Differentiell Expression av FosB Proteiner och Potentiella Målgener i Select Brainregioner av Addiction and Depression Patients (2016)

  • Paula A. Gajewski,
  • Gustavo Turecki,
  • Alfred J. Robison

Publicerad: augusti 5, 2016

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355

Abstrakt

Kronisk exponering för stress eller missbruk av droger har kopplats till förändrat genuttryck i hela kroppen, och förändringar i genuttryck i diskreta hjärnregioner antas ligga till grund för många psykiatriska sjukdomar, inklusive stor depressiv sjukdom och narkotikamissbruk. Prekliniska modeller av dessa sjukdomar har givit bevis för mekanismer för detta förändrade genuttryck, inklusive transkriptionsfaktorer, men bevis som stöder en roll för dessa faktorer hos humana patienter har varit långsamma att framträda. Transkriptionsfaktorn ΔFosB induceras i prefrontal cortex (PFC) och hippocampus (HPC) hos gnagare som svar på stress eller kokain, och dess uttryck i dessa regioner antas reglera deras "top down" -kontroll av belöningskretsar, inklusive kärnan accumbens (NAc). Här använder vi biokemi för att undersöka uttrycket av FosB familj av transkriptionsfaktorer och deras potentiella genmål i PFC- och HPC-postmortemprover från deprimerade patienter och kokainmissbrukare. Vi visar att ΔFosB och andra FosB isoformer är nedreglerade i HPC men inte PFC i hjärnorna hos både deprimerade och beroende personer. Vidare visar vi att potentiella ΔFosB transkriptionella mål, inklusive GluA2, också nedregleras i HPC men inte PFC för kokainmissbrukare. Således tillhandahåller vi de första bevisen på FosB genuttryck i humant HPC och PFC i dessa psykiatriska störningar och i ljuset av de senaste resultaten som visar den kritiska rollen som HPC ΔFosB i gnagaremodeller av inlärning och minne, tyder dessa data på att reducerad ΔFosB i HPC kan potentiellt ligga till grund för kognitiva underskott som åtföljer kronisk kokainmissbruk eller depression.  

Citation: Gajewski PA, Turecki G, Robison AJ (2016) Differentiell Expression av FosB Proteiner och Potentiella Målgener i Select Brainregioner av Addiction and Depression Patients. PLOS ONE 11 (8): e0160355. doi: 10.1371 / journal.pone.0160355

Redaktör: Ryan K. Bachtell, University of Colorado Boulder, USA

Mottagen: Februari 29, 2016; Accepterad: Juli 18, 2016; Publicerad: Augusti 5, 2016

Upphovsrätt: © 2016 Gajewski et al. Detta är en öppen åtkomstartikel som distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i vilket medium som helst, förutsatt att den ursprungliga författaren och källan krediteras.

Data Tillgänglighet: Alla relevanta uppgifter finns i papperet.

finansiering: Författare PAG fick lönstöd från ett bidrag till författaren AJR från Whitehall Foundation. Fundrarna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera eller förbereda manuskriptet.

Konkurrerande intressen: Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen existerar.

Beskrivning

De molekylära och kretsnivåmekanismerna hos psykiatriska sjukdomar som depression och missbruk förstår inte fullt ut, och denna kunskap är avgörande för en rationell utveckling av nya och bättre behandlingar. Förändringar i genuttryck i nukleär accumbens (NAc) och hjärnregionerna som utövar kontroll över NAc-funktionen, som prefrontal cortex (PFC) och hippocampus (HPC), har medverkat i patogenesen av missbruk och depression av många studier i både modellorganismer och i människa hjärnan efter slakt [1-5]. Många nuvarande behandlingar för depression verkar genom kronisk förstärkning av serotonerg och / eller dopaminerg signalering, och i stort sett alla missbruksmedel påverkar dopamin-signalering i NAc. Dessutom är missbruk och depression mycket comorbida, med nästan en tredjedel av patienterna med stor depressiv sjukdom som också har substansanvändning och comorbiditet som ger högre risk för självmord och större social och personlig försämring [6, 7]. Sammantaget tyder dessa data på att kroniska missbildningar i mesolimbisk dopaminkrets och sammanhängande strukturer kan ligga till grund för både beroende och depression, och att förändringar i genuttryck sannolikt kommer att spela en avgörande roll i dessa missbildningar.

Eftersom både depression och missbruk utvecklas över tiden och kan vara kopplad till kronisk exponering för stress och / eller missbruk av droger [8, 9] och eftersom typiska antidepressiva medel som riktar sig mot serotonerg och dopaminerg signalering kräver att behandlingstiden är effektiv [10] verkar det troligt att patogenesen av dessa sjukdomar och mekanismerna för deras behandling kan vara kopplade till lång sikt förändringar i genuttryck. Sådana förändringar kan bero på epigenetiska modifieringar av genstrukturen, och faktiskt är bevis för montering av en nyckelroll för DNA-metylering och histon-modifikationer i både beroende och depression [11-14]. Detta utesluter emellertid inte en potentiell roll för transkriptionsfaktorer i dessa processer, särskilt stabila transkriptionsfaktorer inducerad genom kronisk neuronal aktivering. En sådan transkriptionsfaktor är ΔFosB [1, 15, 16], en splitsvariant som produceras från FosB gen. Till skillnad från FosB-proteinet i full längd är ΔFosB anmärkningsvärt stabil jämfört med andra omedelbara tidiga genprodukter (halveringstid upp till 8-dagar i hjärnan [17]), främst beroende på trunkeringen av två degrondomäner i c-änden [18], såväl som en stabiliserande fosforylering vid Ser27 [19, 20]. ΔFosB induceras genom hela gnagarehjärnan, inklusive NAc och besläktade strukturer, genom stress [21-23], antidepressiva medel [22] och droger av missbruk [24]. Vidare indikerar gnagaremodeller ΔFosB-uttryck i NAc i både beroende [20, 25] och depression [26, 27] och nya studier tyder på en roll för ΔFosB i dessa sjukdomar i PFC [21] och HPC [28]. I NAc, främjar ΔFosB-uttrycket ökad psykomotorisk sensibilisering till och belöning från psykostimulantia hos gnagare [20, 25]. NAc ΔFosB fungerar också som en proresiliencefaktor i muskronisk social nederlagsmodell av depression, och dess uttryck är nödvändigt för antidepressiv funktion [26]. I motsats härtill främjar expression av ΔFosB i PFC mottaglighet för social nederlagsspänning hos möss [21], vilket tyder på att ΔFosB spelar väldigt olika roller i belöningskretsen och hjärnregionerna som innervatar den. Slutligen induceras ΔFosB i musens dorsala HPC genom inlärning och dess funktion krävs för normal rumslig minnesbildning [28], vilket ger en möjlig mekanism för de kognitiva underskotten som ofta åtföljer kronisk drogexponering och / eller depression [29-31].

