A expressão e distribuição do receptor de dopamina mudam dinamicamente no núcleo accumbens do rato após a retirada da auto-administração de cocaína. (2010)

Reticulação de proteínas

Este método foi descrito em detalhes anteriormente (Boudreau e lobo, 2005; Ferrario et al., 2010). Os ratos foram decapitados, os seus cérebros foram removidos rapidamente e o NAc inteiro (ou sub-regiões do núcleo e da casca) foi dissecado em gelo a partir de uma secção coronal de 2mm obtida utilizando uma matriz cerebral. Todo o tecido NAc foi imediatamente cortado em fatias 400μm usando um picador de tecido McIllwain (Vibratome, St. Louis, MO), enquanto as sub-regiões de núcleo e casca menores foram picadas manualmente usando um bisturi. O tecido foi então adicionado a tubos Eppendorf contendo CSF ​​artificial gelado, enriquecido com bis (sulfosuccinimidil) suberato 2 mM (BS³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). A reacção de reticulação foi deixada prosseguir durante 30 min a 4 ° C com agitação suave e foi então terminada por adição de glicina 100mM (10 min a 4 ° C). O tecido foi sedimentado por uma breve centrifuga�o, ressuspenso em tamp� de lise gelado contendo inibidores de protease e fosfatase, tornado sonoro por 5 seg e centrifugado novamente. Alíquotas do sobrenadante foram armazenadas a -80 ° C até serem analisadas por Western blotting.

Análise de Western blot de DARs em tecido reticulado

Amostras (20-30μg proteína total / lisado) foram submetidas a electroforese em géis 4-15% Tris-HCl (Biorad, Hercules, CA). As proteínas foram transferidas para membranas de fluoreto de polivinilideno para immunoblotting usando corrente constante (1.15mA) para 1.5 h. Uma bobina de resfriamento foi usada para evitar o aquecimento excessivo. Transferência completa de agregados de alto peso molecular foi confirmada por géis de coloração após transferência com azul de Coomassie. Além disso, verificou-se que as proteínas DAR reticuladas não foram detectadas no gel de empilhamento (dados não mostrados). Após a transferência, as membranas foram lavadas em ddH₂O, seco ao ar durante 1 hr à temperatura ambiente (RT), re-hidratado com 100% MeOH, lavado em solução salina tamponada com 1x Tris (TBS) e imerso em 0.1M NaOH, pH 10 para 15 min à temperatura ambiente. Em seguida, foram lavados em TBS, bloqueados com 3% albumina de soro bovino (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) em TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, por 1 h à temperatura ambiente e incubados durante a noite a 4 ° C com anticorpos que reconhecem o D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) e D3 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1786P). D4 e D5 DARs não foram analisados ​​devido à falta de anticorpos que reconhecem receptores reticulados e intracelulares. Deve notar-se que os lotes de anticorpos DAR utilizados nestas experiências foram adquiridos em 2005-06; Os lotes atuais desses anticorpos (2009-10) mostram padrões de bandas diferentes que não são alterados no tecido de camundongos knockout DAR (observações não publicadas). Após a incubação do anticorpo primário, as membranas foram lavadas com solução de TBS-T, incubadas por 60 min com IgG anti-coelho conjugado com HRP ou IgG anti-murganho (1: 10,000; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), lavadas com TBS- T, enxaguado com ddH₂O, e imerso em substrato detector de quimioluminescência (Amersham GE, Piscataway, NJ). Depois que os borrões foram desenvolvidos, as imagens foram capturadas com o software Versa Doc Imaging (Bio-Rad). Densidades difusas de bandas superficiais e intracelulares foram determinadas usando o software Quantity One (Bio-Rad). Os valores para os neis de protea superficial, intracelular e total (superficial + intracelular) foram normalizados para a protea total na pista determinada utilizando Ponceau S (Sigma-Aldrich) e analisados ​​com TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK). A relação superfície / intracelular não exigiu normalização, porque ambos os valores são determinados na mesma faixa. Para examinar a especificidade do anticorpo, estudos de pré-absorção foram conduzidos para os anticorpos DAR com o peptídeo usado para gerar cada anticorpo. Combinou-se o anticorpo D1, D2 ou D3 DAR com uma concentração em excesso de 10 do péptido em 500μl de TBS, misturou-se durante 4 horas a 4 ° C, diluiu-se até um volume final de 20ml, adicionou-se à membrana e incubou-se durante a noite a 4 ° C.

