Metanfetamina atua em subpopulações de neurônios que regulam o comportamento sexual em ratos machos (2010)

Neurociência. 2010 Mar 31; 166 (3): 771-84. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2009.12.070. Epub 2010 Jan 4.

Frohmader KS, Wiskerke J, RA sábio, Lehman MN, Coolen LM.

fonte

Departamento de Anatomia e Biologia Celular, Escola Schulich de Medicina e Odontologia, Universidade de Western Ontario, Londres, ON, Canadá, N6A 5C1.

Sumário

A metanfetamina (Meth) é um estimulante altamente viciante. O abuso de metanfetamina é comumente associado à prática de comportamento de risco sexual e o aumento da prevalência do Vírus da Imunodeficiência Humana e dos usuários de metanfetamina relatam aumento do desejo sexual, da excitação e do prazer sexual. A base biológica para este nexo droga-sexo é desconhecida. O presente estudo demonstra que a administração de Meth em ratos machos ativa neurônios em regiões cerebrais do sistema mesolímbico que estão envolvidos na regulação do comportamento sexual. Especificamente, o Meth e o acasalamento co-ativam as células no núcleo e no núcleo do nucleus accumbens, na amígdala basolateral e no córtex cingulado anterior. Esses achados ilustram que, em contraste com a crença atual, as drogas de abuso podem ativar as mesmas células como um reforçador natural, isto é, o comportamento sexual e, por sua vez, podem influenciar a busca compulsiva dessa recompensa natural.

Palavras-chave: nucleus accumbens, amígdala basolateral, córtex pré-frontal, abuso de substâncias, reprodução, dependência

A motivação e a recompensa são reguladas pelo sistema mesolímbico, uma rede interconectada das áreas do cérebro compreendidas pela área tegmentar ventral (VTA) nucleus accumbens (NAc), amígdala basolateral e córtex pré-frontal medial (mPFC) (Kelley, 2004, Kalivas e Volkow, 2005). Há ampla evidência de que o sistema mesolímbico é ativado em resposta a ambas as substâncias de abuso (Di Chiara e Imperato, 1988, Chang et al., 1997, Ranaldi et al., 1999) e a comportamentos naturalmente recompensadores, como o comportamento sexual (Fiorino et al., 1997, Balfour e outros, 2004). O comportamento sexual masculino e, em particular, a ejaculação, é altamente gratificante e reforçador em modelos animais. (Pfaus et al., 2001). Roedores machos desenvolvem uma preferência de lugar condicionada (CPP) para a cópula (Agmo e Berenfeld, 1990, Martinez e Paredes, 2001, Tenk, 2008), e realizará tarefas operantes para obter acesso a uma mulher sexualmente receptiva (Everitt et al., 1987, Everitt e Stacey, 1987). Drogas de abuso também são recompensadoras e reforçadoras, e os animais aprenderão a auto-administrar substâncias de abuso, incluindo opiáceos, nicotina, álcool e psicoestimulantes (Sábio, 1996, Pierce e Kumaresan, 2006, Feltenstein e Veja, 2008). Embora seja sabido que ambas as drogas de abuso e comportamento sexual ativam áreas cerebrais mesolímbicas, atualmente não está claro se as drogas de abuso influenciam os mesmos neurônios que medeiam o comportamento sexual.

Estudos eletrofisiológicos demonstraram que tanto a comida quanto a cocaína ativam os neurônios no NAc. No entanto, os dois reforços não ativam as mesmas células dentro do NAc (Carelli et al., 2000, Carelli e Wondolowski, 2003). Além disso, a autoadministração de alimentos e sacarose não causa alterações a longo prazo das propriedades eletrofisiológicas como são induzidas pela cocaína (Chen et al., 2008). Em contraste, uma coleção de evidências sugere que o comportamento sexual masculino e as drogas de abuso podem de fato agir nos mesmos neurônios mesolímbicos. Psicoestimulantes e opioides alteram a expressão do comportamento sexual em ratos machos (Mitchell e Stewart, 1990, Fiorino e Phillips, 1999a, Fiorino e Phillips, 1999b). Dados recentes do nosso laboratório mostraram que a experiência sexual altera a capacidade de resposta aos psicoestimulantes, evidenciada por respostas locomotoras sensibilizadas e percepção de recompensa sensibilizada à d-anfetamina em animais sexualmente experientes. (Pitchers et al., 2009). Uma resposta semelhante foi previamente observada com exposição repetida a anfetaminas ou outras drogas de abuso (Lett, 1989, Shippenberg e Heidbreder, 1995, Shippenberg et al., 1996, Vanderschuren e Kalivas, 2000). Juntos, esses achados sugerem que o comportamento sexual e as respostas às drogas de abuso são mediados pelos mesmos neurônios do sistema mesolímbico. Assim, o primeiro objetivo do presente estudo é investigar a ativação neural do sistema mesolímbico por comportamento sexual e administração de drogas no mesmo animal. Em particular, testamos a hipótese de que o psicoestimulante metanfetamina (Meth) atua diretamente nos neurônios que normalmente mediam o comportamento sexual.

Meth é uma das drogas ilícitas mais consumidas no mundo (NIDA, 2006, Ellkashef et al., 2008) paraE tem sido freqüentemente ligado a comportamentos sexuais alterados. Curiosamente, os usuários de metanfetamina relatam aumento do desejo sexual e da excitação, bem como aumento do prazer sexual (Semple et al., 2002, Schilder et al., 2005). Além disso, O abuso de metanfetamina é comumente associado ao comportamento sexualmente compulsivo (Rawson et al., 2002). Os usuários geralmente relatam ter vários parceiros sexuais e são menos propensos a usar proteção do que outros usuários de drogas (Somlai et al., 2003, Springer e outros, 2007). Infelizmente, os estudos que indicam o uso de Meth como um preditor de comportamento de risco sexual são limitados, uma vez que eles se baseiam em autorrelatos não confirmados (Elifson et al., 2006). Portanto, uma investigação sobre a base celular de mudanças induzidas por Meth no comportamento sexual em um modelo animal é necessária para a compreensão desse complexo nexo droga-sexo.

Em vista da evidência acima sugerindo que as drogas de abuso, e particularmente Meth, podem atuar sobre os neurônios normalmente envolvidos na mediação do comportamento sexual, o objetivo do presente estudo foi investigar a ativação neural por comportamento sexual e administração do psicoestimulante Meth.. Este estudo implementou uma técnica neuroanatômica, utilizando a visualização imuno-histoquímica dos genes precoces imediatos Fos e Map Quinase fosforilada (pERK) para detectar a ativação neural concorrente por comportamento sexual e Meth, respectivamente. Fos é expresso apenas dentro do núcleo das células, com um nível máximo de expressão 30-90 minutos após a ativação do neurônio. Há ampla evidência de que a atividade sexual induz a expressão de Fos no cérebro (Pfaus e Heeb, 1997, Veening e Coolen, 1998), incluindo o sistema mesocorticolímbico (Robertson e outros, 1991, Balfour e outros, 2004). Há também evidências de que drogas de abuso induzem a expressão de pERK dentro do sistema mesocorticolímbico (Valjent e outros, 2000, Valjent e outros, 2004, Valjent e outros, 2005). Em contraste com a expressão de Fos, a fosforilação da ERK é um processo altamente dinâmico e só ocorre 5-20 minutos após a ativação neuronal. Os perfis temporais distintos de Fos e pERK os tornam um conjunto ideal de marcadores para ativação neuronal subsequente por dois estímulos diferentes.

PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS

Assuntos

Ratos Sprague Dawley machos adultos (210-225g) obtidos de Charles River Laboratories (Montreal, QC, Canadá) foram alojados dois por gaiola em gaiolas de plexiglas padrão (gaiolas domésticas). A sala de animais foi mantida num ciclo de luz invertida 12 / 12 h (luzes apagadas a 10.00 h). Comida e água estavam disponíveis AD Libitum. Todos os testes foram realizados durante a primeira metade da fase escura sob iluminação vermelha escura. As fêmeas de estímulo utilizadas para o comportamento sexual foram ovariectomizadas bilateralmente sob anestesia profunda (13 mg / kg cetamina e 87 mg / kg xilazina) e receberam um implante subcutâneo contendo 5% de benzoato de estradiol (EB) e 95% colesterol. A receptividade sexual foi induzida por administração subcutânea (sc) de 500 μg de progesterona em 0.1 ml de óleo de gergelim 4 h antes do teste. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Animal Care Committee da University of Western Ontario e estão de acordo com as diretrizes delineadas pelo Canadian Council on Animal Care.

