Papel da grelina na recompensa alimentar: impacto da grelina na autoadministração de sacarose e expressão gênica mesolímbica de dopamina e receptor de acetilcolina (2012)

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Sumário

A decisão de comer é fortemente influenciada por fatores não homeostáticos, como a palatabilidade dos alimentos. Na verdade, o valor motivacional e gratificante dos alimentos pode substituir os sinais homeostáticos, levando ao aumento do consumo e, portanto, à obesidade. A grelina, um hormônio orexigênico derivado do intestino, tem um papel importante na alimentação homeostática. Recentemente, no entanto, surgiu como um modulador potente da via de recompensa dopaminérgica mesolímbica, sugerindo um papel para a grelina na recompensa alimentar. Aqui, procuramos determinar se a grelina e seus receptores são importantes para reforçar a motivação para a recompensa natural do açúcar, examinando o papel da estimulação do receptor de grelina (GHS-R1A) e do bloqueio para o condicionamento operante da razão progressiva de sacarose, um procedimento usado para medir o impulso motivacional para obter uma recompensa. A grelina administrada periférica e centralmente aumentou significativamente a resposta do operante e, portanto, o incentivo à motivação para a sacarose. Utilizando o antagonista de GHS-R1A JMV2959, demonstramos que o bloqueio da sinalização de GHS-R1A diminuiu significativamente a resposta operante para sacarose. Investigamos ainda os efeitos da grelina nos principais nódulos de recompensa mesolímbicos, na área tegmental ventral (VTA) e no núcleo accumbens (NAcc), avaliando os efeitos do tratamento crônico com grelina central na expressão de genes que codificam os principais receptores de neurotransmissores de recompensa, a saber, dopamina e acetilcolina. O tratamento com grelina foi associado a um aumento da expressão do gene do receptor de dopamina D5 e do receptor de acetilcolina nAChRβ2 no VTA e diminuição da expressão de D1, D3, D5 e nAChRα3 no NAcc. Nossos dados indicam que a grelina desempenha um papel importante na motivação e reforço para sacarose e impacta na expressão de genes que codificam dopamina e acetilcolina no circuito de recompensa mesolímbico. Essas descobertas sugerem que os antagonistas da grelina têm potencial terapêutico para o tratamento da obesidade e para suprimir o consumo excessivo de alimentos doces.

Palavras-chave: Acetilcolina, dopamina, motivação alimentar, grelina, GHS-R1A, condicionamento operante

INTRODUÇÃO

Está bem estabelecido que a hormona circulante grelina desempenha um papel importante na regulação do balanço energético (Kojima et al. 1999; Nogueiras, Tschöp e Zigman 2008). Liberado principalmente pelo estômago (Dornonville de la Cour et al. 2001), a grelina provoca efeitos orexígenos potentes em roedores e no homem (Carriça et al. 2000, 2001) através da estimulação do seu receptor do sistema nervoso central (SNC) (Saloméet al. 2009a), o receptor do secretagogo da hormona do crescimento (GHS-R1A) (Howard et al. 1996). De fato, a grelina tem como alvo os circuitos hipotalâmicos e do tronco encefálico envolvidos na alimentação e na homeostase energética (Dickson, Leng & Robinson 1993; colherão et al. 2000; Hewson & Dickson 2000; Faulconbridge et al. 2003, 2008). O comportamento alimentar, no entanto, não é apenas motivado pela necessidade de repleção de nutrientes (ou seja, a necessidade de restaurar a homeostase); Alimentos com alto teor de gordura e / ou açúcar com sabor podem motivar a ingestão apesar de um estado de saciedade (Zheng et al. 2009). O consumo excessivo de reforços naturais saborosos, como o açúcar, é um dos principais fatores que impulsionam a atual epidemia de obesidade. Resta determinar se o sistema central de sinalização da grelina é importante para o consumo de açúcares não homeostáticos, proporcionando assim um alvo terapêutico potencialmente importante para suprimir a ingestão de alimentos doces calóricos, saborosos e recompensadores.

Inspirado por descobertas recentes de que a grelina interage com áreas mesolímbicas envolvidas na alimentação não homeostática / recompensa (Jerlhag et al. 2007), procuramos avaliar o papel da grelina e do seu receptor na motivação alimentar e comportamento direcionado para a recompensa de sacarose. Estas áreas mesolímbicas têm sido o foco da pesquisa de dependência de drogas, pois são um alvo importante para a maioria das drogas de abuso (Engel 1977; Koob 1992). A via mesolímbica alvo da grelina inclui a projeção da dopamina da área tegmental ventral (VTA) para o nucleus accumbens (NAcc) (Jerlhag et al. 2006, 2007), um caminho que confere recompensa tanto de drogas químicas viciantes quanto de recompensas naturais, incluindo alimentos (Koob 1992). Curiosamente, o GHS-R1A é expresso em neurônios dopaminérgicos (Abizaid et al. 2006), implicando em possíveis efeitos diretos da grelina no sistema de dopamina VTA. Esses dados imuno-histoquímicos são complementados pelas evidências comportamentais e eletrofisiológicas acumuladas do efeito da grelina no VTA. Por exemplo, a administração intra-VTA de grelina aumenta a atividade dos neurônios de dopamina VTA (Abizaid et al. 2006) e aumenta a libertação de dopamina no NAcc (Jerlhag et al. 2007) A grelina também aumenta a atividade da ligação colinérgica-dopaminérgica, uma importante via de recompensa. Na verdade, pelo menos parte dos efeitos da grelina na dopamina parecem ser mediados pelo sistema colinérgico (Jerlhag et al. 2007).

Embora se estabeleça que a grelina tem um efeito orexígeno potente quando o alimento está prontamente disponível, ainda não se sabe se os efeitos orexígenos da grelina podem ser estendidos para incluir a mudança de motivação e reforçando aspectos de reforços naturais como alimento doce palatável (isto é, aumentando o desejo). o esforço / trabalho que alguém está disposto a colocar em obter um tratamento doce). A eficácia da motivação e recompensa de drogas de dependência pode ser avaliada no modelo de auto-administração, condicionamento operante. O condicionamento operante é um procedimento principal para a análise do comportamento motivado que avalia o comportamento adquirido e voluntário direcionado para obter uma recompensa. Ao medir a quantidade de trabalho que um sujeito está disposto a gastar para obter a recompensa, ele oferece uma medida objetiva do valor da recompensa (Hodos 1961). As regiões mesolímbicas são cruciais para aspectos motivacionais do comportamento, incluindo alimentação, e é claro que a grelina afeta a atividade neuronal em regiões mesolimbicas relevantes. O que ainda não foi mostrado é o efeito direto da grelina na motivação para alimentos ricos em açúcar. O principal objetivo do nosso estudo é investigar se o sistema central de sinalização da grelina desempenha um papel nas propriedades hedônicas / motivacionais ou reforçadoras positivas da recompensa alimentar com alto teor de açúcar e se a supressão desse sistema, utilizando um novo antagonista seletivo de GHS-R1A JMV2959 (Saloméet al. 2009a), pode suprimir a motivação para obter doces. Actualmente, os antagonistas de GHS-R1A estão a ser avaliados terapeuticamente em doentes diabéticos do tipo 2, uma vez que a supressão da sinalização da grelina tem efeitos benéficos na homeostase da glucose (Espreguiçadeiras et al. 2006), efeitos que também se beneficiariam da redução da ingestão de alimentos doces. Várias linhas de evidência sugerem que a neurotransmissão dopaminérgica e colinérgica desempenha um papel importante no comportamento de recompensa motivado. Portanto, para caracterizar ainda mais os efeitos da grelina no circuito de recompensa central, avaliamos o impacto do tratamento com grelina nas alterações da expressão gênica do receptor de dopamina e acetilcolina nos principais nós de recompensa, VTA e NAcc, após tratamento com grelina.

MÉTODOS

Animais

Ratos Sprague-Dawley machos adultos (200-250g, Charles River, Alemanha) foram alojados num ciclo de luz / escuridão 12-hora com ração normal e água disponível ad libitum, exceto quando indicado de outra forma. Todos os procedimentos com animais foram realizados com permissão ética e de acordo com as diretrizes do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Gotemburgo.