D1 DARs

Não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos cocaína e salina no WD45. No entanto, os efeitos da auto-administração de cocaína foram evidentes no WD1. A análise de todo o NAc indicou uma relação superfície / intracelular D1 DAR significativamente maior no grupo WD1-Coc em comparação com os grupos que administraram solução salina (Fig. 2a). Isto foi atribuído a um aumento modesto nos D1 DARs de superfície, combinado com um modesto decréscimo nos D1 DARs intracelulares (nenhum destes dois últimos efeitos foi estatisticamente significativo), na ausência de qualquer alteração nos níveis totais de D1 DAR (superfície + intracelular) (Fig. 2a). Dentro do núcleo NAc, nenhum efeito significativo foi encontrado para qualquer medida D1 DAR (Fig. 2b). No entanto, a concha de NAc exibiu mudanças semelhantes às observadas em todo o NAc, mas ligeiramente mais robustas (Fig. 2c). A relação superfície / intracelular D1 DAR foi aumentada no grupo WD1-Coc devido a um aumento significativo na expressão de D1 DAR na superfície. Os níveis intracelulares permaneceram inalterados, mas houve uma tendência para o aumento dos níveis totais de D1 DAR. Em resumo, uma maior porção da proteína D1 DAR foi expressa na superfície no invólucro NAc de ratos WD1-Coc em comparação com ratos WD1-Sal. A distribuição D1 DAR retornou ao estado de controle após 45 dias de retirada da autoadministração de cocaína.

FIG. 2

A expressão da superfície D1 DAR foi aumentada na camada NAc após o dia 1 de retirada da autoadministração de cocaína

D2 DARs

Em todo o NAc, o principal efeito observado foi a diminuição da expressão de D2 DAR em ratos que cocaína auto-administrada em comparação com controles salinos (Fig. 3a). Isto foi mais pronunciado no WD45, quando foram observadas diminuições na banda de superfície, todas as três bandas intracelulares (~ 55, 75 e 100kDa), e nos níveis totais de D2 DAR em comparação com os controlos com solução salina. A relação superfície / intracelular D2 DAR foi ligeiramente, mas significativamente aumentada no grupo WD45-Coc, devido a uma maior diminuição nos D2 DARs intracelulares, talvez indicando que as células estão compensando a diminuição da expressão de D2 DAR distribuindo uma porção maior de D2 DARs para a superfície. É importante ter em mente que a relação superfície / intracelular elevada não sugere um aumento da transmissão D2 DAR neste caso particular, porque o nível absoluto de D2 DARs expressos na superfície foi diminuído. No grupo WD1-Coc, o único efeito significativo foi uma diminuição nos níveis intracelulares do monómero D2 DAR (~ 55kDa), em comparação com os grupos WD45-Sal e WD1-Sal, embora várias outras medidas também tendessem a diminuir (Fig. 3a).

FIG. 3

Os níveis de D2 DAR intracelular e de superfície no NAc diminuíram após 45 dias de retirada da auto-administração de cocaína

Um decréscimo global na expressão de D2 DAR foi também evidente nas sub-regiões do núcleo e da casca do NAc (Fig. 3b e 3c, respectivamente), embora os efeitos tendessem a ser mais pronunciados na casca. Assim, os níveis de superfície D2 DAR diminuíram em ratos cocaína apenas em WD45 no núcleo, mas em WD1 e WD45 no shell. O total de D2 DARs diminuiu significativamente apenas no shell. Decréscimos nas bandas D2 DAR intracelulares ocorreram em ambos os dias de retirada tanto no núcleo como no invólucro, embora houvesse diferenças específicas de retirada e região em termos das quais a banda intracelular mostrou um efeito estatisticamente significativo. Em resumo, os níveis de superfície D2 DAR e proteína intracelular foram diminuídos no NAc após a auto-administração de cocaína. Algumas diminuições já eram evidentes pelo WD1.

