fonte
Wagoner Center for Alcoholism and Vício Research, Institute for Neuroscience, Universidade do Texas em Austin, Austin, TX, 78712, EUA. [email protegido].
Sumário
ABSTRATO:
TEMA:
A incapacidade de reduzir ou regular a ingestão de álcool é um sintoma característico para transtornos por uso de álcool. Pesquisas sobre novos modelos comportamentais e genéticos de mudanças induzidas pela experiência na bebida aumentarão nosso conhecimento sobre transtornos por uso de álcool. Comportamentos distintos de autoadministração de álcool foram previamente observados ao comparar duas linhagens híbridas de camundongos F1: C57BL / 6J x NZB / B1NJ (BxN) mostra diminuição da preferência por álcool após experiência com altas concentrações de álcool e períodos de abstinência enquanto C57BL / 6J x FVB / NJ (BxF) mostram preferência sustentada pelo álcool. Esses fenótipos são interessantes porque esses híbridos demonstram a ocorrência de aditividade genética (BxN) e overdominance (BxF) na ingestão de etanol de maneira dependente da experiência.
Especificamente, a BxF exibe uma preferência sustentada pelo álcool e a BxN exibe menor preferência por álcool após experiência com altas concentrações de etanol; no entanto, a experiência com baixas concentrações de etanol produz uma preferência sustentada pelo álcool para ambos os híbridos.
No presente estudo, testamos a hipótese de que esses fenótipos são representados pela produção diferencial do fator de transcrição indutível, ΔFosB, em regiões do cérebro relacionadas a recompensa, aversão e estresse.
RESULTADOS:
Alterações na plasticidade neuronal (medidas pelos níveis de ΔFosB) foram dependentes da experiência, bem como da região do cérebro e do genótipo específico, sustentando ainda mais que os circuitos neuronais estão por trás dos aspectos motivacionais do consumo de etanol.
Camundongos BxN exibindo menor preferência por álcool apresentaram menores níveis de ΔFosB no núcleo de Edinger-Westphal do que camundongos com preferência sustentada por álcool, e aumento dos níveis de ΔFosB na amígdala medial central em comparação com camundongos controle.
Camundongos BxN exibindo preferência sustentada pelo álcool exibiram maiores níveis de ΔFosB na área tegmentar ventral, Núcleo de Edinger-Westphal e amígdala (divisões central e lateral).
Além disso, em Níveis de ΔFosB de camundongos BxN no núcleo de Edinger-Westphal e regiões tegmentares ventrais correlacionaram-se significativamente positivamente com a preferência e ingestão de etanol. Além disso, a análise de agrupamento hierárquico revelou que muitos camundongos virgens de etanol com baixos níveis globais de ΔFosB estão em um cluster, enquanto muitos camundongos exibindo preferência sustentada por álcool com altos níveis globais de ΔFosB estão juntos em um cluster.
CONCLUSÕES:
Ao comparar e contrastar dois fenótipos de álcool, este estudo demonstra que os circuitos relacionados a recompensa e estresse (incluindo o núcleo de Edinger-Westphal, área tegmentar ventral, amígdala) sofrem plasticidade significativa que se manifesta como uma redução na preferência pelo álcool.
BACKGROUND
Existem fatores de susceptibilidade conhecidos, ambientais e genéticos, associados ao abuso de álcool e ao alcoolismo. A capacidade de ingerir grandes quantidades de álcool com pouca conseqüência para o indivíduo é um sintoma de início primário em muitos alcoólatras, indicando que um baixo nível de resposta ao álcool é um fator importante de vulnerabilidade no desenvolvimento do alcoolismo [1,2]. A definição de fatores neurobiológicos que contribuem para a moderação do álcool auxiliará nossa compreensão do uso e abuso de álcool e é uma estratégia eficaz para o desenvolvimento de tratamentos aprimorados para indivíduos diagnosticados com transtornos por uso de álcool. O uso de modelos de roedores para imitar doenças humanas tem sido uma ferramenta poderosa no avanço da compreensão dessa doença e na melhoria dos tratamentos. Existem vários modelos de roedores para estudar aspectos do abuso de álcool e alcoolismo, mas nenhum modelo de alcoolismo. Até que ponto um camundongo administrará por via oral soluções de etanol sob condições ambientais semelhantes depende muito de seu conhecimento genético [3].
Recentemente, descobrimos que camundongos híbridos F57 C6BL / 57JxFVB / NJ (BxF) e FVB / NJxC6BL / 6J (FVBxB1) auto-administram níveis anormalmente altos de álcool durante testes de preferência de duas garrafas (fêmeas consomem 20-35 g / kg / dia e machos 7-25 g / kg / dia, dependendo da concentração e paradigma) [4]. Este novo modelo genético tem uma vantagem significativa quando comparado a cepas endogâmicas existentes, incluindo evidências de um fenótipo overdominant e beber a níveis elevados de álcool no sangue [4]. Além disso, o alto consumo de etanol exibido por camundongos BxF é visto em dois paradigmas adicionais de consumo de etanol (beber no escuro e aceitação do etanol durante o acesso programado a fluidos) [4]. Observamos comportamentos distintos de autoadministração de álcool quando comparamos duas linhagens híbridas de camundongos F1: C57BL / NZB / B6NJ (BxN) mostram preferência alcoólica reduzida após experiências com altas concentrações de álcool e períodos de abstinência e BxF mostram preferência sustentada por álcool [5]. Usando uma bateria de testes comportamentais, mostramos que os BxN são mais sensíveis que os ratos BxF aos efeitos aversivos e sedativos, mas não recompensadores, do etanol. [6].
Pesquisas básicas sobre novos modelos comportamentais e genéticos de alto consumo de álcool e mudanças induzidas pela experiência no consumo de bebidas alcoólicas ampliarão nosso conhecimento sobre abuso de álcool e alcoolismo. O fenótipo de preferência reduzida pelo álcool é interessante porque os camundongos BxN inicialmente mostram uma alta preferência por soluções de etanol. Embora o aspecto motivacional de reduzir a ingestão de álcool após a experiência com altas concentrações de etanol e abstinência seja desconhecido, os camundongos BxN podem ser comparados a moderados, pois ainda consomem soluções de etanol, mas em um nível reduzido, presumivelmente devido a uma experiência aversiva.
