Papel dos mecanismos do receptor Orexin-1 no consumo compulsivo de alimentos em um modelo de compulsão alimentar em ratas (2012)

Neuropsicofarmacologia. 2012 Aug; 37 (9): 1999 – 2011.

Publicado on-line 2012 May 9. doi: 10.1038 / npp.2012.48

PMCID: PMC3398727

Laura Piccoli,^1,^4,^5,⁶ Maria Vittoria Micioni Di Bonaventura,^2,^4,^* Carlo Cifani,^2,⁴ Vivian JA Costantini,^1,^5,⁶ Mario Massagrande,^1,^5,⁶ Dino Montanari,^1,^5,⁶ Prisca Martinelli,^1,^5,⁶ Marinella Antolini,^1,^5,⁶ Roberto Ciccocioppo,² Maurizio Massi,² Emilio Merlo-Pich,³ Romano Di Fabio,^1,^5,⁶ e Mauro Corsi^1,^5,⁶

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Sumário

Orexins (OX) e seus receptores (OXR) modulam a alimentação, a excitação, o estresse e o abuso de drogas. Sistemas neurais que motivam e reforçam o abuso de drogas também podem estar subjacentes à busca e ingestão compulsiva de alimentos. Portanto, os efeitos do GSK1059865 (5-bromo-N- [(2S,5S) -1- (3-fluoro-2-metoxibenzoil) -5-metilpiperidin-2-il] metil-piridin-2-amina), um OX selectivo₁Antagonista R, JNJ-10397049 (N- (2,4-dibromofenil) -N′ - [(4S,5S) -2,2-dimetil-4-fenil-1,3-dioxano-5-il] ureia), um OX seletivo₂Antagonista R e SB-649868 (N- [((2S)-1-{[5-(4-fluorophenyl)-2-methyl-1,3-thiazol-4-yl]carbonyl}-2-piperidinyl)methyl]-1-benzofuran-4-carboxamide), a dual OX₁/BOI₂Os antagonistas de R foram avaliados em um modelo de compulsão alimentar (BE) em ratas. BE de alimentos altamente palatáveis (HPF) foi evocado por três ciclos de restrição alimentar seguidos por estresse, causado pela exposição de ratos ao HPF, mas impedindo-os de ter acesso a ele por 15 min. As avaliações farmacocinéticas de todos os compostos foram obtidas nas mesmas condições experimentais usadas para os experimentos comportamentais. O topiramato foi usado como composto de referência, uma vez que bloqueia seletivamente BE em ratos e humanos. Os limiares relacionados com a dose para os efeitos indutores do sono dos antagonistas OXR foram medidos utilizando polissonografia em expericias paralelas. O SB-649868 e o GSK1059865, mas não o JNJ-10397049, reduziram seletivamente o BE para o HPF sem afetar a ingestão padrão de pellets de alimentos, em doses que não induziram o sono. Estes resultados indicam, pela primeira vez, um papel importante do OX₁R mecanismos em BE, sugerindo que o antagonismo seletivo no OX₁R pode representar um novo tratamento farmacológico para o EB e possivelmente outros transtornos alimentares com um componente compulsivo.

Palavras-chave: antagonista do receptor orexina-1, antagonista do receptor orexina-2, compulsão alimentar, ratas, consumo compulsivo de alimentos

INTRODUÇÃO

Episódios de compulsão alimentar (BE) em humanos são caracterizados pelo consumo compulsivo, não homeostático, de uma quantidade extraordinariamente grande de alimentos altamente palatáveis (HPF) em um curto período de tempo. Mesmo que não estejam com fome, os indivíduos comem mais rapidamente do que o normal até sentirem-se desconfortavelmente cheios. Conforme descrito pelo DMS-IV-TR (Associação Americana de Psiquiatria, 2000), esses episódios são acompanhados por uma sensação subjetiva de perda de controle sobre a alimentação e estão associados a sentimentos de angústia, repulsa, depressão, serem culpados por comer em excesso e comer sozinhos por causa do constrangimento.

A BE representa uma característica central da bulimia nervosa, na qual os episódios de EB são seguidos por comportamentos que visam evitar o ganho de peso, como o vômito autoinduzido. Episódios intensos e persistentes de EB representam fenómenos típicos que também ocorrem em indivíduos que sofrem de transtorno de compulsão alimentar periódica (TCAP) (Walsh e Devlin, 1998). O TCAP é caracterizado por episódios repetidos de EB na ausência de comportamentos compensatórios para evitar ganho de peso. Os critérios diagnósticos para TCAP no DSM-IV-TR indicam que os episódios de EB devem ocorrer pelo menos 2 dias por semana para os meses 6. O TCAP está associado a comorbidades clínicas e psiquiátricas significativas (Javaras et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Grucza et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Fassino et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Estima-se que o BE afete cerca de 5% da população adulta dos EUA em algum momento durante suas vidas (Foulds Mathes et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e contribui para o agravamento da obesidade e patologias associadas (Hudson et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Heath, 1998; Devlin et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Yanovski, 2003).

Medicamentos atuais, como o topiramato (McElroy et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; McElroy et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) ou sibutramina (Appolinario et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Wilfley et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), foram relatados para reduzir o BE em estudos clínicos. No entanto, sua administração está associada a uma variedade de efeitos colaterais adversos, que representam sérios problemas durante o tratamento crônico (McElroy et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Carreteiro et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Yager, 2008). Em particular, a sibutramina foi recentemente retirada do mercado europeu, enquanto o topiramato é bem conhecido pelas suas propriedades cognitivas. Tratamentos inovadores para bulimia nervosa e TCAP sem efeitos colaterais graves são fortemente necessários.

Em 1998, dois grupos identificaram independentemente uma nova classe de neuropeptídeos originados em núcleos hipotalâmicos (Sakurai et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; de Lecea et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Estes péptidos, chamados orexina-A (OXA) e orexina-B (OXB) (também designados por hipocretina 1 e hipocretina 2), são produzidos a partir de processamento proteolítico do péptido pré-pró-OX e ligam-se a dois GPCRs, nomeadamente OX- Receptores 1 e OX-2 (OX₁R e OX₂R) (também indicado como HcrtR1 e HcrtR2). BOI₁R é acoplado a Gq / 11, enquanto estudos utilizando células neuronais sugerem que₂R é acoplado às proteínas Gq, Gs e Gi. No sistema nervoso central, o OX₁R e OX₂R mostram padrões de distribuição parcialmente sobrepostos, mas amplamente distintos e complementares (Sakurai, 2007). Áreas cerebrais como o córtex infralímbico, o hipocampo e o locus coeruleus exibem alta expressão de OX₁R, enquanto OX₂R é o único receptor expresso em núcleo arqueado, núcleo tuberomamilar e hipotálamo dorsomedial e lateral (LH). Ambos os receptores estão presentes no córtex pré-frontal, amígdala, núcleo leito da estria terminal, núcleo paraventricular talâmico, rafe dorsal, área tegmentar ventral (ATV) e núcleo núcleo tegmentar laterodorsal-peduncolo (Lu et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Marcus et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Trivedi et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Esses achados sugerem que os OXs e seus receptores provavelmente desempenham um amplo papel regulador no sistema nervoso central.

