Comportamento Sexual e Sinais Ambientais Associados ao Sexo Ativam o Sistema Mesolímbico em Ratos Machos (2004)

¹Neurociência Programa de Pós-Graduação, Departamento de Biologia Celular, Neurobiologia e Anatomia, Faculdade de Medicina da Universidade de Cincinnati, Cincinnati, OH, EUA

Correspondência: Dr. LM Coolen, Departamento de Biologia Celular, Neurobiologia e Anatomia, Faculdade de Medicina da Universidade de Cincinnati, Centro Vontz de Estudos Moleculares, Avenida 3125 Eden, Cincinnati, OH 45267-0521, EUA. Tel: + 513 558 1209; Fax: + 513 558 4454; O email: [email protected]

Recebido em 8 de agosto de 2003; Revisado em 6 de outubro de 2003; Aceito em 9 de outubro de 2003; Publicado online em 23 de dezembro de 2003.

Sumário

O sistema mesolímbico desempenha um papel importante na regulação de ambos os comportamentos patológicos, como dependência de drogas e comportamentos normais motivados, como o comportamento sexual. TO presente estudo investigou o mecanismo pelo qual este sistema é endogenamente ativado durante o comportamento sexual. Especificamente, foram estudados os efeitos da experiência sexual e as pistas ambientais relacionadas ao sexo na ativação de vários componentes do sistema mesolímbico.

O sistema mesolímbico consiste em uma projeção dopaminérgica da área tegmental ventral (VTA) para o nucleus accumbens (NAc). Estudos anteriores sugerem que estes neurônios estão sob inibição tônica por interneurônios GABA locais, que por sua vez são modulados por ligantes do receptor opióide mu (MOR). Para testar a hipótese de que os opioides atuam na VTA durante o comportamento sexual, a visualização da internalização da MOR em VTA foi usada como um marcador para a ativação induzida pelo ligante do receptor. Aumentos significativos na internalização MOR foram observados após a cópula ou exposição a sugestões ambientais relacionadas ao sexo. O objetivo seguinte foi determinar se o comportamento sexual ativa os neurônios dopaminérgicos na ATV, usando a tirosina hidroxilase como marcador de neurônios dopaminérgicos e a imunorreatividade de Fos como marcador de ativação neuronal. Aumentos significativos na porcentagem de neurônios dopaminérgicos ativados foram observados após a cópula ou exposição a estímulos ambientais relacionados ao sexo. Além disso, pistas relacionadas ao acasalamento e ao sexo ativaram uma grande população de neurônios não-dopaminérgicos na VTA, bem como neurônios tanto no Núcleo NAc quanto na Shell.. Em conjunto, nossos resultados fornecem evidências neuroanatômicas funcionais de que o sistema mesolímbico é ativado tanto pelo comportamento sexual quanto pela exposição a sinais ambientais relacionados ao sexo.

INTRODUÇÃO

O sistema de dopamina mesolímbica é um componente chave do circuito neural que regula a motivação e a recompensa. Esse sistema pode ser ativado por meio da aplicação exógena de drogas de abuso, muitas vezes resultando em um conjunto patológico de comportamentos conhecido como dependência. No entanto, o sistema mesolímbico também desempenha um papel importante na regulação de comportamentos normais motivados, como alimentação, bebida, agressão e comportamento sexual. Embora numerosos estudos tenham focado na ativação induzida por drogas desta via, menos se sabe sobre a função do sistema mesolímbico sob condições naturais. Portanto, o presente estudo investiga os mecanismos endógenos pelos quais o comportamento sexual ativa o sistema dopaminérgico mesolímbico.

O comportamento sexual de roedores masculinos consiste em uma fase de aproximação apetitiva seguida de uma fase consumatória na qual o animal se monta e se intromete, culminando com a ejaculação (Hull et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Estudos comportamentais indicam que o comportamento sexual de roedores masculinos - e em particular a ejaculação - é um comportamento recompensador e reforçador. Ratos machos desenvolvem prontamente uma preferência de lugar condicionado à cópula (Agmo e Berenfeld, 1990; Agmo e Gomez, 1993; Meisel et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Paredes e Alonso, 1997; Lopez et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Martinez e Paredes, 2001), e realizará tarefas operantes para obter acesso a uma mulher sexualmente receptiva (Everitt et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Everitt e Stacey, 1987).

O sistema dopaminérgico mesolímbico, constituído por neurônios produtores de dopamina (DA) localizados na área tegmentar ventral (VTA) que se projetam para o nucleus accumbens (NAc), desempenha um papel crítico nos aspectos motivados e recompensadores do comportamento sexual. Estudos de microdiálise indicaram que a dopamina é liberada no NAc quando da apresentação da fêmea, e permanece elevada durante toda a exposição do comportamento sexual (Pfaus et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Pfaus e Phillips, 1991; Damsma et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Wenkstern et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Além disso, a infusão de agonistas do receptor DA no NAc facilita o início do comportamento sexual em ratos machos (Everitt et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), enquanto os antagonistas têm efeitos inibitórios (Pfaus e Phillips, 1989). Os neurônios de projeção dopaminérgica na ATV provavelmente estão sob inibição tônica por interneurônios GABAérgicos locais. Estimulação do G_{eu / o}O receptor opióide mu mu-modulado (MOR) resulta na inibição desses neurônios GABAérgicos, o que, por sua vez, leva à desinibição dos neurônios de projeção dopaminérgica e à subsequente liberação de DA no NAc. Este modelo de circuitos é apoiado por múltiplos estudos eletrofisiológicos e farmacológicos (Matthews e alemão, 1984; Johnson e North, 1992; Klitenick et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Ikemoto et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), e é ilustrado em Figura 1. Nossa hipótese é que, durante o comportamento sexual, os opioides endógenos são liberados na VTA, resultando na desinibição dos neurônios de projeção dopaminérgica. Esta hipótese é corroborada por estudos que demonstram que os antagonistas opioides infundidos na VTA inibem a motivação sexual (van Furth e van Ree, 1996). O presente estudo consiste em um conjunto de experimentos destinados a fornecer evidências neuroanatômicas para este modelo.