O modelo sustentado de preferência pelo álcool também é interessante, pois os camundongos BxF consomem estavelmente níveis extremamente altos de etanol, independentemente da experiência anterior. A preferência sustentada e reduzida pelo álcool pode estar relacionada a um efeito de privação de álcool, um fenômeno em que os animais exibem um aumento significativo no consumo de álcool após um período de abstinência forçada.e [7]. O efeito de privação de álcool é um fenômeno útil para estudar o aumento do comportamento de beber álcool. Embora o esquema experimental conhecido por induzir o efeito de privação de álcool seja bem diferente do esquema usado aqui, comparar preferência de álcool sustentada e reduzida a um efeito de privação de álcool relaciona os diferentes fenótipos comportamentais discutidos aqui com um fenômeno importante em modelos de pesquisa com álcool. A preferência reduzida pelo álcool seria o oposto de um efeito de privação de álcool e a preferência sustentada pelo álcool poderia ser descrita como a ausência de um efeito de privação de álcool. O uso de diversos modelos animais genéticos, como BxF e BxN, contribui grandemente para o avanço do campo, uma vez que os transtornos por uso de álcool são pensados para emergir de interações complexas entre genética e ambiente. A identificação da expressão gênica precoce imediata diferencial para esses híbridos oferece uma visão do circuito cerebral importante para as propriedades recompensadoras e aversivas do etanol.
Etanol e outros neurocircuitos envolvidos com drogas foram estudados em modelos específicos de roedores usando marcadores moleculares de plasticidade e / ou atividade neuronal [8-15]. O etanol autoadministrado e administrado pelo experimentador não resulta em mapas metabólicos cerebrais equivalentes, sugerindo que circuitos específicos estão subjacentes aos efeitos reforçadores do etanol [8,9].
Um componente-chave, ainda a ser amplamente explorado na pesquisa do álcool, é o exame dos comportamentos de preferência sustentada e reduzida ao álcool e a identificação dos circuitos neuronais engajados durante esses comportamentos. O objetivo deste experimento foi identificar as regiões do cérebro envolvidas pela preferência sustentada e reduzida pelo álcool. Como a administração crônica de álcool (juntamente com outras drogas de abuso) mostrou causar diferenças regionais no cérebro nos níveis de ΔFosB, testamos a hipótese de que esses fenótipos comportamentais são representados pela produção diferencial do fator de transcrição indutível, ΔFosB, em regiões do cérebro conhecidas por estar envolvido em recompensa, aversão e estresse [10].
Estímulos crônicos que causam diferenças regionais nos níveis de ΔFosB incluem drogas de abuso (álcool, cocaína, anfetamina, nicotina, morfina e antipsicóticos), estresse crônico (estresse por contenção, choque imprevisível nos pés, convulsões eletroconvulsivas) e corrida compulsiva em roda [11]. Como um potencial mediador de adaptações de longo prazo no cérebro, identificar a variante dominante de FosB (FosB ou ΔFosB) em resposta ao tratamento crônico com etanol é uma distinção importante.
Existem vários estudos que mediram FosB e ΔFosB após estímulos crônicos para os quais não foi verificado que ΔFosB era a isoforma dominante (como os descritos abaixo). No entanto, há fortes evidências de que ΔFosB, não FosB, é a isoforma dominante após estímulos crônicos [10-12]. Um estudo realizado por Ryabinin e Wang (1998) constatou que em baixo álcool preferindo camundongos DBA / 2J, quatro dias de repetidas injeções de etanol resultaram em aumentos robustos na expressão de FosB nas seguintes regiões do cérebro: núcleo amidalóide cortical anterior, septo lateral ventral, amígdala central , amígdala lateral, hipotálamo lateral, concha do núcleo accumbens, núcleo do leito da estria terminal e núcleo paraventricular do tálamo [13]. Seus resultados identificam um neurocircuito responsivo ao etanol. A expressão de FosB também foi medida em camundongos C57BL / 6J preferindo álcool alto durante a aquisição e manutenção da auto-administração de etanol sob condições de acesso limitado. Não houve alterações nos níveis de FosB durante a aquisição da auto-administração [14]. No entanto, após duas semanas de acesso limitado à auto-administração do etanol, os níveis de FosB foram aumentados no núcleo central medial da amígdala e do núcleo de Edinger-Westphal [15]. No geral, os relatórios identificam novas regiões envolvidas na auto-administração do etanol, bem como implicam um papel para a via mesocorticolímbica e extensão da amígdala [16]. No entanto, é importante notar que as alterações nos níveis de ΔFosB dependem da via de administração do etanol, dose e tempo de exposição a um tratamento ou programação [13-15].
As cepas de camundongos usadas neste estudo fornecem modelos interessantes para comparação da preferência sustentada e reduzida pelo álcool e os mecanismos subjacentes responsáveis por essas respostas distintas de álcool. Este estudo demonstra que camundongos exibindo preferência reduzida por álcool também apresentam plasticidade significativa em circuitos relacionados a recompensa e estresse (incluindo o núcleo de Edinger-Westphal, área tegmentar ventral, amígdala, nucleus accumbens e córtex cingulado).
Resultados
O efeito das concentrações de álcool e períodos de abstinência na auto-administração em camundongos BxF e BxN
Para demonstrar que as diferentes concentrações de etanol e / ou períodos de abstinência mudaram o consumo de etanol subsequente, projetamos quatro horários (grupos) para medir o consumo de etanol (Figura (Figura 1a, b).1a, b). Havia quatro grupos experimentais para cada híbrido: Concentrações Elevadas, Concentrações Elevadas com Períodos de Abstinência, Baixas Concentrações e Baixas Concentrações com Períodos de Abstinência. Dados completos para preferência de etanol (Figura (Figure2)2) e consumo (Figura (Figure3)3) dados (para todos os grupos e ambos os genótipos) são apresentados para referência. Para estabelecer e ilustrar os fenótipos comportamentais de preferência sustentada e reduzida de álcool, os dados de preferência e consumo de etanol 9% são apresentados nas Figuras Figures44 e e5.5. Esses fenótipos comportamentais são baseados na comparação da preferência e do consumo de etanol 9% da primeira, segunda, terceira e quarta apresentação nos grupos de altas concentrações e dias experimentais correspondentes para os grupos de baixas concentrações. Foi realizada uma ANOVA de dois fatores (genótipo x tempo) de preferência e consumo de etanol 9%. Para o grupo High Concentrations, a preferência do etanol (Figura (Figure4a)4a) e consumo (Figura (Figure5a)5a) foram maiores para BxF do que BxN, e BxF exibiu preferência e consumo de álcool sustentados, enquanto BxN exibiu preferência e consumo de álcool reduzidos (PREFERÊNCIA DE ETANOL - interação F (3,54) = 4.83, P <0, genótipo F (01, 1,54) = 24.10, P <0.001, tempo F (3,54) = 9.92, P <0.0001; CONSUMO DE ETANOL - interação N / S, genótipo F (1,54) = 50.73, P <0.0001, tempo F (3,54, 11.68) = 0.0001, P <XNUMX). Para o grupo de Altas Concentrações com abstinência, preferência por etanol (Figura (Figure4b)4b) e consumo (Figura (Figure5b)5b) foram maiores para BxF do que BxN, e BxF exibiu preferência e consumo de álcool sustentados, enquanto BxN exibiu preferência e consumo de álcool reduzidos (PREFERÊNCIA DE ETANOL - interação F (3,132) = 15.89, P <0.0001, genótipo F (1,132) = 250.43, P <0.0001, tempo F (3,132) = 27.48, P <0.0001; CONSUMO DE ETANOL - interação F (3,132) = 11.35, P <0.0001, genótipo F (1,132) = 510.88, P <0.0001, tempo F (3,132) = 22.42, P <0.0001). Para o grupo de baixas concentrações, preferência por etanol (Figura (Figure4c)4c) e consumo (Figura (Figure5c)5c) foram maiores para BxF do que BxN, e ambos os híbridos exibiram preferência e consumo sustentado de álcool (PREFERÊNCIA DE ETANOL - interação N / S, genótipo F (1,54) = 12.2, P <0.01, tempo N / S; CONSUMO DE ETANOL - interação N / S, genótipo F (1,54) = 74.83, P <0.0001, tempo N / S). Para o grupo de Baixas Concentrações com abstinência, preferência por etanol (Figura (Figure4d)4d) e consumo (Figura (Figure5d)5d) foram maiores para BxF do que BxN, e ambos os híbridos exibiram reduções moderadas na preferência e no consumo de álcool (PREFERÊNCIA DE ETANOL - interação N / S, genótipo F (1,132) = 166.58, P <0.0001, tempo N / S; CONSUMO DE ETANOL - interação F (3,132) = 3.61, P <0.05, genótipo F (1,132) = 480.64, P <0.0001, tempo F (3,132) = 7.87, P <0.0001). Em resumo, nos grupos de altas concentrações (sem abstinência), BxF exibiu preferência por álcool sustentada enquanto BxN exibiu preferência por álcool reduzida e nos grupos de baixas concentrações (sem abstinência), tanto BxF quanto B6xN exibiram preferência por álcool sustentada. Uma vez que os fenótipos de interesse são mais bem capturados em grupos sem abstinência, eles são o foco do restante do estudo.