Designs Experimentais

Experimentos 1 e 2: ratos machos (n = 37) foram acasalados com uma fêmea receptiva a uma ejaculação (E) ou por 30 min, que chegou primeiro em gaiolas de teste limpas (60 × 45 × 50 cm) durante cinco vezes - pré-teste semanal de sessões de acasalamento, para ganhar experiência sexual. Durante as duas últimas sessões, todos os parâmetros padrão para desempenho sexual foram registrados, incluindo: latência de montagem (ML; tempo desde a introdução da fêmea até a primeira montada), latência intromissão (IL; tempo da introdução da fêmea até a primeira montagem penetração vaginal), latência da ejaculação (EL; tempo desde a primeira intromissão até a ejaculação), intervalo pós-ejaculação (PEI; tempo da ejaculação até a primeira intromissão subseqüente), número de montarias (M) e número de intromissões (IM)Agmo, 1997). Todos os homens receberam 1 ml / kg de injecção diária de 0.9% NaCl (solução salina; sc) 3 dias consecutivos antes do dia do teste, para habituação ao manuseamento e injecções. Um dia antes do dia do teste, todos os machos eram solteiros. Em homens experientes, Fos pode ser induzido por pistas contextuais condicionadas associadas à experiência sexual prévia (Balfour e outros, 2004). Portanto, todas as manipulações de acasalamento e controle durante os testes finais foram conduzidas na gaiola de origem (evitando pistas preditivas condicionadas) para evitar a ativação induzida por estímulo condicionado nos machos controles não acasalados. Os machos foram distribuídos em oito grupos experimentais que não diferiram em qualquer medida de desempenho sexual durante as duas últimas sessões de acasalamento (dados não mostrados). Durante o teste final, os machos foram autorizados a acasalar em sua gaiola até que exibissem uma ejaculação (sexo) ou não recebessem parceira (sem sexo). Todos os machos acasalados foram perfundidos 60 minutos após o início do acasalamento para permitir a análise da expressão de Fos induzida por acasalamento. Os homens receberam uma injecção de 4 mg / kg Meth ou 1 ml / kg de solução salina (sc) (n = 4 cada), 10 (experiência 1) ou 15 (experiência 2) min antes da perfusão, para análise da fosforilação induzida pelo fármaco de quinase MAP. A dose e o tempo antes da perfusão foram baseados em relatórios anteriores (Choe et al., 2002, Choe e Wang, 2002, Chen e Chen, 2004, Mizoguchi et al., 2004, Ishikawa et al., 2006). Os grupos de controle incluíam machos que não acasalaram, mas receberam Meth 10 (n = 7) ou 15 (n = 5) min antes do sacrifício, ou injeções salinas 10 (n = 5) ou 15 (n = 4) min antes do sacrifício . Após o sacrifício, os cérebros foram processados ​​para imuno-histoquímica.

Experimento 3: Uma vez que uma alta dose de Meth foi usada na experiência 1 e 2, uma experiência neuroanatômica adicional foi realizada para investigar se o comportamento sexual e uma dose menor de Meth induzem padrões dependentes de dose de ativação neural sobreposta. Este estudo foi realizado de maneira idêntica às experiências 1 e 2. No entanto, no teste final, os grupos acasalados e não pareados (n = 6 cada) receberam 1 mg / kg de Meth (sc) 15 min antes do sacrifício.

Experimento 4: Para testar se a ativação neural causada por sexo e Meth é específica para Meth, este experimento investigou se padrões semelhantes de ativação neural sobreposta poderiam ser vistos com o psicoestimulante d-anfetamina (Amph). Este experimento foi realizado de maneira idêntica às experiências 1 e 2. No entanto, no teste final, os homens foram administrados com Amph (5 mg / kg) ou solução salina (1 mg / kg) (sc) 15 min antes do sacrifício (n = 5 cada). Os machos não controlados de controlo receberam uma solução salina ou Amph 15 minutos antes do sacrifício. Uma visão geral dos grupos experimentais utilizados nos experimentos 1-4 é fornecida em tabela 1.

tabela 1      

Visão geral dos grupos experimentais incluídos nos experimentos 1 – 4.

Preparação de tecido

Os animais foram anestesiados com pentobarbital (270 mg / kg; ip) e perfundidos transcardiamente com 5 ml de solução salina, seguidos de 500 ml 4% paraformaldeído em tampão de fosfato 0.1 M (PB). Os cérebros foram removidos e pós-fixados para 1 h à temperatura ambiente no mesmo fixador, depois imersos em 20% de sacarose e 0.01% de Azida de Sódio em 0.1 M PB e armazenados a 4 ° C. Cortes coronais (35 μm) foram cortados em micrótomo de congelamento (H400R, Micron, Alemanha), coletados em quatro séries paralelas em solução crioprotetora (30% sacarose e 30% etileno glicol em 0.1 M PB) e armazenados a 20 ° C até em processamento.

Imunohistoquímica

Todas as incubações foram realizadas à temperatura ambiente com agitação suave. As secções de flutuação livre foram lavadas extensivamente com solução salina tamponada com fosfato 0.1 M (PBS) entre incubações. As seções foram incubadas em 1% H2O2 para 10 min e, em seguida, bloqueado em solução de incubação (PBS contendo 0.1% de albumina sérica bovina e 0.4% Triton X-100) para 1 h.

PERK / FOS

O tecido foi incubado durante a noite com um anticorpo policlonal de coelho contra quinases de p42 e p44 ERK1 e ERK2 (pERK; 1: experiência 400 1 lote 19; 1: experiência 4.000 2 e 3 lote 21; Cell Signaling Cat # 9101;), seguido de um 1 h incubações com IgG anti-coelho de burro biotinilado (1: 500; Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA) e complexo de avidina-peroxidase de rábano (ABC Elite; 1: 1000; Vector Laboratories, Burlingame, CA). Em seguida, o tecido foi incubado para 10 min com tiramida biotinilada (BT; 1: 250 em PBS + 0.003% H2O2; Kit de Amplificação de Sinais Tyramid, NEN Life Sciences, Boston, MA) e para 30 min com estreptavidina conjugada com Alexa 488 (1: 100; Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA). Em seguida, o tecido foi incubado durante a noite com um anticorpo policlonal de coelho contra c-Fos (1: 500; SC-52; Santa Cruz Biotecnologia, Santa Cruz, CA), seguido de uma incubação 30 min com cabra anti-coelho Alexa 555 (1: 200; Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA). Após a coloração, as secções foram lavadas cuidadosamente em 0.1 M PB, montadas em lâminas de vidro com 0.3% de gelatina em ddH20 e lamínula com um meio de montagem aquoso (Gelvatol) contendo octano agente anti-desbotamento 1,4-diazabiciclo (2,2) (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Os controlos imuno-histoquicos incluam a omiss de um ou ambos os anticorpos primios, resultando na auscia de marcao no comprimento de onda apropriado.

Análise de Dados

Comportamento sexual

Para os quatro experimentos, os parâmetros padrão para o desempenho sexual foram registrados como descrito acima e analisados ​​por meio de análise de variância (ANOVA). A análise dos dados do comportamento sexual durante o dia final do teste não revelou diferenças significativas entre os grupos em nenhum dos parâmetros de desempenho sexual.

