A superexpressão de DeltaFosB no Núcleo Accumbens aumenta a recompensa sexual em hamsters sírios femininos (2009)

COMENTÁRIOS: ΔFosB é um produto químico necessário para que os vícios ocorram. Ambas as dependências de drogas e comportamentais se correlacionam com um acúmulo de Delta FosB. Bloqueie Delta FosB e o vício cessa. Aqui é mostrado que a experiência sexual aumenta o Delta FosB e leva a uma sensibilização do centro de recompensa. A sensibilização provoca uma maior liberação de dopamina que torna a atividade ou a droga mais atraente. Em essência, o sexo é um processo de dependência. Este estudo também aumentou geneticamente o Delta FosB, o que aumentou os aspectos gratificantes do sexo acima e além dos níveis normais. Poderia usar pornografia na Internet causar um aumento do Delta FosB acima e além dos níveis normais? Isso levaria ao vício e à religação de vias neurais? Parece razoável.

ESTUDO COMPLETO: OverFosB Superexpressão No Núcleo Accumbens Aumenta A Recompensa Sexual Em Hamsters Sírios Femininos

Genes Brain Behav. 2009 junho; 8 (4): 442 – 449. doi: 10.1111 / j.1601-183X.2009.00491.x.

VL Hedges, 1 S. Chakravarty, 2 EJ Nestler, 2 e RL Meisel1

Sumário

A ativação repetida do sistema dopaminérgico mesolímbico resulta em alterações comportamentais persistentes acompanhadas por um padrão de plasticidade neural no nucleus accumbens (NAc). Como o acúmulo do fator de transcrição ΔFosB pode ser um componente importante dessa plasticidade, a questão abordada em nossa pesquisa é se ΔFosB é regulado pela experiência sexual em mulheres. Nós mostramos que fêmeas de hamsters sírios com experiência sexual exibem várias alterações comportamentais, incluindo aumento da eficiência sexual com hamsters machos, recompensa sexual e maior responsividade a estimulantes psicomotores (por exemplo, anfetamina).

Recentemente demonstramos que a experiência sexual aumentou os níveis de ΔFosB no NAc de hamsters sírios femininos. O foco deste estudo foi explorar as conseqüências funcionais desta indução, determinando se a superexpressão constitutiva de ΔFosB por vetores virais adeno-associados (AAV) no NAc poderiam mimetizar os efeitos comportamentais da experiência sexual.

Animais com superexpressão mediada por AAV de ΔFosB no NAc mostraram evidência de recompensa sexual em uma preferência de lugar condicionada Paradigma sob condições em que os animais de controlo que receberam uma injecção de proteína fluorescente verde de AAV (GFP) no NAc não o fizeram. Os testes de comportamento sexual mostraram ainda que os homens emparelhados com as fêmeas AAV-ΔFosB aumentaram a eficiência copulatória medida pela proporção de montagens que incluíam intromissão em comparação com os machos acasalados com as fêmeas AAV-GFP. Estes resultados suportam um papel para ΔFosB na mediação de comportamentos naturais motivados, neste caso o comportamento sexual feminino, e fornecem uma nova visão sobre as possíveis ações endógenas de ΔFosB.

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Introdução

A experiência com drogas de abuso, comportamentos motivados, comportamento de corrida em roda ou aprendizado instrumental resulta na ativação do sistema dopaminérgico mesolímbico e alterações persistentes no nucleus accumbens (NAc) (Becker et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., di Chiara et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Harris et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Kumar et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Meisel & Mullins, 2006, Nestler, 2008, Olausson et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Perrotti et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Pierce & Kumaresan, 2006, lobo et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Mudanças estruturais, particularmente a formação de espinhas dendríticas, são um componente importante dessa plasticidade baseada na experiência (Allen et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Lee et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Li et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Meisel & Mullins, 2006, Norrholm et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Robinson & Kolb, 2004), que permanece por muito tempo após a cessação da experiência comportamental ou da administração da droga (McClung & Nestler, 2008, Meisel & Mullins, 2006, lobo et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.).