O primeiro objetivo deste estudo é ampliar nosso conhecimento da distribuição anatômica do MOR na VTA, particularmente com relação aos neurônios GABAérgicos. Apesar da riqueza de dados farmacológicos, relativamente pouco se sabe sobre a organização anatômica deste circuito. Foi demonstrado que o MOR está presente principalmente nos neurônios não-dopaminérgicos na VTA (Garzon e Pickel, 2001). No entanto, não se sabe se o MOR está localizado nos neurônios do GABA.

O objetivo geral do presente estudo é investigar a ativação dos neurônios MOR e DA na VTA durante o comportamento sexual masculino. Primeiro, para testar a hipótese de que os opioides são liberados na VTA durante o comportamento sexual, usamos a internalização da MOR como um marcador para a ativação induzida pelo ligante do receptor. Esta técnica aproveita o facto de os receptores acoplados à proteína G sofrerem endocitose após ligação ao ligando. Em particular, os MORs foram submetidos a endocitose induzida por ligandos in vitro (Keith et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), Bem como in vivo (Eckersell et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Trafton et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Sinchak e Micevych, 2001). As partulas semelhantes a endossomas internalizadas podem ser visualizadas utilizando microscopia confocal e a quantificao destas partulas proporciona uma medida indirecta da libertao de ptidos opides endenos. Além disso, essa técnica permite a resolução celular na determinação dos alvos da ação opioide endógena. Nosso próximo objetivo foi determinar se o comportamento sexual ativa os neurônios DA na VTA. Para abordar esta questão, utilizamos a imunorreatividade de Fos (Fos-IR) como marcador de ativação neuronal. Finalmente, para avaliar se o NAc é ativado durante o comportamento sexual, quantificamos o Fos-IR nas sub-regiões do NAc Core e da Shell.

Experiência e ambiente também desempenham um papel importante na ativação do sistema mesolímbico. Nos seres humanos, os toxicodependentes relatam frequentemente episódios intensos de desejo após a exposição a estímulos ambientais associados a medicamentos (Childress et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Wallace, 1989). Em roedores, a exposição a estímulos associados a drogas leva à ativação condicionada do sistema dopaminérgico mesolímbico, que é evidenciado pelo aumento da liberação de DA (Duvauchelle et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e expressão gênica precoce imediata no NAc (Ostrander et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) após exposição a um ambiente de pareamento de drogas. Sabe-se menos sobre as respostas condicionadas a estímulos ambientais associados a comportamentos normais motivados, como o comportamento sexual. Ratos machos sexualmente experientes exibem aumentos no NAc DA quando expostos a uma fêmea de estro por trás de uma tela de arame (Damsma et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). No entanto, a exposição a roupas de cama sujas por uma fêmea de estro também estimula a liberação de DA no NAc (Mitchell e Gratton, 1991), e não se sabe se a ativação condicionada do sistema mesolímbico é dependente do input olfativo. Portanto, um dos principais objetivos do presente estudo é determinar se as pistas espaciais e táteis associadas ao sexo ativam o sistema mesolímbico, na ausência de estímulo olfativo. Especificamente, usamos os métodos descritos acima para comparar a ativação induzida pelo sexo do sistema mesolímbico em animais com experiência sexual vs animais ingênuos. Além disso, comparamos animais que ganharam experiência em diferentes ambientes, a fim de investigar o efeito de estímulos ambientais relacionados ao sexo na ativação do sistema mesolímbico DA.

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MATERIAIS E MÉTODOS

Animais

Ratos Sprague-Dawley machos adultos (250-260g) foram obtidos de Harlan (Indianapolis, IN) e alojados individualmente em gaiolas de Plexiglas durante a experiência. A sala da colônia foi mantida no ciclo 12 / 12 h de luz invertida-escuro (luzes apagadas no 1000 h). Comida e água estavam disponíveis ad libitum. As fêmeas de estímulo para testes de comportamento de acasalamento foram ovariectomizadas bilateralmente e receberam um implante subcutâneo contendo 5% de benzoato de estradiol (EB) e 95% de colesterol. A receptividade sexual foi induzida pela administração de 500 g progesterona (subcutânea) em 0.1 ml de óleo de gergelim, 5 h antes do teste. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Cincinnati e estão em conformidade com as diretrizes do NIH envolvendo animais vertebrados em pesquisa.