A fisiologia do estado de vigília / sono é um dos campos em que o papel dos OXs tem sido mais extensivamente estudado. De fato, o rompimento da sinalização de OX em camundongos knockout de prepro-OX produziu um fenótipo com características notavelmente similares àquelas de pacientes que sofrem de narcolepsia, um distúrbio crônico caracterizado por sonolência excessiva que pode estar associada a paralisia do sono muito severa, alucinações hipnagógicas e cataplexia. (Chemelli et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). A sonolência excessiva parece ser uma manifestação de uma incapacidade de manter a vigília prolongada.

Além disso, o antagonismo simultâneo de ambos os OX₁R e OX₂R ou a inibição seletiva de OX₂R resulta na indução de um forte efeito hipnótico (Brisbare-Roch et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Dugovic et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Di Fabio et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.).

Os dados da literatura também apoiam o papel do sistema OX no comportamento alimentar, no controle da ingestão alimentar tanto homeostática quanto baseada em recompensa. Além de exibir um fenótipo de narcolepsia, camundongos knockout de OX também são hipofágicos em comparação com parceiros de ninhada de peso e idade, indicando um papel para os OXs na modulação do metabolismo de alimentação e energia (Willie et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). A injeção de OXA no ventrículo lateral de ratos, durante a fase inicial de luz, induziu um aumento da ingestão de alimentos relacionado à dose em ratos (Sakurai et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), que foi bloqueado pelo pré-tratamento com o OX₁Antagonista R SB-334867 (Haynes et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Rodgers et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). O papel dos OXs na ingestão de alimentos baseada em recompensas foi documentado por um recente Perello et al (2010), mostrando que o aumento no valor de recompensa da dieta rica em gordura induzida pela grelina é dependente de OX; além disso, foi relatado que o SB-334867 inibe a auto-administração de alimentos ricos em gordura (Nair et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Ativação do OX₁R é um componente necessário da resposta, motivação ou ambos reforçados pelos alimentos (Sharf et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Além disso, os neurônios LH OX são ativados por estímulos associados a recompensas consumatórias, como alimentos (Harris et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), sugerindo um papel potencial do sistema OX em resposta a estímulos ambientais externos ligados a aspectos cognitivos da alimentação.

Relatórios recentes apoiam um papel para a sinalização de OX nos efeitos neurocomportamentais e motivacionais de drogas de abuso (Harris et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Borgland et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Jupp et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; para uma revisão, consulte Bonci e Borgland, 2009; Martin-Fardon et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Assim, o bloqueio do OX₁R diminui o etanol (Lawrence et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e autoadministração de nicotina (Hollander et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), inibe o restabelecimento induzido por sugestão de etanol- (Lawrence et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), cocaína- (Smith et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e busca de morfina (Harris et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e atenua o restabelecimento da cocaína induzido pelo estresse (Boutrel et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e procura de etanol (Richards et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Além disso, evidências recentes também associaram a OX₂Mecanismos R-seletivos para recompensa e busca de comportamentoShoblock et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.).

Há evidências de que a ingestão excessiva de certos alimentos sob condições específicas produz comportamentos e mudanças no cérebro que se assemelham a um estado semelhante ao vício (Gold et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Kenny, 2011; Pelchat et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Aveia et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Ifland et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Gearhardt et al2011a). Sistemas neurais que motivam e reforçam o abuso de drogas também têm sido propostos para fundamentar comportamentos associados à busca compulsiva de alimentos e à ingestão de alimentos (Johnson e Kenny, 2010; Hoebel, 1985; Volkow e Wise, 2005; Corwin et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Gearhardt et al2011b; Wang et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Esses achados levantam a questão de saber se o sistema OX pode também ter um papel nos transtornos alimentares caracterizados por episódios compulsivos de compulsão alimentar, como bulimia nervosa e TCAP.

Portanto, este estudo teve como objetivo investigar o efeito do duplo OX₁/BOI₂Antagonista R SB-649868 (N-[((2S)-1-{[5-(4-fluorophenyl)-2-methyl-1,3-thiazol-4-yl]carbonyl}-2-piperidinyl)methyl]-1-benzofuran-4-carboxamide) (Di Fabio et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), o seletivo OX₁Antagonista R GSK1059865 (5-bromo-N- [(2S,5S)-1-(3-fluoro-2-methoxybenzoyl)-5-methylpiperidin-2-yl]methyl-pyridin-2-amine) (Gozzi et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e a seletiva OX₂Antagonista R JNJ-10397049 (N- (2,4-dibromofenil) -N′ - [(4S,5S) -2,2-dimetil-4-fenil-1,3-dioxano-5-il] ureia) (McAtee et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Dugovic et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) no modelo BE descrito por Cifani et al (2009), em que episódios de EB para HPF são evocados em ratas por ciclos de restrição alimentar / realimentação e estresse agudo. Os três antagonistas foram avaliados pela primeira vez in vitro em OX recombinante de rato₁R e OX₂R para determinar sua potência e confirmar sua seletividade para os dois subtipos de receptores. Sua farmacocinética (PKs) foi então avaliada e as doses capazes de induzir efeitos hipnóticos foram determinadas em um modelo de rato-sono. Finalmente, os compostos foram testados nas doses definidas no modelo BE.

MATERIAIS E MÉTODOS

Animais

Todas as pesquisas envolvendo animais foram realizadas de acordo com a diretiva europeia 86/609 / CEE que rege o bem-estar e proteção animal, que é reconhecida pelo Decreto Legislativo Italiano no. 116, de 27 de janeiro de 1992, e de acordo com a revisão interna realizada pelo Comitê GlaxoSmithKline de Ética e Pesquisa Animal (CARE) e com a Política da empresa sobre o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.

Drogas

SB-649868 (Di Fabio et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), GSK1059865 (Gozzi et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e JNJ-10397049 (McAtee et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) foram sintetizados nos laboratórios da GSK. OXA foi fornecido por California Peptides Research (cat. No. 471-99, CA). Myo- [1,2-3H(N)] inositol (NET-906, actividade específica: 51 Ci / mol) e esferas de ligação ao ARN de silicato de ítrio (RPNQ0013) foram adquiridas à Perkin-Elmer (Itália). O topiramato (Topamax; Janssen-Cilag) foi adquirido à Janssen-Cilag. Estava disponível em comprimidos, que foram reduzidos a pó antes da administração.