O fator de transcrição ΔFosB possui propriedades moleculares que o tornam um bom candidato para mediar as modificações estruturais e comportamentais duradouras conseqüentes a experiências comportamentais ou de drogas (Chen et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Chen et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Colby et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Doucet et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Esperança et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Kelz et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., McClung & Nestler, 2003, McClung et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., McDaid et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Nakabeppu & Nathans, 1991, Nestler, 2008, Nye et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Olausson et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Perrotti et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Wallace et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Werme et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Zachariou et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). ΔFosB é um produto de emenda alternativo do gene precoce imediato fosB (Mumberg et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Nakabeppu & Nathans, 1991) e, ao contrário da proteína FosB de comprimento total, a ΔFosB truncada possui uma estabilidade incomum resultando no acúmulo da proteína após estimulação repetida (Chen et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Chen et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Esperança et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Kelz et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Perrotti et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Zachariou et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Embora o mecanismo pelo qual o fosO gene B é alternativamente spliced ​​permanece desconhecido, o truncamento da proteína juntamente com a fosforilação protege a proteína de degradação proteasomal rápida produzindo um maior nível de atividade transcricional em comparação com os membros da família FosB mais transitórios (Carle et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Ulery & Nestler, 2007, Ulery et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). O postulado é que o acúmulo da proteína ΔFosB produz padrões de expressão gênica que podem estar por trás dos efeitos da experiência na plasticidade comportamental e celular de longo prazo (McClung & Nestler, 2008).

Nós usamos o comportamento sexual feminino em hamsters sírios como um modelo de plasticidade baseada em experiência no cérebro (Bradley et ai.2005a, Bradley et ai.2005b, Bradley & Meisel, 2001, Bradley et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Kohlert & Meisel, 1999, Kohlert et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Meisel et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Meisel e Joppa, 1994, Meisel et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Meisel & Mullins, 2006). Uma vantagem em se trabalhar com comportamento sexual é a capacidade de controlar o nível das experiências de um animal por ter animais completamente sexualmente ingênuos ou por expor diferencialmente animais a níveis variáveis ​​de experiência sexual. Mostramos anteriormente que a experiência sexual repetida resulta na sensibilização do sistema dopaminérgico mesolímbico, análogo ao das drogas de abuso (Bradley et ai.2005b, Bradley & Meisel, 2001, Brenhouse & Stellar, 2006, Cadoni & Di Chiara, 1999, Esperança et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Kelz et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Kohlert & Meisel, 1999, Pierce & Kalivas, 1995, Pierce & Kalivas, 1997a, Pierce & Kalivas, 1997b, Robinson & Kolb, 1999a). Por exemplo, como os efeitos de drogas, a experiência sexual repetida aumenta espinhos dendríticos em neurônios espinhosos médios do NAc (Lee et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Li et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Meisel & Mullins, 2006, Norrholm et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Robinson et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Robinson & Kolb, 1997, Robinson & Kolb, 1999a, Robinson & Kolb, 1999b, Robinson & Kolb, 2004). Além disso, descobrimos que a coloração de ΔFosB / FosB é persistentemente elevada no NAc após a experiência sexual repetida (Meisel & Mullins, 2006).

Dado que a experiência sexual pode produzir uma expressão duradoura dos membros da família FosB, o objetivo deste estudo foi manipular a expressão de ΔFosB para imitar as conseqüências comportamentais da experiência sexual repetida. Após a superexpressão de ΔFosB mediada por vírus no NAc, hamsters sírios foram testados para melhorar a preferência de lugar condicionado e também aumentar a eficiência copulatória com hamsters machos, dois pontos de extremidade que já haviam sido afetados pela experiência sexual repetida (Bradley et ai.2005b, Meisel e Joppa, 1994, Meisel et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Meisel & Mullins, 2006). WRelatamos aqui que, ao persistentemente superexpressar ΔFosB no NAc de hamsters fêmeas que recebem experiência sexual mínima, somos capazes de produzir mudanças comportamentais semelhantes àquelas mulheres com experiências sexuais mais extensas.