Eftersom ΔFosB är en transkriptionsfaktor antas det vanligen att det utövar sina biologiska effekter genom modulering av uttrycket av valda målgener och många av dessa målgener har blivit involverade i depression och beroende. ΔFosB reglerar uttrycket av flera subenheter av glutamatreceptorer av a-amino-3-hydroxi-5-metyl-4-isoxazolpropionsyra (AMPA) och N-metyl-D-aspartat (NMDA)25, 26, 32], och dessa receptorer har blivit direkt involverade i missbruk [33, 34], depression [35, 36] och antidepressiva funktionen [36, 37]. ΔFosB reglerar också uttrycket av signalmolekyler, som kalcium / kalmodulinberoende proteinkinas II a (CaMKIIa), som har kopplats till många psykiatriska störningar [38], och vi har visat att denna reglering av CaMKII-uttryck hos möss driver psykomotorisk sensibilisering mot kokain [20] och antidepressiva funktionen [27]. Dessutom reglerar ΔFosB uttrycket av cyklinberoende kinas 5 (cdk5) [39], vilket induceras i striatum genom psykostimulant exponering och stress [40-42] och reglerar de psykomotoriska och motivativa svaren på kokain [43]. Således finns det starka bevis på gnagare-modeller att induktion av FosB i flera hjärnregioner genom stress, antidepressiva medel och missbruksmissbruk kan reglera beteenden relaterade till depression och missbruk genom att modulera uttrycket av valda målgener i diskreta hjärnregioner.

Även om prekliniska modeller av beroende och depression har varit ganska fruktbara, är det viktigt att stödja fynd från djurmodeller med bevis från mänskliga studier om vi förväntar oss att översätta potentiella molekylära mekanismer till nya behandlingsalternativ. Vi har tidigare visat att ΔFosB är uppreglerat i NAc av humana kokainmissbrukare [20] och minskad i NAc hos deprimerade människor [26]. Regleringen av FosB genproduktuttryck i HPC och PFC, kritiska regulatorer av NAc-neuronal aktivering, har inte tidigare studerats i människans hjärna eller har reglering av potentiellt ΔFosB-målgenuttryck. Vi undersökte därför uttrycket för FosB genprodukter, liksom uttrycket av potentiella ΔFosB-målgener i PFC och HPC hos patienter som lider av stor depressiv sjukdom eller kokainberoende.

Material och metoder

Mänskliga prov

Humana hjärnvävnader efter mortem erhölls från Douglas Bell-Canada Brain Bank (Douglas Mental Health University Institute, Montreal, Quebec, Kanada). Ämnesanvändningsinformation om mänskliga kokainmissbrukare, depressionspatienter och matchade kontroller finns i Tabell 1. Behållandet av vävnad fortsatte väsentligen som beskrivet [44]. Kort när, en gång extraheras, placeras hjärnan på våt is i en Styrofoam-låda och rusade till Douglas Bell-Canada Brain Bank-anläggningarna. Hemisfärer separeras omedelbart av en sagittalskärning i mitten av hjärnan, hjärnstammen och cerebellum. Blodkärl, pinealkörtel, choroid plexus, halv cerebellum och halv hjärnstammen dissekeras vanligtvis från vänstra halvklotet, som sedan skärs koronalt i 1 cm tjocka skivor före frysning. Det senare halva cerebellumet skärs sagittalt i 1cm-tjocka skivor före frysning. Vävnader flashfrysas i 2-metylbutan vid -40 ° C för ~ 60 sek. Alla frysta vävnader förvaras separat i plastpåse vid -80 ° C för långvarig förvaring. Specifika hjärnregioner dissekeras från frysta koronalskivor på en rostfri stålplatta med torris överallt för att styra temperaturen i miljön. PFC-prover kommer från Brodmann-området 8 / 9, och HPC-prover tas från centrummassan av hippocampalbildningen (Fig 1).

miniatyr

Ladda ner:

PowerPoint-bildruta

större bild (1.61MB)

originalbild (1.59MB)

Fig 1. Diagram över dissektionsregioner för humana hjärnprover.

Ritningar representerar främre (A) och bakre (B) koronala sektioner av mänsklig hjärna som används för dissektion av PFC-prover och (C) HPC-prover. Röda lådor markerar områden av dissektion. SFG: överlägsen frontal gyrus; MFG: mellansidan gyrus; IG: insulär gyrus; FuG: fusiform gyrus.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g001

miniatyr

Ladda ner:

PowerPoint-bildruta

större bild (529KB)

originalbild (1.02MB)

Tabell 1. Substansberoende, toxikologi och användning av antidepressiva läkemedel hos humana kokainmissbrukare, depressionspatienter och matchade kontrollgrupper.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.t001

Musprover

Studien följde riktlinjer som beskrivs i Guide till vård och användning av laboratoriedjur, åttonde upplagan (Institute of Laboratory Animal Resources, 2011). Före testning godkändes alla experimentella förfaranden av Institutionen för djurvård och användning vid Michigan State University. Om något djur uppvisar brist på grooming, infektion, kraftig viktminskning eller oändlighet dödas djuret. Inga djur krävde sådan euthanisering före experimentell slutpunkt i den aktuella studien. Efter ankomsten till anläggningen var 7-veckan gamla C57BL / 6 hanmöss (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, USA) grupphushållna vid 4 per bur i ett kolonistum satt till en konstant temperatur (23 ° C) åtminstone 3 dagar före experiment i en 12 h ljus / mörk cykel med ad libidum mat och vatten. Möss fick kronisk (7-dagar) eller akut (enkel injektion) kokain (15 mg / kg) eller steril saltlösning (0.9% saltlösning) via en intraperitoneal (ip) injektion och offrades genom cervikal dislokation en timme efter slutlig injektion. Vävnad skördades omedelbart (Fig 2) eller vid olika tidpunkter efter offret (Fig 3).

miniatyr

Ladda ner:

PowerPoint-bildruta

större bild (649KB)

originalbild (878KB)

Fig 2. Jämförelse av humant och mus FosB proteiner.