Experimento 1: Antagonismo de SB-649868, JNJ-10397049 e GSK1059865 no OX de Rato₁R e rato OX₂R

Cultura de células

Células de leucemia basófila de rato estavelmente transfectadas com OX de rato₁R (rOX₁R) ou rato OX₂R (rOX₂R) foram cultivados em α-MEM (Invitrogen / GIBCO) suplementado com 10% soro bovino fetal (FBS, PAA), 100 U / ml penicilina G, 100 U / ml estreptomicina (Pen / Strep; Invitrogen / GIBCO), e 400 μg / ml de geneticina (Invitrogen / GIBCO), a 37 ° C com 5% CO₂ em uma atmosfera umidificada.

Acumulação de [³H] inositol fosfatos (IPs)

Acumulação de [³H] inositol fosfatos (IPs) foi medido como descrito anteriormente (Brandish et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) com as seguintes modificações. As linhas de células que expressam estavelmente a rOX₁R ou rOX₂R foram semeados em placas de cultura de tecidos com 96 em 3 × 10⁴ células por poço e 1.5 × 10⁴ células por poço, respectivamente, em α-MEM suplementado com 10% FBS e Pen / Strep sem geneticina. Após 24 h, o meio de cultura foi aspirado e 100 μl de meio fresco suplementado com 10 μCi / ml NET-906 (Perkin-Elmer) foi adicionado às células; assim, 1 μCi de inositol radiomarcado foi usado por poço. Após 16 h de incubação, as células foram lavadas duas vezes com o tampão de ensaio (1 × HBSS, 20 mM HEPES (pH 7.4), mais 0.1% de albumina sérica bovina e 10 mM LiCl), antes da adição de agonistas ou antagonistas. Os antagonistas foram incubados durante 30 min a 37 antes da estimulao com agonista. Curvas de concentração-resposta (CRCs) de OXA variando de 0.0001 a 10 μM foram realizadas. Após 1 h de incubação a 37 ° C, o tampão de ensaio foi aspirado, foram adicionados 80 μl por poço de ácido fórmico arrefecido com gelo de 0.1 M e as células foram deixadas para incubação 30 min à temperatura ambiente. Foi adicionada uma concentração de 20 μl do extracto celular a 80 μl de esferas de silicato de ítrio (YSi SPA; Perkin-Elmer; 12.5 mg / ml), agitadas durante 1 h à temperatura ambiente e deixadas a 4 ° C durante 2 h contando com um Contador de Cintilação de Microplacas Packard Top-Count NXT.

Os dados foram expressos como% de resposta agonista máxima calculada da seguinte forma:% resposta agonista máxima = ((cpm_antagonista−cpm_basal) / cpm_{maxagonistresponse}−cpm_basal) × 100.

In vitro análise de dados

Os CRCs foram ajustados por análise de regressão não-linear sigmoidal usando o software GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, San Diego, CA) para obter o agonista EC₅₀ (concentração de agonista necessária para obter 50% da resposta máxima).

A potência (K_B= constante de dissociação do antagonista) de antagonistas não superáveis foi determinada pela aplicação da equação do modelo operacional para o antagonismo não competitivo (Kenakin et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). O K_B valor para antagonistas superáveis foi calculado pela análise de Schild (Arunlakshana e Schild, 1959). Para SB-649868 apenas o antagonista IC₅₀ foi calculado. Nós plotamos a resposta produzida por 1 μM OXA na ausência e na presença de quatro diferentes concentrações de antagonista. IC₅₀ é definido como a concentração de antagonista necessária para inibir em 50% a resposta produzida pelo agonista. Os resultados são expressos como pEC₅₀ (−log₁₀ EC₅₀), pK_B (−log₁₀ K_B) ou pIC₅₀ (−log₁₀ IC₅₀), e são apresentados como média ± SEM ou como média com limites de confiança 95% (95% CL) de pelo menos três experimentos independentes. Todas as drogas testadas foram dissolvidas em dimetilsulfóxido (DMSO) e posteriormente diluídas no tampão de ensaio para dar uma concentração final de DMSO não excedendo 0.5%.

Experimento 2: Determinações PK em ratos machos e fêmeas

Para avaliar a exposição sanguínea PK para os estudos de sono e BE, os perfis PK dos compostos foram analisados em ratos machos e fêmeas nas mesmas condições experimentais de sono e experimentos de BE. Os perfis de PK foram investigados após administração por gavagem de 3 mg / kg SB-649868 em ratos fêmeas e machos, administração intraperitoneal de 10 mg / kg em fêmeas e 5 mg / kg em ratos machos de JNJ-10397049 e administração por gavagem em ratos fêmeas e administração intraperitoneal em ratos machos de 10 mg / kg de GSK1059865. Amostras de sangue foram coletadas através da veia femoral em intervalos de até 4 h após a administração. Amostras de cérebro foram coletadas no final do experimento. A concentrao de SB-649868, JNJ-10397049 e GSK1059865 em amostras de sangue e cebro foi determinada utilizando um modo baseado na precipitao de protea seguida por anise HPLC-MS / MS. Parâmetros PK não compartimentais foram obtidos a partir dos perfis de concentração no sangue utilizando o pacote de software WinNonlin v.4.0 (Pharsight, Mountain View, CA). Os parâmetros PK são expressos como média ± DP (Leia e Braggio, 2010).

Experimento 3: Efeito do SB-649868, JNJ-10397049 e GSK1059865 no modelo de sono de ratos

Animais

Ratos macho Sprague-Dawley (275-300 g; Charles River, Calco, Como, Itália) foram alojados individualmente num ciclo 12-h claro-escuro (luz ligada 0300 h) 1 uma semana antes da cirurgia. Acesso a comida e água foi permitido ad libitum. Para coletar os sinais biopotenciais, um transmissor de telemetria multicanal em miniatura (TL10M3-F40-EET; Data Sciences Int.) Foi implantado intraperitonealmente nos animais. Dois eletrodos foram fixados permanentemente com cimento dentário ao crânio para registrar o eletroencefalograma cortical (EEG). Eles estavam diretamente em contato com o dura-máter através de dois furos na região fronto-parietal. Dois outros eletrodos foram fixados nos músculos esqueléticos do pescoço, para registro eletromiograma (EMG) ou na região periorbital do olho para registro de eletrooculograma (EOG).