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Materiais e Métodos

Assuntos Experimentais

Hamsters sírios machos e fêmeas foram entregues em aproximadamente 60 dias de idade de Charles River Breeding Laboratories, Inc. (Wilmington, MA). As fêmeas foram alojadas individualmente em gaiolas de plástico (50.8 cm de comprimento x 40.6 cm de largura x 20.3 de altura), enquanto os animais de estímulo macho foram alojados em gaiolas idênticas em número de três ou quatro. A sala de animais foi mantida a uma temperatura controlada de 22 ° C com um horário 14: 10 hr claro-escuro (luzes apagadas entre 1: 30 e 11: 30 pm). Comida e água estavam disponíveis para os animais ad libitum.

Todos os procedimentos utilizados neste experimento estavam de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde Diretrizes para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório e foram aprovados pelo Purdue Animal Care and Use Committee.

Cirurgia

Hamsters fêmeas foram ovariectomizadas bilateralmente sob anestesia com pentobarbital sódico (Nembutal; 8.5 mg por 100 gm peso corpóreo, ip), receberam anestesia suplementar e depois foram submetidas a cirurgia estereotáxica bilateral para a entrega de vetores virais. Durante a cirurgia estereotáxica, a cabeça foi raspada e a pele e o músculo retraídos. Um pequeno orifício foi perfurado no crânio e uma seringa 5 μL Hamilton foi baixada para o nível do NAc a partir de um ângulo lateral de 2 ° para garantir a desobstrução dos ventrículos laterais do cérebro. A seringa foi mantida no lugar por 5 min antes das injeções e então o vírus adeno-associado (AAV) -GFP ou AAV-ΔFosB (0.7 μL) foi entregue no NAc acima de 7 min, com a seringa então mantida no lugar por um 5 adicional min. Este procedimento foi repetido para o lado contralateral do cérebro.

Vetores Virais

O AAV é caracterizado por sua capacidade de transfetar eficientemente os neurônios, bem como manter a expressão específica do transgene por longos períodos de tempo (Chamberlin et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Existem vetores AAV em diferentes sorotipos baseados na caracterização de seu revestimento proteico de capsídeo. Esta experiência utilizou um AAV2 (serotype 2) da Stratagene com um título acima de 108/ μl expressando proteína verde fluorescente (AAV-GFP), bem como um vetor AAV que tinha construções para ΔFosB e GFP (AAV-ΔFosB-GFP). Os vetores virais foram injetados no NAc pelo menos 3 semanas antes do teste comportamental para permitir que a superexpressão de ΔFosB se desenvolvesse. Estes vetores de AAV medeiam a expressão do transgene em ratos e camundongos que se tornam máximos dentro de 10 dias de injeção e então persistem neste nível por pelo menos 6 meses (Winstanley et al., 2007, Zachariou e outros, 2006). É importante ressaltar que os vetores infectam apenas os neurônios e não produzem toxicidade maior do que as infusões de veículos sozinhas. Detalhes da produção e uso desses vetores são fornecidos em publicações anteriores (Winstanley et al., 2007, Zachariou e outros, 2006).

Experiência Sexual

Todos os hamsters fêmeas ovariectomizados foram preparados para experiência sexual uma vez por semana, administrando duas injecções subcutâneas diárias de benzoato de estradiol (10 μg em 0.1 ml de óleo de algodão) aproximadamente 48 hr e 24 hr antes do teste de comportamento sexual seguido de injecção subcutânea de progesterona (500 μg em 0.1 ml de óleo de semente de algodão) 4 – 6 h antes do teste de comportamento sexual. As fêmeas que receberam experiência sexual foram presenteadas com um hamster macho sexualmente experiente para uma sessão mínima 10 4-6 h após a injeção de progesterona. Cada macho e fêmea só foi emparelhado uma vez durante a duração dos testes de experiência sexual.