(A) Western blot av hippocampala proteiner med FosB-antikropp avslöjar flera ytterligare band i typiskt humant kokainmissbrukare HPC-prov jämfört med en kronisk kokainbehandlad (15 mg / kg för 7-dagar) mus HPC. Nya band är uppenbara vid 20 kDa, 23 kDa (vit pil) och 30 kDa (svart pil). (B) Korrelation och linjär regression av proteinuttryck för varje band i humana prover med postmortemintervallet (tid mellan död och hjärnfrysning) för varje humant prov. Stipade linjer representerar 95% konfidensintervall; ingen linjär regressionshöjd skilde sig signifikant från 0.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g002

miniatyr

Ladda ner:

PowerPoint-bildruta

större bild (214KB)

originalbild (317KB)

Fig 3. Uttryck av FosB-proteiner i mus HPC efter förlängda postmortemintervall.

Hjärnan hos möss gav en akut injektion av kokain (15 mg / kg ip) kvar in situ för 0, 1 eller 8 timmar efter offret innan skörd av HPC. Western blot avslöjar uppbyggnad av ett 23 kDa band i 8 hr-djuren, men visar inte andra band som finns i humana HPC-prover.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g003

Western Blotting

Mushåren extraherades snabbt på is och skivades sedan in i 1 mm-sektioner och dorsal hippocampus avlägsnades med en 12-mätstans och omedelbart frystes på torris. Både humana och musprover homogeniserades genom ljus sonikering i modifierad RIPA-buffert (10 mM Tris-bas, 150 mM natriumklorid, 1 mM EDTA, 0.1% natriumdodecylsulfat, 1% Triton X-100, 1% natriumdeoxikolat, pH 7.4, proteas- och fosfatashämmare [Sigma Aldrich]). Koncentrationen mättes med användning av DC Protein Assay (BioRad) och gelprover normaliserades för totalt protein. Proteiner separerades på 4-15% polyakrylamaidgradientgeler (Criterion System, BioRad) och Western blotting utfördes med användning av kemiluminescens (SuperSignal West Dura, Thermo Scientific). Totalt protein analyserades med användning av Swift Membrane Stain (G Biosciences) och proteiner kvantifierades med hjälp av ImageJ-programvara (NIH). Primär antikroppar användes för att detektera FosB-isoformer (5G4; 1: 500; Cellsignalering, 2251), GluA2 / 3 (1: 1,000; Millipore, 07-598), CaMKIIa (1: 1,000; Millipore, 05-532), cdk5 (1: 1,000; Santa cruz, sc-173), GAPDH (1: 20,000; Cellsignalering, 21185).

Statistik

Alla statistiska analyser utfördes med hjälp av Prism 6 mjukvarupaketet (GraphPad). Linjär regressionsanalys användes för att bestämma huruvida uttrycket av FosB genprodukter korrelerade med postmortemintervall. Lutningen av varje linjär regressionslinje testades för signifikant skillnad från noll. Studentens t-tester användes för alla parvisa jämförelser mellan kontroll- och kokainberoende personer (anges i Resultat där t-värdet ges). Envägs-ANOVAs användes för alla multipla jämförelser mellan kontroller, deprimerade individer med antidepressiva ombord eller deprimerade individer utan antidepressiva medel (anges i Resultat där F-värde ges). Envägs ANOVAs följdes av Tukey post hoc testet. P <0.05 ansågs betydande.

Resultat

Våra senaste studier visar att de tre viktigaste produkterna hos FosB gen i hjärnan, FosB (~ 50 kDa) i full längd, ΔFosB (~ 35-37 kDa) och Δ2AFosB (~ 25 kDa) induceras differentiellt i mushjärnans belöningsrelaterade regioner som svar på stress- och antidepressivbehandling [22] och andra Fos-relaterade antigener som sannolikt produceras av FosB gen har också observerats i mus hjärnan [45-47]. Därför försökte vi först bestämma om människans hjärna uttrycker ett mönster av FosB genprodukter som liknar det som hittades i musens hjärna. Vi jämförde ett typiskt HPC-prov från en mänsklig kokainmissbrukare (Tabell 2) till HPC från en mus som ges kronisk kokain (15 mg / kg, ip för 7 dagar). Alla tre stora FosB genprodukter hittades i både mus och human hjärnvävnad, men ytterligare band observerades i humant prov jämfört med mus (Fig 2A). Mest framträdande visade sig band i ~ 30 kDa, ~ 23 kDa och ~ 20 kDa i humana prover men observerades inte i musprover. Vi postulerade att dessa band kan representera proteolytiska produkter som härrör från nedbrytning av FosB eller AFosB på grund av det förlängda postmortemintervallet (PMI) i våra humana prover (Tabell 2). Emellertid konstaterades ingen korrelation mellan intensiteten hos dessa nya band och PMI (Fig 2B) eller mellan PMI och huvudgenprodukterna, FosB, ΔFosB och A2AFosB (Fig 2B), dvs ingen av regressionslinjerna hade en lutning som skilde sig signifikant från noll. Sålunda kan dessa nya band inte vara proteolytiska nedbrytningsprodukter som härrör från förlängd tid mellan död och vävnadsfrysning.

miniatyr

Ladda ner:

PowerPoint-bildruta

större bild (279KB)

originalbild (504KB)

Tabell 2. Demografi av mänskliga kokainmissbrukare, depressionspatienter och matchade kontrollgrupper.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.t002

För att ytterligare undersöka detta gav vi möss en enda injektion av kokain (15 mg / kg, ip) eller saltlösning och avlivade dem genom cervikal dislokation en timme senare. Hjärnorna lämnade sedan in situ för noll, en eller åtta timmar innan prov togs. Vi noterade några nedbrytningsprodukter (Fig 3), den mest framträdande var ~ 23 kDa, men det resulterande mönstret efterliknade inte det som ses i humana HPC-prover. Sammantaget indikerar dessa data att det finns ytterligare Fos-relaterade antigener i människans hjärna som kan representera en roman FosB genprodukter och är osannolikt att det är resultatet av proteolys av FosB eller AFosB.