ΔFosB Níveis
A quantificação e análise de ΔFosB foi usada para identificar neurocircuitos ativados cronicamente durante a preferência de álcool sustentado e reduzido. Havia três grupos experimentais para cada híbrido: altas concentrações, baixas concentrações e água (controle). Os dados de ΔFosB são apresentados como porcentagem de neurônios positivos para ΔFosB [(n = de neurônios positivos para ΔFosB) / (n = de neurônios positivos para ΔFosB + # para neurônios positivos para Nissl)] (Tabela (Table1).1). Trabalhos anteriores mostraram que a experiência do etanol pode induzir a neurodegeneração [17]. Portanto, nós investigamos os números neuronais neste estudo e não relatamos diferença significativa com base no genótipo ou grupo para as regiões cerebrais quantificadas neste estudo. Foram realizadas as seguintes três análises de dados de ΔFosB: 1) ANOVA de três fatores (genótipo x grupo x região do cérebro), 2) ANOVA de dois fatores (região cerebral x grupo) para cada genótipo e 3) matrizes de correlação para mapear a correlação redes.
Anova de três vias de medidas repetidas (genótipo x grupo x região do cérebro) revelou uma interação genótipo x região do cérebro [F (15,375) = 2.01, P <05], uma interação grupo x região do cérebro [F (15.375) = 1.99, P <0.01], e um efeito principal da região do cérebro [F (15,375) = 43.36, P <000]. ANOVA de duas vias de medidas repetidas (região do cérebro x grupo) para cada genótipo mostrou que houve um efeito principal do grupo e da região do cérebro para BxF e BxN [BxF - F (2,374) = 11.79, P <0001, efeito principal de grupo; F (15,374) = 25.64, P <0001, efeito principal da região do cérebro; BxN - F (2,360) = 43.38, P <0001, efeito principal do grupo; F (15,360) = 23.73, P <0001, efeito principal do genótipo]. A análise post-hoc revelou seis diferenças de grupo significativas para BxN (Figura (Figure6a-c).6ac). Os níveis de ΔFosB percentuais foram maiores no grupo de baixas concentrações do que no grupo de água em La, CeC / CeL, EW e VTA. O percentual de ΔFosB foi maior no grupo de altas concentrações do que no grupo de água no CeMPV. A porcentagem de ΔFosB foi maior no grupo de baixas concentrações do que no grupo de altas concentrações no EW. Os dados de ΔFosB para todas as outras regiões do cérebro quantificadas são apresentados na Tabela Table1.1. A análise correlacional r de Pearson foi usada para determinar se% de neurônios positivos para ΔFosB em uma determinada região do cérebro se correlacionava com o consumo ou preferência de etanol. O consumo de etanol e a preferência apresentaram correlação positiva significativa com% ΔFosB no EW e VTA de camundongos BxN (CONSUMO DE ETANOL - EW r = 0.85; VTA r = 0.85; PREFERÊNCIA DE ETANOL - EW r = 0.83, VTA r = 0.88; p <0.05 para todos).
A relação complexa entre a expressão de ΔFosB, genótipo, região do cérebro e consumo de etanol foi mais explorada usando análise de componentes principais e agrupamento hierárquico. A análise dos componentes principais revelou que a maior parte da variabilidade (~ 80%) nos dados foi representada pelos componentes 5. O agrupamento hierárquico não supervisionado (agrupado por indivíduos e regiões cerebrais) foi então realizado e ordenado usando o primeiro componente principal (Figura (Figure7).7). O agrupamento individual revelou padrões de agrupamento fortes, mas não perfeitos, baseados no consumo de etanol, independentemente do genótipo. Muitos dos camundongos virgens de etanol se agruparam e exibiram menos ΔFosB global do que a média e muitos dos camundongos que apresentaram preferência sustentada pelo álcool se agruparam e exibiram mais ΔFosB global do que a média. Esses dois clusters foram os mais divergentes. Os três grupos intermediários representaram uma mistura maior que, menor que e média dos valores de ΔFosB e fenótipos de consumo de etanol.
Discussão
Comportamentos distintos de autoadministração de álcool foram observados ao comparar duas cepas híbridas de camundongos F1: BxN mostra preferência reduzida por álcool após experiência com altas concentrações de álcool e períodos de abstinência, enquanto BxF mostra preferência sustentada por álcool. Modelos BxF estável, alto consumo (preferência sustentada pelo álcool) e modelos BxN com consumo moderado (menor preferência pelo álcool). A plasticidade neuronal (ou atividade, medida pelos níveis de ΔFosB) foi diferente dependendo da experiência com o etanol, apoiando ainda um papel subjacente de circuitos neuronais específicos na preferência sustentada e reduzida pelo álcool.