Preferência de lugar condicionado

Um paradigma de preferência de lugar condicionado tendencioso foi utilizado neste experimento (Tzschentke, 1998). Nosso aparelho de preferência de lugar condicionado (Meisel e Joppa, 1994, Meisel et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) consiste num compartimento branco e um cinzento (60 × 45 × 38 cm) ligados por um compartimento central claro (37 × 22 × 38). Os compartimentos principais foram ainda diferenciados por leito de faia (Harlan Laboratories, IN) no compartimento cinzento e leito de sabugo de milho (Harlan Laboratories, IN) no compartimento branco. Os hamsters fêmeas ovariectomizados foram iniciados hormonalmente antes do pré-teste, sessões de condicionamento sexual e pós-teste. Durante o pré-teste, o animal foi colocado na câmara central transparente e estava livre para percorrer os diferentes compartimentos para o 10 min para estabelecer uma preferência inicial para cada compartimento. Como todos os animais mostraram uma preferência inicial pela câmara branca, o condicionamento foi realizado na câmara cinzenta. O estímulo hormonal foi repetido durante as semanas 2 (Grupos 2 – 5) ou 5 (Grupo 1) de condicionamento. Durante o condicionamento, as fêmeas receberam experiência sexual com um macho no compartimento cinza por 10 min, com parâmetros copulatórios femininos medidos (latência da lordose e duração total da lordose). Uma hora após o teste de experiência sexual, a fêmea foi colocada sozinha na câmara branca por 10 min. Um grupo de controlo de fêmeas que não receberam experiência sexual foi iniciado com hormona mas colocado sozinho em cada câmara para 10 min. Após as semanas 2 ou 5 de condicionamento, os animais receberam um pós-teste no qual eles estavam novamente livres para vagar pelas câmaras por 10 min. Independentemente do grupo, todos os pós-testes foram realizados sete semanas após a cirurgia estereotáxica e, portanto, todos os animais foram sacrificados com o mesmo nível de expressão viral. Havia grupos de animais 5 neste experimento: Um grupo de controle positivo de animais recebeu AAV-GFP bilateral e deu 5 emparelhamentos de comportamento sexual semanal com um macho (Grupo 1, n = 8). Dois grupos de controlo negativo não receberam qualquer condicionamento sexual durante as semanas 2 e receberam o AAV-ΔFosB (Grupo 2, n = 5) ou o AAV-GFP (Grupo 3, n = 4). Por fim, houve animais que receberam 2 semanas de emparelhamentos de comportamento sexual com um homem com uma injeção bilateral de AAV-ΔFosB (Grupo 4, n = 7) ou AAV-GFP (Grupo 5, n = 7).

Experiência Masculina Naïve

Pesquisas anteriores mostraram que hamsters femininos sexualmente experientes podem melhorar a eficiência copulatória das interações com seus parceiros sexualmente ingênuos (Bradley et ai.2005b). Este teste foi dado aproximadamente uma semana após o pós-teste de preferência de local condicionado para os dois grupos de animais que receberam 2 semanas de condicionamento sexual (Grupos 4 e 5). As fêmeas foram hormonalmente preparadas para a experiência sexual, conforme descrito. Durante o teste 10 min, um hamster sexualmente ingênuo foi introduzido na gaiola da fêmea e a sessão de teste foi gravada em vídeo para posterior análise. O número de montagens e intromissões (incluindo ejaculações) pelo macho, bem como a proporção de montagens totais que incluíam intromissão (taxa de acerto) foram determinadas a partir da fita de vídeo.