Vi försökte därefter avgöra om kokainberoende, obehandlad depression eller depression i kombination med exponering för antidepressiva läkemedel är förknippade med förändringar i FosB genprodukter i humant HPC eller PFC. Patienter och kontrollpersoner valdes så att det inte fanns några signifikanta skillnader i medelålder, kön, hjärnans pH eller PMI (Tabell 1). I prov från kokainberoende patienter avslöjade Western blot inga skillnader i uttrycket av någon FosB-isoform i PFC jämfört med kontroller (Fig 4A och 4B). Vi observerade emellertid en markant minskning av HPC av kokainberoende individer i full längd FosB (t(35) = 2.67, p = 0.012), ΔFosB (t(31) = 2.81, p = 0.009), liksom i alla tre nya band, 30 kDa (t(34) = 2.71, p = 0.011), 23 kDa (t(15) = 2.7, p = 0.016) och 20 kDa (t(13) = 2.43, p = 0.031), och en trend mot en minskning av Δ2ΔFosB (t(29) = 2.03, p = 0.052). På samma sätt var det i prover från patienter som lider av depression inga skillnader i uttrycket av någon FosB-isoform i PFC, medan HPC visade minskningar i full längd FosB (F (2,35) = 1.98, p = 0.048) och ΔFosB F (2,30) = 1.38, p = 0.027), liksom i 23 kDa-bandet (F (2,21) = 2.05, p = 0.022) och 20 kDa-bandet (F (2,18) = 0.97, p = 0.028)Fig 4C och 4D). Dessa data tyder på att FosB genuttryck i HPC reduceras i flera psykiatriska tillstånd medan PFC-uttryck är opåverkat.

miniatyr

Ladda ner:

PowerPoint-bildruta

större bild (1.19MB)

originalbild (1.98MB)

Fig 4. Uttryck av FosB-proteiner i HPC och PFC hos humana kokainberoende och depressionspatienter.

(A) Western blot av FosB-proteiner från HPC och PFC hos humana kokainmissbrukare (Coc) och kontroller (Con). (B) Kvantifiering avslöjar en kokainberoende minskning av många FosB-proteiner i HPC men inte PFC (*: p <0.05, #: p = 0.05). (C) Western blot av FosB-proteiner från HPC och PFC hos humana depressionpatienter utanför (Dep) eller på antidepressiva medel (Dep + AD) och kontroller (Con). (D) Kvantifiering avslöjar en depressionberoende minskning av vissa FosB-proteiner i HPC men inte PFC (*: p <0.05). Felstaplar anger medelvärde +/- SEM.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g004

Direkt bevis för genmål för ΔFosB transkriptionsreglering i HPC är knappt, med endast cyklinberoende proteinkinas 5 (cdk5) ett bekräftat mål efter elektrokonvulsiv stimulering hos möss [39]. Många andra gener är emellertid kända mål för ΔFosB transkriptionsreglering i andra hjärnregioner, särskilt i NAc. Dessa innefattar ett antal gener som är väsentliga för hippocampalcellsfunktion och synaptisk plasticitet, såsom GluA2 [48] och CaMKII [20]. Därför använde vi Western blot för att bedöma nivåerna av potentiella genmål för ΔFosB i HPC och PFC hos kokainberoende och deprimerade patienter. Vi fann inga signifikanta skillnader i proteinnivåerna hos kandidatmålgenerna i PFC hos kokainberoende individer, medan HPC visade en signifikant minskning av GluA2 (t (34) = 2.31, p = 0.027) och en stark trend mot minskning i CaMKII-nivåer (t (35) = 1.99, p = 0.053) uttryck, medan cdk5 förblir oförändrad (Fig 5A och 5B). I PFC och HPC hos deprimerade patienter fanns inga förändringar i uttryck av AFosB-målgenerna (Fig 5C och 5D). Dessa data tyder på att ΔFosB kan reglera uttrycket av potentiella målgener i humant HPC, och denna reglering kan vara hjärnområde och sjukdomsspecifik.

miniatyr

Ladda ner:

PowerPoint-bildruta

större bild (546KB)

originalbild (1.01MB)

Fig 5. Uttryck av möjliga ΔFosB genmålet proteiner i HPC och PFC hos humana kokainberoende och depression patienter.

(A) Western blot av potentiella ΔFosB-genmålproteiner från HPC och PFC hos humana kokainmissbrukare (Coc) och kontroller (Con). (B) Kvantifiering avslöjar en kokainberoende minskning av all GluA2 och CaMKII i HPC men inte PFC (*: p <0.05, #: p = 0.05). (C) Western blot av potentiella ΔFosB-genmålproteiner från HPC och PFC hos humana depressionspatienter utanför (Dep) eller på antidepressiva medel (Dep + AD) och kontroller (Con). (D) Kvantifiering avslöjar inga depressionberoende förändringar. Felstaplar anger medelvärde +/- SEM.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g005

Diskussion

Här presenterar vi den första sammanställningen av FosB genprodukt och ΔFosB-målproteinanalys i hippocampus och prefrontal cortex av kokainmissbrukare och deprimerade patienter. Dessa hjärnregioner är kända för att spela nyckelroller i patofysiologin hos dessa sjukdomar, och användningen av humana post mortemprover gör det möjligt för oss att: 1) bestämma huruvida de molekylära förändringar som finns i välstudierade gnagaremodeller av dessa sjukdomar återfinnas hos människor ; 2) identifiera nya vägar för studier i gnagaremodeller för potentiellt terapeutiskt ingrepp. Våra analyser fokuserade på uttrycket av FosB genprodukter, eftersom deras uttryck i dessa regioner har föreslagits att spela en roll i depression och induceras av kokainexponering i gnagaremodeller [21, 22, 24]. När vi ursprungligen undersökte FosB-proteinnivåerna i våra humana prov var det tydligt att vår FosB-antikropp upptäckte mer band än vad som tidigare rapporterats i gnagarehjärnprover av vår grupp och många andra [1, 22]. Eftersom mänskliga hjärnor är frysta timmar efter döden medan musprover avlägsnas och frysta inom två minuter efter offret lämnade vi musens hjärnor in situ efter uppoffring i upp till åtta timmar för att avgöra om liknande band skulle uppstå. Men eftersom vi inte observerade samma mönster av FosB-proteiner som hittades i de humana proven och eftersom vi inte hittade någon korrelation mellan längden av PMI och nivåerna hos de olika banden i humana prover sluts vi att många av banden i de mänskliga hjärnproverna är osannolikt att vara resultatet av proteolytisk nedbrytning av större FosB-isoformer. Även om vi inte kan utesluta skillnader i proteolytiska maskiner mellan arter, skulle vi föreslå att vissa av de mänskliga banden kan bero på differentierad splitsning av FosB mRNA, och framtida studier från vår grupp kommer att ta upp denna fråga.