Comportamento Sexual

Oito grupos experimentais foram incluídos neste experimento tabela 1). Esses grupos diferiram na experiência sexual (naïve vs experiente), o ambiente no qual o teste de comportamento sexual foi realizado (gaiola vs gaiola de teste) eo comportamento no dia final do teste (sexo vs controle unmated). Primeiro, os animais foram divididos em quatro grupos diferentes na experiência sexual e no ambiente em que foram testados. O ambiente consistia da gaiola ou gaiola de teste. A gaiola de origem refere-se às gaiolas de Plexiglas padrão nas quais os animais foram alojados individualmente durante a duração da experiência. A gaiola de teste refere-se a uma gaiola diferente da gaiola de origem, ou seja, maior e sem sinais de odor (60 45 50 cm³), na qual os animais foram colocados durante cada sessão de teste (veja abaixo). Esta gaiola de teste foi completamente limpa com solução de álcool (70%) entre as sessões e continha roupa de cama limpa. Os animais dos grupos com experiência sexual foram autorizados a acasalar com uma fêmea receptora a uma ejaculação ou por 60 minutos, o que ocorrer primeiro, durante cinco sessões de pré-teste duas vezes por semana. Durante essas sessões de pré-teste, os animais acasalavam em suas gaiolas domésticas ou na gaiola maior, com roupas de cama limpas. Os animais que adquiriram experiência sexual na gaiola de teste foram colocados na gaiola de teste por 60 minutos antes da introdução da fêmea e depois permitidos acasalar com uma ejaculação ou 60 minutos. Os machos que obtiveram experiência sexual na gaiola doméstica receberam uma fêmea receptiva na gaiola doméstica e foram autorizados a acasalar-se com uma ejaculação ou por 60 min. Na 1 semana após a última sessão de acasalamento pré-teste, os ratos com experiência sexual foram subdivididos aleatoriamente em grupos acasalados ('sexo') e não acasalados ('controle') (total de quatro grupos com experiência sexual, N= 4 cada). Durante o teste final, os animais 'sexuais' foram autorizados a acasalar-se com uma ejaculação no mesmo ambiente em que obtiveram experiência, ou seja, em casa ou em jaula de teste. Assim, os animais que adquiriram experiência sexual nas gaiolas domésticas permaneceram na gaiola doméstica, receberam uma fêmea receptiva e acasalaram-se com uma ejaculação. Os animais que adquiriram experiência sexual na gaiola de teste foram colocados nas gaiolas de teste por 1 h, após o que uma fêmea foi colocada na gaiola de teste e os machos acasalaram com uma ejaculação. 5 minutos após a ejaculação, a parceira foi removida e o macho permaneceu na gaiola doméstica ou na gaiola de teste por 1 h até o sacrifício. Os animais controle não receberam uma parceira receptiva no dia final do teste, mas foram retirados da gaiola doméstica ou colocados na gaiola sem fêmeas receptivas por 2 horas antes do sacrifício, dependendo do ambiente em que adquiriram experiência sexual . Os animais sexualmente ingênuos (animais que não receberam experiência sexual) foram deixados sem perturbações na gaiola doméstica ou foram colocados nas gaiolas de teste sem uma fêmea por 1 h, durante cinco sessões duas vezes por semana. Uma semana após a última sessão de pré-teste, os ratos foram subdivididos aleatoriamente em grupos 'sexo' e 'controle' (total de quatro grupos sexualmente ingênuos, N= 4 cada). Semelhante aos grupos com experiência sexual, o ambiente em que o teste final foi realizado foi o mesmo que durante as sessões de pré-teste. Assim, os machos ingênuos expostos à gaiola de teste durante as sessões de pré-teste foram colocados nas gaiolas de teste por 1 h, após o qual uma fêmea foi colocada na gaiola de teste e os machos acasalaram com uma ejaculação ('sexo') ou foram colocado na gaiola de teste sem uma fêmea receptiva por 2 h (controle não acasalado). Os machos que permaneceram nas gaiolas domésticas receberam uma fêmea receptiva e acasalaram-se com uma ejaculação ('sexo') ou foram mortos na gaiola doméstica (controle não acasalado). Nos grupos 'sexo', a parceira foi removida 5 minutos após a ejaculação, e os machos permaneceram na gaiola doméstica ou na gaiola de teste por 1 h até o sacrifício.

 

Preparação de tecido

Os animais foram profundamente anestesiados com pentobarbital (200 mg / kg) e perfundidos por via transcardial com 100 ml de 0.9% NaCl seguido por 500 ml de 4% paraformaldeído, em tampão fosfato 0.1 M (PB; pH 7.3). Os cérebros foram removidos e pós-fixados para 1 h à temperatura ambiente no fixador, depois colocados em 20% de sacarose em 0.1 M PB e armazenados a 4 ° C. Secções coronais (35 m) foram cortadas em micrótomo de congelamento (Richard Allen, Kalamazoo, MI), coletadas em quatro séries paralelas em solução crioprotetora (30% sacarose, 30% etilenoglicol em 0.1 M PB; Watson et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e armazenado a -20 ° C até processamento posterior.

Imunocitoquímica

Todas as incubações foram realizadas à temperatura ambiente com agitação suave. As secções de flutuação livre foram lavadas extensivamente com solução salina tamponada com fosfato 0.1 M (PBS) entre as incubações. As seções foram incubadas por 10 min com 1% H₂O₂, em seguida, bloqueado para 1 h com solução de incubação (PBS contendo 0.1% albumina de soro bovino e 0.4% triton X-100). Todas as incubações de anticorpos primários foram realizadas na solução de incubação, durante a noite à temperatura ambiente. Após a coloração, as secções foram lavadas cuidadosamente em 0.1 M PB, montadas em lâminas de vidro com 0.3% de gelatina em ddH₂O e lamínula com DPX (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA) ou um meio de montagem aquoso (Gelvatol) contendo um agente anti-desbotamento 1,4-diazabiciclo (2,2) octano (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), preparado conforme descrito anteriormente (Harlow e Lane, 1988). Os controlos imunocitoquicos incluam a omiss de anticorpos primios. As séries VTA e / ou NAc foram coradas para os seguintes marcadores:

Fos / TH

 

As secções VTA e NAc foram incubadas durante a noite com um anticorpo policlonal de coelho para c-Fos (1: SC-7500; Santa Cruz Biotecnologia, Santa Cruz, CA) seguido de uma hora de incubação com IgG anti-coelho de burro biotinilado (52: 1 ; Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) e complexo de avidina-peroxidase de rábano (400: 1; ABC Elite Kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA). Finalmente, as seções foram incubadas por 1000 min em 10%. diaminobenzidina (DAB; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) em 0.02 M PB contendo 0.1% de peróxido de hidrogénio e 0.012% de sulfato de níquel, resultando num produto de reacção azul-preto. Em seguida, as secções de VTA foram incubadas durante a noite com anticorpo monoclonal de ratinho para tirosina hidroxilase (TH; 0.08: 1 400; Chemicon International, Temecula, CA), anticorpo secundário anti-IgG de murganho biotinilado (000: 1; Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) e ABC como descrito acima. Finalmente, as secções foram incubadas para 400 min em 10% DAB em 0.02 M PB contendo 0.1% de peróxido de hidrogénio, resultando num produto de reacção castanho-avermelhado.