Imunohistoquímica

A imunocoloração foi realizada em todos os animais para verificar a localização da injeção do vírus e a extensão anatômica da expressão da proteína. As fêmeas receberam uma sobredosagem de Sleepaway (0.2 ml ip, Fort Dodge Laboratories, Fort Dodge, IA) e perfundidas intracardialmente com solução salina tamponada com fosfato 25 mM (PBS) para 2 min (aproximadamente 50 ml) seguida de 4% paraformaldeído em 25 mM PBS para 20 min (aproximadamente 500 ml). Os cérebros foram removidos e pós-fixados para 2 h em 4% paraformaldeído e depois colocados numa solução de 10% de sacarose em PBS durante a noite a 4 ° C. Os animais que receberam apenas AAV-GFP bilateral tiveram secções coronais em série (40 μm) cortadas do tecido congelado em 25 mM PBS mais 0.1% albumina de soro bovino (BSA) (tampão de lavagem) e depois montadas diretamente nas lâminas e cobertas com cobertura enquanto ainda molhadas com 5% n-propil galate em glicerina. Os animais que receberam AAV-ΔFosB bilateral tiveram secções coronais em série (40 μm) cortadas de tecido congelado e, em seguida, lavaram-se vezes 3 para 10 min em tampão de lavagem. Os animais AAV-ΔFosB foram apenas analisados ​​para a expressão de ΔFosB e, portanto, foram incubados em anticorpo primário ΔFosB / FosB (1: sc-10000 Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA) em tampão de lavagem mais 48% Triton-X 0.3 em temperatura ambiente para 100 h e depois movido para 24 ° C para 4 h. Esta concentração de anticorpo primário foi escolhida, pois produz apenas uma coloração endógena mínima de ΔFosB / FosB. Após incubação em anticorpo primário, as secções foram lavadas 24 vezes para 3 min em tampão de lavagem e depois incubadas em anticorpo secundário biotinilado para 10 min à temperatura ambiente (45: 1, Vector, Burlingame, CA). As secções foram então lavadas 200 vezes para 3 min em tampão de lavagem antes de serem incubadas em conjugado de estreptavidina Alexa Fluor 10 (594: 1, Molecular Probes, Eugene, OR). Após esta incubação, as secções foram lavadas 500 vezes para 3 min em tampão de lavagem e depois montadas em lâminas e lamínulas enquanto ainda húmidas com 10% n-propil galato em glicerina.

Análise Microscópica

As lâminas foram analisadas por um microscópio de luz Leica DM4000B com capacidade fluorescente acoplada a uma câmera digital Leica DFC500. Imagens digitais dos locais de injeção direito e esquerdo de cada seção foram analisadas em série por microscopia de fluorescência para localizar a colocação da injeção no NAc. As secções de cada animal foram analisadas para encontrar a propagação rostral para caudal da expressão viral e também a localização anatómica do maior diâmetro de expressão. Além disso, dentro dessas seções, os números de células coradas com FosB foram contados em ImageJ a partir de imagens digitais salvas. Como nosso objetivo era simplesmente obter contagens celulares aproximadas, os métodos estereológicos não foram usados.

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Consistentes

Evolução temporal da superexpressão viral mediada de ΔFosB no NAc de hamsters sírios femininos

Um grupo separado de animais foi utilizado inicialmente para encontrar um curso de tempo de superexpressão de ΔFosB mediada por vírus no hamster fêmea. A análise da expressão de ΔFosB nos momentos de semana 3 (n = 5), 6 (n = 6) e 9 (n = 2) revelou que 3 semanas pós cirurgia estereotáxica produziu um nível de superexpressão ΔFosB que foi mantido através de 6 e 9 semanas pós-cirurgia estereotáxica. A expressão viral foi principalmente nuclear, mas também foi encontrada no citoplasma e até mesmo nos dendritos de algumas células superexpressoras. Dos treze animais que compuseram o experimento de tempo, quatro animais tiveram injeções virais do núcleo NAc rostrais, uma das quais se espalhou no núcleo do leito da estria terminal (BNST). Os nove animais restantes tinham colocações de injeção caudal, sete no núcleo caudal e dois na camada caudal do NAc. Apenas uma das injeções da casca caudal cruzou-se caudalmente com o BNST, enquanto seis das injeções no núcleo caudal cruzaram caudalmente no BNST. Os maiores diâmetros médios de expressão viral para cada ponto de tempo foram encontrados para 0.9 mm, 1.2 mm e 1.0 mm para as semanas 3, 6 e 9, respectivamente. Estes diâmetros médios foram submetidos a uma análise de variância e não foram considerados significativamente diferentes. Portanto, nos seguintes experimentos comportamentais, os testes comportamentais começaram em torno de 3 semanas após a cirurgia estereotáxica e os animais foram sacrificados em torno de 9 semanas após a cirurgia estereotáxica para garantir que a expressão viral fosse mantida em um nível consistente.