Tidigare resultat från gnagare studier har funnit en ökning av FosB isoformer i HPC och PFC efter kronisk kokain [24]. Men från vår kohort av individer beroende av kokain fann vi en minskning av alla FosB-isoformer i HPC, utan förändring i PFC jämfört med kontrollpersoner. Vi tror att detta kan bero på de inneboende skillnaderna mellan gnagarstudier och fall av mänsklig missbruk. Studier av kokainmissbruk endast för en liten del av gnagarnas liv och inga ΔFosB-induktionsstudier har hittills gått utöver 14-dagar med kontinuerlig kokainexponering [1, 20]. Människokokainanvändare kan vara missbrukare under mycket längre tidsperioder, vilket kan orsaka homeostatiska effekter som orsakar FosB gen som ska undertryckas i HPC. Dessutom har många studier visat att långvarig beroende av psykostimulanter åtföljs av minskad kognitiv funktion [9, 49]. Vårt senaste arbete visar att HPC ΔFosB spelar en viktig roll när det gäller att lära [28], och därmed minskningen i HPC FosB genuttryck hos kokainmissbrukare som visas här kan utgöra en mekanism för kognitiv nedgång i psykostimulant beroende. Med minskat uttryck av FosB gen i HPC, observerade vi också en minskning av proteinhalterna hos kandidaten FFBB målgener GluA2 och CaMKII, och båda dessa molekyler är också kritiska för HPC-funktion och lärande [50] och har tidigare varit kopplad till missbruk [38, 51].

I HPC hos deprimerade patienter observerades en minskning av flera FosB-proteiner, beroende på om patienterna tog antidepressiva medel. Detta kan indikera att antidepressiva medel har olika effekter på splicing eller stabilitet hos FosB genprodukter, även om våra tidigare studier på gnagare inte avslöjade sådana skillnader [22]. Det fanns emellertid inga skillnader i uttrycket av potentiella målgener i antingen HPC eller PFC hos dessa patienter. Även om större depression ofta åtföljs av kognitiva problem [52] är det troligt att HPC ΔFosB inte är den enda faktorn som förändras som svar på depression. Medan kokainmissbrukarna visade förändringar i HPC ΔFosB och i målgenuttryck kan depression leda till olika kompensationsmekanismer som förhindrar reduktion av GluA2- eller CaMKII-uttryck. Således kommer framtida studier att belysa huruvida förändringar i HPC-genuttryck i depression och missbruk uppstår från liknande mekanismer.

Det är kritiskt att notera att de mänskliga populationerna som används för denna studie saknar homogeniteten hos prekliniska gnagare eller primatmodeller. Till exempel drabbades fem av de deprimerade patienterna av alkoholism, och två hade opiater ombord vid tidpunkten för dödsfallet. På samma sätt hade sex av de kokainberoende individerna använt antidepressiva läkemedel under de tre månaderna före döden. Även om detta inte är överraskande, eftersom depression och missbruk har en hög grad av comorbiditet [6, 7] komplicerar det tolkningen av resultaten. Vi observerar inte någon signifikant skillnad i någon av våra biokemiska åtgärder mellan kokainberoende personer som hade antidepressiva ombord och de som inte gjorde det, och vi observerar inte skillnader mellan deprimerade patienter som hade substansberoende och de som inte gjorde det (data inte visade ). Det här utesluter dock överlappande eller synergistiska effekter av depression och beroende av våra åtgärder. Tvärtom, som vi observerar liknande minskningar i HPC FosB-isoformuttryck med depression och beroende, är det möjligt att reduktion i HPC FosB genuttryck är en gemensam mekanism mellan de två tillstånden och kan bidra till comorbiditet. Undersökning av denna hypotes kommer att kräva mycket större kohorter av människor och ytterligare prekliniska studier.

Sammanfattningsvis finner vi att flera FosB genprodukter nedregleras i HPC, men inte PFC, hos människor som lider av beroende och depression. Även om vi inte kan göra en etiologisk koppling mellan detta fenomen och sjukdomstillstånden är det möjligt att minskningar i HPC ΔFosB och / eller andra FosB isoformer delvis kan ligga till grund för de kognitiva underskotten som är förknippade med depression och beroende, eller bidra till dessa psykiatriska comorbiditet störningar.

Erkännanden

Författarna vill tacka Kenneth Moon för utmärkt tekniskt bistånd.

Författarbidrag

  1. Upptäckt och utformat experimenten: AJR PAG.
  2. Utförde experimenten: AJR GT PAG.
  3. Analyserade data: PAG AJR.
  4. Bidragande reagens / material / analysverktyg: GT.
  5. Skrev skrivet: PAG AJR.