Cirurgia

Para experimentos comportamentais direcionados ao SNC, uma terceira cânula guia ventricular (calibre 26; Plastics One, Roanoke, VA, EUA; coordenadas: na linha média, 2 mm posterior ao bregma e 5.5 mm ventral à dura-máter, com injetor direcionado a 7.5 mm ventral à dura) foi implantado sob anestesia com isoflurano. As cânulas foram fixadas ao crânio com acrílico dental e parafusos de joalheiro e fechadas com um obturador, conforme descrito anteriormente (Skibicka, Alhadeff & Grill 2009). A colocação da cânula no terceiro ventrículo foi verificada uma semana após a cirurgia, através da medição da resposta glicémica mediada pelo simpatoadrenal à injecção central de 5-thio-D-glucose [210 µg em 2 µl de veículo (solução salina)] (Ritter, Slusser & Stone 1981). Neste protocolo de verificação de colocação, uma elevação pós-injeção de pelo menos 100% do nível basal de glicose plasmática foi necessária para inclusão do paciente. Para o experimento de expressão gênica, os ratos foram anestesiados (60-75 mg / kg Ketalar e 0.5 mg / kg Domitor ip; Pfizer, Suécia; Orion Co, Finlândia) e uma cânula intracerebroventricular (ICV) crônica (Alzet Brain Infusion Kit II, DURECT Corp, Cupertino, CA, EUA) foi inserido no ventrículo lateral usando as seguintes coordenadas: 0.6 mm posterior de bregma, 1.4 mm lateral da linha média, 2.3 ventral do crânio. A cânula foi ligada através de um cateter de polietileno a uma mini-bomba osmótica (modelo de bomba Mini-Osmótica Alzet 2002, Durect, Cupertino, caudal 0.5 / hora durante 14 dias) implantada subcutaneamente no dorso dos animais.

Modelo de condicionamento operante

Aparelho

Experimentos de condicionamento operante ocorreram em oito câmaras de condicionamento operantes projetadas para ratos (30.5 × 24.1 × 21.0 cm; Medical-Associates, Georgia, VT, EUA), que foram colocadas em um gabinete com atenuação de som e pouco iluminado. Cada câmara tinha um piso de grade de metal, duas alavancas retráteis com lâmpadas brancas acima delas e um dispensador de pellets de alimentos que pode fornecer xNUMX mg de sacarose (GlaxoSmithKline, Test Diet, Richmond, IN, EUA) para a bandeja de alimentos. A coleta e o processamento de dados foram controlados pelo software MED-PC (Medical-Associates, Georgia, VT, EUA).

Formação

O procedimento utilizado para o condicionamento operante foi adaptado de (la Fleur et al. 2007) E (Tracy et al. 2008). Todos os ratos foram sujeitos a um paradigma de restrição alimentar moderada, durante o qual o seu peso corporal inicial foi gradualmente reduzido para 90% durante um período de uma semana. Para os ratos canulados com ICV, o treinamento começou uma semana após a cirurgia. Antes da colocação nas caixas operantes, os ratos foram expostos aos grânulos de sacarose no ambiente da gaiola em casa em pelo menos duas ocasiões. Em seguida, os ratos aprenderam a alavancar a prensa para peletes de sacarose sob uma programação FR1 de taxa fixa com duas sessões por dia. No FR1, uma única pressão na alavanca ativa resultou na entrega de um pellet de sacarose. Todas as sessões de FR duraram 30 minutos ou até os ratos ganharem pellets 100, o que ocorrer primeiro. A maioria dos ratos atingiu o pellets 100 por sessão após as sessões 10 15. Prensas na alavanca inativa foram registradas, mas não tiveram conseqüências programadas. As sessões de agendamento FR1 foram seguidas por FR3 e FR5 (isto é, três e cinco prensas por pellet, respectivamente). Mais uma vez, um mínimo de respostas 100 por sessão na alavanca ativa era necessário para o avanço para a próxima programação; a maioria dos ratos necessitou apenas de um a dois agendamentos FR3 e FR5 para atingir este nível. O cronograma do FR5 foi seguido pelo cronograma de taxa progressiva (PR) durante o qual o custo de uma recompensa é progressivamente aumentado para cada recompensa seguinte, a fim de determinar a quantidade de trabalho que o rato está disposto a colocar na obtenção da recompensa. O requisito de resposta aumentou de acordo com a seguinte equação: taxa de resposta = [5e (0.2 × número de infusão)] - 5 através das seguintes séries: 1, 2, 4, 9, 12, 15, 20, 25, 32 , 40, 50, 62, 77, 95, 118, 145, 178, 219. A sessão de RP terminou quando o rato não conseguiu ganhar uma recompensa no prazo de 268 minutos. O ponto de quebra foi definido como a taxa final concluída antes do término da sessão. A resposta foi considerada estável quando o número de pílulas de alimentos por sessão não diferiu mais do que 328% por três sessões consecutivas. Na maioria dos casos, a resposta estabilizou em cinco a sete sessões. O teste de RP foi realizado uma sessão / dia. As sessões duraram, em média, 60 minutos, embora todos os ratos tenham permanecido nas caixas dos operantes até 15 minutos para permitir que todas as sessões terminassem. Os ratos foram subsequentemente transferidos para as gaiolas de origem para uma medição de ingestão de ração de alimentação livre de uma hora. No final do treino e antes do teste, os ratos foram devolvidos a ad libitum horário de alimentação.

Design experimental

Todos os ratos receberam intraperitoneal (IP) ou em um grupo separado de ratos, terceiro ventrículo (terceiro ICV) injeções no início do ciclo de luz (para testes da grelina) e no final do ciclo de luz para experiências antagonista da grelina 20 minutos antes do início de teste operante. Todas as condições foram separadas por um mínimo de 48 horas e executadas de maneira contrabalançada (cada rato recebeu todas as condições em dias de teste separados).

Experimento 1: impacto da administração periférica ou central de ghrelina sobre o operante de PR respondendo por sacarose em ratos

Para todas as ratazanas, as respostas de pressão da alavanca foram examinadas após duas condições: Tratamento IP com solução salina ou grelina de rato acilada (Tocris, Bristol, Reino Unido; 0.33 mg / kg de peso corporal a 1 ml / kg). A dose selecionada de IP da grelina foi mostrada anteriormente para induzir uma resposta de alimentação em ratos (Carriça et al. 2000) e também para induzir liberação de dopamina e atividade locomotora em ratos (Jerlhag 2008). Posteriormente ao teste operante, os ratos tiveram acesso livre ao alimento e a ingestão de ração foi medida após um período de uma hora. A seguir, num grupo separado de ratos, examinámos as respostas após administração dirigida do fármaco do SNC após três condições como se segue: condição de controlo com solução salina do terceiro ventrículo, 0.5 ou 1.0 de grelina de rato acilada (Tocris) num volume de 1. As doses selecionadas de grelina mostraram anteriormente induzir respostas de alimentação (Nakazato et al. 2001). Tanto para o ICV quanto para os estudos da grelina IP, os experimentos de pressão de alavanca foram realizados no estado saciado (isto é, quando a ingestão de alimentos seria impulsionada pelas propriedades recompensadoras do alimento, e não pelas unidades homeostáticas). Além disso, em ambos os estudos, após o teste operante, os ratos tiveram acesso livre a ração e a ingestão de ração foi medida após um período de uma hora.

Experimento 2: impacto do tratamento periférico ou central com o antagonista de um receptor de grelina (GHS-R1A) (JMV2959) na motivação de incentivo para uma recompensa de sacarose em ratos

As respostas dos operandos de PR foram examinadas após três condições como se segue: condição de controlo com solução salina IP, 1 mg / kg ou 3 mg / kg de JMV2959 (AEZS-123, AeternaZentaris GmBH, Frankfurt, Alemanha). As doses de JMV2959 foram selecionadas com base Jerlhag et al. (2009) e Egecioglu et al. (2010) e dados preliminares, anteriormente mostrados para diminuir o comportamento de preferência de local condicionado, mas não têm um efeito independente sobre a atividade locomotora. Posteriormente ao teste operante, os ratos foram autorizados a ter acesso livre a comida. Para avaliar os efeitos da ação antagonista central aguda direta, em um grupo separado de ratos, o comportamento operante foi examinado após as três condições a seguir: condição de controle com injeção de solução salina do terceiro ventrículo, 5 µg ou 10 µg de JMV2959 em um volume 1 µl. As doses selecionadas de ICV da dose de JMV2959 foram baseadas Saloméet al. (2009a) em que a ação orexígena do ICV administrado com 1 µg grelina foi bloqueada. Subsequente ao teste operante, os ratos foram autorizados a ter acesso livre ao consumo de ração e ração, após um período de uma hora e também a 24 horas após a injecção inicial. Os estudos com o antagonista do GHS-R1A, em contraste com os realizados com grelina (ver anteriormente), foram realizados nos ratos após uma restrição alimentar de 16-hora antes das injecções, para assegurar níveis elevados de grelina endógena em circulação (Cummings et al. 2001).