Para a estirpe de consumo elevado de álcool, C57BL / 6, a preferência e o consumo de etanol são altamente dependentes da concentração inicial de etanol, duração da abstinência e subtensão (C57BL / 6Cr ou C57BL / 6J) [7,18]. Descobrimos que a preferência e o consumo de etanol observados em camundongos BxF foram consistentemente maiores (e mais estáveis que em BxN) nos quatro diferentes esquemas testados. A preferência e o consumo de etanol moderadamente elevados em BxN foram mantidos apenas com um cronograma de consumo crônico (baixas concentrações sem abstinência), enquanto as reduções na preferência e consumo foram observadas com todos os outros cronogramas de consumo crônico testados. A preferência pelo álcool reduzido BxN oferece um novo modelo animal no qual a experiência (apresentação repetida de etanol após experiência com múltiplas concentrações elevadas de etanol e / ou vários curtos períodos de abstinência) reduz drasticamente sua resposta a uma concentração de etanol anteriormente altamente preferida.
O etanol auto-administrado e administrado pelo experimentador produz diferentes mapas metabólicos cerebrais, sugerindo que os circuitos específicos estão por trás dos efeitos reforçadores do etanol [8,9]. Nós testamos a hipótese de que os fenótipos comportamentais de preferência de álcool sustentado e reduzido são representados pela produção diferencial do fator de transcrição indutível, ΔFosB, em regiões do cérebro conhecidas por estarem envolvidas em recompensa, aversão e estresse. ΔFosB é um fator de transcrição com uma estabilidade única a longo prazo e não dessensibiliza a estímulos como o C-Fos, antes acumula durante tratamentos crônicos. Os aumentos em ΔFosB são devidos ao aumento da atividade neuronal e acredita-se que refletem a plasticidade neuronal de longa duração. Descobrimos que a porcentagem de neurônios positivos para ΔFosB nas regiões cerebrais depende do genótipo (BxF e BxN) e do grupo (Controle de água, Concentrações Baixas e Concentrações Elevadas).
Fou BxN, análise post-hoc revelou que o consumo voluntário de etanol resultou no aumento de ΔFosB no núcleo EW, VTA e amígdala: indicando aumento da plasticidade neuronal em regiões do cérebro conhecidas por estarem envolvidas nas respostas de etanol, recompensa e estresse. Camundongos BxN no grupo de altas concentrações (reduzida preferência de álcool) reduziram a plasticidade neuronal no EW, sugerindo que esses neurônios respondem à ingestão de álcool com uma plasticidade dependente da experiência. No grupo de baixas concentrações (exibiu preferência de álcool sustentada), plasticidade neuronal no EW é maior do que nos grupos de controle de altas concentrações e água. Embora conduzidos usando diferentes paradigmas de consumo de etanol e modelos genéticos de camundongos, nossos achados no EW de camundongos BxN concordam com estudos prévios de consumo de etanol [14,15]. O EW não pré-ganglionar foi caracterizado recentemente como contendo neurônios contendo micrococina (Ucn) perioculomotora [19]. O Ucn1 é um peptídeo do tipo liberador de corticotropina (CRF) que se liga aos receptores CRF1 e CRF2. Estudos anteriores usando abordagens genéticas, farmacológicas e de lesões mostraram que o Ucn1 está envolvido na regulação do consumo de álcool [19-22]. Taqui é uma predisposição genética conhecida para o consumo elevado de álcool em roedores que está correlacionada com níveis basais mais elevados de Ucn1 em EW e LSi [23]. Assim, a falta de significância post-hoc que observamos em EW para o álcool elevado preferindo e consumindo camundongos BxF foi inesperada. Talvez isso se deva aos níveis ligeiramente elevados de ΔFosB no grupo de água BxF em comparação com o grupo de água BxN. De fato, os níveis de ΔFosB percentuais para todos os camundongos exibindo preferência sustentada por álcool (grupo Concentrações altas de BxF, grupo Concentrações baixas de BxF e grupo Concentrações baixas de BxN) foram bastante semelhantes.
Para BxN, o consumo de etanol no grupo de baixas concentrações aumentou a plasticidade neuronal na VTA (maior que nos grupos de alta concentração e controle de água). A preferência e o consumo de etanol também foram maiores para o grupo de baixas concentrações. A falta de significância pós-hoc que observamos em VTA para álcool alto preferindo e consumindo camundongos BxF foi inesperada e pode ser devido a níveis basais ligeiramente maiores de ΔFosB no grupo de controle de água. Os níveis de ΔFosB percentuais foram levemente elevados no grupo água BxF em comparação com o grupo água BxN, enquanto os níveis de ΔFosB percentuais foram bastante semelhantes para todos os camundongos com preferência sustentada por álcool (grupo BxF High Concentrations, BxF Low Concentrations e BxN Low Concentrations) . O sistema de dopamina VTA desempenha um papel importante na mediação dos efeitos reforçadores do etanol e participa de muitas conexões recíprocas importantes para o etanol e comportamentos relacionados à recompensa [24-26]. Além disso, o VTA se projeta para a amígdala e o núcleo EW. Os ratos demonstraram autoadministrar o etanol diretamente no VTA [27]. Além disso, a exposição ao etanol aumenta a taxa de disparo dos neurônios dopaminérgicos no VTA [28,29]. A taxa de queima aumentada pode estar ligada à indução de ΔFosB na VTA que observamos após administração voluntária crônica de etanol em BxN.
A dependência do álcool induz neuroadaptações a longo prazo, resultando em estados emocionais negativos; um importante mecanismo no reforço negativo é a sinalização do fator liberador de corticotropina (CRF) dentro da amígdala [30]. Manipulações farmacológicas de neurônios no CeA têm como alvo receptores de GABA, CRF, opioides, serotonina, dinorfina e norepinefrina [25,31-34]. GAntagonistas do ABA, bem como antagonistas do CRF, diminuem o consumo de etanol [32,33,35]. Lesões do CeA diminuem o consumo voluntário de etanol por acesso contínuo [36]. Nossas descobertas apóiam ainda mais o papel do CeA no comportamento regulador do consumo de álcool. Neurônios GABAérgicos na amígdala central formam uma população heterogênea cujas conexões aparecem relacionadas ao seu conteúdo peptídico. Esses neurônios GABAérgicos integram a atividade de saída do CeA. Conforme revisto em [Pequenino e Koob (2010]), sEstudos recentes identificaram um papel para os receptores opiáceos de dinorfina e kappa na manutenção e escalonamento da ingestão de etanole [37]. Mais recentemente, Walker e cols. Demonstraram que o antagonista do receptor opióide κ, nor-binaltorfinina, dentro da amígdala estendida reduz seletivamente a auto-administração do etanol em animais dependentes [38]. A sinalização do receptor opióide kappa continua sendo um dos principais interesses da pesquisa na intersecção de estresse, recompensa e aversão. Também foi demonstrado que a auto-administração de etanol induzida por estresse é mediada pela sinalização do receptor opióide kapa [39]. O CeA central pode ser subdividido em latero-capsular (CeL / CeC) e medial posterior ventral. Neurónios GABAérgicos do CeL / CeC recebem inervação dopaminérgica do VTA; Como observado anteriormente, esses neurônios são ativados após a administração aguda de etanol e mostram que os camundongos ΔFosB aumentados apresentam preferência sustentada pelo álcool. Além disso, veja Mc [Noiva (2002]) para uma excelente revisão sobre o CeA e os efeitos do álcool [40]. No nosso estudo, ratinhos com BXN sustentada preferência álcool (grupo baixas concentrações) apresentaram maior plasticidade neuronal no CEC CEL e La e BXN / ratinhos com reduzida preferência álcool (grupo altas concentrações) apresentam aumento da plasticidade neural no CeMPV. Estes resultados sugerem que a experiência específica do etanol envolve plasticidade nos neurônios GABAérgicos na amígdala. Com esses dados, juntamente com as correspondentes mudanças na plasticidade neuronal na VTA e na EW, propomos que esse circuito sofra uma plasticidade significativa sob condições sustentadas de preferência de álcool.