referenser

  1. 1. Robison AJ, Nestler EJ. Transkriptionella och epigenetiska mekanismer för missbruk. Nat Rev Neurosci. 2011; 12 (11): 623-37. Epub 2011 / 10 / 13. doi: 10.1038 / nrn3111 nrn3111 [pii]. PMID: 21989194; PubMed Central PMCID: PMC3272277.
  2. 2. Fass DM, Schroeder FA, Perlis RH, Haggarty SJ. Epigenetiska mekanismer vid humörstörningar: Targeting av neuroplasticitet. Neuroscience. 2014; 264: 112-30. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2013.01.041 pmid: 23376737; PubMed Central PMCID: PMC3830721.
  3. Visa artikel
  4. PubMed / NCBI
  5. Google Scholar
  6. Visa artikel
  7. PubMed / NCBI
  8. Google Scholar
  9. Visa artikel
  10. PubMed / NCBI
  11. Google Scholar
  12. Visa artikel
  13. PubMed / NCBI
  14. Google Scholar
  15. Visa artikel
  16. PubMed / NCBI
  17. Google Scholar
  18. 3. Menard C, Hodes GE, Russo SJ. Patogenes av depression: Insikter från studier av mänskliga och gnagare. Neuroscience. 2015. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2015.05.053 pmid: 26037806.
  19. Visa artikel
  20. PubMed / NCBI
  21. Google Scholar
  22. Visa artikel
  23. PubMed / NCBI
  24. Google Scholar
  25. Visa artikel
  26. PubMed / NCBI
  27. Google Scholar
  28. Visa artikel
  29. PubMed / NCBI
  30. Google Scholar
  31. Visa artikel
  32. PubMed / NCBI
  33. Google Scholar
  34. Visa artikel
  35. PubMed / NCBI
  36. Google Scholar
  37. Visa artikel
  38. PubMed / NCBI
  39. Google Scholar
  40. Visa artikel
  41. PubMed / NCBI
  42. Google Scholar
  43. Visa artikel
  44. PubMed / NCBI
  45. Google Scholar
  46. Visa artikel
  47. PubMed / NCBI
  48. Google Scholar
  49. Visa artikel
  50. PubMed / NCBI
  51. Google Scholar
  52. Visa artikel
  53. PubMed / NCBI
  54. Google Scholar
  55. Visa artikel
  56. PubMed / NCBI
  57. Google Scholar
  58. Visa artikel
  59. PubMed / NCBI
  60. Google Scholar
  61. Visa artikel
  62. PubMed / NCBI
  63. Google Scholar
  64. Visa artikel
  65. PubMed / NCBI
  66. Google Scholar
  67. Visa artikel
  68. PubMed / NCBI
  69. Google Scholar
  70. Visa artikel
  71. PubMed / NCBI
  72. Google Scholar
  73. Visa artikel
  74. PubMed / NCBI
  75. Google Scholar
  76. Visa artikel
  77. PubMed / NCBI
  78. Google Scholar
  79. Visa artikel
  80. PubMed / NCBI
  81. Google Scholar
  82. Visa artikel
  83. PubMed / NCBI
  84. Google Scholar
  85. Visa artikel
  86. PubMed / NCBI
  87. Google Scholar
  88. Visa artikel
  89. PubMed / NCBI
  90. Google Scholar
  91. Visa artikel
  92. PubMed / NCBI
  93. Google Scholar
  94. Visa artikel
  95. PubMed / NCBI
  96. Google Scholar
  97. Visa artikel
  98. PubMed / NCBI
  99. Google Scholar
  100. Visa artikel
  101. PubMed / NCBI
  102. Google Scholar
  103. Visa artikel
  104. PubMed / NCBI
  105. Google Scholar
  106. Visa artikel
  107. PubMed / NCBI
  108. Google Scholar
  109. Visa artikel
  110. PubMed / NCBI
  111. Google Scholar
  112. Visa artikel
  113. PubMed / NCBI
  114. Google Scholar
  115. Visa artikel
  116. PubMed / NCBI
  117. Google Scholar
  118. Visa artikel
  119. PubMed / NCBI
  120. Google Scholar
  121. Visa artikel
  122. PubMed / NCBI
  123. Google Scholar
  124. Visa artikel
  125. PubMed / NCBI
  126. Google Scholar
  127. Visa artikel
  128. PubMed / NCBI
  129. Google Scholar
  130. Visa artikel
  131. PubMed / NCBI
  132. Google Scholar
  133. Visa artikel
  134. PubMed / NCBI
  135. Google Scholar
  136. Visa artikel
  137. PubMed / NCBI
  138. Google Scholar
  139. Visa artikel
  140. PubMed / NCBI
  141. Google Scholar
  142. Visa artikel
  143. PubMed / NCBI
  144. Google Scholar
  145. Visa artikel
  146. PubMed / NCBI
  147. Google Scholar
  148. Visa artikel
  149. PubMed / NCBI
  150. Google Scholar
  151. Visa artikel
  152. PubMed / NCBI
  153. Google Scholar
  154. 4. Keralapurath MM, Briggs SB, Wagner JJ. Kokain självadministration inducerar förändringar i synaptisk överföring och plasticitet i ventral hippocampus. Addiction biologi. 2015. doi: 10.1111 / adb.12345 pmid: 26692207.
  155. 5. Loureiro M, Kramar C, Renard J, Rosen LG, Laviolette SR. Cannabinoidöverföring i Hippocampus aktiverar Nucleus Accumbens Neurons och Modulates Reward and Aversion-Related Emotional Salience. Biologisk psykiatri. 2015. doi: 10.1016 / j.biopsych.2015.10.016 pmid: 26681496.
  156. 6. Davis L, Uezato A, Newell JM, Frazier E. Major depression och comorbid substansanvändningsstörningar. Nuvarande åsikt i psykiatrin. 2008; 21 (1): 14-8. doi: 10.1097 / YCO.0b013e3282f32408 pmid: 18281835.
  157. 7. Comorbiditet: Addiction och andra psykiska sjukdomar. I: Tjänster USDoHaH, redaktör: National Institute on Drug Abuse; 2010.
  158. 8. Tafet GE, Nemeroff CB. Länkarna mellan stress och depression: Psykoneuroendokrinologiska, genetiska och miljömässiga interaktioner. Journal of neuropsychiatry och klinisk neurovetenskap. 2015: appineuropsych15030053. doi: 10.1176 / appi.neuropsych.15030053 pmid: 26548654.
  159. 9. Cadet JL, Bisagno V. Neuropsykologiska följder av kronisk drogbruk: Relevans för behandlingsmetoder. Gränser i psykiatrin. 2015; 6: 189. doi: 10.3389 / fpsyt.2015.00189 pmid: 26834649; PubMed Central PMCID: PMC4713863.
  160. 10. Blier P. Farmakologin av förmodade antidepressiva strategier. Eur Neuropsychopharmacol. 2003; 13 (2): 57-66. PMID: 12650947. doi: 10.1016 / s0924-977x (02) 00173-6
  161. 11. Januar V, Ancelin ML, Ritchie K, Saffery R, ​​Ryan J. BDNF-promotormetylering och genetisk variation i fördröjd depression. Översättningspsykiatri. 2015; 5: e619. doi: 10.1038 / tp.2015.114 pmid: 26285129; PubMed Central PMCID: PMCPMC4564567.
