Efeitos benéficos de alimentos altamente palatáveis ​​nas adversidades comportamentais e neurais induzidas pela experiência precoce de estresse de vida em ratas (2015)

Jin Young Kim,¹ Jong-Ho Lee,^{1,-benzóico.} Doyun Kim,^1,2 Soung-Min Kim,¹ JaeHyung Koo,² e Jeong Won Jahng^{1,-benzóico.}

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Este estudo examinou os efeitos de alimentos altamente palatáveis ​​durante a adolescência sobre os distúrbios psico-emocionais e neurais causados ​​pela experiência de estresse no início da vida em ratas. Os filhotes Sprague-Dawley fêmeas foram separados da mãe por 3 h diariamente durante as duas primeiras semanas de nascimento (MS) ou deixados não perturbados (NH). Metade das mulheres com MS recebeu livre acesso a cookies de chocolate, além de ad libitum comida do dia pós-natal 28. Filhotes foram submetidos aos testes comportamentais durante a idade adulta jovem. A resposta da corticosterona plasmática aos níveis de estresse agudo, ΔFosB e fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) nas regiões cerebrais foram analisadas. O consumo calórico total e o ganho de peso corporal durante todo o período experimental não diferiram entre os grupos experimentais. O acesso a cookies durante a adolescência e a juventude melhorou os comportamentos de ansiedade / depressão pela experiência da EM. A expressão de ΔFosB foi diminuída, mas o BDNF foi aumentado no nucleus accumbens de mulheres com EM, e a expressão de ΔFosB foi normalizada e o BDNF foi adicionalmente aumentado após o acesso ao cookie. A resposta da corticosterona ao estresse agudo foi embotada pela experiência da EM e o acesso a cookies não melhorou a resposta. Os resultados sugerem que o acesso a cookies durante a adolescência melhora os distúrbios psico-emocionais de mulheres com EM, e a expressão de ΔFosB e / ou BDNF no nucleus accumbens pode desempenhar um papel em seus mecanismos neurais subjacentes.

Animais

Ratos Sprague-Dawley foram adquiridos (Samtako Bio, Osan, Coréia) e tratados em uma área de barreira livre de patógenos específicos com controle constante de temperatura (22 ± 1 ℃), umidade (55%) e 12 / 12 h ciclo claro / escuro (acende-se no 07: 00 AM). Alimentos de laboratório padrão (Purina Rodent Chow, Purina Co., Seul, Coreia) e água purificada filtrada por membrana estavam disponíveis ad libitum. Os animais foram tratados de acordo com a Diretriz para Experiências com Animais, 2000, editada pela Academia Coreana de Ciências Médicas, que é consistente com as Diretrizes do NIH para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório, revista 1996. Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório na Universidade Nacional de Seul.