Contagens de células pERK / Fos

Células marcadas simples e duplas para Fos e pERK foram contadas nos níveis caudais do núcleo NAc e sub-regiões da casca, amígdala basolateral (BLA), amígdala medial posterodorsal (MEApd), amígdala central (CeA), núcleo pré-óptico medial (NMP), póstero-medial e núcleo do leito póstero-lateral da estria terminal (BNSTpm e BNSTpl), e as sub-regiões da área cingulada anterior (ACA), pré-límbica (PL) e infralímbica (IL) do mPFC. As imagens foram capturadas usando uma câmera CCD refrigerada (Microfire, Optronics) acoplada a um microscópio Leica (DM500B, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemanha) e software Neurolucida (MicroBrightfield Inc) com configurações de câmera fixas para todos os indivíduos (usando objetivas 10x). Utilizando o software neurolucida, as áreas de análise foram definidas com base em pontos de referência (Swanson, 1998) único para cada região do cérebro Figura 1). Áreas padrão de análise foram usadas em todas as áreas, exceto no núcleo e no shell do NAc. Nestas �timas �eas, a express� de pERK e Fos n� era homog�ea e aparecia em padr�s semelhantes a remendos. Portanto, todo o núcleo e a casca foram delineados com base em pontos de referência (ventrículo lateral, comunicação anterior e ilhas de Calleja). As áreas de análise não diferiram entre os grupos experimentais e foram 1.3 mm2 no núcleo e no shell do NAc. As áreas padrão de análise para as áreas restantes foram: 1.6 mm2 no BLA, 2.5 e 2.25 mm2 no MEApd e CeA respectivamente, 1.0 mm2 no MPN, 1.25 mm2 nas sub-regiões BNST e mPFC, e 3.15 mm2 no VTA. Foram contadas duas secções bilateralmente para cada região do cérebro por animal, e o número de células marcadas simples e duplas para pERK e Fos, bem como as percentagens de células pERK que expressaram o marcador Fos foram calculadas. Para as experiências 1, 2 e 4, as médias dos grupos foram comparadas usando ANOVA two way (fatores: acasalamento e droga) e LSD de Fisher para post hoc comparações a um nível de significância de 0.05. Para o experimento 3, as médias dos grupos foram comparadas usando testes t não pareados em um nível de significância de 0.05.

Figura 1      

Desenhos esquemáticos e imagens ilustrando áreas do cérebro de análise. As áreas de análise indicadas basearam-se em pontos de referência únicos para cada região do cérebro, não diferiram entre os grupos experimentais e foram 1.25 mm2 nas sub-regiões mPFC (a), 1.3 mm2 no ...

Imagens

Imagens digitais para Figura 3 foram capturados usando câmera CCD (DFC 340FX, Leica) acoplada a um microscópio Leica (DM500B) e foram importados para o software Adobe Photoshop 9.0 (Adobe Systems, San Jose, CA). As imagens não foram alteradas de forma alguma, exceto para ajuste de brilho.

Figura 3      

Imagens representativas de seções de NAc imunomarcadas para Fos (vermelho; a, d, g, j) e pERK (verde; b, e, h, k) de animais de cada grupo experimental: Sem Sexo + Sal (a, b, c) , Sexo + Sal (d, e, f), Sem Sexo + Meth (g, h, i) e Sexo + Meth (j, k, l). Painéis direitos são ...

PREÇO/ RESULTADOS

Ativação Neural do Sistema Límbico por Comportamento Sexual e Administração de Metanfetaminas

Experimento 1: A análise de células marcadas simples e duplas para FER induzida pelo acasalamento e pERK induzida por Meth em machos que receberam meth 10 minutos antes do sacrifício revelou Fos induzido pelo acasalamento no NMP, BNSTpm, núcleo e concha de NAc, BLA, VTA, e todas as sub-regiões de mPFC, consistentes com estudos anteriores que demonstram a expressão de Fos induzida por acasalamento nessas áreas (Baum e Everitt, 1992, Pfaus e Heeb, 1997, Veening e Coolen, 1998, Hull e outros, 1999). A administração de metanfetamina 10 minutos antes do sacrifício induziu pERK no núcleo e concha de NAc, BLA, MeApd, CeA, BNSTpl e regiões de mPFC, consistente com os padrões de ativação induzidos por outros psicoestimulantes (Valjent e outros, 2000, Valjent e outros, 2004, Valjent e outros, 2005).

Além disso, três padrões de co-expressão de ativação neural por comportamento sexual e Meth foram observados: Primeiro, áreas cerebrais foram identificadas onde sexo e drogas ativaram populações neurais não sobrepostas (tabela 2) Especificamente, no CeA, MEApd, BNSTpl e mPFC, aumentos significativos em ambos pERK induzido por drogas (F (1,16) = 7.39-48.8; p = 0.015- <0.001) e Fos induzido por sexo (F (1,16, 16.53) = 158.83–0.001; p <1,16) foram observados. No entanto, nessas regiões não houve aumentos significativos em neurônios duplamente marcados em machos tratados com Metanfetamina acasalados. A única exceção foi o MEApd, onde foi encontrado um efeito do acasalamento no número de células duplas marcadas (F (9.991) = 0.006; p = XNUMX). No entanto, não houve efeito geral do tratamento com drogas e a marcação dupla nos grupos tratados com metanfetamina não foi significativamente maior do que nos grupos tratados com solução salina, portanto, não foi causada pela droga (tabela 2). Segundo, as áreas do cérebro foram identificadas onde a ativação neural foi induzida apenas pelo acasalamento (tabela 3). Especificamente, o MPN, o BNSTpm e o VTA foram ativados apenas por acasalamento e continham aumentos significantes nos Fos induzidos pelo acasalamento (F (1,16) = 14.99-248.99; p ≤ 0.001), mas nenhum pERK induzido por Meth.

tabela 2      

Visão geral da expressão de pERK induzida por Fos e Meth induzida por acasalamento em áreas do cérebro onde sexo e drogas ativam populações neurais não sobrepostas.
tabela 3      

Visão geral da expressão de pERK induzida por Fos e Meth induzida por math em áreas do cérebro onde a ativação neural foi induzida apenas por acasalamento.

Finalmente, áreas do cérebro foram encontradas onde o sexo e as drogas ativavam populações sobrepostas de neurônios (Figura 2 e E3) .3) No núcleo e casca do NAc, BLA e ACA, houve efeitos gerais de acasalamento (F (1,16) = 7.87-48.43; p = 0.013- <0.001) e tratamento medicamentoso (F (1,16) = 6.39- 52.68; p = 0.022- <0.001), bem como uma interação entre esses dois fatores (F (1,16) = 5.082-47.27; p = 0.04- <0.001; nenhuma interação significativa em ACA) no número de células que expressam ambos Fos induzido por acasalamento e pERK induzido por Meth. A análise post hoc revelou que o número de neurônios duplamente marcados foi significativamente maior em machos com injeção de Metanfetamina acasalados em comparação com machos tratados com Metanfetamina não acasalados (p = 0.027- <0.001) ou tratados com solução salina (p = 0.001- <0.001) (Figura 2 e E3) .3). Quando os dados foram expressos como as porcentagens de neurônios ativados por drogas, 39.2 ± 5.3% no núcleo NAc, 39.2 ± 5.8% na camada NAc, 40.9 ± 6.3% na BLA e 50.0 ± 5.3% dos neurônios ACA foram ativados por tanto acasalamento e metanfetamina.

Figura 2      

Fos induzida por sexo e expressão de pERK induzida por Meth em neurônios NAc, BLA e ACA 10 min após a administração de 4 mg / kg Meth. Números médios ± sem de células marcadas com Fos (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) e duplas (c, f, i, l) no núcleo NAc (a, ...

Uma observação inesperada foi que o comportamento sexual afetou a pERK induzida por Meth. Embora Meth tenha induzido de forma significativa os níveis de pERK em ambos os grupos injetados com Meth, no NAc, BLA e ACA, a rotulagem de pERK foi significativamente menor em machos injetados com Meth quando comparados com machos injetados com Meth (Figura 2b, e, h, k; p = 0.017- <0.001). Esse achado pode apoiar ainda mais a hipótese de que sexo e drogas agem nos mesmos neurônios, mas também pode ser indicativo de alterações induzidas pelo acasalamento na captação ou metabolismo de drogas que, por sua vez, causam respostas neurais alteradas ao Meth. Para investigar se o comportamento sexual causa um padrão temporal diferente de ativação induzida por drogas, seções do NAc, BLA e ACA foram coradas para machos sacrificados em um momento posterior (15 min) após a administração do fármaco (experiência 2).

Experimento 2: A análise de células marcadas simples e duplas confirmou os achados descritos acima de que o comportamento sexual e a exposição subseqüente aos minutos do Meth 15 antes do sacrifício resultaram em aumentos significativos da imunomarcação de Fos e pERK no núcleo e concha de NAc, BLA e ACA. Além disso, co-expressão significativa de pERK induzida por Fos e induzida por Meth foram novamente encontradas nessas áreas (Figura 4; efeito de acasalamento: F (1,12) = 15.93–76.62; p = 0.002- <0.001; efeito da droga: F (1,12) = 14.11–54.41; p = 0.003- <0.001). O número de neurônios duplos marcados em machos acasalados injetados com Meth foi significativamente maior em comparação com os machos tratados com Meth não acasalados (p <0.001) ou tratados com solução salina (p <0.001). Quando os dados foram expressos como as porcentagens de neurônios ativados por drogas, 47.2 ± 5.4% (núcleo NAc), 42.7 ± 7.6% (shell NAc), 36.7 ± 3.7% (BLA) e 59.5 ± 5.1% (ACA) dos neurônios ativados por acasalamento também foram ativados por Meth. Além disso, o pERK induzido por drogas não diferiu entre animais acasalados e não acasalados (Figura 4b, e, h, k), em todas as áreas, exceto no ACA (p <0.001). Esses dados indicam que o comportamento sexual de fato causa uma alteração do padrão temporal de indução de pERK por Meth.