A expressão da superfície D1 DAR aumenta transitoriamente na camada NAc após a interrupção da autoadministração de cocaína

Após a autoadministração da cocaína, a expressão da superfície D1 DAR foi aumentada no invólucro NAc no WD1, mas normalizada pelo WD45, enquanto nenhuma alteração foi observada no núcleo, indicando um aumento transitório confinado ao invólucro. Resultados semelhantes foram obtidos em estudos anteriores utilizando autoradiografia do receptor. Ben-Shahar et al. (2007) encontraram aumento da densidade D1 DAR na camada NAc de ratos 20 min (mas não 14 ou 60 dias) após interromper o acesso prolongado (6 hr / dia) à auto-administração de cocaína, enquanto não foram observadas alterações no núcleo ou após curto acesso à cocaína -Administração (2 hr / dia). Nader et al. (2002) observaram um pequeno aumento na densidade de D1 DAR na casca, mas não no núcleo de macacos rhesus mortos após a última sessão de auto-administração de cocaína da 100. Macacos avaliados 30 dias após a descontinuação do mesmo regime mostraram aumento da densidade D1 DAR no NAc rostral e em ambos os núcleos e conchas em níveis mais caudais, mas a densidade D1 DAR tinha normalizado em dias 90 (Beveridge et al., 2009). Todos estes resultados, como os nossos, indicam um aumento transitório nos níveis de D1 DAR, particularmente na casca, após a interrupção da auto-administração da cocaína. No entanto, um estudo anterior por este grupo indicou uma diminuição na densidade D1 DAR no NAc (mais robusto na casca) de macacos rhesus que tinham auto-administrado cocaína por um período de tempo muito mais longo (meses 18; Moore e outros, 1998a). A diminuição da ligação de D1 DAR no NAc também foi encontrada em 18 h após a interrupção de um regime de acesso prolongado em ratos, embora a ingestão total de cocaína neste estudo tenha sido maior do que nos estudos com ratos discutidos acima (De Montis et al., 1998). Estes resultados indicam que as adaptações de D1 DAR dependem de muitos aspectos da exposição à cocaína. Outra consideração é que a autorradiografia do receptor mede os receptores celulares totais, ao passo que nossos experimentos de reticulação de proteínas podem distinguir entre receptores de superfície e intracelulares. Curiosamente, um estudo de immunoblotting encontrou uma tendência para o aumento dos níveis de D1 DAR no NAc de usuários humanos de cocaína (Worsley et al., 2000).

O aumento transitório na expressão da superfície D1 DAR que observamos na concha de NAc é importante para a incubação de cocaína induzida por cueína? Isso é difícil de avaliar, porque nenhum estudo testou o efeito da injeção intra-NAc de agonistas ou antagonistas D1 DAR na cocaína induzida por estímulo que busca a retirada da gaiola (ou a reintegração induzida pela cocaína na busca de treinamento de extinção). No entanto, os receptores D1 no NAc medial (concha e núcleo medial) estão implicados no restabelecimento da cocaína induzida pela cocaína após a extinção, aparentemente através de um mecanismo que requer a ativação cooperativa de D1 e D2 DARs (Anderson et al., 2003; 2008; Bachtell e outros, 2005; Schmidt e Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Juntamente com os nossos resultados, isso poderia sugerir que os neurônios na camada NAc são mais responsivos à busca de cocaína mediada por D1 DAR na retirada precoce devido à regulação positiva de D1R. No entanto, deve-se ter cautela ao extrapolar da reintegração para os estudos de incubação, porque o treinamento de extinção e a retirada da gaiola são associados a diferentes neuroadaptações no NAc (Sutton et al., 2003; Ghasemzadeh e outros, 2009; Lobo e Ferrario, 2010). É importante notar que D1 DARs na amígdala basolateral e no córtex pré-frontal também são importantes para o restabelecimento da cocaína induzida pela sugestão (por exemplo, Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt et al., 2006; Berglind e outros, 2006).

Num nível celular, tanto os DAR pré-sinápticos como os pós-sinápticos podem modular a excitabilidade dos neurónios espinhosos médios, o tipo de célula predominante e o neurónio de saída do NAc (Nicola et al., 2000; O'Donnell, 2003). Sabe-se que a administração repetida e não-contingente de cocaína aumenta alguns efeitos da ativação do D1 DAR no NAc. Assim, um dia a um mês após a interrupção do tratamento com cocaína, foi observada uma capacidade aumentada de agonistas D1 DAR para inibir a actividade de neurónios espinhosos médios (impulsionados pelo glutamato iontoforético) em todo o NAc (Henry e White, 1991; 1995). No entanto, é improvável que a expressão de superfície D1 DAR aumentada relatada aqui explique esses resultados anteriores, pois ela está restrita ao shell e só foi demonstrada no WD1. Um dia após um desafio com cocaína administrado 10-14 dias após a interrupção de injeções repetidas de cocaína, Beurrier e Maleka (2002) observaram um aumento da inibição mediada por DA de respostas sinápticas excitatórias em neurônios espinhosos médios de NAc que foi aparentemente mediada por DARs pré-sinápticas tipo D1 em terminais nervosos de glutamato. No entanto, possíveis efeitos da injeção de desafio (por exemplo, ver Boudreau et al., 2007 e Kourrich et al., 2007), combinado com diferenças de espécies e falta de registros no núcleo, dificultam a comparação de suas descobertas com as nossas. Também deve ser notado que os agonistas e antagonistas de DAR usados ​​por Henry e Branco (1991; 1995) e Beurrier e Malenka (2002) não distinguiu entre D1 e D5 DARs.