protocolo experimental

Fêmeas nulíparas e machos reprodutores comprovados foram usados ​​para reprodução no laboratório da instalação de animais, e os filhotes foram criados de maneira controlada para minimizar e padronizar a estimulação ambiental indesejada de in utero vida. Doze horas após a confirmação do parto [dia pós-natal (PND) 1], os filhotes foram manipulados como descrito anteriormente ^{13, 14, 33 - 35}. Cada ninhada foi designada para o grupo de separação materna (MS) ou para o grupo não manipulado (NH). Os filhotes de MS foram removidos de sua mãe e da gaiola doméstica e colocados próximos uns dos outros em uma nova gaiola forrada com aparas de madeira (barbear Aspen, Animal JS Bedding, Cheongyang, Coreia) durante 9:00 h - 12:00 h, e então voltaram para suas casas gaiola e barragem. Nenhum tratamento adicional para manter os filhotes aquecidos durante o período de separação foi oferecido. O MS foi realizado diariamente do PND 1 ao 14 e, em seguida, os filhotes foram deixados com a mãe sem serem perturbados até o desmame no PND 22. O grupo NH permaneceu imperturbado até o desmame, exceto para a limpeza da gaiola de rotina realizada duas vezes por semana. No dia do desmame, 2 filhotes NH e 4 MS fêmeas foram selecionados aleatoriamente de cada ninhada NH ou MS, respectivamente, e colocados 2 filhotes NH ou 2 MS juntos em cada gaiola. Duas fêmeas filhotes MS alojadas juntas receberam acesso gratuito a alimentos altamente palatáveis ​​(HPF) (biscoito Oreo, Kraft Foods Global, Inc., East Hanover, NJ, EUA), além de ad libitum comida do PND 28 (grupo MS + HPF), e os demais filhotes de 2 fêmeas MS em cada ninhada (grupo MS) e filhotes NH (grupo NH) receberam somente ração padrão. As fórmulas de composição de nutrientes de ração padrão e biscoito Oreo são mostradas na Tabela Table1.1. A ingestão diária de alimentos e o ganho de peso foram registrados no PND 29. Para a avaliação da ingestão alimentar de 24 h, foi fornecida a quantidade pré-medida de ração e biscoitos e, no dia seguinte, a quantidade restante de ração e biscoitos foi pesada e subtraída do valor fornecido no dia anterior. Um cuidado especial foi tomado para incluir o derramamento. A ingestão calórica foi calculada de acordo com as fórmulas de composição nutricional de ração e biscoitos. As quantidades totais de alimentos consumidos pelos filhotes em cada gaiola foram divididas pelo número de filhotes em cada gaiola e cada valor calculado foi considerado como n = 1. A água estava disponível gratuitamente para todos os grupos experimentais e as condições alimentares continuaram durante todo o período experimental. O diagrama esquemático do protocolo experimental é fornecido na figura Figura 11.

 

Figura 1

Protocolo experimental.

 

tabela 1

Teores em nutrientes (%) em ração padrão e biscoito Oreo

Atividade Ambulatorial

As fêmeas NH, MS e MS + HPF (n = 8 de 4 diferentes ninhadas em cada grupo; total 24 filhotes de 8 diferentes ninhadas) foram submetidas ao teste ambulatorial em PND 54. Em cada ensaio, o rato foi colocado no centro da câmara de actividade (43.2 cm de comprimento, 42.2 cm de largura e 30.5 cm de altura, MED Associates, VT, EUA), uma câmara de acrílico transparente equipada com dois planos horizontais de 16 pares de fotocélulas e detectores de infravermelhos colocados em x, y dimensão, espaçadas de 2.5 cm, e sua atividade ambulatorial foi monitorada pelo sistema computadorizado para 30 min. A condição de luz da sala de testes foi mantida na mesma intensidade com salas de animais sob condição de luz diurna. A actividade ambulatória foi medida como a contagem total de interrupções de feixe no sensor horizontal durante cada sessão mínima 5 consecutiva. A atividade de defecação, peso de bolus fecal, durante o teste de deambulação de cada rato foi pontuada também. A atividade de limpeza foi posteriormente analisada; ou seja, o preparo da pata dianteira e da cabeça foi considerado como limpeza rostral e o corpo, pernas e cauda / preparação genital como preparação caudal ³⁶. A câmara de actividade foi limpa com 70% etanol após cada utilização para eliminar quaisquer sugestões olfactivas do rato previamente testado.

Labirinto Mais Elevado

Dois dias após o teste de actividade ambulatória (PND 56), os ratos foram submetidos à avaliação comportamental num labirinto em cruz elevado, um labirinto em acrílico com dois braços abertos opostos (50 cm de comprimento e 10 cm de largura) e dois opostos fechados braços (50 cm de comprimento, 10 cm de largura e 31 cm de altura), estendendo-se a partir de uma plataforma central (10 cm x 10 cm). Todo o aparelho foi elevado 50 cm acima do chão. O procedimento de teste foi seguido como descrito anteriormente ³⁷. Cada rato foi colocado no centro do labirinto de frente para um dos braços abertos, e depois permitiu explorar os braços abertos ou fechados do labirinto para 5 min. O tempo gasto nos diferentes braços foi registrado. Quatro patas tinham que estar dentro da linha de entrada para cada braço, o que sinalizava o início do tempo gasto no braço específico, e então o tempo final era registrado quando todas as quatro patas estavam fora da linha novamente. O labirinto foi limpo com 70% etanol após cada teste para evitar influências do rato previamente testado.