Análise imunohistológica de injeções virais de AAV-ΔFosB e AAV-GFP

As secções cerebrais de cada animal utilizado nos experimentos comportamentais foram analisadas em série em um plano coronal para a localização anatômica da injeção viral. Um total de animais 12 foi analisado pela sua expressão bilateral de ΔFosB por contagem de células e colocação de injecção, que foi determinada traçando os trajectos residuais da agulha. Embora a colocação da injeção tenha sido analisada em uma seção coronalFigura 1), expressão protéica estendida em uma elipse rostral-caudal do local da injeção, e também espalhada em uma elipse dorsal-ventral a partir do local da injeção. Dos cinco animais analisados ​​do grupo 2, 70.5% das células de superexpersão estavam no NAc (mediana = células 16,864, quartil inferior = células 7,551, quartil superior = células 20,002, intervalo interquartílico = 12,451). Os sete animais analisados ​​do Grupo 4 apresentaram 65.6% de superexpressão viral no NAc (mediana = células 9,972, quartil inferior = células 5,683, quartil superior = células 11,213, intervalo interquartílico = 5530.). Estas contagens de células representam superexpressão viral em vez de coloração endógena devido à diluição intencional do anticorpo primário.

Figura 1    

Níveis de expressão proteica mediados por AAV-GFP ou AAV-ΔFosB 12 wks pós-injeção. Topo. A superexpressão da GFP foi principalmente nuclear, mas também se espalhou para o citoplasma e dendritos das células. Inferior. Expressão da proteína ΔFosB imitada ...

Dos locais de injeção bilateral 24, doze estavam no núcleo rostral do NAc, seis dos quais tinham expressão viral que se espalhou caudalmente no BNST. Os restantes doze locais de injeção estavam no NAc caudal. Uma das doze injeções estava no casco caudal e se espalhou caudalmente no BNST. Os últimos onze locais de injeção estavam todos no núcleo caudal do NAc, oito dos quais se espalharam caudalmente no BNST. Todas as injeções foram centradas em torno da comissura anterior, exceto a injeção na concha caudal do NAc, que era levemente mais medial do que a comissura anterior (Figura 2). Todos os animais apresentaram sobre-expressão adequada de GFP ou ΔFosB e, portanto, foram utilizados em análise comportamental subsequente. Nenhum animal foi excluído do estudo devido à má colocação da injeção anatômica. Além disso, como todas as injeções foram direcionadas ao núcleo do tumor e apenas uma injeção incluiu o invólucro, nenhuma análise estatística foi feita nos locais de injeção.

Figura 2    

Localização anatômica de colocações de injeção viral de animais experimentais. Os círculos representam o posicionamento AAV-GFP e os quadrados representam o posicionamento AAV-ΔFosB. a. Posicionamento de injeção AAV-GFP para animais com condicionamento sexual 5 wks (Grupo 1). ...

A superexpressão do vetor AAV de ΔFosB no NAc de hamsters sírios femininos resulta em aumento da recompensa sexual

Para avaliar se a superexpressão de ΔFosB no NAc teve um efeito sobre a recompensa sexual, usamos o paradigma de preferência de lugar condicionado. Neste teste, os animais foram submetidos a 0, 2 ou 5 semanas de condicionamento sexual. Durante o condicionamento sexual, a latência e a duração da lordose foram registradas para cada hamster fêmea. Nem latência de lordose (Grupo 1: 553 sec ± 7 sec, Grupo 4: 552 sec ± 7 sec, Grupo 5: 561 sec ± 7 seg), nem duração da lordose (Grupo 1: 485 sec ± 15 sec, Grupo 4: 522 sec ± 10 sec, Grupo 5: 522 sec ± 12 seg) durante o condicionamento sexual diferiu significativamente entre os grupos ao longo dos testes, independentemente da injeção viral. Portanto, nem a superexpressão de GFP nem ΔFosB tiveram qualquer efeito sobre o comportamento receptivo das fêmeas.