Figura 4      

Fos induzida por sexo e expressão de pERK induzida por Meth em neurônios NAc, BLA e ACA 15 min após a administração de 4 mg / kg Meth. Números médios ± sem de células marcadas com Fos (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) e duplas (c, f, i, l) no núcleo NAc (a, ...

Ativação Neural Após Comportamento Sexual e 1 mg / kg Meth

Até o momento, os resultados revelaram que o comportamento sexual e o 4 mg / kg Meth ativaram populações sobrepostas de neurônios no núcleo e no invólucro de NAc, BLA e ACA. To investigar a influência da dosagem da droga nesta sobreposição na ativação, os padrões de ativação neural também foram estudados usando uma dose menor de Meth. O núcleo e o invólucro de NAc, BLA e ACA foram analisados ​​quanto à ativação induzida por sexo e Meth. De fato, o comportamento sexual e a exposição subsequente a Meth resultaram em aumentos significativos da imunomarcação de Fos e pERK no núcleo NAc e nas sub-regiões de conchas, o BLA, bem como neurônios na região ACA do mPFC (Figura 5). Curiosamente, a menor dose de Meth resultou em números semelhantes de neurônios marcados com pERK como induzidos por 4 mg / kg Meth nas quatro regiões cerebrais analisadas. Mais importante ainda, o núcleo e shell de NAc, BLA e ACA apresentaram aumentos significativos no número de células duplamente marcadas (Figura 5c, f, i, l) em comparação com machos não acasalados com injeção de Metanfetamina (p = 0.003- <0.001). Quando os dados foram expressos como as porcentagens de neurônios ativados por drogas, 21.1 ± 0.9% e 20.4 ± 1.8% no núcleo e concha do NAc, respectivamente, 41.9 ± 3.9% no BLA e 49.8 ± 0.8% dos neurônios ACA foram ativados por sexo e Meth.

Figura 5      

Fos induzida por sexo e expressão de pERK induzida por Meth em neurônios NAc, BLA e ACA 15 min após a administração de 1 mg / kg Meth. Números médios ± sem de células marcadas com Fos (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) e duplas (c, f, i, l) no núcleo NAc (a, ...

Ativação neural após comportamento sexual e administração de d-anfetamina

Para testar se os resultados acima eram específicos para Meth, foi realizada uma experiência adicional para estudar a ativação neural induzida por acasalamento e por Amph. A análise de células marcadas simples e duplas para pERK e Fos mostrou que o comportamento sexual e a exposição subsequente a Amph resultaram em aumentos significativos da imunomarcação de Fos e pERK no núcleo e concha de NAc e BLA (Figura 6; efeito de acasalamento: F (1,15) = 7.38–69.71; p = 0.016- <0.001; efeito da droga: F (1,15) = 4.70–46.01; p = 0.047- <0.001). Além disso, o número de neurônios duplos marcados foi significativamente maior em machos tratados com Amph acasalados em comparação com tratados com Amph não acasalados (p = 0.009- <0.001), ou tratados com solução salina (p = 0.015- <0.001) (Figura 6c, f, i). Quando os dados foram expressos como as porcentagens de neurônios ativados por droga, 25.7 ± 2.8% e 18.0 ± 3.2% no núcleo e no invólucro NAc respectivamente, e 31.4 ± 2.0% dos neurônios BLA foram ativados tanto pelo acasalamento quanto pelo Amph. A região ACA do mPFC apresentou níveis significativos de Fos induzidos por acasalamento (Figura 6j; F (1,15) = 168.51; p <0.001). No entanto, ao contrário de Meth, Amph não resultou em aumentos significativos nos níveis de pERK induzidos por drogas no ACA (Figura 6k) ou números de neurônios duplos rotulados na ACA (Figura 6l) quando comparados com machos injetados com solução salina, acasalados ou não acoplados.

Figura 6      

Fos induzida por sexo e expressão de pERK induzida por Amph em neurônios NAc, BLA e ACA 15 min após administração de 5 mg / kg Amph. Números médios ± sem de células marcadas com Fos (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) e duplas (c, f, i, l) no núcleo NAc (a, ...

DISCUSSÃO

O presente estudo demonstra a nível celular uma sobreposição entre a ativação neural pelo comportamento sexual reforçador natural e o psicoestimulante Meth. Portanto, esses dados mostram que as drogas não apenas agem nas mesmas regiões do cérebro que regulam a recompensa natural, mas, de fato, as drogas ativam as mesmas células envolvidas na regulação da recompensa natural. Especificamente, foi mostrado aqui que o comportamento sexual e a metanfetamina co-ativaram uma população de neurônios na região central do núcleo e concha, BLA e região ACA do mPFC, identificando locais potenciais onde a Meth pode influenciar o comportamento sexual.

A descoberta atual de que o comportamento sexual e a administração de Meth ativam populações sobrepostas de neurônios no NAc, BLA e ACA está em contraste com os achados de outros estudos mostrando que diferentes populações de neurônios NAc codificam a recompensa natural e medicamentosa.

Especificamente, estudos eletrofisiológicos que compararam a ativação neural durante a autoadministração de recompensas naturais (alimentos e água) e cocaína intravenosa indicaram que a autoadministração de cocaína ativou uma população diferencial, não sobreposta, de neurônios que geralmente não respondeu durante a resposta operante à água. e reforço alimentar (92%). Apenas 8% dos neurônios acumbais apresentaram ativação tanto pela cocaína quanto pela recompensa natural (Carelli et al., 2000).

Em contraste, a maioria (65%) da célula no NAc mostrou ativação por diferentes recompensas naturais (comida e água), mesmo se um reforçador fosse mais palatável (sacarose) (Roop et al., 2002).

Vários fatores podem ter contribuído para a discrepância com os resultados atuais. Primeiro, diferentes abordagens técnicas foram usadas para investigar a atividade neural. O presente estudo utilizou um método neuroanatômico para detecção de ativação neural concomitante por dois estímulos diferentes usando imunocitoquímica fluorescente dupla para Fos e pERK, permitindo a investigação da ativação de uma única célula em grandes extensões de áreas do cérebro. Em contraste, os estudos de Carelli e colaboradores usaram registros eletrofisiológicos restritos ao NAc de comportamento de animais para abordar se a autoadministração de drogas de abuso ativa o mesmo circuito neural usado por recompensas naturais.

Em segundo lugar, o presente estudo investigou uma recompensa natural diferente, ou seja, o comportamento sexual em comparação com estudos anteriores, que usaram alimentos e água em ratos restritos. (Carelli, 2000). Comida e água podem ter menor valor de recompensa do que o acasalamento. O comportamento sexual é altamente recompensador e os ratos prontamente formam CPP para cópula (Agmo e Berenfeld, 1990, Martinez e Paredes, 2001, Tenk, 2008). Embora, os ratos com restrição alimentar formem CPP para água (Agmo et al., 1993, Regalias e Clifton, 1997) e comida (Regalias e Clifton, 1997), dRatos irrestritos preferencialmente consomem e formam CPP para alimentos mais saborosos (Jarosz et al., 2006, Jarosz et al., 2007).

Em terceiro lugar, nossos estudos incluíram diferentes drogas de abuso em comparação com estudos anteriores, utilizando metanfetaminas e anfetaminas em vez de cocaína.. Os presentes resultados demonstram que especificamente a metanfetamina e, em menor grau, a anfetamina, resultaram na ativação de neurônios também ativados pelo comportamento sexual. A experiência com drogas também pode ter influenciado nossos resultados. Os estudos atuais utilizaram animais sexualmente experientes, mas sem drogas. Em contraste, os estudos eletrofisiológicos de Carelli e colaboradores usaram animais “bem treinados” que receberam repetidas exposições à cocaína.