Teste de Natação Forçada

Três dias após o teste do labirinto em cruz elevado (PND 59), os ratos foram submetidos ao teste de natação forçada, de acordo com o método descrito anteriormente. ³⁸. Cada rato foi autorizado a nadar em um cilindro de vidro (54 cm de altura e 24 cm de diâmetro) cheio de água a 40 cm de profundidade (23-25 ​​℃) por 5 min, e as sessões de teste foram gravadas por uma câmera de vídeo de o lado do cilindro. A duração da imobilidade do rato na água foi avaliada a partir de fitas de vídeo usando um cronômetro. A imobilidade foi definida como o estado em que os ratos faziam apenas os movimentos necessários para manter a cabeça acima da superfície da água.

Os ratos foram colocados na sala de teste pelo menos 2 h antes de cada teste para minimizar efeitos de stress indesejados, e todas as avaliações comportamentais foram realizadas entre 9: 00 AM e 12: 00 PM do dia para evitar as influências das varianças circadianas. A pontuação comportamental foi feita com o observador cego do tratamento dos ratos.

Ensaio de corticosterona plasmática

Uma semana após o término das sessões comportamentais, os ratos foram colocados em uma caixa de contenção por 2 h, na qual os ratos eram capazes de mover seus quatro membros, mas não de mudar sua orientação corporal. O sangue da cauda foi coletado nos pontos de tempo de 0, 30, 60 e 120 min durante o período de contenção e centrifugado a 2,000 rpm por 20 min. As amostras de plasma foram congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -80 ° C até o uso para o ensaio. Os níveis plasmáticos de corticosterona foram determinados por radioimunoensaio usando ¹²⁵Kit Coat-A-Count com etiqueta I (Siemens, CA, EUA). A sensibilidade do ensaio foi de 5.7ng / ml. O coeficiente de variação intra-ensaio foi de 4-12.2%.

Análise de Western blot

Ratos que são virgens de testes comportamentais (n = 6 de 3 ninhadas diferentes em cada grupo; total de 18 filhotes de 6 ninhadas diferentes) foram sacrificados em PND 62 para a análise de western blot dos níveis de ΔFosB e BDNF nas regiões do cérebro. Os coxins de gordura retroperitoneal foram coletados no momento do sacrifício e os cérebros foram removidos imediatamente após a decapitação. Amostras de tecido de nucleus accumbens (NAc) e hipocampo foram rapidamente dissecadas em gelo, congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -80 ° C até serem utilizadas. A dissecção do tecido NAc foi realizada com lâmina fina de acordo com o método utilizado em nossos estudos anteriores ^{28, 39}; entretanto, uma possível inclusão de corpo estriado ventro-medial próximo não pode ser evitada. Os tecidos foram homogeneizados num único tampão de lise detergente (50 mM Tris, pH 8.0; 150 mM NaCl; 1% Triton X-100; protease e inibidor da fosfatase cocktail 0.5%) e depois centrifugados a 13,000 g para 20 min em 4^oC. Os sobrenadantes transferidos para novos tubos foram medidos quanto ao conteúdo de proteína usando um kit de ensaio de proteína (Biorad DC, Biorad, Inc., Hercules, CA), aliquotado a uma concentração de 80 μg / 20 μl em tampão de lise e armazenado a -80 ° C, caso contrário, usado no mesmo dia. As amostras foram misturadas com tampão de carga (Tris 100 mM, pH 6.8; ditiotreitol 200 mM; SDS 4%; glicerol 20%; azul de bromofenol 0.2%) na diluição 1: 1, fervida por 5 min, resfriada rapidamente em gelo e, em seguida eletroforese em géis de SDS-poliacrilamida Tris-glicina a 12%. As proteínas transferidas para membranas de nitrocelulose (Hybond-C, Amersham, Bucks, UK) foram tratadas com 5% de leite em pó desnatado em 1X solução salina tamponada com Tris (10 mM C₄H₁₁NÃO₃; 0.145 M NaCl; 0.2% SDS; 0.1% Tween 20) durante a noite no 4⁰C. As membranas foram reagidas com anti-FosB policlonal de coelho (diluição 1: 1000; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, EUA) ou anti-BDNF (diluição 1: 500; Millipore, Temecula, CA, EUA), e o os anticorpos ligados foram detectados com quimioluminescência de acordo com as instruções do fabricante (substrato Lumi-light western blotting; Roche, Indianapolis, IN, EUA) e quantificados usando um sistema de análise de imagem digital (LAS-1000, Fuji film, Tóquio, Japão). Os valores digitalizados de cada amostra foram normalizados para o controle de carga β-actina e, em seguida, todos os valores foram convertidos em valores relativos para o valor médio do grupo NH.