Os níveis de D2 DAR diminuem no NAc após a interrupção da auto-administração de cocaína

O principal efeito observado em nosso estudo foi uma diminuição na proteína D2 DAR tanto no núcleo quanto no invólucro de NAc após a interrupção da auto-administração de cocaína, em relação aos controles com solução salina. Isso foi mais pronunciado na casca, onde as bandas intracelular, de superfície e total foram reduzidas em WD1 e WD45. No núcleo, a expressão de superfície D2 DAR foi diminuída apenas em WD45 e os níveis totais de D2 DAR não diminuíram significativamente. Vários outros estudos descobriram similarmente diminuição da expressão de D2 DAR após a interrupção da auto-administração de cocaína. Em macacos rhesus com experiência extensa de autoadministração de cocaína, a densidade D2 DAR, medida com autorradiografia do receptor, diminuiu em muitas regiões do estriado, incluindo o núcleo e o invólucro de NAc quando o tecido foi obtido imediatamente após a última sessão (Moore e outros, 1998b; Nader et al., 2002). Utilizando PET, este efeito nos gânglios da base foi detectado na semana 1 de iniciar a auto-administração de cocaína (Nader et al., 2006). A taxa na qual os níveis de D2 DAR se recuperam durante a retirada pode depender do consumo total de cocaína. Num estudo de autorradiografia, os níveis de D2 DAR no NAc recuperaram para controlar os valores após 30 ou 90 dias de interrupção das sessões de 100 de auto-administração de cocaína (Beveridge et al., 2009). Contudo, num estudo PET de macacos com maior exposição (1 ano) e assim maior consumo total de cocaína, 3 de macacos 5 demonstrou a recuperação dos níveis de D2 DAR após 90 dias, enquanto os macacos 2 não recuperaram mesmo após 12 meses (Nader et al., 2006). No geral, esses resultados correspondem bem aos nossos achados de diminuição dos níveis de D2 DAR durante a abstinência.

Estudos em PET de viciados em cocaína humanos também encontraram níveis reduzidos de D2 DAR em muitas regiões do estriado, incluindo estriado ventral, que eram evidentes na retirada precoce, bem como após meses de desintoxicação (Volkow et al., 1990, 1993, 1997). No entanto, a significância para o comportamento não é clara, uma vez que a disponibilidade do D2 DAR não se correlacionou com os efeitos subjetivos positivos da cocaína ou com a decisão de tomar mais cocaína após uma dose inicial (Martinez e outros, 2004). É importante notar que, embora o desejo de cocaína induzido por sugestão apresente um aumento dependente do tempo durante a retirada (“incubação”), isso não ocorre para a busca de cocaína com cocaínaLu et al., 2004a). Portanto, os resultados de Martinez et al. (2004) deixar em aberto a possibilidade de que a disponibilidade de D2 DAR pode estar correlacionada com a busca por cocaína induzida por cue, o foco do modelo de incubação aqui estudado. A baixa disponibilidade de D2 DAR em usuários humanos de cocaína correlaciona-se com a diminuição do metabolismo cortical frontal (Volkow et al., 1993). Juntamente com outras mudanças, isso pode contribuir para a perda de controle que ocorre quando os dependentes são expostos a drogas ou estímulos pareados a drogas, e para uma maior saliência das drogas em comparação com as recompensas não medicamentosas (Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). Deve-se notar que os níveis de D2 DAR diminuídos em um estudo PET podem indicar liberação elevada de DA ao invés de diminuição nos níveis de D2 DAR, mas os resultados recentes argumentam contra essa explicação no caso de pacientes dependentes de cocaína (Martinez e outros, 2009). Além disso, um estudo post-mortem de usuários humanos de cocaína encontrou uma tendência de diminuição dos níveis de D2 DAR no NAc usando immunoblotting (Worsley et al., 2000).