Cada grupo do procedimento de preferência de lugar condicionado foi analisado individualmente com um teste t de medida repetida entre a quantidade de tempo gasto no compartimento de condicionamento (compartimento cinza) durante o pré-teste e o pós-teste. A análise estatística não foi estendida entre os grupos. Pesquisas anteriores mostraram que cinco experiências sexuais condicionantes são suficientes para detectar mudanças significativas na preferência local (Meisel e Joppa, 1994, Meisel et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). De fato, o grupo de controle positivo consistindo de animais fêmeas superexpressando GFP no NAc que receberam cinco experiências sexuais condicionantes gastaram significativamente mais tempo durante o pós-teste na câmara cinza emparelhada com a experiência sexual em comparação com o desempenho de pré-condicionamento, t (8 ) = −3.13, P<0.05. Como previsto, os animais que não receberam nenhuma experiência sexual de condicionamento não mudaram significativamente a quantidade de tempo em nenhuma das câmaras, independentemente da injeção viral. Mulheres com superexpressão de GFP que receberam 2 experiências sexuais de condicionamento não demonstraram condicionamento de local, enquanto as mulheres que receberam duas experiências sexuais de condicionamento com superexpressão de ΔFosB passaram significativamente mais tempo na câmara emparelhada com experiência sexual durante este pós-teste, t (7) = -2.48, P <0.05 (Figura 3).

Figura 3    

Preferência de lugar condicionado após injeção viral. Este gráfico mostra o número médio (± SEM) de segundos durante o teste de pré-condicionamento (Pré) e o teste de pós-condicionamento (Post) que cada grupo de hamsters passou no compartimento cinza. ...

A superexpressão do vetor AAV de ΔFosB no NAc de hamsters sírios femininos melhora sua eficiência copulatória com machos ingênuos

Uma semana após o pós-teste de preferência de local condicionado, as mulheres com 2 semanas de testes de condicionamento sexual (Grupos 4 e 5) foram submetidas a um teste de comportamento sexual masculino naïve. Neste teste, as fêmeas AAV-ΔFosB com testes anteriores de experiência sexual 2 melhoraram significativamente a sua eficiência copulatória mais do que as fêmeas AAV-GFP com 2 experiências sexuais anteriores (Figura 4) A taxa de acerto (a proporção do total de montagens que incluiu a intromissão) de machos sexualmente virgens que foram pareados com mulheres AAV-ΔFosB foi significativamente maior do que a taxa de acertos de homens ingênuos pareados com mulheres AAV-GFP, t (14) = 4.089 p <0.005.

Figura 4    

Eficiência copulatória de parceiros virgens de hamster. Este gráfico mostra a média (± SEM) taxa de acerto (a proporção de montes totais que incluiu a intromissão) dos hamsters machos naïves que foram emparelhados com fêmeas AAV-GFP ...
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Discussão

Experiências prévias que utilizaram vetores AAV para superexpressão de ΔFosB foram conduzidas em sistemas modelo de ratos ou camundongos (Wallace et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Winstanley et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Zachariou et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Nós validamos os padrões de expressão viral no cérebro de hamster por coloração imuno-histoquímica. Esta análise demonstrou a expressão eficaz de ΔFosB que apareceu logo após 3 semanas após a injeção intracraniana e permaneceu elevada por 9 semanas em nossa análise de tempo e até 12 semanas nos experimentos comportamentais.

Em nosso modelo de experiência sexual, repetidas interações copulatórias pelo homem levam a uma sensibilização da liberação de dopamina no NAc (Kohlert & Meisel, 1999, Kohlert et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) que tem consequências reforçadoras em um paradigma de preferência de lugar condicionadom (Meisel e Joppa, 1994, Meisel et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Esta sensibilização da dopamina, bem como a capacidade de hamsters fêmeas para regular a intromissão bem-sucedida pelo macho crescente como resultado de encontros sexuais repetidos, demonstra uma resposta associativa (Bradley et ai.2005b). Mostramos que esse comportamento sexual reforçado pode ser aumentado pela superexpressão de ΔFosB no NAc no contexto da experiência sexual subliminar, análogo ao aumento das respostas instrumentais à cocaína, à morfina ou ao consumo de alimentos após a superexpressão similar de ΔFosB (Colby et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Olausson et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Zachariou et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Esse aumento nas interações sexuais com o homem após a experiência sexual foi espelhado pela aquisição de uma preferência de lugar condicionada. EuÉ razoável considerar a ΔFosB como um nexo transcricional que está mediando tanto modificações de longo prazo no comportamento quanto a plasticidade neuronal subjacente, conseqüente à ativação dos alvos a jusante de ΔFosB.