Análise estatística

Os dados foram analisados ​​por dados de corticosterona de uma ou duas vias; tratamento (manejo ou condição de alimento, níveis 2 cada)) X tempo (4 níveis)] análise de variância (ANOVA), e comparações pré-planejadas entre os grupos foi realizada por post hoc Teste PLSD de Fisher quando necessário, utilizando o software StatView (Abacus, Berkeley, CA, EUA). Os dados de peso corporal e ingestão alimentar foram analisados ​​posteriormente por ANOVA de medidas repetidas, seguido pela correção de Bonferroni P ajuste de valor. O nível de significância foi estabelecido em P <0.05, e todos os valores foram apresentados como médias ± SEM

Ingestão de alimentos e ganho de peso corporal

As fêmeas da MS pareciam ser mais leves do que as fêmeas NH do mesmo sexo até o PND 39 e a diferença de peso não foi observada a partir daí (Figura (Figure2A) .2UMA). Diferenças estatisticamente significativas (P<0.05) entre mulheres com NH e MS foram observados durante PND 32-39, exceto no PND 36 e 37. O acesso a alimentos palatáveis ​​diminuiu a diferença de peso pela experiência de MS, e a significância estatística entre NH e MS + HPF desapareceu após PND 36. Repetido ANOVA de medidas revelou que o ganho de peso corporal ao longo do tempo é diferente entre MS e MS + HPF [F(1,780) = 2.146; P= 0.0008], mas não entre NH e MS. A ingestão diária de rações de fêmeas com esclerose múltipla não diferiu das fêmeas com idade (Figure2B) .2B). O acesso a biscoitos suprimiu o consumo diário de ração de mulheres com MS, mas a ingestão calórica diária tendeu a ser aumentada pelo acesso a biscoitos sem significância estatística. A análise da ingestão calórica com ANOVA de medidas repetidas não revelou efeitos da separação materna e da condição alimentar. A ingestão calórica total durante todo o período experimental (PND 28 - 62) não diferiu entre os grupos experimentais (Figura (Figure2C) .2C). Cerca de 40% do total de calorias consumidas pelas fêmeas MS + HPF originadas dos cookies (3259.921 ± 211.657 kcal da ração, 2184.641 ± 186.077 kcal dos cookies). O coxim retroperitoneal de gordura de fêmeas MS em PND 62 não diferiu das fêmeas NH de correspondência de idade e tendeu a ser aumentado com acesso a cookie sem significância estatística (P= 0.0833, MS vs. MS + HPF) (figura (Figure22D).

 

Figura 2

Ganho de peso corporal (A), ingestão diária de ração e calorias (B), ingestão calórica total (C) e peso da gordura retroperitoneal (D). NH; alimentado de forma não controlada apenas com ração, MS; separação materna alimentada apenas com ração, MS + HPF; separação materna alimentada com comida ...