Gravação

Após a recuperação da cirurgia, os animais foram mantidos em sua gaiola em ambiente de temperatura controlada (21 ± 1 ° C) com acesso a alimentos e água. ad libitum. Os animais implantados demonstraram um repertório comportamental normal imediatamente após a recuperação da cirurgia. No entanto, para permitir que os padrões normais de sono sejam restabelecidos, os animais foram utilizados após um período de semana 3. As condições ambientais descritas acima foram mantidas durante os estudos do sono. Durante a vigência do período de teste, animais em movimento livre permaneceram em suas gaiolas em casa em receptores individuais. Os sinais EEG e EMG ou EOG foram gravados continuamente usando DSI Dataquest ART O traçado EEG, dividido em épocas 10-s, foi transformado digitalmente (transformação FFT) para fornecer os espectros de potência de δ, θ, α e β bandas para distinguir três padrões diferentes de atividade no rato (acordado, sono NREM e sono REM). Os marcadores atribuídos pelo sistema de pontuação automatizado (estágio Sleep, DSI) foram transferidos para o sinal digital do EEG e, posteriormente, confirmados pelo exame visual dos traçados de EEG e EMG / EOG por operadores treinados, cegos para o tratamento medicamentoso. A análise dos parâmetros do sono incluiu: latência para o sono NREM (intervalo de tempo até as seis primeiras épocas de sono NREM consecutivas após a injeção), latência para o sono REM (intervalo de tempo para a primeira fase do sono REM após a injeção), sono NREM, sono REM e total hora de dormir.

Tratamento medicamentoso

Tratamentos medicamentosos foram realizados de acordo com um delineamento cruzado pareado randomizado onde, em sessões experimentais separadas, cada animal recebeu tratamento com veículo ou medicamento. Os ratos foram tratados com o composto experimental ou com o respectivo veículo, num volume de 2 ml / kg, 6 h após o desligamento da luz (tempo circadiano (CT) 18). As gravações foram feitas para o período de teste subsequente 3-h. O SB-649868 foi dissolvido em 0.5% HPMC (hidroxipropilmetilcelulose) (p / v) em água destilada e foi administrado por gavagem a doses de 3 e 10 mg / kg. O JNJ-10397049 foi dissolvido em mygliol 812N e foi administrado intraperitonealmente em doses de 5 e 25 mg / kg. O GSK1059865 foi dissolvido em 0.5% HPMC (p / v) em água destilada e administrado intraperitonealmente em doses de 5 e 25 mg / kg.

A análise dos dados

Todos os dados são expressos como a média ± SEM. Os resultados foram analisados utilizando uma análise de variância unidireccional (ANOVA). Post-hoc as comparações foram realizadas com o teste de Dunnett. A significância estatística foi estabelecida em P

Experiência 4: compulsão alimentar

Animais

Ratas Sprague-Dawley fêmeas (Charles River) foram utilizadas. Seu peso corporal era 225-250 g no início dos experimentos. Os ratos foram aclimatados a gaiolas individuais sob um ciclo de luz / escuridão 12-h (luz ligada em 0800 h) com ad libitum comida e água durante 2 semanas antes das experiências. Eles foram mantidos em uma sala com temperatura constante (20 – 22 ° C) e umidade (45 – 55%). Ratos foram mantidos em gaiolas individuais com paredes metálicas; o chão e a parede frontal eram feitos de grade metálica. As dimensões do piso da gaiola foram 30 cm × 30 cm; a gaiola tinha 30 cm de altura. Uma porta frontal (30 cm × 20 cm) composta por uma grade metálica estava presente na parede anterior da gaiola para permitir o acesso ao interior da gaiola. A parte restante da parede da frente estava equipada com uma bureta para beber.

Dieta

Os animais receberam oferta de ração padrão para ratos, 4RF18 (Mucedola; Settimo Milanese, Milano, Itália; 2.6 kcal / g). O HPF era uma pasta preparada misturando creme de chocolate Nutella (Ferrero, Alba, Torino, Itália) (5.33 kcal / g; 56%, 31% e 7% de carboidrato, gordura e proteína, respectivamente), pellets de alimentos moídos ( 4RF18; Mucedola; Settimo Milanese) e ua na proporo percentual peso / peso seguinte: 52% Nutella, 33% pastilhas alimentares e 15% ua. A dieta HPF tinha um teor calórico de 3.63 kcal / g. Pelotas padrão foram oferecidas dentro de um contêiner de grade metálica que foi pendurado na parede anterior da gaiola; foi removido da gaiola para medir seu peso para determinar a ingestão de pellets de alimentos. O HPF foi oferecido em uma xícara de café; a alça do copo foi inserida na grade metálica da parede anterior da gaiola e fixada na parede.

O procedimento de estresse

Para 15 min, a xícara de café da China contendo HPF foi colocada dentro de um recipiente de grade metálica que foi pendurado na parede anterior da gaiola. Nestas condições, o animal foi capaz de ver a taça em que recebeu HPF nos dias 5, 6, 13 e 14 dos dois primeiros ciclos, foi capaz de ver o HPF em si e também cheirar o seu odor. Neste período 15-min, o rato engajou-se em movimentos repetidos das patas dianteiras, cabeça e tronco, visando obter o HPF, mas não foi capaz de alcançá-lo.

Isso gerou uma condição levemente estressante que causa um aumento significativo nos níveis séricos de corticosterona (Cifani et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Após 15 min, o copo foi colocado dentro da gaiola de ratos dos grupos de estresse, de modo que o HPF se tornou acessível a eles.

Tratamento medicamentoso

No dia 25, os compostos ou o respectivo veículo foram dados antes do acesso ao HPF. O SB-649868 foi dissolvido em 0.5% HPMC (p / v) em água destilada e foi administrado por gavagem a doses de 1 e 3 mg / kg. O topiramato foi dissolvido em 0.5% HPMC (p / v) em água destilada e foi administrado por sonda esofágica na dose de 60 mg / kg. O JNJ-10397049 foi dissolvido em 0.5% HPMC (p / v) em água destilada e foi administrado intraperitonealmente a doses de 1 e 3 mg / kg. O GSK1059865 foi dissolvido em 0.5% HPMC (p / v) em água destilada e administrado por gavagem em doses de 10 e 30 mg / kg. Todas as drogas ou seus veículos foram administrados 1 h antes do acesso ao HPF.

Experiência 4A: Efeito do SB-649868 e Topiramato

Para avaliar o papel dos antagonistas OXR em BE, o antagonista não seletivo de OXR, SB-649868, foi testado em nosso modelo BE.