Portanto, é possível que a ativação induzida por Meth de neurônios ativados pelo comportamento sexual seja alterada em ratos com experiência em drogas. No entanto, estudos preliminares do nosso laboratório sugerem que a experiência com drogas provavelmente não será um fator importante como o comportamento sexual e o tratamento com metanfetamina em homens cronicamente tratados com Meth co-ativados por percentuais semelhantes de neurônios ativados por drogas, conforme relatado no estudo atual. (20.3 ± 2.5% no núcleo de NAc e 27.8 ± 1.3% no shell de NAc; Frohmader e Coolen, observações não publicadas).

Finalmente, o presente estudo investigou a ação “direta” de drogas utilizando administração passiva. Portanto, a análise atual não revela informações sobre os circuitos neurais envolvidos na busca de drogas ou dicas associadas à recompensa de drogas, mas revela atividade neural causada pela ação farmacológica da droga.. Nos estudos eletrofisiológicos anteriores, a atividade neural do NAc ocorrendo em segundos de respostas reforçadas não é o resultado da ação farmacológica da cocaína, mas é muito dependente de fatores associativos dentro do paradigma de autoadministração (Carelli, 2000, Carelli, 2002). Especificamente, a atividade neural do NAc é influenciada por apresentações independentes de resposta de estímulos associados à administração intravenosa de cocaína, bem como por contingências instrumentais (isto é, pressão de alavanca) inerentes a esse paradigma comportamental (Carelli, 2000, Carelli e Ijames, 2001, Carelli, 2002, Carelli e Wightman, 2004). Em resumo, nossos achados de co-ativação por recompensa natural e medicamentosa podem ser específicos para ativação por comportamento sexual e administrados passivamente por Meth e Amph.

Meth e sexo ativaram populações sobrepostas de neurônios no núcleo e no invólucro de NAc de uma maneira dependente da dose. Os neurônios co-ativados no NAc podem mediar os efeitos potenciais do Meth sobre a motivação e as propriedades recompensadoras do comportamento sexual, já que as lesões do NAc perturbam o comportamento sexual (Liu et al., 1998, Kippin et al., 2004). Além disso, esses neurônios são potencialmente um locus para efeitos de drogas dependentes de dose no acasalamento, já que a dose mais baixa de Meth (1 mg / kg) reduziu o número de células duplamente marcadas em 50% em comparação com a dose mais alta de Meth (4 mg / kg). kg). Embora este estudo não identifique o fenótipo químico de neurônios co-ativados, estudos anteriores mostraram que a expressão de pERK e Fos induzida por drogas no NAc é dependente de ambos os receptores de dopamina (DA) e glutamato (Valjent e outros, 2000, Ferguson e outros, 2003, Valjent e outros, 2005, Sun et al., 2008). Embora não esteja claro se a ativação neural induzida pelo acasalamento no NAc é dependente desses receptores, isso foi demonstrado em outras regiões do cérebro, particularmente na área pré-óptica medial (Lumley e Hull, 1999, Dominguez et al., 2007). TAssim, Meth pode atuar sobre os neurônios também ativados durante o comportamento sexual por meio da ativação de receptores de dopamina e glutamato. O papel do glutamato de NAc no comportamento sexual ainda não está claro, mas está bem estabelecido que o DA desempenha um papel crítico na motivação para o comportamento sexual (Hull e outros, 2002, Hull e outros, 2004, Pfaus, 2009). Estudos de microdiálise relataram aumentos no efluxo de NAc DA durante fases apetitivas e consumatórias do comportamento sexual masculino (Fiorino e Phillips, 1999a, Lorrain et al., 1999) e efluxo de DA mesolímbico foi correlacionado com a facilitação da iniciação e manutenção do comportamento sexual de ratos (Pfaus e Everitt, 1995). Além disso, estudos de manipulação de DA mostram antagonistas de DA no NAc inibem o comportamento sexual, enquanto agonistas facilitam o início do comportamento sexual.r (Everitt et al., 1989, Pfaus e Phillips, 1989). Assim, Meth pode afetar a motivação para o comportamento sexual via ativação de receptores DA.

Em contraste com o NAc, o número de células duplamente marcadas no BLA e no ACA permaneceu relativamente inalterado, independentemente da dose de Meth. O BLA é crítico para a aprendizagem associativa discreta e está fortemente envolvido no reforço condicionado e na avaliação da recompensa durante a resposta instrumental (Everitt et al., 1999, Cardinal e outros, 2002, Veja, 2002). Ratos lesionados em BLA exibem diminuição da pressão da alavanca para estímulos condicionados emparelhados com alimentos (Everitt et al., 1989) ou reforço sexual (Everitt et al., 1989, Everitt, 1990). Em contraste, essa manipulação não afeta a fase consumatória da alimentação e do comportamento sexual (Cardinal e outros, 2002). O BLA também desempenha um papel fundamental na memória de estímulos condicionados associados a estímulos de drogas (Grace e Rosenkranz, 2002, Laviolette e Grace, 2006). Lesões ou inativações farmacológicas do BLA bloqueiam a aquisição (Whitelaw et al., 1996) e expressão (Grimm e veja, 2000) reintegração da cocaína condicionada, sem afetar o processo de administração da droga. Além disso, Amph infundido diretamente no BLA resulta em uma reintegração potenciada do fármaco na presença dos estímulos condicionados (Veja et al., 2003). Portanto, é possível que a transmissão de DA reforçada por psicoestimulantes na BLA resulte em saliência emocional potencializada e busca (Ledford et al., 2003) de recompensa sexual, contribuindo assim para o impulso sexual aumentado e desejo relatado por abusadores de metanfetamina (Semple et al., 2002, Verde e Halkitis, 2006).

Na ACA, a ativação neural de neurônios ativados por sexo era independente da dosagem e específica para Meth, como não foi observado com Amph. Embora Meth e Amph tenham propriedades estruturais e farmacológicas similares, Meth é um psicoestimulante mais potente que Amph, com efeitos mais duradouros (NIDA, 2006). Estudos de Goodwin et al. mostraram que Meth gera um maior efluxo de DA e inibe a depuração de DA aplicada localmente mais efetivamente na NAc de rato do que em Amph. Estas características podem contribuir para as propriedades aditivas do Meth em comparação com o Amph (Goodwin et al., 2009e talvez as diferenças de ativação neural observadas entre as duas drogas. No entanto, não está claro se os diferentes padrões de resultados são devidos a diferenças de eficácia entre as drogas ou problemas de potência relacionados às doses empregadas, sendo necessárias investigações adicionais.

Co-ativação por Meth e sexo não foi observada em outras sub-regiões do mPFC (IL e PL). No rato, o ACA tem sido extensivamente estudado usando tarefas apetitivas, apoiando um papel em associações de estímulo-reforço (Everitt et al., 1999, Veja, 2002, Cardinal e outros, 2003). Há ampla evidência de que o mPFC está envolvido no desejo de drogas e recaída para a busca de drogas e o comportamento de tomada de drogas em humanos e ratos. (Grant et al., 1996, Childress e outros, 1999, Capriles et al., 2003, McLaughlin e veja, 2003, Shaham et al., 2003, Kalivas e Volkow, 2005). EuEm consonância com isso, foi proposto que a disfunção do CPFm causada pela exposição repetida a drogas de abuso pode ser responsável pelo controle reduzido do impulso e pelo aumento do comportamento direcionado ao medicamento, como observado em muitos adictos. (Jentsch e Taylor, 1999). Dados recentes de nosso laboratório demonstraram que lesões mPFC resultam em busca contínua de comportamento sexual, quando isso foi associado a um estímulo aversivo (Davis et al., 2003). Embora este estudo não tenha investigado o ACA, ele apoia a hipótese de que o mPFC (e o ACA especificamente) medeia os efeitos do Meth sobre a perda do controle inibitório sobre o comportamento sexual, conforme relatado por abusadores de Meth (Salo et al., 2007).

Em conclusão, juntos, esses estudos formam um primeiro passo crítico para uma melhor compreensão de como as drogas de abuso agem nas vias neurais que normalmente mediam as recompensas naturais. Além disso, esses achados ilustram que, em contraste com a crença atual de que as drogas de abuso não ativam as mesmas células no sistema mesolímbico como recompensa natural, Meth e, em menor grau, Amph, ativam as mesmas células que o comportamento sexual. Por sua vez, essas populações neurais coativadas podem influenciar a busca de recompensa natural após a exposição ao medicamento. Finalmente, os resultados deste estudo podem contribuir significativamente para a compreensão da base da dependência em geral. Comparações das semelhanças e diferenças, bem como alterações na ativação neural do sistema mesolímbico provocadas pelo comportamento sexual versus drogas de abuso podem levar a uma melhor compreensão do abuso de substâncias e alterações associadas na recompensa natural.