Avaliações Comportamentais

As atividades ambulatoriais de mulheres com NH, MS e MS + HPF foram medidas em uma câmara de atividade computadorizada no PND 54. As contagens ambulatoriais de mulheres com MS durante a primeira (0 - 15 min) e a última sessão (15 - 30 min) foram reduzidas significativamente em comparação com mulheres NH; no entanto, uma diminuição significativa (P<0.05) em relação ao NH foi observado apenas durante a última sessão no grupo MS + HPF (Figura (Figure3A) .3UMA). A distância total percorrida durante a primeira sessão mínima de 15 diminuiu significativamente em MS (P<0.05), mas não em MS + HPF, em comparação com NH (Figura (Figure3B) .3B). O comportamento de limpeza e atividade de defecação foram pontuados durante o teste de atividade ambulatorial (Figure3C3C e D). A experiência de EM aumentou significativamente a preparação rostral (P<0.05, NH vs. MS) enquanto o acesso aos cookies reduziu (P<0.05, MS vs. MS + HPF) (Figura (Figure3C) .3C). A atividade de defecação de fêmeas MS tendeu a ser aumentada em relação a NH sem significância estatística, e o acesso a cookies reduziu significativamente (P<0.05, MS vs. MS + HPF) (Figura (Figure33D).

 

Figura 3

Teste de atividade ambulatorial realizado no PND 54. Contagens ambulatoriais pontuadas consecutivamente a cada sessão min 5. Comportamentos de preparação e atividade de defecação durante 30 min do teste de atividade ambulatorial foram pontuados. Contagem ambulatorial total (A) e viajou ...

A fim de avaliar ainda mais os comportamentos semelhantes à ansiedade, os ratos foram submetidos a um teste de labirinto em cruz elevado 2 dias após o teste de atividade ambulatorial (PND 56). O tempo gasto nos braços abertos foi significativamente diminuído em mulheres com EM (P <0.05), mas não em MS + HPF, em comparação com NH (Figura (Figure4A) .4UMA). A porcentagem de entrada no braço aberto não diferiu entre os grupos experimentais (Figura (Figure4B) .4B). Para avaliar comportamentos semelhantes aos da depressão, os ratos foram submetidos ao teste de natação forçada 3 dias após o teste do labirinto em cruz elevado (PND 59). A duração da imobilidade durante a sessão 5 min de natação forçada foi significativamente aumentada em mulheres com EM (P <0.05) em comparação com NH, e o escore de imobilidade de mulheres MS + HPF não diferiu de NH (Figura (Figure44C).

 

Figura 4

Tempo gasto e entrada de braços abertos durante o teste do labirinto em cruz elevado (A, B) e imobilidade durante o teste de natação forçada (C). Os ratos foram submetidos ao teste de labirinto em cruz elevado em PND 56 e ao teste de natação forçada em PND 59. NH; alimentado sem manuseio apenas com ração, ...

Níveis plasmáticos de corticosterona

Uma semana após o teste de natação, os ratos receberam estresse de contenção e os sangues da cauda foram coletados nos momentos 0, 30, 60 e 120 durante 2 h da sessão de restrição, e foi usado para o ensaio de corticosterona plasmática (Figura (Figure5) .5). Os níveis basais de corticosterona (ponto 0) não diferiram entre os grupos; no entanto, os aumentos do nível de corticosterona induzidos pelo estresse foram menores em mulheres com EM do que em NH nos momentos 30 e 60 min após o início do estresse (P<0.05, NH vs. MS em cada ponto de tempo). Os níveis de corticosterona plasmática de MS + HPF não diferiram de NH em 30 minutos após o início do estresse, mas foram menores do que NH em 60 minutos (P <0.05; 394.29 ± 38.35 ng / ml em NH vs. 247.48 ± 24.57 ng / ml em MS + HPF). A análise dos níveis de corticosterona induzidos pelo estresse com ANOVA de 2 vias revelou os principais efeitos da separação materna [F(1,56) = 8.814, P= 0.0045] e hora [F(3,56) = 9.335, P<0.0001], e nenhum efeito da condição alimentar. Não foram encontradas interações significativas entre separação materna e tempo ou entre condição alimentar e tempo.

 

Figura 5

Níveis plasmáticos de corticosterona durante 2 h de sessão de contenção. Os ratos foram submetidos a estresse de contenção após uma semana de recuperação do teste de natação forçada. A condição de alimentação continuou durante o período de recuperação. Ratos foram colocados na caixa de contenção ...