pesquisa anterior tem mostrado que os ratos C57BL / 6J pode alcançar níveis de álcool no sangue por duas garrafa de beber escolha, no entanto, estes níveis de álcool no sangue não está sustentada e muitas vezes a beber não satisfazem os critérios para a motivação farmacológico estabelecido pelos Dole e Gentry (1984) [41,42]. Camundongos BxN exibindo preferência de álcool reduzida consumiram menos do que seria esperado de um camundongo C57BL / 6J típico [1]. Portanto, embora não tenhamos colhido amostras de álcool no sangue, não é provável que camundongos BxN com preferência reduzida por álcool tenham atingido níveis sustentáveis de álcool no sangue, sugerindo que altas concentrações de álcool no sangue não são necessárias para induzir plasticidade nessas regiões cerebrais. É importante notar que um efeito altamente significativo do grupo também existe na BxF, embora os resultados post-hoc (corrigidos para comparações múltiplas) para as regiões cerebrais BxF não indicaram mudanças significativas na porcentagem de neurônios positivos para qualquer região após o consumo crônico de etanol. com esses horários diferentes.
Para visualizar possíveis relações entre as variáveis, foi realizado o agrupamento hierárquico. O mapa de calor da análise resultante mostra uma tendência geral entre os níveis de ΔFosB e o consumo de etanol, independentemente do genótipo. Níveis mais altos de ΔFosB foram associados com alto consumo de bebida e menores níveis de ΔFosB foram associados com animais controle; no entanto, a força do relacionamento não foi suficiente para prever com precisão os fenótipos de consumo com base apenas nos níveis de ΔFosB.
Conclusões
Comportamentos distintos de autoadministração de álcool foram observados com duas cepas híbridas de camundongos F1: BxN mostrou menor preferência por álcool após experiência com altas concentrações de álcool enquanto BxF mostrou preferência sustentada por álcool. Modelos BxF estável, alto consumo (preferência sustentada pelo álcool) e modelos BxN com consumo moderado (menor preferência pelo álcool). As alterações na plasticidade neuronal (medidas pelos níveis de ΔFosB) foram dependentes da experiência, assim como a região cerebral e os genótipos específicos, definindo ainda mais os circuitos neuronais subjacentes aos aspectos motivacionais do consumo de etanol. Estes resultados mostram que a mudança de uma linha parental em ratos híbridos resulta em mudanças nos padrões de consumo de álcool e mudanças marcantes nos padrões de expressão de ΔFosB, sugerindo que redes cerebrais distintas estão envolvidas nesses diferentes camundongos híbridos.
De Depósito
Ética
Este estudo foi realizado em estrita conformidade com as recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do National Institutes of Health. O protocolo foi aprovado pelo Institutional Animal Care e pelo Comitê de Uso da Universidade do Texas em Austin (AUP 2010-00028). Todas as cirurgias foram realizadas sob anestesia com pentobarbital sódico, e todos os esforços foram feitos para minimizar o sofrimento.
Animais
Os estudos foram conduzidos utilizando ratinhos híbridos F1 fêmeas intercross provenientes de ratinhos C57BL / 6J e FVB / NJ ou NZB / B1NJ (BxF F1 e BxN F1, estirpe materna x estirpe paterna). Os criadores de C57BL / 6J, FVB / NJ e NZB / B1NJ foram comprados no The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) e acasalados nas semanas 7-8. Os descendentes foram desmamados em grupos isóssexuais de cada um dos genótipos (BxF F1, BxN F1). Testamos apenas camundongos fêmeas para facilitar a comparação com dados previamente coletados [1,5,6]. Os ratos foram alojados em gaiolas padrão com alimentos e água fornecidos ad libitum. A sala da colônia e a sala de testes estavam em uma luz 12 h: ciclo escuro 12 h (luzes acesas no 07: 00).
Teste de preferência de etanol de duas garrafas
O método da escolha de duas garrafas foi usado para determinar os padrões voluntários de auto-administração de etanol em camundongos fêmeas BxF e BxN [1,6]. Ratinhos fêmeas híbridos F1 (idade 63 dias) foram alojados individualmente em gaiolas padrão enquanto se habituavam durante uma semana a garrafas com tubos sipper contendo água antes da introdução de uma solução de etanol. Após a habituação, os ratos tiveram acesso a duas garrafas idênticas: uma contendo água e a outra contendo uma solução de etanol. As posições do tubo foram trocadas diariamente para controlar as preferências de posicionamento. Para contabilizar o possível derramamento e evaporação, o peso médio esgotado de tubos em gaiolas de controle sem ratos foi subtraído dos valores individuais de consumo a cada dia. Os ratos foram pesados a cada 4 dias durante o experimento. Todo o consumo de fluidos foi medido diariamente durante o experimento. A quantidade de etanol consumida e preferência de etanol foram calculados para cada rato, e estes valores foram calculados para cada concentração de etanol. O efeito das concentrações de álcool e períodos de abstinência na auto-administração em camundongos BxF e BxN foi demonstrado pela designação de um grupo experimental com acesso a altas concentrações (acesso crescente a soluções de etanol 3-35%, seguido por 3 ciclos repetidos de 9, 18, e 27% de etanol, que termina com uma apresentação final de 9% de etanol) e outro grupo com baixas concentrações (crescentes acesso a 3-9% de etanol, com o restante da experiência levada a cabo com acesso a 9% de etanol). Cada um desses grupos tinha um subgrupo que experimentou ou não três períodos de uma semana de abstinência. Os ratos de controlo experimentaram condições semelhantes ao mesmo tempo que os ratos experimentais, mas apenas lhes foi oferecida uma garrafa de água.
No total, havia cinco grupos para cada híbrido: Água (n = 14-16), Alta Concentração (n = 10), Alta Concentração com Períodos de Abstinência (n = 20), Baixas Concentrações (n = 10) e Baixas Concentrações com períodos de abstinência (n = 20). Consulte a figura Figure11 para os horários detalhados de dois grupos de escolha de garrafa.