Agradecimentos

Esta pesquisa foi apoiada por doações dos Institutos Nacionais de Saúde R01 DA014591 e Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde RN 014705 para LMC.

ABREVIATURAS

  • abc
  • complexo avidina-biotina-peroxidase de rábano
  • ACA
  • área de cingulado anterior
  • Amph
  • d-anfetamina
  • BLA
  • amígdala basolateral
  • BNSTpl
  • leito póstero-lateral da estria terminal
  • BNSTpm
  • leito póstero-medial da estria terminal
  • BT
  • tiramida biotinilada
  • CeA
  • amígdala do centro
  • CPP
  • preferência local condicionado
  • E
  • ejaculação
  • EL
  • latência da ejaculação
  • IF
  • área infralimbica
  • IL
  • latência de intromissão
  • IM
  • intromissão
  • M
  • montar
  • MAP Kinase
  • proteína quinase ativada por mitógeno
  • MEApd
  • amígdala medial posterodorsal
  • Meth
  • metanfetamina
  • ML
  • latência de montagem
  • mPFC
  • córtex pré-frontal medial
  • MPN
  • núcleo pré-óptico medial
  • NAc
  • Núcleo Accumbens
  • PB
  • tampão de fosfato
  • PBS
  • salina tamponada com fosfato
  • PEI
  • pós intervalo ejaculatório
  • animar
  • MAP quinase fosforilada
  • PL
  • área prelimbic
  • VTA
  • área tegmental ventral