ΔFosB e BDNF Western Blots

Os níveis de ΔFosB e BDNF no NAc foram examinados com análise de western blot (Figura (Figure6) .6). ΔFosB foi significativamente reduzido, mas o BDNF foi aumentado no NAc de mulheres com EM (P <0.05) em comparação com NH (Figura (Figure6A6A e B). O nível de ΔFosB no NAc de mulheres com MS foi normalizado pelo acesso a cookies; ou seja, nenhuma diferença entre NH e MS + HPF, e o nível de BDNF foi ainda mais aumentado (P <0.05, MS vs. MS + HPF). Os níveis de BDNF no hipocampo de mulheres com MS diminuíram acentuadamente em relação ao NH (P <0.05) e não foi recuperado por acesso a cookies (Figura (Figure66C).

 

Figura 6

Análises de Western blot dos níveis de ΔFosB e BDNF nos níveis de NAc (A, B) e BDNF no hipocampo (C). Ratos que são ingênuos dos testes comportamentais foram sacrificados em PND 62 para coletar as amostras de tecido para análise de western blot. NH; ...

Acesso à comida palatável melhorou os comportamentos psicoemocionais das mulheres com EM

Neste estudo, os escores comportamentais representaram ansiedade e depressão, como atividade ambulatorial, atividade rostral de grooming e defecação durante o teste de atividade; braços abertos permanecem durante o teste do labirinto em cruz elevado; imobilidade durante o teste de natação forçada, foram melhoradas em mulheres com esclerose múltipla com acesso livre aos biscoitos Oreo durante a adolescência e juventude. A resposta de corticosterona ao estresse agudo foi diminuída em mulheres com EM, como relatado em homens com EM ¹⁴. A resposta embotada à corticosterona parece ser uma consequência da experiência da EM; isto é, experiência de estresse repetido, uma vez que as respostas do eixo HPA ao estresse agudo desafiaram-se aparentemente embotadas após experiências de estresse crônico repetido ^{40, 41}. Estudos sugeriram que a exposição à dieta altamente preferida rica em gordura pode modificar a atividade do eixo HPA basal e as respostas endócrinas a um estresse agudo ⁹melhorar as respostas ao estresse ^{17, 19} e diminuir comportamentos semelhantes à ansiedade ^{18, 20}. Além disso, o livre acesso a biscoitos Oreo (~ 21% de conteúdo de gordura; uma dieta moderada em gorduras) durante a adolescência e juventude normalizou a função do eixo HPA e melhorou comportamentos de ansiedade em ratos machos ¹⁴. Ou seja, é provável que o acesso de cookies adolescentes possa melhorar a função do eixo HPA embotado pela experiência do MS, estresse repetido no início da vida e melhorar as adversidades comportamentais. No entanto, neste estudo, o acesso a cookies durante a adolescência e a juventude não melhorou a atividade do eixo HPA em resposta ao estresse agudo em ratas do sexo feminino. Sugere-se que as eficiências ansiolíticas e / ou antidepressivas do acesso de cookies na adolescência em ratas de femea feminina podem não estar relacionadas com a função do eixo HPA, embora tenha sido em ratas MS machos. Ratos machos e fêmeas diferem em numerosos parâmetros neuroendócrinos e comportamentais, e a vulnerabilidade ao estresse é dependente de gênero ^{42, 43}. Um estudo anterior relatou que um protocolo de dieta com moderada gordura no dia 7 leva a uma liberação exagerada de corticosterona seletiva masculina após estresse agudo. ⁶.