Estudos em humanos dependentes de cocaína não podem determinar se a diminuição da disponibilidade de D2 DAR é uma característica predisponente ou um resultado da exposição à cocaína, mas outros resultados indicam que ambos são verdadeiros. Por um lado, experimentos em humanos que não abusam de drogas descobriram uma correlação inversa entre a disponibilidade de D2 DAR e relatos de “gostar de drogas” quando administrados metilfenidato (Volkow et al., 1999; 2002). Esses achados sugerem que a baixa disponibilidade de D2 DAR pode aumentar a vulnerabilidade ao vício. Uma conclusão semelhante é apoiada por estudos em macacos rhesus. Em macacos com alojamento social, a conquista da dominância social aumenta a disponibilidade de D2 DAR no corpo estriado e isto está associado a uma menor sensibilidade aos efeitos reforçadores da cocaína em comparação com os macacos subordinados (Morgan et al., 2002). O status social também está correlacionado com a disponibilidade de D2 DAR no estriado em voluntários humanos livres de drogas (Martinez e outros, 2010). Por outro lado, tanto os estudos de autorradiografia com PET como com os receptores mostram que a autoadministração a longo prazo da cocaína diminui a disponibilidade do receptor D2 DAR no estriado em macacos alojados individualmente, como discutido acima (Moore e outros, 1998b; Nader et al., 2002; Nader et al., 2006). A auto-administração crónica de cocaína também parece diminuir a disponibilidade de D2 DAR em macacos dominantes socialmente alojados (Czoty e outros, 2004). Assim, após a auto-administração a longo prazo da cocaína, não houve mais diferenças significativas na disponibilidade do receptor D2 ou nos efeitos reforçadores da cocaína entre macacos dominantes e subordinados (Czoty e outros, 2004) No entanto, níveis elevados de D2 DAR ressurgiram nos macacos dominantes durante a abstinência e isso foi correlacionado com maior latência em reação à novidade, uma característica preditiva de diminuição da sensibilidade aos efeitos de reforço da cocaína (Czoty e outros, 2010).

Como em humanos e macacos, estudos com ratos indicam que a baixa disponibilidade de D2 DAR é um fator de risco para a vulnerabilidade à cocaína. Assim, estudos de PET em ratos com alta impulsividade (uma característica associada ao aumento da auto-administração de cocaína) mostram redução da disponibilidade de D2 / D3 DAR no estriado ventral (Dalley et al., 2007). Os níveis de D2 DAR no NAc também são reduzidos em ratos que mostram uma alta resposta locomotora à novidade, outra característica associada à vulnerabilidade do vício (Hooks et al., 1994). Nossos resultados em ratos indicam que a diminuição dos níveis de D2 DAR no NAc também pode ser uma consequência da exposição repetida à cocaína, consistente com estudos em macacos e humanos (acima). No entanto, dois estudos de autorradiografias de receptores em ratos encontraram resultados diferentes dos nossos. Ben-Shahar et al. (2007) não observaram diminuição dos níveis de D2 DAR no NAc após a retirada (20 min, 14 dias de 60 dias) de um regime de autoaplicação de cocaína de acesso alargado semelhante ao nosso (6 hr / dia), embora tenham sido observados decréscimos na concha de NAc após um regime de acesso limitado (2 hr / dia) e 14 dias de retirada (Ben-Shahar e outros, 2007). Stéfanski et al. (2007) não encontraram alterações nos níveis de D2 DAR no núcleo ou na cápsula 24 h após a interrupção da administração autónoma de acesso limitado à cocaína (2 hr / dia), embora os níveis de D2 DAR tenham diminuído nos controlos da cocaína. Como notado acima, a autorradiografia do receptor mede os receptores celulares totais, enquanto os estudos de ligação cruzada de PET e proteína medem os receptores da superfície celular.