ΔFosB Imuno-histoquímica e quantificação
A imunohistoquímica ΔFosB (IHC) foi medida em 16 regiões do cérebro de camundongos que experimentaram 72 dias de acesso contínuo a água (controle) ou água e álcool [altas concentrações e baixas concentrações]. O efeito das altas concentrações na preferência e no consumo do etanol foi muito maior do que o efeito da abstinência; portanto, os grupos que experimentaram períodos de abstinência não foram incluídos nas medidas de ΔFosB IHC. Além disso, o experimento foi realizado além do primeiro aparecimento de preferência de álcool sustentada ou reduzida para mostrar que os fenótipos comportamentais são estáveis com ciclos repetidos de mudanças na concentração de etanol para examinar os efeitos do consumo crônico de etanol. Quatro a oito horas após a remoção do álcool no 73º dia do experimento, os camundongos foram profundamente anestesiados (175 mg / kg de pentobarbital de sódio) e perfundidos intracardialmente com 20 ml de solução salina tamponada com fosfato 0.01 M (PBS), seguido por 100 ml de 4% paraformaldeído em PBS. Os cérebros foram removidos, pós-fixados em paraformaldeído a 4% a 4 ° C, incorporados em agarose a 3%, seccionados (50 um, coronal) em um vibratome, colocados em crioprotetor (sacarose 30%, etilenoglicol 30% e polivinil 0.1% pirrolidona em PBS) durante a noite a 4 ° C, e armazenado a -20 ° C até ser processado para IHC. As seções descongeladas foram lavadas com PBS, tratadas com 0.3% de H2O2 e incubadas por uma hora em 3% de soro de cabra normal para minimizar a marcação não específica. As secções de tecido foram então incubadas durante a noite a 4 ° C em soro de cabra normal a 3% e anti-FosB (SC-48, diluição 1: 5000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). As seções foram lavadas, incubadas em Ig anti-coelho de cabra biotinilado (diluição 1: 200, Vector Laboratories, Burlingame, CA) por uma hora, lavadas e incubadas em complexo avidina-biotina (diluição 1: 200, kit Elite-Vector Laboratories) . A atividade da peroxidase foi visualizada pela reação com 0.05% de diaminobenzidina (contendo 0.015% de H2O2). As secções de tecido foram contrastadas com Nissl (usando azul de metileno / azure II). Slides foram codificados para contagem cega. Os neurónios ΔFosB-IR foram contados com ampliação 50X (óleo) utilizando o método do fraccionador óptico e o software de computador StereoInvestigator. Informação do parâmetro de amostragem: o quadro de contagem (50um x 50um x 10um) foi o mesmo para todas as regiões quantificadas; no entanto, o tamanho da grade foi determinado para cada região do cérebro para assegurar que a contagem total de células bilaterais seria igual a 100-300, a fim de alcançar um coeficiente de variação menor que 0.1. Os dados foram calculados como porcentagem de núcleos positivos de ΔFosB (número de núcleos positivos de ΔFosB / número de neurônios) para cada região.
O anticorpo FosB utilizado neste estudo (SC-48, Biotecnologia Santa Cruz, Santa Cruz, CA) foi criado contra uma região interna de FosB e reconhece tanto FosB quanto ΔFosB. Embora este anticorpo reconhece tanto FosB e ΔFosB, os neurónios imunopositivas quantificadas neste estudo será referido como neurónios ΔFosB positivos, uma vez que tem sido demonstrado que as drogas de abuso, incluindo álcool, especificamente induzir ΔFosB, não FosB, em neurónios. Perrotti et al. ([2008]) Medido indução ΔFosB (em resposta à administração crónica de drogas de abuso, incluindo o álcool) utilizando dois anticorpos: um que reconhece FosB e ΔFosB (SC-48) e uma selectivo para ΔFosB (não disponível comercialmente) e descobriram que, para todas as drogas estudada, a imunorreatividade observada usando o anticorpo FosB (SC-48) é devida a ΔFosB, uma vez que eles não detectaram nenhum neurônio imunorreativo usando um anticorpo seletivo para FosB [10]. Além disso, ΔFosB é conhecido por ser induzido em uma maneira específica da região cerebral e tipo de célula, por vários tratamentos crônicos e excelentes revisões sobre este tópico estão disponíveis [11,43,44].
Abreviaturas e localização de estruturas neuroanatômicas
Il - córtex infralímbico (+1.70 mm); Cg1 - córtex cingulado 1 (+1.1 mm); Cg2 - córtex cingulado 1 (+1.10 mm); Núcleo NAcc - núcleo do núcleo accumbens (+1.10 mm); Concha NAcc - concha do nucleus accumbens (+1.10 mm); LSi - intermediário septo lateral (+1.10 mm); La - amígdala lateral (-1.22 mm); Bla - amígdala basolateral (-1.22 mm); CeC / CeL - amígdala capsular central e amígdala central lateral (−1.22 mm); CeMPV - porção posterioventral medial do núcleo central da amígdala (-1.22 mm); PAG - cinza periaquaductal (−3.64 mm); EW - núcleo de Edinger-Westphal (−3.64 mm); VTA - área tegmental ventral (−3.64 mm); RD - rafe dorsal (- 4.60 mm); PBN - núcleo parabraquial (−5.2 mm); NTS - núcleo do trato solitário (−6.96 mm). O cérebro do mouse em coordenadas estereotáxicas[45] foi usado para corresponder subjetivamente uma a três seções para quantificação de cada região do cérebro.
Procedimentos estatísticos
Os dados são relatados como a média ± SEM, exceto quando especificado de outra forma. Os dados foram distribuídos normalmente. As estatísticas foram realizadas usando a versão Statistica 6 (StatSoft, Tulsa, OK, EUA) e a versão GraphPad Prism 4.00 (GraphPad Software, San Diego, CA, EUA). Medidas repetidas ANOVAs de duas vias foram realizadas para consumo de etanol e dados de preferência para avaliar as diferenças entre os grupos. ANOVAs de duas e três vias foram realizadas para os dados de ΔFosB para avaliar as interações e os principais efeitos para o grupo (Concentrações Elevadas, Baixas Concentrações e Água), região do cérebro e genótipo. A correção de Bonferroni para comparações múltiplas e post-hoc de Bonferroni foram realizadas quando apropriado. Especificamente, levantamos a hipótese de que o circuito de estresse e recompensa teria aumentado o FosB em camundongos, mostrando uma preferência reduzida pelo álcool. Para cada cruzamento híbrido, o teste de Pearson foi usado para identificar a presença de correlações significativas entre os níveis de ΔFosB e a preferência e consumo de etanol em camundongos experientes em etanol.