Os animais foram divididos em quatro grupos de animais 27 cada, pareados por peso corporal e consumo alimentar diário: (1) o grupo não restrito e não exposto ao estresse (NR + NS); (2) o grupo restrito e não exposto ao estresse (R + NS); (3) o grupo não restrito e exposto ao estresse (NR + S); e (4) o grupo restrito e exposto ao estresse (R + S). Uma vez atribuído a um desses grupos, os ratos permaneceram nesse grupo durante todo o estudo. Os ratos expostos ao estresse foram aclimatados em uma sala diferente daquela dos grupos não expostos ao estresse. Os ratos foram expostos a três ciclos consecutivos de 8 dias seguidos pelo teste final no dia 25 (tabela 1):

A agenda adotada para evocar compulsão alimentar

o grupo NR + NS tinha comida ad libitum para 4 dias, nos dias 5 e 6 eles receberam chow + HPF para 2 h; nos dias 7 e 8 eles tinham comida ad libitum; e no dia 25 não foram expostos ao estresse;
o segundo grupo tinha ração e HPF como NR + NS, mas no dia do teste (dia 25) eles foram expostos ao estresse (NR + S);
o terceiro grupo (R + NS) teve restrição restrita a 66% da ingestão normal por 4 dias, foram oferecidos ração e HPF (2 h) nos dias 5 e 6 e somente ração nos dias 7 e 8; no dia 25 eles não foram expostos ao estresse.
o grupo R + S tinha ração restrita a 66% da ingestão normal por 4 dias, foram oferecidos ração e HPF (2 h) nos dias 5 e 6 e somente ração nos dias 7 e 8; e no dia 25 eles foram expostos ao estresse.

O ciclo do dia 8 foi repetido três vezes, mas no terceiro ciclo os animais não tiveram acesso aos alimentos HPF.

No dia 25, cada grupo de ratos 27 foi dividido em três subgrupos e tratados, respectivamente, com veículo, SB-649868, 1 ou 3 mg / kg, dados por gavagem 1 h antes do acesso a HPF.

O consumo de HPF foi expresso como média de kcal / kg ingerido ± SEM; A ingestão de HPF foi medida em 15, 30, 60 e 120 min após o início do acesso. O consumo de pellets de alimentos foi medido apenas em 120 min, devido aos achados de estudos anteriores mostrando que a ingestão de pellets de alimentos era muito pequena, e para evitar perturbações aos animais durante o teste.

Topiramato, usado como composto de referência para este paradigma experimental (Cifani et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), foi testado nos mesmos ratos, 10 dias após o final do experimento SB-649868. Destes animais 108, 72 foram divididos nos mesmos quatro grupos (animais 18 para cada grupo) descritos anteriormente. Após um dia de folga no final do primeiro teste, estes grupos de ratos receberam um ciclo 8-dia adicional: os grupos NR + NS e NR + S tiveram 8 dias de ração ad libitum, enquanto que os grupos R + NS e R + S tiveram dias 4 restrito a 66% da ingestão normal, seguido de 4 dias de ração ad libitum. Neste ciclo adicional, todos os grupos não tiveram acesso ao HPF. No dia seguinte, os grupos NR + S e R + S foram expostos ao estresse, enquanto os grupos NR + NS e R + NS não foram. Neste dia, o topiramato (60 mg / kg) ou o seu veículo foi administrado por gavagem 1 h antes do acesso ao HPF.

Experiência 4B: Efeito de JNJ-10397049 e GSK1059865

Para investigar o OXR envolvido na redução dos episódios de EB, o OX seletivo₂Antagonista R, JNJ-10397049, e o seletivo OX₁O antagonista R, GSK1059865, foi testado em nosso modelo BE.

Um adicional de ratos fêmeas 54, divididos em dois grupos (NR + NS e R + S) de ratos 27, foram submetidos ao mesmo procedimento experimental que no Experimento 4A. Apenas dois grupos de ratos foram utilizados nesta experiência, pois ambos os ratos NR + S e R + NS não apresentam BE. No dia do teste (dia 25), 1 h antes do acesso ao HPF, os ratos foram tratados intraperitonealmente com JNJ-10397049 (1 e 3 mg / kg) ou o seu veículo.

Após um dia de folga no final do teste JNJ-10397049, o mesmo grupo de ratos recebeu um ciclo adicional de 8 dias seguido no dia 10 (como descrito na experiência anterior) pelo tratamento com GSK1059865. GSK1059865 (10 e 30 mg / kg) ou o seu veículo foram administrados por gavagem 1 h antes do acesso ao HPF.

A análise dos dados

Todos os dados são expressos como a média ± SEM e cada valor reflete a média do número de animais por grupo, conforme descrito nas legendas. Os dados foram analisados por ANOVA de duas vias com comparações entre indivíduos para grupos experimentais ou tratamentos com fármacos, e comparação intra-sujeito para o tempo de observação. Post-hoc comparações foram realizadas pelo teste de Bonferroni. Significância estatística foi estabelecida em P

RESULTADOS

Experiência 1: Antagonismo de SB-649868, JNJ-10397049 e GSK1059865 em rOX₁R e rOX₂R

OXA (0.1 nM – 10 μM) aumentou o³H] acumulação de IPs de forma dependente da concentração com um pEC₅₀ valor de 7.79 ± 0.04 (n= 16) e 7.68 ± 0.04 (n= 16) em rOX₁R e rOX₂R, respectivamente. No rOX₁R, JNJ-10397049 (1 μM – 33 μM; Figura 1a) e GSK1059865 (0.3 nM – 10 nM; Figura 2a) produziu antagonismo não superável com um desvio para a direita dependente da dose do OXA EC₅₀ e uma diminuição concomitante da resposta máxima agonista. O p calculadoK_B valores foram 5.73 ± 0.16 (n= 3) e 8.77 ± 0.12 (n= 3) para JNJ-10397049 e GSK1059865, respectivamente. SB-649868 (0.1, 0.3, 0.6 e 1 nM) (Figura 3a) produziu uma redução significativa da resposta máxima do OXA, sem um desvio do agonista EC₅₀. O pIC estimado₅₀ valor foi 9.46 ± 0.02 (n= 3). No rOX₂JNJ-10397049 (10 nM – 0.3 μM) (Figura 1b) e GSK1059865 (0.1 – 3.3 μM) (Figura 2b) produziu um perfil clássico superável com deslocamento paralelo à direita do eixo OXA EC₅₀ sem depressão da resposta máxima do agonista. As inclinações obtidas pela análise de regressão de Schild foram 1.17 (95% CL 0.92-1.42) e 0.86 (95% CL 0.71-1.00) para JNJ-10397049 e GSK1059865, respectivamente, e não foram estatisticamente diferentes de um (P> 0.05). Limitando as encostas a um, o pK_B os valores foram 8.49 (95% CL 8.34 – 8.63; n= 3) e 6.90 (95% CL 6.80 – 6.99; n= 3) para JNJ-10397049 e GSK1059865, respectivamente. SB-649868 (0.1 – 3.3 nM) (Figura 3b) produziu um desvio para a direita dependente da dose do OXA EC₅₀, acompanhado de uma redução da resposta máxima agonista. Aplicando o modelo operacional para análise de antagonismo não competitivo, como descrito em Materiais e Métodos, apK_B valor de 9.35 ± 0.15 (n= 3) foi calculado.