Experimento 3: alterações induzidas pela grelina na expressão de genes relacionados à dopamina e à acetilcolina na VTA e na NAcc

Aqui, determinamos os efeitos da infusão de grelina ICV crônica por duas semanas na expressão de genes selecionados envolvidos na transmissão dopaminérgica e colinérgica em dois nódulos da via de recompensa mesolímbica chave, o VTA e o NAcc. Os genes relacionados à dopamina selecionados foram genes que codificam os receptores de dopamina (D1A, D2, D3, D5), catecol-O-metiltransferase, tirosina hidroxilase (apenas em VTA) e monoamina oxidase A. Os genes relacionados à acetilcolina foram: subunidades do receptor nicotínico (α3 α6, β2, β3). Os genes que escolhemos para avaliar foram previamente implicados nos efeitos da grelina e / ou no comportamento de recompensa / motivação (Kelley et al. 2002; Figlewicz et al. 2006; Jerlhag et al. 2006, 2007; Sibilia et al. 2006; Dalley et al. 2007; Kuzmin et al. 2009; Lee et al. 2009; Nimitvilai & Brodie 2010; Perello et al. 2010). Um protocolo de infusão de grelina / soro fisiológico foi usado em preferência à injeção aguda, a fim de aumentar as chances de ver um efeito na expressão gênica; Além disso, se a grelina é um importante regulador do sistema de recompensa a longo prazo, promovendo excessos excessivos e obesidade, seus efeitos crônicos para alterar os principais mecanismos de recompensa provavelmente terão considerável importância.

Administração de medicamentos e dissecção de tecidos

O cateter e a bomba osmótica foram cheios com solução de grelina humana acetilada (presente de Rose Pharma, Copenhaga, Dinamarca) (8.3 / rat / dia) ou solução de veículo salino (0.9% NaCl); esta dose e duração do tratamento mostraram anteriormente afetar a expressão génica no hipotálamo (Saloméet al. 2009b). Catorze dias após o implante das minipumps, os ratos foram mortos por decapitação. Os cérebros foram rapidamente removidos e o VTA e o NAcc foram dissecados usando uma matriz cerebral (as bordas de cada região foram determinadas com base em Paxinos & Watson 1986), congelado em nitrogênio líquido e armazenado em –80 ° C para posterior determinação da expressão de RNAm.

Isolamento de RNA e expressão de mRNA

Amostras cerebrais individuais foram homogeneizadas em Qiazol (Qiagen, Hilden, Alemanha) usando um TissueLyzer (Qiagen). O RNA total foi extraído usando o kit RNeasy Lipid Tissue Mini (Qiagen) ou o kit RNeasy Micro (Qiagen), ambos com tratamento adicional com DNAse (Qiagen). A qualidade e a quantidade do RNA foram avaliadas por medidas espectrofotométricas (Nanodrop 1000, NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, EUA). Para a síntese de cDNA, o RNA total foi transcrito reversamente usando hexâmeros aleatórios (Applied Biosystems, Sundbyberg, Suécia) e transcriptase reversa Superscript III (Invitrogen Life Technologies, Paisley, Reino Unido) de acordo com a descrição do fabricante. O inibidor de ribonuclease RNaseout recombinante (Invitrogen) foi adicionado para prevenir a degradação mediada por RNase. Todas as reações de cDNA foram realizadas em triplicado. PCR de transcrição reversa em tempo real foi realizada usando ensaios TaqMan Custom Array. Eles foram projetados com conjuntos de sondas e primer TaqMan para genes-alvo escolhidos em um catálogo on-line (Applied Biosystems). Cada porta nas plataformas TaqMan Array foi carregada com cDNA correspondente a 100 ng de RNA total combinado com água sem nuclease e 50 µl de TaqMan Gene Expression Master Mix (Applied Biosystems) para um volume final de 100 µl. Os TaqMan Arrays foram analisados ​​usando o sistema 7900HT com um TaqMan Array Upgrade (Applied Biosystems). As condições do ciclo térmico foram: 50 ° C por dois minutos, 94.5 ° C por 10 minutos, seguidos por 40 ciclos de 97 ° C por 30 segundos e 59.7 ° C por um minuto.

Os valores de expressão gênica foram calculados com base no ΔΔCt método (Livak & Schmittgen 2001), onde o grupo tratado com solução salina foi designado o calibrador. Resumidamente, ΔCt representa o ciclo limite (Ct) do gene alvo menos o gene de referência e ΔΔCt representa o ΔCt do grupo tratado com grelina menos o do calibrador. Quantidades relativas foram determinadas usando a equação da quantidade relativa = 2ΔΔCt. Para a amostra do calibrador, a equação é quantidade relativa = 2-0que é 1; portanto, todas as outras amostras são expressas em relação a isso. A gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase foi usada como gene de referência.

Estatísticas

Todos os parâmetros comportamentais foram analisados ​​por análise de variância seguida de post hoc Teste de Tukey ou t-testes conforme apropriado. As análises estatísticas foram realizadas utilizando o software Statistica (Tulsa, OK, EUA). A fim de analisar o efeito do tratamento crônico com grelina central na expressão gênica, t-teste foi utilizado, com P-valores calculados usando o ΔCt-valores. As diferenças foram consideradas significativas P <0.05. Os dados são expressos como média ± SEM.

RESULTADOS

Experimento 1: impacto da administração periférica ou central de ghrelina sobre o operante de PR respondendo por sacarose em ratos

Aqui, empregamos um paradigma utilizado na pesquisa de dependência para avaliar o papel da grelina na motivação natural dos alimentos doces e nas propriedades reforçadoras do açúcar. Especificamente, para determinar o papel da administração periférica de grelina na eficácia da recompensa de sacarose, examinamos a autoadministração de sacarose em um programa de resposta progressiva nos ratos 20 minutos após a injeção IP do veículo ou da grelina. Todas as medidas de comportamento operante foram significativamente aumentadas nos ratos após a injeção aguda de grelina periférica: pressionando a alavanca ativa (P <0.05 para todos os pontos de tempo), número de pellets de açúcar ganhos (P <0.005 para todos os pontos de tempo) e ponto de quebra de 120 minutos (P <0.005, 32.53 ± 3.4 e 41 ± 4.3 para veículo e grelina, respectivamente; Fig. 1a, b) A literatura apoia principalmente um local central de ação para o efeito orexigênico da grelina. No entanto, GHS-R1A também é expresso fora do SNC em locais relevantes para o controle da ingestão de alimentos, por exemplo, no nervo vago; portanto, não se pode descartar que parte dos efeitos observados da grelina IP sejam mediados por esses receptores periféricos. A injeção central de baixo volume e dose de grelina, entretanto, estimula apenas o SNC GHS-R1A. Portanto, a fim de determinar um efeito direto da grelina no SNC sobre a eficácia da recompensa de sacarose, realizamos um estudo paralelo em que o veículo ou a grelina foram administrados por injeção no terceiro ventrículo, também 20 minutos antes do paradigma operante. Consistente com uma hipótese de sítio central de efeito, a injeção aguda de grelina ICV em ratos (ambas as doses de 0.5 µg e 1.0 µg) aumentou significativamente todas as medidas acima mencionadas do comportamento operante (Fig. 2a, b). O curso temporal das respostas da alavanca ativa no estudo da grelina do VCI revelou que, embora o efeito tenha emergido lentamente durante os pontos de tempo dos minutos 10 e 30, atingiu significância em 60 minutos [alavanca ativa: 10 minutos F(2, 24) = 0.94, P = 0.41, 30 minutos F(2, 24) = 3.13, P = 0.06, 60 minutos F(2, 24) = 5.86, P <0.01, 90 minutos F(2, 24) = 6.42, P <0.01, 120 minutos F(2, 24) = 6.03, P <0.01; recompensas ganhas: 10 minutos F(2, 24) = 0.26, P = 0.78, 30 minutos F(2, 24) = 2.76, P = 0.08, 60 minutos F(2, 24) = 8.31, P <0.005, 90 minutos F(2, 24) = 10.16, P <0.001, 120 minutos F(2, 24) = 11.93, P <0.001; e ponto de ruptura: F(2, 24) = 7.22, P <0.005 (17.31 ± 1.53, 33.15 ± 5.52, 36 ± 6.95 para veículo, 0.5 µg e 1.0 µg grelina, respectivamente)], um curso de tempo consistente com outros relatos de latência de alimentação induzida por grelina quando entregue por esta via (Faulconbridge et al. 2003). Em ambas as experiências, a actividade na alavanca inactiva foi pequena e não diferiu significativamente entre os diferentes grupos de tratamento (IP 4.1 ± 1.1, 4.1 ± 1.1 para veículo e grelina, respectivamente; ICV3.9 ± 1.1, 2.1 ± 0.7, 3.5 ± 1.6 para veículo, 0.5 µg e 1.0 µg de grelina, respectivamente), sugerindo que o tratamento não produz alterações inespecíficas na atividade. Imediatamente após o teste do operante, os ratos voltaram para suas gaiolas e permitiram o livre acesso à ração; os ratos injectados com grelina, quer sejam administrados perifericamente (P <0.05) ou centralmente [F(2, 24) = 12.64, P <0.001], quase dobrou a ingestão de ração durante a primeira hora em comparação com os grupos tratados com veículo (Figs 1c e 2c). Em consonância com dados anteriores (Faulconbridge et al. 2003) indicando que a maior parte do efeito hiperfágico da injeção aguda de grelina central ocorre dentro de três horas após a injeção, nenhum efeito na ingestão de ração foi observado em nosso estudo em três a 24 horas após a administração do ICV de qualquer dose de grelina [17.4 ± 1.12, Veículo 18.42 ± 1.34, 19.12 ± 1.43, 0.5 µg e 1.0 µg de grelina, respectivamente, F(2, 24) = 2.27, P = 0.13].