Acesso a alimentos palatáveis ​​e função neuronal no NAc de ratas

O presente estudo demonstrou que a expressão de ΔFosB está diminuída e o BDNF aumentou no NAc de ratas por experiência de EM. Tem sido relatado que o estresse psicológico ou metabólico aumenta a expressão de ΔFosB no NAc ^44-46. Estudos sugeriram que o fator de transcrição ΔFosB está relacionado com a expressão de BDNF nos neurônios NAc ^{32, 47-49}. Tomados em conjunto, sugere-se que a diminuição da ΔFosB e o aumento da expressão de BDNF no NAc podem ser uma consequência a longo prazo do estresse da MS no início da vida, possivelmente modulando a função neuronal da NAc. Sugeriu-se que a função neuronal do NAc fosse modulada pelo paradigma do estresse comportamental ^{24, 25} e sua disfunção tem sido implicada em transtornos depressivos e ansiosos ^{22, 23, 26, 27}. De fato, o aumento da sinalização do BDNF no NAc tem sido relatado em modelos de depressão induzidos pelo estresse ^50-52e os efeitos depressivos induzidos pelo estresse foram atenuados em camundongos superexpressando ΔFosB no estriado ⁵³. Assim, é provável que os comportamentos de depressão e / ou ansiedade de ratos com EM feminina possam estar relacionados com diminuição de ΔFosB e aumento da expressão de BDNF no NAc.

Neste estudo, o acesso a cookies durante o período da adolescência aumentou as expressões de ΔFosB e BDNF em ratas MS. Este resultado está de acordo com relatórios anteriores mostrando que a exposição a uma dieta palatável resulta em níveis aumentados de ΔFosB no NAc. ³¹e essa dieta rica em gordura aumentou os níveis de BDNF no NAc de camundongos superexpressores ΔFosB ³². Considerando relato anterior revelando que a expressão aumentada de ΔFosB no estriado exerce resiliência aos efeitos depressivos induzidos pelo estresse ⁵³, conclui-se que o aumento de ΔFosB no NAc de nossas mulheres com acesso ao cookie; isto é, normalizado ao nível basal, pode ter contribuído para a eficácia antidepressiva e / ou ansiolítica do acesso de cookies na adolescência. No entanto, não está claro se o aumento do nível de BDNF nas mulheres NAc de MS com acesso a cookie está implicado em seus efeitos antidepressivos e ansiolíticos, uma vez que o aumento da sinalização de BDNF no NAc foi relatado principalmente em modelos depressivos ^50-52, mas raramente em modelos antidepressivos. Mais estudos são necessários.

Efeitos da MS e HPF nos níveis de BDNF no hipocampo

Diminuição do nível de BDNF no hipocampo tem sido relatada em ratos machos e fêmeas que foram submetidos a um protocolo MS similar usado neste estudo. ^{54, 55}. Concomitantemente, o nível de BDNF foi diminuído no hipocampo de nossos ratos MS femininos em relação aos controles NH neste estudo. A neurogênese do hipocampo tem sido implicada em sintomas de ansiedade e depressão ^{56, 57}e o hipocampo é bem conhecido por estar envolvido na regulação de retroalimentação da atividade do eixo HPA. Lembrando que a atividade da HPA estava embotada em nossas mulheres com EM, é provável que os níveis diminuídos de BDNF no hipocampo possam estar implicados em transtornos de ansiedade e / ou depressão pela experiência da EM, possivelmente em relação à atividade do eixo HPA enfraquecido. A relação entre o nível de BDNF no hipocampo e a atividade do eixo HPA em nossas mulheres com EM foi apoiada ainda mais pelo fato de que o acesso a cookies não melhorou ambos no presente estudo. Estudo prévio mostrou que o consumo prolongado de dieta hiperlipídica (32% gordura) aumenta a expressão de BDNF no hipocampo de ratos machos MS submetidos a um protocolo MS similar que foi usado neste estudo ⁵⁸. O efeito do acesso de cookies durante a adolescência (~ 21% gordura) nos níveis de BDNF hipocampal de ratos machos MS está atualmente sob investigação.