MOR

 

Secções de VTA foram incubadas durante a noite com um anticorpo policonalco de coelho reconhecendo a região do terminal C do rato MOR1 (1: 10 000; DiaSorin, Saluggia, Itália), IgG anti-coelho de burro biotinilado e ABC, como descrito acima. Em seguida, as seções foram incubadas por 10 min com tiramida biotinilada (BT; 1: 250 em PBS + 0.003% H₂O₂; Kit de amplificação de sinal Tyramide, NEN Life Sciences, Boston, MA) e para 30 min com steptavidina conjugada com CY-3 (1: 200; Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA).

GABA / MOR

 

As secções de VTA foram incubadas durante a noite com um anticorpo monoclonal de ratinho para GABA (1: 1000 em PBS / BSA sem TX; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) e para 30 min com anti-IgG de murganho de cabra conjugado com Alexa 488 (1: 200 em PBS / BSA, Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA). As secções foram então coradas para MOR, como descrito acima.

GAD / TH

 

As secções de VTA foram incubadas com um anticorpo policlonal de coelho reconhecendo a descarboxilase do ácido glutâmico (GAD; 1: Chemicon International, Temecula, CA), seguido por incubações com estreptavidina de burro anti-coelho de biotina, ABC, BT e CY-1500 , como descrito acima. Em seguida, as seções foram incubadas com um anticorpo monoclonal de camundongo para tirosina hidroxilase (TH; 3: 1 40; Chemicon International, Temecula, CA), seguido por uma incubação 000-min com anti-IgG de camundongo conjugada com Alexa 30 (488: 1 ; Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA).

Análise de Dados

Anatomia VTA

 

Para análise anatômica do VTA, pilhas de 1 m seções ópticas foram capturadas ao longo do zEixo, usando um microscópio de varredura a laser Zeiss LSM-510. A fluorescência CY3 foi obtida com um filtro de emissão 567 nm e um laser He-Ne, e um filtro de emissão Alexa 488 com 505 nm e laser de argônio. A distribuição das fibras GAD-IR em relação aos neurônios TH foi investigada. Além disso, a localização do MOR em relação aos corpos celulares GABA-IR foi investigada e a distribuição rostrocaudal de neurônios MOR-IR co-expressando GABA foi quantificada em um animal. Além disso, a distribuição rostrocaudal em corpos celulares MOR-IR ao longo da VTA foi analisada em três animais.

Comportamento sexual

 

Cada pré-teste e final de sessão de acasalamento foi observado e o comportamento sexual foi registrado: número de montagens (#M), número de intromissões (#I), latências de montagem e intromissão (ML e IL, ou seja, o tempo de apresentação da fêmea ao primeiro monte ou intromissão), e latência da ejaculação (EL; o tempo desde a primeira intromissão até a ejaculação). Os resultados de cada medida para o último dia das sessões de acasalamento antes do teste foram analisados ​​usando uma ANOVA unidirecional, para determinar se o ambiente de acasalamento (gaiola em casa vs gaiola de teste) afetou a experiência sexual. Os resultados do dia final do teste foram analisados ​​usando ANOVA two-way (fatores: experiência, ambiente) e post hoc as comparações foram realizadas com o PLSD de Fisher, todos com níveis de significância de 5%.

Internalização MOR

 

Para análise quantitativa da contagem de endossomos em neurônios VTA, z-pilhas de 1 m seções ópticas através dos neurônios 15-30 foram capturadas usando um sistema de microscópio confocal Zeiss de varredura a laser (Zeiss LSM-510). De cada pilha de imagens através dos neurônios, duas seções consecutivas no meio do neurônio foram usadas para análise. Os números de partículas intracelulares imunorreactivas foram contados para cada célula por um observador cego para o grupo experimental, e foram calculados a média por animal. Além disso, a porcentagem de células MOR-IR internalizadas foi quantificada; Os neurônios MOR-IR contendo três ou mais partículas intracelulares imunorreativas foram considerados internalizados. Os resultados foram analisados ​​por meio de uma ANOVA de três fatores (fatores: acasalamento, experiência e ambiente) e post hoc comparações (PLSD de Fisher) usando níveis de significância de 5%. As imagens foram importadas para o Adobe Photoshop 7.0 (Adobe Systems, San Jose, CA) para compor as figuras. As imagens não foram ajustadas ou alteradas de maneira alguma, exceto pelo brilho.