O agrupamento hierárquico foi realizado para visualizar como os dados co-variam e avaliar como os dados se agrupam. Os valores medianos imputados substituíram os dados de ΔFosB por cento em falta, que não excederam 15% dos dados. Embora exista um grau maior de incerteza do que se os valores imputados tivessem sido realmente observados, a análise hierárquica de agrupamentos requer participação completa ou exclusão completa para comparações de casos. O agrupamento hierárquico foi realizado usando o método de Ward e os clusters resultantes foram ordenados pelo primeiro componente principal de uma análise de componentes principais (JMP®, Versão 8, Instituto SAS Inc., Cary, NC). Para grupos experientes em água e etanol, os dados de ΔFosB para cada região do cérebro foram transformados em escore z e a análise de componentes principais foi realizada para determinar o número de clusters. Os dados foram então agrupados por regiões do cérebro e indivíduos usando análise de agrupamento hierárquico supervisionado.
Contribuições dos autores
ARO, YAB, RAH, TAJ contribuíram para o desenho do estudo. ARO adquiriu os dados. ARO, IP, RDM analisou os dados. ARO, RDM, IP, TAJ, YAB e RAH estavam envolvidos na elaboração e revisão do manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer ao Drs. Jody Mayfield e Colleen McClung para discussões úteis e Marni Martinez, Jennifer Stokes, Michelle Foshat, José Cienfuegos, Jamie Seymour e Darshan Pandya por assistência técnica. Esta pesquisa foi apoiada pela Iniciativa de Neurociência Integrativa sobre Alcoolismo Consórcio Grant AA13520, e Instituto Nacional sobre Abuso de Álcool e Alcoolismo Subvenções AA06399-S e AA16424.
Referências
- Garcia-Andrade C, Parede TL, Ehlers CL. O mito da aguardente e a resposta ao álcool em Índios da Missão. Am J Psychiatry. 1997;154: 983 – 988. [PubMed]
- Schuckit MA, Smith TL, Kalmijn J. Descobertas entre subgrupos em relação ao nível de resposta ao álcool como um fator de risco para transtornos por uso de álcool: uma população universitária de mulheres e latinos. Alcohol Clin Exp Res. 2004;10: 1499 – 1508. [PubMed]
- Belknap JK, Crabbe JC, Jovem ER. Consumo voluntário de etanol em linhagens de camundongos 15. Psicofarmacologia. 1993;112: 503 – 510. doi: 10.1007 / BF02244901. [PubMed] [Cross Ref]
- Blednov YA, Metten P, Finn DA, Rodes JS, Bergeson SE, Harris RA, Crabbe JC. Os ratinhos híbridos C57BL / 6J x FVB / NJ bebem mais álcool do que os ratinhos C57BL / 6J. Alcohol Clin Exp Res. 2005;29:1949–1958. doi: 10.1097/01.alc.0000187605.91468.17. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Blednov YA, Ozburn AR, Walker D, Ahmed S e Belknap JK. et al. Ratos híbridos como modelos genéticos de alto consumo de álcool. Behav Genet. 2010;40:93–110. doi: 10.1007/s10519-009-9298-4. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Ozburn AR, Harris RA, Blednov YA. Diferenças comportamentais entre camundongos híbridos C57BL / 6JxFVB / NJ e C57BL / 6JxNZB / B1NJ F1: relação com o controle do consumo de etanol. Behav Genet. 2010;40:551–563. doi: 10.1007/s10519-010-9357-x. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Melendez RI, Middaugh LD, Kalivas PW. Desenvolvimento de uma privação de álcool e efeito de escalada em C57BL / 6J. Alcohol Clin Exp Res. 2006;30:2017–2025. doi: 10.1111/j.1530-0277.2006.00248.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Porrino LJ, Whitlow CT, Samson HH. Efeitos da auto-administração de etanol e etanol / sacarose nas taxas de utilização de glicose cerebral local em ratos. Cérebro Res. 1998;791(1 – 2): 18 – 26. [PubMed]
- Williams-Hemby L, Porrino LJ. Doses baixas e moderadas de etanol produzem padrões distintos de alterações metabólicas cerebrais em ratos. Alcohol Clin Exp Res. 1994;18(4):982–988. doi: 10.1111/j.1530-0277.1994.tb00070.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Perrotti LI, Tecelão RR, Robison B, Renthal W, Labirinto I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Próprio DW, Nestler EJ. Padrões distintos de indução DeltaFosB no cérebro por drogas de abuso. Sinapse. 2008;62(5):358–369. doi: 10.1002/syn.20500. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: um interruptor molecular para adaptação a longo prazo no cérebro. Res do cérebro Mol Res do cérebro. 2004;132: 146 – 154. [PubMed]
- Perrotti LI, Bolaños CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB acumulam-se em uma população de células GABAérgicas na cauda posterior da área tegmentar ventral após o tratamento com psicoestimulantes. Eur J Neurosci. 2005;21:2817–2824. doi: 10.1111/j.1460-9568.2005.04110.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE, Wang YM. A administração repetida de álcool afeta diferencialmente a imunorreatividade da proteína c-Fos e FosB em camundongos DBA / 2J. Alcohol Clin Exp Res. 1998;22:1646–1654. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03962.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE, Bachtell RK, Freeman P, Risinger FO. Expressão de ITF no cérebro de camundongos durante a aquisição da auto-administração de álcool. Cérebro Res. 2001;890:192–195. doi: 10.1016/S0006-8993(00)03251-0. [PubMed] [Cross Ref]
- Bachtell RK, Wang YM, Freeman P, Risinger FO, Ryabinin AE. O consumo de bebidas alcoólicas produz mudanças seletivas na região do cérebro na expressão de fatores de transcrição indutíveis. Cérebro Res. 1999;847(2):157–165. doi: 10.1016/S0006-8993(99)02019-3. [PubMed] [Cross Ref]
- Kalivas PW. Como podemos determinar quais alterações neuroplásticas induzidas por drogas são importantes? Nat Neurosci. 2005;8:1440–1441. doi: 10.1038/nn1105-1440. [PubMed] [Cross Ref]
- Crews FT, Nixon K. Mecanismos de neurodegeneração e regeneração no alcoolismo. Álcool. 2009;44: 115 – 127. doi: 10.1093 / alcalc / agn079. [Cross Ref]