Dado que a elevação de ΔFosB produz esses efeitos, os mecanismos subjacentes devem ser considerados. Existem muito poucas conseqüências moleculares identificadas que resultam do acúmulo de ΔFosB. MEstudos com marcadores de camundongos superexpressando ΔFosB indicaram aumentos na cinase dependente de serina / treonina-5 (Cdk5), no fator nuclear kappa B (NF-κB), na subunidade GluR2 do receptor de glutamato e na dinorfina (Ang et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Bibb, 2003). Não está claro como esses eventos moleculares podem afetar a plasticidade e a formação da coluna dendrítica, embora Cdk5 tenha papel conhecido no aumento da densidade da coluna dendrítica (Bibb, 2003, Cheung et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Kumar et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Norrholm et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e as subunidades GluR2 ou NF-κB foram implicadas em sinapses (Ang et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Nestler, 2001, Homem de Pico et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Em estudos futuros, planejamos nos concentrar nesses e em outros potenciais alvos de transcrição de ΔFosB para determinar como sua atividade flutua com o acúmulo de ΔFosB após o comportamento sexual repetido.

Existe uma vasta literatura postulando papéis distintos que a concha e o núcleo do NAc desempenham em comportamentos motivados (Brenhouse & Stellar, 2006, Cadoni & Di Chiara, 1999, Perrotti et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Pierce & Kalivas, 1995). Pesquisas anteriores em nosso laboratório identificaram consistentemente os efeitos celulares da experiência sexual no núcleo do accumbens (Bradley et ai.2005a, Bradley et ai.2005b, Bradley & Meisel, 2001, Bradley et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Kohlert & Meisel, 1999, Kohlert et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., Meisel et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), formando a base para nosso direcionamento do núcleo NAc neste estudo. Nossa análise da extensão anatômica da superexpressão de ΔFosB indicou que, embora as injeções fossem de fato direcionadas ao núcleo caudal do NAc, a expressão de ΔFosB freqüentemente se espalhava caudalmente para o BNST rostral. Embora o NAc caudal e o BNST rostral sejam certamente núcleos anatomicamente distintos, eles não são necessariamente funcionalmente distintos, pois ambas as regiões modulam muitos dos elementos mecanicistas fundamentais para os processos motivacionais (por exemplo, Koob et al., 2004). Nos nossos estudos de microdiálise de hamsters fêmeas (Kohlert et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), notamos uma incapacidade de distinguir as colocações da sonda rostral de BNST daquelas na NAc caudal em termos dos níveis de dopamina basal, respostas de dopamina às interações sexuais com os homens ou padrões de inervação aferente dopaminérgica. Em vez de considerar a propagação da infecção no BNST como metodologicamente problemática, esses resultados apóiam a ideia de um continuum funcional entre o NAc e o BNST.

Embora tenhamos mostrado que a superexpressão de ΔFosB em hamsters femininos é suficiente para produzir uma preferência de lugar condicionada para responder sexual e para aumentar as interações copulatórias com machos, permanece desconhecido se a expressão de ΔFosB é também necessário por essas conseqüências comportamentais da experiência sexual. Estudos recentes utilizaram um vírus AAV-ΔJunD, que diminui a transcrição mediada por ΔFosB por heterodimerização competitiva com ΔFosB antes de ligar a região AP-1 em genes (Winstanley et ai.bordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Usando a AAV-ΔJunD para derrubar a transcrição mediada por ΔFosB, esperamos determinar se ΔFosB é necessário para a plasticidade comportamental que observamos após a experiência de comportamento sexual, o que complementará os resultados do estudo aqui apresentado. Se o acúmulo de ΔFosB e sua subsequente ativação de alvos a jusante causam plasticidade comportamental e celular, então o knockdown de ΔFosB deve abolir esses efeitos.

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Agradecimentos

Gostaríamos de agradecer a Amanda Mullins, Melissa McCurley e Chelsea Baker por sua ajuda com testes comportamentais, condicionamento e processamento de tecidos. Este trabalho foi apoiado pelo NIH concede DA13680 (RLM) e MH51399 (EJN).

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