Figura 1 

A injeção de grelina periférica aumenta a motivação para obter alimentos saborosos em um modelo de condicionamento operante de razão PR. O número de respostas na alavanca ativa (a) e o número de recompensas de 45 mg de sacarose obtidas (b) são significativamente aumentados ...
Figura 2 

A entrega de grelina no SNC (terceiro ICV) aumenta o valor de recompensa da sacarose em um modelo de condicionamento operante da proporção PR. O número de respostas na alavanca ativa (a) e o número de recompensas 45 mg de sacarose obtidas (b) são significativamente aumentados em ...

Experimento 2: impacto do tratamento periférico ou central com o antagonista do receptor da grelina (GHS-R1A) (JMV2959) na motivação de incentivo à recompensa de sacarose em ratos

Em seguida, exploramos os efeitos do bloqueio farmacológico do GHS-R1A na eficácia da recompensa de sacarose. Assim, a administração autónoma de sacarose num esquema de resposta progressiva foi examinada nos ratos sujeitos a restrição alimentar durante a noite para assegurar níveis elevados de 20 em circulação de grelina endógena minutos após a injecção IP do veículo ou 1 mg / kg ou 3 mg / kg de JMV2959 -R1A antagonista. Todas as medidas de comportamento operante foram significativamente diminuídas nos ratos após injeção periférica de JMV2959 [alavanca ativa: cinco minutos F(2, 24) = 11.53 P <0.0005, 120 minutos F(2, 24) = 11.27, P <0.001; recompensas ganhas: cinco minutos F(2, 24) = 23.39 P <0.0005, 120 minutos F(2, 24) = 9.26, P <0.001 e ponto de quebra em 120: F(2, 24) = 5.98, P <0.01 (45.31 ± 6.45, 42.08 ± 5.80, 30.0 ± 5.89 para veículo, 1 mg / kg e 3 mg / kg JMV2959, respectivamente)]. Post hoc A análise revelou que o principal efeito foi determinado pela dose de 3 mg / kg (Fig. 3a, b). Para determinar o papel do receptor central da grelina na eficácia da recompensa de sacarose, foi realizado um estudo semelhante em que o veículo ou JMV2959 (5 µg ou 10 µg) foi administrado ao terceiro ventrículo 20 minutos antes das medições do operante. Todas as medidas de comportamento operante acima mencionadas foram significativamente diminuídas nos ratos após a infusão aguda do terceiro ventrículo de ambas as doses de JMV2959 (Fig. 4a, b). O efeito observado foi imediato como post hoc A análise revelou diferenças significativas entre os grupos de tratamento somente após 10 minutos de atividade na câmara operante que foram mantidos durante todo o período de teste [alavanca ativa: 10 minutos F(2, 24) = 10.16, P <0.0005, 30 minutos F(2, 24) = 11.48, P <0.0005, 60 minutos F(2, 24) = 9.11, P <0.001, 90 minutos F(2, 24) = 8.30, P <0.001, 120 minutos F(2, 24) = 4.95, P <0.05; recompensas ganhas: 10 minutos F(2, 24) = 21.23, P <0.0001, 30 minutos F(2, 24) = 25.08, P <0.0001, 60 minutos F(2, 24) = 19.24, P <0.0001, 90 minutos F(2, 24) = 20.04, P <0.0001, 120 minutos F(2, 24) = 5.44, P <0.01; e ponto de ruptura: F(2, 24) = 3.78, P <0.05 (51.4 ± 8.58, 38.13 ± 5.07, 33.67 ± 5.21 para o veículo, 5 µg e 10 µg JMV2959, respectivamente)].

Figura 3 

Entrega periférica de um antagonista do receptor da grelina, JMV2959. diminui a motivação para obter alimentos saborosos em um modelo de condicionamento operante de razão PR. O número de respostas na alavanca ativa (a) e o número de recompensas de 45 mg de sacarose obtidas ...
Figura 4 

O bloqueio central de GHS-R1A com JMV2959 diminui a motivação para obter recompensa alimentar em um modelo de condicionamento operante de razão PR. O número de respostas na alavanca ativa (a) e o número de recompensas de 45 mg de sacarose obtidas (b) são significativamente menores ...

Como esperado (Hodos 1961; Jewett et al. 1995), em todos os grupos de tratamento, incluindo ambas as vias de administração IP e ICV, o efeito da privação de alimentos na resposta operante para a sacarose foi evidente (Figs 3a e 4a) e contrasta com o observado no estado saciado (Figs 1a e 2a). A actividade na alavanca inactiva era pequena (IP 9.6 ± 3.0, 6.8 ± 2.2, 5.6 ± 1.9 para veículo e 1 mg / kg ou 3 mg / kg JMV2959; ICV6.4 ± 1.3, 4.6 ± 1.3, 4.4 ± 1.7 para veículo, 5 µg e 10 µg de JMV2959, respectivamente) e se administrado perifericamente ou centralmente, o JMV2959 não teve qualquer efeito significativo nessa atividade (esta atividade não diferiu significativamente entre os diferentes grupos de tratamento). Para o estudo do ICV, imediatamente após o teste do operante, os ratos foram devolvidos às suas gaiolas e tiveram acesso livre a comida; Curiosamente, nenhum efeito na ingestão de comida foi anotado em uma hora (Fig. 4c) ou ponto de tempo 24-hora (dados não mostrados). Isto pode indicar que, embora a sinalização da grelina seja necessária para a motivação alimentar induzida pela privação, não é essencial que a alimentação livre induzida pela privação de alimento seja provavelmente devido a outros mecanismos redundantes ativados durante um período de privação. Todas as medições de alimentação livre ocorreram 16 minutos após a injeção da droga e, portanto, não podemos excluir que a falta de efeito é parcialmente devido a lavagem fora da droga.

Experimento 3: alterações induzidas pela grelina na expressão de genes relacionados à dopamina e à acetilcolina na VTA e na NAcc

No presente estudo, também exploramos se os genes relacionados à dopamina e à acetilcolina são alterados pela grelina nos principais nós mesolímbicos, o VTA e o NAcc, examinando os efeitos do tratamento crônico com grelina central na expressão de receptores selecionados de dopamina e enzimas envolvidas na produção e metabolismo da dopamina, em um paradigma já estabelecido para produzir alterações associadas à ghrelina na expressão gênica no hipotálamo (Saloméet al. 2009b). No receptor de dopamina VTA, o D5 e o receptor de acetilcolina nicotínico (nAChRβ2) apresentaram uma expressão aumentada de mRNA nos ratos tratados com grelina, em comparação com o grupo tratado com solução salina (Fig. 5a). No NAcc, houve uma diminuição na expressão de mRNA dos genes que codificam os receptores de dopamina D1A, D3 e D5 e também o receptor nicotínico de acetilcolina nAChRα3 nos ratos tratados com grelina em comparação com o grupo tratado com solução salina (Fig. 5b).

Figura 5 

Expressão gênica associada à dopamina e acetilcolina em ATV (a) e NAcc (b) após grelina crônica pelo VCI ou tratamento com veículo. Os dados representam a média da mudança de vezes em relação ao tratamento com solução salina. D1, receptor de dopamina D1; Receptor D2 dopamina D2; D3, dopamina ...