- Khisti RT, Wolstenholme J, Shelton KL, Miles MF. Caracterização do efeito da privação de etanol em subcepas de camundongos C57BL / 6. Álcool. 2006;40: 119 – 126. doi: 10.1016 / j.alcohol.2006.12.003. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE. A distribuição de Urocortina 1 no cérebro de camundongo é dependente da linhagem. Neurociência. 2005;132: 729 – 740. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2004.12.047. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE. Lesões do núcleo de Edinger-Westphal em camundongos C57BL / 6J interrompem a hipotermia induzida pelo etanol e o consumo de etanol. Eur J Neurosci. 2004;20:1613–1623. doi: 10.1111/j.1460-9568.2004.03594.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE, Yoneyama N, Tanchuck MA, Mark GP, Finn DA. A microinjeção de Urocortin 1 no septo lateral do camundongo regula a aquisição e expressão do consumo de álcool. Neurociência. 2008;151: 780 – 790. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2007.11.014. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Turek VF, Tsivkovskaia NÃO, Hyytia P, Harding S, Lê AD, Ryabinin AE. Expressão de Urocortina 1 em cinco pares de linhagens de ratos seletivamente criadas para diferenças no consumo de álcool. Psicofarmacologia. 2005;181:511–517. doi: 10.1007/s00213-005-0011-x. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE, Weitemier AZ. O neurocircuito 1 da urocortina: sensibilidade ao etanol e potencial envolvimento no consumo de álcool. Brain Res. Rev. 2006;52: 368 – 380. doi: 10.1016 / j.brainresrev.2006.04.007. [PubMed] [Cross Ref]
- Samson HH, Tolliver GA, Haraguchi M, Hodge CW. Autoadministração de álcool: papel da dopamina mesolímbica. Ann NY Acad Sci. 1992;654:242–253. doi: 10.1111/j.1749-6632.1992.tb25971.x. [PubMed] [Cross Ref]
- McBride WJ, Li TK. Modelos animais de alcoolismo: neurobiologia do alto consumo de álcool em roedores. Crit Rev Neurobiol. 1998;12:339–369. doi: 10.1615/CritRevNeurobiol.v12.i4.40. [PubMed] [Cross Ref]
- Koob GF, Roberts AJ, Schulteis G, Parsons LH, Heyser CJ, Hyyti P, Merlo-Pich E, Weiss F. Neurocircuitos alvos na recompensa e dependência de etanol. Alcohol Clin Exp Res. 1998;22:3–9. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03611.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Rodd ZA, Melendez RI, Sino RL, Kuc KA, Zhang Y, Murphy JM, McBride WJ. Autoadministração intracraniana de etanol dentro da área tegmentar ventral de ratos Wistar machos: evidência de envolvimento de neurônios dopaminérgicos. J Neurosci. 2004;24:1050–1057. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1319-03.2004. [PubMed] [Cross Ref]
- Gessa GL, Muntoni F, Collu M., Vargiu L, Mereu G. Baixas doses de etanol ativam os neurônios dopaminérgicos na área tegmentar ventral. Cérebro Res. 1985;348:201–203. doi: 10.1016/0006-8993(85)90381-6. [PubMed] [Cross Ref]
- Brodie MS, Shefner SA, Dunwiddie TV. O etanol aumenta a taxa de disparo dos neurônios dopaminérgicos da área tegmentar ventral do rato in vitro. Cérebro Res. 1990;508:65–69. doi: 10.1016/0006-8993(90)91118-Z. [PubMed] [Cross Ref]
- Heilig M, Koob GF. Um papel fundamental para o fator liberador de corticotropina na dependência de álcool. Tendências Neurosci. 2007;30(8):399–406. doi: 10.1016/j.tins.2007.06.006. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Dyr W, Kostowski W. Evidência de que a amígdala está envolvida nos efeitos inibitórios dos antagonistas dos receptores 5-HT3 no consumo de álcool em ratos. Álcool. 1995;12:387–391. doi: 10.1016/0741-8329(95)00023-K. [PubMed] [Cross Ref]
- Gilpin NW, Richardson HN, Koob GF. Efeitos do receptor CRF1 e dos antagonistas dos receptores opióides no aumento induzido pela dependência no consumo de álcool por ratos que preferem o álcool (P). Alcohol Clin Exp Res. 2008;32:1535–1542. doi: 10.1111/j.1530-0277.2008.00745.x. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Hyytiä P, Koob GF. O antagonismo do receptor GABAA na amígdala extensa diminui a auto-administração de etanol em ratos. Eur J Pharmacol. 1995;283:151–159. doi: 10.1016/0014-2999(95)00314-B. [PubMed] [Cross Ref]
- Roberto M, Madamba SG, Moore SD, Tallent MK, Siggins GR. O etanol aumenta a transmissão GABAérgica nos sítios pré e pós-sinápticos nos neurônios centrais da amígdala do rato. Proc Natl Acad Sci. 2003;100: 2053 – 2058. doi: 10.1073 / pnas.0437926100. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Roberts AJ, Cole M, Koob GF. O muscimol intra-amígdala diminui a auto-administração do etanol operante em ratos dependentes. Alcohol Clin Exp Res. 1996;20:1289–1298. doi: 10.1111/j.1530-0277.1996.tb01125.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Möller C, Wiklund L, Sommer W, Thorsell A, Heilig M. Diminuição da ansiedade experimental e do consumo voluntário de etanol em ratos após lesões centrais, mas não basolaterais, da amígdala. Cérebro Res. 1997;760:94–101. doi: 10.1016/S0006-8993(97)00308-9. [PubMed] [Cross Ref]
- Wee S, Koob GF. O papel do sistema opioide dinorfina-kappa nos efeitos reforçadores das drogas de abuso. Psicofarmacologia (Berl) 2010;210:121–135. doi: 10.1007/s00213-010-1825-8. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Walker BM, Valdez GR, McLaughlin JP, Bakalkin G. Visando sistemas de receptor de opiáceos dynorphin / kappa para tratar abuso e dependência de álcool. Álcool. 2012;46: 359 – 370. doi: 10.1016 / j.alcohol.2011.10.006. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Sperling RE, Gomes SM, Sypek EI, Carey AN, McLaughlin JP. Mediação kappa-opioide endógena da potencialização induzida por estresse de preferência de lugar condicionado por etanol e autoadministração. Psicofarmacologia (Berl) 2010;210:199–209. doi: 10.1007/s00213-010-1844-5. [PubMed] [Cross Ref]
- McBride WJ. Núcleo central da amígdala e os efeitos do álcool e do álcool em roedores. Pharmacol Biochem Behav. 2002;71:509–515. doi: 10.1016/S0091-3057(01)00680-3. [PubMed] [Cross Ref]
- Dole VP, Gentry RT. Em direção a um análogo do alcoolismo em camundongos: fatores de escala no modelo. Proc Natl Acad Sci. 1984;81: 3543 – 3546. doi: 10.1073 / pnas.81.11.3543. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Dole VP, Gentry RT. Em direção a um análogo do alcoolismo em camundongos: Critérios para o reconhecimento de bebidas alcoolicamente motivadas. Proc Natl Acad Sci. 1985;82: 3469 – 3471. doi: 10.1073 / pnas.82.10.3469. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed] [Cross Ref]
- Nestler EJ. Neurobiologia Molecular da Adicção. Sou J Addict. 2001;10: 201 – 217. doi: 10.1080 / 105504901750532094. [PubMed] [Cross Ref]
- Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: um mediador molecular de plasticidade neural e comportamental a longo prazo. Cérebro Res. 1999;835:10–17. doi: 10.1016/S0006-8993(98)01191-3. [PubMed] [Cross Ref]
- Franklin KJ, Paxinos G. O cérebro do rato em coordenadas estereotáxicas. 2. San Diego, CA: acadêmico; 2001.
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