Fos / TH

 

Utilizando um tubo de desenho ligado a um microscópio Leica (Leica Microsystems; Wetzlar, Alemanha), foram feitos desenhos de câmara lúcida das secções analisadas de cada animal. No VTA, os desenhos da câmera lúcida foram feitos de quatro seções aproximadamente 280 distantes, representativos de quatro níveis rostrais a caudais na VTA (Figura 2). Utilizando a coloração TH e a localização do lemnisco medial (ml) e do fascículo retroflexo (fr) como pontos de referência, definiram-se áreas padrão para contagem de núcleos Fos-IR e células Fos / TH duplamente marcadas. As contagens de células foram realizadas em áreas padrão variando de 2.16 mm² (rostral e dois níveis médios) para 1.6 mm² (nível mais caudal). No NAc, os desenhos de câmara lúcida foram feitos de três seções aproximadamente 600 distantes, representativos de três níveis rostrais a caudais no NAc (Figura 3). Em cada nível, áreas padrão de 0.24 mm² foram definidos, em que para contar os núcleos Fos-IR no Núcleo NAc e NAc Shell. As médias dos grupos foram calculadas para cada nível rostral a caudal separado em NAc e VTA. Além disso, uma média dos quatro (VTA) ou três (NAc) rostral para caudal foram calculados por animal, e as médias do grupo foram baseadas em médias animais. Os resultados foram analisados ​​por meio de uma ANOVA de três fatores (fatores: acasalamento, experiência e ambiente) e post hoc comparações (PLSD de Fisher) usando níveis de significância de 5%. Especificamente, foram feitas comparações dentro de cada nível rostrocaudal entre: (1) cada grupo sexual e o grupo controle correspondente, (2) todos os grupos controle e (3) todos os grupos sexuais. Imagens digitais de seções imunocoradas foram capturadas usando uma câmera digital (Magnafire, Optronics) acoplada a um microscópio Leica (Leica Microsystems; Wetzlar, Alemanha). As imagens foram importadas para o Adobe Photoshop 7.0 (Adobe Systems, San Jose, CA) para compor as figuras. As imagens não foram ajustadas ou alteradas de maneira alguma, exceto pelo ajuste ocasional do brilho.

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RESULTADOS

Anatomia VTA

MOR-IR foi observado em ambos os terminais axônicos e corpos celulares (Figura 4a) e nas fibras em justaposição aos neurônios GABA-IR. Além disso, foi observado que a MOR-IR se colocalizou com GABA-IR em corpos celulares (Figura 4a). Aproximadamente 79% de neurônios MOR-IR co-expressam GABA-IR na porção rostral da ATV onde a maioria dos neurônios MOR-IR está localizada. Poucos neurônios MOR-IR foram observados na VTA caudal, embora aproximadamente 50% desses neurônios MOR-IR coexpressam o GABA. Além disso, observamos as fibras GAD-IR em justaposição aos neurônios TH-IR ao longo da VTA (Figura 4b).

 

Comportamento Sexual

As medidas para o comportamento sexual no último dia das sessões de acasalamento pré-teste dos machos sexualmente experientes são ilustradas tabela 2. O ambiente em que os machos experientes adquiriram sua experiência não afetou nenhum dos parâmetros analisados ​​do comportamento sexual (tabela 2). Em particular, no último dia das sessões de acasalamento antes do teste, não houve diferenças entre os machos que se acasalaram na gaiola ou na gaiola de teste. As medidas para o comportamento sexual durante o dia do teste são ilustradas tabela 3. Diferenças significativas foram observadas entre os machos ingênuos e experientes no dia do teste (F_(1,12)= 8.927; p= 0.0113; tabela 3). Naïve machos que acasalaram na gaiola de teste tiveram maior número de montagens e latências mais longas para montar, intromissão e ejaculação, em comparação com machos experientes que se acasalaram ou na gaiola de teste ou na gaiola de origem. Observamos uma tendência semelhante nos machos ingênuos que se acasalaram na gaiola, embora as diferenças não tenham alcançado significância post hoc testes. Diferenças estatisticamente significativas no comportamento sexual entre machos ingênuos que acasalaram em casa vs gaiola de teste só foram observados em IL, que foi maior em machos naïves que se acasalaram na gaiola de teste.

 

MOR Internalização

A internalização induzida por MOR foi analisada em neurônios localizados na VTA rostral (Figura 4c, d), onde a maioria dos corpos celulares MOR-IR estavam localizados. Comportamento sexual aumentou significativamente a internalização MOR na VTA (F_(1,23)= 112.382; p<0.0001). Aumentos significativos induzidos por acasalamento no número de partículas semelhantes ao endossomo MOR-IR foram observados em todos os machos que acasalaram no dia do teste, em comparação com seus controles (Figura 5a, preenchidas vs barras abertas; p<0.03). Além disso, a exposição apenas ao ambiente relacionado ao sexo também resultou em um aumento significativo da internalização do MOR. Em particular, uma interação de três vias entre o acasalamento, experiência e ambiente foi observada (F₍₁₂₃₎= 16.370; p= 0.0005) e post hoc a análise indicou que a internalização do MOR foi significativamente aumentada em homens experientes que foram colocados no ambiente em que receberam experiência sexual anterior, mas não se acasalaram no dia do teste quando comparados com todos os outros grupos de controlo não pareados (Figura 5a, barras abertas; p<0.05). O comportamento sexual também aumentou significativamente a porcentagem de neurônios MOR-IR que mostraram internalização (F_(1,23)= 136.312; p<0.0001). Em particular, uma proporção maior de neurônios MOR-IR internalizados foi observada em machos que acasalaram no dia do teste em comparação com seus controles não acasalados (Figura 5b, preenchidas vs barras abertas; p<0.03), e em machos sexualmente experientes que foram expostos ao ambiente relacionado ao sexo, mas não acasalaram em comparação com todos os outros grupos de controle não acasalados (Figura 5b, barras abertas; p

 