DISCUSSÃO

Aqui, nós revelamos um papel para o sistema central de sinalização da grelina na modulação da motivação de incentivo e reforçando as propriedades da recompensa de sacarose e indicamos um impacto do tratamento crônico central da grelina na expressão gênica de receptores dopaminérgicos e colinérgicos nos principais nós de recompensa mesolímbicos. Os resultados demonstram que tanto a distribuição central como a periférica da grelina aumentam significativamente a quantidade de trabalho que um animal está disposto a fazer para obter recompensa de sacarose. Além disso, o bloqueio sistêmico ou central do receptor da grelina suprimiu o operante que respondia pela sacarose. Assim, podemos inferir que a sinalização da grelina endógena é importante para a motivação de incentivo para uma recompensa de sacarose. Nossos achados estão de acordo com a hipótese de que um importante papel do sistema central de sinalização da grelina é aumentar o valor de incentivo das recompensas, incluindo alimentos. Dado que a restrição alimentar aumenta o valor de recompensa da sacarose (Hodos 1961; Jewett et al. 1995) e que os níveis de grelina são elevados durante a restrição alimentar a curto prazo (Gualillo et al. 2002), é possível que, durante um estado de restrição / privação alimentar, a grelina seja um dos fatores contribuintes que aumenta o valor recompensador da motivação comida / alimento. De fato, a exposição periférica à grelina aumentou o comportamento dos operantes para níveis semelhantes aos observados em ratos privados de alimento e, inversamente, o bloqueio da sinalização da grelina diminuiu o comportamento dos operantes para níveis observados nos ratos não-privados.

Agora, parece claro que o aumento da ingestão de alimentos provavelmente reflete uma desregulação dos mecanismos centrais de recompensa alimentar, envolvendo aspectos hedônicos e motivacionais. Como alimentação livre e alimentação motivada por recompensa parecem ser dois fenômenos separáveis ​​com substratos neuroanatômicos de controle diferencial (Salamone et al. 1991), é importante examinar ambos ao avaliar o papel dos agentes envolvidos no comportamento alimentar. Os potentes efeitos orexigênicos da grelina foram amplamente estudados em modelos de acesso à alimentação livre nos quais seria difícil distinguir entre seu papel na reposição de nutrientes e a alimentação motivada por recompensa. No presente estudo, descobrimos que os ligantes GHS-R1A interferem na motivação para recompensa de sacarose, usando um modelo experimental que tem sido usado em outros contextos para mostrar desejo e motivação para drogas aditivas de abuso. Um aumento no comportamento motivado é comum tanto para o vício em drogas químicas quanto para a restrição calórica e provavelmente envolve mecanismos neurobiológicos sobrepostos. No presente estudo, também detectamos um aumento induzido pela grelina na alimentação livre de ração normal nos mesmos animais que despenderam significativamente mais trabalho para alimentação na câmara operante. Portanto, nossos dados, em conjunto com relatórios anteriores dos efeitos da grelina em modelos de alimentação livre (Carriça et al. 2000), indicam que a grelina tem a capacidade de modular tanto a alimentação livre como a motivação alimentar.

Dado que o receptor da grelina GHS-R1A está presente nas principais áreas hipotalâmicas, rombencéfalo e mesolímbico envolvidas no equilíbrio e recompensa de energia (Zigman et al. 2006) e que a injeção ventricular central de ligantes GHS-R1A provavelmente obtém amplo acesso a essas áreas do SNC, pode haver vários substratos neuroanatômicos relevantes para o efeito de motivação da recompensa de sacarose da grelina mostrada aqui. Parece provável que a grelina atue diretamente nas principais áreas mesolímbicas, já que a grelina ativa os neurônios da dopamina VTA (Abizaid et al. 2006) e administração direta de grelina ao VTA aumenta a liberação de dopaminaJerlhag et al. 2007). Consistente com isso, nós relatamos anteriormente efeitos da grelina intra-VTA para aumentar o consumo de alimentos gratificantes / palatáveis ​​em paradigmas de alimentação de livre escolha e também que as lesões do VTA resistem ao comportamento exploratório de alimentos palatáveis ​​induzidos por grelina (Egecioglu et al. 2010). O NAcc também pode ser um alvo direto para a grelina na modulação dos aspectos motivacionais da ingestão de alimentos; quando injetada diretamente nessa área, a grelina induz uma resposta de alimentação (Naleid et al. 2005), embora a presença de GHS-R1A nesta área em roedores não tenha sido descrita por outros investigadores (Zigman et al. 2006) e, portanto, requer esclarecimentos adicionais.

Consistentemente, com seu papel essencial em comportamentos motivados, vários genes dentro do sistema da dopamina foram alterados pelo tratamento central com grelina. Esses dados levantam a possibilidade de que a regulação da expressão do receptor de dopamina seja um mecanismo de longo prazo através do qual a grelina afeta a função e a sinalização relacionadas à recompensa. A avaliação dos receptores de dopamina não é importante apenas no local de liberação, como o NAcc, mas também no VTA, como por causa da liberação de dopamina dendrítica (Cragg & Greenfield 1997), é provável que atue localmente para influenciar os comportamentos motivados pela recompensa. Aqui, encontramos uma expressão aumentada de D5 no VTA após o tratamento com grelina. Os receptores dopaminérgicos D5 estão presentes nos corpos celulares dos neurônios dopaminérgicosCiliax et al. 2000) e sua atividade é necessária para restaurar a atividade do neurônio da dopamina VTA após um período de dessensibilização (Nimitvilai & Brodie 2010). No NAcc, notamos uma expressão diminuída de D1. De fato, a redução da expressão desse receptor foi recentemente demonstrada no NAcc de ratos obesos obesos, mas não resistentes à obesidade, em dietas ricas em gordura, indicando seu potencial papel no NAcc na obesidade e no consumo excessivo (Alsio et al. 2010). Além disso, a expressão de genes que codificam D3 foi reduzida pela grelina, um achado de interesse particular, dada a diminuição da disponibilidade de receptores D2 / D3 em usuários de drogas tanto em ratos como em humanos, correlaciona-se com o aumento da impulsividade (Dalley et al. 2007; Lee et al. 2009). Curiosamente, não observamos mudanças significativas nas enzimas envolvidas na síntese ou produção de dopamina.

O papel importante do sistema de acetilcolina para medicamentos e alimentos é bem documentado; aqui, mostramos que o tratamento com grelina foi associado a alterações na expressão de genes que codificam várias subunidades de receptores nicotínicos de acetilcolina, fornecendo outra via pela qual a grelina pode potencialmente alterar a função de recompensa. A grelina pode regular os neurônios dopaminérgicos da VTA indiretamente através de sua ação sobre os neurônios colinérgicos na área tegmentar laterodorsal (LDTg), uma área rica em GHS-R1A, que é importante para a recompensa do álcool envolvendo uma projeção colinérgica ao sistema dopaminérgico. De fato, anteriormente, nós mostramos que a injeção de grelina bilateral no LDTg em camundongos estimula a liberação de dopamina de uma maneira dependente de colinérgica (Jerlhag et al. 2007, 2008) e aumenta o consumo de álcool em um paradigma de livre escolha (álcool / água) (Jerlhag et al. 2009). De fato, estudos recentes têm implicado o link de recompensa colinérgico-dopaminérgico na recompensa alimentar (Dickson et al. 2010). Outra possibilidade interessante é que a grelina pode aumentar a sinalização colinérgica na ATV através da regulação positiva dos receptores colinérgicos. De fato, nossos dados atuais de expressão gênica parecem apoiar esse mecanismo, já que os níveis de mRNA de nAChRβ2 de VTA estavam aumentados nos ratos tratados com grelina.

A função dos neurónios colinérgicos de NAcc e acetilcolina no NAcc, por outro lado, tem sido mais controversa com alguns relatos indicando um papel da acetilcolina no aumento do comportamento orientado para a recompensa (Pratt & Kelley 2005; Pratt & Blackstone 2009) mas outros indicando que Ach no NAcc pode agir para inibir a alimentação e desempenhar um papel no mecanismo de saciedade (Capacete et al. 2003; Hoebel et al. 2007) De fato, nossos resultados parecem ser consistentes com o último, visto que o tratamento com grelina foi associado a uma expressão diminuída de uma das subunidades do receptor nicotínico, o nAChRα3. É importante notar que os estudos de expressão gênica, embora muito valiosos na indicação de potenciais alvos a jusante da grelina, apenas sugerem o tipo de relação (regulação positiva ou regulação negativa) necessária para a expressão da resposta orexigênica / orientada para recompensa, mas não a define pois seria difícil dissociar mudanças diretas de compensatórias. Portanto, nossos estudos de expressão gênica indicam uma conexão e fornecem uma plataforma para futuros estudos genéticos e farmacológicos que determinam o papel desses genes nos efeitos da grelina na alimentação gratuita e motivada por recompensa.