No geral, os estudos sobre a relação entre os níveis de D2 DAR e a autoadministração de cocaína sustentam um modelo no qual os D2 DARs normalmente limitam a autoadministração de cocaína. Portanto, sugerimos que os níveis de D2 DAR diminuídos observados em nossos experimentos podem contribuir para a busca de cocaína induzida por estímulo após a retirada da cocaína. Em particular, o fato de a expressão da superfície D2 DAR no núcleo NAc ter diminuído no WD45, mas não no WD1, combinado com um papel chave para o núcleo NAc na busca de cocaína induzida por sugestão, sugere que a regulação negativa D2 DAR no núcleo NAc pode contribuem para a intensificação dependente do tempo da busca por cocaína induzida por estímulo. Isto iria prever que a infusão intra-NAc de um agonista D2 durante a retirada reduziria a procura de cocaína induzida por sugestão. Infelizmente, nenhum estudo examinou os efeitos de drogas intra-NAc D2 DAR no modelo de incubação. Por outro lado, estudos de reintegração estimulada com cocaína indicam que D1 e D2 DARs no núcleo da casca e medial trabalham cooperativamente para promover a busca de cocaína (Anderson et al., 2003; Bachtell e outros, 2005; Schmidt e Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Com base nesses achados, a diminuição da expressão de D2 DAR observada em nossos experimentos pode ser prevista para reduzir a procura de cocaína, ou seja, produzir um efeito oposto à intensificação dependente de retirada que é realmente observada. A discrepância pode refletir problemas introduzidos pela generalização da reintegração induzida pela cocaína após o treinamento de extinção para a cocaína induzida pelo estímulo que busca a retirada.

Um aumento dependente do tempo na expressão da superfície D3 DAR ocorre no núcleo NAc após a interrupção da auto-administração de cocaína

Estudos de drogas que preferem D3 DAR em paradigmas de autoadministração e restabelecimento de cocaína sugerem que os antagonistas D3 DAR podem ser úteis no tratamento da dependência de cocaína e, em particular, na redução da reatividade a estímulos associados à cocaína (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll et al., 2005; Xi e Gardner, 2007). Estes resultados implicam que a ativação do D3 DAR pelo DA endógeno pode estar envolvida na mediação da busca de cocaína induzida pelo estímulo. Nossos resultados mostram que a expressão da superfície D3 DAR no núcleo NAc permanece inalterada no WD1 a partir da autoadministração de cocaína de acesso estendido, mas aumentou em WD45 em associação com a incubação do desejo por cocaína. A expressão da superfície D3 DAR não aumentou significativamente na casca, embora tenha havido um aumento pequeno, mas significativo, na relação superfície / intracelular. Dado o papel da transmissão D3 DAR em responder a dicas associadas à cocaína e a importância do núcleo para a busca induzida por cocaína, é tentador especular que o aumento da expressão da superfície D3 DAR no núcleo NAc contribuiu para a incubação da cocaína induzida por cue. desejo que é observado no WD45. No entanto, o local neural no qual os antagonistas D3 DAR agem para reduzir a procura de cocaína não foi estabelecido. Especificamente, nenhum estudo examinou o efeito da injeção intra-NAc de D3 DAR preferindo drogas na busca de cocaína induzida por estímulo. Em um modelo diferente, Schmidt et al. (2006) descobriram que a injeção do agonista PD 3 que preferia D128,907 no núcleo ou no invólucro não produzia a reintegração da cocaína em busca do treinamento de extinção.

Nossos resultados são geralmente consistentes com estudos de autoradiografia de receptores que mediram os níveis totais de D3 DAR no NAc após exposição à cocaína. Staley e Mash (1996) relataram que a ligação D3 DAR foi maior nas vítimas de overdose de cocaína do NAc em comparação com controles pareados por idade. Após a exposição à cocaína em um paradigma de preferência de lugar condicionado e três dias de retirada, os camundongos exibiram aumento da ligação de D3 DAR no núcleo e no invólucro de NAc (Le Foll et al., 2002). Neisewander et al. (2004) mediu a ligação D3 DAR em ratos com experiência extensa de autoadministração de cocaína que foram testados para reintegração induzida por cocaína após vários períodos de abstinência e depois mataram 24 h mais tarde. A ligação D3 DAR no NAc foi inalterada no WD1, mas aumentou após um longo período (WD31-32), consistente com a nossa observação de um aumento dependente do tempo. Além disso, um tratamento medicamentoso durante a abstinência que reduziu a procura de cocaína também atenuou o aumento da ligação de D3 DAR, sugerindo que a sobre-regulação de D3 DAR está funcionalmente ligada à procura de cocaína. Deve-se notar que o D3 DAR aumenta em Neisewander et al. (2004) foram significativos no núcleo, enquanto apenas as tendências foram observadas na concha, mas as sub-regiões foram analisadas em uma porção rostral do NAc, onde o núcleo e a casca são menos distintos. Nossa análise foi realizada em núcleo e concha de porções rostral e caudal do NAc.

Este trabalho foi apoiado por DA009621, DA00453 e um NARSAD Distinguished Investigator Award para MEW, DA020654 para MM e pré-doutorado National Research Service Award DA021488 para KLC