Expressão Fos em Neurônios Dopaminérgicos

O comportamento sexual e a exposição ao ambiente relacionado ao sexo resultaram na ativação de neurônios dopaminérgicos em todo o VTA (Figuras 4e, f e 6). Houve efeito significativo do acasalamento na porcentagem de células TH expressando Fos ao longo da VTA (F_(1,24)= 99.774; p Post hoc A análise indicou aumentos significativos na expressão de Fos em machos não castrados que se acasalaram em casa ou gaiola de teste em comparação com seus controles não pareados, e em machos experientes que se acasalaram na gaiola em comparação com seus controles não pareados (Figura 6, p<0.0001). Além disso, foi observada uma interação de mão dupla entre o acasalamento e o ambiente (F_(1,24)= 12.479; p= 0.0017). Post hoc a análise indicou que a porcentagem de células TH ativadas foi significativamente aumentada em machos controles não casados ​​e experientes que foram expostos ao ambiente no qual eles receberam experiência sexual prévia em comparação com todos os outros grupos de controle não pareados (Figura 6, p<0.001). Curiosamente, o acasalamento não aumentou ainda mais as porcentagens de neurônios TH ativados em machos experientes, em relação à ativação induzida por sugestão observada nos controles não acasalados. No geral, as porcentagens de neurônios TH ativados por sexo / ambiente pareceram mais altas nos níveis rostrais do VTA em comparação com os níveis caudais, embora isso não tenha sido analisado estatisticamente (tabela 4).

 

Expressão Fos em Neurônios Nopropaminérgicos

Embora o comportamento sexual e as pistas relacionadas ao sexo induziram a expressão de Fos em neurônios TH, a maioria (80-90%) de neurônios Fos-IR na VTA não expressou TH. A análise da expressão de Fos nestes neurônios não-dopaminérgicos revelou um padrão de indução semelhante ao dos neurônios TH (Figura 7). Especificamente, foi observado um efeito significativo do acasalamento na expressão de Fos (F_(1,24)= 40.093, p<0.0001), e aumentos significativos induzidos por acasalamento no número de neurônios Fos-IR estavam presentes nos machos ingênuos e experientes que acasalaram nas jaulas caseiras em comparação com seus controles não acasalados, bem como nos machos ingênuos que acasalaram na gaiola de teste em comparação com seus controles não acoplados (Figura 7, p<0.006). Além disso, houve uma interação significativa entre o acasalamento e o ambiente (F_(1,24)= 5.288, p= 0.0305), e um aumento significativo na expressão de Fos foi observado em machos experientes não casados ​​que foram colocados no ambiente em que haviam recebido experiência sexual prévia em comparação com todos os outros grupos de controle não pareados (Figura 7, p<0.02). O comportamento sexual em machos experientes que acasalaram na gaiola de teste não aumentou ainda mais o nível de expressão de Fos em comparação com seus controles não acasalados. A análise da expressão de Fos em cada um dos níveis rostrocaudais separados do VTA revelou um padrão semelhante de expressão de Fos descrito acima para o VTA total. No entanto, a maioria dos neurônios Fos-IR foi observada nos níveis rostrais do VTA (tabela 5), embora diferenças na expressão de Fos entre os níveis rostrocaudais não tenham sido analisadas estatisticamente.

 

Expressão Fos no NAc

Comportamento sexual e exposição ao ambiente relacionado ao sexo resultou em ativação neuronal no NAc (Figura 8). Houve um efeito significativo de acasalamento no número de células expressando Fos no Núcleo NAc (F_(1,24)= 457.265, p<0.0001) e NAc Shell (F_(1,24)= 234.159, p<0.0001). No NAc Core, um aumento significativo induzido por acasalamento no número de neurônios ativados estava presente em todos os machos que acasalaram no dia do teste em comparação com seus controles (Figura 8b, p<0.0001). Além disso, uma interação de mão dupla foi observada entre o acasalamento e o ambiente (F_(1,24)= 3.244, p= 0.0294). Post hoc A análise revelou que o número de células ativadas foi significativamente aumentado em machos controles não casados ​​e experientes que foram expostos ao ambiente em que receberam experiência sexual prévia (Figura 8b, p<0.002). Da mesma forma, no escudo NAc, um aumento significativo induzido por acasalamento no número de neurônios ativados estava presente em todos os machos que acasalaram no dia do teste em comparação com seus controles (Figura 8a, p<0.0001). Além disso, uma interação de mão dupla foi observada entre o acasalamento e o ambiente (F_(1,24)= 8.725; p= 0.0069). Post hoc A análise revelou que o número de células ativadas foi significativamente aumentado em machos controles experientes que foram expostos ao ambiente no qual eles receberam experiência sexual prévia em comparação com todos os outros grupos de controle não pareados (Figura 8a, p<0.005). Os resultados de todos os três níveis rostrocaudais são apresentados em Tabela 6a eb.

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DISCUSSÃO

O presente estudo fornece a primeira evidência anatômica direta de que tanto o MOR como os neurônios dopaminérgicos da ATV são ativados durante o comportamento sexual. Estes resultados confirmam achados anteriores por microdiálise e estudos farmacológicos sugerindo que a via mesolímbica é ativada durante o comportamento sexual. Primeiro, foi demonstrado que o acasalamento resulta em ativação induzida por ligante de MOR em neurônios VTA, sugerindo que a ativação da VTA é mediada por opioides endógenos liberados durante o comportamento sexual. Em segundo lugar, foi demonstrado que o acasalamento resulta na ativação de neurônios DA na VTA, potencialmente contribuindo para a liberação da DA no NAc.. De fato, um padrão semelhante de ativação induzida pelo acasalamento foi observado em neurônios NAc, possivelmente devido à liberação de DA. Finalmente, o comportamento sexual resultou na ativação de neurônios não-dopaminérgicos na VTA. Curiosamente, todos esses efeitos também foram observados em resposta a sinais ambientais espaciais e táteis associados a experiências sexuais anteriores. Tomados em conjunto, estes dados apoiam o envolvimento da via mesolímbica no comportamento sexual masculino e na recompensa.