Embora as áreas hipotalâmica e do tronco cerebral contribuam mais provavelmente para a alimentação homeostática, não podemos excluir um papel indireto dos sistemas aferentes hipotalâmicos e / ou do tronco cerebral na motivação para recompensa alimentar induzida pela grelina. De fato, os neurônios orexinérgicos se projetam do hipotálamo lateral para o circuito de recompensa mesolímbico, incluindo o VTA e o NAcc (Toshinai et al. 2003; Harris et al. 2005; Perello et al. 2010). Neuropeptídeos Y (NPY) / AgRP neurônios do núcleo arqueado, outro alvo para os ligantes GHS-R1A (Dickson & Luckman 1997; Keen-Rhinehart & Bartness 2007a,b), também pode desempenhar um papel importante. Demonstrou-se que o NPY aumenta a eficácia da recompensa da ração, bem como da sacarose (Brown, Fletcher & Coscina 1998), enquanto a AgRP parece aumentar a eficácia de recompensa apenas dos alimentos ricos em gordura (Tracy et al. 2008). A grelina parece ter um papel na recompensa de sacarose (presente estudo) e na recompensa de gordura elevada (Perello et al. 2010); no entanto, a importância relativa dos neurônios NPY / AgRP para esses efeitos da grelina continua a ser elucidada. Em resumo, a grelina possui propriedades motivacionais que se estendem a todos os componentes nutricionais e, provavelmente, afeta várias áreas do cérebro para sincronizar uma resposta comportamental coordenada para promover a alimentação.

Embora o transporte de grelina no cérebro seja limitado (Bancos et al. 2002), a grelina periférica parece acessar e atingir áreas como o hipocampo (Diano et al. 2006) e VTA (Jerlhag 2008) Embora ainda haja algum debate sobre a relevância do nervo vago como uma via indireta para os efeitos centrais da grelina (Dornonville de la Cour et al. 2005; Data et al. 2002; Arnold et al. 2006), uma ação direta dentro do SNC parece provável, já que os efeitos da grelina periférica sobre a ingestão de alimentos podem ser suprimidos pela administração intra-VTA de antagonistas da grelina (Abizaid et al. 2006). A grelina é produzida no cérebro (Cowley et al. 2003), embora continue a ser determinado como isso é regulado e se a grelina derivada do cérebro fornece um importante sinal gerado centralmente para a ingestão de alimentos e para a motivação para comer. Considerado em conjunto com o fato de que o receptor da grelina GHS-R1A é constitutivamente ativo (isto é, tem atividade na ausência do ligante da grelina) (Holst et al. 2003), surge a questão de saber se a grelina circulante fornece um sinal intestinal fisiologicamente relevante para a motivação de incentivo para a recompensa alimentar. Os resultados do presente estudo, mostrando efeitos semelhantes no trabalho de recompensa de sacarose podem ser obtidos via administração central e periférica de ligantes GHS-R1A, pode indicar que tanto a grelina liberada centralmente quanto a grelina liberada perifericamente podem potencialmente afetar a motivação alimentar.

Em conclusão, nossos novos dados fornecem novas evidências de que a sinalização da grelina é importante para a motivação para obter recompensa de sacarose e impacto na expressão de genes dopaminérgicos e colinérgicos na via de recompensa mesolímbica. Nossos achados inspiram questões importantes sobre o papel da grelina endógena na determinação do valor de incentivo para recompensas naturais como açúcar, no comportamento apetitivo normal e na fisiopatologia dos transtornos alimentares e obesidade. Embora ainda haja um trabalho significativo para relacionar causalmente as mudanças moleculares no sistema de dopamina e acetilcolina ao impacto da grelina na recompensa, nossos dados indicam potencialmente um novo mecanismo pelo qual a grelina impacta o comportamento da recompensa. Compreender o papel da grelina nos processos de recompensa é importante para a compreensão da neurobiologia sobreposta de transtornos alimentares e dependência química e fornece um caminho potencial para a compreensão da etiologia dessas doenças e para o desenvolvimento de novas terapias. Finalmente, a possibilidade de suprimir a ingestão excessiva problemática de alimentos doces saborosos usando antagonistas de GHS-R1A pode ter relevância clínica e terapêutica para os efeitos benéficos emergentes de tais compostos para o controle da glicose no sangue (Espreguiçadeiras et al. 2006) em diabéticos tipo 2 (Esler et al. 2007).

Agradecimentos

Pesquisa apoiada pelo Conselho de Pesquisa Sueco para Medicina (VR 2006-5663; 2009-S266), 7th Framework da União Europeia (FP7-HEALTH-2009-241592; FP7-KBBE-2009-3-245009), ALF Göteborg (SU7601), o Instituto Sueco e a Fundação Sueca para Pesquisa Estratégica para o Centro Sahlgrenska de Pesquisa Cardiovascular e Metabólica (A305-188). Gostaríamos também de agradecer ao Dr. Daniel Perrissoud (AeternaZentaris, GmBH, Alemanha) por fornecer o antagonista do GHS-R1A, JMV2959 e Anders Friberg, para assistência na submissão.

Contribuição dos autores

A KPS iniciou, projetou, executou e analisou todos os estudos comportamentais. CH realizou e analisou todos os estudos de expressão gênica. EE contribuiu para o início do estudo. SLD foi autor sênior e forneceu supervisão e apoio financeiro para todos os estudos. O manuscrito foi criado por KPS e SLD, todos os autores contribuíram para o texto final.