Notas de rodapé

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Referências

  1. Agmo A. Comportamento sexual de ratos machos. Cérebro Res Brain Res Protoc. 1997; 1: 203 – 209. [PubMed]
  2. Agmo A, Berenfeld R. Reforço das propriedades da ejaculação no rato masculino: papel dos opióides e da dopamina. Behaviour Neurosci. 1990; 104: 177 – 182. [PubMed]
  3. Agmo A, Federman I, Navarro V, Pádua M, Velazquez G. Recompensa e reforço produzidos pela água potável: Papel dos opióides e subtipos de receptores de dopamina. Pharmacol Biochem Behav. 1993; 46 [PubMed]
  4. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Comportamento sexual e sinais ambientais associados ao sexo ativam o sistema mesolímbico em ratos machos. Neuropsicofarmacologia. 2004; 29: 718 – 730. [PubMed]
  5. Baum MJ, Everitt BJ. Expressão aumentada de c-fos na área pré-óptica medial após o acasalamento em ratos machos: Papel das entradas aferentes da amígdala medial e do campo central tegmentar mesencefálico. Neurociência. 1992; 50: 627 – 646. [PubMed]
  6. Capriles N, Rodaros D, Sorge RE, Stewart J. Um papel para o córtex pré-frontal na reposição de cocaína induzida por cocaína e estresse em ratos. Psicofarmacologia (Berl) 2003; 168: 66 – 74. [PubMed]
  7. Cardeal RN, Parkinson JA, Hall J, Everitt BJ. Emoção e motivação: o papel da amígdala, estriado ventral e córtex pré-frontal. Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 2002; 26: 321–352. [PubMed]
  8. Cardeal RN, J Parkinson, Marbini HD, Toner AJ, TJ Bussey, Robbins TW, Everitt BJ. Papel do córtex cingulado anterior no controle do comportamento de estímulos condicionados de Pavlov em ratos. Neurociência Comportamental. 2003; 117: 566 – 587. [PubMed]
  9. Carelli RM. Ativação da queima de células de accumbens por estímulos associados à administração de cocaína durante a auto-administração. Sinapse. 2000; 35: 238 – 242. [PubMed]
  10. Carelli RM. Nucleus accumbens célula disparada durante comportamentos direcionados a um objetivo para cocaína vs. reforço 'natural'. Fisiologia e comportamento. 2002; 76: 379–387. [PubMed]
  11. Carelli RM, Ijames SG. Ativação seletiva de neurônios accumbens por estímulo associado a cocaína durante um esquema múltiplo de água / cocaína. Pesquisa do cérebro. 2001; 907: 156 – 161. [PubMed]
  12. Carelli RM, Ijames SG, Crumling AJ. Evidências de que circuitos neurais separados no núcleo accumbens codificam a cocaína versus recompensa “natural” (água e comida). J Neurosci. 2000; 20: 4255 – 4266. [PubMed]
  13. Carelli RM, Wightman RM. Microcircuito funcional na toxicodependência subjacente accumbens: insights de sinalização em tempo real durante o comportamento. Opinião atual em Neurobiologia. 2004; 14: 763 – 768. [PubMed]
  14. Carelli RM, Wondolowski J. Codificação seletiva de cocaína versus recompensas naturais pelos neurônios nucleus accumbens não está relacionada à exposição crônica a drogas. J Neurosci. 2003; 23: 11214 – 11223. [PubMed]
  15. JY Chang, Zhang L, Janak PH, DJ Woodward. Respostas neuronais no córtex pré-frontal e núcleo accumbens durante a auto-administração de heroína em ratos que se movimentam livremente. Cérebro Res. 1997; 754: 12 – 20. [PubMed]
  16. Chen BT, Bowers MS, Martin M., Hopf FW, Guillory AM, Carelli RM, Chou JK, Bonci A. Cocaína, mas não recompensa natural Autoadministração nem infusão passiva de cocaína Produz LTP persistente na VTA. Neurônio 2008; 59: 288 – 297. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  17. Chen PC, Chen JC. Atividade Aprimorada de Cdk5 e Translocação p35 no Estriado Ventral de Ratos Tratados com Metanfetamina Aguda e Crônica. Neuropsicofarmacologia. 2004; 30: 538 – 549. [PubMed]
  18. AR Childress, PD de Mozley, McElgin W, Fitzgerald J, Reivich M, O'Brien CP. Ativação límbica durante craving cocaína induzida por sugestão. Sou J Psiquiatria. 1999; 156: 11 – 18. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  19. Choe ES, Chung KT, Mao L, Wang JQ. A anfetamina aumenta a fosforilação da cinase regulada pelo sinal extracelular e dos fatores de transcrição no estriado de rato através dos receptores de glutamato metabotrópico do grupo I. Neuropsicofarmacologia. 2002; 27: 565 – 575. [PubMed]
  20. Choe ES, Wang JQ. O CaMKII regula a fosforilação de ERK1 / 2 induzida por anfetaminas em neurónios do estriado. Neuroreport. 2002; 13: 1013 – 1016. [PubMed]
  21. Davis JF, Loos M, Coolen LM. Sociedade de Neuroendocrinologia Comportamental. Vol. 44. Cincinnati, Ohio: hormônios e comportamento; 2003. Lesões do córtex pré-frontal medial não interrompem o comportamento sexual em ratos machos; p. 45.
  22. Di Chiara G, Imperato A. Drogas abusadas por seres humanos aumentam preferencialmente as concentrações sinápticas de dopamina no sistema mesolímbico de ratos que se movimentam livremente. Proc Natl Acad Sci EUA A. 1988; 85: 5274-5278. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  23. Dominguez JM, Balfour ME, Lee HS, Brown HJ, Davis BA, Coolen LM. O acasalamento ativa os receptores NMDA na área pré-óptica medial de ratos machos. Neurociência Comportamental. 2007; 121: 1023 – 1031. [PubMed]
  24. Elifson KW, Klein H, Sterk CE. Preditores de risco sexual entre novos usuários de drogas. Jornal de pesquisa sexual. 2006; 43: 318 – 327. [PubMed]
  25. Ellkashef A, Voci F, Hanson G, Branco J, Wickes W, Tiihonen J. Farmacoterapia da Dependência de Metanfetamina: Uma atualização. Abuso de Substâncias. 2008; 29: 31 – 49. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  26. Everitt BJ. Motivação sexual: uma análise neural e comportamental dos mecanismos subjacentes às respostas apetitivas e copulatórias de ratos machos. Neurosci Biobehav Rev. 1990; 14: 217-232. [PubMed]
  27. Everitt BJ, Cador M, Robbins TW. Interações entre a amígdala e o corpo estriado ventral em associações estímulo-recompensa: Estudos que utilizam um esquema de segunda ordem de reforço sexual. Neurociência. 1989; 30: 63 – 75. [PubMed]
  28. Everitt BJ, Fray P, E Kostarczyk, Taylor S, Stacey P. Estudos de comportamento instrumental com reforço sexual em ratos machos (Rattus norvegicus): I. Controle por breves estímulos visuais pareados com uma fêmea receptiva. J Comp Psychol. 1987; 101: 395 – 406. [PubMed]
  29. Everitt BJ, J Parkinson, Olmstead MC, Arroyo M, Robledo P, Robbins TW. Processos Associativos em Vício e Recompensa O Papel dos Subsistemas de Striatal da Amygdala-Ventral. Anais da Academia de Ciências de Nova York. 1999; 877: 412 – 438. [PubMed]
  30. Everitt BJ, Stacey P. Estudos do comportamento instrumental com reforço sexual em ratos machos (Rattus norvegicus): II. Efeitos de lesões na área pré-óptica, castração e testosterona. J Comp Psychol. 1987; 101: 407 – 419. [PubMed]
  31. Feltenstein MW, ver RE. O neurocircuito da dependência: uma visão geral. Br J Pharmacol. 2008; 154: 261 – 274. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  32. Ferguson SM, Norton CS, Watson SJ, Akil H, Robinson TE. Expressão de ARNm de c-fos evocada por anfetaminas no putâmen caudado: os efeitos dos antagonistas dos receptores DA e NMDA variam em função do fenótipo neuronal e do contexto ambiental. Jornal de Neuroquímica. 2003; 86: 33 – 44. [PubMed]
  33. Fiorino DF, Coury A, Phillips AG. Alterações dinâmicas no efluxo de dopamina no núcleo accumbens durante o efeito Coolidge em ratos machos. J Neurosci. 1997; 17: 4849 – 4855. [PubMed]
  34. Fiorino DF, Phillips AG. Facilitação do Comportamento Sexual e Efluxo de Dopamina Melhorado no Núcleo Accumbens de Ratos Machos após Sensibilização Comportamental Induzida por D-Anfetamina. J Neurosci. 1999a; 19: 456 – 463. [PubMed]
  35. Fiorino DF, Phillips AG. Facilitação do comportamento sexual em ratos machos após sensibilização comportamental induzida por d-anfetamina. Psicofarmacologia. 1999b; 142: 200 – 208. [PubMed]
  36. Goodwin JS, Larson GA, Swant J, N Sen, Javitch JA, Zahniser NR, De Felice LJ, Khoshbouei H. Anfetaminas e Metanfetamina afetam diferencialmente os transportadores de dopamina in vitro e in vivo. J Biol Chem. 2009; 284: 2978 – 2989. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  37. Grace AA, Rosenkranz JA. Regulação das respostas condicionadas dos neurônios da amígdala basolateral. Fisiologia e comportamento. 2002; 77: 489–493. [PubMed]
  38. Grant S, ED de Londres, DB de Newlin, VL de Villemagne, Liu X, Contoreggi C, Phillips RL, Kimes AS, Margolin A. Ativação de circuitos de memória durante o desejo de cocaína eliciada cue. Proc Natl Acad Sci EUA A. 1996; 93: 12040-12045. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  39. Green AI, Halkitis PN. Metanfetamina cristal e socialidade sexual em uma subcultura gay urbana: uma afinidade eletiva. Cultura, saúde e sexualidade. 2006; 8: 317–333. [PubMed]
  40. Grimm JW, Veja RE. Dissociação de núcleos límbicos relevantes para recompensa primária e secundária em um modelo animal de recaída. Neuropsicofarmacologia. 2000; 22: 473 – 479. [PubMed]
  41. Hull EM, Lorrain DS, Du J, Matuszewich L., Lumley LA, Putnam SK, Moses J. Hormone-neurotransmissores interações no controle do comportamento sexual. Pesquisa do cérebro comportamental. 1999; 105: 105 – 116. [PubMed]
  42. Casco EM, Meisel RL, Sachs BD. Comportamento sexual masculino Em: Pfaff DW, et al., Editores. Hormônios Cérebro e Comportamento. San Diego, CA: Elsevier Science (EUA); 2002. pp. 1 – 138.
  43. Hull EM, Muschamp JW, Sato S. Dopamina e serotonina: influências no comportamento sexual masculino. Fisiologia e comportamento. 2004; 83: 291–307. [PubMed]
  44. Ishikawa K, Nitta A, H Mizoguchi, Mohri A, M Murai R, Y Miyamoto, Noda Y, Kitaichi K., Yamada K, Nabeshima T. Efeitos da administração única e repetida de metanfetamina ou morfina na expressão do gene C neuroglycan no cérebro de ratos. O Jornal Internacional de Neuropsicofarmacologia. 2006; 9: 407 – 415. [PubMed]