Efeitos comportamentais do conteúdo de gordura / açúcar no biscoito Oreo

Neste estudo, o livre acesso aos biscoitos Oreo melhorou as adversidades psicoemocionais em ratas com experiência estressante no início da vida. O biscoito Oreo é um biscoito de chocolate, não apenas rico em gordura, mas também rico em açúcar, como mostrado na Tabela. Table1.1. No estudo em humanos, comer chocolate reduziu o humor negativo em comparação com a água potável, ao passo que nenhum efeito foi encontrado no humor neutro e positivo ⁵⁹. E o efeito de melhora do humor do chocolate foi dependente da palatabilidade do chocolate (chocolate ao leite versus chocolate comum), sugerindo que comer alimentos doces e palatáveis ​​melhora um estado de humor negativo experimentalmente induzido. Foi relatado que o desejo de sacarose é aumentado em animais deprimidos com estresse leve e crônico, e o desejo palatável de chocolate ao leite é aumentado especificamente em indivíduos deprimidos ⁶⁰. Livre escolha de sacarose e / ou banha, além de chow tudo modulado as respostas do eixo de estresse para estresse agudo ⁶¹. Além disso, a exposição a curto prazo a uma dieta com teor moderado de gordura (20% óleo de milho; conteúdo similar de gordura com biscoitos Oreo) induziu alterações neuroendócrinas e comportamentais de maneira sexualmente dimórfica. ^4-6. Em conjunto, conclui-se que o conteúdo de açúcar e gordura dos biscoitos Oreo pode ter contribuído para melhorar as adversidades neurais e comportamentais em mulheres com EM. Mais estudos são necessários para examinar se a mesma quantidade de gordura ou de fornecimento de açúcar, como o acesso a biscoitos Oreo, produziria melhorias semelhantes em fêmeas MS observadas neste estudo.

Por fim, o depósito de gordura retroperitoneal tendeu a ser aumentado em fêmeas MS por acesso a cookie neste estudo. Além de seu efeito de modulação na função do eixo de estresse, o acesso de alimentos palatáveis ​​aumentou significativamente os níveis de leptina e insulina circulantes com o aumento do depósito de gordura ^{15, 61}. Tanto a leptina como a insulina têm sido sugeridas para exercer uma função reguladora no sistema de recompensa meso-límbico, e especialmente a expressão aumentada de insulina dos transportadores de dopamina na área tegmentar ventral. ^{62, 63}. Como descrito acima, o sistema de recompensa meso-límbico é altamente implicado nos distúrbios psicoemocionais em relação à função do eixo de estresse ^22-27. Assim, sugere-se que uma modulação experimental, se houver, no sistema de recompensa meso-límbico pelo aumento da leptina e / ou insulina com aumento do depósito de gordura desempenhe um papel na elevação do humor pelo acesso palatável aos alimentos. De fato, o consumo prolongado de uma dieta rica em gorduras reduziu os comportamentos de ansiedade e aumentou os níveis de leptina e insulina no plasma com depósito de gordura acentuadamente aumentado em ratas submetidas a um protocolo MS similar usado neste estudo. ¹¹. No entanto, ainda não está claro se as melhorias comportamentais observadas em nossas mulheres com acesso a cookie (uma dieta com moderada gordura com conteúdo de gordura 21%) estão relacionadas com o aumento do depósito de gordura, porque o aumento do depósito de gordura retroperitoneal pelo cookie acesso não alcançou significância estatística e, além disso, nem a leptina circulante nem a insulina foram medidas no presente estudo.

Em conclusão, disfunções no eixo HPA, os neurónios NAc e o hipocampo pareciam estar implicados nas adversidades psico-emocionais de ratos jovens do sexo feminino por experiência de separação materna durante as duas primeiras semanas de nascimento. O acesso gratuito a alimentos altamente palatáveis, uma dieta moderada em gordura, durante a adolescência e juventude melhorou os comportamentos de ansiedade e depressão em mulheres com EM sem afetar o ganho de peso corporal, e a modulação funcional nos neurônios pode desempenhar um papel em seus mecanismos neurais subjacentes.

Os autores agradecem ao Dr. SB Yoo pela ajuda na análise estatística e ao Dr. JY Lee com técnicas experimentais. Este estudo foi apoiado por doações da Fundação Nacional de Pesquisa (2013R1A1A3A04-006580) e do Centro de Pesquisa de Anestesia Oromaxilofacial para Idosos da Universidade Nacional de Seul (2014050477), financiado pelo Governo da Coréia (Ministério da Ciência, TIC e Planejamento Futuro).