Figura 1

[³Acumulação de fosfatos de inositol (IPs) induzida pelas curvas de concentração-resposta (CRC) da orexina-A (OXA) (.) em células de leucemia basófila de rato (RBL) que expressam: rato OX₁R (rOX₁R) (a) na presença de 1 (Δ), 3.3 (▾), 10 ...

Figura 2

[³Acumulação de fosfatos de inositol (IPs) induzida pelas curvas de concentração-resposta (CRC) da orexina-A (OXA) (.) em células de leucemia basófila de rato (RBL) expressando: rOX₁R (a) na presença de 0.3 (▴), 1 (▾), 3.3 (♦) ...

Figura 3

[³Acumulação de fosfatos de inositol (IPs) induzida pelas curvas de concentração-resposta (CRC) da orexina-A (OXA) (.) em células de leucemia basófila de rato (RBL) expressando: rato rOX₁R (rOX₁R) (a) na presença de 0.1 (□), 0.3 (Δ), ...

Experimento 2: Determinações PK em ratos machos e fêmeas

As determinações de PK em ratos machos foram investigadas nas mesmas condições experimentais do Experimento 3, e elas são mostradas em tabela 2.

Parâmetros farmacocinéticos de SB-649868, JNJ-10397049 e GSK1059865 em ratos machos Sprague-Dawley

C_max de SB-649868 a 3 mg / kg foi de 333 ± 52 ng / ml e AUC 1260 ± 262 ng^*h / ml.

C_max de JNJ-10397049 a 5 mg / kg foi de 14.2 ± 1.0 ng / ml e de AUC 64 ± 4.3 ng^*h / ml.

C_max de GSK1059865 a 10 mg / kg foi de 366 ± 70 ng / ml e AUC 1290 ± 320 ng^*h / ml.

As determinações de PK em ratos fêmeas foram investigadas nas mesmas condições experimentais do Experimento 4, e elas são mostradas em tabela 3.

Parâmetros Farmacocinéticos de SB-649868, JNJ-10397049 e GSK1059865 em Ratas Sprague-Dawley Femininas

C_max de SB-649868 a 3 mg / kg foi de 572 ± 115 ng / ml e AUC 1708 ± 331 ng^*h / ml.

C_max de JNJ-10397049 a 10 mg / kg foi de 369 ± 97 ng / ml e de AUC 457 ± 224 ng^*h / ml.

C_max de GSK1059865 a 10 mg / kg foi de 268 ± 29 ng / ml e AUC 768 ± 46 ng^*h / ml.

Experimento 3: Efeito do SB-649868, JNJ-10397049 e GSK1059865 no modelo de sono de ratos

O perfil hipnótico dos antagonistas OXR foi avaliado durante um período 3-h na fase ativa do rato, iniciando a fase de registro no CT 18 (luzes desligadas no CT 12) do ciclo claro-escuro do rato. CT 18 foi escolhido especificamente para permitir uma janela máxima para avaliar os efeitos hipnóticos dos compostos.

Nestas condições experimentais, o duplo OX₁/BOI₂O antagonista R SB-649868 (3 e 10 mg / kg, por gavagem) induziu uma diminuição robusta na vigília (F (2, 21) = 22.9; P<0.01), e uma diminuição na latência do sono (F (2, 21) = 9.11; P<0.01) em comparação com o grupo controle. O teste de Dunnett após ANOVA mostrou um efeito estatisticamente significativo a 3 e 10 mg / kg (P<0.01) em ambos os parâmetros do sono. A análise dos padrões de sono indica aumentos no sono NREM e REM em ambas as doses (Tabela 4a).

Efeito do SB-649868 (por Gavage) sobre os parâmetros do sono em ratos

O seletivo OX₂O antagonista R JNJ-10397049 (5 e 25 mg / kg, intraperitonealmente) mostrou um efeito hipnótico, como revelado pela diminuição da vigília (F (2, 14) = 18.8; P<0.01) e latência do sono (F (2, 14) = 4.8; P<0.05). O teste de Dunnett após ANOVA mostrou que a diminuição foi estatisticamente significativa a 5 e 25 mg / kg (P<0.01 para vigília e P<0.05 para latência do sono). Um aumento no sono NREM foi observado em ambas as doses (P<0.01), mas nenhum efeito foi observado no sono REM (Tabela 4b).

Efeito do JNJ-10397049 (ip) nos parâmetros do sono em ratos

O seletivo OX₁O antagonista R GSK1059865 (5 e 25 mg / kg, intraperitonealmente) produziu uma tendência para redução da vigília (F (2, 14) = 3.27; P<0.05) e latência do sono (F (2, 20) = 1.73; P> 0.05). A análise dos padrões de sono mostrou um aumento apenas no sono NREM, estatisticamente significativo na dose mais alta testada (P<0.05 teste de Dunnett após ANOVA); nenhum efeito foi observado no sono REM (Tabela 4c).

Efeito do GSK1059865 (ip) nos parâmetros do sono em ratos

Experiência 4A. BE: Efeito do SB-649868 e Topiramato

A ANOVA revelou uma diferença altamente significativa na ingestão de 2-h HPF nos quatro grupos de ratos após a administração do veículo (F (3, 32) = 13.81; P<0.01). Como mostrado em Figura 4, após a administração do veículo, a ingestão de HPF no grupo R + S foi marcadamente superior à do grupo de controlo (NR + NS). A ingestão de HPF de ratos R + S foi muito pronunciada no primeiro 15 min de acesso a ele; A ingestão de HPF do grupo NR + S não foi significativamente diferente da dos controles (NR + NS), indicando que a tensão não foi suficiente para induzir BE. Além disso, a ingestão de HPF do grupo R + NS não foi significativamente diferente da dos controles (NR + NS), indicando que os ciclos de restrição alimentar não são suficientes para induzir BE. Portanto, a BE pode ser causada por uma interação única entre dieta e estresse.

Figura 4

Efeito do SB-649868 (1 e 3 mg / kg, por gavagem) ou do seu veículo na ingestão de alimentos altamente palatáveis (HPF). Os valores são expressos como média ± EPM de nove ratos. ^**P<0.01, diferença de ratos tratados com veículo; onde não indicado, ...

A ingestão de pellets alimentares padrão foi muito pequena (cerca de 3-4% da ingestão total de calorias no teste 2 h), e não foi afetada pela restrição alimentar, estresse ou pela combinação de ambos.