O presente estudo marca a primeira demonstração da ativação do MOR na VTA por um comportamento natural ou por sugestões ambientais. Outros utilizaram técnicas semelhantes para visualizar a ativação da MOR em outras áreas do cérebro e medula espinhal, em resposta a opióides aplicados exogenamente (Keith et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Trafton et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e estrogénio (Eckersell et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Sinchak e Micevych, 2001). Estudos recentes do nosso laboratório mostraram que o comportamento sexual causa a internalização do MOR no núcleo pré-óptico medial do hipotálamo em ratos machos (Coolen et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). No presente estudo, a internalização do MOR foi detectada na VTA seguindo o comportamento sexual e as indicações ambientais associadas ao sexo, sugerindo que os peptídeos opióides endógenos são liberados em resposta a esses estímulos. Embora esta técnica forneça um marcador útil para a ativação endógena de MOR, é um marcador indireto para liberação de opióides. Além disso, o ligante opióide específico envolvido na ativação de MOR em VTA não foi identificado. Estudos anatômicos mostram tanto beta-endorfina (Mansour et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.) e encefalina (Johnson et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Fallon e Leslie, 1986) terminais na VTA, e evidências farmacológicas mostram que ambos os peptídeos podem ativar o sistema mesolímbico DA (Broekkamp et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Stinus et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Dauge et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Além disso, relatórios recentes indicaram a presença dos ligandos endomorfina-1 e -2 altamente específicos da MOR na VTA (Greenwell et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Embora o presente estudo tenha se concentrado exclusivamente no MOR, é possível que outros receptores opioides também estejam envolvidos na ativação induzida pelo sexo do sistema mesolímbico. Estudos auto-radiográficos mostram que os receptores opióides delta e kappa estão presentes na VTA, embora em densidades muito menores em comparação com o MOR (Mansour et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works., 1988; Dilts e Kalivas, 1990; Xia e Haddad, 1991). Além disso, os agonistas delta infundidos no VTA são 100-1000 vezes menos potentes na estimulação da liberação de DA no NAc, enquanto os agonistas kappa não conseguem fazê-lo completamente (Divino et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.), sugerindo que a ativação induzida por sexo da via mesolímbica da DA ocorre primariamente via ativação da MOR.

Os dados anatômicos do presente estudo confirmam a evidência de que o MOR ativa indiretamente os neurônios da dopamina mesolímbica através da inibição dos interneurônios do GABA. Usando microscopia confocal, MOR foram observados em ambos os corpos celulares e fibras GABAergic em justaposição aos neurônios GABAérgicos. Essas fibras tinham a aparência de botões, indicativos de terminais axônicos; portanto, o MOR parece estar localizado pré-sináptico aos corpos celulares GABAérgicos. Esses achados estão de acordo com observações anteriores de que o MOR na VTA não está localizado nos neurônios DA (Garzon e Pickel, 2001), sugerindo um relacionamento indireto. Além disso, estudos farmacológicos mostraram que os agonistas MOR inibem a ativação de neurônios GABA, estimulam o disparo de neurônios DA e aumentam a liberação de DA no NAc (Matthews e alemão, 1984; Leão et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Johnson e North, 1992). No presente estudo, a análise da internalização induzida pelo acasalamento foi restrita à porção rostral da VTA, onde a maioria dos corpos celulares contendo MOR está localizada. Nessa região, 79% dos corpos celulares contendo MOR eram GABAérgicos, sugerindo que a maior parte da internalização do MOR estava nos neurônios GABAérgicos. No entanto, não está claro se todos os neurônios GABAérgicos que observamos na VTA são interneurônios locais, uma vez que os neurônios GABA também enviam projeções para o NAc ou córtex pré-frontal (Carr e Sesack, 2000). No entanto, esses resultados fornecem evidências adicionais de que, durante o comportamento natural motivado, os ligantes MOR inibem os interneurônios GABAérgicos, resultando na ativação de neurônios dopaminérgicos na VTA e liberação de DA no NAc.

O presente estudo também demonstra ativação induzida por sexo de neurônios DA na VTA. Embora não tenha sido demonstrado diretamente que a ativação do MOR causou a ativação dos neurônios DA, o mesmo padrão de ativação foi observado em ambos os sistemas - isto é, ativação tanto por comportamento sexual quanto por estímulos ambientais relacionados ao sexo - sugerindo que a ativação neural no MOR e os sistemas DA podem estar correlacionados. Atualmente, não se sabe se os neurônios VTA DA ativados se projetam para o NAc. No entanto, evidências anatômicas mostraram que o NAc é o principal alvo da projeção de AD da VTA (Swanson, 1982). Além disso, foi demonstrado que a Fos-IR induzida pela morfina no NAc é um resultado da ação opióide na VTA (Bontempi e Sharp, 1997). Os presentes dados apóiam ainda este modelo e indicam que os opioides endógenos liberados na ATV iniciam a ativação dessa via mesolímbica durante o comportamento sexual masculino. Além disso, a expressão de Fos induzida por sexo e estímulo foi observada tanto no núcleo quanto no invólucro de NAc. Estas sub-regiões do NAc diferem em suas características histoquímicas e conectividade com outros componentes do circuito que mede a motivação e a recompensa (Heimer et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Kelley, 1999; Zahm, 1999). Em particular, o Núcleo NAc possui semelhanças com o corpo estriado dorsal e envia projeções para as estruturas clássicas de saída dos gânglios da base, incluindo o pálidal ventral, o núcleo subtalâmico e a substantia nigra. Por outro lado, a concha NAc envia projeções principalmente para estruturas límbicas como VTA, hipotálamo lateral e centros autonômicos de tronco encefálico (Heimer et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.; Zahm e Brog, 1992). Assim, o comportamento sexual e as pistas associadas ao sexo resultam na ativação de componentes mesolímbicos relacionados à função motora voluntária, bem como motivação e emoção.

