sardinien. Psykofarmakologi (Berl) 2007;192:537–546. [PubMed]
  • Salinas JA, förälder MB, McGaugh JL. Ibotensyralesioner i amygdala basolaterala komplex eller centrala kärna påverkar differentiellt svaret på minskningar i belöning. Brain Res. 1996;742:283–293. [PubMed]
  • Shalev U, Erb S, Shaham Y. Roll av CRF och andra neuropeptider i stressinducerad återinsättning av drogsökning. Brain Res. 2010;1314:15–28. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Vale W, Spiess J, Rivier C, Rivier J. Karakterisering av en 41-rester av fårhypotalamuspeptid som stimulerar utsöndring av kortikotropin och beta-endorfin. Vetenskap. 1981;213:1394–1397. [PubMed]
  • Volkow ND, O'Brien CP. Frågor för DSM-V: bör fetma inkluderas som en hjärnsjukdom. Am J Psykiatri. 2007;164:708–710. [PubMed]
  • Wellman LL, Gale K, Malkova L. GABAA-medierad hämning av basolateral amygdala blockerar belöningsdevalvering hos makaker. J Neurosci. 2005;25:4577–4586. [PubMed]
  • Yach D, Stuckler D, Brownell KD. Epidemiologiska och ekonomiska konsekvenser av de globala epidemierna av fetma och diabetes. Nat Med. 2006;12:62–66. [PubMed]