Como mostrado em Figura 4, SB-649868 reduziu significativamente a ingestão de HPF no grupo R + S (F (2, 24) = 18.63; P<0.01), mas não nos outros grupos: NR + NS (F (2, 24) = 0.91; P> 0.05); R + NS (F (2, 24) = 0.16; P> 0.05); NR + S (F (2, 24) = 1.1; P> 0.05). Post-hoc comparações revelaram que o efeito de SB-649868 no grupo R + S foi estatisticamente significativo em todos os momentos em resposta à dose mais elevada de 3 mg / kg. A dose de 1 mg / kg no grupo R + S mostrou uma tendência de redução que não foi estatisticamente significativa.

O teste de topiramato revelou uma diferença altamente significativa na ingestão de 2-h HPF (F (3, 32) = 3.93; P<0.01) dos diferentes grupos após a administração do veículo. O topiramato administrado na seletividade de 60 mg / kg reduziu a ingestão de HPF (F (1, 16) = 6.57; P<0.01) no grupo R + S (Figura 5), mas não nos grupos NR + NS, NR + S e R + NS. Os dados dos grupos NR + S e R + NS não são mostrados.

Figura 5

Efeito do topiramato (60 mg / kg, por gavagem) ou do seu veículo na ingestão de alimentos altamente palatáveis (HPF). Os valores são expressos como média ± EPM de nove ratos. ^*P<0.05, diferença de ratos tratados com veículo; onde não indicado, a diferença ...

Experiência 4B. BE: Efeito de JNJ-10397049 e GSK1059865

Quanto ao experimento anterior, a ANOVA confirmou que o grupo R + S apresentou um aumento significativo da ingestão de HPF (F (1, 16) = 16.17; P<0.01). JNJ-10397049 também não afetou a alimentação no grupo NR + NS (F (2, 26) = 0.23; P> 0.05) ou no grupo R + S (F (2, 24) = 0.49; P> 0.05) (Figura 6a).

Figura 6

Efeito de JNJ-10397049 (1 e 3 mg / kg, intraperitonealmente) (a) ou GSK1059865 (10 e 30 mg / kg, por gavagem) (b) na ingestão de alimentos altamente palatáveis (HPF). Os valores são expressos como média ± EPM de nove ratos. ^*P<0.05, diferença ...

Os resultados obtidos mostram que o OX₂O antagonismo de R não afetou o comportamento alimentar. Assim, o efeito anteriormente observado com SB-649868 foi presumivelmente mediado por OX₁R mecanismos. Para confirmar este achado, a seletiva OX₁O antagonista R GSK1059865 (10 e 30 mg / kg) foi testado. A ANOVA mostrou uma diferença significativa entre os grupos em resposta ao tratamento com veículo (F (1, 16) = 17.1; P<0.01), confirmando o efeito BE no grupo R + S. GSK1059865 (nas doses de 10 e 30 mg / kg) não afetou a alimentação no grupo NR + NS (F (2, 24) = 0.10; P> 0.05). No grupo R + S, a ANOVA mostrou um efeito significativo (F (2, 23) = 4.20, P<0.05) (Figura 6b). Post-hoc comparações revelaram que o efeito de GSK1059865 no grupo R + S nas doses de 10 e 30 mg / kg foi estatisticamente significativo em 15, 30 e 60 min após o acesso livre ao HPF.

DISCUSSÃO

Um grande corpo de evidências sugere que a dieta, o estresse e os estados afetivos negativos representam possíveis fatores desencadeantes do EB em pacientes que sofrem de TCAP ou bulimia nervosa (Wardle et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Freeman e Gil, 2004). De fato, os períodos de dieta são comuns nas histórias de comedores compulsivos, embora a fome em si não pareça ser suficiente para induzir BE na ausência de estresse e estado afetivo negativo (Policial et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Águas et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Evidências consideráveis sugerem que o EB pode ser causado por uma interação única entre dieta e estresse; assim, o estresse ambiental e uma história de restrições alimentares cíclicas podem ser responsáveis por sua precipitação e manutenção (Stice et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Crowther et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Wolff et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Consequentemente, as restrições alimentares recorrentes são consistentemente o mais forte preditor de excessos em resposta ao estresse (Wardle et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.).

A combinação de dieta e estresse também desempenha um papel importante no desenvolvimento de BE em nosso modelo pré-clínico. No modelo desenvolvido por Cifani et al (2009), BE é estimulado pela dieta yo-yo e exposição estressante ao HPF. Neste modelo, as ratas são expostas a ciclos repetidos de restrição e a um procedimento estressante caracterizado pela exposição dos animais ao HPF sem a possibilidade de acesso a ele.

Como afirmado na Introdução, os mecanismos de OX têm sido implicados no controle da alimentação tanto homeostática quanto baseada em recompensa, bem como na motivação para drogas de abuso (Bonci e Borgland, 2009). Em consonância com a ideia de que os sistemas neurais que motivam e reforçam o abuso de drogas podem também estar subjacentes a comportamentos associados à procura e ingestão de alimentos (Gearhardt et al2011b), este estudo investigou a capacidade do antagonista de OXR em bloquear episódios de EB e avaliar o envolvimento de OXR₁ e OX₂ mecanismos de controle dos episódios de EB.

Por esta razão, três compostos relatados na literatura têm uma seletividade diferente vs OX₁ e OX₂ receptores humanos foram testados: o duplo OX₁/BOI₂R antagonista (SB-649868), o seletivo OX₂Antagonista R (JNJ-10397049), e o seletivo OX₁Antagonista R (GSK1059865). Para utilizar doses relevantes farmacológicas, os três antagonistas OXR foram avaliados in vitro em OX recombinante de rato₁R e OX₂R para determinar a potência e confirmar a sua selectividade nesta espécie animal. O diferente OX₁/BOI₂R seletividade foi confirmada em ratos usando³Ensaio de inositol.

Para avaliar a exposição ao sangue PK em apoio aos estudos de sono e BE, os perfis PK dos compostos foram analisados em ratos machos e fêmeas, pois estes foram o sexo usado nos experimentos de sono e BE, respectivamente.

Em seguida, as doses capazes de induzir efeitos hipnóticos foram determinadas em um modelo de rato-sono. Finalmente, os compostos foram testados nas doses definidas no modelo BE.

OX₁R e OX₂Os antagonistas de R são relatados na literatura como envolvidos no controle do sono, em particular para induzir efeitos hipnóticos (Di Fabio et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Gozzi et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Dugovic et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Em um modelo de sono hipnótico pré-clínico em ratos machos, os resultados obtidos demonstraram que o duplo OX₁/BOI₂O antagonista R, SB-649868, induziu um efeito hipnótico robusto, tanto na capacidade de induzir como manter o sono, atingindo um efeito estatisticamente significativo a 3 mg / kg. Semelhante ao SB-649868, o OX₂O antagonista R JNJ-10397049 demonstrou um bom efeito hipnótico com uma diminuição significativa do tempo gasto acordado com 5 mg / kg. Pelo contrário, o OX₁O antagonista R GSK1059865 mostrou uma capacidade hipnótica muito fraca para induzir e manter o sono. Estes resultados estão de acordo com outros relatórios que sugerem que o OX₂R pode ser mais importante que o OX₁R na mediação do efeito OX no sono (Sakurai, 2007; Brisbare-Roch et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Malherbe et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Dugovic et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Di Fabio et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.).