Referências

  • Abizaid A, Liu ZW, Andrews ZB, Shanabrough M. Borok E, Elsworth JD, Roth RH, Sleeman MW, Picciotto MR, Tschop MH, Gao XB, Horvath TL. O grelelino modula a atividade e a organização da entrada sináptica dos neurônios dopaminérgicos mesencefálicos, promovendo o apetite. J Clin Invest. 2006; 116: 3229 – 3239. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Alsio J, Olszewski PK, Norback AH, Gunnarsson ZE, Levine AS, Pickering C, Schioth HB. A expressão gênica do receptor Dopamine D1 diminui no nucleus accumbens após exposição prolongada a alimentos saborosos e difere dependendo do fenótipo de obesidade induzida por dieta em ratos. Neurociência. 2010; 171: 779 – 787. [PubMed]
  • Os aferentes vagais de Arnold M, Mura A, Langhans W, Geary N. Gut não são necessários para o efeito estimulante da ingestão de grelina injetada intraperitonealmente no rato. J Neurosci. 2006; 26: 11052 – 11060. [PubMed]
  • Bailey ART, Von Englehardt N, Leng G, Smith RG, Dickson SL. A ativação do secretagogo do hormônio de crescimento do núcleo arqueado e do tronco cerebral ocorre por via não noradrenérgica. J Neuroendocrinol. 2000; 12: 191 – 197. [PubMed]
  • Bancos WA, Tschop M, Robinson SM, Heiman ML. A extensão e a direção do transporte da grelina através da barreira hematoencefálica são determinadas por sua estrutura primária única. J Pharmacol Exp Ther. 2002; 302: 822 – 827. [PubMed]
  • Marrom CM, Fletcher PJ, Coscina DV. O operante induzido por neuropéptido Y que responde pela sacarose não é mediado pela dopamina. Peptides. 1998; 19: 1667 – 1673. [PubMed]
  • Ciliax BJ, Nash N, Heilman C, Sunahara R, Hartney A, Tiberi M, DB Rye, Caron MG, HB Niznik, Levey AI. Imunolocalização de receptor de dopamina D (5) em cérebro de rato e macaco. Sinapse. 2000; 37: 125 – 145. [PubMed]
  • Cowley MA, Smith RG, Diano S, M Tschop, Pronchuk N, KL Grove, Strasburger CJ, M Bidlingmaier, Esterman M, ML Heiman, Garcia-Segura LM, EA Nillni, Mendez P, MJ Baixo, Sotonyi P, Friedman JM, Liu HY, Pinto S, Colmers WF, Cone RD, Horvath TL. A distribuição e mecanismo de ação da grelina no SNC demonstra um novo circuito hipotalâmico regulando a homeostase energética. Neurônio 2003; 37: 649 – 661. [PubMed]
  • Cragg SJ, Greenfield SA. Controle de autorreceptores diferenciais de liberação de dopamina somatodendrítica e axon terminal em substância negra, área tegmentar ventral e estriado. J Neurosci. 1997; 17: 5738 – 5746. [PubMed]
  • Cummings DE, Purnell JQ, Frayo RS, Schmidova K, Wisse BE, Weigle DS. Um aumento pré-prandial nos níveis plasmáticos de grelina sugere um papel no início da refeição em humanos. Diabetes. 2001; 50: 1714 – 1719. [PubMed]
  • Dalley JW, Fritadeira TD, Brichard L, Robinson ES, Theobald DE, Laane K, Pena Y, Murphy ER, Shah Y, K Probst, Abakumova I, FI Aigbirhio, Richards HK, Hong Y, Barão JC, Everitt BJ, Robbins TW . Os receptores D2 / 3 do Nucleus accumbens predizem a impulsividade do traço e o reforço da cocaína. Ciência. 2007; 315: 1267 – 1270. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Date Y, Murakami N, Toshinai K, Matsukura S, Niijima A, H Matsuo, Kangawa K, Nakazato M. O papel do nervo vagal aferente gástrico na alimentação induzida pela grelina e secreção do hormônio do crescimento em ratos. Gastroenterologia. 2002; 123: 1120 – 1128. [PubMed]
  • Diano S, Farr SA, Benoit SC, McNay EC, da Silva I, Horvath B, Gaskin FS, Nonaka N, Jaeger LB, Bancos WA, Morley JE, Pinto S, Sherwin RS, Xu L, Yamada KA, Sleeman MW, Tschop MH, Horvath TL. A grelina controla a densidade das sinapses da coluna hipocampal e o desempenho da memória. Neurociência da natureza. 2006; 9: 381 – 388. [PubMed]
  • Dickson SL, Hrabovszky E, Hansson C, Jerlhag E, M Alvarez-Crespo, Skibicka KP, Molnar CS, Liposits Z, Engel JA, Egecioglu E. Bloqueio da nicotina acetilcolina receptor central de sinalização atenuam a ingestão de alimentos induzida pela grelina em roedores. Neurociência. 2010; 171: 1180 – 1186. [PubMed]
  • Dickson SL, Leng G, Robinson ICAF. A administração sistêmica do peptídeo liberador do hormônio do crescimento ativa os neurônios arqueados hipotalâmicos. Neurociência. 1993; 53: 303 – 306. [PubMed]
  • Dickson SL, Luckman SM. Indução do ácido ribonucléico mensageiro c-fos no neuropeptídeo Y e neurônios do fator de liberação do hormônio de crescimento (GH) no núcleo arqueado do rato após injeção sistêmica do secretagogo da GH, peptídeo liberador de GH-6. Endocrinologia. 1997; 138: 771 – 777. [PubMed]
  • CD de Dornonville de la Cour, Björkqvist M, Sandvik AK, Bakke I, CM Zhao, Chen D, Håkanson R. Células do tipo A no estômago do rato contêm grelina e não operam sob controle de gastrina. Regul Pept. 2001; 99: 141 – 150. [PubMed]
  • Dornonville de la Cour CD, Lindqvist A, Egecioglu E, YCL Tung, Surve V, Ohlsson C, Jansson JO, Erlanson-Albertsson C, Dickson SL, tratamento Hakanson R. Ghrelin reverte a redução no ganho de peso e gordura corporal em camundongos gastrectomizados. Intestino. 2005; 54: 907 – 913. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Egecioglu E, Jerlhag E, Skibicka S, N Salomé, Haage D, Bohlooly YM, Andersson D, M Bjursell, Perrissoud D, Engel JA, Dickson SL. A grelina aumenta a ingestão de alimentos saborosos em roedores. Viciado Biol. 2010; 15: 304 – 311. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Engel JA. Avanços Recentes no Estudo do Alcoolismo (Excerpta Medica International Congress Series) Amesterdão: Excerta Medica; 1977. Aspectos neuroquímicos da europóia induzida por drogas produtoras de dependência; pp. 16 – 22.
  • Esler WP, Rudolph J, Claus TH, Tang WF, Barucci N, SE Brown, Bullock W, Daly M, DeCarr L, YX Li, Milardo L, D Molstad, Zhu J, JJ Gardell, Livingston JN, Sweet LJ. Os antagonistas do receptor da grelina de molécula pequena melhoram a tolerância à glicose, suprimem o apetite e promovem a perda de peso. Endocrinologia. 2007; 148: 5175 – 5185. [PubMed]
  • Faulconbridge LF, Cummings DE, Kaplan JM, Grill HJ. Efeitos hiperfágicos da administração de ghrelin do tronco cerebral. Diabetes. 2003; 52: 2260 – 2265. [PubMed]
  • Faulconbridge LF, Grill HJ, Kaplan JM e Daniels D. Caudal, administração da grelina pelo tronco encefálico, induz a expressão de fos no núcleo do trato solitário, mas não nos núcleos arqueados ou paraventriculares do hipotálamo. Cérebro Res. 2008; 1218: 151 – 157. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Figlewicz DP, Bennett JL, Naleid AM, Davis C, Grimm JW. Insulina intraventricular e leptina diminuem a autoadministração de sacarose em ratos. Physiol Behav. 2006; 89: 611 – 616. [PubMed]
  • Gualillo O, Caminos JE, Nogueiras R, Seoane LM, Arvat E, E Ghigo, Casanueva FF, Dieguez C. Efeito da restrição alimentar sobre a grelina em fêmeas de ciclo normal e na gravidez. Obes Res. 2002; 10: 682 – 687. [PubMed]
  • Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Um papel para os neurônios da orexina hipotalâmica lateral na busca de recompensa. Natureza. 2005; 437: 556 – 559. [PubMed]
  • Helm KA, Rada P, Hoebel BG. A colecistoquinina combinada com a serotonina no hipotálamo limita a liberação de dopamina enquanto aumenta a acetilcolina: um possível mecanismo de saciedade. Cérebro Res. 2003; 963: 290 – 297. [PubMed]
  • Hewson AK, Dickson SL. A administrao sistica de grelina induz as proteas Fos e Egr-1 no nleo arqueado hipotalico de ratos alimentados em jejum e alimentados. J Neuroendocrinol. 2000; 12: 1047 – 1049. [PubMed]
  • Hodos W. Relação progressiva como uma medida da força de recompensa. Ciência. 1961; 134: 943 – 944. [PubMed]
  • Hoebel BG, Avena NM, Rada P. Accumbens equilíbrio dopamina-acetilcolina na abordagem e evitação. Curr Opin Pharmacol. 2007; 7: 617 – 627. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Holst B, Cygankiewicz A, Jensen TH, Ankersen M, Schwartz TW. Alta sinalização constitutiva do receptor da grelina - identificação de um potente agonista inverso. Mol Endocrinol. 2003; 17: 2201 – 2210. [PubMed]
  • Howard AD, Feighner SD, Cully DF, Arena JP, Libertador PA, CI Rosenblum, Hamelin M, Hreniuk DL, OC Palyha, Anderson J, Paress PS, Diaz C, M Chou, Liu KK, KK McKee, Pong SS, Chaung LY , Elbrecht A, Dashkevicz M, Heavens R, M Rigby, Sirinathsinghji DJS, Dean DC, DG Melillo, AA Patchett, R Nargund, Griffin PR, DeMartino JA, Gupta SK, Schaeffer JM, RG Smith, VanderPloeg LHT. Um receptor na hipófise e no hipotálamo que funciona na liberação do hormônio do crescimento. Ciência. 1996; 273: 974 – 977. [PubMed]