Embora os presentes resultados mostrem que os principais componentes da via da dopamina mesolímbica são ativados durante o comportamento sexual masculino, não está claro quando durante o comportamento esta ativação ocorre. De fato, é possível que a ativação desse sistema possa ocorrer em momentos diferentes durante o comportamento em crianças sexualmente ingênuas. vs animais experientes. Especificamente, a VTA e NAc foram ativadas em resposta a estímulos ambientais relacionados ao sexo, na ausência de interação com uma parceira, o que sugere que os opioides são liberados durante a fase apetitiva do comportamento. Esse raciocínio está de acordo com os estudos de Shultz que mostram atividade dopaminérgica no VTA de macacos quando a recompensa é antecipada (Schultz, 2001). No presente estudo, o ambiente de acasalamento parece atuar como um estímulo condicionado predizendo a recompensa sexual. Curiosamente, não apenas os neurônios dopaminérgicos foram ativados pela recompensa prevista, mas também a ativação do MOR foi observada. Assim, os opioides endógenos na ATV podem levar à ativação desse circuito em resposta a estímulos ambientais preditivos de recompensa. Em contraste, Schultz (2001) ilustrou que, quando a recompensa não era prevista, os neurônios de dopamina eram ativados durante a apresentação da recompensa. De acordo com essa hipótese, é possível que, em animais sexualmente ingênuos, a ativação da via da dopamina mesolímbica ocorra durante a recompensa sexual não prevista. Relatórios anteriores indicaram que a ejaculação é o componente mais recompensador do comportamento sexual (Agmo e Berenfeld, 1990; Lopez et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). No entanto, estudos de microdiálise mostraram que os odores de uma fêmea receptiva podem induzir liberação de DA no NAc, mesmo em machos sexualmente ingênuos. (Wenkstern et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Atualmente, não está claro se a exposição a odores femininos tem um valor recompensador ou preditivo para homens sexualmente ingênuos.

Estudos farmacológicos sugerem que o sistema mesolímbico envolvido nos aspectos motivacionais do comportamento sexual. Os agonistas de MORF diretamente infundidos na ATV facilitam o comportamento sexual (Mitchell e Stewart, 1990). Por outro lado, a naloxona diminui o número de mudanças de nível antecipatório em uma câmara de dois níveis, uma medida de motivação sexual (van Furth e van Ree, 1996). As lesões 6-Hidroxidopamina (6-OHDA) e os antagonistas DA no NAc causam reduções de desempenho semelhantes neste teste (van Furth et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Além disso, as lesões 6-OHDA do NAc retardam o início do comportamento sexual e prejudicam a ereção sem contato em ratos machos, sugerindo que o DA está envolvido na excitação sexual em resposta a estímulos externos (Liu et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). Essas manipulações não alteraram o desempenho sexual, sugerindo que essa via está envolvida nos aspectos motivacionais do comportamento, e não na fase consumatória. Além disso, os antagonistas dos receptores DA ou receptores opióides inibem o desenvolvimento da preferência de lugar condicionado pelo comportamento sexual (Agmo e Berenfeld, 1990; Meisel et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.).

Curiosamente, também observamos que muitos neurônios não-dopaminérgicos na ATV foram ativados tanto pelo comportamento sexual quanto por estímulos ambientais relacionados ao sexo. Isso sugere que outras vias que não a ativação de neurônios DA via opioides endógenos podem estar envolvidas na ativação da VTA. De fato, outras regiões cerebrais associadas à recompensa, como o córtex pré-frontal medial (mPFC), fornecem estímulo excitatório para os neurônios não-dopaminérgicos na ATV. (Sesack e Pickel, 1992; Carr e Sesack, 2000). Especificamente, os aferentes mPFC projetam para interneurônios VTA GABAérgicos e neurônios de projeção mesoacumbais GABAérgicos, mas não para neurônios GABAérgicos mesocorticais. (Carr e Sesack, 2000). Mais estudos são necessários para investigar as conexões e o fenótipo neuroquímico dos neurônios não-ativados por sexo na VTA, bem como sua importância para a motivação e recompensa sexual.

Por fim, os resultados do presente estudo sugerem a existência de diferenças rostrocaudais na ativação induzida pelo sexo da ATV, embora essas diferenças não tenham sido analisadas estatisticamente no presente estudo. Curiosamente, Bolanos e seus colegas demonstraram recentemente a possibilidade de regiões topográficas distintas dentro da VTA mediarem geralmente vs respostas negativas aos estímulos emocionais. Em particular, eles demonstraram que a superexpressão da fosfolipase C1 (PLC1) no VTA rostral aumenta a preferência por morfina e sacarose, enquanto PLCA superexpressão de 1 na VTA caudal diminui a preferência de recompensa e aumenta a sensibilidade a estímulos aversivos (Bolanos et albordados escolares americanos dos séculos XVIII, XIX e XX, bandeiras regimentais da Guerra Civil e bandeiras e estandartes de campanhas políticas do século XIX. Virginia é membro da Art Conservators Alliance e Fellow do American Institute for Conservation of Historic and Artistic Works.). De acordo, os resultados do presente estudo sugerem que a VTA rostral, mas não caudal, pode mediar a motivação e recompensa sexual.

Em conclusão, o estudo atual demonstra a ativação do sistema mesolímbico durante um comportamento natural motivado - comportamento sexual masculino. Especificamente, a ativação desse sistema está relacionada ao comportamento de acasalamento, bem como a pistas ambientais associadas a experiências sexuais anteriores. O sistema mesolímbico está intimamente envolvido no abuso de drogas - um comportamento motivado 'não natural' (Sábio, 1996). Ao estudar a função deste sistema em condições naturais, podemos obter uma melhor compreensão do seu papel na dependência de drogas.

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