  45. Jarosz PA, Kessler JT, Sekhon P, Coscina DV. Preferências de lugar condicionado (CPPs) para “salgadinhos” altamente calóricos em linhagens de ratos geneticamente propensos vs. resistentes à obesidade induzida por dieta: Resistência ao bloqueio de naltrexona. Farmacologia Bioquímica e Comportamento. 2007; 86: 699 – 704. [PubMed]
  46. Jarosz PA, Sekhon P, Coscina DV. Efeito do antagonismo de opiáceos nas preferências de locais condicionados aos aperitivos. Farmacologia Bioquímica e Comportamento. 2006; 83: 257 – 264. [PubMed]
  47. Jentsch JD, Taylor JR. Impulsividade resultante da disfunção frontostriatal no abuso de drogas: implicações para o controle do comportamento por estímulos relacionados à recompensa. Psicofarmacologia (Berl) 1999; 146: 373 – 390. [PubMed]
  48. Kalivas PW, Volkow ND. A base neural do vício: uma patologia de motivação e escolha. Sou J Psiquiatria. 2005; 162: 1403 – 1413. [PubMed]
  49. Kelley AE. Memória e vício: circuitos neurais compartilhados e mecanismos moleculares. Neurônio 2004; 44: 161 – 179. [PubMed]
  50. Kippin TE, Sotiropoulos V, Badih J, Pfaus JG. Funções opostas do núcleo accumbens e área hipotalâmica lateral anterior no controle do comportamento sexual no rato macho. Revista Européia de Neurociência. 2004; 19: 698 – 704. [PubMed]
  51. Laviolette SR, Grace AA. Canabinóides Potencializam a Plasticidade da Aprendizagem Emocional em Neurônios do Córtex Pré-frontal Medial através de Insumos Basolaterais da Amígdala. J Neurosci. 2006; 26: 6458 – 6468. [PubMed]
  52. Ledford CC, Fuchs RA, Ver RE. Reintegração Potenciada do Comportamento de Busca de Cocaína Após a Infusão de D-Anfetamina na Amígdala Basolateral. Neuropsicofarmacologia. 2003; 28: 1721 – 1729. [PubMed]
  53. Lett BT. Exposições repetidas intensificam em vez de diminuir os efeitos recompensadores da anfetamina, da morfina e da cocaína. Psicofarmacologia (Berl) 1989; 98: 357 – 362. [PubMed]
  54. Liu YC, Sachs BD, Salamone JD. Comportamento sexual em ratos machos após radiofreqüência ou lesões depleção de dopamina no núcleo accumbens. Pharmacol Biochem Behav. 1998; 60: 585 – 592. [PubMed]
  55. Lorrain DS, Riolo JV, Matuszewich L, Hull EM. Serotonina Lateral Hipotalâmica Inibe Nucleo Accumbens Dopamina: Implicações Para a Saciedade Sexual. J Neurosci. 1999; 19: 7648 – 7652. [PubMed]
  56. Lumley LA, Hull EM. Efeitos de um antagonista D1 e da experiência sexual na imunorreatividade Fos-like induzida pela cópula no núcleo pré-óptico medial. Pesquisa do cérebro. 1999; 829: 55 – 68. [PubMed]
  57. Martinez I, Paredes RG. Apenas o acasalamento individualizado é recompensador em ratos de ambos os sexos. Horm Behav. 2001; 40: 510 – 517. [PubMed]
  58. McLaughlin J, veja RE. A inativação seletiva do córtex pré-frontal dorsomedial e da amígdala basolateral atenua a restituição condicionada do comportamento de busca por cocaína extinguida em ratos. Psicofarmacologia (Berl) 2003; 168: 57 – 65. [PubMed]
  59. Mitchell JB, Stewart J. Facilitação de comportamentos sexuais no rato macho na presença de estímulos previamente pareados com injeções sistêmicas de morfina. Farmacologia Bioquímica e Comportamento. 1990; 35: 367 – 372. [PubMed]
  60. Mizoguchi H, M Yamada K, Mizuno M, T Mizuno, Nitta A, Noda Y, Nabeshima T. Regras de Metanfetamina Recompensa por Quinase Regulada por Sinal Extracelular 1 / 2 / ets-Like Gene-1 via de sinalização via a ativação de Dopamina NIDA ( Série de relatórios de pesquisa: abuso e adição de metanfetamina 2006 NIH Número da publicação 06-4210.PubMed]
  61. Perks SM, Clifton PG. Reavaliação do reforçador e preferência de lugar condicionada. Fisiologia e comportamento. 1997; 61: 1–5. [PubMed]
  62. Pfaus JG. Caminhos do desejo sexual. Jornal de Medicina Sexual. 2009; 6: 1506 – 1533. [PubMed]
  63. Pfaus JG, Everitt BJ. A psicofarmacologia do comportamento sexual. Em: Bloom FE, Kupfer DJ, editores. Psicofarmacologia: a quarta geração de progresso. Nova Iorque: Raven; 1995. pp. 743 – 758.
  64. Pfaus JG, Heeb MM. Implicações da Indução Gênica Imediata-Precoce no Cérebro Após Estimulação Sexual de Roedores Femininos e Masculinos. Boletim de Pesquisa do Cérebro. 1997; 44: 397 – 407. [PubMed]
  65. Pfaus JG, Kippin TE, Centeno S. Condicionamento e comportamento sexual: uma revisão. Horm Behav. 2001; 40: 291 – 321. [PubMed]
  66. Pfaus JG, Phillips AG. Efeitos diferenciais de antagonistas de receptores de dopamina no comportamento sexual de ratos machos. Psicofarmacologia. 1989; 98: 363 – 368. [PubMed]
  67. Pierce RC, Kumaresan V. O sistema dopaminérgico mesolímbico: a via comum final para o efeito de reforço das drogas de abuso? Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 2006; 30: 215–238. [PubMed]
  68. Jarros KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L, Coolen LM. A experiência sexual induz plasticidade funcional e estrutural no sistema mesolímbico. Psiquiatria Biológica. 2009 In press.
  69. Ranaldi R, Pocock D, R Zereik, RA sábio. Flutuações de dopamina no núcleo accumbens durante a manutenção, extinção e reintegração da administração intravenosa de D-anfetamina. J Neurosci. 1999; 19: 4102 – 4109. [PubMed]
  70. Rawson RA, Washton A, Domier CP, Reiber C. Drogas e efeitos sexuais: papel do tipo de droga e gênero. Jornal de Tratamento de Abuso de Substâncias. 2002; 22: 103 – 108. [PubMed]
  71. Robertson GS, Pfaus JG, Atkinson L.J, Matsumura H, Phillips AG, Fibiger HC. O comportamento sexual aumenta a expressão de c-fos no prosencéfalo do rato macho. Cérebro Res. 1991; 564: 352 – 357. [PubMed]
  72. Roop RG, Hollander RJ, Carelli RM. Atividade de Accumbens durante um programa múltiplo para reforço de água e sacarose em ratos. Sinapse. 2002; 43: 223 – 226. [PubMed]
  73. Salo R, Nordahl TE, Natsuaki Y, Leamon MH, GP Galloway, Águas C, CD Moore, Buonocore MH. Controle Atencional e Níveis de Metabolito Cerebral em Abusadores de Metanfetamina. Psiquiatria Biológica. 2007; 61: 1272 – 1280. [PubMed]
  74. Schilder AJ, Lampinen TM, Miller ML, Hogg RS. Cristal metanfetamina e ecstasy diferem em relação ao sexo inseguro entre os jovens gays. Revista canadense de saúde pública. 2005; 96: 340 – 343. [PubMed]
  75. Veja RE. Substratos neurais de recaída condicionada com o comportamento de procura de drogas. Farmacologia Bioquímica e Comportamento. 2002; 71: 517 – 529. [PubMed]
  76. Veja RE, Fuchs RA, Ledford CC, McLaughlin J. Toxicodependência, Recaída e Amígdala. Anais da Academia de Ciências de Nova York. 2003; 985: 294 – 307. [PubMed]
  77. Semple SJ, Patterson TL, Grant I. Motivações associadas ao uso de metanfetaminas entre homens HIV que fazem sexo com homens. Jornal de Tratamento de Abuso de Substâncias. 2002; 22: 149 – 156. [PubMed]
  78. Shaham Y, Shalev U, Lu L, De Wit H, Stewart J. O modelo de reintegração da recaída da droga: história, metodologia e principais resultados. Psicofarmacologia (Berl) 2003; 168: 3 – 20. [PubMed]
  79. Shippenberg TS, Heidbreder C. Sensibilização aos efeitos condicionantes da cocaína: características farmacológicas e temporais. J Pharmacol Exp Ther. 1995; 273: 808 – 815. [PubMed]
  80. Shippenberg TS, Heidbreder C, Lefevour A. Sensibilização aos efeitos condicionantes da morfina: farmacologia e características temporais. Eur J Pharmacol. 1996; 299: 33 – 39. [PubMed]
  81. Somlai AM, Kelly JA, McAuliffe TL, Ksobiech K, Hackl KL. Preditores de comportamentos sexuais de risco para o HIV em uma amostra comunitária de homens e mulheres usuários de drogas injetáveis. AIDS e comportamento. 2003; 7: 383 – 393. [PubMed]
  82. Springer A, Peters R, Shegog R, White D, Kelder S. Uso de Metanfetaminas e Comportamentos Sexuais de Risco em Estudantes do Ensino Médio nos EUA: Resultados de uma Pesquisa Nacional sobre Comportamentos de Risco. Ciência da Prevenção. 2007; 8: 103 – 113. [PubMed]
  83. Sun WL, Zhou L., Hazim R, Quinones-Jenab V, Jenab S. Efeitos dos receptores de dopamina e NMDA na expressão de Fos induzida pela cocaína no estriado de ratos Fischer. Pesquisa do cérebro. 2008; 1243: 1 – 9. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  84. Swanson LW, editor. Mapas Cerebrais: Estrutura do Cérebro de Rato. Amesterdão: Elsevier Science; 1998.
  85. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Jarros KK, Coolen LM. Recompensa sexual em ratos machos: Efeitos da experiência sexual na preferência do lugar condicionado associada a ejaculações e intromissões. Horm Behav. 2008 [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  86. Valjent E, Corvol JC, Páginas C, Besson MJ, Maldonado R, Caboche J. Envolvimento da cascata de quinase regulada por sinal extracelular para propriedades recompensadoras de cocaína. J Neurosci. 2000; 20: 8701 – 8709. [PubMed]
  87. Valjent E, Páginas C, Herve D, Girault JA, Caboche J. drogas Addictive e não-viciante induzir padrões distintos e específicos de ativação de ERK no cérebro do rato. Eur J Neurosci. 2004; 19: 1826 – 1836. [PubMed]
  88. Valjent E, Pascoli V, P Svenningsson, Paul S, Enslen H, Corvol JC, Stipanovich A, Caboche J, PJ Lombroso, Nairn AC, P Greengard, Herve D, Girault JA. A regulação de uma cascata de proteína fosfatase permite que sinais convergentes de dopamina e glutamato ativem ERK no estriado. Proc Natl Acad Sci EUA A. 2005; 102: 491-496. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  89. Vanderschuren LJ, Kalivas PW. Alterações na transmissão dopaminérgica e glutamatérgica na indução e expressão de sensibilização comportamental: uma revisão crítica de estudos pré-clínicos. Psicofarmacologia (Berl) 2000; 151: 99 – 120. [PubMed]
  90. Veening JG, Coolen LM. Ativação neural após comportamento sexual no cérebro de ratos machos e fêmeas. Pesquisa do cérebro comportamental. 1998; 92: 181 – 193. [PubMed]
  91. Whitelaw RB, Markou A, Robbins TW, Everitt BJ. As lesões excitotóxicas da amígdala basolateral prejudicam a aquisição do comportamento de busca de cocaína sob um esquema de reforço de segunda ordem. Psicofarmacologia. 1996; 127: 213 – 224. [PubMed]
  92. RA sábio. Neurobiologia da dependência. Opinião atual em Neurobiologia. 1996; 6: 243 – 251. [PubMed]