  • Jerlhag E. A administração sistêmica da grelina induz a preferência do local condicionado e estimula a dopamina no período pós-operatório. Viciado Biol. 2008; 13: 358 – 363. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Dickson SL, Andersson M. Svensson L, Engel JA. A grelina estimula a atividade locomotora e o excesso de dopamina por meio de sistemas colinérgicos centrais em camundongos: implicações para seu envolvimento na recompensa do cérebro. Viciado Biol. 2006; 11: 45 – 54. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Dickson SL, Douhan A, Svensson L, Engel JA. A administração de grelina em áreas tegmentares estimula a atividade locomotora e aumenta a concentração extracelular de dopamina no nucleus accumbens. Viciado Biol. 2007; 12: 6 – 16. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E., Dickson SL, Svensson L, Engel JA. Os receptores de acetilcolina nicotínicos sensíveis à alfa-conotoxina MII estão envolvidos na mediação da estimulação locomotora induzida pela grelina e transbordamento da dopamina no núcleo accumbens. Eur Neuropsychopharmacol. 2008; 18: 508 – 518. [PubMed]
  • Jerlhag E, Egecioglu E, Landgren S, N Salomé, Heilig M, Moechars D, R Datta, Perrissoud D, Dickson SL, Engel JA. Exigência de sinalização central da grelina para recompensa de álcool. Proc Natl Acad Sci EUA A. 2009; 106: 11318 – 11323. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Jewett DC, Cleary J, LE Levine, Schaal DW, Thompson T. Efeitos do neuropéptido Y, insulina, 2-deoxiglicose e privação de comida no comportamento motivado pelos alimentos. Psicofarmacologia. 1995; 120: 267 – 271. [PubMed]
  • Keen-Rhinehart E, Bartness TJ. O MTII atenua os aumentos induzidos pela privação da grelina e do alimento no açambarcamento de alimentos e na ingestão de alimentos. Horm Behav. 2007a; 52: 612 – 620. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Keen-Rhinehart E, Bartness TJ. O receptor NPY Y1 está envolvido nos aumentos induzidos pela grelina e pelo jejum no forrageamento, na reserva alimentar e na ingestão de alimentos. Sou J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2007b; 292: R1728 – 1737. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Kelley AE, Bakshi VP, Haber SN, Steininger TL, Will MJ, Zhang M. Modulação opiácea dos hedonistas do sabor dentro do estriado ventral. Physiol Behav. 2002; 76: 365 – 377. [PubMed]
  • Kojima M, Hosoda H, Data Y, Nakazato M, Matsuo H, Kangawa K. A grelina é um peptídeo acilado liberador de hormônio de crescimento do estômago. Natureza. 1999; 402: 656 – 660. [PubMed]
  • Koob GF. Drogas de abuso - anatomia, farmacologia e função dos caminhos de recompensa. Trends Pharmacol Sci. 1992; 13: 177 – 184. [PubMed]
  • Kuzmin A, Jerlhag E., Liljequist S, Engel J. Efeitos dos receptores nACh seletivos de subunidades na auto-administração do etanol operante e comportamento de beber etanol como a recaída. Psicofarmacologia. 2009; 203: 99 – 108. [PubMed]
  • la Fleur SE, Vanderschuren LJ, Luijendijk MC, Kloeze BM, Tiesjema B, Adan RA. Uma interação recíproca entre comportamento motivado por alimentos e obesidade induzida por dieta. Int J Obes. 2007; 31: 1286 – 1294. [PubMed]
  • Lee B, Londres ED, Poldrack RA, J Farahi, Nacca A, JR Monterosso, Mumford JA, AV Bokarius, M Dahlbom M, Mukherjee J, RM RM, Brody AL, MA Mandelkern. A disponibilidade do receptor de dopamina d2 / d3 no estriado é reduzida na dependência de metanfetaminas e está ligada à impulsividade. J Neurosci. 2009; 29: 14734 – 14740. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Livak KJ, Schmittgen TD. Análise de dados de expressão de genes relativos usando PCR quantitativo em tempo real e o método 2 (delta C (T)). Métodos. 2001; 25: 402 – 408. [PubMed]
  • Nakazato M, Murakami N, data Y, Kojima M, H Matsuo Kangawa K, Matsukura S. Um papel para a grelina na regulação central da alimentação. Natureza. 2001; 409: 194 – 198. [PubMed]
  • Naleid AM, Graça MK, Cummings DE, Levine AS. A grelina induz a alimentação na via de recompensa mesolímbica entre a área tegmentar ventral e o nucleus accumbens. Peptides. 2005; 26: 2274 – 2279. [PubMed]
  • Nimitvilai S, Brodie MS. Reversão da inibição prolongada da dopamina de neurônios dopaminérgicos da área tegmentar ventral. J Pharmacol Exp Ther. 2010; 333: 555 – 563. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Nogueiras R, Tschop MH, Zigman JM. Regulação do sistema nervoso central do metabolismo energético - grelina versus leptina. Ann NY Acad Sci. 2008; 1126: 14 – 19. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Paxinos G, Watson C. O cérebro de ratos em coordenadas estereotáxicas. Nova York: Academic Press, Nova York; 1986.
  • Perello M, Sakata I, S Birnbaum, Chuang JC, Osborne-Lawrence S, Rovinsky SA, Woloszyn J, M Yanagisawa, Lutter M, Zigman JM. A grelina aumenta o valor de recompensa da dieta rica em gordura de uma maneira dependente da orexina. Psiquiatria Biol. 2010; 67: 880 – 886. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Pratt WE, Blackstone K. Núcleo accumbens acetilcolina e ingestão de alimentos: diminuição do tônus ​​muscarínico reduz a alimentação, mas não busca de alimentos. Behav Brain Res. 2009; 198: 252 – 257. [PubMed]
  • Pratt WE, Kelley AE. O antagonismo do receptor muscarínico do estriatal reduz a ingestão de alimentos 24-h em associação com a diminuição da expressão do gene da pré-pro-encefalina. Eur J Neurosci. 2005; 22: 3229 – 3240. [PubMed]
  • Ritter RC, Slusser PG, Stone S. Glucoreceptores controlando a alimentação e a glicose sanguínea - localização no rombencéfalo. Ciência. 1981; 213: 451 – 453. [PubMed]
  • Salamone JD, Steinpreis RE, McCullough LD, Smith P, Grebel D, Mahan K. Haloperidol e depleção de dopamina nucleus accumbens suprimem a pressão da alavanca por alimentos, mas aumentam o consumo de alimentos livres em um novo procedimento de escolha alimentar. Psicofarmacologia. 1991; 104: 515 – 521. [PubMed]
  • N Salomé, Haage D, Perrissoud D, Moulin A, L Demange, Egecioglu E, Fehrentz JA, J Martinez, Dickson SL. Ações anorexigênicas e eletrofisiológicas de novos antagonistas do receptor da grelina (GHS-R1A) em ratos. Eur J Pharmacol. 2009a; 612: 167 – 173. [PubMed]
  • Salomé N, Hansson C, Taube M, Gustafsson-Ericson L, Egecioglu E, Karlsson-Lindahl L, Fehrentz JA, Martinez J, Perrissoud D, Dickson SL. Sobre o mecanismo central subjacente aos efeitos pró-obesidade crônicos da grelina em ratos: novos insights de estudos que exploram um potente antagonista do receptor de grelina. J Neuroendocrinol. 2009b; 21: 777–785. [PubMed]
  • Sibilia V, Lattuada N, Rapetti D, F Pagani, Vincenza D, Bulgarelli I, Locatelli V, Guidobono F, Netti C. Grelina inibe a dor inflamatória em ratos: envolvimento do sistema opióide. Neurofarmacologia. 2006; 51: 497 – 505. [PubMed]
  • Skibicka KP, Alhadeff AL, Grill HJ. O transcrito Hindbrain regulado por cocaína e anfetamina induz hipotermia mediada por receptores GLP-1. J Neurosci. 2009; 29: 6973 – 6981. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Sol Y, Asnicar M, Saha PK, Chan L, Smith RG. Ablação da grelina melhora o fenótipo diabético, mas não obeso, de camundongos ob / ob. Cell Metab. 2006; 3: 379 – 386. [PubMed]
  • Toshinai K, data Y, Murakami N, MS Shimada, MS Mondal, Shimbara T, JL Guan, Wang QP, Funahashi H, Sakurai T, Shioda S, Matsukura S, Kangawa K, ingestão de alimentos induzida Nakazato M. Grelina é mediada via a via da orexina. Endocrinologia. 2003; 144: 1506 – 1512. [PubMed]
  • Tracy AL, DJ de Clegg, Johnson JD, Davidson TL, Benoit SC. O antagonista da melanocortina AgRP para uma gordura, mas não um (83-132) aumenta o carboidrato que responde ao apetite, reforçador. Pharmacol Biochem Behav. 2008; 89: 263 – 271. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Wren AM, Selo LJ, Cohen MA, Brynes AE, Geada GS, Murphy KG, Dhillo WS, Ghatei MA, Bloom SR. A grelina aumenta o apetite e aumenta a ingestão de alimentos em seres humanos. J Clin Endocrinol Metab. 2001; 86: 5992 – 5995. [PubMed]
  • Wren AM, CJ pequeno, Ward HL, Murphy KG, CL Dakin, Taheri S, AR Kennedy, Roberts GH, DGA Morgan, Ghatei MA, Bloom SR. O novo peptídeo ghrelin hipotalâmico estimula a ingestão de alimentos e secreção do hormônio do crescimento. Endocrinologia. 2000; 141: 4325 – 4328. [PubMed]
  • Zheng H, Lenard NR, Shin AC, Berthoud HR. Controle do apetite e regulação do balanço energético no mundo moderno: o cérebro dirigido pela recompensa supera os sinais de reposição. Int J Obes. 2009; 33 (Suplemento 2): S8-S13. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
  • Zigman JM, Jones JE, CE Lee, Saper CB, Elmquist JK. Expressão do ARNm do recetor da grelina no rato e no cérebro do ratinho. J Comp Neurol. 2006; 494: 528 – 548. [PubMed]