  162. 12. Covington HE 3rd, Maze I, LaPlant QC, Vialou VF, Ohnishi YN, Berton O, et al. Antidepressiva verkningar av histon-deacetylasinhibitorer. J Neurosci. 2009; 29 (37): 11451-60. Epub 2009 / 09 / 18. 29 / 37 / 11451 [pii] doi: 10.1523 / JNEUROSCI.1758-09.2009 pmid: 19759294; PubMed Central PMCID: PMC2775805.
  163. 13. Maze I, Covington HE 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, et al. Viktig roll för histon-metyltransferas G9a i kokaininducerad plasticitet. Vetenskap. 2010; 327 (5962): 213-6. Epub 2010 / 01 / 09. 327 / 5962 / 213 [pii] doi: 10.1126 / science.1179438 pmid: 20056891; PubMed Central PMCID: PMC2820240.
  164. 14. Massart R, Barnea R, Dikshtein Y, Suderman M, Meir O, Hallett M, et al. Rollen av DNA-metylering i kärnan accumbens i inkubation av kokainsträng. Journal of neuroscience: den officiella tidningen för Society for Neuroscience. 2015; 35 (21): 8042-58. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.3053-14.2015 pmid: 26019323.
  165. 15. Ruffle JK. Molekylär neurobiologi av missbruk: vad handlar det om (Delta) FosB? Den amerikanska tidskriften för drog- och alkoholmissbruk. 2014; 40 (6): 428–37. doi: 10.3109 / 00952990.2014.933840 pmid: 25083822.
  166. 16. Nestler EJ. FosB: En transkriptionsregulator av stress- och antidepressiva reaktioner. Eur J Pharmacol. 2014. doi: 10.1016 / j.ejphar.2014.10.034 pmid: 25446562.
  167. 17. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. Fosforylering av DeltaFosB medierar dess stabilitet in vivo. Neuroscience. 2009; 158 (2): 369-72. Epub 2008 / 12 / 02. S0306-4522 (08) 01596-0 [pii] doi: 10.1016 / j.neuroscience.2008.10.059 pmid: 19041372; PubMed Central PMCID: PMC2734485.
  168. 18. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, et al. Proteasomberoende och oberoende mekanismer för FosB-destabilisering: identifiering av FosB degron-domäner och konsekvenser för DeltaFosB-stabilitet. Eur J Neurosci. 2007; 25 (10): 3009-19. Epub 2007 / 06 / 15. EJN5575 [pii] doi: 10.1111 / j.1460-9568.2007.05575.x pmid: 17561814.
  169. 19. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ. Reglering av DeltaFosB-stabilitet genom fosforylering. J Neurosci. 2006; 26 (19): 5131-42. Epub 2006 / 05 / 12. 26 / 19 / 5131 [pii] doi: 10.1523 / JNEUROSCI.4970-05.2006 pmid: 16687504.
  170. 20. Robison AJ, Vialou V, Mazei-Robison M, Feng J, Kourrich S, Collins M, et al. Beteende och strukturella reaktioner på kronisk kokain Kräver en feedforward-loop som involverar DeltaFosB och Calcium / Calmodulin-Dependent Protein Kinase II i Nucleus Accumbens Shell. J Neurosci. 2013; 33 (10): 4295-307. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.5192-12.2013 pmid: 23467346.
  171. 21. Vialou V, Bagot RC, Cahill ME, Ferguson D, Robison AJ, Dietz DM, et al. Prefrontal kortikala kretsar för depression- och ångestrelaterade beteenden medierade av cholecystokinin: DeltaFosBs roll. J Neurosci. 2014; 34 (11): 3878-87. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.1787-13.2014 pmid: 24623766; PubMed Central PMCID: PMC3951691.
  172. 22. Vialou V, Thibault M, Kaska S, Cooper S, Gajewski P, Eagle A, et al. Differentiell induktion av FosB-isoformer i hela hjärnan genom fluoxetin och kronisk stress. Neuro. 2015; 99: 28-37. doi: 10.1016 / j.neuropharm.2015.07.005 pmid: 26164345.
  173. 23. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, et al. Induktion av deltaFosB i belöningsrelaterade hjärnstrukturer efter kronisk stress. J Neurosci. 2004; 24 (47): 10594-602. Epub 2004 / 11 / 27. 24 / 47 / 10594 [pii] doi: 10.1523 / JNEUROSCI.2542-04.2004 pmid: 15564575.
  174. 24. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, et al. Distinkta mönster av DeltaFosB induktion i hjärnan av missbruk. Synapse. 2008; 62 (5): 358-69. Epub 2008 / 02 / 23. doi: 10.1002 / syn.20500 pmid: 18293355; PubMed Central PMCID: PMC2667282.
  175. 25. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA Jr., Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, et al. Uttryck av transkriptionsfaktorn deltaFosB i hjärnan styr känsligheten för kokain. Natur. 1999; 401 (6750): 272-6. Epub 1999 / 09 / 28. doi: 10.1038 / 45790 pmid: 10499584.
  176. 26. Vialou V, Robison AJ, Laplant QC, Covington HE 3rd, Dietz DM, Ohnishi YN, et al. DeltaFosB i hjärnbelöningskretsar medierar motståndskraft mot stress och antidepressiva reaktioner. Nat Neurosci. 2010; 13 (6): 745-52. Epub 2010 / 05 / 18. nn.2551 [pii] doi: 10.1038 / nn.2551 pmid: 20473292; PubMed Central PMCID: PMC2895556.
  177. 27. Robison AJ, Vialou V, Sun HS, Labonte B, S AG, Dias C, et al. Fluoxetin förändrar epigenetiskt CaMKIIalpha-promotorn i Nucleus Accumbens för att reglera DeltaFosB-bindande och antidepressiva effekter. Neuropsychopharmacology. 2013. doi: 10.1038 / npp.2013.319 pmid: 24240473.
  178. 28. Eagle AL, Gajewski PA, Yang M, Kechner ME, Al Masraf BS, Kennedy PJ, et al. Erfarenhetsberoende Induktion av Hippocampal DeltaFosB Controls Learning. J Neurosci. 2015; 35 (40): 13773-83. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.2083-15.2015 pmid: 26446228.
  179. 29. Papakostas GI, Culpepper L. Förstå och hantera kognition i deprimerad patient. J Clin Psychiatry. 2015; 76 (4): 418-25. doi: 10.4088 / JCP.13086ah1c pmid: 25919832.
  180. 30. Evans VC, Iverson GL, Yatham LN, Lam RW. Förhållandet mellan neurokognitiv och psykosocial funktion i stor depressiv sjukdom: en systematisk granskning. J Clin Psychiatry. 2014; 75 (12): 1359-70. doi: 10.4088 / JCP.13r08939 pmid: 25551235.
  181. 31. Trä S, Sage JR, Shuman T, Anagnostaras SG. Psykostimulanter och kognition: ett kontinuum av beteende- och kognitiv aktivering. Pharmacol Rev. 2014; 66 (1): 193-221. doi: 10.1124 / pr.112.007054 pmid: 24344115; PubMed Central PMCID: PMC3880463.