O SB-649868, testado nas quatro diferentes condições de estresse e restrição alimentar (NR + NS, R + NS, NR + S, R + S), foi capaz de reduzir a ingestão de HPF apenas no grupo R + S. Em 3 mg / kg, o SB-649868 teve um efeito semelhante ao observado com o topiramato. Assim como o topiramato, o SB-649868 não modificou a ingestão de HPF nas outras condições de restrição alimentar e estresse.

a OX₂O antagonista R, JNJ-10397049, testado nas mesmas condições, não mostrou qualquer efeito na ingestão de HPF em todas as quatro condições testadas.

Estes resultados indicam claramente que o OX₁R está envolvido no controle de episódios de EB e sugeriu um possível papel do OX₁R antagonistas para reverter os episódios de EB induzidos por estresse e dieta restrita. Para verificar essa hipótese, o OX seletivo₁O antagonista R GSK1059865 foi avaliado em animais restritos e estressados. Os resultados obtidos confirmaram que o OX₁Os antagonistas de R inibiram o aumento na ingestão de HPF em ratos R + S, sem afetar o consumo de alimentos nos controles (NR + NS).

A falta de um efeito de JNJ-10397049 não pode ser atribuída a uma exposição composta insuficiente nos animais submetidos ao modelo BE. A avaliação PK do JNJ-10397049 indicou uma diferença entre os sexos, com as fêmeas mais expostas do que os ratos do sexo masculino com a mesma dose de JNJ-10397049 (10 mg / kg). Os valores de AUC estimados foram 64 ng^*h / ml em ratos machos vs 457 ng^*h / ml em ratos fêmea (aproximadamente sete vezes maior). Por conseguinte, conclui-se que as exposições animais no modelo BE a 1 e 3 mg / kg JNJ-10397049 foram muito superiores às alcançadas no estudo do sono em 5 e 25 mg / kg. Por outro lado, nenhuma diferença entre os sexos foi observada na PK de SB-649868 e GSK1059865, e as exposições aos dois compostos foram sobrepostas em ratos machos e fêmeas.

Como afirmado na Introdução, o estresse é um fator determinante do BE. Diversos conjuntos de dados foram produzidos na última década, apoiando um papel para os peptídeos de OX em estados de alto despertar, incluindo o estresse, sendo este último associado a taxas substancialmente mais altas de neurotransmissão OXérgica. Os neurônios OX no hipotálamo dorsomedial perifornical são propostos para mediar a ativação do estresse (Harris e Aston-Jones, 2006, para uma revisão, veja Koob, 2008). Possivelmente, o OXA dessa área hipotalâmica ativa os neurônios que expressam o CRF no núcleo paraventricular do hipotálamo e no núcleo central da amígdala (Sakamoto et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Consequentemente, o OX₁Os antagonistas de R inibem a reintegração do etanol e da sacarose em busca do induzido pelo estressor farmacológico ioimbina (Richards et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) ea OXA restabelece o comportamento de procura de cocaína (Boutrel et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Recentemente, Kuwaki (2011) Descobriu que o sistema OX é um dos moduladores essenciais nos circuitos neurais que controlam as funções autonômicas e os comportamentos emocionais. Descobertas anteriores de Johnson et al (2010) mostrou que o seletivo OX₁O antagonista R SB334867 atenuou o comportamento semelhante à ansiedade e bloqueou os aumentos nas respostas de locomoção, frequência cardíaca e pressão arterial induzidas pelo desafio com lactato de sódio no rato.

Vários estudos sugerem que uma regulação alterada da dopamina estriatal (DA) pode existir em pacientes com bulimia nervosa e TCAP (Bello e Hajnal, 2010; Broft et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Wang et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Os estudos de Hoebel e colaboradores (para uma revisão, ver Avena e Bocarsly, 2011) revelaram alterações na liberação de DA estriatal e na ligação ao receptor, semelhantes às observadas em resposta a drogas de abuso. Os neuropeptídeos produzidos no LH podem modular a atividade dos neurônios do VTA-DA e do estriado. Os neurônios contendo OX projetam-se do LH para o VTA, onde o OX₁R desempenha um papel fundamental na regulação da transmissão da DA mesolímbica e nas propriedades recompensadoras de várias drogas de abuso e alimentos (Cason et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Uramura et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Zheng et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Além disso, os episódios de BE podem ser controlados através de uma influência específica nos processos de recompensa e reforço para HPF. A esse respeito, é interessante notar que os neurônios OX no LH foram propostos para mediar a ativação da recompensa (para uma revisão, ver Koob, 2008). Assim, sugere-se que os neurônios OX no LH são ativados por estímulos associados com recompensas, como alimentos ou drogas, e a estimulação dos neurônios OX no LH restaura a busca de drogas em ratos (Harris et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.).

Nosso grupo demonstrou recentemente através de uma abordagem de MRI pré-clínica que o OX₁R em vez de OX₂R modula seletivamente a região mesolímbica do cérebro e a parte cortical da ínsula, áreas implicadas no processamento de recompensas (Gozzi et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Esses dados confirmam e estendem as descobertas anteriores de que o OX₁R desempenha um papel no processamento de recompensas e na precipitação do comportamento de busca de drogas (Boutrel et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Lawrence et al, 2006; Hollander et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Smith et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Assim, mais trabalho será necessário para avaliar se o efeito supressor no EB evocado pelo OX₁Os antagonistas de R estão relacionados à sua influência nos mecanismos de estresse ou recompensa, ou em ambos.

Em conclusão, os resultados obtidos neste estudo utilizando três antagonistas OXR com seletividade diferente para OX₁R vs OX₂R demonstrou claramente o papel diferente do OXR no controle de episódios de EB e na modulação do sono. Nossos dados confirmaram o papel principal do OX₂R mecanismos no controle do sono. Além disso, eles mostram pela primeira vez que o OX₁Os mecanismos R desempenham um papel importante no controle dos episódios de EB. Essas descobertas sugerem que o direcionamento do OX₁R pode representar uma interessante nova abordagem farmacológica para o tratamento de transtornos relacionados ao EB.

Agradecimentos

Agradecemos ao Dr. Charles Pickens pela correção estilística do manuscrito.

Notas

EM-P é funcionário em tempo integral da GSK.

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