  182. 32. Hiroi N, Marek GJ, Brown JR, Ye H, Saudou F, Vaidya VA, et al. Viktig roll för fosB-genen i molekylära, cellulära och beteendemässiga verkningar av kroniska elektrokonvulsiva anfall. J Neurosci. 1998; 18 (17): 6952-62. Epub 1998 / 08 / 26. PMID: 9712664.
  183. 33. Pierce RC, Wolf ME. Psykostimulerande inducerade neuroadaptationer i kärnan accumbens AMPA-receptoröverföring. Cold Spring Harbor perspektiv inom medicin. 2013; 3 (2): a012021. doi: 10.1101 / cshperspect.a012021 pmid: 23232118; PubMed Central PMCID: PMC3552338.
  184. 34. Luscher C. Kokain-framkallad synaptisk plasticitet av excitatorisk överföring i det ventrala tegmentala området. Cold Spring Harbor perspektiv inom medicin. 2013; 3 (5): a012013. doi: 10.1101 / cshperspect.a012013 pmid: 23637310; PubMed Central PMCID: PMC3633178.
  185. 35. Graybeal C, Kiselycznyk C, Holmes A. Stressinducerad underskott i kognition och emotionalitet: en roll av glutamat. Curr Top Behav Neurosci. 2012; 12: 189-207. doi: 10.1007 / 7854_2011_193 pmid: 22261703; PubMed Central PMCID: PMC3877736.
  186. 36. Duman RS. Patofysiologi av depression och innovativa behandlingar: remodeling glutamatergiska synaptiska förbindelser. Dialoger Clin Neurosci. 2014; 16 (1): 11-27. PMID: 24733968; PubMed Central PMCID: PMC3984887.
  187. 37. Zarate C, Duman RS, Liu G, Sartori S, Quiroz J, Murck H. Nya paradigmer för behandlingsresistent depression. Ann NY Acad Sci. 2013; 1292: 21-31. doi: 10.1111 / nyas.12223 pmid: 23876043; PubMed Central PMCID: PMC3936783.
  188. 38. Robison AJ. Emerging roll av CaMKII i neuropsykiatrisk sjukdom. Trender Neurosci. 2014; 37 (11): 653-62. doi: 10.1016 / j.tins.2014.07.001 pmid: 25087161.
  189. 39. Chen J, Zhang Y, Kelz MB, Steffen C, Ang ES, Zeng L, et al. Induktion av cyklinberoende kinas 5 i hippocampus genom kroniska elektrokonvulsiva anfall: [Delta] FosBs roll. J Neurosci. 2000; 20 (24): 8965-71. Epub 2000 / 01 / 11. 20 / 24 / 8965 [pii]. PMID: 11124971.
  190. 40. Mlewski EC, Krapacher FA, Ferreras S, Paglini G. Övergående förbättrat uttryck av Cdk5-aktivator p25 efter akut och kronisk d-amfetaminadministration. Ann NY Acad Sci. 2008; 1139: 89-102. doi: 10.1196 / annals.1432.039 pmid: 18991853.
  191. 41. Bignante EA, Rodriguez Manzanares PA, Mlewski EC, Bertotto ME, Bussolino DF, Paglini G, et al. Inblandning av septal Cdk5 i framväxten av överdriven ångest inducerad av stress. Europeisk neuropsykofarmakologi: Tidningen för European College of Neuropsychopharmacology. 2008; 18 (8): 578-88. doi: 10.1016 / j.euroneuro.2008.02.007 pmid: 18406108.
  192. 42. Seiwell AP, Reveron ME, Duvauchelle CL. Ökad Cdk5 uttryck i råttor efter kort åtkomst till självstyrt kokain, men inte efter långåtkomst sessioner. Neurosci Lett. 2007; 417 (1): 100-5. doi: 10.1016 / j.neulet.2007.02.043 pmid: 17339080; PubMed Central PMCID: PMC1876973.
  193. 43. Taylor JR, Lynch WJ, Sanchez H, Olausson P, Nestler EJ, Bibb JA. Inhibering av Cdk5 i kärnan accumbens ökar de lokomotoriska aktiverande och incitament-motiverande effekterna av kokain. Proc Natl Acad Sci USA A. 2007; 104 (10): 4147-52. Epub 2007 / 03 / 16. 0610288104 [pii] doi: 10.1073 / pnas.0610288104 pmid: 17360491; PubMed Central PMCID: PMC1820723.
  194. 44. Quirion R, Robitaille Y, Martial J, Chabot JG, Lemoine P, Pilapil C, et al. Mänsklig hjärnreceptorautoradiografi med hela halvklotet: en allmän metod som minimerar vävnadsartefakter. Synapse. 1987; 1 (5): 446-54. Epub 1987 / 01 / 01. doi: 10.1002 / syn.890010508 pmid: 2850625.
  195. 45. Hoppas BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, et al. Induktion av ett långvarigt AP-1-komplex bestående av förändrade Fos-liknande proteiner i hjärnan av kronisk kokain och andra kroniska behandlingar. Nervcell. 1994; 13 (5): 1235-44. Epub 1994 / 11 / 01. 0896-6273 (94) 90061-2 [pii]. PMID: 7946359. doi: 10.1016 / 0896-6273 (94) 90061-2
  196. 46. Nye HE, Hopp BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakologiska studier av reglering av kronisk FOS-relaterad antigeninduktion av kokain i striatum och kärnan accumbens. J Pharmacol Exp Ther. 1995; 275 (3): 1671-80. Epub 1995 / 12 / 01. PMID: 8531143.
  197. 47. Chen J, Kelz MB, Hopp BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ. Kroniska Fos-relaterade antigener: stabila varianter av deltaFosB inducerad i hjärnan genom kroniska behandlingar. J Neurosci. 1997; 17 (13): 4933-41. Epub 1997 / 07 / 01. PMID: 9185531.
  198. 48. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, et al. Uttryck av transkriptionsfaktorn [Delta] FosB i hjärnan styr känsligheten för kokain. Natur. 1999; 401 (6750): 272-6. http://www.nature.com/nature/journal/v401/n6750/suppinfo/401272a0_S1.html. PMID: 10499584
  199. 49. Buchta WC, Riegel AC. Kronisk kokain stör störningar för mesokortisk inlärning. Brain Res. 2015; 1628 (Pt A): 88-103. doi: 10.1016 / j.brainres.2015.02.003 pmid: 25704202; PubMed Central PMCID: PMC4739740.
  200. 50. Shonesy BC, Jalan-Sakrikar N, Cavener VS, Colbran RJ. CaMKII: ett molekylärt substrat för synaptisk plasticitet och minne. Framsteg inom molekylärbiologi och translationell vetenskap. 2014; 122: 61-87. doi: 10.1016 / B978-0-12-420170-5.00003-9 pmid: 24484698.
  201. 51. Loweth JA, Tseng KY, Wolf ME. Anpassningar i AMPA-receptoröverföring i kärnan accumbens bidrar till inkubation av kokainbehov. Neuro. 2014; 76 Pt B: 287-300. doi: 10.1016 / j.neuropharm.2013.04.061 pmid: 23727437; PubMed Central PMCID: PMC3836860.
  202. 52. Culpepper L. Påverkan av obehandlad major depressiv sjukdom vid kognition och daglig funktion. J Clin Psychiatry. 2015; 76 (7): e901. doi: 10.4088 / JCP.13086tx4c pmid: 26231021.